JPH01249799A - 新規生理活性物質リスタチン及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は抗リシルエンドペプチダーゼ作用を有する新規
な生理活性物質リスタチン及びその塩ならびにそれらの
製造？去に関するものである。

（従来の技術及び発明が解決しようとする課題）微生物
の生産する生理活性物質の中で、これまでにリシルエン
ドペプチダーゼを特異的に阻害するものは見出されてい
ない、したがってこの型の阻害物質が望まれている。

（課題を解決するための手段） 本発１者６．よ、上述。期待、答え：６＜＜　！Ｊ　％
ピントペプチダーゼに対して阻害作用を有する物質の検
索を行なったところ、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｌｃｅｓ）属に属するある菌株の培養液中にリシル
エンドペプチダーゼを強く阻害する物質が生産されてい
ることを見出し、その有効物質を単離、精製することに
成功し、リスタチン（ＬｙｓｔａＬ−１ｎ）　と命名し
た。さらにリスタチンの理化学的及び生物学的性状を確
定することにより本発明を完成した。

したがって、第一の本発明は、次式 で表わされる構造を有する新規生理活性物質リスタチレ
及びその塩を１１供するものである。

リスタチンの理化学的性質は下記のとおりである。１ １）　リスタチンの理化学的性状（特に示さない限りｌ
／２クエン酸塩として） （１）色及び形状；白色わ）末 （２）分子式（遊Ｂ塩基として）　：　Ｃｚｏｌｌ＊ａ
ＮＪ４（３）分子量（遊離塩基として）： ３９８　（Ｓｌ−ＭＳ　Ｎ−アセチル体　Ｍ　＋　１　
４４１゜ドアセチル体の酸化物 Ｍ　＋　１　４５７） （４）融点：１６５−１７０℃ （５）比旋光度：　［ａｌ　Ｍ５−１２．５°　（ｃ　
　Ｏ，２゜メタノール〉 （６）￥：外線吸収スペクトル：　１　ｒａｇ／ｍβ水
溶液ない。

（７）赤外線吸収スペクトル：添付図面の第１図に示す
。

（８）呈色反応ニジリカゲル薄層上でニンヒドリン試薬
、モリブデン硫酸試薬に陽性。

（９）溶解性二本、メタノール、エタノールに易溶であ
り、アセトン、酢酸エチル、クロロホルム、ヘキサンに
不溶である。

（１０）薄層クロマトグラフィーのｆｌｆ値シリカゲル
（メルク社製Ａｒｔ、　５７１５　）ｎ−ブタノール−
酢酸−水（４：１：ｌ）−Ｉｌｆ：０．５ａ （１１）塩基性、酸性、中性の区分：塩基性リスタチン
の塩の例としては、リスタチンのアミノ基における薬学
的に許容でとる無機塩、たとえば塩酸塩、硫酸塩、燐酸
塩など、または有機塩、たどえばクエン酸、酢酸などと
の酸付加塩も包含される。

（発明の作用） 本発明のリスタチンと、参考としての他のエンドペプチ
ダーゼ阻害物質との抗リシルエンドペプチダーゼ活性は
第１表に示すとおりである。

ロイペプチンと比較すると、シスタチンはりシルエンド
ペプチダーゼに対して特に強い阻害活性を示した。シス
タチンは他のエンドペプチダーゼ阻害物質とは全く異な
る酵素阻害パターン線式を示し、新規酵素阻害物質とし
てさまざまな用途が期待される。たとえば、動物細胞系
においてはタンパク合成の後、種々のエンドプロテアー
ゼによるプロセシングがおこり、さまざまな機能の蛋白
質が切出される近年、酸性プロテアーゼ阻害物質である
ペプスタチンが抗エイズビールス作用を有すること、ま
たチオールプロテアーゼ阻害物質であるシスタチンが抗
ポリオビールス作用を有することが報告されている。シ
スタチンなどのエンドプロテアーゼ阻害物質もビールス
蛋白質のプロセシングを阻害することにより抗ビールス
作用を示すことが期待される。また抗炎症作用、筋ジス
トロフイー発症遅延作用も期待される。

さらに、第二の本発明は、ストレプトミセス属に属する
シスタチン生産菌を培養し、その培養物からリスタチン
を採取することを特徴とする生理活性物質シスタチンの
製造法を提供するものである。

