JPH0154997B2 - - Google Patents
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- JPH0154997B2 JPH0154997B2 JP56096814A JP9681481A JPH0154997B2 JP H0154997 B2 JPH0154997 B2 JP H0154997B2 JP 56096814 A JP56096814 A JP 56096814A JP 9681481 A JP9681481 A JP 9681481A JP H0154997 B2 JPH0154997 B2 JP H0154997B2
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Description
本発明はアルカリ・ホスフアターゼおよびその
同位酵素の酵素活性の測定に臨床化学で使用され
る緩衝溶液中のアルカリ・ホスフアターゼの安定
化方法および安定化剤に関する。 血清または血漿中のアルカリ・ホスフアターゼ
の酵素活性の測定（EC3.1.3.1）は臨床診断にお
いて重要な役割を演じる。この測定は緩衝水溶液
で行なわれ、その溶液のPHは８以上でなければな
らない。緩衝剤としては、最初にバルビトン緩衝
剤（PH8.6）が使用され、次に炭酸塩／重炭酸塩
緩衝液（PH9.9）またはグリシン／水酸化ナトリ
ウム溶液緩衝液（PH10.5）が使用されていた。ホ
スホリル受容体として作用できる、高濃度のアミ
ノアルコールがアルカリ・ホスフアターゼの酵素
活性を増大することが発見された後でジエタノー
ルアミンおよび２−アミノ−２−メチルプロパン
−１−オールが臨床化学におけるアルカリ・ホス
フアターゼの酵素活性の測定用の緩衝物質として
特に使用されてきた。しかしながら、これらの緩
衝物質はアルカリ・ホスフアターゼを抑制または
不活性化する不純物を含有することがあるという
欠点を有する。ジエタノールアミンの場合に不純
物はエタノールアミンであり、これは費用のかか
る精留により分離できる。２−アミノ−２−メチ
ルプロパン−１−オールの場合に置換エチレン誘
導体（この構造はまだ完全に解明されていない）
がアルカリ・ホスフアターゼの不活性化物質とし
て多くの不純物から同定されている〔Clin.
Chem.24，1611（1978）〕。 ２−アミノ−２−メチルプロパン−１−オール
緩衝液中のアルカリ・ホスフアターゼの不活性化
が、この緩衝液に亜鉛塩を加えると回避できるこ
とはClin.Chem.Acta.98，61（1979）から既知で
ある。しかしながら、この方法は亜鉛イオンの濃
度が最適濃度より大きい場合にアルカリ・ホスフ
アターゼがまた抑制されるので正確な量で亜鉛塩
を加えた場合にだけアルカリ・ホスフアターゼが
最高酵素活性を有することが保証される。しかし
ながら、添加しようとする亜鉛イオンの最適濃度
は緩衝液の各バツチ毎に変わる。 本発明の目的は緩衝溶液中のアルカリ・ホスフ
アターゼの安定化方法および安定化剤を使用でき
るようにすることにあり、酵素活性の抑制を阻止
できそして常に最適の再現性のある結果を得るこ
とができる。 驚くべきことに、錯化した亜鉛イオンが２−ア
ミノ−２−メチルプロパン−１−オール緩衝液中
のアルカリ・ホスフアターゼの酵素活性を亜鉛塩
と全く同様に安定化できることが判つた。これが
何故驚くべきことかというと、上記の錯化した亜
鉛イオンは特に抑制に関係ある錯化剤そのもので
あるからであり、かつ、エチレンジアミンテトラ
アセテートによるアルカリ・ホスフアターゼの抑
制は亜鉛イオンによつて部分的にのみ解消し得る
こと、ならびにそれも非常に特殊な濃度の添加に
よつてのみ達成することができるだけであること
が知られているからである。本発明の新しい安定
化剤の利点は硫酸亜鉛およびその他の亜鉛塩に反
して、0.1ミリモル／より大きい安定化剤濃度
でもアルカリ・ホスフアターゼの酵素活性がさら
に抑制されることがないという事実に基づいてい
る。安定化剤濃度の最適範囲は非常に広いので単
一の安定化剤濃度を品質の異なる緩衝剤の種々の
バツチに使用できる。従つて、アルカリ・ホスフ
アターゼの安定化に亜鉛錯化合物を使用すると、
緩衝液の各特定バツチについて最適の安定化剤濃
度を決定する必要性をなくすることができる。 本発明の主題は緩衝溶液中のアルカリ・ホスフ
アターゼの安定化方法にあり、この方法は水溶性
