JPH01150857A - ヘモグロビンの存在下におけるラテックス凝集イムノアッセイ及び試薬キット - Google Patents
ヘモグロビンの存在下におけるラテックス凝集イムノアッセイ及び試薬キットInfo
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
ｌ肌Ω貨旦
本発明は、ラテックス凝集イムノアッセイに基く、血液
試料中の分析対象物の測定方法に関する。更に詳しくは
、本発明は、試験試料中に存在するヘモグロビンからの
非特異的凝集を阻止する方法に関する。本発明は、特に
、全血試料中のグリケート化ヘモグロビン（ｇｌｙｃａ
ｔｅｄｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ） 、例えばヘモグロビン
Ａｌｃの測定に関する。
試料中の分析対象物の測定方法に関する。更に詳しくは
、本発明は、試験試料中に存在するヘモグロビンからの
非特異的凝集を阻止する方法に関する。本発明は、特に
、全血試料中のグリケート化ヘモグロビン（ｇｌｙｃａ
ｔｅｄｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ） 、例えばヘモグロビン
Ａｌｃの測定に関する。
ラテックス凝集イムノアッセイは、多価ラテックス抗体
試薬と、対応する多価形態の抗原又はハブテンとを結合
させることによる検出可能な凝集の形成に基くものであ
る。対象とする分析対象物がラテックス抗体試薬に関し
てそれ自身多価である場合には、直接的な試験を行なう
ことができる。しかしながら、対象とする分析対象物が
、低分子量ハブテンの場合のように多価でない場合には
、かかるハブテン系分析対象物を定量するために競合試
験が行なわれる。凝集試薬を、抗分析対象物抗体試薬に
関する多数のエピトピック（ｅｐｉｔｏｐｉｃｌな結合
部位を含む系に加える。凝集試薬とラテックス抗体試薬
との間の結合によって検出可能な凝集が形成される６ラ
テツクス抗体試薬に結合する凝集試薬と競合する分析対
象物の量を増加させることによって、得られる凝集の量
を減少させる。
試薬と、対応する多価形態の抗原又はハブテンとを結合
させることによる検出可能な凝集の形成に基くものであ
る。対象とする分析対象物がラテックス抗体試薬に関し
てそれ自身多価である場合には、直接的な試験を行なう
ことができる。しかしながら、対象とする分析対象物が
、低分子量ハブテンの場合のように多価でない場合には
、かかるハブテン系分析対象物を定量するために競合試
験が行なわれる。凝集試薬を、抗分析対象物抗体試薬に
関する多数のエピトピック（ｅｐｉｔｏｐｉｃｌな結合
部位を含む系に加える。凝集試薬とラテックス抗体試薬
との間の結合によって検出可能な凝集が形成される６ラ
テツクス抗体試薬に結合する凝集試薬と競合する分析対
象物の量を増加させることによって、得られる凝集の量
を減少させる。
先行技術においては、ラテックス凝集イムノアッセイ法
は、血液中の対象とする分析対象物を測定するために主
として血清又は血漿試料に対して１〒なわれている。全
血成分が存在することによってラテックス試薬の非特異
的凝集が生じることが知られている。したがって、全血
を試験することが所望又は必要である状況において、試
験結果の正確性が大きな障害を受ける可能性がある。
は、血液中の対象とする分析対象物を測定するために主
として血清又は血漿試料に対して１〒なわれている。全
血成分が存在することによってラテックス試薬の非特異
的凝集が生じることが知られている。したがって、全血
を試験することが所望又は必要である状況において、試
験結果の正確性が大きな障害を受ける可能性がある。
これは、特に、診断学上重要なヘモグロビン誘導体のよ
うな赤血球に関連する血液成分の測定において当てはま
る。
うな赤血球に関連する血液成分の測定において当てはま
る。
１五Ω互Ｉ
ここで、反応混合物のｐＨを約８．５以上に保持するこ
とによって、全血試料に関して行なわれるラテックス凝
集イムノアッセイにおける非特異的凝集が有効に排除さ
れることが見出された。非特異的凝集は、その正味の正
電荷性のために、陰電荷ラテックス粒子に非特異的に吸
引される、ヘモグロビンＡｏと称される天然の未変性ヘ
モグロビンの存在によるものであると考えられている。
とによって、全血試料に関して行なわれるラテックス凝
集イムノアッセイにおける非特異的凝集が有効に排除さ
れることが見出された。非特異的凝集は、その正味の正
電荷性のために、陰電荷ラテックス粒子に非特異的に吸
引される、ヘモグロビンＡｏと称される天然の未変性ヘ
モグロビンの存在によるものであると考えられている。
試験を高いｐＨにおいて行なうことにより、ヘモグロビ
ンＡＯの正味の電荷が中性化し、ラテックス粒子に対す
る静電気的吸引力による凝集が起こらなくなる。
ンＡＯの正味の電荷が中性化し、ラテックス粒子に対す
る静電気的吸引力による凝集が起こらなくなる。
したがって、本発明は、ラテックス凝集イムノアッセイ
による血液試料中の分析対象物の測定方法であって、（
ａｔ血液試料と、水懸濁性ラテックス粒子に結合してい
る抗分析対象物抗体又はそのフラグメントを含む多価ラ
テックス抗体試薬、並びに、分析対象物が単価しかない
場合には、更に、抗分析対象物抗体又はそのフラグメン
トに関する多数のエピトピックな結合部位を含む凝集試
薬とを配合することによって水性反応混合物を生成させ
、（ｂｌ水性反応混合物中において得られる凝集を血液
試料中の分析対象物の関数として測定する方法に関する
６本発明においては、約７以下のｐＨを有する水溶液中
に懸濁した際に正味の有効な表面陰電荷を有するラテッ
クス粒子、例えばポリスチレンラテックスを用いること
ができる。
による血液試料中の分析対象物の測定方法であって、（
ａｔ血液試料と、水懸濁性ラテックス粒子に結合してい
る抗分析対象物抗体又はそのフラグメントを含む多価ラ
テックス抗体試薬、並びに、分析対象物が単価しかない
場合には、更に、抗分析対象物抗体又はそのフラグメン
トに関する多数のエピトピックな結合部位を含む凝集試
薬とを配合することによって水性反応混合物を生成させ
、（ｂｌ水性反応混合物中において得られる凝集を血液
試料中の分析対象物の関数として測定する方法に関する
６本発明においては、約７以下のｐＨを有する水溶液中
に懸濁した際に正味の有効な表面陰電荷を有するラテッ
クス粒子、例えばポリスチレンラテックスを用いること
ができる。
また、ヘモグロビンによるラテックス粒子の観察される
非特異的凝集によって血液試料中のヘモグロビンＡｏの
測定の基礎も与えられる６反応混合物は、血液試料及び
懸濁ラテックス粒子を含み、ｐＨが約８以下に保持され
るように生成される６得られる凝集は試料中のヘモグロ
ビンＡＯの関数である。ｐＨ８以下においては、ラテッ
クス粒子は、その正味の表面陰電荷を保持し、ヘモグロ
ビンの静電気的吸引力によって凝集する。
非特異的凝集によって血液試料中のヘモグロビンＡｏの
測定の基礎も与えられる６反応混合物は、血液試料及び
懸濁ラテックス粒子を含み、ｐＨが約８以下に保持され
るように生成される６得られる凝集は試料中のヘモグロ
ビンＡＯの関数である。ｐＨ８以下においては、ラテッ
クス粒子は、その正味の表面陰電荷を保持し、ヘモグロ
ビンの静電気的吸引力によって凝集する。
ましい 態様の！日
ヘモグロビンＡｌｃとして知られるヘモグロビン誘導体
を測定するためのラテックス凝集イムノアッセイの開発
過程において、量応答曲線が、完全な試薬系によるｐＨ
７，４における試験実験と、凝集試薬を存在させないで
行なったものとの間で実質的に同一であることが見出さ
れた。ヘモグロビンＡｌｃ類縁体ではな（、ウシ血清ア
ルブミンを被覆したラテックスが、血液試料の存在下で
凝集することも見出された。血液試料中の天然ヘモグロ
ビンが対象物になりつると考えられる。
を測定するためのラテックス凝集イムノアッセイの開発
過程において、量応答曲線が、完全な試薬系によるｐＨ
７，４における試験実験と、凝集試薬を存在させないで
行なったものとの間で実質的に同一であることが見出さ
れた。ヘモグロビンＡｌｃ類縁体ではな（、ウシ血清ア
ルブミンを被覆したラテックスが、血液試料の存在下で
凝集することも見出された。血液試料中の天然ヘモグロ
ビンが対象物になりつると考えられる。
血液試料を蛋白分解性酵素ペプシンで処理することによ
