JPH01165368A - 制御した増殖速度の発酵方法 - Google Patents
制御した増殖速度の発酵方法Info
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- JPH01165368A JPH01165368A JP63280537A JP28053788A JPH01165368A JP H01165368 A JPH01165368 A JP H01165368A JP 63280537 A JP63280537 A JP 63280537A JP 28053788 A JP28053788 A JP 28053788A JP H01165368 A JPH01165368 A JP H01165368A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、フェッド・バッチ（ｆｅｄ ｂａｔｃｈ）方
法を用いる微生物の発酵方法に関する。
法を用いる微生物の発酵方法に関する。
Ｃ従来の技術〕
、大規模の発酵方法では、バッチ様式で発酵を操作する
ことが一般的である。かかる方法においては、全栄養源
を予め含む発酵槽に初期培養物を添加して所望の最終細
胞集団を得ている。
ことが一般的である。かかる方法においては、全栄養源
を予め含む発酵槽に初期培養物を添加して所望の最終細
胞集団を得ている。
はとんどのバッチ発酵では、高濃度の初発物質は、微生
物の至適増殖にとって有害である。その結果として、い
わゆるフエツド・バッチ方法が一般的である。これらの
方法では、生産される細胞集団または増殖速度もしくは
他のパラメーターを増大するように発酵の進展に応じて
栄養源が添加されている。
物の至適増殖にとって有害である。その結果として、い
わゆるフエツド・バッチ方法が一般的である。これらの
方法では、生産される細胞集団または増殖速度もしくは
他のパラメーターを増大するように発酵の進展に応じて
栄養源が添加されている。
組み換えＤＮＡ技術の出現は、発酵方法に対する新たな
注意事項を浮き彫りにした。所望の生産物を生成するた
めには、一般に、微生物内に外因性のＤＮＡを導入した
微生物を発酵槽で増殖させねばならない。増殖期間中か
またはその後、外因性のＤＮＡは発現されそして所望の
生産物が生成される。
注意事項を浮き彫りにした。所望の生産物を生成するた
めには、一般に、微生物内に外因性のＤＮＡを導入した
微生物を発酵槽で増殖させねばならない。増殖期間中か
またはその後、外因性のＤＮＡは発現されそして所望の
生産物が生成される。
ある種のバシラス（ハ虱旦用）、シュードモナス（Ｐｓ
ｅｕｄｏｍｏｎａｓ ）およびストレプトミセス（旦匹
匹臼匹並）菌株が使用され始めたとはいえ、宿主微生物
としては、エシェリヒア・コリー（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈ
ｉａ ｃｏｌｔ）またはサツカロミセス・セレビシェ（
Ｓａｃｃｈａｒｏｍ ｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｔａｅ）
が−船釣である。残念なことに、これらの微生物を最大
の増殖速度が達成できるところで増殖させる場合には、
望ましくない副生成物を生ずる。これらの副生成物は、
出発原料およびエネルギーの流用をもたらすばかりでな
く、究極的に生産し得る細胞量を制限し、しかもそれら
が生産される割合を限定する。
ｅｕｄｏｍｏｎａｓ ）およびストレプトミセス（旦匹
匹臼匹並）菌株が使用され始めたとはいえ、宿主微生物
としては、エシェリヒア・コリー（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈ
ｉａ ｃｏｌｔ）またはサツカロミセス・セレビシェ（
Ｓａｃｃｈａｒｏｍ ｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｔａｅ）
が−船釣である。残念なことに、これらの微生物を最大
の増殖速度が達成できるところで増殖させる場合には、
望ましくない副生成物を生ずる。これらの副生成物は、
出発原料およびエネルギーの流用をもたらすばかりでな
く、究極的に生産し得る細胞量を制限し、しかもそれら
が生産される割合を限定する。
例えばＥ・コリー（Ｅ、ｃｏｌｉ）では、制御されてい