本発明に使用されるシスタチン生産菌の一例としては、
本発明者らにより土壌より新たに分離されたＭ１１３−
１２Ｆｌｆｔ株がある。

この菌株は昭和６１年４月、微生物化学研究所において
、神奈川県津久井湖付近の土壌より分離された放線菌で
、Ｍ１１３−１２Ｆ１［ｉの菌株番号が付された。

Ｍ１１３−１２Ｆ１６の菌学的性状はつぎのとおりであ
　−る。

１、形態 Ｍ１１３−１２Ｆ１８株は顕微鏡下で分枝した基中菌糸
より比較的長い気菌糸を形成し、その先端には５０個以
上の胞子の連鎖がみとめられ、らせん状に固くまいてい
る。胞子の大ぎさは０．８〜１．Ｏｘ　１．０〜１．２
ミクロン程度を示し、その表面は平滑である。

２、各種培地における生育状態 色の記載について（）内に示す標準は、コンテイナー・
コーポレーション・オブ・アメリカのカラー・ハーモニ
ー・マニニアル（ＣｏｎｔａｉｎｅｒＣｏｒｐｏｒａｔ
ｉｏｎ　ｏｆ　Ａａ＋ｅｒｌｃ♀ｏｌｏｒ　Ｈａｒｍｏ
ｎｙ　Ｍａｎｕａｌ）を用いた。

（１）　シュクロース・硝酸塩寒天培地（２７℃培養） 無色から黄茶（３１ｅ、Ｃｌｎｎａｍｏｎ　〜３　ｐｌ
、ＧｏｌｄａｎＢｒｏｗｎ　）の発育上に、ピンク白〜
うすピンク（５ｃａ、Ｆｌｅｓｈ　Ｐｉｎｋ　）の気菌
糸を着生し、溶解性色素は認められない。

（２）グルコース・アスパラギン寒天培地（２７℃培養
） 発育は無色〜うす黄茶〜うす茶（３ｇｃ、ＬＬ。

Ｔａｎ　）を呈し、気菌糸は茶白〜うすピンク（５ｃａ
、Ｆｌｅｓｈ　Ｐｉｎｋ）　、溶解性色素は　認められ
ない。

（３）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ−培
地５．２７℃培養） 無色〜暗い茶灰〜灰茶（４ｎｌ、５ｐｉｃｅ　Ｂｒｏｗ
ｎ）の発育上に、白色〜うすピンク（５ｃａ、Ｆ１ａ５
ｈＰｉｎｋ　）の気菌糸を着生し、溶解性色素はわずか
に茶色味をおびる程度である。

（４）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−培地４゜２
７℃培養） 無色の発育上にうすピンク（５ｅｃ、ＤｕｓｔｙＰｅａ
ｃｈ　）　〜茶灰（５ｉｅ、Ｃｏｐｐｅｒ　Ｔａｎ　）
の気菌糸を着生するが、培養７日目頃から次第にぬれた
ような感じになり、灰味赤茶（５ｎｇ、Ｂｒ１ｃｋ　Ｒ
ｅｄ）となる。溶解性色素は認められない。

（５）チロシン寒天培地（ｒｓｐ−培地７．２７℃培養
） うす茶〜灰味黄茶（４１ｇ、ＬＬ、　５ｐｉｃｅ　Ｂｒ
ｏｗｎ）の発育上に、白〜うすピンク（６ｅｃ、Ｐｏｎ
ａｅｒ　Ｒｏｓｅ）〜灰味茶（６ｇｃ、　Ｄｕｓｔｙ　
Ｃｏｒａｌ　）の気菌糸を着生する。溶解性色素は認め
られない。

（６）栄養寒天培地（２７℃培養） 発育は無色〜明るい灰（３１ｇ、Ｂａｉｇｅ　Ｂｒｏｗ
ｎ）　。

気菌糸は着生せず、溶解性色素もだめられない。

（７）　イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−培地２．２
７℃培養） 無色〜うず茶（２ｇｃ、Ｂａｍｂｏｏ）の発育上に、う
ずピンク（５ｅｃ、Ｄｕｓｔｙ　Ｐｅａｃｈ）　〜ピン
ク灰（６ｇｅ。