って非特異的凝集が排除される。β−鎖中のＮ−末端ア
ミノ基において変性されていない天然ヘモグロビンであ
るヘモグロビンＡｏの多価性はペプシン消化によって破
壊されるであろう。更に、その後の実験において、ヘモ
グロビンＡｏによって、ラテックス粒子が、水性ラテッ
クス懸濁液中のその濃度に比例して凝集することが見出
された。
って非特異的凝集が排除される。β−鎖中のＮ−末端ア
ミノ基において変性されていない天然ヘモグロビンであ
るヘモグロビンＡｏの多価性はペプシン消化によって破
壊されるであろう。更に、その後の実験において、ヘモ
グロビンＡｏによって、ラテックス粒子が、水性ラテッ
クス懸濁液中のその濃度に比例して凝集することが見出
された。
したがって、ラテックス表面上の陰電荷基、例えばポリ
スチレン上のスルフェート基と、ヘモグロビン上の正電
荷アミノ基、例えば、ヘモグロビンのβ−鎖上のＮ−末
端アミノ基との間のイオン性吸引力によって、ヘモグロ
ビンＡｏがラテックスと相互作用すると考えられるが、
これは本発明においで重要ではないと考えられる。それ
によって、ヘモグロビンの４量体が、ラテックス粒子の
結合による凝集を引き起こすのに十分な多価正電荷を与
える。更に、グリケート化ヘモグロビンのようなヘモグ
ロビン誘導体は、正電荷が減少又は除去されるように変
性されており、ラテックス粒子を凝集させる差動的な能
力がヘモグロビンＡＯと特定のヘモグロビン誘導体との
間で生じると考えられる。したがって、ヘモグロビンＡ
Ｏの非特異的凝集効果を中和するｐＨ条件下で試験を行
なうことによって、非特異的なラテックス凝集を実質的
に引き起こすことのない、特定のヘモグロビン誘導体、
例えばヘモグロビンＡｌｃに関する試験を行なうことが
可能になる。
スチレン上のスルフェート基と、ヘモグロビン上の正電
荷アミノ基、例えば、ヘモグロビンのβ−鎖上のＮ−末
端アミノ基との間のイオン性吸引力によって、ヘモグロ
ビンＡｏがラテックスと相互作用すると考えられるが、
これは本発明においで重要ではないと考えられる。それ
によって、ヘモグロビンの４量体が、ラテックス粒子の
結合による凝集を引き起こすのに十分な多価正電荷を与
える。更に、グリケート化ヘモグロビンのようなヘモグ
ロビン誘導体は、正電荷が減少又は除去されるように変
性されており、ラテックス粒子を凝集させる差動的な能
力がヘモグロビンＡＯと特定のヘモグロビン誘導体との
間で生じると考えられる。したがって、ヘモグロビンＡ
Ｏの非特異的凝集効果を中和するｐＨ条件下で試験を行
なうことによって、非特異的なラテックス凝集を実質的
に引き起こすことのない、特定のヘモグロビン誘導体、
例えばヘモグロビンＡｌｃに関する試験を行なうことが
可能になる。
本発明は、種々のラテックス粒子に基く凝集イムノアッ
セイに適用することができる。ラテックスの殆どは、中
性のｐＨにおいて正味の表面陰電荷を有する粒子から成
っている。ラテックスの表面陰電荷の間の電荷反発作用
は、粒子が懸濁状態で保持されるのに重要なものである
。ここで用いるように、ラテックスという用語は、水性
液中において不連続な微粒子が懸濁する性質を意味する
ものと意図される。
セイに適用することができる。ラテックスの殆どは、中
性のｐＨにおいて正味の表面陰電荷を有する粒子から成
っている。ラテックスの表面陰電荷の間の電荷反発作用
は、粒子が懸濁状態で保持されるのに重要なものである
。ここで用いるように、ラテックスという用語は、水性
液中において不連続な微粒子が懸濁する性質を意味する
ものと意図される。
本発明において有用なラテックス粒子は、ラテックス凝
集イムノアッセイの分野に詳しい当業者には明らかであ
ろう０通常、かかる粒子は、試験に所望の抗体試薬に関
して好適な支持体として機能し、分析の目的に十分な凝
集試薬の存在下で凝集するために必要な性質を有する工
とが必要とされる。ラテックス粒子は、通常、乳化重合
又は懸濁重合によって得られる［Ｂａｎｇｓ。
集イムノアッセイの分野に詳しい当業者には明らかであ
ろう０通常、かかる粒子は、試験に所望の抗体試薬に関
して好適な支持体として機能し、分析の目的に十分な凝
集試薬の存在下で凝集するために必要な性質を有する工
とが必要とされる。ラテックス粒子は、通常、乳化重合
又は懸濁重合によって得られる［Ｂａｎｇｓ。
Ｌ、Ｂ、 （１９８４１Ｕｎｉｆｏｒｍ Ｌａｔｅｘ
Ｐａｒｔｉｃｌｅｓ、 ＳｅｒａｇｅｎＤｉａｇｎｏｓ
ｔｉｃｓ Ｉｎｃ、、 Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ Ｉ
Ｎ、 ＵＳＡ、］、膨膨潤乳化台を用いることもできる
［Ｕｇｅｌｓｔａｄ、 Ｊ。
Ｐａｒｔｉｃｌｅｓ、 ＳｅｒａｇｅｎＤｉａｇｎｏｓ
ｔｉｃｓ Ｉｎｃ、、 Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ Ｉ
Ｎ、 ＵＳＡ、］、膨膨潤乳化台を用いることもできる
［Ｕｇｅｌｓｔａｄ、 Ｊ。
ら、 （１９８０） Ａｄｖ、 Ｃｏ１１ｏｉｄ ａｎ
ｄ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ Ｓｃｉ。
ｄ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ Ｓｃｉ。
１３：１Ｑｌ−１４０１、良好なラテックス粒子を市販
物の中から選択することができる。ポリスチレン粒子は
特に有用である。
物の中から選択することができる。ポリスチレン粒子は
特に有用である。
ラテックス粒子の密度は、制限されることなく、概して
約０．１ｍｇ／−〜約０．１ｇ／−の間で変化させるこ
とができる。ラテックス粒子の殆どは、粗面の微小球状
の、制限されることなく約０．０４〜約１．２μの間で
変化させることのできる直径を有する粒子から成るもの
である。
約０．１ｍｇ／−〜約０．１ｇ／−の間で変化させるこ
とができる。ラテックス粒子の殆どは、粗面の微小球状
の、制限されることなく約０．０４〜約１．２μの間で
変化させることのできる直径を有する粒子から成るもの
である。
抗体試薬のラテックス粒子への結合は、従来技術が適用
される領域のものである６通常、該結合は共有結合であ
っても非共有結合であってもよい、抗体試薬は、全抗体
、抗体フラグメント、多官能性抗体凝集物などから成っ
ていてよい。通常、全抗体、又はＦａｂ、 Ｆａｂ’又
は）”（ａｂ’ｌａのようなＩｇＧフラグメントが用い
られる。抗体試薬を、通常の抗血清及びモノクローナル
法のような任意の利用可能な方法によって誘導すること
ができる。
される領域のものである６通常、該結合は共有結合であ
っても非共有結合であってもよい、抗体試薬は、全抗体
、抗体フラグメント、多官能性抗体凝集物などから成っ
ていてよい。通常、全抗体、又はＦａｂ、 Ｆａｂ’又
は）”（ａｂ’ｌａのようなＩｇＧフラグメントが用い
られる。抗体試薬を、通常の抗血清及びモノクローナル
法のような任意の利用可能な方法によって誘導すること
ができる。
通常は、ヘモグロビンＡｏの正電荷性を中和し、それに
よって血液試料の存在下でのラテックス試薬の非特異的
凝集を排除するのには、イムノアッセイ反応を約８．５
以上のｐＨで行なうことで十分である。反応のｐＨは、
もちろん、分析対象物とラテックス試薬との間の免疫反
応性が実質的に減少する点、即ち、有用な試験がもはや
得られない点まで到達することのないようにされる。
よって血液試料の存在下でのラテックス試薬の非特異的
凝集を排除するのには、イムノアッセイ反応を約８．５
以上のｐＨで行なうことで十分である。反応のｐＨは、
もちろん、分析対象物とラテックス試薬との間の免疫反
応性が実質的に減少する点、即ち、有用な試験がもはや
得られない点まで到達することのないようにされる。
好ましくは、水性反応混合物は、約８．７５〜約１０、
より好ましくは約９．５未満のｐＨを有し、約９．０の
ｐＨが特に有用である。この目的のために好適なバッフ
ァーは、簡便性及び試験特性に基いて選択することがで
きる。グリシン及びビシン（ｂｉｃｉｎｅ）バッファー
が好ましい。
より好ましくは約９．５未満のｐＨを有し、約９．０の
ｐＨが特に有用である。この目的のために好適なバッフ
ァーは、簡便性及び試験特性に基いて選択することがで
きる。グリシン及びビシン（ｂｉｃｉｎｅ）バッファー
が好ましい。
凝集剤化合物は、凝集イムノアッセイの分野においてよ
く知られている方法によって調製される。この試薬は、
