JPH032184A - 新規抗生物質ｎｋ８６―０２７９、その製法及びその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規抗生物質ＮＫ８６−０２７９、その製法及
びその用途に関する。

本発明の化合物は抗真菌、抗腫瘍、血管新生抑制および
殺虫作用を有し、カビに対する又は悪性腫瘍に対する化
学療法剤とし、て、あるいは血管の異常増殖によりて発
症する疾患、例えばリーラマチ性関節炎、糖尿病性網膜
症、未熟児網膜症、老人性黄斑部変性、創傷治癒時の過
剰搬痕形成の予防または治療薬として又、殺虫剤、農園
芸用抗真菌剤として期待される。

〔従来の技術〕

従来、抗真菌性の抗生物質としてはアンホテリシンＢ、
ティスタチンＡ１等が、又抗腫瘍剤としては、シスプラ
チン、プレオマイシン、アドリアマイシン等々が知られ
ている。また血管新生抑制作用を有する物質として、例
えばインドメタシン、メトロキシプロゲステロン、コー
チシンとヘパリンの併用、牛軟骨、大動脈壁の粗抽出液
等が知られている。

〔発明が解決しようとする課題　〕

しかし、従来の抗生物質や、抗腫瘍剤は耐性真菌や耐性
細胞の出現のため、常に新しいものが要望されており、
又血管新生抑制剤に至って式（１）で示されろ新規物質
Ｎ　Ｋ　８６−０２７９を産出することを見い出した。

抑制作用を有する新規物質の創生が期待されている。

〔課題を解決するための手段〕

そこで１本発明者らは、微生物の代謝産物について種々
検索した結果、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓ　）属に属する一菌株が抗真菌、抗腫瘍、血管新
生抑制、及び殺虫作用を有する本発明は上記知見に基づ
いて完成されたものである。

上記新規抗生物質ＮＫ８６−０２７９は、ストレプトミ
セス属に属するＮＫ８６−０２７９生産菌を培養し、Ｎ
Ｋ８６−０２７９物質を生成蓄積せしめこの培養物より
ＮＫ８６−０２７９物質を採取することにより得られる
。ＮＫ８６−０２７９物質の生産菌の代表的なものとし
て、昭和６１年８月千葉県船橋市内の土壌より分離した
ストレプトミセス・ボトロペンシスＮＫ８６−０２７９
　（微工研条寄第１７８５号：以下ｒＮＫ８６−０２７
９株」と略称する）があげられる。

以下ＮＫ８６−０２７９株の菌学的性状を示す。

ＮＫ８６−０２７９株の菌学的性状 １、形態 ＮＫ８６−０２７９株は顕微鏡下で分枝した基中菌糸よ
りらせん状の気菌糸を形成し、輪生枝はみとめられない
。成熟した胞子鎖は２０個以上の胞子の連鎖をみとめ、
胞子の大きさは０．６〜０．８Ｘ１．２〜１．４ミクロ
ン位で胞子の表面は平滑である。また胞子の５はみとめ
られない。

２、各種培地における生育状態 色の記載については（財）日本色彩研究所の色の標準を
用いた。

（１）　　シュクロース・硝酸塩寒天培地（２７°Ｃ培
養） ５す苗条の発育上に白色の気菌糸を着生し溶解性色素は
わずかに黄色味をおびる程度である。

（２）　　グルコース・アスパラギン寒天培地（２７℃
培養） うす黄〜うす苗条の発育上に白〜明るい茶入の気菌糸を
着生し、溶解性色素はみとめられない。

（３）　　スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−培地４
．２７℃培養） ５す苗条の発育上に明るい茶入〜茶入の気菌糸を着生し
、溶解性色素はわずかに茶色味をおびる程度である。

（４）　　チロシン寒天培地（ＩＳＰ−培地７．２７℃
培養） 暗い茶入の発育上に灰白〜明る（・茶入の気菌糸を着生
し、溶解性色素は黒褐色である。

（５）栄養寒天培地（２７℃培養） うす苗条の発育上に気菌糸は着生せず、溶解性色素は茶
色味をおびる程度である。

（６）イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−培地２．２７
℃培養） うす苗条の発育上に灰白〜茶入の気菌糸を着生し、溶解
性色素はみとめられない。

（７）　　オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培地３．２
７℃培養） 無色の発育上に灰白〜明るい茶入の気菌糸を着生し、溶
解性色素はみとめられない。

（８）　　スターチ寒天培地（２７℃培養）うす黄〜５
す苗条の発育上に白〜明るい茶入の気菌糸を着生し、溶
解性色素はわずかに茶色味をおびる程度である。

（９）リンゴ酸石灰寒天培地（２７℃培養）５す黄〜５
す苗条の発育上にうつすらと白色の気菌糸を着生し、溶
解性色素はみとめられない。

（１０）グリセリン・アスパラギン寒天培地（工ＳＰ−
培地５．２７℃培養） うす黄の発育上に蒼白〜明るい茶入の気菌糸を着生し、
溶解性色素はみとめられない。

（１））グリセリン・硝酸塩寒天培地（２７℃培養）う
す苗条の発育上に白色の気菌糸を着生し、溶解性色素は
わずかに茶色味をおびる程度である。

（１２）ゼラチン穿刺培養 単純ゼラチン培地（２０℃培養）及びグルコース・ペプ
トン・ゼラチン培１（２４℃培養）双方で５す黄〜うす
苗条の発育上に、気菌糸は着生せず、溶解性色素は茶色
味をおびる。

