JPH01230600A - 乳漿からの免疫グロブリンに富む画分の単離 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は，乳漿から免疫グロブリンに富む画分を単離す
る方法に関する。

（従来の技術） 種々の物質から免疫グロブリンを単離する方法は久しく
以前より公知である。しかしながら、乳漿は免疫グロブ
リンを多量に含有しているにもかかわらず，乳漿から免
疫グロブリンに富む濃縮物を獲得することは乳漿に関連
した製品の性質ゆえに，今日に至るまで商業化不可能で
あった。

１９７１年には既に．乳が潜在的な抗体源として利用さ
れた。米国特許第３．５５３．３１７号ではウシまたは
ヤギの乳から抗体を得る可能性が提唱された。

このような源から入手し得る抗体の量が重要であると考
えられていたが，その源を実際に利用することはできな
かった。

分子量，等電点，電気泳動移動度．および種々の系にお
ける溶解度のような物理的特性に基づいて分子群を分離
することを含む物理的手法によって，抗体を単離し．精
製することは生化学者に公知である。このような方法に
おいては，抗体が免疫的特異性とは無関係に全部まとま
って単離されるというのが事実である。同様に，免疫学
者は。

あらゆる抗体が有する第一の特性，すなわち抗体の特異
的な抗原と反応する能力，に依存する傾向がある。従っ
て，抗原を特異的な抗体を含む混合物に添加すると，そ
れらの抗原と抗体は複合し。

溶液から沈降する。

一ｉにこれらの方法は血清において行われているが，乳
製品それも特にチーズを製造する際残存する乳漿等の他
の系において使用される工業的手法の商業化にはこれま
でのところ成功していない。

英国特許明細書２０４４７７５Ａには静脈内投与用免疫
グロブリンの調製法が開示されていて，この調製法には
ヒトの血漿から得た免疫グロブリンを分画沈降法（ｆｒ
ａｃｔｉｏｎａｌ　ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｏｎ　ｍｅｔ
ｈｏｄ）およびアフィニヂイークロマトグラフィー法を
組み合わせて精製する工程が含まれている。

米国特許第４，２５６，６３１号には，ヒトの血漿から
得た静脈内投与用免疫グロブリンの他の調製法が開示さ
れており．この調製法においては１種またはそれ以上の
２価または３価の塩類が沈降剤としてこの様な免疫グロ
ブリンの水溶液に添加される分画沈降およびアフィニテ
ィークロマトグラフィーが任意の順で行われる。

米国特許第４，２２９，３４２号にはスキムミルクから
タンパクを抽出する方法が開示されている。１９７７年
５月当時の技術事情を考えると，この特許では。

スキムミルクの加工は，一般にまず酸または酵素を用い
た凝固によってカゼインを抽出し，次いで加熱による凝
固または限外濾過またはイオン交換によってタンパクを
乳清から抽出し，最後にラクトース（これは加水分解さ
れ得る）を分解するという手順を踏んで行われていたこ
とが示されている。この特許にはまた，加熱による凝固
によって乳清から抽出されたタンパクの不利な点は，タ
ンパクがそれによってある生物学的特性を失ってしまう
ことにあるということ，および限外濾過により乳清から
抽出されたタンパクもまた１作業が長びくため一般に乳
清の低温殺菌を必要とし、同様のことが言えるというこ
とが記載されている。更に、イオン交換によって乳清か
らタンパクを分離することは、公知のデキストランおよ
びセルロースを主成分とするイオン交換体の機械的特性
が比較的弱いため、工業的スケールにおける実施が非常
に困難である。この様な不都合な点のないイオン交換体
が提唱されているにもかかわらず、凝固したカゼインは
なお一部劣化した沈降状態にあることがこの特許に記載
されている。