亜鉛錯化合物を緩衝溶液に加えることを特徴とす
る。本発明の好ましい主題は２−アミノ−２−メ
チルプロパン−１−オール中のアルカリ・ホスフ
アターゼの安定化方法であつて、この方法は亜鉛
イオンとキレート剤との錯化合物を緩衝液に加え
ることを特徴とする。 本発明の他の主題は緩衝溶液中のアルカリ・ホ
スフアターゼの安定化剤にあり、これは緩衝剤に
加えて水溶性亜鉛鎖化合物を含有することを特徴
とする。 前記の新しい安定化剤を用いるアルカリ・ホス
フアターゼの測定は慣用の方法で行なう。被検査
試料を安定化剤およびマグネシウムイオン含有の
温度調節された緩衝溶液に加える。特定のインキ
ユベーシヨン時間の後で基質を加え、酵素活性に
比例する単位時間当りの吸光度の変化を光度計で
記録する。 安定化剤は亜鉛キレート錯化合物からなる。こ
の錯化合物はそのまま緩衝物質または緩衝溶液に
加えることができ、またはこの錯化合物の両構成
成分を緩衝液に同時にまたは継続的に加えること
もできる。 錯化合物の製造に適する亜鉛化合物は、特に水
または錯化剤の溶液に可溶であり、そしてアルカ
リ・ホスフアターゼの酵素的測定を妨害しない任
意の亜鉛塩、たとえば硫酸亜鉛、酢酸亜鉛、硝酸
亜鉛または水酸化亜鉛等であり、硫酸亜鉛が好ま
しい。 水溶性亜鉛錯化合物の製造に適するキレート剤
の例はエチレンジアミンテトラアセテート、トラ
ンス−１，２−ジアミノヘキサンテトラアセテー
ト、ジエチレントリアミンペンタアセテート、エ
チレングリコールビス（β−アミノエチルエーテ
ル）Ｎ，N′−テトラアセテート等であり、エチ
レンジアミンテトラアセテートが好ましい。これ
らキレート剤はそれらの塩の形態または酸の形態
のどちらでも使用できる。 前記の亜鉛錯化合物はキレート剤と亜鉛化合物
とを約１：１のモル比で混合することにより製造
する。この方法で、亜鉛錯化合物を緩衝液に固体
として、たとえばZnEDTA・4H2Oとして加える
か、または等量のたとえば硫酸亜鉛とエチレンジ
アミンテトラアセテートとを緩衝液中に順次導入
して、錯化合物を緩衝溶液中で形成するかは限定
的ではない。 錯化合物対緩衝液のモル比は１：106〜１：10
の範囲で変えることができ、約１：104〜１：103
の範囲が好ましい。 本発明を次に実施例によりさらに詳細に説明す
る。 例 １ アルカリ・ホスフアターゼの酵素活性に対する
各種安定化剤濃度の影響の試験。亜鉛エチレンジ
アミンテトラアセテート（ZnEDTA）と硫酸亜
鉛との安定化作用の比較。 次の組成の緩衝溶液2.8mlの１cm長さのセルに
ピペツトで入れた。 ２−アミノ−２−メチルプロパン−１−オール
0.96モル／ 硫酸マグネシウム 1.0ミモル／ 安定化剤（ZnSO4またはZnEDTA）
10-5〜10-2モル／ この溶液を30℃の温度に加熱し、次に血清0.1
mlを加えた。この溶液を混合し、30℃でインキユ
ベーシヨンした。インキユベーシヨン時間は測定
実験ａでは90秒であり、測定実験ｂでは10分であ
つた。0.48モル／の濃度を有するｐ−ニトロフ
エニル−リン酸ジナトリウム溶液0.1mlの添加に
よりインキユベーシヨンを終了させた。溶液を混
合し、アルカリ・ホスフアターゼの活性を405nm
における時間経過に伴なう吸光度の変化から計算
した。
同位酵素の酵素活性の測定に臨床化学で使用され
る緩衝溶液中のアルカリ・ホスフアターゼの安定
化方法および安定化剤に関する。 血清または血漿中のアルカリ・ホスフアターゼ
の酵素活性の測定（EC3.1.3.1）は臨床診断にお
いて重要な役割を演じる。この測定は緩衝水溶液
で行なわれ、その溶液のPHは８以上でなければな
らない。緩衝剤としては、最初にバルビトン緩衝
剤（PH8.6）が使用され、次に炭酸塩／重炭酸塩
緩衝液（PH9.9）またはグリシン／水酸化ナトリ
ウム溶液緩衝液（PH10.5）が使用されていた。ホ
スホリル受容体として作用できる、高濃度のアミ
ノアルコールがアルカリ・ホスフアターゼの酵素
活性を増大することが発見された後でジエタノー
ルアミンおよび２−アミノ−２−メチルプロパン
−１−オールが臨床化学におけるアルカリ・ホス
フアターゼの酵素活性の測定用の緩衝物質として
特に使用されてきた。しかしながら、これらの緩
衝物質はアルカリ・ホスフアターゼを抑制または
不活性化する不純物を含有することがあるという
欠点を有する。ジエタノールアミンの場合に不純
物はエタノールアミンであり、これは費用のかか