通常の条件においては、抗分析対象物抗体試薬に関する
多数のエピトピックな結合部位を含んでいる。かかる部
位は、分析対象物自身、又は、試験の目的のために抗体
によって結合されるのに十分な能力を保持する好適な類
縁体を用いることによって得ることができる。かかる類
縁体は、蛋白分析対象物の場合には、合成によって又は
消化によって得られる、抗体試薬、例えば、以下の実施
例において説明するようなヘモグロビンＡｌｃのグリケ
ート化ペプチドｆｇｌｙｃａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅｌ
残基のためのエピトープ（ｅｐｉｔｏｐｅｌ を含む好
適なフラグメントを含んでいる。
く知られている方法によって調製される。この試薬は、
通常の条件においては、抗分析対象物抗体試薬に関する
多数のエピトピックな結合部位を含んでいる。かかる部
位は、分析対象物自身、又は、試験の目的のために抗体
によって結合されるのに十分な能力を保持する好適な類
縁体を用いることによって得ることができる。かかる類
縁体は、蛋白分析対象物の場合には、合成によって又は
消化によって得られる、抗体試薬、例えば、以下の実施
例において説明するようなヘモグロビンＡｌｃのグリケ
ート化ペプチドｆｇｌｙｃａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅｌ
残基のためのエピトープ（ｅｐｉｔｏｐｅｌ を含む好
適なフラグメントを含んでいる。
本発明は、潜在的な非特異性緩衝物質としてヘモグロビ
ンを含む試験試料の試験に適用することができる。かか
る試験試料は、通常、全血又は分離赤血球のような血液
使用の溶解産物を含む。
ンを含む試験試料の試験に適用することができる。かか
る試験試料は、通常、全血又は分離赤血球のような血液
使用の溶解産物を含む。
ヘモグロビンＡＯがラテックス粒子を凝集させる能力に
よってＡＯの測定方法も提供される。この実施態様にお
いては、ラテックス粒子が抗体試薬を担持する必要が無
く、また、凝集剤化合物も必要とされない、単純にヘモ
グロビン及びラテックス粒子の水性混合物のｐＨを約８
以下に保持することによって、ヘモグロビンＡｏ濃度に
相関しうる凝集を得ることができる０本発明のこの態様
に関する有用なｐＨ範囲の下限は、ヘモグロビンＡｏが
ラテックス粒子を凝集させる能力を失うことが経験的に
分かっているｐＨである。通常、これは約４を超えるｐ
Ｈを要する。
よってＡＯの測定方法も提供される。この実施態様にお
いては、ラテックス粒子が抗体試薬を担持する必要が無
く、また、凝集剤化合物も必要とされない、単純にヘモ
グロビン及びラテックス粒子の水性混合物のｐＨを約８
以下に保持することによって、ヘモグロビンＡｏ濃度に
相関しうる凝集を得ることができる０本発明のこの態様
に関する有用なｐＨ範囲の下限は、ヘモグロビンＡｏが
ラテックス粒子を凝集させる能力を失うことが経験的に
分かっているｐＨである。通常、これは約４を超えるｐ
Ｈを要する。
本発明を以下の実施例によって示すが、これらに限定さ
れるものではない。
れるものではない。
必要な材料
・２％ラテックス懸濁液（直径０．０８５μのポリスチ
レンラテックス、Ｓｅｒａｇｅｎ。
レンラテックス、Ｓｅｒａｇｅｎ。
Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、 ＩＮ、 ＵＳＡ、）・抗
体溶液［米国特許筒４，６４７゜ ６５４号に記載のように調製し、蛋白 Ａ−アフィニティークロマトグラフィー（ＢｉｏＲａｄ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、 Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、
ＣＡ。
体溶液［米国特許筒４，６４７゜ ６５４号に記載のように調製し、蛋白 Ａ−アフィニティークロマトグラフィー（ＢｉｏＲａｄ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、 Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、
ＣＡ。
ＵＳＡ、 ）によって腹水液から生成したモノクローナ
ル抗体］ ・１０ｍＭ−グリシンバッファー、 ０．０２％アジド、ｐＨ９，３ −１００ｍＭ−ＮａＣＩ２ 抗体の被覆は０．５％のラテックス濃度で行なわれ、抗
体は、通常、被覆反応において１ｍｇ／ｄの最終濃度で
用いられる。必要量の抗体を１０ｍＭのグリシンバッフ
ァー中に希釈し、ＮａＣβを加えて最終的な所望の伝導
度（０，５〜１．８ｍｏｈｍ）を与＾ることによって２
倍の濃度の抗体溶液を調製した１等容量の１０ｍＭ−グ
リシンバッファーと共に混合することによって、２％の
ラテックスを２倍の濃度（又は１％）に希釈した。
ル抗体］ ・１０ｍＭ−グリシンバッファー、 ０．０２％アジド、ｐＨ９，３ −１００ｍＭ−ＮａＣＩ２ 抗体の被覆は０．５％のラテックス濃度で行なわれ、抗
体は、通常、被覆反応において１ｍｇ／ｄの最終濃度で
用いられる。必要量の抗体を１０ｍＭのグリシンバッフ
ァー中に希釈し、ＮａＣβを加えて最終的な所望の伝導
度（０，５〜１．８ｍｏｈｍ）を与＾ることによって２
倍の濃度の抗体溶液を調製した１等容量の１０ｍＭ−グ
リシンバッファーと共に混合することによって、２％の
ラテックスを２倍の濃度（又は１％）に希釈した。
反応は、ラテックス懸濁液を抗体溶液を含む容器内に注
ぐことによって開始された。ラテックスを加える際に、
抗体溶液を電磁撹拌棒で撹拌した。
ぐことによって開始された。ラテックスを加える際に、
抗体溶液を電磁撹拌棒で撹拌した。
溶液は全て室温下にあった。電磁撹拌プレートからの加
熱が起こらないように容器を絶縁して、混合を一晩（少
なくとも１５時間）続けた。これは、容器を、絶縁のた
めに約１インチの空間をとって攪拌プレート上に懸下す
ることによって行なうことができた。
熱が起こらないように容器を絶縁して、混合を一晩（少
なくとも１５時間）続けた。これは、容器を、絶縁のた
めに約１インチの空間をとって攪拌プレート上に懸下す
ることによって行なうことができた。
１５時間の混合後、得られた懸濁液を、５ｏｒｖａｌｌ
５Ｓ−３４０−クー［ＤｕＰｏｎｔ、 Ｗｉｌｍｉｎ
ｇｔｏｎ。
５Ｓ−３４０−クー［ＤｕＰｏｎｔ、 Ｗｉｌｍｉｎ
ｇｔｏｎ。
ＤＥ、 ＵＳＡ、］用のポリプロピレン遠心管に等しく
（各管に約１０艷）分配した。懸濁液を１５゜００Ｏ
ｒｐｍ （２７００ｘｇ）で６０分遠心分離した。上
澄みをデカントした。ペレットを、所望の過被覆蛋白［
例えば、Ｍｉｌｅｓ Ｉｎｃ、、 Ｅｌｋｈａｒｔ。
（各管に約１０艷）分配した。懸濁液を１５゜００Ｏ
ｒｐｍ （２７００ｘｇ）で６０分遠心分離した。上
澄みをデカントした。ペレットを、所望の過被覆蛋白［
例えば、Ｍｉｌｅｓ Ｉｎｃ、、 Ｅｌｋｈａｒｔ。
ＩＮ、ＵＳＡ、から得られる１％プロテアーゼ遊離ウシ
血清アルブミン（ＢＳＡ−ｐｆｌ ］を含む１０ｍＭ−
グリシンバッファーで２回洗浄した。ペレットを洗浄す
るために、管中の元の容量に等しい量の洗浄溶液を加え
た。ペレットを、激しく撹拌し、短時間（１回あたり１
０〜１５秒）音波処理することによって再懸濁させた。
血清アルブミン（ＢＳＡ−ｐｆｌ ］を含む１０ｍＭ−
グリシンバッファーで２回洗浄した。ペレットを洗浄す
るために、管中の元の容量に等しい量の洗浄溶液を加え
た。ペレットを、激しく撹拌し、短時間（１回あたり１
０〜１５秒）音波処理することによって再懸濁させた。
最初の再懸濁後、吸着ラテックスを再遠心分離する前に
室温で１時間放置した。最初の再懸濁及び遠心分離の後
、ペレットが完全に分散したら直ちに再懸濁液を遠心分
離した。第２の洗浄の後、ペレットを、最初の反応容量
と等しい容量中に再懸濁した。懸濁液を０．８μのフィ
ルターを通して濾過し５℃で保存した。
室温で１時間放置した。最初の再懸濁及び遠心分離の後
、ペレットが完全に分散したら直ちに再懸濁液を遠心分
離した。第２の洗浄の後、ペレットを、最初の反応容量
と等しい容量中に再懸濁した。懸濁液を０．８μのフィ
ルターを通して濾過し５℃で保存した。
元の上澄み液、第１及び第２の洗浄からの上澄み液及び
最終試料の１００倍希釈液の５４６ｎｍの吸光度を測定
することによって濃度を測定した。これら吸光度の合計
