JPH01132390A - 新規化合物ｗｆ２０１５ａおよびｂ、それらの製造法ならびにそれらを含有する組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野コ この発明は、新規化合物ＷＦ２０１５ＡおよびＢに関す
るものである。より詳しくは、この発明は、免疫抑制活
性および抗腫瘍活性を有する新規化合物ＷＦ２０１５Ａ
およびＢ１　スコレコバシデイウム（Ｓｃｏｌｅｃｏｂ
ａｓｉｄｉｕｍ　）属に属するＷＦ２０１５Ａおよび／
またはＢ生産菌を栄養培地中で培養することによるＷＦ
２０１５ＡおよびＢの製造ならびにそれらを含有する医
薬組成物に関するものである。

［発明の開示］ 後記実施例で得られるＷＦ２０１５ＡおよびＢは下記の
理化学的性質を有する： （１〉讐Ｆ２０１５Ａ ａ）分子量 ４１０　　［ＦＡＢ−ＭＳ　　：　　ｍ／ｚ　　４１１
　　（Ｍ＋Ｈ）コｂ）元素分析 Ｃ６４，５５ｉ　Ｈ８，０６；　０２７．３９　（差と
Ｉ、−Ｃ算出）Ｃ）比旋光度 ［６１ｇ３　＝−５２°（Ｃ＝１．０．　ＣＨ３０Ｈ）
ｄ）　ＵＶ吸収スペクトル 末端吸収（ＣＨＣｌ３中） ｅ）　ＩＲ吸収スペクトル νＣＨＣｌ３　：　３４５０．２９６０．２９２０．１
７１０．１６５０゜ａＸ １４４０、１３７０．１３００．１２６０．１２００゜
１１７０、１１２０．１１００．１０７０．１０５０゜
１０００、９８０．９２０．８８０．８３０　ｃｍ−１
ｆ）　’ＨＮＭＲ吸収スペクトル（ＣＤＣＩ　）Ｅ　　
：　６．９５　（ＬＨ，ｄｄ、Ｊ＝１５．５および４．
５Ｈｚ）。