米国特許第４，２２９，３４２号はこの問題の解決策と
してまずスキムミルクを一種またはそれ以上の陰イオン
交換体と接触させた後、シリカ０キムミルク中の免疫グ
ロブリンを選択的に固定する任を負つの作用に付するこ
とによって、カゼイン以外のタンパクを抽出することを
提唱している。しかしながらシリカの結合効率は低いた
め、その歩留りでは工業的規模での抽出工程を維持しき
れない。

仏画特許第２，５２０，２３５号には脱脂初乳または初
乳清を電気泳動に付して免疫グロブリンに富む画分を形
成し、更にその免疫グロブリンに富む画分をクロマトグ
ラフィーによる分画に付することによって初乳からタン
パクを分離することが開示されている。

米国特許第４．４３６，６５８には乳漿から、または濃
縮乳漿から、またはＰＨ７，７〜８．８の弱塩基性条件
下でラクトフェリン以外のタンパクをシリカ等の固体支
持体に吸収させて予め除去した乳漿から。

ラクトフェリンを抽出することが開示されている。

Ｄａｉｒｙ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
　ＩＮＲＡのＭａｕｂｏｉｓらは１９８６年米国０シカ
ゴにて開催されたＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＷｈｅｙ
　Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅに報告された論文に、カルシウ
ムイオンを約２℃の乳漿に添加し、　ｐＨを約７．３に
調製した後急激に乳漿の温度を約５０℃まで上昇させ、
この温度を約８分間保持してカルシウムの結合によりリ
ポタンパクの凝集および凝集の凝固を行い、清澄な乳漿
を形成することを記載している。

Ｍａｕｂｏｉｓ　らはりボタンバクが両性でありかつ両
親媒性であるため、メンブレン材料に強力に吸収され不
可逆性の粘液化して限外濾過を制限することに着目し、
よって乳漿からタンパクを分画するためになされた従来
の提唱が失敗に終わった原因は乳漿中にリポタンパクが
存在しているからだと述べた。

英国特許出願ＧＢ　２１７９９４７には、乳漿からラク
トフェリンおよび免疫グロブリンを選択的に抽出するこ
とが記載されている。その方法には乳漿（生乳よりカゼ
インおよび脂肪を除去した後得られた）をぜリスルホン
メンプレン（遮断分子ｆｆ１２５，０００〜５．０００
　’）を用いた限外濾過によって５倍にｉ４［。

次いでｐＨ５〜８．５．好ましくは７〜８の条件下での
弱陽イオン性カルボキシメチル樹脂を用いたイオン交換
処理および同ｐｌ（条件下での溶出によってタンパクを
透析濾過し、吸着させることが含まれる。

しかしながらここでもまた工業的規模でこの抽出法を実
施するには歩留まりが低過ぎる。本発明は。

実施可能な量を抽出できるほど免疫グロブリンが効果的
に結合されていると、結合した免疫グロブリンを溶出に
よって除去することは極めて困難であり、従って全体と
しての歩留まりは依然として低く、工業的規模での抽出
法の施行は実現不可能であるという認識に一部基づくも
のである。免疫グロブリンが比較的除去されやすい樹脂
はまず第一に免疫グロブリンと十分には結合しないとい
う不都合な点を有する。

従って、あまたの研究および試験が行われているにもか
かわらず、免疫グロブリンを乳漿から抽出するための単
純にして効果的な工業的規模においても施行され得る方
法はいまだ得られていない。

（発明の要旨） 本発明の目的は工業的規模で乳漿から免疫グロブリンに
富む濃縮物を抽出することを可能にする方法を提供する
ことにある。

驚くべきことに、リポタンパクが存在していても限外濾
過法を単独であるいは陰イオン交換処理と組み合わせて
用い、この様な抽出を行うことが可能であるということ
が見い出されている。この方法は乳漿、または乳漿から
直接形成したかあるいは乳漿タンパク濃縮物の粉末から
再形成しだ液状乳漿タンパク濃縮物について行われる。