は１００％であるか又は０．５％ラテックスと等しいと
仮定した。最終試料の吸光度を、１００％を算出するた
めに用いられる吸光度の合計で割った。最終試料の１０
０倍希釈液の吸光度に１００をかけて最終試料の吸光度
を得た。
最終試料の１００倍希釈液の５４６ｎｍの吸光度を測定
することによって濃度を測定した。これら吸光度の合計
は１００％であるか又は０．５％ラテックスと等しいと
仮定した。最終試料の吸光度を、１００％を算出するた
めに用いられる吸光度の合計で割った。最終試料の１０
０倍希釈液の吸光度に１００をかけて最終試料の吸光度
を得た。
例：
試料 Ａ３４６
上澄み液 ０．０４４第１の洗浄液
０．０３４第２の洗浄液 ０
．０２１最終試料（１００倍希釈） ０．０５１ Ｘ
１００ ＝ ５．１１００％（又は０．５％ラテックス
） ＝ ５．１０÷０．０４４ ＋ ０．０３４÷０．０２
１ ＝ ５．１９９最終試料のラテックス濃度 ＝（５，１１５，１９９１Ｘ Ｏ，５％＝０．４９％ｌ
−亙皇試ス ポリ（アスパラギン酸）を、Ａｌｐｅｒｔ Ｊ、 Ｃｈ
ｒｏ−ｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ２６６：２３ ［１９８
３１の方法にしたがって調製した。
０．０３４第２の洗浄液 ０
．０２１最終試料（１００倍希釈） ０．０５１ Ｘ
１００ ＝ ５．１１００％（又は０．５％ラテックス
） ＝ ５．１０÷０．０４４ ＋ ０．０３４÷０．０２
１ ＝ ５．１９９最終試料のラテックス濃度 ＝（５，１１５，１９９１Ｘ Ｏ，５％＝０．４９％ｌ
−亙皇試ス ポリ（アスパラギン酸）を、Ａｌｐｅｒｔ Ｊ、 Ｃｈ
ｒｏ−ｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ２６６：２３ ［１９８
３１の方法にしたがって調製した。
アミノエタノール（８０ミリモル）、及び、４．９−ジ
オキサ−１，１２−ドデカンジアミン（２０ミリモル）
を、アルゴン下でジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に
溶解した。溶液をポリ（アスパラギン酸）（１０ミリモ
ル）及びＤＭＦの溶液で処理した０反応を、室温で１時
間、次に７０℃で２時間撹拌した６次に、混合物を冷却
し、液体の大部分を減圧下において蒸発させることによ
って除去した。油状の残査をエーテルで、次に温テトラ
ヒドロフランで繰り返し洗浄した。
オキサ−１，１２−ドデカンジアミン（２０ミリモル）
を、アルゴン下でジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に
溶解した。溶液をポリ（アスパラギン酸）（１０ミリモ
ル）及びＤＭＦの溶液で処理した０反応を、室温で１時
間、次に７０℃で２時間撹拌した６次に、混合物を冷却
し、液体の大部分を減圧下において蒸発させることによ
って除去した。油状の残査をエーテルで、次に温テトラ
ヒドロフランで繰り返し洗浄した。
生成物を凝固させ、濾過によって回収した。粗生成物を
水中に溶解し、ｐＨを中性に調節した。次に、溶液をＢ
ｉｏＲａｄ Ｐ６−ＤＧ脱塩ゲルカラム（ＢｉｏＲａｄ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、 Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、 Ｃ
Ａ、 ＩＪＳＡ、）を用いて精製した。アミノ官能化ポ
リマーを含むフラクションをプールし、凍結乾燥した。
水中に溶解し、ｐＨを中性に調節した。次に、溶液をＢ
ｉｏＲａｄ Ｐ６−ＤＧ脱塩ゲルカラム（ＢｉｏＲａｄ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、 Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、 Ｃ
Ａ、 ＩＪＳＡ、）を用いて精製した。アミノ官能化ポ
リマーを含むフラクションをプールし、凍結乾燥した。
ポリマー上のアミノ基の数を、Ｈａｂｅｅｂ’ｓ ＴＮ
ＢＳ試験［Ａｎａｌ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 １４：３２
８−３３６ （１９６６１］によって測定すると、ポリ
マー１ｍｇあたり２２個であることが分かった。
ＢＳ試験［Ａｎａｌ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 １４：３２
８−３３６ （１９６６１］によって測定すると、ポリ
マー１ｍｇあたり２２個であることが分かった。
アミノ官能化ポリ（アルバラギン酸１ｆｔ０． ７ｍｇ
）及びＳＭＣＣ（３０ｍｇ）をＤＭＦ中に溶解した１反
応を室温で２時間撹拌した。氷水を混合物に加え、Ｂｉ
ｏＲａｄ ６Ｐ−ＤＧゲルカラムを用いて活性化ポリマ
ーを混合物から分離した１次に活性化ポリマーを、ヨー
ロッパ特許筒１８５．８７０号に記載の方法によって調
製されたグリケート化ペプチド： Ｈ （２０ｍｇ）と室温で３分間反応させた０反応後、６Ｐ
−ＤＧゲルカラムを用いて生成物を再精製し、凍結乾燥
した。
）及びＳＭＣＣ（３０ｍｇ）をＤＭＦ中に溶解した１反
応を室温で２時間撹拌した。氷水を混合物に加え、Ｂｉ
ｏＲａｄ ６Ｐ−ＤＧゲルカラムを用いて活性化ポリマ
ーを混合物から分離した１次に活性化ポリマーを、ヨー
ロッパ特許筒１８５．８７０号に記載の方法によって調
製されたグリケート化ペプチド： Ｈ （２０ｍｇ）と室温で３分間反応させた０反応後、６Ｐ
−ＤＧゲルカラムを用いて生成物を再精製し、凍結乾燥
した。
活性化ポリマー上のマレイミド基の数をＰＤＳ試験［Ｇ
ｒａｓｓｅｔｔｉ及び１４ｕｒｒａｙ、 Ａｒｃｈ、
Ｂｉｏｃｈｅｍ。
ｒａｓｓｅｔｔｉ及び１４ｕｒｒａｙ、 Ａｒｃｈ、
Ｂｉｏｃｈｅｍ。
Ｂｉｏｐｈｙｓ、 １１９：４４−４９ ｆ１９６７１
］によって測定すると、ポリマー１ｍｇあたり０．４６
マイクロモルであることが分かった。また、ポリマー上
のＧｌｃ−ペプチドの量を、チロシンに関する２７５％
ｍにおけるモル吸光係数を用いて、ＵＶ／可視光吸収測
定によって測定すると、ポリマー１ｍｇあたり０，４６
マイクロモルであることが分かった。
］によって測定すると、ポリマー１ｍｇあたり０．４６
マイクロモルであることが分かった。また、ポリマー上
のＧｌｃ−ペプチドの量を、チロシンに関する２７５％
ｍにおけるモル吸光係数を用いて、ＵＶ／可視光吸収測
定によって測定すると、ポリマー１ｍｇあたり０，４６
マイクロモルであることが分かった。
Ｃ，ウシ血゛アルブミン ラテックス２％ラテックス
溶液（４−）を、１％プロテアーゼ遊離ＢＳＡを含む１
０ｍＭ−グリシンバッファー（１２ｄ）と混合した。混
合物を簡単に音波処理した。
溶液（４−）を、１％プロテアーゼ遊離ＢＳＡを含む１
０ｍＭ−グリシンバッファー（１２ｄ）と混合した。混
合物を簡単に音波処理した。
ＢＳＡ被覆ラテックスを、５０ｍＭ−リン酸ナトリウム
バッファー、０．０５％ＢＳＡ、０．０２％ナトリウム
アジド（ｐＨ＝７．４）中で０．０３６％の濃度に希釈
した。ラテックスを、種々の既知Ａｏ濃度を有する変性
血液試料と混合した。５５０％ｍにおける吸光度の変化
を室温において長時間にわたって記録し、図１に示した
（ヘモグロビン濃度濃度：Ａ＝９９．５％、Ｂ＝９６％
、Ｃ＝９０％、０２８６％、Ｅ＝７８％、Ｆ＝７１％）
。
バッファー、０．０５％ＢＳＡ、０．０２％ナトリウム
アジド（ｐＨ＝７．４）中で０．０３６％の濃度に希釈
した。ラテックスを、種々の既知Ａｏ濃度を有する変性
血液試料と混合した。５５０％ｍにおける吸光度の変化
を室温において長時間にわたって記録し、図１に示した
（ヘモグロビン濃度濃度：Ａ＝９９．５％、Ｂ＝９６％
、Ｃ＝９０％、０２８６％、Ｅ＝７８％、Ｆ＝７１％）
。
Ｉｌ、 Ｈ＝９．０
５０ｍＭ−グリシン、８０ｍＭ−塩化ナトリウム、０．
０５％−ＢＳＡ、０．０２％ナトリウムアジド（ｐＨ＝
９．０）中で０．０５％に希釈したＢＳＡ被覆ラテック
スを用いて実験を繰り返した。どの血液試料を加えても
凝集は観察されなかった。
０５％−ＢＳＡ、０．０２％ナトリウムアジド（ｐＨ＝
９．０）中で０．０５％に希釈したＢＳＡ被覆ラテック
スを用いて実験を繰り返した。どの血液試料を加えても
凝集は観察されなかった。
濃縮吸着ラテックスを、ＢＳＡ−ｐｆｏ、０５％及びナ