６．２０　（ＬＨ，ｄｄ、Ｊ＝１５．５および２）！ｚ
）。

５．７０　（ＩＨ，広いＳ）。

５．２０　（ＩＨ，広いｔ、Ｊ＝７Ｈｚ）。

４．３１　　（ＬＨ，ｍ）。

３．９０　　（ＩＨ，ｍ＞。

３．６８　（ＬＨ，ｄｄ、Ｊ＝１１および３Ｈｚ）。

３．４４　（３Ｈ，ｓ）。

２．９８　（ＬＨ，ｄ、Ｊ＝４．２Ｈｚ）。

２．６２　（１）１．ｄｄ、Ｊ＝６．５および６Ｈｚ　
）　。

２．５６　（ＬＨ，ｄ、Ｊ＝４．２Ｈｚ＞。

２．３６　　（１）１．ｍ＞。

２．１６　（ＬＨ，ｍ）。

２．１０　（ＩＨ，ｍ＞。

２．００　（ＩＨ，ｍ）。

１．９８　（ＬＨ，ｄ、Ｊ＝１１Ｈｚ）。

１．８７　　（ＬＨ，ｍ）。

１．７４　　（３Ｈ，ｄ、Ｊ＝ＩＨｚ）。

１．６６　（３Ｈ，ｄ、Ｊ＝ＩＨｚ＞。

１．２１　　（３）１．ｓ）。

１．１４　　（３Ｈ，ｄ、Ｊ＝６．５Ｈｚ＞。

１．０７　　（ＩＨ，ｍ＞。

ｇ＞　１３ＣＮＭＲ吸収スペクトル（ＣＤＣ１３）Ｓ　
　’　　１６５．８　（ｓ）。

１４６．６　（ｄ）。

１３５．０　（ｓ）。

１２１．８　　（ｄ）。

１１８．３　（ｄ）。

７９．４　　（ｄ）。

７４．５　（ｄ）。

６９．９　（ｄ）。

６６．３　（ｄ）。

６１．１　　（ｄ）。

５９．４　（Ｓ）。

５８．９　　（ｓ）。

５６．７　（ｑ）。

５０．７　（ｔ）。

４８．２　（ｄ）。

２９．２　（ｔ）。

２７．２　（ｔ）。

２５．６　（Ｑ）。

２５．６　　（ｔ）。

１７．９　（ｑ）。

１７．１　（ｑ）。

１３．７　（ｑ＞。

ｈ〉溶解性 可溶：クロロホルム、メタノ−Ｊ呟アセトン、エタノー
ル 不溶：ｎ−ヘキサン、水 ｉ）呈色反応 陽性：沃素蒸気との反応 陰性：ニンヒドリン反応、モリッレユ反応、塩化第二鉄
反応 ｊ）物質の性質 中性物質 （２）ＷＦ２０１５Ｂ ａ）分子量 ４４７　　［ＦＡＢ−ＭＳ　　：　　ｍ／ｚ　　４６９
　　（Ｍ＋Ｎａ）コｂ〉元素分子 Ｃ５８，０３；　Ｈ７，９４；　Ｃ１７，３１；　０２
６．７２　＜差として算出） １ｌ− Ｃ）比旋光度 ［α］：３−２４８°（Ｃ＝２．０．　Ｃ）ＩＣｌ３）
ｄ）　ｕｖ吸収スペクトル 末端吸収（ＣＨＣｌ３中） ａ）　ＩＲ吸収スペクトル νＣＨＣｌ３　：　３５７０．３４００．２９６０．２
９４０．２８７０゜ａｘ ２８２０、１７１０．１６６０．１５６０．１４６０゜
１４４０、１４００．１３８０．１３６０．１３４０゜
１３００、１２７０．１２２０．１１７０．１１２０゜
１０８０、１０２０．９８０．９６０．９４０゜９１０
　ａｍ−１ ｆ）　’ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、　ＣＤＣｌ５）１；
　：　６．９９　（ＬＨ，ｄｄ、Ｊ＝５および１５．５
Ｈｚ）。

６．２０　（ＬＨ，ｄｄ、Ｊ＝２および１５．５Ｈｚ）
。

ｓ、ｓ５　（ＩＨ，ｍ）。

５．１８　（ＩＨ，ｍ）。

４．３６　（ＩＨ，ｍ）。

３．９８　（ＬＨ，ｄｑ、Ｊ＝４および６Ｈｚ）。

３．８７　（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝１１Ｈｚ＞。

３．４９　　（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝１１Ｈｚ）。

３．３１　　（ＬＨ，ｍ）。

３．３０　（３Ｈ，ｓ）。

２．９７　　（ＬＨ，ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ）。

２．５０−２．４０　（２Ｈ，ｍ）。

２．１７　（ＩＨ，ｎ＋）。

２．０５　（ＩＨ，ｍ＞。

１．９０−１．７５　（２Ｈ，ｍ）。

１．７３　　（３Ｈ，ｓ）。

１．６６　（３Ｈ，ｓ）。

１．４９　（３Ｈ，ｓ）。

１．４０　（１）Ｔ、広いｄ、Ｊ＝１４Ｈｚ）。

１．２０　（３Ｈ，ｄ、Ｊ＝６Ｈｚ） ｇ＞　１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ５）δ　
：　　１６５．７　（Ｓ）。

１４６．３　（ｄ）。

１３４．８　（ｓ）。

１２２．４　（ｄ）。

１１８．２　（ｄ）。

７８．７　　（ｄ）。

７６．２　（ｓ）。

７４．５　（ｄ）。

７０．０　（ｄ）。

６６．１　　（ｄ）。

ａａ、ｏ　（ｓ）。

６２．３　（ｄ）。

５６．７　（ｄ）。

５０．５　　（ｔ）。

４３．３　　（ｄ）。

２９．１　　（ｔ）。

２７．５　（ｔ）。

２５．８　（ｑ）。

２３．５　（ｔ）。

２２．２　（Ｑ）。

１７．９　（Ｑ）。

１７．６　（Ｑ） ｈ）溶解性 １　：　’）ロロホルム、メタノール、アセトン、エタ
ノール 不溶：ｎ−ヘキサン、水 ｉ〉呈色反応 陽性：沃素蒸気との反応 陰性：ニンヒドリン反応、モリッシュ反応、塩化第二鉄
反応 ｊ）物質の性質 中性物質 該ＷＦ２０１５ＡおよびＢは、スコレコバシデイウム・
アレナリウム（Ｓｃｏｌｅｃｏｂａｓｉｄｉｕｍ　ａｒ
ｅｎａｒｉｕｍ）等のごときスコレコバシデイウム属に
属するＷＦ２０１５Ａおよび／またはＢ生産菌を培地に
培養し、得られる培養物からＷＦ２０１５ＡおよびＢを
採取することにより製造できる。スコレコバシデイウム
属に属スルＷＦ２０１５Ａおよび／またはＢ生産菌のう
ち、スコレコバシデイウム・アレナリウムＦ−２０１５
は、本発明者らによって、日本国石川県内灘町の海岸で
採集された腐朽木片から新たに単離されたものである。

スコレコバシデイウム・アレナリウムＦ−２０１５の凍
結乾燥試料が、１９８７年１０月１３日に、ブダペスト
条約に基く国際寄託機関である工業技術院微生物工業技
術研究所に、寄託番号ＦＥＲＭ　ＢＰ−１５２０の下に
寄託されている。

新規化合物ＷＦ２０１５ＡおよびＢの生産が、単に説明
のために示したに過ぎない本明細書記載の特定の微生物
の使用に限定されるものではないことを了解されたい。

本発明は、自然変異体ならびにＸ線、紫外線の照射、Ｎ
−メチル−Ｎ′−二トローＮ−二トロソグアニジン、２
−アミノプリン等による処理のごとき常法によって得る
ことのできる人工変異体を含めて、ＷＦ２０１５Ａおよ
びＢを生産しうる全ての変異株の使用をも包含するもの
である。

