CS224614B2 - Method for stabilization alcalic phosphatose - Google Patents
Method for stabilization alcalic phosphatose Download PDFInfo
- Publication number
- CS224614B2 CS224614B2 CS814709A CS470981A CS224614B2 CS 224614 B2 CS224614 B2 CS 224614B2 CS 814709 A CS814709 A CS 814709A CS 470981 A CS470981 A CS 470981A CS 224614 B2 CS224614 B2 CS 224614B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- buffer
- zinc
- alkaline phosphatase
- added
- complex
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 10
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 title description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 title 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 claims description 24
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 claims description 24
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 24
- 239000011701 zinc Substances 0.000 claims description 16
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims description 10
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 9
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 claims description 6
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 150000003752 zinc compounds Chemical class 0.000 claims description 3
- ZOIORXHNWRGPMV-UHFFFAOYSA-N acetic acid;zinc Chemical compound [Zn].CC(O)=O.CC(O)=O ZOIORXHNWRGPMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004246 zinc acetate Substances 0.000 claims description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 14
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 14
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 description 9
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 239000011686 zinc sulphate Substances 0.000 description 6
- 235000009529 zinc sulphate Nutrition 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 3
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical group NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoisobutyric acid Chemical compound CC(C)(N)C(O)=O FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical class C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 2
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 2
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ONDPHDOFVYQSGI-UHFFFAOYSA-N zinc nitrate Chemical compound [Zn+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O ONDPHDOFVYQSGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 description 2
- FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 5,5-diethylbarbituric acid Chemical compound CCC1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 1
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MJOQJPYNENPSSS-XQHKEYJVSA-N [(3r,4s,5r,6s)-4,5,6-triacetyloxyoxan-3-yl] acetate Chemical compound CC(=O)O[C@@H]1CO[C@@H](OC(C)=O)[C@H](OC(C)=O)[C@H]1OC(C)=O MJOQJPYNENPSSS-XQHKEYJVSA-N 0.000 description 1
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000001414 amino alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 229960002319 barbital Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- HFNQLYDPNAZRCH-UHFFFAOYSA-N carbonic acid Chemical compound OC(O)=O.OC(O)=O HFNQLYDPNAZRCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000008139 complexing agent Substances 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004177 diethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N diethylamine Chemical compound CCNCC HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VIYFPAMJCJLZKD-UHFFFAOYSA-L disodium;(4-nitrophenyl) phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][N+](=O)C1=CC=C(OP([O-])([O-])=O)C=C1 VIYFPAMJCJLZKD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- WHYUWYVXDNNLTR-UHFFFAOYSA-J dizinc;2-[2-[bis(carboxylatomethyl)amino]ethyl-(carboxylatomethyl)amino]acetate Chemical compound [Zn+2].[Zn+2].[O-]C(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC([O-])=O)CC([O-])=O WHYUWYVXDNNLTR-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol Substances OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940093476 ethylene glycol Drugs 0.000 description 1
- 229940071106 ethylenediaminetetraacetate Drugs 0.000 description 1
- 238000004508 fractional distillation Methods 0.000 description 1
- 230000000937 inactivator Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- SCZVXVGZMZRGRU-UHFFFAOYSA-N n'-ethylethane-1,2-diamine Chemical compound CCNCCN SCZVXVGZMZRGRU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFGREXWGYUGZLY-UHFFFAOYSA-N phosphoryl Chemical group [P]=O LFGREXWGYUGZLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- CIJQGPVMMRXSQW-UHFFFAOYSA-M sodium;2-aminoacetic acid;hydroxide Chemical compound O.[Na+].NCC([O-])=O CIJQGPVMMRXSQW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- WGPCGCOKHWGKJJ-UHFFFAOYSA-N sulfanylidenezinc Chemical compound [Zn]=S WGPCGCOKHWGKJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UGZADUVQMDAIAO-UHFFFAOYSA-L zinc hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Zn+2] UGZADUVQMDAIAO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940007718 zinc hydroxide Drugs 0.000 description 1
- 229910021511 zinc hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- YTSDVWYUJXKXCC-UHFFFAOYSA-L zinc;2-[2-[carboxylatomethyl(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetate Chemical compound [Zn+2].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O YTSDVWYUJXKXCC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/42—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving phosphatase
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
Vynález se týká způsobu stabilizace alkalické fosfatázy v pufrových roztocích, jak se používají v klinické chemii ke stanovení enzymatické aktivity alkalické fosfatázy a jejích izoenzymů.