ない増殖が、その微生物の対数増殖期のかなり早い時期
に酢酸が生産することを本発明者等は見い出した。なお
、対数増殖期間中に所望の生産物が生成される場合には
、特に、微生物の対数増殖期を延長することが好ましい
であろう。
ない増殖が、その微生物の対数増殖期のかなり早い時期
に酢酸が生産することを本発明者等は見い出した。なお
、対数増殖期間中に所望の生産物が生成される場合には
、特に、微生物の対数増殖期を延長することが好ましい
であろう。
酢酸の生成をモニターすることにより発酵を制御するこ
とは現実的でない。第一に、酢酸塩のオンライン測定に
対する分析方法が十分に開発されていない。しかしなが
ら、より重要なことは、本発明者等が発見した酢酸塩が
検出できる場合には、〔発明が解決しようとする課題〕 従って、本発明により解決される課題は、可能な限り増
殖を阻害する副生成物の生産を実質的に減少するかまた
は除去するフェッド・バッチ方法を提供し、それによっ
て対数増殖期を延長することである。
とは現実的でない。第一に、酢酸塩のオンライン測定に
対する分析方法が十分に開発されていない。しかしなが
ら、より重要なことは、本発明者等が発見した酢酸塩が
検出できる場合には、〔発明が解決しようとする課題〕 従って、本発明により解決される課題は、可能な限り増
殖を阻害する副生成物の生産を実質的に減少するかまた
は除去するフェッド・バッチ方法を提供し、それによっ
て対数増殖期を延長することである。
本発明に従えば、発酵期間を通じて炭素源を添加し続け
る微生物の発酵のためのフェッド・バッチ方法であって
、 １）発酵期間を通じて発生する二酸化炭素を連続的に測
定し、 ２）発生する二酸化炭素から微生物の比増殖速度を計算
し、そして ３）前記炭素源の供給速度をいろいろ変化せしめること
により実質的に一定な比増殖速度が、副生物の阻害的な
蓄積をもたらす増殖速度より低くなるように維持される
段階を含む、前記方法が提供される。
る微生物の発酵のためのフェッド・バッチ方法であって
、 １）発酵期間を通じて発生する二酸化炭素を連続的に測
定し、 ２）発生する二酸化炭素から微生物の比増殖速度を計算
し、そして ３）前記炭素源の供給速度をいろいろ変化せしめること
により実質的に一定な比増殖速度が、副生物の阻害的な
蓄積をもたらす増殖速度より低くなるように維持される
段階を含む、前記方法が提供される。
Ｅ・コリーの発酵が本発明の実例である。Ｅ・コリーの
発酵期間を通じて、その増殖速度が実質的に一定であり
、かつ酢酸塩が生成されるであろう水準を常に下回るな
らば、対数増殖期は増殖を制限する酢酸塩以外のファク
ターが生じるまで継続するであろう。
発酵期間を通じて、その増殖速度が実質的に一定であり
、かつ酢酸塩が生成されるであろう水準を常に下回るな
らば、対数増殖期は増殖を制限する酢酸塩以外のファク
ターが生じるまで継続するであろう。
以下の説明では、増殖阻害副生成物が酢酸塩であるＥ・
コリーの発酵について詳細に検討するであろう。しかし
ながら、本発明は、例えばサツカロミセス（伽胚勘μｍ
匹並）属に属する例えばセレビシェ（ｃｅｒｅｖｉｓｉ
ａｅ） 、ハシラス（Ｂａｃｆ ｆｌｕｓ）、シュード
モナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ）およびストレプト
ミセス（鉦脛旦亜匹競）Ｂに属する菌株のいずれかの微
生物を用いる方法にも向けられていることが理解される
であろう。また、本説明では酢酸塩の阻害活性を大いに
強調するとは言え、本発明を用いて他の有機酸の如き他
の■害物質の影害を減少することもできる。
コリーの発酵について詳細に検討するであろう。しかし
ながら、本発明は、例えばサツカロミセス（伽胚勘μｍ
匹並）属に属する例えばセレビシェ（ｃｅｒｅｖｉｓｉ
ａｅ） 、ハシラス（Ｂａｃｆ ｆｌｕｓ）、シュード
モナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ）およびストレプト
ミセス（鉦脛旦亜匹競）Ｂに属する菌株のいずれかの微
生物を用いる方法にも向けられていることが理解される
であろう。また、本説明では酢酸塩の阻害活性を大いに
強調するとは言え、本発明を用いて他の有機酸の如き他
の■害物質の影害を減少することもできる。
第１図は、本発明による代表的な方法の結果のプロット
である。これらの結果を生ずる発酵に関する詳細は、例