スコレコバシデイウム・アレナリウムＦ−２０１５は、
次のような形態上、培養上および生理学的特徴を有する
。

本菌株は各種培地上で速やかに広がり、暗いオリーブ色
でフェルト状の集落を形成する。２ケ月間の培養では、
分生子構造が豊富に形成きれたのに対し、テレオモルフ
は観察されなかった。その分生子形成様式は全発芽型（
）ｌｏｌｏｂｌａｓｔｉｃ）で、分生子は暗色、隔壁を
もち、だ円形であった。また、分生子柄は短く、単純ま
たは分枝し、シンポジアル型に連続して発達する。その
形態的特徴から、Ｆ−２０１５株は不完全菌類スコレコ
バシデイウム属（Ｓｃｏｌｅｃｏｂａｓｉｄｉｕｍ　Ａ
ｂｂｏｔｔ　１９２７）に所属すると思われる。以下に
本菌株の菌学的性質を示す。

各種培地上での培養上の特徴を表１に示した。

コーンミール寒天上の培養では、速やかに広がり、２５
℃、１週間後で直径４．５ｃｍから５．５ｃｍに達した
。集落表面は、平坦で薄く、フェルト状、黄味灰色であ
った。集落裏面は同様であった。分生子構造は観察され
た。麦芽抽出寒天上で集落はコーンミール寒天上と同程
度の速さで広がった。

集落表面は、平坦でフェルト状、セクターが形成され、
暗い緑色とオリーブ茶色であった。集落裏面は暗い緑色
。分生子は豊富に生じた。３．５％食塩含有麦芽抽出寒
天上では、本菌株は他の培地上よりも速やかに広がり、
同一条件下で直径８．　Ｏｃ＋ｎに達する。それらは平
坦で、粉状からフェルト状、セクターを形成せず、オリ
ーブ色から暗いオリーブ色であった。集落裏面は緑味黒
色。分生子構造は豊富に形成された。

形態的特徴は、コーンミール寒天上、２５°Ｃで、２週
間培養して観察した。分生子柄は、車止、薄い茶色、滑
面、隔壁があり、単純または分枝し、直状または屈曲状
、長き（８−）　１２−３５（−７０）μｍ、幅２−４
μｍであった。その分枝の頂端は直径４−５μｍに肥大
し、分生子を形成する歯形状の部分になる。しばしば分
生子柄は、肥大した先端部からさらに伸長し、二次的な
胞子形成分枝になった。肥大部分には、２個から１２個
の分生子が房状に生じた。分生子は茶色、滑面で、倒卵
形か、だ円形から円筒形、基部に明瞭な突起をもち、表
面構造は細かいがはっきりとした粒状である。また、１
から３個（最大５個）の濃い色の隔壁をもち、しばしば
胞子の両端に暗いスポットがあり、長き（９−）　１２
−２５（−３０）μｍ１幅４−７μｍの大きさであった
。栄養菌糸は、隔壁をもち、無色、滑面で分枝する。菌
糸細胞は円筒形、幅２−６μｍ、厚膜胞子は形成きれな
い。

Ｆ−２０１５株は、５℃から３７℃の範囲で生育可能で
、２３℃から２５℃までが最適生育温度であった。

また、ｐＨ４から１０の範囲で生育でき、最適生育ｐＨ
は６から７であった。この菌株は５％までの食塩濃度を
含むとき良い生育がみられるのに対し、２０％の食塩濃
度下まで耐性があった。

スフレコバシブイウム属の分類体系に従えば、Ｆ−２０
１５株はスコレコバシデイウム・アレナリウム・ニコッ
トφエム・ビー・エリス （Ｓｃｏｌｅｃｏｂａｓｉｄｉｕｍ　ａｒｅｎａｒｉｕ
ｍ　（Ｎｉｃｏｔ）Ｍ、Ｂ、Ｅｌｌｉｓ　１９７６）に
類似していた。また上記の特徴は、エリス（１）による
この種の記載と例外なく一致した。よって我々は、生産
菌株をスコレコバシデイウム・アレナリウムと同定し、
スコレコバシデイウム・アレナリウム−Ｆ−２０１５（
Ｓｃｏｌｅｃｏｂａｓｉｄｉｕｍ　ａｒｅｎａｒｉｕｍ
　Ｆ−２０１５）と命名した。

＝１９− 上記の特徴は、２５℃で、７ケ日間培養後に観察した。

色調の記載は、メズエン・ハンドブック・才ブ・カラー
（Ｍｕｔｈｕａｎ　Ｈａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｃｏ１ｏ
ｕｒ（２））をもとにして行った。

（１）エム・ビー・エリス著、モア・デマチアセアス・
ヒホミセーテス、１９４ページ、シー・エム・アイ・キ
ュー、１９７６年、（Ｍ、　Ｂ、　Ｅｌｌｉｓ、　Ｍｏ
ｒｅＤｅｍａｔｉａｃｅｏｕｓ　Ｈｙｐｈｏｍｙｃｅｔ
ｅｓ　ｐ、１９４＋　Ｃ，Ｍ、　Ｉ。

