JPH01304895A - Ｎ‐末端プロリンで始まるタンパク質の製造法 - Google Patents

Ｎ‐末端プロリンで始まるタンパク質の製造法

Info

Publication number
JPH01304895A
JPH01304895A JP1089576A JP8957689A JPH01304895A JP H01304895 A JPH01304895 A JP H01304895A JP 1089576 A JP1089576 A JP 1089576A JP 8957689 A JP8957689 A JP 8957689A JP H01304895 A JPH01304895 A JP H01304895A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
proline
terminal
protein
terminal extension
stimulating factor
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP1089576A
Other languages
English (en)
Inventor
Paul Dr Habermann
パウル、ハーベルマン
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hoechst AG
Original Assignee
Hoechst AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoechst AG filed Critical Hoechst AG
Publication of JPH01304895A publication Critical patent/JPH01304895A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/53—Colony-stimulating factor [CSF]
    • C07K14/535—Granulocyte CSF; Granulocyte-macrophage CSF
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 Ｎ−末端プロリンで始まるタンパク質の遺伝子工学的手
法による調製は、既に開示されている。これは、アスパ
ラギン酸、またはＣ−末端アスパラギン酸を含む短いア
ミノ酸配列物、がプロリンの前に位置している、より長
いタンパク質を先ず発現させるものであり、これが所望
のタンパク質の始まりに相当する。次いで、この中間体
はタンパク質分解によって切断されて、プロリン開始部
を有する所望のタンパク質を遊離する。このタイプの工
程は、欧州特許出願（ＥＰ−Ａ）第０．２１９，７８１
号、第０．２２７，９３８号および第０．２２８，０１
８号明細書に記載されている。
もちろん、この既知の工程は、遊離されるタンパク質が
充分に酸安定性である場合にのみ適用される。しかしな
がら、比較的に酸安定性であるタンパク質の場合でさえ
も、副反応が起きるおそれがあり、これは、一方では収
率の直接的な減少をもたらし、他方では望ましくない副
産物からの分離の難しさによる更なる収率の減少をもた
らす。
上記のような限定がなく、さらに記述されたような欠点
を有しない工程がいま見出された。本発明によるＮ−末
端プロリンで始まるタンパク質は、短いＮ−末端伸長部
を有し、かつ遺伝子操作によって得ておいた前駆体を、
アミノペプチダーゼＰで酵素的に切断することによって
、調製される。
前駆体の短いＮ−末端伸長部は、とくに、！Ｒ菌からの
タンパク質の通常の直接的発現において見られるように
、メチオニン残基を含んでなる。しかしながら、好まし
い出発材料は、また、タンパク質混合物であり、直接的
に発現された産生物の場合にみられるように、これらタ
ンパク質はその一部だけがＮ末端にメチオニン残基を有
するものである。今までに知られている工程を用いて、
そのようなタンパク質混合物はきわめて大きい困難性を
ともなってのみ分画することができる。
所望のタンパク質からアミノペプチダーゼＰを分離する
ことは、その酵素の大きざの故に困難ではない。ざらに
、切断に用いた酵素を既知の方法、例よば、欧州特許（