本発明は、免疫グロブリンに富む乳漿タンパク濃縮物の
製造法を提供する。この方法は、乳漿タンパクを免疫グ
ロブリンに富む画分と免疫グロブリンを除去した画分に
分画すること、および少なくとも免疫グロブリンに富む
画分を濃縮することを包含し１次の工程により特徴づけ
られる。

（ｉ）乳漿または液状乳漿タンパク濃縮物を。

実質的に５００，０００の遮断分子量を有するメンブレ
ンによって限外濾過に付して、免疫グロブリンに富み脂
肪を含む′ａ縮物を直接生成すること；ここで透過物は
少なくとも残存する乳漿タンパクの主要なタンパクを含
有する；または （ｉｉ　）乳漿または液状乳漿タンパク濃縮物を陰イオ
ン交換樹脂の作用に付して、流出物、すなわちもとの乳
漿または乳漿タンパク濃縮物よりも免疫グロブリン含有
率の高い乳漿タンパク、および免疫グロブリン含有率が
減少した乳漿タンパクを有する溶出物を生成し、そして
、少なくとも該流出物を限外濾過によって濃縮すること
。

必要に応じて脱脂を行い得る。つまり、脱脂はもとの乳
漿、または乳漿タンパク濃縮物もしくは再形成濃縮物、
または（ｉ）から生じた濃縮物。

または（１１）から生じた流出物において行われ得る。

上記工程（ｉｉ）の場合、直接形成されたまたは乳漿タ
ンパク濃縮物の粉末から再形成された液状乳漿タンパク
を５ｐｈｅｒｏｓｉｌ　ＱＭＡ樹脂（Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏ
ｕｌｅｎｃ社）、または５ｅｐｈａｒｏｓｅ　Ｆａｓｔ
　Ｆｌｏｗ　Ｑ　（Ｐｈａｒｒｎａｃｉａ社）、または
Ｔｒｉｓａｃｒｙｌ　Ｑ樹脂（ＴＢＦ社）等の陰イオン
交換体樹脂と接触させて、免疫グロブリンに冨み（特に
免疫グロブリンＧ）かつもとの乳漿タンパク濃縮物の全
ての残留脂肪ならびに他のいくらかの乳漿タンパクを含
有する流出物を形成する。免疫グロブリン含有率の低い
結合タンパクは。

０．３　Ｍ　ＮａＣ１のような希釈塩化ナトリウム溶液
を用いてイオン交換樹脂から溶出され得、カラムは。

再利用のため０．１ＭのＨＣＬのような希塩酸１次いで
脱塩水によって洗浄される。塩酸によって結合タンパク
も溶出されるが、残留している全ての結合免疫グロブリ
ンの構造および活性は酸によって破壊される。次いで脂
肪は流出物から分離されるか、あるいはまず濃縮物から
分離された後、陰イオン交換樹脂と接触した脱脂濃縮物
から分離され得る。

乳漿タンパク濃縮物の脱脂は、好ましくはアイシングラ
スを沈降剤（例えば濃度１％のアイシングラス）として
用いた沈降法によって行われる。

乳漿タンパク濃縮物は脱脂前に約１％のタンパク濃度に
希釈される。必要に応じて、ＧＢ　３２９０３７４に開
示された脱脂法を用いることもできる。

乳漿またはイオン交換によるカラム流出物の脱脂は、灰
分／タンパク比が０．０８：１よりも小さいという条件
下で、アイシングラスを沈降剤として用いた沈降法によ
っても行われ得る。灰分／タンパク比がｏ、ｏｓ：ｔよ
りも大きいと、乳漿または流出物を９例えばイオン交換
、または透析、または限外濾過によって脱塩し、灰分／
タンパク比を０．０８：１よりも小さくする必要がある
。カラム流出物の部分限外濾過は、流出物流の固形分が
少ないために非常に効率的に行われ得る。