Ｋｅｗ、　１９７６、　） （２）エイ・コーナラップ・エンド・ジェイ・エッチ・
つオンシャー著、メズエン・ハンドブック・才プ・カラ
ー、三版、メズエン、ロンドン、１９８３年、（Ａ、　
Ｋｏｒｎｅｒｕｐ　ａｎｄ　Ｊ、　Ｈ，Ｗａｎｓｃｈｅ
ｒ、　Ｍｅｔｈｕｅｎ）１ａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｃｏ
１ｏｕｒ、　Ｉｈ１ｒｄ　ａｄ、、　Ｍａｔｈｕｅｎ。

Ｌｏｎｄｏｎ、　１９８３．） 一般に、ＷＦ２０１５ＡおよびＢは、同化されうる炭素
源および窒素源を含有する栄養培地中で、好ましくは好
気性条件下に（たとえば振盪培養、深部培養等）、ＷＦ
２０１５Ａおよび／またはＢ生産菌を培養することによ
って生産できる。

培地中の好ましい炭素源は、グルコース、フルクトース
、グリセリン、でんぷんなどの戻水化物である。包含さ
れうる他の炭素源としては、ラクトース、アラビノース
、キシロース、デキストリン、糖蜜などがある。

好ましい窒素源は、酵母エキス、ペプトン、グルテンミ
ール、綿実粉、大豆粉、コーンスチープリカー、乾燥酵
Ｎ等ならびに、アンモニウム塩類（たとえば硝酸アンモ
ニウム、硫酸アンモニウム、りん酸アンモニウム等）、
尿素、アミノ酸等のごとき無機および有機窒素化合物で
ある。

炭素源と窒素源とは、組合せて用いるのが有利であるが
、微量の成長因子類および相当量の無機栄養源を含有す
る低純度材料でも使用に適しているので、それぞれ純粋
な形で使用する必要はない。所望するときは、炭酸カル
シウム、りん酸ナトリウムまたはカリウム、沃化ナトリ
ウムまたはカリウム、マグネシウム塩、塩化コバルト等
のごとき無機塩類を培地に添加してもよい。必要ならば
、とくに培地が顕著に泡立つときは、流動パラフィン、
高級アルコール、植物油、鉱物油、シリコーンなどの消
泡剤を添加すればよい。

大量生産のための条件としては、通気液内培養条件が、
ＷＦ２０１５ＡおよびＢの生産のためには好ましい。少
量生産には、フラスコまたはびん中での振盪培養または
表面培養を用いる。また、生育を大型タンク中で行うと
きには、ＷＦ２０１５ＡおよびＢの生産プロセスにおけ
る成長遅延を避けるために、生産タンクへの接種には、
増殖型（栄養型）の当該微生物を用いるのが好ましい。

従って、比較的少量の培地に該微生物の胞子または菌子
体を接種し、該接種ずみ培地を培養することによってま
ず該微生物の増殖型の接種材料を生産し、つぎに、この
培養した増殖型接種材料を大型タンクに移すのが望まし
い。増殖型接種材料を生産するための培地としては、Ｗ
Ｆ２０１５ＡおよびＢの本格生産のために用いる培地と
実質的に同一かまたはそれとは若干相異する培地を用い
ることができる。

培養混合物の攪拌および通気は種々の方法で実施できる
。攪拌は、プロペラまたは類似の機械的攪拌装置によっ
て、ファーメンタ−の回転または振盪によって、あるい
は培地中に無菌空気を通すことによって行えばよい。通
気は、醗酵混合物中に無菌空気を通すことによって行い
うる。

醗酵は、通常、薬２０〜４０℃の間の温度、好ましくは
２５℃前後で、醗酵の条件および規模によっても異なる
であろうが、５０〜１００時間にわたって行う。

かくして生産されたＷＦ２０１５ＡおよびＢは、抗生物
質などの他の醗酵生産物の回収に通常用いられる慣用手
段によって、培地から回収できる。

一般に、生産されたＷＦ２０１５ＡおよびＢは大部分が
培養濾液中に見出きれ、従って、ＷＦ２０１５Ａおよび
Ｂは、培養液の濾過または遠心分離によって得られた濾
液から、減圧下での濃縮、凍結乾燥、慣用溶媒による抽
出、ｐＨ調節、慣用樹脂（たとえば陰イオンまたは陽イ
オン交換樹脂、非イオン性吸着樹脂）による処理、慣用
吸着剤（たとえば活性戻、珪酸、シリカゲル、セルロー
ス、アルミナ）による処理、晶出、再結晶等のごとき慣
用法によって、単離することができる。

ＷＦ２０１５ＡおよびＢの若干の生物学的性質を、次の
試験例において詳述する。

ＷＦ２０１５ＡおよびＢは、ＷＦ２０１５ＡおよびＢを
含有する粗製物を、実施例で例示するようなシリカゲル
カラムクロマトグラフィーに付すことによって、相互に
分離することができる。

試験例１　（ＷＦ２０１５Ａ）抗腫瘍活性）ＷＦ２０１
５Ａの抗腫瘍活性を、マウスの実験腫瘍系で求めた。

マウス線維肉腫ＭｅｔｈＡを、Ｂａ１ｂ／　ｃ７ウス（
雌性、８週令）の皮内に、接種量１匹当り１×１０５細
胞で、移植した。腫瘍細胞移植から２４時間後に、所定
用量のＷＦ２０１５Ａをマウスに静脈内投与した。