ＥＰ−Ｂ）第０．１４１，２２３号および第０．１４１
，２２４号明細書およびそれらに記載の文献に記載され
た方法によって固定化することが可能である。
アミノペプチダーゼＰは、Ａ、　Ｙａｒｏｎらによって
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃ
ａｌ　ＲｅｓｅａｒｃｈＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ
　’３：２．６５８−６６３．１９６８に開示されてお
り、これには、末端プロリンに至るまでのペプチドに対
するＮ−末端攻撃についても記述されている。しかしな
がら、記述されている遊離されるアミノ酸は、中性アミ
ノ酸であるグリシン、アラニン、バリン、イソロイシン
およびプロリン（後者にもうひとつのプロリンが続く）
および塩基性アミノ酸アルギニンのみである。
アミノペプチダーゼＰは、Ｙａｒｏｎらによって記述さ
れた方法によって容易に単離される。その分子量の約２
Ｘ１０５は、固定化をしなくても所望のタンパク質から
分離することが可能な大きさである。
このように、この酵素は、メチオニンを迅速にまた定量
的に切除することから、Ｎ−末端プロリンで始まるタン
パク質を遺伝子操作によって得られる前駆体から、とく
に細菌からの直接的な発現の産生物から得るために、と
りわけ適している。
本発明は、以下の諸例において詳細に説明される通りで
ある。パーセント表示は重量パーセントを表す。
例」− アミノペプチダーゼＰを、前出のＹａｒｏｎらの方法に
次のような改変を行った方法によって単離精製する。
大腸菌（Ｅ、　ｃｏｌｉ）　Ｂｔａｌ胞を５０ｍＭ燐酸
ナトリウム緩衝液中で破砕してから遠心分離して、粗細
胞抽出物を５０℃で１５分間インキュベートする。
混合物を再び遠心分離して、４５％飽和にて硫酸アンモ
ニウム沈澱を行う。遠心分離の後、酵素は上清液中に見
出される。その後の精製を既知の方法にて行う。
肘２ プラスミド構築に用いる出発材料は、ＥＰ−Ａ第０．２
２８，０１８号明細書からのプラスミドｐｓ２０３およ
びｐＰＨ１６０である。
プラスミドｐｓ２０３は、ＥＰ−Ａ第 ０．２２８，０１８号明細書の第１０ａ図において（７
８）として見出されるものである。これは、ヒト顆粒球
マクロファージ・コロニー刺激因子（ＧＭ−Ｃ５Ｆ）の
合成遺伝子を含む。この遺伝子は、複数の制限酵素切断
部位を含んでおり、それらはＥＰ−Ａ第０．２２８，０
１８号明細書の９〜１１ページの諸表に示されている。
次の構築に非常に重要なｐＳ２０３の切断部位は、本明
細書の第１図に示される通りである。
プラスミドｐＳ２０３をＳｍａｌおよび部分的に５ａｌ
ｌで消化して、大きさが約３８０　ｂｐであって、アミ
ノ酸９／１０からのＧＭ−〇ＳＦのための合成遺伝子を
含むフラグメントを酢離する。
このフラグメントを、５ａｉｌおよびＳｍａＩで開裂し
ておいた市販のベクターｐＵｃ１８に挿入する。コンピ
テントにした大腸菌７９１０２細胞をライゲーション混
合物とインキュベートして、形質転換混合物を２０μｇ
／ｍｌのアンピシリンを含むＩＰＴＣ；−Ｘｇａ　ｌプ
レートに画線する。−晩インキユベートした後に、白色
コロニーを単離して、プラスミドＤＮＡを得る。プラス
ミドＤＮＡを制限酵素分析によって特徴づけする。期待
された制限酵素パターンを有するプラスミドをｐＳ４９
９と称する。
プラスミドｐＳ４９９をＥｃｏＲＩおよび部分的に５ａ
ｌＩで消化して、合成ＣＭ−ＣＳＦ遺伝子を含むフラグ
メントを単離する。このフラグメントをここで発現プラ
スミドｐＰＨ１６０に挿入する。この目的のためζこ、
オリゴヌクレオチドＭｅｔ　　Ｐｒｏ　　ＡＬａ　　Ｐ
ｒｏ　　ＡＬａ　　Ａｒｇ　　Ｓｅｒ　　Ｐｒｏ　　Ｓ
ｅｒ　　Ｐｒ。
５’　　−ＣＡＴＧ　　ＣＣＧ　　ＧＣＧ　　ＣＣＧ　
　ＧＣＣＣＧＡ　　ＴＣＧ　　ＣＣＧ　　ＴＣＴ　　Ｃ
ＣＧ　　　　　　　−３’ＧＧＣＣＧＣＧＧＣＣＧＧ　
　ＧＣＴ　　ＡＧＣＧＧ（ＡＧＡ　　ＧＧＣＡＧＣＴ（
ＳａＬＩ） を合成して、単離したフラグメントおよび酵素ＮｃｏＩ
およびＥｃｏＲＩで開裂しておいたプラスミドｐＰＨ１
６０と連結させる。これによってＮｃｏ１部位は破壊さ
れる（第２図中のＮｃｏｌ　　）。ライゲーション混合
物を用いて、コンピテントにした大腸菌ＭＭ２９４細胞
を形質転換させて、プラスミドを制限酵素およびＤＮＡ