限外濾過は４℃〜６０℃１好ましくは４８℃〜５５℃の
温度条件下で行われ得る。イオン交換の工程は４℃〜５
５℃１好ましくは４℃〜１０℃の温度条件下で行われ得
る。

で行われ得る。

陰イオン交換樹脂のｐｌ＋の範囲は２．０〜６．５であ
り得るが、好ましくは３．５〜４．０であり得る。イオ
ン交換に付される液体のｐｕの範囲は５．５〜７．０で
あり得るが、好ましくは６．０〜６．４であり得る。

限外濾過に用いられるメンブレンは市販されている一般
に人手可能な、メンブレンであり得るが。

好ましくはポリスルホンメンブレンであり得る。

乳漿タンパク濃縮物生成用には、メンブレンの遮断分子
量の範囲は３，０００〜５００，０００であり得る。

しかしながら遮断分子量が実質的に５００，０００のメ
ンブレンを乳漿または脱脂乳漿に用いる際には。

驚くべきことに乳漿中に存在する免疫グロブリンの約７
５％を占める免疫グロブリンＧ、およびＧｔの分子量が
２００，０００　　（または１６０．０００　）より低
いにもかかわらず、乳漿の回収可能な免疫グロブリン含
量のほとんど全部が濃縮物中に残存する。そして。

透過物は他の乳漿タンパクをかなり高い割合で含有して
はいるものの、免疫グロブリンの含有量はほんのわずか
である。例えば、乳漿中の約８８重量％の免疫グロブリ
ンが濃縮物中に残存しており。

透過物中に移行したのは約４．５重量％の免疫グロブリ
ンのみであり、残り（約７％）は通常の工程上の損失で
あることが見い出されている。この様にして生成された
濃縮物はもとの乳漿の全ての脂肪を含有するが、脂肪の
存在が許される場合には直接免疫グロブリン濃縮物とし
て用いられ得る。

脂肪の存在が許されない場合には、−ａ縮物の脱脂を行
うかまたは限外濾過以前に元の乳漿を脱脂することもで
きる。本発明により、：ａ縮物を更に。

他の乳漿タンパクとは結合するが、免疫グロブリンに対
する結合能力がほとんどない陰イオン交換樹脂の作用に
付して処理し得る。流出物中の乳漿タンパクはｍＷ物よ
りも高い割合で免疫グロブリンを有する。

乳漿を遮断分子量が実質的に５００．０００より低いメ
ンブレンを用いた限外濾過に付すと、透過物の乳漿タン
パク含量は減少し、濃縮物中の免疫グロブリンの、ｆ’
Ｒ物中の他の乳漿タンパクに対する相対比も低下する。

結局、メンブレンの遮断分子量１０．０００以下で実質
的に全ての乳漿タンパクが濃縮物中に残存する。従って
１本発明の方法により濃縮物を陰イオン交換樹脂を用い
て処理し、免疫グロブリン含有率のより高い流出物を生
成することは、一般に第１の限外濾過を遮断分子量が実
質的に５００，０００より低いメンブレンによって行う
場合に必要である。陰イオン交換処理は未処理の乳漿に
おいても行い得るが、限外濾過によって生成された濃縮
物において最も良く行われる。

従来技術による方法とは対照的に２本発明により用いら
れる陰イオン交換処理は免疫グロブリンを選択的に樹脂
に結合させようとするものではなく、他の乳漿タンパク
を結合させて、それにより流出物に移行する免疫グロブ
リンから少なくともその一部を分離し、その後接流出物
を更なる限外濾過によって濃縮するものである。

陰イオン交換樹脂処理後に行われる限外濾過についても
、使用されるメンブレンの遮断分子量に応じて、更に分
画することが可能である。この様に、使用するメンブレ
ンによって、透過物に移行する免疫グロブリン以外のタ
ンパクの割合を高めたり低めたりすることが可能である
。

本発明はまた。免疫グロブリンを実質的に有さす２例え
ば英国特許出願第８７２３６５１号に開示された。α−
ラクトアルブミンに富む画分を調製する方法により、後
に更なる分画に付され得る透過物を提供することも可能
である。