る精留により分離できる。２−アミノ−２−メチ
ルプロパン−１−オールの場合に置換エチレン誘
導体（この構造はまだ完全に解明されていない）
がアルカリ・ホスフアターゼの不活性化物質とし
て多くの不純物から同定されている〔Clin.
Chem.24，1611（1978）〕。 ２−アミノ−２−メチルプロパン−１−オール
緩衝液中のアルカリ・ホスフアターゼの不活性化
が、この緩衝液に亜鉛塩を加えると回避できるこ
とはClin.Chem.Acta.98，61（1979）から既知で
ある。しかしながら、この方法は亜鉛イオンの濃
度が最適濃度より大きい場合にアルカリ・ホスフ
アターゼがまた抑制されるので正確な量で亜鉛塩
を加えた場合にだけアルカリ・ホスフアターゼが
最高酵素活性を有することが保証される。しかし
ながら、添加しようとする亜鉛イオンの最適濃度
は緩衝液の各バツチ毎に変わる。 本発明の目的は緩衝溶液中のアルカリ・ホスフ
アターゼの安定化方法および安定化剤を使用でき
るようにすることにあり、酵素活性の抑制を阻止
できそして常に最適の再現性のある結果を得るこ
とができる。 驚くべきことに、錯化した亜鉛イオンが２−ア
ミノ−２−メチルプロパン−１−オール緩衝液中
のアルカリ・ホスフアターゼの酵素活性を亜鉛塩
と全く同様に安定化できることが判つた。これが
何故驚くべきことかというと、上記の錯化した亜
鉛イオンは特に抑制に関係ある錯化剤そのもので
あるからであり、かつ、エチレンジアミンテトラ
アセテートによるアルカリ・ホスフアターゼの抑
制は亜鉛イオンによつて部分的にのみ解消し得る
こと、ならびにそれも非常に特殊な濃度の添加に
よつてのみ達成することができるだけであること
が知られているからである。本発明の新しい安定
化剤の利点は硫酸亜鉛およびその他の亜鉛塩に反
して、0.1ミリモル／より大きい安定化剤濃度
でもアルカリ・ホスフアターゼの酵素活性がさら
に抑制されることがないという事実に基づいてい
る。安定化剤濃度の最適範囲は非常に広いので単
一の安定化剤濃度を品質の異なる緩衝剤の種々の
バツチに使用できる。従つて、アルカリ・ホスフ
アターゼの安定化に亜鉛錯化合物を使用すると、
緩衝液の各特定バツチについて最適の安定化剤濃
度を決定する必要性をなくすることができる。 本発明の主題は緩衝溶液中のアルカリ・ホスフ
アターゼの安定化方法にあり、この方法は水溶性
亜鉛錯化合物を緩衝溶液に加えることを特徴とす
る。本発明の好ましい主題は２−アミノ−２−メ
チルプロパン−１−オール中のアルカリ・ホスフ
アターゼの安定化方法であつて、この方法は亜鉛
イオンとキレート剤との錯化合物を緩衝液に加え
ることを特徴とする。 本発明の他の主題は緩衝溶液中のアルカリ・ホ
スフアターゼの安定化剤にあり、これは緩衝剤に
加えて水溶性亜鉛鎖化合物を含有することを特徴
とする。 前記の新しい安定化剤を用いるアルカリ・ホス
フアターゼの測定は慣用の方法で行なう。被検査
試料を安定化剤およびマグネシウムイオン含有の
温度調節された緩衝溶液に加える。特定のインキ
ユベーシヨン時間の後で基質を加え、酵素活性に
比例する単位時間当りの吸光度の変化を光度計で
記録する。 安定化剤は亜鉛キレート錯化合物からなる。こ
の錯化合物はそのまま緩衝物質または緩衝溶液に
加えることができ、またはこの錯化合物の両構成
成分を緩衝液に同時にまたは継続的に加えること
もできる。 錯化合物の製造に適する亜鉛化合物は、特に水
または錯化剤の溶液に可溶であり、そしてアルカ
リ・ホスフアターゼの酵素的測定を妨害しない任
意の亜鉛塩、たとえば硫酸亜鉛、酢酸亜鉛、硝酸
亜鉛または水酸化亜鉛等であり、硫酸亜鉛が好ま
しい。 水溶性亜鉛錯化合物の製造に適するキレート剤
の例はエチレンジアミンテトラアセテート、トラ
ンス−１，２−ジアミノヘキサンテトラアセテー
ト、ジエチレントリアミンペンタアセテート、エ
チレングリコールビス（β−アミノエチルエーテ
ル）Ｎ，N′−テトラアセテート等であり、エチ
レンジアミンテトラアセテートが好ましい。これ
らキレート剤はそれらの塩の形態または酸の形態
のどちらでも使用できる。 前記の亜鉛錯化合物はキレート剤と亜鉛化合物
とを約１：１のモル比で混合することにより製造
する。この方法で、亜鉛錯化合物を緩衝液に固体
として、たとえばZnEDTA・4H2Oとして加える
か、または等量のたとえば硫酸亜鉛とエチレンジ
アミンテトラアセテートとを緩衝液中に順次導入
して、錯化合物を緩衝溶液中で形成するかは限定
