JPH02174789A - リボフラビン―４’，５’―シクロ燐酸エステルクロリド、ならびにリボフラビン―５’―ホスファート（５’―ｆｍｎ）もしくはそのナトリウム塩の製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （技術分野） 本発明は以下の式（Ｉ） ＨＣ−へ、り０ ＩＰ Ｈｅ−σ／　’−Ｃ１ で表される新規のりボフラビン−４’、５’　−シクロ
燐酸エステルクロリド、ならびにこの新規のエステルク
ロリドを経てリボフラビン−５′−ホスファート（すな
わち　５　＋　−フラビンモノヌクレオチドであって、
以下において５’−ＦＩＮと略称する）ならびにその商
業的に有用なモノナトリウム塩を製造する方法に関する
ものである。

（従来技術） ５’−ＦＮｌｌは生体における種々の酵素反応において
補酵素として重要な役割を果たすものであって、ことに
医薬、食物及び飼料の添加剤としてその塩、ことに５’
−ＦＭＮナトリウム塩として使用されている。この５’
−ＦＩＮナトリウム塩は、またビタミンＢ２欠乏症治療
剤として使用されるフラビンアデニンジヌクレオチド製
造用の出発材料としても使用される。

ナトリウム５’−ＦＵＮは、工業的には、−膜内にリボ
フラビンとホスホリル化剤、例えば部分的水素添加オキ
シ塩化燐との直接的反応及び生成５’−ＦＭｌｌの水酸
化ナトリウム溶液による処理を経て製造される。しかし
ながら、リボフラビンの選択的ホスホリル化は必ずしも
順調には行われない。そこで、例えば米国特許２，６１
０，１７７号によれば、著しく過剰のオキシ塩化燐が使
用される。またＣ、Ａ、８３　（１９７５）　、　７９
５５１ａ、、’　Ｃ，＾６８３．７９５４９ｆ　（日本
国特許出願公開昭５０−２５５９７号）及び仁＾、８３
　（１９７５）　、７９５５０号（日本国特許出願公開
昭５０−２５５９８号）では、溶媒、例えばテトラヒド
ロフラン、ジエチレングリコールジメチルエーテル、モ
ノエチレングリコールジメチルエーテル、トリエチレン
ホスフＴ−ト、１，２−ジクロルエタン或は１゜２−ジ
ブロムエタン中において僅かに過剰量のオキシ塩化燐を
使用することが推奨されている。これら実施例を反覆実
験している間に、本発明者らは、ｔ１定された条件下に
おいて５’−Ｆ）Ｉｌｌが全く形成されない事例が多く
、その他の場合にも極めて少量の５’−ＦＭＮが得られ
るに過ぎないことが見出された、上記文献中の高収率は
、分析上の問題に起因するものと思われる。

またホスホリル化をピリジンの存在下（米国特許２，１
１１．４９ｕｔ　）或はアセトニトリルの存在下（デン
マークのフランツ、カウフマンによるＴｅｃｈｎｓＲａ
ｐｐｏｒｔ　Ｎｏ、２７１５　（＋９７９）　＊照）に
行う事例もある。

これら公知方法のすべてにおいて、依然として相当量の
未反応リボフラビンとＡｌ１１生成物としての異性体モ
ノホスファート及びポリホスファートを含をする粗生成
物がまず得られる。従って、５′−ＦＭＮは米国及びヨ
ーロッパの薬局方における純粋性基準に合致する生成物
を得るために技術的に複雑な精製処理に付されねばなら
ない。例えば「ケミカル、エンジニアリングＪ　１９５
４年１１月号１２０頁以下において、５’−ＦＨＮの製
造方法において、異性体混合物をモノアンモニウム塩の
形態においてエタノールアミンにより反覆処理して溶解
させることによりｉＱ縮し、この溶液を未反応及び非溶
解リボフラビンから分離することを開示している。