配列分析によって同定する。期待された制限酵素パター
ンを有するプラスミドをｐｓ５００と称する（第２図）
。このプラスミドは、Ｎ−末端Ｍｅｔ−Ｐｒｏ伸長部を
有するＧＭ−Ｃ３Ｆ誘導体をコードする。
涯ユ ＥＰ−Ａ第０．２２８，０１８号明細書に開示されたＣ
Ｍ−Ｃ９Ｆ誘導体を直接的に発現させる類似プラスミド
構築を以下に記述する。
これらの構築には、プラスミドｐｓ２０３またはｐＳ４
９９のＨｐａＩ切断部位を用いる。
例２と同様にして、ｐＳ４９９をＥｃｏＲＩおよびＨＩ
）　ａ　Ｉで消化して、合成ＧＭ−ＣＳＦ遺伝子を有す
るフラグメントな単離する。しかしながら、オリゴヌク
レオチド（１）の代わりにオリゴヌクレオチド（２） Ｍｅｔ　Ｐｒｏ　ＡＬａ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ｓ
ｅｒ　Ｐｒｏ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　ＧＬｎ５’　−ＣＡＴ
Ｇ　ＣＣＧ　ＧＣＣＣＧＡ　ＴＣＧ　ＣＣＧ　ＴＣＴ　
ＣＣＧ　ＴＣＧ　ＡＣＣＣＡＧ　−ＧＧＣＣＧＧ　　Ｇ
ＣＴ　　ＡＧＣＧＧＣＡＧＡ　　ＧＧＣＡＧＣＴＧＧ　
　ＧＴＣＰｒｏ　Ｔｒｐ　ＧＬｕ　Ｈｉｓ　ＶａＬ　　
　　　　　（２）ＣＣＣ丁ＧＧ　　ＧＡＡ　　ＣＡＣＧ
ＴＴ　　−３’ＧＧＧ　　ＡＣＣＣＴＴ　　ＧＴＧ　　
ＣＡＡ（Ｈｐａｌ） を挿入する。このようにしてプラスミドｐｓ５０２を得
る。
オリゴヌクレオチド（２）をオリゴヌクレオチド　　（
３） Ｍｅｔ　　Ｐｒｏ　　Ｓｅｒ　　Ｐ、ｒｏ　　Ｓｅｒ　
　Ｔｈｒ　　ＧＬｎ　　’Ｐｒｏ　　工ｒｐ　　ＧＬｕ
　　Ｈａｓ　　ＶａＬ５’　　−ＣＡＴＧ　　ＣＣＧ　
　ＴＣ了　ＣＣＣＴＣＧ　　ＡＣＣＣＡＧ　　ＣＣＣＴ
ＧＧ　　ＧＡＡ　　ＣＡＣＣＴＴ　−３１ＧＧＣＡＧＡ
　ＧＧＧ　ＡＧＣＴＧＧ　（ＩＴｃ　ＧＧＧ　　ＡＣＣ
ＣＴＴ　ＧＴＧ　　（ＡＡ（ＨｐａＬ） で置換して、プラスミドｐｓ５０３を得る。
同様にして、オリゴヌクレオチド（４）Ｍｅｔ　　Ｐｒ
ｏ　　Ｓｅｒ　　Ｔｈｒ　　ＧＬｎ　　Ｐｒｏ　　丁ｒ
ｐ　　ＧＬｕ　　Ｈｉｓ　　ＶａＬ５’　　−ＣＡＴＧ
　　Ｃ（Ｇ　　ＴＣＧ　　Ａ（Ｃ（ＡＧ　　ＣＣＣ丁Ｇ
Ｇ　　ＧＡＡ　　（ＡＣＧＴＴ　　−３’　　　（４）
ＧＧ（ＡＧＣＴＧＧ　　ＧＴＣＧＧＧ　　Ａｃｅ　　（
ＴＴ　　ＧＴＧ　　ＣＡＡ（Ｈｐａｌ） の挿入によって、ｐｓ５０４を得る。
同様に、オリゴヌクレオチド（５） Ｍｅｔ　Ｐｒｏ　Ｔｒｐ　ＧＬｕ旧ｓ　ＶａＬ５１　−
　　ＣＡＴＧ　　ＣＣＧ　　ＴＧＧ　　ＧＡＡ　　（Ａ
ＣＧＴＴ　　−３’　　　　　　　　　　　　（５）Ｇ
ＧＣＡＣＣＣＴＴ　　ＧＴＧ　　ＣＡＡ（Ｈｐａｌｌ の挿入によって、プラスミドｐｓ５０５を得る。
明確にするために、ＧＭ−ＣＳＦのアミノ酸番号をオリ
ゴヌクレオチドに付した。
すべてのＧＭ−Ｃ５Ｆ誘導体の発現を、ＥＰ−Ａ第０．
２２８，０１８号明細書の例１のようにして行う。
培養条件によって、ＧＭ−ＣＳＦ誘導体は細胞中で溶解
した状態でまたは不溶性の封入体（１ｎｃｌｕｓｉｏｎ
　ｂｏｄｙ）として存在する。
後者の場合には、細胞破砕の後に、遠心分離によってタ
ンパク質を沈澱物中に濃厚富化することができる。沈澱
物を水で洗浄し、次いでデオキシコレート溶液に再懸濁
させる。懸濁液を遠心分離して沈澱物を再び水で洗浄し
て、６Ｍ尿素を含む５０ｍトリス緩衝液（ｐＨ８）に溶
解させる（水４ｍｌ当りタンパク質５０ｍｇ）。
タンパク質のスルフォン化物（ｓｕｌｆｏｎａｔｅ）を
形成するために、約１５ｍ８の亜硫酸ナトリウムを上清
液または溶液に加えて、混合物を室温にて約１２０分間
放置する。１０＋ｎｌに希釈の後、ｐ）Ｉを４．７に調
整して、混合物を一晩放置する。沈澱物を遠心分離して
、沈澱物を水で洗浄してから緩衝ｆｆ　（５Ｍ尿素、５
０ｍＭ　ＮａＣｌ、５０ｍＭ）リス）に再溶解させる。
この溶液をＲＦＲＡＣＴＯＧＥＬ　ＤＥＡＥＴＳＫ物質
（４５〜９０μｍ、メルク社製）を充填してから６Ｍ尿
素、５０ｍＭ）リス、５０ｍＭＮａＣ１゜０．１％（ｗ
／ｖ）界面活性剤（ＲＴＷＥＥＮ）、２ｍＭエチレンジ
アミン（ｐＨ８，７）で平衡にしておいた陰イオン交換
カラムにかける。ＧＭ−Ｃ５Ｆ　　Ｓ−スルフォン化物
は、１４０〜２１０ｍＭ　Ｎ　ａＣｌの範囲に溶出され
る。
ＣＭ−Ｃ５Ｆ　　Ｓ−スルフォン化物を含む分画を合わ