的ではない。 錯化合物対緩衝液のモル比は１：106〜１：10
の範囲で変えることができ、約１：104〜１：103
の範囲が好ましい。 本発明を次に実施例によりさらに詳細に説明す
る。 例 １ アルカリ・ホスフアターゼの酵素活性に対する
各種安定化剤濃度の影響の試験。亜鉛エチレンジ
アミンテトラアセテート（ZnEDTA）と硫酸亜
鉛との安定化作用の比較。 次の組成の緩衝溶液2.8mlの１cm長さのセルに
ピペツトで入れた。 ２−アミノ−２−メチルプロパン−１−オール
0.96モル／ 硫酸マグネシウム 1.0ミモル／ 安定化剤（ZnSO4またはZnEDTA）
10-5〜10-2モル／ この溶液を30℃の温度に加熱し、次に血清0.1
mlを加えた。この溶液を混合し、30℃でインキユ
ベーシヨンした。インキユベーシヨン時間は測定
実験ａでは90秒であり、測定実験ｂでは10分であ
つた。0.48モル／の濃度を有するｐ−ニトロフ
エニル−リン酸ジナトリウム溶液0.1mlの添加に
よりインキユベーシヨンを終了させた。溶液を混
合し、アルカリ・ホスフアターゼの活性を405nm
における時間経過に伴なう吸光度の変化から計算
した。
【表】
ZnEDTAに比較して亜鉛塩についての最適安
定化作用の濃度範囲が狭いことが上記の表から明
白に判る。硫酸亜鉛は約10-3モル／の安定化剤
濃度から抑制剤として作用し、硫酸亜鉛の10-2モ
ル／の濃度で、酵素活性はゼロに低下する。こ
れに対してZnEDTAの場合には、最適酵素活性
が依然として測定できる。 例 ２ 異なる抑制剤濃度の緩衝液中における安定化剤
ZnSO4およびZnEDTAの作用の試験。 ２−アミノ−２−メチルプロパン−１−オール
の分別蒸留から、アルカリ・ホスフアターゼを高
度または低度に不活性化する留分１および留分２
をそれぞれ、153〜164℃（最初の留出物）および
164℃（主留出物）の温度で採取した。これらの
留分を使用してZnSO4またはZnEDTAの存在下
におけるアルカリ・ホスフアターゼの酵素活性を
測定した。この測定は例１と同様に90秒のインキ
ユベーシヨン時間を用いて行なつた。 次表において、10-3モル／の濃度における安
定剤の濃度を比較した。アルカリ・ホスフアター
ゼの酵素活性はｕ／で示す。
定化作用の濃度範囲が狭いことが上記の表から明
白に判る。硫酸亜鉛は約10-3モル／の安定化剤
濃度から抑制剤として作用し、硫酸亜鉛の10-2モ
ル／の濃度で、酵素活性はゼロに低下する。こ
れに対してZnEDTAの場合には、最適酵素活性
が依然として測定できる。 例 ２ 異なる抑制剤濃度の緩衝液中における安定化剤
ZnSO4およびZnEDTAの作用の試験。 ２−アミノ−２−メチルプロパン−１−オール
の分別蒸留から、アルカリ・ホスフアターゼを高
度または低度に不活性化する留分１および留分２
をそれぞれ、153〜164℃（最初の留出物）および
164℃（主留出物）の温度で採取した。これらの
留分を使用してZnSO4またはZnEDTAの存在下
におけるアルカリ・ホスフアターゼの酵素活性を
測定した。この測定は例１と同様に90秒のインキ
ユベーシヨン時間を用いて行なつた。 次表において、10-3モル／の濃度における安
定剤の濃度を比較した。アルカリ・ホスフアター
ゼの酵素活性はｕ／で示す。
【表】
この表は２種の安定化剤は10-3モル／の濃度
において極めて高濃度の不純物を含む蒸留残留分
に対してだけ均等であることを示している。しか
しながら、低濃度の不純物を含む緩衝剤留分につ
いては、同じ安定化剤濃度では、硫酸亜鉛の場合
に、ZnEDTAと比較して約80％のアルカリ・ホ
スフアターゼの酵素活性の抑制が生じる。 例 ３ ２−アミノ−２−メチルプロパン−１−オール
緩衝剤中のアルカリ・ホスフアターゼの安定化に
対する各種亜鉛錯化合物の適応性の試験。 測定は例１と同様に実施し、安定化剤濃度は全
ての場合に10-4モル／であつた。インキユベー
シヨン時間は90秒または10分であつた。この結果
を次表に示す。
において極めて高濃度の不純物を含む蒸留残留分
に対してだけ均等であることを示している。しか
しながら、低濃度の不純物を含む緩衝剤留分につ
いては、同じ安定化剤濃度では、硫酸亜鉛の場合
に、ZnEDTAと比較して約80％のアルカリ・ホ
スフアターゼの酵素活性の抑制が生じる。 例 ３ ２−アミノ−２−メチルプロパン−１−オール
緩衝剤中のアルカリ・ホスフアターゼの安定化に