Ｒｏｓａ　Ｇｒａｙ　）の気菌糸を着生する。培養１０
０日目頃ら場所によって次第にぬれたような感じになり
、赤味茶（６ｎｇ、［１ｒｌｃｋ　Ｒｅｄ）となる、溶
解性色素は認められない。

（８）オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培地３．２７℃
培養） 無色の発育上にうすピンク（５ｇｃ、Ｐｅａｃｂ　Ｔａ
ｎ）〜明るい茶灰（４ｅｃ、’　Ｂ１５ｑｕｅ）の気菌
糸をうつすらと着生し、溶解性色素は認められない。

（９）グリセリン・硝酸塩寒天培地（２７Ｃ培養）発育
はうす黄茶（３ｎＩ、ｃｌｏｖｅ　Ｂｒｏｗｎ）〜黄茶
（４１１，Ｂｅａｖｅｒ　−４ｎｌ、Ｄｋ、Ｄｒｏｗｎ
　）　、白〜黄味灰（２ｅｃ、Ｂ１５ｃｕｉｔ）の気菌
糸をうつすらと着生し、溶解性色素は認められない。

（ｌＯ）スターチ寒天培地 無色〜うす茶（３Ｉｓ、Ｇａｍｅｌ）の発育上に、うす
ピンク（４ｃａ、Ｆｌｅｓｈ　Ｐｉｎｋ　）の気菌糸を
うつすらと着生し、溶解性色素は認められない。

（目）リンゴ酸石灰寒天培地（２７℃培養）発育は無色
〜うす黄だいだい、気菌糸はピンク白〜うすピンク（４
ｃａ、Ｆｌｅｓｈ　Ｐｉｎｋ　〜４　ｅｃ。

Ｂ１５ｑｕｅ）　、溶解性色素は詔められない。

（１２）セルロース（濾紙片添加合成液、２７℃培瞥 養） 発育は無色、気菌糸を着生せず、溶解性色素も認められ
ない。

（１３）ゼラチン穿刺培養 １５％単純ゼラチン培地（２０℃培養）では無色〜黄茶
の発育上に白の気菌糸をわずかに着生し、黄茶〜暗い黄
茶の溶解性色素が詔められる。

グルコース・ペプトン・ゼラチン培地（２７℃培養）で
は、無色〜黄茶発育上に気菌糸は着生せず。

黄茶の溶解性色素が認められる。

（１４）脱脂牛乳（３７℃培養） 無色〜うす黄茶の発育上に気菌糸は着生せず、溶解性色
素は初め茶色味をおび、次第に茶〜口ｇい茶を呈する。

３、生理的性質 （１）生育温度範囲 スターチ・イースト寒天（可溶性′ｉ１粉１．０％、イ
ーストエキス（大五宋養）０．２％、ひも寒天３．０％
、ｐ］暑７．Ｑ〜７．２）を用し）、２０℃、２４℃、
２７℃、３０℃、３７℃、５０℃の各温度で試験の結果
、５０℃を除いてそのいずれの温度でも発育したが、最
適生育温度は３０℃〜３７℃付近であると思われる。

（２）ゼラチンの液化（１５％単純ゼラチン、２０℃培
養；グルコース・ペプトン・ゼラチン、２７℃培養） 単純ゼラチン培地では、培養後２１日１まで観察したが
液化は認められなかった。グルコース・ペプトン・ゼラ
チン培地の場合は、培養後１５５日目頃なり、発育の下
の部分にわずかに液化様の性状を観察したが、液化性は
おそらく陰性と推定される。

（３）スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地
及びスターチ寒天培地、いずれも２７℃培養） スターチ・無機塩寒天培地、スターチ寒天培地ともに培
養後７日目頃より氷解性が認められ、その作用は中等度
〜強い方である。

（４）脱脂牛乳の凝固・ペプトン化（脱脂牛乳、３７℃
培養） 培養後８日目頃より凝固を此めることなくペプトン化が
始まり、約１週間でペプトン化は完了する。その作用は
強い方である。