１に記載する。短時間の初期の高速増殖期（プロットし
ていない）後、その増殖速度は一定に維持されているこ
とが認められるであろう０発酵期間中、培地のサンプル
を採取しそして酢酸塩およびグルコースについて分析し
た。これらの物質の両者とも発酵期間を通じて低い水準
に維持されている。
である。これらの結果を生ずる発酵に関する詳細は、例
１に記載する。短時間の初期の高速増殖期（プロットし
ていない）後、その増殖速度は一定に維持されているこ
とが認められるであろう０発酵期間中、培地のサンプル
を採取しそして酢酸塩およびグルコースについて分析し
た。これらの物質の両者とも発酵期間を通じて低い水準
に維持されている。
本発明に従えば、比増殖速度は、供給速度をいろいろに
変化せしめることで実質的に一定速度に保持される。比
増殖速度が所望のもの以上に増大する場合には、供給速
度が減少される。逆に、該増殖速度が所望のもの以下で
ある場合には、供給速度が増大される。
変化せしめることで実質的に一定速度に保持される。比
増殖速度が所望のもの以上に増大する場合には、供給速
度が減少される。逆に、該増殖速度が所望のもの以下で
ある場合には、供給速度が増大される。
比増殖速度は、該当する増殖速度を該当する時間までに
生じた増殖の総量で割ったものとして定義される。従っ
て、比増殖速度は、１／時間の単位を有する。本発明で
は、生成する二酸化炭素の速度がそのまま増殖速度に比
例し、そして同様に生成する二酸化炭素の総量がそのま
ま増殖の総量に比例すると仮定している。従って、比増
殖速度は二酸化炭素のデータを使用して定常的にモニタ
ーすることができる。
生じた増殖の総量で割ったものとして定義される。従っ
て、比増殖速度は、１／時間の単位を有する。本発明で
は、生成する二酸化炭素の速度がそのまま増殖速度に比
例し、そして同様に生成する二酸化炭素の総量がそのま
ま増殖の総量に比例すると仮定している。従って、比増
殖速度は二酸化炭素のデータを使用して定常的にモニタ
ーすることができる。
発酵で生産される二酸化炭素は、通常測定されているの
で、この測定方法は当業者にとって周知である。−の方
法は、オンライン・マススペクトロメーターを使用する
ことである。
で、この測定方法は当業者にとって周知である。−の方
法は、オンライン・マススペクトロメーターを使用する
ことである。
増殖速度は、増殖阻害副生成物の阻害的な蓄積を司る速
度よりも低い実質的に一定の速度に維持される。本発明
の方法で用いられる正確な増殖速度は、増殖している微
生物に依存する。特に選ばれた菌株、例えばＥ・コリー
においてさえも、所望の正確な速度は菌株ごとに変化し
得るし、しかも使用される培地に依存し得る。従って、
それは実験的に決定しなければならない。阻害物質が生
成する場合の増殖速度を決定する方法は、当該技術分野
において既知である。代表的な方法では、定常期条件下
の連続発酵槽中で微生物が増殖される。これは、ケモス
タットとして当該技術分野で知られている。ケモスタッ
トは平衡に達するまでに長期の時間を要し、そのため商
業的な目的には役に立たない。
度よりも低い実質的に一定の速度に維持される。本発明
の方法で用いられる正確な増殖速度は、増殖している微
生物に依存する。特に選ばれた菌株、例えばＥ・コリー
においてさえも、所望の正確な速度は菌株ごとに変化し
得るし、しかも使用される培地に依存し得る。従って、
それは実験的に決定しなければならない。阻害物質が生
成する場合の増殖速度を決定する方法は、当該技術分野
において既知である。代表的な方法では、定常期条件下
の連続発酵槽中で微生物が増殖される。これは、ケモス
タットとして当該技術分野で知られている。ケモスタッ
トは平衡に達するまでに長期の時間を要し、そのため商
業的な目的には役に立たない。
酢酸塩を生産し始める増殖速度を例示する組み換えＥ・
コリー株のケモスタット増殖は公表されており、そして
本発明のフェッド・バッチ方法における所望の増殖速度
を決定する方法も例示かある（ＦｉｅｓｃｈｏおよびＲ
ｉｔｃｈ、Ｃｈｅｍ、［！ｎｇ、ｃｏｆｆ＋ｎ＋ｕｎ、
＋ ４５＋２２９〜２４０．１９８６）。他の増殖阻害
副生成物を生産し得る他の微生物における限界増殖速度
も同様に決定することができる。
コリー株のケモスタット増殖は公表されており、そして
本発明のフェッド・バッチ方法における所望の増殖速度