（以下余白） （実施例） 以下の実施例を参照して本発明を更に説明するが、これ
らの実施例は本発明を限定するものではな（、単に例示
するものである。

尖指■土 真のタンパク濃度が１１あたり４．８ｇの割合であるチ
ェダー（ｃｈｅｄｄａｒ）乳漿１，５００１を、１０イ
の面積を有するＲｏｍｉｃｏｎ　ＲＭＩＯメンブレンを
用いて濃縮し、総固型分中７５％のタンパクを含む乳漿
タンパク濃縮物を得た０次いで乳漿タンパク濃縮物（以
下−ＰＣ７５と称す）をタンパクの含有率が１％になる
まで希釈（６８０ｌ）　Ｌ、アイシングラスを沈降剤と
して用いる沈降法（アイシングラスの濃度１％）によっ
て脱脂した。その結果生じた上清液からは約５０％の免
疫グロブリンが得られた。更に。

水酸化カリウムを用いてｐ）Ｉを６．２に調整し、該上
清液を５ｐｈｅｒｏｓｉｌ　ＱＭＡ樹脂（Ｒｈｏｎｅ／
Ｐｏｕｌｅｎｃ社、フランス）を充填したＰｈａｒｍａ
ｃｉａ　Ｂｉｏ　Ｐｒｏｃｅｓｓ　２５２カラムにかけ
ることによってこれを精製した。このイオン交換カラム
の容量は５０２しかないため。

上清液を１回につき２１０１のハツチ処理に付した。

溶離液、すなわち遅滞せずにカラムを通過した物質を回
収した。７０２Ｎの溶離液が回収され、　Ｒｏｍｉｃｏ
ｎＲＭ１００メンブレンを用いた限外濾過によってこれ
を濃縮し、その結果乳漿中に存在していた免疫グロブリ
ンの総収量の２４％を含有する液状濃縮物２３１を得た
。次いでこの濃縮物を凍結乾燥し、イオン交換カラムと
結合したタンパクを実施例２に詳述する方法で溶出した
。

裏施貫Ｉ 液状乳漿タンパク濃縮物（ＷＰＣ６０）を１分間あたり
４１の流速で５ｐｈｅｒｏｓｉｌ　ＱＭＡ樹脂（Ｒｈｏ
ｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ社、フランス）の４５１！、カラ
ムにかけ、脱塩水で洗浄した。カラムを遅滞せずに通過
した流出物を９５１回収した（その後実施例１の方法で
処理することもできる） 結合タンパク画分を １．０．３Ｍの塩化ナトリウム ２、０．１　Ｍの塩酸 で？容量し。

３、次いでカラムを、ｐＨが３．５となるまで脱塩水で
洗浄した。次いでカラムを再度上記１．２および３の工
程に利用した。

出発物質およびイオン交換により得られた３つの画分の
結果を表１にｇで示した。

紅 出発−ＰＣ２５１０１７２０２６０１７５流出物　　　
　１０１０４６０　　２６０　　９２ＮａＣ１溶出液　
　７００　　　５６０　　　０　　２６１１ＣＩ溶出液
　　６００　　　４８０　　　０　　　本本（免疫グロ
ブリンの構造および活性は０．１Ｍの１１ＣＩによって
破壊される。） 表１を分析するとわかるように、流出物には脂肪および
免疫グロブリンが高い割合で含まれていたので、脱脂が
行われた。脱脂は塩酸を添加してｐＨを４．３に調整し
、アイシングラス（１％溶液）を流出物に直接添加して
凝結を引き起こす沈降法によって行われた。脱脂操作を
２度行い、得られた結果を表２に示す。

紅 土　　　　　叉 流出物の容量　　　　　１７？　ｆｆｉ　　　　１００
　ｆ上清液の容量　　　　　　１５２　Ｉ！、９０１次
いで脱脂タンパク濃縮物中の免疫グロブリンを：ａ縮し
、１０イの面積を有するＲｏｍｉｃｏｎ　ＰＭ１００メ
ンブレンを用いた限外濾過によって分画した。