Stanovení enzymatické aktivity alkalické fosfatázy (ЕС 3.1.3.1·) v séru nebo plasmě hraje důležitou roli v klinické diagnostice. Toto stanovení se provádí v pufrovém vodném roztoku, přičemž hodnota pH roztoku by měla být nad 8. Jako pufr byl nejprve použitý barbitonový pufr (pH 8,6), později uhličitan - hydrouhličitan (pH 9,9) nebo glycin - louh sodný (pH 10,5). Potom bylo zjiětěno, že aminoalkoholy, které mohou fungovat jako akceptory fosforylu, zvyšují ve vysoké koncentraci enzymatickou aktivitu alkalické fosfatázy, a pro stanovení enzymatické aktivity alkalické fosfatázy bylo v klinické chemii především použito jako pufru dietanolaminu a 2-amino-2-metylpropanolu-(1). Tyto pufry však mají nevýhodu, že mohou obsahovat znečištěniny, které alkalickou fosfatázu inhibují nebo inaktivují. V případě dietanolaminu se jedná o etanolamin, který se může oddělit nákladnou rektifikací. V případě 2-amino-2-metylpropanolu-(1) byl identifikován z řady znečištěnin jako inaktivátor alkalické fosfatázy substituovaný etylénový derivát v té době ne zcela vyjasněné struktury (Clin. Chem. 2£, 1 611 /1978/).
Z Clin. Chem. Acta 98, 61 (1979) je známo, že inaktivace alkalické fosfatázy v 2-amino-2-metylpropanolu-(1) jako pufru se může odstranit, když se přidají k pufru zinečnaté soli. Tento způsob má však nevýhodu, že při nadoptimální koncentraci zinečnatých iontů je však alkalická fosfatáza inhibována, takže pouze při přesnějším dávkování zinečnatých solí je zajištěna maximální enzymatická aktivita alkalické fosfatázy. Optimální koncentrace přidávaných zinečnatých iontů je však pro každou dávku pufru rozdílná.
Úkolem vynálezu je zajistit způsob a prostředek ke stabilizaci alkalické, fosfatázy v pufrových roztocích, kterým by se zmennila inhibice enzymatické aktivity a který by poskytoval reprodukovatelné výsledky.
Neočekávaně bylo zjištěno, že zinečnaté ionty tvořící komalex mohou stejně tak dobře jako zinečnaté soU stabilizovat enzymmaickou a^kivil^u alkalické fosfatázy v 2-amino-2-m^ej^lpropia^c^oi^-(1 ) jako pufru. Toto je především proto tak neočekávané, že jsou pro inhibici podstatné právě kommpexotvorné látky a na druhé straně je známé, že inhibice ^Λβΐ,ϊοké fosfatázy se může ntyléndiaaintnttaacetánea opět poUačit pouze částečně a jen za přídavku zcela určité koncentrace zinečnatých iontů. Výhoda nových sta^bli^s^ál^oi^ů spočívá v tom, že na rozdíl od síranu zinečnatého a dalších zinečnatých s^o^ií nenastává u ^παθι^^οί větších než 0,1 mmluui již žádná inhibice enzymmaické akivity alkaLické fosfatázy. Rozmmzí optimální koncentrace stabilizátoru je velice široké, takže jediná koncentrace sta^biLi^z^átoru je pouužtelná pro různé dávky pufru rozdílné kvalty. Pi poouiií zinnčnttých komplexů ke stabilizaci alkalické fosfatázy odpadá tedy pro danou pufrovou dávku optimální stanovení koncentrace stabilizátoru.