腫瘍移植後の第１．２．３．４および７．８．９．１０
日目に、１日１回ずつ処置した。対照動物には、生理食
塩液を静脈内投与した。すべての実験において、注射量
は０．２ｍＱであった。各実験群には、マウス５匹を用
いた。

投与１４日後の、腫瘍の長さおよび幅のカリパス測定か
ら導かれる腫瘍重量を次式により計算した： 腫瘍重量（ｍｇ）＝　−ｘ　ａ　Ｘ　ｂ２式中のａは長
さ、ｂは幅（ｍｍ）を表わす。

結果を次表に示す。

（平均士標準誤差、ｎ＝５） 基１１例２　（ＷＦ２０１５のインビトロ細胞毒性）こ
の研究では、ヒト肺腺腫Ａ３４９細胞およびマウスリン
パ腫ＥＬ−４細胞を用いた。Ａ３４９細胞を、１０％の
熱不活性化つシ胎仔血清（ＦＢＳ　）、ペニシＩＪ　ン
Ｇ　（６０ｐｇ／　ｍＱ　）およびストレプトマイシン
（ｚｏ＜／ｍａ　）を加えたダルベツコ培地中で単層培
養として増殖させ、トリプシン処理して集めた。

ＥＬ−４細胞は、培養フラスコ内で、１０％ＦＢＳおよ
び上記抗生物質を加えたＲＰＭ　Ｉ培地中で維持した。

培養物から集めた対数期のＡ３４９またはＥＬ−４細胞
を、フラスコ内で、上記適合培地（１０％ＦＢＳおよび
抗生物質を加えたダルベツコ培地またはＲＰＭ　Ｉ培地
）中に、それぞれ２Ｘ１０’細胞／　ｍＱまたは２×１
０５細胞／　ｍＱの濃度で、懸濁させた。プラスチック
製組織培養皿中で、細胞を、所定用量のＷＦ２０１５Ａ
およびＢで処理した。

加温５％次酸ガス雰囲気中３７℃で、Ａ３４９細胞の場
合は１２０時間、ＥＬ−４細胞の場合は４８時間インキ
ュベートしたのち、薬物濃度の対数に対して処理細胞の
生育率（対照に対する百分比）をプロットすることによ
り、細胞生育の５０％阻害に要する物質濃度（ＩＣ５ｏ
値、斥／　ｍＱ　）を求めた。

結果を以下に示す： （１）ＷＦ２０１５Ａ　ＩＣ５ｏ値： Ａ３４９　　３．ＯＸ　１０−’　ｘ／ｍＱＥＬ−４６
，５Ｘ　１０−’　ｘ／ｍＱ（２）ＷＦ２０１５Ｂ　Ｉ
Ｃ５ｏ値： Ａ３４９　　１．４　Ｘ　１０−’　ｑ／＋ｎＱＥＬ−
４５，１Ｘ　　１０　　　慝／賊試験例３　（ＷＦ２０
１５の急性毒性）ＷＦ２０１５ＡまたはＢの生理食塩水
溶液（１００ｍｇ／　ｋｇ）を、１日１回５日間、ＩＣ
Ｒ系マウス５匹（雌性、５週令）に投与した。結果とし
て、マウスの異常な症状は何ら観察されなかった。

試験例４［混合リンパ球反応（ＭＬＲ）の抑制］：ＭＬ
Ｒ試験は９６穴のマイクロタイター・プレートを用いて
行う。

プレートの各式に所定濃度の試験化合物とＣ５７ＢＬ／
　６応答細胞（Ｈ−２’　）（５Ｘ１０）とマイトマイ
シンＣ処理した（　２５ｍｇ／　ｍＱのマイトマイシン
で３７°Ｃ１３０分間処理した）　ＢＡＬＢ／　Ｃ刺激
細胞（Ｈ−２’　　）と培地［１０％牛脂児血清、２ｍ
Ｍグルタミン、３×１０−８Ｍ２−メルカプトエフノー
ル、２４ｍＭ炭酸水素ナトリウム、ペニシリン（５０単
位／ｍＱ　）およびストレプトマイシン（５０ｇ／ｍ１
１）を添加したＰＲＭ１１６４０培地コ（Ｑ、　２ｍｍ
　）を入れる。

細胞を湿度を保った５％次酸ガス中３７℃で６６時間培
養し、次いで３Ｈ−チミジン（０，５Ｃｉ　）を添加し
、さらに４時間培養し、自動細胞補集装置で細胞を集め
、液体シンチレータ−に入れ、Ｂ−カウンターで放射能
を測定する。測定された放射能からＭＬＲ抑制率を求め
た。結果を次表に示す。

試験例５（ヒト乳癌ＭＸ−１に対する抗癌作用）ヌード
マウスＢＡＬＢ　ｎｕ／ｎｕ　（早、６週令）を用いて
、継代移植していたＭＸ−１腫瘍細胞魂を３ｍｍ角に切
り出し、ヌードマウスに皮下移植する（　ＭＣＩ（ＵＳ
Ａ）マニュアルに準する。）ＷＦ２０１５Ａは移植後０
，１．２．３．４．７．８．９．１０．１１．１４．１
５．１６．１７．１８日目にそれぞれ静注（心投与）し
、移植後２１日目に腫瘍塊をとりだし、湿重量を測定し
、薬剤無投与群と比較し、腫瘍増殖抑制率を算出する。