この方法に含まれる各工程及びさらにホスホリル化され
るべきリボフラビン（ビタミンＢ２）に対スるオキシ塩
化燐の著しく大きい使用量は、これら方法の廃水におけ
る塩化物公害に対する少からざる影響を示す。ビタミン
Ｂ２ホスフｙ）をセルロースイオン交換体に吸着させ、
ナトリウムオキサラート／オキサル酸緩衝液或はアンモ
ニウムホルマート／蟻＃緩衝液【日本国特許出願公告昭
４７−８８３６号、同昭４７−８５５４号）により溶離
させることは、これら方法を経済的にし、かつ環境保護
的にすることにはならない。工業的にこれを行う場合、
大量の緩衝液塩を使用することになるからである。

（発明の要約） しかるに、これら従来技術と異なり、遊離リボフラビン
でなく、その金属塩、ことにアルカリ金属塩、なかんず
（、リボフラビンカリウム塩をホスホリル化に使用する
ときは、５’−ＦＨＮ塩が著しくを利に得られることが
兄出された。これにより、本発明者らの知る限りにおい
ていかなる文献にも記載されておらず、また結晶形態で
分離され得るリボフラビン−４’　、−５’　シクロ燐
酸エステルクロリド（Ｉ）がまず得られる。この新規化
合物は、適当な条件下で開環して水素添加され、水酸化
ナトリウム溶液による部分的中和によりｐＨ５，５とし
て５’−ＦＭＩＩのナトリウム塩に転化されることがで
きる。

カリウム塩が使用される場合には、反応は以下の式に示
すように行われる。

リボフラビンのアルカリ金属塩とオキシ塩化燐もしくは
オキシノ塩化燐との反応において、ホスホリル化剤の作
用がリビチル残基の４’、５’位において行われるとい
うことは全く予想外のことと云い得る。各種文献から、
リボフラビン陰イオンの負電荷はへテロ環に局在してお
り、従ってこの分野の技術者すべてがホスホリル化剤の
作用は最高電荷密度値、すなわちイソアロキサジン環の
４及び５−位において行われ、リビチル残基の遠隔４’
、５’　−位では行われないと理解すべき筈であった。

そこで本発明は新規のリボフラビン４’、５’−シクロ
燐酸エステルクロリド（Ｉ）のみに関するものではなく
、リボフラビンのアルカリ金属塩、ことにカリウム塩を
、２０乃至５０℃、ことに３０−４５℃において、適当
な中性溶媒中で、アルカリ金属塩１モルに対して１．２
乃至３モルのオキシ塩化燐と反応させ、反応混合物から
晶出する生成物を濾過により分離するその製造方法にも
及ぶべきものである。

（発明の構成） この反応のための適当な中性溶媒は、ことに直鎖或は環
式エーテル、例えばモノエチレングリコールジメチルエ
ーテル、ジエチレングリコールジメチルエーテル、トリ
エチレングリフールジメチルエーテル、テトラヒドロフ
ラン或はジオキサンである。

出発材料として使用されるアルカリ金属塩は、リボフラ
ビンを当モル量の水酸化アルカリ金属粉水溶液に溶解さ
せ、生成する塩をメタノールの滴下添加により晶出させ
ることにより簡単に得られる。錦別、メタノール洗浄及
び乾燥により、はぼ定量的収率においてアルカリ金属塩
がもたらされる。乾屈伏態において、このアルカリ金属
塩は結晶水１分子を含有し、リボフラビン自体と同様に
安定である。

式（Ｉ）の燐酸エステルクロリドの製造は、上記リボフ
ラとンアルカリ金属塩を、アルカリ金属塩１モルに対し
て約２．８モル（すなわち約１．８モル過剰ｆｎ）のオ
キシ塩化燐の水溶液中に導入して行うのが打利である。

４Ｇ−４５℃において２時間反応させるだけで、すでに
９５％の転化が行われる。

形成される結晶性リボフラビン−４’、５’　−シクロ
燐酸エステルクロリドは濾過により分離され、或はその
まま直ちに反応混合物に水を添加し、加熱することによ
り、加水分解され異性化されて所望の５’−ＦＩＮにな
されることができる。