Předmětem vynálezu je způsob stabilitacn alkalické fosfatázy v pufrových roztocích, který se vyznačuje tím, že se přidá k pufrovému roztoku zi^nečnatý kommlex rozpustný ve vodě, s výhodou způsob stabilizace alkalické fosfatázy v 2-tminoo2-ma'tyУpгopptnOu-(1) jako pufru, který se vyznačuje tím, že se přidá k pufru kommlex zinečnatých iontů a chelttotvorné látky.
Stanovení alkalické fosfatázy pomocí nového sta^biLi^z^át^or^u se provádí obvyklým způsobem: ke zkoušenému vzorku se přidá termostatovaný pufrový roztok, který obsahuje 8ίθΜ11zátor a hořečnaté ionty. Po určité inkubační době se přidá subbsrát , a ve fotometru se registruje změna extinkce za časovou jednotku, která je úměrná enzymmaické tktivitt.
Stabilizátor sestává ze zinečnatého chelatonového kommlexu. Tento komp^p-ex se může přidat k pufru jako takový nebo se mohou přidat k pufru obě složky komplexu současně nebo po sobě.
Vhodnými zinninttýai sloučeninami pro přípravu kommlexu jsou obzvláště všechny zinečnaté soli, které jsou rozpustné ve vodě nebo v roztoku kommlexotvorné látky a které neruší enzymmaické stanovení fosfatázy, jako síran zinečnatý, acetát zinečnatý, dusičnan zinečnatý nebo také hydroxid zine^aty atd., s výhodou síran , zinečnatý.
Vhodnou che^t-otvornou látkou pro tvorbu iinnčnttého kommlexu rozpustného ve vodě je ntppítlad ntyléndiaaintntraacetát, trans-1,2-diaшinohexεmCteraaceeát, dintyléntгtaminlnntaacetot, ntyléiglykol-bis-(bnta-tainolnyУétnг)-N,N*-tntraaintét atd·, s výhodou etylénditainCenratcenát. Cheeatotvorné látky se mohou přitom použit bu3 ve formě soU nebo také ve formě kyseeiny.
Příprava iineinatéeo komplexu se provádí smícháním chelatotvorné látky se zinečnatou sloučeninou v molárním poměru 1:1. Při-tom není kritické, , zda se k pufru přidá zi^nečnatý klmalnx jako látka, nappíklad Zn EDTA . 4 ^C, nebo se přidá do pufru nkviaolární množiv! ^ρ^^^ síranu zinečnatého a ntyléndiaaintntrttintátu po sobě, takže se může kommlex vytvdit v pufrovém roztoku.
Motorní ^měr komplexu к pufru se můto mtoit v rozmezí 1:10^ až 1:10; .výh^né je rozmezi 1:104 až 1 :1 C3. .
Vynález bude blíže objasněn v následd jících příkladech
22461 4
Přikladl ·
Zkoušení vlivu různých koncentrací stabilizátoru na enzymatickou aktivitu alkalické fosfatázy. Srovnání stabilizačního účinku etyléndiamintetraacetátu zinečnatého (Zn ESTA) se sírmeem zinečnatým:
Do kyvety s tlouštkou vrstvy 1 cm se odpipetuje 2,8 ml pufrového roztoku následujíc lího složení:
2-tmino-2-aenylprlpanol-1 ) 0,96 moou/l síran horečnatý 1 ,0 molu/1 stabilizátor (ZnS^O^ nebo ZnEDTAj 10”' až VO”2 molu/1
Roztok se upraví na teplotu 30 °C a potom se přidá 0,1 ml séra. Roztok se smíchá a předinkubuje při 30 °C. Doba předinkubace je při měření a) yG sekund, při měření b) 10 minut. Inkubace se ukončí přídavkem 0,1 ml roztoku dvojsodné soli p-nitrlfnnylflsfát/ při 0,48 mol^/lL. Roztok se smíchá a z brzké změny extinkce při 405 nm se vypočítá aktivita alkalické fosfatázy.