結果を次表に示す。

この発明のＷＦ２０１５Ａおよび／またはＢは、医薬と
して許容しうる担体と混合して、カプセル、錠剤、顆粒
、粉末、口内錠（バッカル）、舌下錠、液剤などの医薬
組成物の形で、ヒトを含めて哺乳動物に、免疫抑制剤ま
たは抗腫瘍剤として、経口または非経口的に投与できる
。

医薬として許容しろる担体としては、製薬の目的に慣用
される種々の有機または無機担体、たとえば賦形剤（た
とえば、スクロース、でん粉、　　　　　　・マンニッ
ト、ソルビット、ラクトース、クルコース、セルロース
、タルり、りん酸カルシウム、戻酸カルシウム等）、結
合剤（セルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロ
ピルセルロース、ポリプロピルピロリドン、ゼラチン、
アラビアゴム、ポリエチレングリコール、スクロース、
でん粉等）、崩壊剤（たとえば、でん粉、カルボキシメ
チルセルロ−ス シウム コールでん粉ナトリウム、重羨酸ナトリウム、りん酸カ
ルシウム、くえん酸カルシウム等）、滑沢剤（たとえば
、ステアリン酸マグネシウム、エーロジル、タルク、ラ
ウリル硫酸ナトリウム等）、矯味剤（たとえば、くえん
酸、メントール、グリシン、オレンジ粉末等）、保存剤
（安息香酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、メチルパ
ラベン、プロピルパラベン等）、安定剤（くえん酸、く
えん酸ナトリウム、酢酸等）、懸濁化剤（たとえば、メ
チルセルロース、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸
アルミニウム等）、分散剤［たとえば、界面活性剤等］
、水性希釈剤（たとえば水）、油類（たとえばごま油等
）、基剤ワ・７クス（たとえば、カカオ脂、ポリエチレ
ングリコール、白色ワセリン等）が包含されうる。

目的化合物の用量は、疾患の種類、患者の体重および／
または年令、さらには投与経路等の種々の因子に応じて
変更すべきである。

ＷＦ２０１５ＡまたはＢの好ましい用量は、通常、注射
の場合には０．０１〜１０ｍｇ／　ｋｇ／日の、経口投
与の場合には０．５〜５０ｍｇ／　ｋｇ／日の用量範囲
から選択される。

以下の実施例は、この発明を説明するためのものである
。

実施例１ 可溶性でん粉２％、とうもろこしでん粉１％、グルコー
ス１％、綿実粉１％、乾燥酵母１％、ペプトン０．５％
、コーンスチーブリ力−０，５％および炭酸カルシウム
０．２％を含有する水性培地（ｐ）＋６、０　）　（１
５ＱｍＱ　）を、５００戚容三角フラスコ１９本に分注
し、１２０℃で２０分間滅菌した。スフレコバシブイウ
ム・アレナリウムＦ−２０１５の斜面培養物の１白金耳
を各培地に接種し、２５℃で３日間振盪培養した。得ら
れた培養物を、あらかじめ１２０°Ｃで２０分間滅菌し
た２００！容ジャーファーメンタ−中の可溶性でん粉３
％、グルコース１％、小麦の麦芽１％、綿実粉０．５％
および炭酸カルシウム０．２％を含有する水性培地（１
２０ｊ２）に接種し、２５℃で３日間培養した。

こうして得た培養液を、珪藻±（２０ｋｇ）を用いて濾
過した。濾液（９５ｉを酢酸エチル（９５ｊりで抽出し
た。この抽出操作を２回行い、抽出液を合せた。無水硫
酸マグネシウムで脱水後、酢酸エチル層を減圧下に濃縮
した。濃縮物をシリカゲルクロマトグラフィーカラム（
１りにイ寸した。カラムをｎ−ヘキサン（３ｊ２）およ
びｎ−ヘキサン−酢酸エチル混液（１：Ｌ３Ｊ２）で洗
った。活性両分を酢酸エチル（４りで溶出し、ついで減
圧下に濃縮した。これをきらにシリカゲルカラム（４ｏ
ｏｍＱ）に付した。クロロホルム（１２１２）およびク
ロロホルム−メタノール混液（１００：　１．１．２乏
）でカラムを洗浄したのち、クロロホルム−メタノール
混液（７５：１．５０：１および２５：１）で段階的に
溶出した。活性画分を減圧下に濃縮し、残渣をＯＤＳ　
（ＹＭＣ）カラムクロマトグラフィーに付した。カラム
をメタノール水混液（１：１．３００ｍＱ　）で洗浄し
たのち、メタノール−水混液（３：２および７：３、各
３００ｍ１１）で段階的に展開した。活性画分を減圧下
に蒸発乾固して、精製された無色油状のＷＦ２０１５Ａ
　（９２ｍｇ　）を得た。