対する各種亜鉛錯化合物の適応性の試験。 測定は例１と同様に実施し、安定化剤濃度は全
ての場合に10-4モル／であつた。インキユベー
シヨン時間は90秒または10分であつた。この結果
を次表に示す。
【表】
【表】
試験した全ての亜鉛錯化合物がアルカリ・ホス
フアターゼの安定化剤に適していることが判る。
フアターゼの安定化剤に適していることが判る。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 水溶性亜鉛錯化合物を２−アミノ−２−メチ
ルプロパン−１−オール緩衝液に加えることを特
徴とする該緩衝液中のアルカリ・ホスフアターゼ
の安定化方法。 ２ 亜鉛イオンとキレート剤との錯化合物を前記
緩衝液に加える特許請求の範囲第１項に記載の方
法。 ３ 亜鉛エチレンジアミンテトラアセテートを前
記緩衝液に加える特許請求の範囲第１項または第
２項に記載の方法。 ４ 亜鉛化合物およびキレート剤を前記緩衝液に
加える特許請求の範囲第１項〜第３項のいずれか
１つに記載の方法。 ５ ２−アミノ−２−メチルプロパン−１−オー
ル緩衝液に加えて、水溶性亜鉛錯化合物を含有す
ることを特徴とする該緩衝液中のアルカリ・ホス
フアターゼの安定化剤。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19803023485 DE3023485A1 (de) | 1980-06-24 | 1980-06-24 | Verfahren und mittel sowie deren verwendung zur stabilisierung der alkalischen phosphatase |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5733596A JPS5733596A (en) | 1982-02-23 |
| JPH0154997B2 true JPH0154997B2 (ja) | 1989-11-21 |
Family
ID=6105261
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9681481A Granted JPS5733596A (en) | 1980-06-24 | 1981-06-24 | Stabilizing method and agent of alkali phosphatase |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4400464A (ja) |
| EP (1) | EP0042969B1 (ja) |
| JP (1) | JPS5733596A (ja) |
| CS (1) | CS224614B2 (ja) |
| DD (1) | DD159781A5 (ja) |
| DE (2) | DE3023485A1 (ja) |
| IL (1) | IL63141A (ja) |
| MX (1) | MX155094A (ja) |
| ZA (1) | ZA814217B (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4555484A (en) * | 1983-07-25 | 1985-11-26 | Eastman Kodak Company | Analytical element and method for alkaline phosphatase assay |
| US5143825A (en) * | 1990-03-01 | 1992-09-01 | Abbott Laboratories | Stabilized substrate for use in an immunoassay |
| DE4103220A1 (de) * | 1991-02-02 | 1992-08-06 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur stabilisierung von 1-methylhydantoinase, verwendung einer stabilisierten 1-methylhydantoinase zur bestimmung eines analyten, entsprechendes bestimmungsverfahren sowie hierfuer geeignete mittel |