（１３）脱脂牛乳（３２℃培養） うす黄〜５す苗条の発育上に白色の気菌糸を着生し、溶
解性色素は茶色味をおびる。

３、生理学的性質 （１）生育温度範囲 イースト・スターチ寒天培地（可溶性デンプン１．０％
、イースト・エキス（大豆’）０．２％、粉末寒天（栄
研）２．０％、ｐＨ７，０）を用い５．１０．２４．２
７．３２．３７．４５℃の各温度で試験の結果５と４５
℃を除いて、そのいずれの温度でも発育したが、最適温
度は２４〜３２℃付近と思われる。

（２）　　ゼラチンの液化（１５％単純ゼラチン培地、
２０℃培養、グルコース・ペプトン・ゼラチン培地、２
７℃培養） 双方共１７日日日ろから液化が始まり、その作用は弱い
方である。

（３）スターチの加水分解（スターチ無機塩寒天培地及
びスターチ寒天培地、いずれも２７°Ｃ培養） いずれの培地にお−・ても培養後１０日日日から氷解性
がみとめられ、その作用は中等度である。

（４）脱脂牛乳の凝固・ペプトン化（脱脂牛乳３２℃培
養） 培養２１日目子も凝固、ペプトン化はみとめられない。

（５）　　メラニン様色素の生成（トリプトン・イース
ト・プロスｌ５Ｐ−培地１：ペプトン・イースト・°鉄
寒天培地、ｌ５Ｐ−培地６；チロシン寒天培地、ｌ５Ｐ
−培地７、いずれも２７℃培養）いずれの培地でもメラ
ニン様色素の生成をみとめる。

（６）炭素源の利用（プリドハム・ゴトリーフ寒天培地
、ｌ５Ｐ−培地９．２７℃培養）グルコース、Ｌ−アラ
ビノース、Ｄ−キシロース、シュクロース、イノシトー
ル、Ｄ−フラクトース、Ｄ−マンニトール、ラムノース
、ラフィノース、ガラクトースヲ利用する。

（７）リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰寒天培地、２
７℃培養） 溶解性をみとめる。

（８）硝酸塩の還元反応（０，１％硝酸カリウム含有ペ
プトン水、ｌ５Ｐ−培地８．２７℃培養） 陰性である。

以上の性状を要約するとＮＫ８６−０２７９株はストレ
プトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ））属に属し、
細胞壁に含まれる２、６−ジアミノピメリン酸はＬＬ−
型である。又胞子の５をみとめず、気菌糸はらせん状を
有し、輪生枝はみとめられない。

胞子の表面は平滑である。種々の培地でうす黄〜うす苗
条の発育上に灰白〜明るい茶入の気菌糸を着生し、溶解
性色素はわずかに茶色味をおびる。メラニン様色素は陽
性、蛋白分解力は弱い方で、スターチの氷解性は中等度
である。

これらの性状よりＮＫ８６−０２７９株に近時の既知菌
種を検索するとインターナショナル・ジャーナル・オプ
・システマテイク・パクテリオロジー（Ｊｎｔｅｒｎａ
ｔｉｏｎａｌ　ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　３ｙｓｔｅｍａ
ｔｉｃ　Ｂａｏｔｅ−ｒｉｏｌｏｇｙ　）　１９巻、４
１０頁、１９６９年に記載されているストレプトミセス
・ボトロベンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｂｏｔ
ｔｒｏｐｅｎｓｉｓ　）があげられる。この菌株と文献
上比較すると、種々の培地上での気菌糸の色、糖の利用
性、メラニン様色素の生成など完全に一致している。以
上のことにより本菌ＮＫ８６−０２７９株はストレプト
ミセス・ボトロペンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　
ｂｏｔｔｒｏｐｅｎｓｉｓ　）に属することが明らかに
なり、ストレプトミセス・ボトロベンシスＮＫ８６−０
２７９と命名した。

この発明で使用するストレプトミセス・ボトロペンシス
ＮＫ８６−０２７９は例えば、紫外線、異誘起剤による
変異処理、形質導入、形質転換、細胞融合等の通常用い
られる変異処理手段によってＮＫ８６−０２７９の生産
能力を高めることができる。

本発明のＮＫ８６−０２７９を製造するにはストレプト
ミセス属に属し、抗生物質ＮＫ８６−０２７９を産生す
る能力を有する微生物を培地中で培養し、培養物中に抗
生物質ＮＫ８６−０２７９を生成蓄績セしめ、次いでこ
れを採取すればよい。