トリウムアジド０．１％を含む２００ｍＭ−グリシンバ
ッファーを用いて適当な濃度に希釈した。濃度４％のマ
ンニトールもバッファー中に存在させてよい、希釈後、
吸着ラテックス溶液を簡単に音波処理した（５〜１０秒
）。
トリウムアジド０．１％を含む２００ｍＭ−グリシンバ
ッファーを用いて適当な濃度に希釈した。濃度４％のマ
ンニトールもバッファー中に存在させてよい、希釈後、
吸着ラテックス溶液を簡単に音波処理した（５〜１０秒
）。
鼓１週
凝集試薬の作用溶液を１．０ｍｇ／−保存水溶液から調
製した。保存溶液を、ＢＳＡ−ｐｆｏ、１％及びナトリ
ウムアジド０．１％を含有する２０ｍＭ−ホスフェート
バッファー（ｐＨ６）を用いて希釈することによって１
０μｇ／−溶液を調製した。
製した。保存溶液を、ＢＳＡ−ｐｆｏ、１％及びナトリ
ウムアジド０．１％を含有する２０ｍＭ−ホスフェート
バッファー（ｐＨ６）を用いて希釈することによって１
０μｇ／−溶液を調製した。
血液をベースとした槽゛ｉ ＋ び臨 試゛コ血液をベ
ースとした標準試料及び臨床試料は使用前に変性されな
ければならない、試験において用いるために、血液試料
を、Ａｍｅｓ Ａ１１ｑｕｏｔ混合器（Ｍｉｌｅｓ Ｉ
ｎｃ、、 Ｅｌｋｈａｒｔ、 ＩＮ、 ＵＳＡ、ｌ の
ような振盪混合器によって良く混合した０次にこれらの
試料を、変性剤／酸化体（３Ｍ−ＮＨ，ＳＣＮ、２ｍｇ
／ｄ−Ｋ ｘ Ｆ ｅ （ＣＮｌａ、１０ｍＭ−Ｔｒｉ
ｓ、ｐＨ７，５）で１＝３１に希釈した。変性剤中にフ
ェリシアニドが存在することによって、希釈試料又は標
準試料をヘモグロビン濃度の測定に用いることが可能に
なった。試料を少なくとも１５秒間放置した後、ＯＰＴ
ＩＭＡＴＥ”″″装置Ｍｉｌｅｓ Ｉｎｃ。
ースとした標準試料及び臨床試料は使用前に変性されな
ければならない、試験において用いるために、血液試料
を、Ａｍｅｓ Ａ１１ｑｕｏｔ混合器（Ｍｉｌｅｓ Ｉ
ｎｃ、、 Ｅｌｋｈａｒｔ、 ＩＮ、 ＵＳＡ、ｌ の
ような振盪混合器によって良く混合した０次にこれらの
試料を、変性剤／酸化体（３Ｍ−ＮＨ，ＳＣＮ、２ｍｇ
／ｄ−Ｋ ｘ Ｆ ｅ （ＣＮｌａ、１０ｍＭ−Ｔｒｉ
ｓ、ｐＨ７，５）で１＝３１に希釈した。変性剤中にフ
ェリシアニドが存在することによって、希釈試料又は標
準試料をヘモグロビン濃度の測定に用いることが可能に
なった。試料を少なくとも１５秒間放置した後、ＯＰＴ
ＩＭＡＴＥ”″″装置Ｍｉｌｅｓ Ｉｎｃ。
Ｅｌｋｈａｒｔ、 ＩＮ、 ＵＳＡ、］上で試験し、蛋
白を完全に変性しヘムを酸化させた。
白を完全に変性しヘムを酸化させた。
Ｂ、ＨｂＡｌｃに関 る七濁試
ＨｂＡｌｃを測定するためにＯＰＴＩＭＡＴＥ装置に関
する三種の異なる手順を用いた。二つは終点試験であり
、そのうちの一方は凝集剤溶液を手動で加える工程を必
要とするものであり、もう一方は試験を完全に自動化し
たものである。第３の試験方法は速度試験である。以下
の記載によって三種の試験の概略を説明する。
する三種の異なる手順を用いた。二つは終点試験であり
、そのうちの一方は凝集剤溶液を手動で加える工程を必
要とするものであり、もう一方は試験を完全に自動化し
たものである。第３の試験方法は速度試験である。以下
の記載によって三種の試験の概略を説明する。
凝 斉を で加える、点訳
１ 、 Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３７（７）プログラム
テストヲ用イて、以下の試験パラメーターをＵＳＥＲＣ
ＨＥＭＩＳＴＲＹＮｏ、２５のようにプログラムした。
テストヲ用イて、以下の試験パラメーターをＵＳＥＲＣ
ＨＥＭＩＳＴＲＹＮｏ、２５のようにプログラムした。
単位：無し
試験の種類；終点試験
少数位：２
分配法：Ａ
遅延時間Ａ： １２００秒（試薬を分配してから吸光度
を読取るまでの時間） 平衡時間：６秒（吸光度を読取る前に試料をキュベツト
内に保持する時間） 読取時間：５秒（データを採取する時間、吸光度は１秒
間に７．７回読取る） キエペット温度＝２５℃ 標準濃度：無し ファクター：１０００（結果にこのファクターをかけて
ミリ吸光度単位に変換し た） 低Ｉ／ＡｆＡｂｓ）：２．０００ 高Ｉ／Ａ（Ａｂｓｌ：２．０００ （吸光度の下限及び
上限の両方を２．００に設定す ることによって、ＯＰＴＩＭＡＴＥに各試料に関する実
際の吸光度を打 ち出させる） 低標準：無し 高標準値：無し 吸光フィルター：５４０ｎｍ 移動温度二室温 試料量：１０１１ｊ！ 試薬量：０．５ｍＮ ２、 試験を開始する前に、ピペッタ−／希釈器に１０
０μ試料シリンジ及び１．〇−試薬シリンジが装着され
ていることを確認した。ビベツクー／希釈器のタレット
を、試料シリンジに関しては１０％（ｌ Ｏｗｌ、）、
試薬シリンジに関しては５０％（０，５−）に設定した
。
を読取るまでの時間） 平衡時間：６秒（吸光度を読取る前に試料をキュベツト
内に保持する時間） 読取時間：５秒（データを採取する時間、吸光度は１秒
間に７．７回読取る） キエペット温度＝２５℃ 標準濃度：無し ファクター：１０００（結果にこのファクターをかけて
ミリ吸光度単位に変換し た） 低Ｉ／ＡｆＡｂｓ）：２．０００ 高Ｉ／Ａ（Ａｂｓｌ：２．０００ （吸光度の下限及び
上限の両方を２．００に設定す ることによって、ＯＰＴＩＭＡＴＥに各試料に関する実
際の吸光度を打 ち出させる） 低標準：無し 高標準値：無し 吸光フィルター：５４０ｎｍ 移動温度二室温 試料量：１０１１ｊ！ 試薬量：０．５ｍＮ ２、 試験を開始する前に、ピペッタ−／希釈器に１０
０μ試料シリンジ及び１．〇−試薬シリンジが装着され
ていることを確認した。ビベツクー／希釈器のタレット
を、試料シリンジに関しては１０％（ｌ Ｏｗｌ、）、
試薬シリンジに関しては５０％（０，５−）に設定した
。
３、 少なくとも５０４の試料をＯＰＴＩＭＡＴＥ試料
カップ中にピペットで加えた。
カップ中にピペットで加えた。
４、 ピペッタ−／希釈器に吸着ラテックス溶液を充
填した。
填した。
５、 Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ Ｒｅｐｅａｔｅｒ Ｐｉ
ｐｅｔｔｅ （容量１．２５１ｎｌのチップ、１に設定
）を用いて凝集溶液２５Ｂｉｔ’をＯＰＴＩＭＡＴＥ反
応カップ内に反応カップレた。ブランク試験のカップＮ
ｏ、６０及び濁り反応が起こっていない他の全てのカッ
プを取り外した。
ｐｅｔｔｅ （容量１．２５１ｎｌのチップ、１に設定
）を用いて凝集溶液２５Ｂｉｔ’をＯＰＴＩＭＡＴＥ反
応カップ内に反応カップレた。ブランク試験のカップＮ
ｏ、６０及び濁り反応が起こっていない他の全てのカッ
プを取り外した。
これらのカップ内に、バッファー（２０ｍＭ−ホスフェ
ート、ｐＨ６，０，１％ＢＳＡ−ｐｆ、０．１％ナトリ
ウムアジド）２５ＩＬｌをピペットで加えた。
ート、ｐＨ６，０，１％ＢＳＡ−ｐｆ、０．１％ナトリ
ウムアジド）２５ＩＬｌをピペットで加えた。
６、 記載されている全ての指示にしたかって、Ｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ Ｎｏ、２５−ｔｌｓＥＲ（：ＨＥＭＩＳ
ＴＲＹ Ｎｏ、２５を開始した。次に、ＯＰＴＩＭＡＴ
Ｅによって自動的に、試料及び吸着ラテックスを反応カ
ップ内にとベット滴下し１分配し、２０分後の吸光度の
読みを測定した。
ｍｉｓｔｒｙ Ｎｏ、２５−ｔｌｓＥＲ（：ＨＥＭＩＳ
ＴＲＹ Ｎｏ、２５を開始した。次に、ＯＰＴＩＭＡＴ
Ｅによって自動的に、試料及び吸着ラテックスを反応カ
ップ内にとベット滴下し１分配し、２０分後の吸光度の
読みを測定した。
１集斉を ・に？５１、口 る 申訳１、 ＯＰＴ
ＩＭＡＴＥ装置に、１．０−のシリンジを備えたＧ１１
ｆｏｒｄ Ａｕｔｏｍａｔｉｃ Ｄｉｓｐｅｎｓｅｒを
装着した。連絡ケーブルをＯＰＴＩＭＡ：ＴＥの後部の
Ｊ４ポートに連結した。この外部分配器は、ｆａｌユー
ティリティー１５、セキュリティーコード９８０４５６
を入力する：（ｂ）ユーティリティー５０、チエツク＝
０、オプション２０を入力する：この分配器のタレット
を５０％（０，５ｄ）に設定することによって使用可能
となる。
ＩＭＡＴＥ装置に、１．０−のシリンジを備えたＧ１１
ｆｏｒｄ Ａｕｔｏｍａｔｉｃ Ｄｉｓｐｅｎｓｅｒを
装着した。連絡ケーブルをＯＰＴＩＭＡ：ＴＥの後部の
Ｊ４ポートに連結した。この外部分配器は、ｆａｌユー
ティリティー１５、セキュリティーコード９８０４５６