| Kooccntrtcn stabilizátoru (moVl) | Enzymmaická aktivita (U/l) | |||
| a) Přednnk/btce 90 sek. | b) Předinkubace 10 min | |||
| ZnSO4 | Zn EDTA | ZnS04 | Zn EDTA | |
| 1 O5 | 201 | 184 | 171 | 1 62 |
| 3. 10“5 | 209 | 1 91 | 1 86 | 184 |
| 10”4 | 206 | 202 | 200 | 20C |
| 3. 10”4 | 201 | 205 | 205 | 202 |
| 103 | 157 | 204 | 1>1 | 203 |
| 3. 10“3 | 11 | 200 | 18 | 199 |
| 10“2 | 0 | 195 | 0 | 1 96 |
Z tabulky vyplývá jednoznačně, že pro zinečnatou sůl existuje ve srovnání s Zn EDTA pouze úzké koncemi-rační rozmezí optimálního stabilizačního účinku. Asi od koncentrace stabi1izátlr/ 10“3 moHu/l působí s^an zi.nečnatý jako inhibitor a prii koncentrtci 10~2 m^u/l síranu zinečnatého je snížena enzyímaická aktivitě na 0, zatímco v případě Zn EDTA· se může měěit ještě při optimální enzymaaické aktivitě.
Příklad 2
Zkoušení účinku stabilizátoru·ZnSO^ a Zn EDTA v pufru různé koncentrace inhibitoru:
Při frakční destilaci 2-aainto2-πatyl‘lprolPatOu/(1 ) se získají frakce, které způsobuj více nebo méně silnou inaktivaci alkaiické fosfatázy. Tyto frakce se p<^u^i;jí pro stanovení enzymaaické aktivity alkalické fosfatázy za přítomnosti ZnSO^ nebo Zn EDTA. Stanovení se provádělo analogicky podle příkladu 1 s dobou inkubace 90 sekund.
V následující tabulce je uveden účinek stabilizátorů při konceetraci 1 0“J moolZll. Enzymmaická aktivita alkalické fosfatázy je udána v U/l. ,
| Pufr | Enzymetieká aktiviti ZnSO^ | 3 (U/l) Zn EDTA |
| frakce 1 | 41 | 1 9 5 |
| frakce 2 | 43 | 202.. |
| zbytek | 203 | 204 |
Tabulka ukazuje, že pouze v destilačním zbytku při extrémně zvýšené koncentraci, znečištěnu jsou oba stabilizátory při koi^<^e^e^t^raei 10“J moOu/1 rovnocenné. Stejná koncentrace stabilizátorů vede však při méně znečištěných frakcích pufru v případě síranu zinečnatého k 80% inhibiei enzymmtieké aktivity alkalické fosfatázy, ve srovnání s Zn EDTA.
Příklad 3
Zkoušení způssoilostí různých zinečnatých komplexů ke stabilizaci alkalické fosfatázy v 2-amino-2-metyyproopnnouu(1) jako pufru:
Stanovení se provádí analogicky podle příkladu 1 , přičemž je koncentrace stabilizátoru ve všech ^^ade^ ΙΟ“'* molu/1; doba ^e^nku^ce je 90 sekund nebo 10 Výsledky jsou uvedeny v následujcí tabulce:
| Zinečnatý kommlex | Enzymmaické akkivita (U/l) | |
| Předinkubace a) 90 sek. | Předinkubace b) 10 mio | |
| e tyL^éodi emiiOe traac e tát | 212 | 214 |
| traos-1,2-diamiooheean0etraacetát | 213 | 206 |
| diety!éotгiодinptotaacetát | 216 | 218 |
| e tyléoglykol-M a- (ieta-aInino-etylé ter)- . -N, N^tetraacetét | 207 | 217 |
| bez stabnizátoru | 180 | 82 |
Z tabulky ' vyplývá, že všechny zkoušené zinečnaté komplexy jsou vhodné ke stabilizaci aLkalické fosfatázy.