せてからタンパク質濃度を１０−５Ｍに調整して、次い
で、クエン酸マンガン反応緩衝液（ｐＨ８，６、Ｍ　ｎ
　２＋濃度３　Ｘ　１０−５Ｍ）に対して透析する。次
いで、ＧＭ−Ｃ５Ｆ　　Ｓ−スルフォン化物を１０−５
Ｍの濃度に調製して、０．５〜ｌμｇ／ｍｌのアミノペ
プチダーゼＰと３７〜４０℃で１時間反応させる。次い
で、ゲルクロマトグラフィー（Ｒ５ＥＰＨＡＤＥＸ　Ｇ
　７５　カラム、ファルマシア社製）によって反応生成
物をそれぞれに分離する。次いで、ＧＭ−Ｃ５Ｆを、５
０ｍＭグリシン緩衝液中で酸素の存在下で希釈によって
復元（ｒｅｎａｔｕｒｅ）させる。
復元させた産物を濃縮して、タンパク質配列分析のため
にＨＰＬＣによって精製する（カラム：Ｗａｔｅｒｓ　
Ｃ、、，２５０Ｘ４．６ｍｍ、緩衝液Ａ：０．１％トリ
フルオロ酢酸、緩衝液Ｂ：８０％アセトニトリル、０．
１％トリフルオロ酢酸）。３５％Ｂから７５％Ｂまでの
勾配を３０分間で流速１．５ｍｌ／分になるように設定
する。ＣＭ−Ｃ５Ｆを含む画分を自動タンパク質配列分
析に供する。メチオニンが実際に定量的に切除されてい
たことが明らかになる。これに対して、アミノペプチダ
ーゼＰで処理しなかった産生物は、〉５０％のメチオニ
ンをＮ−末端アミノ酸として含んでいた。
前記の公開された欧州特許出願は、次の公開されたオー
ストラリア特許出願に対応する。
ＥＰ−Ａ　　　　　ＡＵ−Ａ Ｏ，２１９，７８１６３９７９／８６ ０．２２７．９３８　　　　６５６９３／８６０．２２
８．０１８　　　　　　６６７５６／８６欧州特許第０
．１４１，２２３号は、オーストラリア特許第５６５　
、７０３号に対応する。
【図面の簡単な説明】
第１図は、本発明に非常に重要なｐｓ２０３の切断部位
を示す、説明図である。 第２図は、本発明に係るプラスミドｐｓ５００の、説明
図である。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １、短いＮ−末端伸長部（ｅｘｔｅｎｔｉｏｎ）を有し
    、かつ遺伝子操作によって得ておいた前駆体を、アミノ
    ペプチダーゼＰによる酵素的切断に供することからなる
    、Ｎ−末端プロリンで始まるタンパク質の製造法。 ２、短いＮ−末端伸長部がメチオニン残基を含んでなる
    、請求項１に記載の製造法。 ３、用いられる出発材料が、タンパク質の混合物であっ
    て、それらの一部のみがＮ−末端にメチオニン残基を有
    するタンパク質の混合物である、請求項１に記載の製造
    法。 ４、用いられる出発材料が、タンパク質の混合物であっ
    て、それらの一部のみがＮ−末端にメチオニン残基を有
    するタンパク質の混合物である、請求項２に記載の製造
    法。 ５、プロリンで始まり、かつＮ−末端伸長部を有するヒ
    ト顆粒球マクロファージ・コロニー刺激因子誘導体を用
    いることを特徴とする、請求項１に記載の製造法。 ６、プロリンで始まり、かつＮ−末端伸長部を有するヒ
    ト顆粒球マクロファージ・コロニー刺激因子誘導体を用
    いることを特徴とする、請求項２に記載の製造法。 ７、プロリンで始まり、かつＮ−末端伸長部を有するヒ
    ト顆粒球マクロファージ・コロニー刺激因子誘導体を用
    いることを特徴とする、請求項３に記載の製造法。 ８、プロリンで始まり、かつＮ−末端伸長部を有するヒ
    ト顆粒球マクロファージ・コロニー刺激因子誘導体を用
    いることを特徴とする、請求項４に記載の製造法。 ９、プロリンで始まり、かつＮ−末端伸長部を有するヒ
    ト顆粒球マクロファージ・コロニー刺激因子誘導体を用
    いることを特徴とする、請求項５に記載の製造法。
JP1089576A 1988-04-09 1989-04-07 Ｎ‐末端プロリンで始まるタンパク質の製造法 Pending JPH01304895A (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE3811921A DE3811921A1 (de) 1988-04-09 1988-04-09 Verfahren zur herstellung von proteinen, die n-terminal mit prolin beginnen
DE3811921.8 1988-04-09