を入力する：（ｂ）ユーティリティー５０、チエツク＝
０、オプション２０を入力する：この分配器のタレット
を５０％（０，５ｄ）に設定することによって使用可能
となる。
２ 、 Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３７−ｐｒｏｇｕｒａ
ｍ Ｎｅｗ Ｔｅ５ｔを用いて、以下の試験パラメータ
ーをＵＳＥＲＣＨＥＭｌ、５ＴＲＹ２４のようにプログ
ラムした。
ｍ Ｎｅｗ Ｔｅ５ｔを用いて、以下の試験パラメータ
ーをＵＳＥＲＣＨＥＭｌ、５ＴＲＹ２４のようにプログ
ラムした。
単位：無し
試験の種類：終点試験
少数位：２
分配法：Ａ及びＢ
塔からの分配Ｂ；有
分配Ａから分配Ｂまでの時間：５秒
遅延時間Ａ：１２００秒
平衡時間＝６秒
読取時間＝５秒
キュベツト温度＝２５℃
標準濃度：無し
ファクター：１Ｏ００
低Ｉ／Ａ （Ａｂｓｌ： ２．０００
高Ｉ／Ａ （Ａｂｓｌ： ２．０００
低標準：無し
高標準値：無し
吸光フィルター：５４０ｎｍ
移動温度：室温
試料量：１０μ
試薬量：０．１ｍ／
３、 試験を開始する前に、ビベツクー／希釈器に１０
０４試料シリンジ及び２５０ｕ試薬シリンジが装着され
ていることを確認した。ピペッタ−／希釈器のタレット
を、試料シリンジに関しては１０％（ｌｏｄ）、試薬シ
リンジに関しては１０％（２５ｄ）に設定した。イムノ
アッセイプローブがピペッタ−／希釈器上で用いられて
いることも確認した。
０４試料シリンジ及び２５０ｕ試薬シリンジが装着され
ていることを確認した。ピペッタ−／希釈器のタレット
を、試料シリンジに関しては１０％（ｌｏｄ）、試薬シ
リンジに関しては１０％（２５ｄ）に設定した。イムノ
アッセイプローブがピペッタ−／希釈器上で用いられて
いることも確認した。
４、 少なくとも５０ｇ／の試料をＯＰＴＩＭＡＴＥ試
料力・ツブ中にピペットで加えた。
料力・ツブ中にピペットで加えた。
５、 ビベツクー／希釈器に凝集剤溶液を充填した。
６、 外部分配器に吸着ラテックス溶液を充填した。
７ 、 Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｎｏ、 ２４−ＵＳＥ
Ｉ’ｌ ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ Ｎｏ、 ２４を開始し、
全ての指示に従った。次に、ＯＰＴＩＭＡＴＥによって
自動的に、試料及び凝集剤を反応カップ内にピペット滴
下し、分配し、５秒後に吸着ラテックスを加えた。２０
分後に反応の吸光度の読みを測定した。
Ｉ’ｌ ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ Ｎｏ、 ２４を開始し、
全ての指示に従った。次に、ＯＰＴＩＭＡＴＥによって
自動的に、試料及び凝集剤を反応カップ内にピペット滴
下し、分配し、５秒後に吸着ラテックスを加えた。２０
分後に反応の吸光度の読みを測定した。
１度拭眉
１、 ＯＰＴＩＭＡＴＥ装置に、１．０−のシリンジ
を備えたＧ１１ｆｏｒｄ Ａｕｔｏｍａｔｉｃ Ｄｉｓ
ｐｅｎｓｅｒを装着した。連絡ケーブルをＯＰＴＩＭＡ
ＴＥの後部のＪ４ボートに連結した。この外部分配器は
、（ａｌユーティリティー１５、セキュリティーコード
９８０４５６を入力する＝（ｂ）ユーティリティー５０
、チエツク＝０、オプション２０を入力する：この分配
器のタレットを５０％（０，５１ｎ！りに設定すること
によって使用可能となる。
を備えたＧ１１ｆｏｒｄ Ａｕｔｏｍａｔｉｃ Ｄｉｓ
ｐｅｎｓｅｒを装着した。連絡ケーブルをＯＰＴＩＭＡ
ＴＥの後部のＪ４ボートに連結した。この外部分配器は
、（ａｌユーティリティー１５、セキュリティーコード
９８０４５６を入力する＝（ｂ）ユーティリティー５０
、チエツク＝０、オプション２０を入力する：この分配
器のタレットを５０％（０，５１ｎ！りに設定すること
によって使用可能となる。
２ 、 Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３７−ｐｒｏｇｕｒａ
ｍ Ｎｅｗ Ｔｅ５ｔを用いて、以下の試験パラメータ
ーをＵＳＥＲＣＨＥＭＩＳＴＲＹ２３のようにプログラ
ムした。
ｍ Ｎｅｗ Ｔｅ５ｔを用いて、以下の試験パラメータ
ーをＵＳＥＲＣＨＥＭＩＳＴＲＹ２３のようにプログラ
ムした。
単位：無し
試験の種類：動的酵素
少数位：２
分配法：Ａ及びＢ
塔からの分配Ｂ：有
分配Ａから分配Ｂまでの時間；５秒
遅延時間Ａ：２０秒
平衡時間＝５秒
読取時間＝３０秒
キュベツト温度：３０℃
標準濃度：無し
ファクター＝１０００
低Ｉ／Ａ （Ａｂｓｌ： ２．０００
高Ｉ／Ａ ｆＡｂｓ）： ２．０００
吸光フィルター：５４０ｎｍ
移動温度・３０℃
試料量：１０ｇｆ
試薬量：０．１ｍｉ’
３、 試験を開始する前に、ピペッタ−／希釈器に１０
０４試料シリンジ及び２５０ｐＪｌ試薬シリンジが装着
されていることを確認した。ピペッタ−／希釈器のタレ
ットを、試料シリンジに関しては１０％（ｌｏＮり、試
薬シリンジに関しては１０％（２５ＩＬｌ）に設定した
。イムノアッセイプローブがピペッタ−／希釈器上で用
いられていることも確認した。
０４試料シリンジ及び２５０ｐＪｌ試薬シリンジが装着
されていることを確認した。ピペッタ−／希釈器のタレ
ットを、試料シリンジに関しては１０％（ｌｏＮり、試
薬シリンジに関しては１０％（２５ＩＬｌ）に設定した
。イムノアッセイプローブがピペッタ−／希釈器上で用
いられていることも確認した。
４、 少なくとも５０μの試料をＯＰＴＩＭＡＴＥ試料
カップ中にピペットで加えた。
カップ中にピペットで加えた。
５、 ピペッタ−／希釈器に凝集剤溶液を充填した。
６、 外部分配器に吸着ラテックス溶液を充填した。
７ 、 Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｎｏ、 ２３−ＵＳＥ
ＲＣＨＥＭＩＳＴＲＹ Ｎｏ、２３を開始し、全ての指
示に従った。次に、ＯＰＴＩＭＡＴＥによって自動的に
、試料及び凝集剤を反応カップ内にピペット滴下し、分
配し、５秒後に吸着ラテックスを加えた。１４秒後にこ
の反応の吸光度の読みを測定した。吸光度は全部で３０
秒間読み取った。 ＯＰＴＩＭＡＴＥによって、採取さ
れたデータ及び１分あたりの吸光度の変化の見地から得
られるデータから綿状回帰線が測定された。
ＲＣＨＥＭＩＳＴＲＹ Ｎｏ、２３を開始し、全ての指
示に従った。次に、ＯＰＴＩＭＡＴＥによって自動的に
、試料及び凝集剤を反応カップ内にピペット滴下し、分
配し、５秒後に吸着ラテックスを加えた。１４秒後にこ
の反応の吸光度の読みを測定した。吸光度は全部で３０
秒間読み取った。 ＯＰＴＩＭＡＴＥによって、採取さ
れたデータ及び１分あたりの吸光度の変化の見地から得
られるデータから綿状回帰線が測定された。
さｉ之旦旦之１
全ての血液試料に関して、試料中のＨｂＡｌｃのパーセ
ントを算出するために試料中のヘモグロビン濃度を測定
しなければならない。ＨｂＡｌｃの測定に用いたのと同
一の変性試料を、以下のプロトコールｆｐｒｏｔｏｃｏ
ｌｌを用いたヘモグロビン測定に用いた。
ントを算出するために試料中のヘモグロビン濃度を測定
しなければならない。ＨｂＡｌｃの測定に用いたのと同
一の変性試料を、以下のプロトコールｆｐｒｏｔｏｃｏ
ｌｌを用いたヘモグロビン測定に用いた。
１ 、 Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３７のプログラムテス
トを用いて、以下の試験パラメーターをＵＳＥＲＣＨＥ
ＭＩＳＴＲＹＮｏ、 ２６のようにプログラムした。
トを用いて、以下の試験パラメーターをＵＳＥＲＣＨＥ
ＭＩＳＴＲＹＮｏ、 ２６のようにプログラムした。
単位：無し
試験の種類：終点試験
少数位＝２
分配法：Ａ
遅延時間Ａ：３００秒
平衡時間二６秒
読取時間＝５秒
キュベツト温度：２５℃
標準濃度：無し
ファクター：１０００
低Ｉ／Ａ ｆＡｂｓｌ： ２．０００
高Ｉ／Ａ （Ａｂｓｌ： ２．０００
低標準；無し
高標準値：無し
吸光フィルター：５４０ｎｍ
移動温度二室温
試料量ニア０４
試薬量：０．５Ｗｄ！
２、 試験を開始する前に、ビペックー／希釈器に１０
０μ試料シリンジ及び１．〇−試薬シリンジが装着され
ていることを確認した。ビペックー／希釈器のタレット
を、試料シリンジに関しては７０％（７０ｄ）、試薬シ