（５）メラニン色素の生成（トリプトン・イースト・ブ
ロス、ｌ５Ｐ−培地１；ペプトン・イースト・鉄寒天、
ＩＳＰ〜培地６；チロシン寒天、　ｌ５Ｐ−培地７、い
ずれも２７℃培養） トリプトン・イースト・ブロス及びペプトン・イースト
・鉄寒天では陽性、チロシン寒天では陰性であった。

（δ）炭素源の利用性（ブリドハム・ゴトリープ寒天培
地、ｌ５Ｐ−培地９．２７℃培養）Ｄ−グルコース、Ｄ
−フラクトースを利用して良く発育し、シュクロースに
ついてはＤ−グルコースに比較して生育が劣るが、利用
していると判定される。Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロ
ース、イノシトール、し−ラムノース、ラフィノース、
Ｄ−マンニトールは利用しない。

（７）リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰寒天、２７℃
培養） 陽性である。

（８）硝酸塩の還元反応（０，１％硝酸カリウム含有ペ
プトン水、ＩＳＰ培地−８，２７℃培養）陽性である。

（９）セルロースの分解（濾紙片添加合成液、２７℃培
養） 陰性である。

以上の性状を、要約すると、Ｍｌｌ３−１２Ｆ１６株は
よく伸長した気菌糸に固くまいたらせん形成を有し、胞
子の表面は平滑である。

種々の培地で無色〜うす黄茶の発育上に、うすピンク又
はうすビンクルピンク灰の気菌糸を着生する。ただし、
イースト麦芽寒天培地及びスターチ・無機塩寒天培地の
場合は、培＠１０日目頃から次第に湿潤し、気菌糸は赤
味茶あるいは灰味赤茶を呈する。

溶解性色素は１０められないか又はわずかに茶色味をお
びる程度である。

メラニン様色素の生成はトリプトン・イーストブロス及
びペプトン・イースト麦芽寒天培地で陽性、チロシン寒
天培地では陰性である。蛋白分解力、澱粉の氷解性はと
もに中等度〜強い方である、なお、細胞壁に含まれる２
、６−ジアミノ・ピメリン酸はＬ−Ｌ型であった。

これらの性状よりＭｌｌ３−１２Ｆ１６株はストレプト
ミセス（ＳＬｒｅｐＬｏｉｙｃｅｓ）属に属するものと
考えられる。さらに近縁の既知菌種を検索すると、スト
レプトミセス・トキシトリシニ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓ　ｔｏｘ−ｙＬｒｌｃｌｎｉ、文献１ｎｔｅｒｎａ
Ｌｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　　Ｓｙｓ−ｔｅ
ｍａｔｉｃ　［１ａｃｔｅｒｉｏ１ｏｇｙ、１８巻、１
７４頁、　１９６８；同誌３０巻、４０２頁、　１９８
０）及びストレプトミセス・ボリクｄモゲヌス（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｐｏｌｙｃｂｒｏｗｏｇｅｎｕｓ
。

文献Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏ
ｆ　　５ｙｓｔｅａ＋ａＬｉｃ　Ｂａ−ｃＬｅｒｌｏｌ
ｏｇｙ、１９巻、４６４頁、　１９６９）があげられた
、そこで、Ｍｌｌ：ｌ−１２Ｆ１１ｉ株とこれらの菌種
について実地に比較検討した。その結果をまとめると、
第２表のようになる。

第２表にみられるように、旧１３−１２Ｆ１６株とスト
レプトミセス・ポリクロモゲヌスとは気菌糸の形態、色
調及び糖の利用性等で大きな相異点がみられる。

一方ストレプトミセス・トキシトリシニとは、ＭＩ１３
−１２Ｆ１６株の気菌糸がイースト・麦芽寒天培地及び
スターチ・無機塩寒天培地上で湿潤する（ｂｙ−ｇｒｏ
ｓｃｏｐｌｃ）点を除けば気菌糸の形態、色調について
非常によく類似している。

糖の利用性については、ＭＩ１３−１２Ｆ１６株がＤ−
グルコース、Ｄ−フラクトース、シュクロースを利用す
るのに対し、ストレプトミセス・トキシトリシニはＤ−
グルコースのみしか利用しなかった。

しかし、文献上ではＤ−フラクトースの利用については
不明な点があり、またＭＩ１３−１２Ｆ１６株のシュク
ロースの利用は十の対照であるＤ−グルコースの発育と
比較して劣っている。なお、硝酸塩の還元反応も異なっ
ている０両者について、これらの相異点は他種を想定す
、る根拠として考えにくい。