を決定する方法も例示かある（ＦｉｅｓｃｈｏおよびＲ
ｉｔｃｈ、Ｃｈｅｍ、［！ｎｇ、ｃｏｆｆ＋ｎ＋ｕｎ、
＋ ４５＋２２９〜２４０．１９８６）。他の増殖阻害
副生成物を生産し得る他の微生物における限界増殖速度
も同様に決定することができる。
他方、増殖速度を制御した本発明の方法を使用して、連
続発酵についての正確な増殖速度を決定することができ
る。例えば、具体的な発酵で選んだ増殖速度が、過剰な
阻害副生成物を生ずる場合には、次の発酵は、わずかに
低い増殖速度で実施すればよい。
続発酵についての正確な増殖速度を決定することができ
る。例えば、具体的な発酵で選んだ増殖速度が、過剰な
阻害副生成物を生ずる場合には、次の発酵は、わずかに
低い増殖速度で実施すればよい。
まったく阻害副生成物を生じない増殖速度よりもわずか
に高い増殖速度が、ある環境下では使用され得ることが
認められるであろう。重要なことは、かかる速度におい
て生成する阻害副生成物が発酵の進行期間中に阻害水準
まで蓄積しないことである。最も現実的には、まったく
阻害副生成物を生じないような増殖速度を選ぶことが望
ましいであろう。
に高い増殖速度が、ある環境下では使用され得ることが
認められるであろう。重要なことは、かかる速度におい
て生成する阻害副生成物が発酵の進行期間中に阻害水準
まで蓄積しないことである。最も現実的には、まったく
阻害副生成物を生じないような増殖速度を選ぶことが望
ましいであろう。
第２図に、本発明の一部である制御を実施する上で役立
つ装置の構成図を示す。図には、例えばマススペクトロ
メーターであってもよい二酸化炭素測定装置１０が示さ
れている。この装置からの出力信号は、比増殖速度（Ｓ
ＧＲ）を演算する手段２１および発酵を制御するための
論理手段２２を含むコンピューター２０に入る。論理手
段２２は、供給ポンプ４０を制御する比例積分制御装置
（Ｐｌ、Ｃ）であってもよい。次に、発酵槽５０で生じ
た二酸化炭素は、二酸化炭素測定装置１０により秤量さ
れ制御回路を完成する。
つ装置の構成図を示す。図には、例えばマススペクトロ
メーターであってもよい二酸化炭素測定装置１０が示さ
れている。この装置からの出力信号は、比増殖速度（Ｓ
ＧＲ）を演算する手段２１および発酵を制御するための
論理手段２２を含むコンピューター２０に入る。論理手
段２２は、供給ポンプ４０を制御する比例積分制御装置
（Ｐｌ、Ｃ）であってもよい。次に、発酵槽５０で生じ
た二酸化炭素は、二酸化炭素測定装置１０により秤量さ
れ制御回路を完成する。
本発明によるバッチ発酵では、微生物を増殖せしめるた
めに使用される培地は臨界的でない。個々の微生物の増
殖にとって有用であることがわかっている成分のすべて
の組み合わせを使用することができる。供給物中の各成
分の割合は、二酸化炭素に基づく制御が効果を発揮し、
発酵槽中で実質的に限定された炭素源となる培地をもた
らすようなものであることが好ましい。培地の最適化は
当業者に周知である。発酵開始時の発酵槽中の炭素源の
初期量は、本発明の方法で即座に所望の制御範囲まで増
殖速度が低下するように低いものであろう。発酵におい
て重要であることが知られている他のパラメーターは、
常法で制御される。例えば、ｐＨ制御、溶存酸素制御お
よび温度制御を包含することが好ましい。
めに使用される培地は臨界的でない。個々の微生物の増
殖にとって有用であることがわかっている成分のすべて
の組み合わせを使用することができる。供給物中の各成
分の割合は、二酸化炭素に基づく制御が効果を発揮し、
発酵槽中で実質的に限定された炭素源となる培地をもた
らすようなものであることが好ましい。培地の最適化は
当業者に周知である。発酵開始時の発酵槽中の炭素源の
初期量は、本発明の方法で即座に所望の制御範囲まで増
殖速度が低下するように低いものであろう。発酵におい
て重要であることが知られている他のパラメーターは、
常法で制御される。例えば、ｐＨ制御、溶存酸素制御お
よび温度制御を包含することが好ましい。
本発明は、本発明により増殖期が延びるので、増殖期間
中に微生物によって有用生成物が生産される場合に特に
有用である。外因性のＤＮＡにより産生されるほとんど
の生産物がこの範晴に入る。
中に微生物によって有用生成物が生産される場合に特に
有用である。外因性のＤＮＡにより産生されるほとんど
の生産物がこの範晴に入る。
しかしながら、最終的に高い細胞密度が達成できるので