衷農■遣 スフレコバシブイウム・アレナリウムＦ−２０１５の斜
面培養物の１白金耳を、可溶性でん粉２％、とうもろこ
しでん粉１％、グルコース１％、綿実粉１％、乾燥酵母
１％、ペプトン０．５％、コーンスチーブリ力−０５％
、ＮａＣｌ３％およびＣａＣＯ３０，２％を含有する種
培地（ｐ！（６，０）　（１６０ｍＱ　）を２０木の６
−５Ｏ０容三角フラスコの各々へ分注し常法通り滅菌し
たものに接種し、回転振盪機を用いて２５０ｒ戸にて２
５℃で７２時間培養した。

得られた種培養液を、ステンレス製２００ρジャーファ
ーメンタ−中の上記と同じ滅菌培地１６０ｐ中へ接種し
、ファーメンタ−を２０Ｏｒｐｍ、　２５°Ｃで４８時
間攪拌した。こうして得た種培養９０ρをさらに、可溶
性でん粉３％、グルコース１％、綿実粉０．５％、小麦
の胚芽１％、ＮａＣｌ３％およびＣａＣＯ３０，２％を
含有する４０００　ｊ２容鋼製ファーメンタ−中の滅菌
生産培地３０００ρに接種した。３０００ρ／分の通気
および１３０ｒｐｍの攪拌のもとに、２５℃で７２時間
培養を行った。

培養液（２８５０リツトル）を珪藻土（６５ｋｇ）を用
いて濾過した。濾液を、活性戻（６００リツトル）のカ
ラムに通した。カラムを脱イオン水１８０りで洗い、８
０％アセトン水（ｔｓｏｆ）で溶出した。溶出液を減圧
下に体積１７ｊ２まで濃縮した。濃縮物を酢酸エチル１
８１で抽出した。酢酸エチル層を分離し、減圧乾固して
、粉末（６１，３ｇ）を得た。この粗製粉末をシリカゲ
ル０．３１２と混合した。混合物をシリカゲル（３１）
を用いてのカラムクロマトグラフィーに付した。カラム
をヘキサン１０１でついでヘキサン−酢酸エチル（１：
１）ＩＯＩＶ、で洗Ｉｕ、酸１Ｍエチル１０ｊ２で溶出
した。活性画分を集め、蒸発乾固して、粉末を得、この
粉末をシリカゲルと混合した。混合物を、シリカゲル（
１１）を用いてのカラムクロマトグラフィーに付した。