リンジに関しては５０％（０，５ｍ／）に設定した。
０μ試料シリンジ及び１．〇−試薬シリンジが装着され
ていることを確認した。ビペックー／希釈器のタレット
を、試料シリンジに関しては７０％（７０ｄ）、試薬シ
リンジに関しては５０％（０，５ｍ／）に設定した。
３、 少なくとも１２０４の試料をＯＰＴＩＭＡＴＥ試
料カップ中にピペットで加えた。
料カップ中にピペットで加えた。
４ ピペッタ−／希釈器に、２００ｍＭ−グリシン、
０．０５％ＢＳＡ−ｐｆ及び０．１％ナトリウムアジド
を含むｐＨ９のバッファーを充填した。
０．０５％ＢＳＡ−ｐｆ及び０．１％ナトリウムアジド
を含むｐＨ９のバッファーを充填した。
５ 、 Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｎｏ、２６−ＵＳＥＲ
ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ Ｎｏ、２６を開始し、全ての指示
に従った。次に、ＯＰＴＩＭＡＴＥによって自動的に、
試料及びバッファーを反応カップ内にとベット滴下し、
分配し、５分後の吸光度の読みを測定した。
ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ Ｎｏ、２６を開始し、全ての指示
に従った。次に、ＯＰＴＩＭＡＴＥによって自動的に、
試料及びバッファーを反応カップ内にとベット滴下し、
分配し、５分後の吸光度の読みを測定した。
肚箕
ＯＰＴＩＭＡＴＥによって与えられた情報をＨｂＡｌｃ
（％）の結果に変換するために多数の計算を行なわな（
ではならない。
（％）の結果に変換するために多数の計算を行なわな（
ではならない。
１、 全ての試験実験にラテックスブランク試験（５０
０ｄラテツクス＋３０４バツフアー）を含ませた。この
反応の吸光度を他の全ての結果から減じなければならな
い。
０ｄラテツクス＋３０４バツフアー）を含ませた。この
反応の吸光度を他の全ての結果から減じなければならな
い。
２、 全ての血液試料に関して、反応に対するヘモグロ
ビンの吸光度の寄与を、ＵＳＥＲＣＨＥＭＩＳＴＲＹ２
６から得られた情報を用いて計算した。これから得られ
た吸光度の結果を７で割って、血液１０４の吸光度を計
算した０次に、この値を上記で得られた吸光度の結果か
ら減じた。
ビンの吸光度の寄与を、ＵＳＥＲＣＨＥＭＩＳＴＲＹ２
６から得られた情報を用いて計算した。これから得られ
た吸光度の結果を７で割って、血液１０４の吸光度を計
算した０次に、この値を上記で得られた吸光度の結果か
ら減じた。
３、 標準曲線を算出するために、イムノアッセイＮｏ
、３７−Ｐｒｏｇｒａｍ Ｎｅｗ Ｔｅ５ｔを用いて擬
イムノアッセイをプログラムした。以下のパラメーター
をＵＳＥＲＩＭＭＵＮＯＡＳＳＡＹ Ｎｏ、２７のよう
にプログラムした。
、３７−Ｐｒｏｇｒａｍ Ｎｅｗ Ｔｅ５ｔを用いて擬
イムノアッセイをプログラムした。以下のパラメーター
をＵＳＥＲＩＭＭＵＮＯＡＳＳＡＹ Ｎｏ、２７のよう
にプログラムした。
プロトコール：Ｎｏ、１
較正値：Ｇ１ｃｍペプチド標準試料（単位μＭ−ＨｂＡ
１ｃ）に関して指定され た較正値を入力した。これらは用いた 吸着ラテックスの全部に依存する。他 の全てのパラメーターは重要ではない が、較正値を供給するために入力しな ければならない。
１ｃ）に関して指定され た較正値を入力した。これらは用いた 吸着ラテックスの全部に依存する。他 の全てのパラメーターは重要ではない が、較正値を供給するために入力しな ければならない。
４、 イムノアッセイＮＯ，３３−Ｉｍｍｕｎｏａｓｓ
ａｙＣａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓを用いて４つのパラメー
ター論理標準曲線を作成した。
ａｙＣａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓを用いて４つのパラメー
ター論理標準曲線を作成した。
試験Ｎｏ、 ：Ｎｏ、 ２７
計算式＝１．４パラメータ論理式
Ｇｌｃ−ペプチド標準試料に関する吸光度結果（ラテッ
クスブランク値を減じたもの）を入力した０次に、ＯＰ
ＴＩＭＡＴＥによって、標準曲線を作成し、曲線及び４
つのパラメーターの標準偏差を計算した０式が完成した
ら、全ての試料に関する吸光度（−ラテックスブランク
値、−Ｈｂ分配）を入力することによって未知試料のＨ
ｂＡｌｃを算出した。打ち出された結果がＨｂＡ１ｃ濃
度（μＭ）である。
クスブランク値を減じたもの）を入力した０次に、ＯＰ
ＴＩＭＡＴＥによって、標準曲線を作成し、曲線及び４
つのパラメーターの標準偏差を計算した０式が完成した
ら、全ての試料に関する吸光度（−ラテックスブランク
値、−Ｈｂ分配）を入力することによって未知試料のＨ
ｂＡｌｃを算出した。打ち出された結果がＨｂＡ１ｃ濃
度（μＭ）である。
５、 各血液試料におけるヘモグロビン濃度を、ＵＳＥ
ＲＣＨＥＭＩＳＴＲＹ Ｎｏ、２６からの情報を用いて
算出した。ヘモグロビン濃度は、まず第１にＧ／ＣＩＩ
の単位で算出され、次にこの情報を用いて存在するヘモ
グロビンβ鎖の濃度（ｍＭ）を測定した。
ＲＣＨＥＭＩＳＴＲＹ Ｎｏ、２６からの情報を用いて
算出した。ヘモグロビン濃度は、まず第１にＧ／ＣＩＩ
の単位で算出され、次にこの情報を用いて存在するヘモ
グロビンβ鎖の濃度（ｍＭ）を測定した。
ｍＭ−βサブユニツト中のヘモグロビン濃度：６、 こ
こで、ＨｂＡｌｃ濃度及びヘモグロビン濃度（μＭ）（
どちらもβサブユニットに関する）が分かり、ＨｂＡｌ
ｃ（％）を測定することが可能になる。
こで、ＨｂＡｌｃ濃度及びヘモグロビン濃度（μＭ）（
どちらもβサブユニットに関する）が分かり、ＨｂＡｌ
ｃ（％）を測定することが可能になる。
１困皿肌ヌ
臨床試料（７１）を地方の臨床研究室から得、これを、
通常のＨｂＡ１ｃアフィニティークロマトグラフィー（
Ｉｓｏｌａｂ、 Ａｋｒｏｎ、 ＯＨ，ＵＳＡ、ｌ に
よって試料を試験した。本発明を用いて、上記のように
して試料を試験した。関係を図３に示す。
通常のＨｂＡ１ｃアフィニティークロマトグラフィー（
Ｉｓｏｌａｂ、 Ａｋｒｏｎ、 ＯＨ，ＵＳＡ、ｌ に
よって試料を試験した。本発明を用いて、上記のように
して試料を試験した。関係を図３に示す。
５、ヘモ ロビンＡｏ試
８０ｍＭ塩化ナトリウム、０．０５％−ＢＳＡ及び０．
０２％ナトリウムアジドを含む５０ｍＭ−ホスフェート
、ｐＨ７，４を用い、上記記載のＡｌｃ （％）に関す
る手順を用いて試料のＡｏ（％）を測定した１代表的な
量応答曲線を図４に示す。
０２％ナトリウムアジドを含む５０ｍＭ−ホスフェート
、ｐＨ７，４を用い、上記記載のＡｌｃ （％）に関す
る手順を用いて試料のＡｏ（％）を測定した１代表的な
量応答曲線を図４に示す。
上記に本発明の詳細な説明し例示した。明らかに、本発
明の精神及び範囲から逸脱することな〈発明の多くの他
の変更及び修正を行なうことができる。
明の精神及び範囲から逸脱することな〈発明の多くの他
の変更及び修正を行なうことができる。
図１は、ラテックス粒子の凝集に対する、ヘモグロビン
Ａｏ（天然の未変性ヘモグロビン）濃度を変化させるこ
との効果を示すグラフ；図２は、ヘモグロビンＡｏがラ
テックス粒子を凝集させる能力に対するｐＨの効果を示
すグラフ； 図３は、本発明によって得られるＨｂＡ１ｃ試験結果と
、標準アフィニティークロマトグラフィー法によって得
られる結果との関係を示すグラフであり： 図４は、本発明によって得られるヘモグロビンＡＯの量
応答曲線を示すグラフである。 ＡｏＲ害 時間（秒） ＦＩＧ、１ ｐＨ効果 ＨｂＡｌｃ イムノアフセイ Ｑ ５ １０ １５
２０％Ｈｂ Ａｌｃ （対照方法） ＦＩＧ、３ Ｈｂ Ａｏ試験 １４００ １６００ 旧００
２０００Ｈｂ Ａｏ濃度（％Ｍ ） ＦＩＧ、４
Ａｏ（天然の未変性ヘモグロビン）濃度を変化させるこ
との効果を示すグラフ；図２は、ヘモグロビンＡｏがラ
テックス粒子を凝集させる能力に対するｐＨの効果を示
すグラフ； 図３は、本発明によって得られるＨｂＡ１ｃ試験結果と
、標準アフィニティークロマトグラフィー法によって得
られる結果との関係を示すグラフであり： 図４は、本発明によって得られるヘモグロビンＡＯの量
応答曲線を示すグラフである。 ＡｏＲ害 時間（秒） ＦＩＧ、１ ｐＨ効果 ＨｂＡｌｃ イムノアフセイ Ｑ ５ １０ １５