、後の静止期を通じて所望の生成物が生産される場合や
、または単に高細胞密度で微生物を生産することが必要
な場合にも、本発明は有用である。
、後の静止期を通じて所望の生成物が生産される場合や
、または単に高細胞密度で微生物を生産することが必要
な場合にも、本発明は有用である。
ある態様では、ビオチン産生の外因性ＤＮＡを含有する
微生物について本発明は使用される。かかる組み換え微
生物としては、昭和６２ （１９８７）年３月１２日付
けで公表されたＰＣＴ出願第８．７０１．３９１号明細
書に記載されているようなプラスミドｐＫａ５を含有す
るＥ・コリーＢＭ４０６２を挙げることができる。常法
のフェッド・バッチ法で１．０■／ｌ・時のビオチン生
産性であるのに比し、本発明を使用すれば、２．２■／
！・時のビオチン生産性が達成できた。比増殖速度を３
０°Ｃで約０．１／時以下に維持する場合には、本微生
物はまったく酢酸塩を生産しないことをケモスタット試
験は示した。
微生物について本発明は使用される。かかる組み換え微
生物としては、昭和６２ （１９８７）年３月１２日付
けで公表されたＰＣＴ出願第８．７０１．３９１号明細
書に記載されているようなプラスミドｐＫａ５を含有す
るＥ・コリーＢＭ４０６２を挙げることができる。常法
のフェッド・バッチ法で１．０■／ｌ・時のビオチン生
産性であるのに比し、本発明を使用すれば、２．２■／
！・時のビオチン生産性が達成できた。比増殖速度を３
０°Ｃで約０．１／時以下に維持する場合には、本微生
物はまったく酢酸塩を生産しないことをケモスタット試
験は示した。
０．２７時の比増殖速度において、はんの少量の酢酸塩
が生成したにすぎない。
が生成したにすぎない。
以下の例は、本発明の理解をさらに深めるために提供す
る。
る。
■土工
種母培養物を、生産用フエツド・ハツチ発酵槽に接種す
るために調製した。この方法は、発酵の開始期を通じて
酢酸塩の生産性が最小になるように選んだ。以下に記載
するタンク培地５００ｍ１を含むフラスコをプラスミド
ｐＫａ５を含有するＥ・コリ＝ＢＭ４０６２が入った凍
結乾燥バイアルで接種した。
るために調製した。この方法は、発酵の開始期を通じて
酢酸塩の生産性が最小になるように選んだ。以下に記載
するタンク培地５００ｍ１を含むフラスコをプラスミド
ｐＫａ５を含有するＥ・コリ＝ＢＭ４０６２が入った凍
結乾燥バイアルで接種した。
このフラスコを２０Ｏｒｐｍに撹拌しながら３０″Ｃで
１６時間インキュベーションした。
１６時間インキュベーションした。
得られた培養物の光学濃度を測定し、そしてその光学濃
度とサンプルの−の積（以下ｒ ｍＬＯＤ Ｊという）
が１４０になるのに十分量の培養物のサンプルを用いて
、タンク培地の別の５００ ＋ｎ７を含有する第２のフ
ラスコに接種した。再び、このものを３０°Ｃで１６時
間撹拌しながらインキュベーションした。
度とサンプルの−の積（以下ｒ ｍＬＯＤ Ｊという）
が１４０になるのに十分量の培養物のサンプルを用いて
、タンク培地の別の５００ ＋ｎ７を含有する第２のフ
ラスコに接種した。再び、このものを３０°Ｃで１６時
間撹拌しながらインキュベーションした。
次に、１９６抛ＬＯＤを含有するサンプルを用いて、タ
ンク培地５ｊ２を含む１４ｆのフェッド・バッチ発酵槽
を接種した。
ンク培地５ｊ２を含む１４ｆのフェッド・バッチ発酵槽
を接種した。
このフェッド・バッチ発酵槽は、前記第２図に関連して
記載した装置を装備したものである。二酸化炭素の放出
により計算される比増殖速度は、実時間プロセス・コン
ピューター制御システムヒユーレット・パラカード（Ｉ
ｌｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ）Ａ−６００に属する
比例積分制御装置により制御した。この比例積分アルゴ
リズムは、次の数式に等価であった。
記載した装置を装備したものである。二酸化炭素の放出
により計算される比増殖速度は、実時間プロセス・コン
ピューター制御システムヒユーレット・パラカード（Ｉ
ｌｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ）Ａ−６００に属する
比例積分制御装置により制御した。この比例積分アルゴ
リズムは、次の数式に等価であった。
制御誤差εは、所期の比増殖速度の設定値から計算した