カラムをクロロホルム３１、ついでクロロホルム−メタ
ノール（１００：　１　）　３　ｐ、で展開し、クロロ
ホルム−メタノール（７５：１）３ｊ！で溶出した。

溶出液を減圧乾固して粉末（１６，４ｇ）を得、この粉
末を逆相シリカゲルＯＤＳ３０ｍＱと混合した。混合物
をＯＤＳ　（６００ｍ１ｌ　）カラムにかけ、メタノー
ル−水（１：　１　）２．４ｆｆｉ洗浄した。カラムを
メタノール−水（３：　２）で溶出した。活性画分を集
め、減圧下に濃縮して、油状の旺２０１５Ｂ　（３０５
ｍｇ　）を得た。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）下記の理化学的性質を有する新規化合物ＷＦ２０１
   ５ＡおよびＢ： （１）ＷＦ２０１５Ａ： ａ）分子量 ４１０［ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ４１１（Ｈ＋Ｈ）］ｂ）
   元素分析 Ｃ６４．５５；Ｈ８．０６；０２７．３９（差として算
   出）ｃ）比旋光度 ［α］＾２＾３＿Ｄ＝５２°（Ｃ＝１．０，ＣＨ＿３Ｏ
   Ｈ）ｄ）ＵＶ吸収スペクトル 末端吸収（ＣＨＣｌ＿３中） ｅ）ＩＲ吸収スペクトル ▲数式、化学式、表等があります▼：３４５０，２９６
   ０，２９２０，１７１０，１６５０，１４４０，１３７
   ０，１３００，１２６０，１２００，１１７０，１１２
   ０，１１００，１０７０．１０５０，１０００，９８０
   ，９２０，８８０，８３０ｃｍ＾−＾１ｆ）＾１ＨＮＭ
   Ｒ吸収スペクトル（ＣＤＣｌ＿３）δ：６．９５（１Ｈ
   ，ｄｄ，Ｊ＝１５．５および４．５Ｈｚ），６．２０（
   １Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１５．５および２Ｈｚ），５．７０（
   １Ｈ，広いｓ）， ５．２０（１Ｈ，広いｔ，Ｊ＝７Ｈｚ）， ４．３１（１Ｈ，ｍ）， ３．９０（１Ｈ，ｍ）， ３．６８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１および３Ｈｚ），３．
   ４４（３Ｈ，ｍ）， ２．９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ）， ２．６２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．５および６Ｈｚ），２
   ．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ）， ２．３６（１Ｈ，ｍ）， ２．１６（１Ｈ，ｍ）， ２．１０（１Ｈ，ｍ）， ２．００（１Ｈ，ｍ）， １．９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ）， １．８７（１Ｈ，ｍ）， １．７４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ）， １．６６（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ）， １．２１（３Ｈ，ｓ）， １．１４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ）， １．０７（１Ｈ，ｍ） ｇ）＾１＾３ＣＮＭＲ吸収スペクトル（ＣＤＣｌ＿３）
   δ：１６５．８（ｓ）， １４６．６（ｄ）， １３５．０（ｓ）， １２１．８（ｄ）， １１８．３（ｄ）， ７９．４（ｄ）， ７４．５（ｄ）， ６９．９（ｄ）， ６６．３（ｄ）， ６１．１（ｄ）， ５９．４（ｓ）， ５８．９（ｓ）， ５６．７（ｑ）， ５０．７（ｔ）， ４８．２（ｄ）， ２９．２（ｔ）， ２７．２（ｔ）， ２５．６（ｑ）， ２５．６（ｔ）， １７．９（ｑ）， １７．１（ｑ）， １３．７（ｑ）， ｈ）溶解性 可溶：クロロホルム、メタノール、アセト ン、エタノール 不溶：ｎ−ヘキサン、水 ｉ）呈色反応 陽性：沃素蒸気との反応 陰性：ニンヒドリン反応、モリッシュ反応、塩化第二鉄
   反応 ｊ）物質の性質 中性物質 （２）ＷＦ２０１５Ｂ： ａ）分子量 ４４７［ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ４６９（Ｍ＋Ｎａ）］ｂ
   ）元素分析 Ｃ５８．０３；Ｈ７．９４；Ｃ１７．３１；Ｏ２６．７
   ２（差として算出） ｃ）比旋光度 ［α］＾２＾３＿Ｄ−２４８°（Ｃ＝２．０，ＣＨＣｌ
   ＿３）ｄ）ＵＶ吸収スペクトル 末端吸収（ＣＨＣｌ＿３中） ｅ）ＩＲ吸収スペクトル ▲数式、化学式、表等があります▼＝３５７０，３４０
   ０，２９６０，２９４０，２８７０，２８２０，１７１
   ０，１６６０，１５６０，１４６０，１４４０，１４０
   ０，１３８０，１３６０，１３４０，１３００，１２７
   ０，１２２０，１１７０，１１２０，１０８０，１０２
   ０，９８０，９６０，９４０，９１０ｃｍ＾−＾１ ｆ）＾１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ＿３）δ：
   ６．９９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５および１５．５Ｈｚ），
   ６．２０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２および１５．５Ｈｚ），
   ５．５５（１Ｈ，ｍ）， ５．１８（１Ｈ，ｍ）， ４．３６（１Ｈ，ｍ）， ３．９８（１Ｈ，ｄｑ，Ｊ＝４および６Ｈｚ），３．８
   ７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ）， ３．４９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ）， ３．３１（１Ｈ，ｍ）， ３．３０（３Ｈ，ｓ）， ２．９７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ）， ２．５０−２．４０（２Ｈ，ｍ）， ２．１７（１Ｈ，ｍ）， ２．０５（１Ｈ，ｍ）， １．９０−１．７５（２Ｈ，ｍ）， １．７３（３Ｈ，ｓ）， １．６６（３Ｈ，ｓ）， １．４９（３Ｈ，ｓ）， １．４０（１Ｈ，広いｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ），１．２０（
   ３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ）， ｇ）＾１＾３ＣＮＨＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ＿３）
   δ：１６５．７（ｓ），５６．７（ｄ）， １４６．３（ｄ），５０．５（ｔ）， １３４．８（ｓ），４３．３（ｄ）， １２２．４（ｄ），２９．１（ｔ）， １１８．２（ｄ），２７．５（ｔ）， ７８．７（ｄ），２５．８（ｑ）， ７６．２（ｓ），２３．５（ｔ）， ７４．５（ｄ），２２．２（ｑ）， ７０．０（ｄ），１７．９（ｑ）， ６６．１（ｄ），１７．６（ｑ） ６４．０（ｓ）， ６２．３（ｄ）， ｈ）溶解性 可溶：クロロホルム、メタノール、アセ トン、エタノール 不溶：ｎ−ヘキサン、水 ｉ）呈色反応 陽性：沃素蒸気との反応 陰性：ニンヒドリン反応、モリッシュ反 応、塩化第二鉄反応 ｊ）物質の性質 中性物質 ２）スコレコバシディウム（￥Ｓｃｏｌｅｃｏｂａｓｉ
   ｄｉｕｍ￥）属に属するＷＦ２０１５Ａおよび／または
   Ｂ生産菌を培地に培養し、得られる培養物からＷＦ２０
   １５ＡおよびＢを採取することを特徴とする、請求項１
   記載の化合物ＷＦ２０１５ＡおよびＢの製造法。 ３）請求項１記載のＷＦ２０１５ＡまたはＢを有効成分
   として製薬上許容しうる担体と共に含有する抗腫瘍剤。 ４）スコレコバシディウム・アレナリウム （￥Ｓｃｏｌｅｃｏｂａｓｉｄｉｕｍ￥　￥ａｒｅｎａ
   ｒｉｕｍ￥）Ｆ−２０１５。