その結果生じた免疫グロブリンの濃縮物を凍結乾燥し、
出発乳漿タンパクから総収量３３％の割合で免疫グロブ
リンを得た。

（以下余白） 実ｊ１１走 新鮮な白Ｃｈｅｄｄａｒ乳漿（ｐＨ６，０５）　８１！
をＲｏｍ　ｉｃｏｎＰＭ５００メンブレン（中空のファ
イバーカートリッジ型、メンブレンの面積０．４６ｎｆ
）にて′ａ縮した。

操作中、温度をｔｏ−１２℃に保ち、？ａ縮の最終段階
で１８’Ｃに上昇させた。この操作は５時間に渡り。

濃縮物の最終容量は３．５！であった。乳漿／濃縮物の
流速を一貫して高速（２，２ｍ／５ｅｃ）に保ち。

透過物の平均流量は３４１　／　ｎｉ　／ｈであった。

最終濃縮物を凍結乾燥し、以下の組成を得た。

総固型分：　９６．０％ 総タンパク：　５１．４％ 脂肪ニア、１％ ＰＭ５００　ｆｉ縮物および透過物両方のＩｇＧ含量［
真のタンパクの比率（％）として示す］を、放射状免疫
拡散法を用いてＲＩＤプレートにより直接測定した。そ
の結果、比較対照のため乳漿の結果（高品質のＷＰＣ７
５濃縮物から結果を得た）と共に表３に示す。

（以下余白） ４表Ｊ− ＰＭ５００　　濃４宿物　　　　　　　１２．５χ乳漿
　　　　　　　　８．６χ ｐＨ５００透過物　　　　２．０χ ＰＭ５００４縮物およびｐＨ５００透過物の収率を表４
に示す。

表土 門選狙（Ｉ責　　門肛叱ｌ過立 総固型分　　　　　６１５　ｇ　　　　　　４２５７　
ｇ総タンパク　　　　　３４４　ｇ　　　　　　　３８
４　ｇ真のタンパク　　　　３１６　ｇ　　　　　　　
２０４　ｇＰＭ５００ｐＨ５００透過物メンブレンを用
いた限外濾過によって濃縮し、凍結乾燥した。乳漿およ
び凍結乾燥した濃縮物についての分析の詳細を表５に重
量％で示す。

ｌ豆 固型分　　　　６．２３χ　　　　　９１．６Ｘ脂肪　
　　　　０．０３χ　　　　　０．３χ総タンパク　　
　０．８８χ　　　　　８２．６！灰分　　　　　０．
５１！　　　　　　２．９Ｘ更にクロマトグラフィーの
結果を示すプロフィールをＰＭ５００　、乳漿、および
ｐＨ５００透過物について作成し、添付図面に示す。第
１図はＰＭ５００濃縮物のプロフィール、第２図は乳漿
のプロフィール。

第３図はｐＨ５００透過物のプロフィールである。いず
れの図においても、斜線部分は免疫グロブリンに対応す
る。０．１　Ｍのリン酸緩衝液をｐＨ６，２、そして流
速０．７　ｄ／ｗｉｎで用い、　ＴＳＫ　Ｇ２００　Ｓ
−カラムを備えたＬＤＣ装置にてＨＰＬＣを行ない、そ
のプロフィールを作成した。試料としては１重量％の濃
縮物２０μ２を用い、　２２０ｎｍの紫外線吸収によっ
て検出を行った。

本発明は前出の実施態様に限定されるものではなく、ま
た上記の実施例に限定されるものでもない。例えば、上
記の実施例においては、特定の限外濾過用メンブレンお
よびイオン交換用媒体を用いたが、これらに限らず例え
ばＡｂｃｏｒ　ＭＳＤ　１８１および第４アンモニウム
イオン交換樹脂（例えばＰｈａｒｍａｃｉａＦａｓｔ　
Ｆｌｏｗ　Ｑ　、　ＩＢＦ　Ｔｒｉｓａｃｒｙｌ　Ｑ　
、および他の製造業者により製造された他の類似のメン
ブレン）も同様に使用され得る。同様に、　Ｃｈｅｄｄ
ａｒチーズの製造により生成した乳漿以外の乳漿も使用
され得る。