比増殖速度（二酸化炭素の放出に由来する）を減算する
ことにより得られた。次に、制御装置からの出力信号を
用い、発酵槽に輸送される供給培地の速度を変化させた
。Ｋｃは比例ゲイン（本例ではＩＯに設定）であり、Ｋ
、は積分ゲイン（本例では０．１に設定）である。発酵
槽は、通常のｐｏ、溶存酸素および温度を制御する装置
をも装備したものである。
比増殖速度（二酸化炭素の放出に由来する）を減算する
ことにより得られた。次に、制御装置からの出力信号を
用い、発酵槽に輸送される供給培地の速度を変化させた
。Ｋｃは比例ゲイン（本例ではＩＯに設定）であり、Ｋ
、は積分ゲイン（本例では０．１に設定）である。発酵
槽は、通常のｐｏ、溶存酸素および温度を制御する装置
をも装備したものである。
発酵槽は、当初に一定量のグルコースを含むので、約４
時間は制御し得る範囲内に比増殖速度を安定化すること
ができなかった。その後、前述の二酸化炭素制御システ
ムは、比増殖速度を０．１５〜０．２０／時に維持した
。発酵槽の物質の光学流通が２０に達したとき、微生物
中のプラスミドのコピー数を高めるために発酵温度を３
７°Ｃまで上げた。
時間は制御し得る範囲内に比増殖速度を安定化すること
ができなかった。その後、前述の二酸化炭素制御システ
ムは、比増殖速度を０．１５〜０．２０／時に維持した
。発酵槽の物質の光学流通が２０に達したとき、微生物
中のプラスミドのコピー数を高めるために発酵温度を３
７°Ｃまで上げた。
この増殖速度で生産する酢酸塩は、極微であった（３４
時間後に最大酢酸塩濃度が０．４ｇ／ｌに達するにすぎ
なかった）。
時間後に最大酢酸塩濃度が０．４ｇ／ｌに達するにすぎ
なかった）。
タンク培地および供給培地の組成は次のとおりである：
第１表
結果は、第１図に示す。対数増殖期を３４時間継続し、
細胞は光学濃度１１０に達した（図中、細胞は乾燥重量
でプロットした。細胞の乾燥重量と光学濃度との関係は
、約２のファクターである。
細胞は光学濃度１１０に達した（図中、細胞は乾燥重量
でプロットした。細胞の乾燥重量と光学濃度との関係は
、約２のファクターである。
従って、例えば細胞の乾燥重量が６０である場合、対応
する発酵培地中の対応する光学濃度は、約１２０となる
）、ビオチン生産性は、平均２．２■／２・時であった
。
する発酵培地中の対応する光学濃度は、約１２０となる
）、ビオチン生産性は、平均２．２■／２・時であった
。
ｌ土
これは比較例である。
フェッド・バッチ発酵槽に種母を導入した時点から例１
を繰り返した。発酵はそのまま継続した。
を繰り返した。発酵はそのまま継続した。
しかしながら、増殖速度を制御する代わりに、供給速度
を二酸化炭素に基づくグルコース消費の理論量を供給す
るに足りるように調整した。
を二酸化炭素に基づくグルコース消費の理論量を供給す
るに足りるように調整した。
その結果、対数増殖期は約２０時間だけ継続し、細胞は
約６０の光学濃度にしか達せずそしてビオチン生産性の
平均値は、３４時間の発酵を通じて約１．０ｇ／ｌ・時
にすぎなかった。発酵の最初の１５時間中に酢酸塩の産
生が明らかであった。
約６０の光学濃度にしか達せずそしてビオチン生産性の
平均値は、３４時間の発酵を通じて約１．０ｇ／ｌ・時
にすぎなかった。発酵の最初の１５時間中に酢酸塩の産
生が明らかであった。
第１図は本発明の方法に関連するデータをプロットした
グラフであり、そして第２図は本発明で使用される二酸
化炭素に基づくフィードバック制御の代表的な構成図で
ある。 なお、第２図において、 １０は二酸化炭素測定装置、２０はコンピューター、２
１はＳＲＧを演算する手段、２２は論理手段、４０は供
給ポンプおよび５０は発酵槽を示す。
グラフであり、そして第２図は本発明で使用される二酸
化炭素に基づくフィードバック制御の代表的な構成図で
ある。 なお、第２図において、 １０は二酸化炭素測定装置、２０はコンピューター、２
１はＳＲＧを演算する手段、２２は論理手段、４０は供
給ポンプおよび５０は発酵槽を示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、発酵期間を通じて炭素源を添加し続ける微生物の発
酵のためのフェッド・バッチ方法であって、 １）発酵期間を通じて発生する二酸化炭素を連続的に測
定し、 ２）発生する二酸化炭素から微生物の比増殖速度を計算
し、そして ３）前記炭素源の供給速度をいろいろ変化せしめること