Claims (4)
1. Způsob stabilizace alkalické fosfatázy v pufrových roztocích, vyznačený tím, že se přidá k piufrovému roztoku zinečnatý kommlex rozpustný ve vodě.
2. Způsob stabilizace alkalické fosfatázy v' 2-amino-2-metylpropanolu-(1) jako pufru,, vyznačený tím, že se k pufru přidá komplex zinečnatých iontů a chelatotvorné látky.
3. Způsob podle bodů 1 a 2, vyznačený tím, že se k pufru přidá ttlléodialninOetra-2 acetát zinečnatý..~
4. Způsob podle bodů ' 1 až 3, vyznačený tím, že se k pufru přidá zinečnatá sloučenina a chelatotvorné látka.*
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19803023485 DE3023485A1 (de) | 1980-06-24 | 1980-06-24 | Verfahren und mittel sowie deren verwendung zur stabilisierung der alkalischen phosphatase |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS224614B2 true CS224614B2 (en) | 1984-01-16 |
Family
ID=6105261
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS814709A CS224614B2 (en) | 1980-06-24 | 1981-06-22 | Method for stabilization alcalic phosphatose |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4400464A (cs) |
| EP (1) | EP0042969B1 (cs) |
| JP (1) | JPS5733596A (cs) |
| CS (1) | CS224614B2 (cs) |
| DD (1) | DD159781A5 (cs) |
| DE (2) | DE3023485A1 (cs) |
| IL (1) | IL63141A (cs) |
| MX (1) | MX155094A (cs) |
| ZA (1) | ZA814217B (cs) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4555484A (en) * | 1983-07-25 | 1985-11-26 | Eastman Kodak Company | Analytical element and method for alkaline phosphatase assay |
| US5143825A (en) * | 1990-03-01 | 1992-09-01 | Abbott Laboratories | Stabilized substrate for use in an immunoassay |
| DE4103220A1 (de) * | 1991-02-02 | 1992-08-06 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur stabilisierung von 1-methylhydantoinase, verwendung einer stabilisierten 1-methylhydantoinase zur bestimmung eines analyten, entsprechendes bestimmungsverfahren sowie hierfuer geeignete mittel |
| WO1994005803A1 (en) * | 1992-08-31 | 1994-03-17 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Method for stabilizing an alkoxy amine buffer |
| EP0709458B1 (en) * | 1994-10-21 | 1998-06-10 | Daiichi Pure Chemicals Co., Ltd. | Method for stabilizing an aqueous alkaline phosphatase solution |
| CN102109430B (zh) | 2009-12-25 | 2013-11-06 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 有核红细胞模拟粒子，血液质控物及其制备方法和用途 |
| CN102628863B (zh) * | 2012-04-19 | 2016-05-11 | 上海蓝怡科技有限公司 | 标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液 |
| CN102636639A (zh) * | 2012-04-19 | 2012-08-15 | 上海蓝怡科技有限公司 | 碱性磷酸酶标记物的稀释液 |
| JP6417517B2 (ja) * | 2013-07-31 | 2018-11-07 | 株式会社シノテスト | ヘモグロビンの影響を回避した生体試料中の酵素活性測定試薬及び測定方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4132598A (en) * | 1977-06-03 | 1979-01-02 | Modrovich Ivan Endre | Stabilized liquid phosphate containing diagnostic compositions and method of preparing same |
-
1980
- 1980-06-24 DE DE19803023485 patent/DE3023485A1/de not_active Withdrawn
-
1981
- 1981-05-20 DE DE8181103866T patent/DE3168872D1/de not_active Expired
- 1981-05-20 EP EP81103866A patent/EP0042969B1/de not_active Expired
- 1981-06-22 CS CS814709A patent/CS224614B2/cs unknown
- 1981-06-22 US US06/276,399 patent/US4400464A/en not_active Expired - Lifetime
- 1981-06-22 IL IL63141A patent/IL63141A/xx not_active IP Right Cessation
- 1981-06-22 DD DD81231009A patent/DD159781A5/de unknown
- 1981-06-22 ZA ZA814217A patent/ZA814217B/xx unknown