実ｍ先 １８２０ｆの乳を通常の大量生産法によりＣｈｅｄｄａ
ｒチーズおよび乳漿に加工した。乳漿を清澄化し。

かつ−ｅｓｔｆａｌｉａ遠心分離機によって分離して過
剰残留脂肪を除去し、　１５５０ｆの分離乳漿を得た。

実施例１に記載した方法を用い９分離乳漿を濃縮して１
８５１の限外濾過′ａ縮物を生成し１次いでイオン交換
によって脱脂、精製して６８２１のカラム流出物を得１
次いで濃縮、乾燥して４６６ｇの最終生成物を得た。出
発原料である乳、中間生成物、および最終生成物中の総
タンパクを以下の表６に示す。

表旦 薦ｌ詠！聾−（℃と 乳　　　　　　　　　　　　　　　　３．０６分離乳漿
　　　　　　　　０．７７ 限外濾過濃縮物　　　　　４．３２ カラム流出物　　　　　　０．１３ 最終生成物　　　　　　６８．１ 最終粉末は３２．７％の免疫グロブリンＧ＋（ＩｇＧ＋
）を含有しており、乳からの総数率は約２５％であった
。

クロマトグラフィーの結果を示すプロフィールを実施例
３と同様に分離乳漿および最終生成物について作成し、
それぞれ添付図面の第４図と第５図に示す。これらのプ
ロフィールにおける時間と濃度と面積の相関関係を以下
の表７（第４図に対応）および表８（第５図に対応）に
示す。第４および５図の斜線部分は免疫グロブリンに対
応する。

表１ 称Ｍ　　　　　濃度　　　　　　皿盪 ７．８７　　　　７．７２５６　　　　２４９７１３１
２．２２　　　　２．１３０２　　　　６８８５３１３
’、３５　　　　０．５０２９　　　　１６２５７１４
．７　　　　２４．９２０６　　　　８０５５００１６
．３５　　　　１８．３０３６　　　　５９１６２１１
８．９　　　　４６．４１６９　　　１５００３１６９
９．９９９８　　　　　３２３２２６０表」− 朋　　　　濃度　　　　　型組 ８．２８　　　　　４．５３４４　　　　　６９８９９
９．２６　　　　　５．３７２１　　　　　８２７９３
１２．４１　　　　　６５．２０７４　　　　１００４
９５７１５゜０３　　　　　１５．９７８３　　　　　
２４６２５４１６．４６　　　　　８．４８８６　　　
　　１３０８２５１Ｂ、７８　　　　　　０．４１７８
　　　　　　６４３９９９．９９８６　　　　　１５４
１１６７（発明の要約） 本発明は免疫グロブリンに富む乳漿タンパク濃゛縮物を
製造する方法であって、乳漿タンパクを免疫グロブリン
に富む画分と免疫グロブリンを除去した画分に分画する
こと、および少なくとも免疫グロブリンに富む画分を濃
縮することを包含し。

（ｉ）乳漿または液状乳漿タンパク′ａ縮物または再形
成された乳漿タンパク濃縮物の粉末を、実質的に５００
．０００の遮断分子量を有するメンブレンによって限外
濾過に付して、免疫グロブリンに富み脂肪を含む濃縮物
を直接調整すること；ここで透過物は少なくとも大部分
の残存する乳漿タンパクを含有しているか、または （ｉｉ　）乳漿または液状乳漿タンパク濃縮物または再
形成された乳漿タンパク濃縮物の粉末を陰イオン交換樹
脂の作用に付して、もとの乳漿または乳漿タンパク濃縮
物または再形成された乳漿タンパク濃縮物の粉末よりも
免疫グロブリン含有率の高い乳漿タンパクである流出物
、および免疫グロブリン含有率が減少した乳漿タンパク
を有する溶出物を得、そして少なくとも該流出物を限外
濾過によって濃縮することを特徴とする方法を提供する
。