により、実質的に一定な比増殖速度が副生物の阻害的な
蓄積をもたらす増殖速度より低くなるように維持される
段階、 を含む前記方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US118702 | 1980-02-05 | ||
| US11870287A | 1987-11-09 | 1987-11-09 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01165368A true JPH01165368A (ja) | 1989-06-29 |
Family
ID=22380227
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63280537A Pending JPH01165368A (ja) | 1987-11-09 | 1988-11-08 | 制御した増殖速度の発酵方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0315944B1 (ja) |
| JP (1) | JPH01165368A (ja) |
| KR (1) | KR890008312A (ja) |
| AU (1) | AU626527B2 (ja) |
| CA (1) | CA1293217C (ja) |
| DE (1) | DE3889294T2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0383595A (ja) * | 1989-08-25 | 1991-04-09 | Green Cross Corp:The | ヒト血清アルブミンの製造方法 |
| JP2015508658A (ja) * | 2012-02-22 | 2015-03-23 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | 高度発酵制御 |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8917963D0 (en) * | 1989-08-05 | 1989-09-20 | Scras | Apparatus for repeated automatic execution of a thermal cycle for treatment of biological samples |
| DE4001518A1 (de) * | 1990-01-19 | 1991-07-25 | Biotechnolog Forschung Gmbh | Verfahren zur hochzelldichte-fermentation von escherichia coli in einem ruehrkesselfermentor |
| DE4037325A1 (de) * | 1990-11-23 | 1992-05-27 | Karl Mueller U Co Kg | Verfahren zur erzeugung von zellmasse und/oder fermentierungsprodukten unter sterilen bedingungen sowie vorrichtung zur durchfuehrung des verfahrens |
| GB9119382D0 (en) * | 1991-09-11 | 1991-10-23 | Knight Scient Ltd | Apparatus for monitoring liquids |
| DE19518913C1 (de) * | 1995-05-29 | 1996-11-28 | Mueller Wolf Ruediger Dr Ing | Verfahren und Vorrichtung zur Überprüfung der aeroben biologischen Abbaubarkeit von Testsubstanzen |
| AU702567B2 (en) * | 1996-03-13 | 1999-02-25 | Novozymes Biopharma Dk A/S | Fermentation control |