生成５’−ＦＭＮは、必要に応じて部分的中和により５
’−ＦＭＮモノナトリウム塩になされ得る。

５’−ＦＭＮナトリウム塩は、遊離酸の部分的中和によ
る単一工程で所望純度において得られるので、５’−Ｆ
）ＩＮの中間的分離はほとんど不要である。

そこで本発明はまたリボフラビン−４’、５’−シクロ
燐酸エステルクロリドＣＩ）を、加水分解及び異性化に
より５’−ＦＩＩＮ製造のために、また異性化及び部分
的中和により５’−ＦＭＩＩモノナトリウム塩製造のた
めに使用することにも及ぶものである。

本発明はまた５’−ＦＮＮ或はそのナトリウム塩製造の
ために、式（Ｉ）のりボフラビンー４′５′−シクロ燐
酸エステルクロリドを、（ａ）加水分解してリボフラビ
ン−４’、５’燐酸エステルとし、 （ｂ）異性化により５’−ＦＩＩＮとし、（Ｃ）必要に
応じてこれを水酸化ナトリウムと反応させて５’−ＦＩ
Ｎモノナトリウム塩とする方法にも及ぶものである。

この方法を実施するため、一般にリボフラビン−４’　
　５’−燐酸エステルクロリド（Ｉ）を含有する反応混
合物に、 （ａ）燐酸エステルクロリド１モルに対して、３０乃至
５０モル、ことに３２乃至３５モルにおいて、水を迅速
に添加して、温度を９０℃以上に上昇させ、加水分解に
よりリボフラビン−４′５′−燐酸エステルとし、 （ｂ）水蒸気を導入して反応混合物をさらに５乃至１５
分間、ことに８乃至１２分間８０乃至！００℃、ことに
８５乃至９０℃に保持してリボフラビン−４’、５’　
−燐酸エステルをほぼ異性化して５′−Ｆ関にとし、 （Ｃ）この異性化は反応混合物に６８乃至１００モルの
水を添加し、冷却して停止される。

（ｄ）　５’　−ＦＩＮのモノナトリウム塩製造のため
には、上記反応混合物は水酸化ナトリウムによりｐＨ値
を５．５乃至６になされる。

単離されたりボフラビン−４’　　５’−シクロ燐酸エ
ステルクロリド（１）を出発材料として使用する場合に
は、 （ａ）よく溶解させるために８０乃至９５℃に加熱した
水中にこれを投じ、 （ｂ）反応混合物に水蒸気を導入してこれを８０乃至１
００℃にさらに５乃至！５分間保持し、（Ｃ）さらに６
８乃至１００モルの水を添加して異性化を停止し、 （ｄ）　５’−ＦＩＮモノナトリウム塩を製造する場合
には、水酸化ナトリウムにより反応混合物のｐＨ値を５
．５乃至６とすることが必要である。

本発明による５’−ＦＭＮ或はそのモノナトリウム塩製
造のためには、リボフラビン−４′　５′−シクロ燐酸
エステルクロリドを含有する反応混合物が、なるべく早
く８０乃至１００℃の温度に達し、この温度に上述した
時間にわたり中ＩＬ’ｌ的な冷却が生じないように保持
されるようにすることが必要である。しからざる場合に
は蓉認し難い高リボフラビン含有量の生成物がもたらさ
れる。

リボフラビン−５′−ホスフ１−トとＮａＨの反応によ
るそのナトリウム塩の製造は、−膜内に２０乃至５０℃
、ことに３０乃至４０℃の温度で行われる。

本発明はさらに、 （＾）リボフラビンアルカリ金属塩を、２０乃至５０℃
の温度で、適当な中性溶媒中において、アルカリ金属塩
１モル当り、■、２乃至３モルのオキシ塩化燐と反応さ
せ、 （Ｂ）このようにして得られた、新規のりボフラビン−
４’、５’　−シクロ燐酸エステルクロリド（Ｉ）含を
反応混合物にエステルクロリド１モルに対して３０乃至
５０モルの水を迅速に添加して、温度を９０℃以上に上
昇させ、（Ｃ）反応混合物に水蒸気を導入してこれを８
０乃至１００℃にさらに５乃至１０分間保持し、（Ｄ）
シかる後６８乃至３００モルの水を反応混合物に添加し
て、品出するりボフラビンー５′ホスファートを分離し
、 （Ｅ）上記（Ｄ）で得られた反応混合物をＮａＯ［Ｉに
より２０乃至５０℃、ことに３０乃至４０℃の温度にお
いてｐＨ５，５乃至６として、品出するりボフラビンー
５′−ホスファートを分離する、全般的に簡単且つ効率
的なりボフラビンー５′ホスファートもしくはそのモノ
ナトリウム塩の単一反応容器製造方法をもその対象とす
るものである。