| WO1994005803A1 (en) * | 1992-08-31 | 1994-03-17 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Method for stabilizing an alkoxy amine buffer |
| EP0794249B1 (en) * | 1994-10-21 | 2003-12-17 | Daiichi Pure Chemicals Co., Ltd. | Method for stabilizing an aqueous alkaline phosphatase solution |
| CN102109430B (zh) | 2009-12-25 | 2013-11-06 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 有核红细胞模拟粒子，血液质控物及其制备方法和用途 |
| CN102628863B (zh) * | 2012-04-19 | 2016-05-11 | 上海蓝怡科技有限公司 | 标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液 |
| CN102636639A (zh) * | 2012-04-19 | 2012-08-15 | 上海蓝怡科技有限公司 | 碱性磷酸酶标记物的稀释液 |
| JP6417517B2 (ja) * | 2013-07-31 | 2018-11-07 | 株式会社シノテスト | ヘモグロビンの影響を回避した生体試料中の酵素活性測定試薬及び測定方法 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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-
1980
- 1980-06-24 DE DE19803023485 patent/DE3023485A1/de not_active Withdrawn
-
1981
- 1981-05-20 DE DE8181103866T patent/DE3168872D1/de not_active Expired
- 1981-05-20 EP EP81103866A patent/EP0042969B1/de not_active Expired
- 1981-06-22 CS CS814709A patent/CS224614B2/cs unknown
- 1981-06-22 US US06/276,399 patent/US4400464A/en not_active Expired - Lifetime
- 1981-06-22 ZA ZA814217A patent/ZA814217B/xx unknown
- 1981-06-22 IL IL63141A patent/IL63141A/xx not_active IP Right Cessation
- 1981-06-22 DD DD81231009A patent/DD159781A5/de unknown
- 1981-06-23 MX MX187936A patent/MX155094A/es unknown
- 1981-06-24 JP JP9681481A patent/JPS5733596A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS224614B2 (en) | 1984-01-16 |
| IL63141A (en) | 1984-08-31 |
| EP0042969A1 (de) | 1982-01-06 |
| ZA814217B (en) | 1982-07-28 |
| EP0042969B1 (de) | 1985-02-13 |
| DE3168872D1 (en) | 1985-03-28 |
| DD159781A5 (de) | 1983-04-06 |
| US4400464A (en) | 1983-08-23 |
| JPS5733596A (en) | 1982-02-23 |
| MX155094A (es) | 1988-01-26 |
| DE3023485A1 (de) | 1982-01-07 |
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