（以下余白） ４　　・・　　の　　−　なう゛ＩＩ 第１第１第、第２よび第３図は、実施例３におけるＰ？
Ｉ　５００濃縮物、乳漿、およびＰＭ　５００透過物の
クロマトグラフィーによりそれぞれ得られたチャート１
そして、第４図および第５図は実施例４における分離乳
漿および最終生成物のクロマトグラフィーによりそれぞ
れ得られたチャートである。

以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、免疫グロブリンに富む乳漿タンパク濃縮物を製造す
   る方法であって、乳漿タンパクを免疫グロブリンに富む
   画分と免疫グロブリンを除去した画分に分画すること、
   および少なくとも免疫グロブリンに富む画分を濃縮する
   ことを包含し、 （ｉ）乳漿または液状乳漿タンパク濃縮物または再形成
   された乳漿タンパク濃縮物の粉末を、実質的に５００，
   ０００の遮断分子量を有するメンブレンによって限外濾
   過に付して、免疫グロブリンに富み脂肪を含む濃縮物を
   直接調製すること；ここで透過物は少なくとも残存する
   乳漿タンパクの大部分を含有している、 または（ｉｉ）乳漿または液状乳漿タンパク濃縮物また
   は再形成された乳漿タンパク濃縮物の粉末を陰イオン交
   換樹脂の作用に付して、もとの乳漿または乳漿タンパク
   濃縮物または再形成された乳漿タンパク濃縮物の粉末よ
   りも免疫グロブリン含有率の高い乳漿タンパクである流
   出物、および免疫グロブリン含有率が減少した乳漿タン
   パクを有する溶出物を得、そして、少なくとも該流出物
   を限外濾過によって濃縮すること、 を特徴とする方法。 ２、もとの乳漿、乳漿タンパク濃縮物、再形成された濃
   縮物の粉末、 （ｉ）から得られる濃縮物、 または（ｉｉ）から得られる濃縮物において脱脂を行う
   ことを特徴とする請求項１に記載の方法。 ３、乳漿タンパク濃縮物または再形成された乳漿タンパ
   ク濃縮物の粉末の脱脂をアイシングラスを沈降剤として
   用いる沈降法によって行い、脱脂前に濃縮物または再形
   成された粉末を実質的に１重量％のタンパク濃度にまで
   希釈することを特徴とする、請求項２に記載の方法。 ４、もとの乳漿または（ｉｉ）で得られる流出物の脱脂
   をアイシングラスを沈降剤として用いる沈降法によって
   行い、必要に応じて乳漿または流出物をまず最初に必要
   とされる程度に脱塩して、灰分／タンパク比を０．０８
   ：１を下まわる値にまで下げることを特徴とする請求項
   ２に記載の方法。 ５、前記アイシングラスを、脱脂される液体の実質的に
   １重量％の量で用いることを特徴とする請求項３または
   ４に記載の方法。 ６、全ての限外濾過を４℃から６０℃の温度範囲で行う
   ことを特徴とする請求項１から５のいずれかに記載の方
   法。 ７、前記温度が４８℃から５５℃の範囲にあることを特
   徴とする請求項６に記載の方法。８、前記イオン交換の
   工程を４℃から５５℃の温度範囲で行うことを特徴とす
   る請求項１から７のいずれかに記載の方法。 ９、前記温度が４℃から１０℃の範囲にあることを特徴
   とする請求項８に記載の方法。 １０、前記陰イオン交換樹脂のｐＨが２．０から６．５
   の範囲にあることを特徴とする前記の請求項のいずれか
   に記載の方法。 １１、前記イオン交換に付される液体のｐＨが５．５か
   ら７．０にあることを特徴とする前記請求項のいずれか
   に記載の方法。