本発明方法により得られるリボフラビンホスファートは
、一般に６％以下のりボフラビン及び７５乃至８０％の
りボフラビンー５′−ホス７アートを含有しており、製
薬技術分野において適用される純度基準に適合する。そ
れ以降の高コストの精製処理は不要である。

リボフラビン−４’、５’　−シクロ燐酸エステルクロ
リド（Ｉ）は所望の生成物、５’−ＦＨＮ及びそのモノ
ナトリウム塩を高純度で得るための簡１１１な方法をも
たらす、簡単に得られるべき中間生酸物である。

実施例１ リボフラビン−４’、５’　−シクロ燐酸エステルクロ
リドの製造 ６０．１２　ｇ　（０，３９２モル）のオキシ塩化燐を
、１８０Ｉｌｌのジエチレングリコールジメチルエーテ
ル中に投入し、微細粉状のりボフラビンカリウム塩８０
ｇ（０，１３９モル）を撹拌下に添加し、この間に温度
は３０℃に上昇した。反応混合物を次いで加熱して４５
℃とし、この温度で２時間撹拌した。分散液を室温（Ｒ
Ｔ）に冷却して、生成物を窒素雰囲気下に吸引−！別し
、次いでジエチレングリコールジメチルエーテルで、次
いでアセトンで洗浄し、減圧下に乾燥した。

収量は６２．０ｇであって、これは理論量の９７．８％
に相当する。

分析結果 ＨＰＬＣによる環式クロリド含有分９５％、Ｆ＾ト閾Ｓ
法（「サイエンスＪ　２１８　　（１９８２）　２５４
頁におけるに、Ｌ、ラインハルトの論稿参照）。により
測定された分子イオンを測定した。

分子ｍ　１１１１定の結果は４５６ｇ１モルであって、
これは表記化合物のそれに相当する。生成物はカリウム
塩を含有していた。

実施例２ リボフラビン−５′−ホスファートの製造微細粉として
のりポフラビンカリウム塩６０ｇ（０、１３９モル）を
、少しずつジエチレングリコールジメチルエーテル１８
０ｍ１と、オキシ塩化燐６０．１２ｇ　（０，３９２モ
ル）＝３６層ノの混合液中に投入し、次いで反応混合物
を４５℃において２時間撹拌し、次いで７５ｇの水を同
じ温度で迅速に添加した結果、温度は急速に９０乃至９
５℃まで上昇した。水蒸気を導入してこの温度に！Ｏ乃
至１５分間保持した。次いで水１７０ｍｊを滴下添加す
ることにより反応混合物は徐々に冷却され、７０乃至８
０℃の温度になるとりボフラビンー５′−ホスファート
が沈澱し始めた。２０乃至２５℃における最後の撹拌処
理後に、生成物を吸引濾別し、残渣をまず水／エタノー
ル混合液（５０：５０容量割合）で、次いで少量の純エ
タノールで洗ゆし、減圧下、７５℃で乾燥した。

収量は約５２ｇであって、これは理論量の８２，０％に
相当する。

分析結果 ＨＰＬＣにより、生成物は約７５乃至７８％のりボフラ
ビンー５′−ホスファート、約９乃至１１％のりボフラ
ビンー４′−ホスファート、約５乃至７％のりポフラビ
ンー３′−ホスフ１−ト及び約４乃至８％の遊離リボフ
ラビンを含有することが確認された。