したがって−１１３−１２Ｆ１６株をストレプトミセス
・トキシトリシニ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　Ｌｏｘ
ｙｔｒｌｃｌｎｌ）Ｍ１１３−１２Ｆ１ｆｉと同定した
。

Ｍ！＋：ｌ−１２ＦＩＩｉ株は昭和６３年１月ＩＩ日に
、工業技術院微生物工業技術研究所に保管委託申請し、
その受託番号は微工研菌寄第９８１１号（ＦＥｎｌｌ　
Ｐ−９８１１）　テある。

旧１３−１２Ｆ１６株はほかの放線菌の場合にみられる
ようにその性状が変化しやすい、たとえば、旧−１３−
１２Ｆ株、又はこの株に由来する突然変異株（自然発生
°又は既発性）、形質融合体又は遺伝子組換え体であっ
ても、リスタチンの生産能を有するストレプトミセス属
の菌はすべて本発明の方法に使用することができる。

本発明の方法では、前記の菌を通常の微生物が利用しつ
る栄養物を含有する培地で培養する。栄養源としては、
グルコース、水あめ、デキストリン、シュクロース、で
んぷん、糖蜜、動植物油等を使用できる。また窒素源と
して、大豆粉、小麦胚芽、コーンスチーブ・リカー、綿
実かす、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、硫酸アンモ
ニウム、硝酸ソーダ、尿素等を利用できる。その他、必
要に応じ、ナトリウム、コバルト、塩素、燐酸、硫酸及
びその他のイオンを生成することのできる無機塩類を添
加することは有効である。また菌の生育を助け、生理活
性物質リスタチンの生産を促進するような有機及び無機
物を適当に添加することができる。

培養法としては、好気的条件での培養法、特に深部培養
法が適している。培養に適当な温度は１５−３７℃であ
るが、多くの場合、２ｆｉ−３０℃付近で培養する。生
理活性物質リスタチンの生産は培地や培養条件により異
なるが、振とう培養、タンク培養とも通常１〜１０日の
間でその蓄積が最高に達する。培養物中の生理活性物質
リスタチンの蓄積量が最高になったときに培養を停止し
、培養液から目的物質をＪＩＬｌｌ！！、精製する。

本発明によって得られるリスタチンの培養液からの採取
にあたっては、その性状を利用した通常の分離手段を適
宜組み合わせて抽出精製することができる。すなわち、
培養濾液を吸着樹脂ダイヤイオンＩＰ−２０（日本録水
製）のカラムに通し、水で洗浄し、アセトンなどの有機
溶媒で溶離し、溶離液を減圧濃縮乾固することにより粗
粉末を得ることができる。

上述の方法に加え、吸着クロマトグラフィー、ゲル濾過
クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーなど
を適宜組み合わせあるいは繰返すことによってリスタチ
ンを単制する。

リスタチンの培養工程ならびに精製工程中での追跡はつ
ぎの方法による抗リシルエンドペプチダーゼ活性の測定
に基づいて行なった。抗リシルエンドペプチダーゼ活性
の測定は和光純薬工業の方法で行なった（Ｃｏｄｅ　１
２９−０２５４１）。

すなわち、試験管に２．５ａ＋ＭのＮ　−ｃ７＜ンゾイ
ルーＤＬ−リシンーｐ−ニトロアニリド・臭化水素酸塩
０．１５　ｒｔｒＪｌ、　０．２Ｍ　　２−アミノ−２
−メチル−１，３−プロパン　ジオール緩衝液（ｐＨ９
，５）１．３ｍｊ２　、検体を含む水溶液０．０３　ｔ
ｓ文を加えた混合溶液を３７℃、３分間加温した後、０
．２−１ｌ１位／１ａｉｌのりシルエンドペプチダーゼ
（和光純薬工粟）の溶液を０．０２ｍｊ２加え３７℃で
３０分間反応した後、４５％酢酸溶液０．５ｍｕた。