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JPH01304895A true JPH01304895A (ja) 1989-12-08

Family

ID=6351689

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP1089576A Pending JPH01304895A (ja) 1988-04-09 1989-04-07 Ｎ‐末端プロリンで始まるタンパク質の製造法

Country Status (12)

Country Link
EP (1) EP0337264A3 (ja)
JP (1) JPH01304895A (ja)
KR (1) KR890016171A (ja)
AU (1) AU3253689A (ja)
DE (1) DE3811921A1 (ja)
DK (1) DK169889A (ja)
FI (1) FI891652A (ja)
HU (1) HUT51676A (ja)
IL (1) IL89877A0 (ja)
NO (1) NO891451L (ja)
PT (1) PT90225A (ja)
ZA (1) ZA892551B (ja)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3822045A1 (de) * 1988-06-30 1990-01-11 Hoechst Ag Verfahren zur herstellung von proteinen
GB9017008D0 (en) * 1990-08-02 1990-09-19 Erba Carlo Spa Process for the enzymatic preparation of basic fibroblast growth factor
US7504372B2 (en) 2004-09-08 2009-03-17 Clariant Produkte (Deutschland) Gmbh Mixtures of bleaching agents
DE102004043360A1 (de) 2004-09-08 2006-03-09 Clariant Gmbh Bleichaktivator-Mischungen