２０％Ｈｂ Ａｌｃ （対照方法） ＦＩＧ、３ Ｈｂ Ａｏ試験 １４００ １６００ 旧００
２０００Ｈｂ Ａｏ濃度（％Ｍ ） ＦＩＧ、４
Claims (31)
- （１）ラテックス凝集イムノアッセイによって血液試料
中の分析対象物を測定するための分析方法において、 （ａ）血液試料を、水懸濁性ラテックス粒子に結合した
抗分析対象物抗体又はそのフラグメントからなる多価ラ
テックス抗体試薬、並びに、分析対象物が単価である場
合には、更に、抗分析対象物抗体又はそのフラグメント
のための多数のエピトピックな（ｅｐｉｔｏｐｉｃ）結
合部位を含む凝集試薬と配合することによって水性反応
混合物を生成させ： （ｂ）水性反応混合物中において得られる凝集を血液試
料中の分析対象物の関数として測定することを特徴とし
、 その改良点が、ｐＨ約８．５以上を有する水性反応混合
物を生成させ、それによって、血液試料中のヘモグロビ
ンの存在によるラテックス試薬の非特異性凝集が起こる
可能性を実質的に排除することを含む方法。 - （２）該ラテックス粒子が、約７以下のｐＨを有する水
溶液中に懸濁した場合に、有効な正味の表面陰電荷を有
する請求項１記載の方法。 - （３）該ラテックス粒子がポリスチレンである請求項１
記載の方法。 - （４）水性反応混合物が、約８．５からそのｐＨにおい
て分析対象物とラテックス試薬との間の免疫反応性が実
質的に減少するｐＨまでの間のｐＨを有するように生成
される請求項１記載の方法。 - （５）水性反応混合物が、約８．７５〜約１０の間のｐ
Ｈを有するように生成される請求項１記載の方法。 - （６）水性反応混合物が、約９のｐＨを有するように生
成される請求項１記載の方法。 - （７）粒子凝集抑制イムノアッセイによって血液溶解産
物を含む試験試薬中のヘモグロビンＡｌｃを測定する分
析方法であって、 （ａ）血液試料、並びに、（ｉ）水懸濁性ポリスチレン
ラテックス粒子に結合したヘモグロビンＡｌｃに対する
抗体又はそのフラグメントを含む多価抗体試薬、及び（
ｉｉ）ヘモグロビンＡｌｃのグリケート化ペプチド（ｇ
ｌｙｃａｔｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓ）配列に対応する多数
のグリコペプチドを含む凝集試薬を含む試験試薬を含む
水性反応混合物を約８．５以上のｐＨを有するように生
成する工程を含む方法。 - （８）反応混合物のｐＨが約１０未満である請求項７記
載の方法。 - （９）反応混合物のｐＨが約８．７５〜約 ９．５である請求項８記載の方法。
- （１０）反応混合物のｐＨが約９である請求項９記載の
方法。 - （１１）血液試料をヘモグロビン変性物によって予め処
理し、抗体試薬が変性ヘモグロビンＡｌｃに特異的に結
合するモノクローナル抗体又はそのフラグメントを含ん
でいる請求項７記載の方法。 - （１２）（ｉ）水懸濁性ラテックス粒子に結合している
抗分析対象物抗体又はそのフラグメントを含む多価ラテ
ックス抗体試薬； （ｉｉ）分析対象物が単価である場合には、抗分析対象
物抗体又はそのフラグメントのための多数のエピトピッ
ク結合部位を含む凝集試薬；及び、 （ｉｉｉ）試験系成分と血液試料とを配合することによ
って生成される反応混合物のｐＨを約８．５以上に保持
しうるバッファー； を含む、ラテックス凝集イムノアッセイによって血液試
料中の分析対象物を測定するための試験系。 - （１３）該ラテックス粒子が、約７以下のｐＨを有する
水溶液中に懸濁した場合に、有効な正味の表面陰電荷を
有する請求項１２記載の試験系。 - （１４）該ラテックス粒子がポリスチレンである請求項
１２記載の試験系。 - （１５）水性反応混合物が、約８．５からそのｐＨにお
いて分析対象物とラテックス試薬との間の免疫反応性が
実質的に減少するｐＨまでの間のｐＨを有するように生
成される請求項１２記載の試験系。 - （１６）水性反応混合物が、約８．７５〜約１０の間の
ｐＨを有するように生成される請求項１２記載の試験系
。 - （１７）水性反応混合物が、約９のｐＨを有するように
生成される請求項１２記載の試験系。 - （１８）分析対象物がヘモグロビンＡｌｃであり、凝集
試薬がヘモグロビンＡｌｃのグリケート化ペプチド配列
に対応する多数のグリケート化ペプチドを含む請求項１
２記載の試験系。 - （１９）ラテックス粒子がポリスチレンである請求項１
８記載の試験系。 - （２０）バッファーが、反応混合物のｐＨを約８．７５
〜約１０に保持しうるものである請求項１９記載の試験
系。 - （２１）バッファーが、反応混合物のｐＨを約９に保持
しうるものである請求項２０記載の試験系。 - （２２）ヘモグロビン変性物を更に含み、抗体試薬が、
変性ヘモグロビンＡｌｃに特異的に結合するモノクロー
ナル抗体又はそのフラグメントを含む請求項１９記載の
試験系。 - （２３）（ａ）血液試料及び懸濁化ラテックス粒子を含
む水性反応混合物を生成させ、該反応混合物のｐＨを約
８以下に保持し、 （ｂ）該ラテックスの凝集を血液試料中の ヘモグロビンＡｏの関数として測定することを含む、血
液試料中のヘモグロビンＡｏを測定するための分析方法
。 - （２４）該ラテックス粒子が、約７以下のｐＨを有する
水溶液中に懸濁した場合に、有効な正味の表面陰電荷を
有する請求項２３記載の方法。 - （２５）該ラテックス粒子がポリスチレンである請求項
２４記載の方法。 - （２６）反応混合物のｐＨが、約８から、そのｐＨにお
いてヘモグロビンＡｏがポリスチレンラテックス粒子を
凝集させる能力が実質的に減少するｐＨまでの間のｐＨ
に保持される請求項２３記載の方法。 - （２７）反応混合物のｐＨが、約８〜約４に保持される
請求項２３記載の方法。 - （２８）（ｉ）ラテックス粒子、及び（ｉｉ）ラテック
ス粒子及び血液試料を含む水性反応混合物のｐＨを約８
以下に保持しうるバッファーを含む、血液試料中のヘモ
グロビンＡｏ測定するための試験系。 - （２９）該ラテックス粒子が、約７以下のｐＨを有する
水溶液中に懸濁した場合に、有効な正味の表面陰電荷を
有する請求項２８記載の試験系。 - （３０）該ラテックス粒子がポリスチレンである請求項
２９記載の試験系。 - （３１）バッファーが、反応混合物のｐＨを約８〜約４
に保持しうるものである請求項２８記載の試験系。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US118469 | 1987-11-09 | ||
| US07/118,469 US4847209A (en) | 1987-11-09 | 1987-11-09 | Latex agglutination immunoassay in the presence of hemoglobin |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01150857A true JPH01150857A (ja) | 1989-06-13 |
| JP2607385B2 JP2607385B2 (ja) | 1997-05-07 |
Family
ID=22378796
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63280551A Expired - Fee Related JP2607385B2 (ja) | 1987-11-09 | 1988-11-08 | ヘモグロビンの存在下におけるラテックス凝集イムノアッセイ及び試薬キット |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4847209A (ja) |
| EP (1) | EP0315866B1 (ja) |
| JP (1) | JP2607385B2 (ja) |
| AT (1) | ATE93323T1 (ja) |
| AU (1) | AU608910B2 (ja) |
| CA (1) | CA1332043C (ja) |
| DE (1) | DE3883351T2 (ja) |
| DK (1) | DK174350B1 (ja) |
| ES (1) | ES2058212T3 (ja) |
| IE (1) | IE61300B1 (ja) |
| IL (1) | IL87588A (ja) |
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