| GB9902000D0 (en) | 1999-01-30 | 1999-03-17 | Delta Biotechnology Ltd | Process |
| ITTV20120212A1 (it) * | 2012-11-09 | 2014-05-10 | NoForm Srl | Fermentatore migliorato |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57144978A (en) * | 1981-03-04 | 1982-09-07 | Hitachi Ltd | Method and apparatus for controlling cultivation of micro-organism |
| JPS60141283A (ja) * | 1983-12-28 | 1985-07-26 | Toyo Soda Mfg Co Ltd | 酵母の培養方法 |
| JPS6132957A (ja) * | 1984-07-25 | 1986-02-15 | Tanaka Kikinzoku Kogyo Kk | 亜鉛−塩素二次電池用電極の製造方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5878584A (ja) * | 1981-11-04 | 1983-05-12 | Hitachi Ltd | 培養基質の流加制御方法 |
-
1988
- 1988-03-08 CA CA000560824A patent/CA1293217C/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-07-14 AU AU19060/88A patent/AU626527B2/en not_active Ceased
- 1988-08-30 KR KR1019880011020A patent/KR890008312A/ko not_active IP Right Cessation
- 1988-11-08 DE DE3889294T patent/DE3889294T2/de not_active Revoked
- 1988-11-08 EP EP88118567A patent/EP0315944B1/en not_active Revoked
- 1988-11-08 JP JP63280537A patent/JPH01165368A/ja active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS57144978A (en) * | 1981-03-04 | 1982-09-07 | Hitachi Ltd | Method and apparatus for controlling cultivation of micro-organism |
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| JPH0383595A (ja) * | 1989-08-25 | 1991-04-09 | Green Cross Corp:The | ヒト血清アルブミンの製造方法 |
| JP2015508658A (ja) * | 2012-02-22 | 2015-03-23 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | 高度発酵制御 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3889294T2 (de) | 1994-11-17 |
| CA1293217C (en) | 1991-12-17 |
| AU626527B2 (en) | 1992-08-06 |
| AU1906088A (en) | 1989-05-11 |
| EP0315944A3 (en) | 1991-04-10 |
| EP0315944B1 (en) | 1994-04-27 |
| DE3889294D1 (de) | 1994-06-01 |
| KR890008312A (ko) | 1989-07-10 |
| EP0315944A2 (en) | 1989-05-17 |
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