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL60184A (en) * 1979-05-31 1984-05-31 Schering Ag Process for the specific cleavage of protein sequences from proteins
JPS60500043A (ja) * 1982-12-10 1985-01-17 ノルデイスク・インスリンラボラトリウム 原核細胞又は真核細胞中で合成される融合蛋白質から成熟蛋白質を作る方法
DE3586773T2 (de) * 1984-08-16 1993-03-18 Bio Technology General Corp Verfahren zur beseitigung von n-endaminosaeureresten aus eukaryotpolypeptidanlagen und so erzeugte polypeptide.
WO1986007380A1 (en) * 1985-06-04 1986-12-18 Takeda Chemical Industries, Ltd. Process for preparing polypeptide
US4865974A (en) * 1985-09-20 1989-09-12 Cetus Corporation Bacterial methionine N-terminal peptidase
DE3822045A1 (de) * 1988-06-30 1990-01-11 Hoechst Ag Verfahren zur herstellung von proteinen

Also Published As

Publication number Publication date
FI891652A (fi) 1989-10-10
KR890016171A (ko) 1989-11-28
FI891652A0 (fi) 1989-04-06
HUT51676A (en) 1990-05-28
EP0337264A3 (de) 1990-08-01
DE3811921A1 (de) 1989-10-19
AU3253689A (en) 1989-10-12
DK169889A (da) 1989-10-10
EP0337264A2 (de) 1989-10-18
NO891451L (no) 1989-10-10
IL89877A0 (en) 1989-12-15
PT90225A (pt) 1989-11-10
DK169889D0 (da) 1989-04-07
NO891451D0 (no) 1989-04-07
ZA892551B (en) 1989-12-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR870000701B1 (ko) 인체 성장 호르몬의 제조방법
CA2033176C (en) Growth hormone fusion proteins
JP3043764B2 (ja) ミニ‐プロインシュリン、その製造および使用
GB2147902A (en) Microbially produced bgh and its use
AU623518B2 (en) Processes and compositions for the isolation of human relaxin
US6875589B1 (en) Mini-proinsulin, its preparation and use
JPH03228682A (ja) Ｅ．コリでの非融合タンパク質の調製方法
US4828988A (en) Hybrid polypeptides comprising somatocrinine and alpha1 -antitrypsin, method for their production from bacterial clones and use thereof for the production of somatocrinine
US5334532A (en) PDGF-B fusion protein, vectors, and host cells for use in production thereof
JP2862870B2 (ja) 新規ペプチド
JPH01304895A (ja) Ｎ‐末端プロリンで始まるタンパク質の製造法
AU600891B2 (en) Expression in E. coli of hybrid polypeptides containing the growth hormone releasing factor sequence
US4711847A (en) Preparation of secretin
Mayne et al. Direct expression of human growth in Escherichia coli with the lipoprotein promoter
JPH02190193A (ja) アミド化ペプチドの製造方法
Nishikawa et al. Efficient cleavage by α-thrombin of a recombinant fused protein which contains insulin-like growth factor I
JPH0284196A (ja) タンパク質の製造法
US6018037A (en) DNA coding for (Leu13) motilin
US5695952A (en) Method for producing Leu13 !motilin
JP2650856B2 (ja) Ｃ−末端アミド化酵素の製造方法
KR970009082B1 (ko) 인간 알파 아트리알 나트리 우레틱 인자(human α-arterial natriuretic factor; α-hANF)의 미생물학적 제조방법
EP0206863A1 (fr) Dérivés non amidés de la somatocrinine et procédé de préparation par génie génétique
JPH0829092B2 (ja) 変異型ヒトリゾチーム
JPS62259595A (ja) 生理活性ペプチドの製造方法
JPS6137099A (ja) 蛋白質の製造法