実施例３ リボフラビン−５′−ホスファ−トナトリウム塩の製造 当初は実施例２におけると同様にして、しかしながら加
水分解及び水１７０■ｌの水を滴下添加した後、水酸化
す）　ＩＪウムの２５％濃度水溶液を徐々に添加して反
応混合物を３０℃に冷却し、そのｐＨ値を約５．５とし
た。このｐｉ値に達した後、反応混合物を２０℃に冷却
し、直ちに吸引濾別し、水／エタノール（５０：５０容
量割合）ｆｉ合液及びエタノールで洗浄し、威圧下７５
°Ｃにおいて乾燥した。

収量は５４．５　ｇであって、これは理論量の８２．１
％に相当する。

分析結果 ＨＰＬＣにより、生成物は９乃至１１％のりボフラビン
ー４′−ホスファ−）、７５乃至７８％のナトリウムリ
ボフラビン−５′−ホスフ１−ト及び５乃至６％の未転
化リボフラビンを含有することが判明した。

旋光度　＋３７．３〜＋３８゜ ナトリウム公約５％ ３％濃度水溶液のｐ１１値　５−６．３実施例４ （＾）１２ｍｌのオキシ塩化燐をｌｏＯｍノのジエチレ
ングリコールジメチルエーテル中に導入し、微細粉とし
てのりポフラビンカリウム塩２０ｇ　（０，０４８モル
）を撹拌下に少しずつ添加し、これにより温度は３０℃
に上昇した。反応混合物を３５℃に加熱し、この温度で
３時間撹拌した。分散液をＲＴまで冷却し、生成物を窒
素雰囲気下に吸引濾別し、１００ｓＬのジエチレングリ
コールジメチルエーテルで洗浄し、乾燥した。ＩＩＰＬ
ｃ分析により、この生成物は９１％のりボフラビン−４
′　５′−燐酸クロリドと、僅かに１％の未転化リボフ
ラビンを含有することが判明した。

（Ｂ）　２００鵬りの水を７５乃至８５℃に加熱し、上
記（＾）で得られた生成物を少しずつこの加熱水中に導
入した。次いでこの反応混合物を９０乃至９５℃におい
てさらに１５分間撹拌した。次いで徐々に４０℃に冷却
し、水酸化ナトリウムの２５％濃度水溶液によりそのｐ
１１値５．５とした。所望のｐＨ値に達した後、反応混
合物を２０℃に冷却し、直ちに生成物を吸引濾別し、水
／エタノール混合＃（５０：５０容量割合）及びエタノ
ールで洗浄し、減圧下、７５℃において乾燥した。収ｆ
ｆ１１９ｇ。

分析結果 ＨＰＬＣによりこの生成物は約７６％のりボフラビンー
５′−ホスファート、約９％のりポフラビンー４′−ホ
スファート及び約５％の未転化リボフラビンを含有する
ことが確認された。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）以下の式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） で表されるリボフラビン−４′，５′−シクロ燐酸エス
   テルクロリド。
2. （２）（Ａ）リボフラビンのアルカリ金属塩を、２０乃
   至５０℃の温度で、適当な中性溶媒中において、アルカ
   リ金属塩１モルに対して１．２乃至３モルのオキシ塩化
   燐と反応させ、 （Ｂ）これにより得られた新規の請求項（１）によるリ
   ボフラビン−４′，５′−シクロ燐酸エステルクロリド
   （ I ）を含有する反応混合物に、このエステルクロリ
   ド１モルに対して３０乃至５０モルの水を直ちに添加し
   て、これにより温度を９０℃以上に上昇させ、 （Ｃ）この反応生成物に水蒸気をなお５乃至１５分導入
   して温度を８０乃至１００℃に保持し、（Ｄ）次いで６
   ８乃至１００モルの水を反応混合物に添加して晶出する
   リボフラビン−５′−ホスファートを分離し、或は必要
   に応じて、 （Ｅ）工程（Ｄ）において得られた反応生成物のｐＨ値
   を、２０乃至５０℃の温度において、ＮａＯＨにより５
   ．５乃至６に調整して、晶出するリボフラビン−５′−
   ホスファートのモノナトリウム塩を分離することを特徴
   とする、純粋なリボフラビン−５′−ホスファートもし
   くはそのナトリウム塩の製造方法。