（実施例） つぎに実施例によって本発明のリスタチンの製造例を説
明する。

瓦ｊｆ　ｔｆｌｌユ 独培地及び生産培地として、グリセロール３．０％、魚
粉２．０％、炭酸カルシウム０．２％を含む培地を用い
た。なお殺菌前のｐｌ＋はすべてｐＨ７，４に調整して
使用した。

５００ｍ１ｌ容三角フラスコに１１０ｍ℃を分注した前
記種培地を１２０℃で２０分間殺菌し、これにストレプ
トミセス旧１３−１２Ｆ１６　（微工研菌寄第９８１１
号）の斜面培養の１〜２白金耳を接拙し、２８℃で３日
間振とう培養して第１種培養とした。ついで５００Ｕａ
Ｊ２容三角フラスコ９０本、にＩＩ（１ｍｊ２ずつ前記
生産培地を分注し、１２０℃で２０分間殺菌し、前記の
第１　ｆｉｌｌ培地２　ｍｕずつを接種し、２８℃で３
日間振とう培養した。培養終了後濾過助剤として珪藻土
を加えて濾過し、菌体を含む固形物及び培養濾液を得た
。

火直里ス 実施例１で得られた培養濾液８．４１１を吸着樹脂ダイ
ヤイオンＩＩＰ−２０１ｔのカラムにかけ、水で洗浄し
、５０％アセトン（３１）　で溶離した。活性画分を含
む溶離液を減圧濃縮乾固し、粗物質５．２ｇを得た。

衷１し１且 実施例２で得られた粗物質を２５０　ｍｌｌの水に溶解
し、ｐＨを６．８に調整し、アンバーライト１ｎｃ５０
（１１◆）２５０ｍＡのカラムにかけ、水、５０％アセ
トンで洗浄し、０．１Ｎ　１ｃｔｃ熔離した。活性画分
を含む溶ｍｌＪ　？ａを、ダイヤイオンＩＩＰ−２０５
０ｍＡのカラムにかけ、水で洗浄し、５０％アセトン（
２００ｍＩＬ）で溶固Ｉし、活性画分を含むｉ８離液を
減圧（Ｒ縮乾固し、粗粉末４５０ｍｇを得た。

支匹■」 実施例３で得られた粉末を５０＋ｏＭクエン酸χΔｉ薊
液（ｐＨ４，５１１５ｍｊ２に溶解し、（：Ｍ−Ｓｅｐ
ｌ＋ａｄｅｘ　Ｃ−２５カラム４０ｏｆｆＩｆｌニカケ
、０−ＩＭ食塩’ｒｔム５０ｍ１ａりｘ　ン酸ＸＨｉｉ
ｉ液（ｐｌ＋４．５）のグラジェント１８ｔＡを行ない
、７ｇずつ分画した。活性画分をダイヤイオンＩＩＰ−
２０２０■１のカラムにかけ、水で洗浄し、脱塩を行な
い、５０％アセトン（Ｈｍｊりで溶離し、活性画分を減
圧濃縮し、アセトンを除去した後、凍結乾燥を行ない白
色粉末２０ａ＋ｇを得た。

夫ｊｉｂ　（Ｎ至 実施例４で得られた粉末を高速液体クロマトカラム（Ｐ
ａｒｔ１ｓ目ＯＤ５／Ｍ９．　９．４Ｘ２５Ｑｍｍ、Ｉ
（１μ、センシュウ科学）にかけ、アセトニ）・クル：
０，１酸（１　：　９）で溶離し、活性画分をダイヤイ
オンＩＩＰ−２０　２０ｍｊ２のカラムにかけ、クエン
酸・ｌ水和物の５％水溶液で洗浄し、水洗後、５０％ア
セトンで溶離する．アセトンを減圧除去した後、凍結乾
燥し、ラスタチン１／２クエン酸塩の白色わ）末６．５
　Ｂを得た。このラスタチン１／２クエン酸塩は０．０
４μ〆ｍｊ２の濃度でリシルエンドペプチダーゼを５０
％阻害した。

【図面の簡単な説明】

第１図はリスタチン１／２クエン酸塩の臭化カリウム錠
内での赤外線吸収スペクトルを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる生理活性物質リスタチン及びその塩。 ２、ストレプトミセス属に属するリスタチン生産菌を培
   養し、その培養物からリスタチンを採取することを特徴
   とする請求項１記載の生理活性物質リスタチンの製造法
   。