- 1981-06-23 MX MX187936A patent/MX155094A/es unknown
- 1981-06-24 JP JP9681481A patent/JPS5733596A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0042969B1 (de) | 1985-02-13 |
| US4400464A (en) | 1983-08-23 |
| MX155094A (es) | 1988-01-26 |
| IL63141A (en) | 1984-08-31 |
| DD159781A5 (de) | 1983-04-06 |
| JPS5733596A (en) | 1982-02-23 |
| DE3168872D1 (en) | 1985-03-28 |
| DE3023485A1 (de) | 1982-01-07 |
| EP0042969A1 (de) | 1982-01-06 |
| JPH0154997B2 (cs) | 1989-11-21 |
| ZA814217B (en) | 1982-07-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hull et al. | Phosphorus-31 nuclear magnetic resonance study of alkaline phosphatase: the role of inorganic phosphate in limiting the enzyme turnover rate at alkaline pH | |
| Deves et al. | Identification of a new transport system (y+ L) in human erythrocytes that recognizes lysine and leucine with high affinity. | |
| Chance | The energy-linked reaction of calcium with mitochondria | |
| Anderson et al. | Evaluation of 5-enolpyruvoylshikimate-3-phosphate synthase substrate and inhibitor binding by stopped-flow and equilibrium fluorescence measurements | |
| Stallcup et al. | Coupled transport of glutamate and sodium in a cerebellar nerve cell line | |
| CS224614B2 (en) | Method for stabilization alcalic phosphatose | |
| Trentham et al. | The kinetics of the reaction of nitrophenyl phosphates with alkaline phosphatase from Escherichia coli | |
| Gallo et al. | Glutamate receptor subtypes in cultured cerebellar neurons: modulation of glutamate and γ‐aminobutyric acid release | |
| EP2031402B1 (en) | Method for measuring coagulation time of blood sample | |
| Rindler et al. | (Na+, K+)-cotransport in the Madin-Darby canine kidney cell line. Kinetic characterization of the interaction between Na+ and K+. | |
| AU602129B2 (en) | Method for the determination of a differential white blood cell count | |
| DK0509086T3 (da) | Fremgangsmåde til bestemmelse af koncentrationen af antikoagulanter | |
| Pochini et al. | Reconstitution into liposomes and functional characterization of the carnitine transporter from renal cell plasma membrane | |
| RU1809922C (ru) | Реагент дл определени ионной силы или плотности мочи | |
| Lapetina | Effect of pertussis toxin on the phosphodiesteratic cleavage of the polyphosphoinositides by guanosine 5′-O-thiotriphosphate and thrombin in permeabilized human platelets | |
| de Jong et al. | Anticholinesterase activity and rate of decomposition of some phosphylated oximes | |
| Jorpes | The colorimetric determination of histidine | |
| Bunton et al. | Micellar effects upon phosphorylation and phosphate ester hydrolysis | |
| Bergman et al. | Effect of detergent on kinetic Jaffé-method assay of creatinine. | |
| JP7056143B2 (ja) | 免疫学的測定用組成物および免疫学的測定方法 | |
| Bennett et al. | Inhibition of the dehydrogenase activity of sheep liver cytoplasmic aldehyde dehydrogenase by magnesium ions | |
| Bresler et al. | Double dependence of organic acid active transport in proximal tubules of surviving frog kidney on sodium ions I. Influence of sodium ions in bath medium on the uptake and run out of fluorescein and uranin | |
| Lightcap et al. | Discrete monomeric metaphosphate anion as an intermediate in the hydrolysis of. mu.-monothiopyrophosphate | |
| Lacko et al. | Interaction of benzoic acid derivatives with the transport system of glucose in human erythrocytes | |
| EP0344220B1 (en) | Cold stable liquid creatinine reagent |