培養方法は原則的には放線菌の培養方法に草するが、通
常は液体培養による深部培養法が有利である。培養に用
いられる培地としては、菌株ＮＫ８６−０２７９が利用
する栄養源を含有する培地であればよい。

栄養源としては、従来から放線菌の培養に利用されてい
る公知のものが使用でき、例えば、炭素源としてはグル
コース、ガラクトース、マンニトール、デキストリン、
澱粉、水飴（澱粉麦芽糖化物）、大豆油など単独または
組み合せて用いることができる。無機および有機窒素源
としては塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、尿素、
硝酸アンモニウム、硝酸ソーダー　ペプトン、肉エキス
、酵母エキス、乾燥酵母、コーン・スチーブ・リカー　
大豆油カス、オートミル、カザミノ酸、バクトソイトン
、ンリプル・ベジタブル・プロティンなど単独または組
合せて用いることができる。その他必要に応じて食塩、
硫酸マグネシウム、硫酸銅、硫酸亜鉛、塩化マンガン、
炭酸カルシウム、燐酸塩などの無機塩を加えることがで
きるほか本国の生育やＮＫ８６−０２７９の生産を促進
する有機物、例えば核酸類、アミノ酸、ビタミン類や無
機物を適当に添加することができる。培養中発泡が著し
い時には、例えば大豆油、亜麻仁油等の植物油やプロナ
ール１（東邦化学社製）、シリコンＫＭ−７０（信越化
学工業社製）等の石油系消泡剤を適宜添加すればよい。

培養温度は２５〜３０℃、ｐＨは中性ないし微酸性で培
養を行うこされる。菌体中の生成量が最大に達したとき
培養を停止し菌体を戸別し、得られた菌体より目的物を
精製、単離する。

図体より本物質の精製、単離には一般に微生物代謝生産
物をその菌体から単離するために用いられる分離、精製
の方法が利用される。ＮＫ８６−０２７９はメタノール
、アセトン、酢酸エチル、エタノールをはじめとする有
機溶媒には溶けるが、水に溶けにくい物質で、その精製
には脂溶性物質の精製に用いられる方法により行なわれ
る。

すなわち、各種有機溶媒による抽出、シリカ■ ゲル、セファデックス　ＬＨ−２０によるクロマトグラ
フィーなどを適宜組み合わせて用いることができる。

例えば、培養液を濾過し、菌体を集め、アセトンで２回
抽出し、アセトン溶液を減圧濃縮、乾固し残渣をｎ−ヘ
キサンを用いて洗浄する。

得られた褐色の粗粉末をクロロホルムに溶解し、シリカ
ゲルカラムクロマトグラフィーにより精製する。展開溶
媒はクロロホルム−メタノール（５０：１）を用いた。

活性画分を集め濃縮、乾固することＫより、褐色の粉末
を得る。この粉末をヘキサン−アセトン（３：２）に溶
解し、再び、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製
する。

展開溶媒は、ヘキサン−アセトン（３：２）を用いた。

活性画分を集め、濃縮、″乾固することにより淡黄色の
粉末を得る。

ムを用いてクロマトグラフィーを行う。活性画分を集め
、濃縮、乾固した後、メタノール−水から結晶化しＮＫ
８６−０２７９の無色結晶を得た。

尚、培養及び粗分雨中のＮＫ８６−０２７９の力価は、
Ｈｅ　Ｌａ　Ｓ３細胞を用い増殖抑制を色素法にて測定
した。

以上のようにして得られたＮＫ８６−０２７９の理化学
的性状を次に示す。

（１）外　　観；無色結晶 （２）分子量：　ＦＤ−ＭＳ　ｍ／ｚ　：　８１９　（
Ｍ十Ｈ）”（３）元素分析；炭素６６．５４％水素９．
２９％酸素２４．０６ （４）分子式；　Ｃ４６Ｈ７４０＋ｚ （５）融　点：１５７．０〜１５９．０°Ｃ（６）　　
比施光度、〔α）、　＝−４７，０（Ｃ１，ＯＯ，メタ
ノール）（７）溶解性：メタノール、アセトン、酢酸エ
チル、ジメチルスルホキシトナ どの有機溶媒に可溶 水、ヘキサンなどＫは難溶。

（８）　　シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲ
ｆ値 シリカゲル薄層（１（ｉｅｓｅｌ　ｇｅｌ　６０　Ｆｚ
ｓｎ　＋　０．２５　ｗｓＭｅｒｃｋ社）を使用し、ヘ
キサンニア七トン（３：　２　Ｖ／Ｖ％）およびクロロ
ホルム：メタノール（３０：　１　ｖ／ｖ％）の展開溶
媒系で０．３７および０．５３を示す。

（９）紫外線吸収スペクトル 図１に示した通り、ＵＶｌ暦ａｘ−／′（Ｅ（−）；２
２５、Ｏｎｍ（３６４，５）、２３２．５　ｎｍ（３３
８，４）。

２４２．５　ｎｍ（ｓｈ、　） （１０）赤外線吸収スペクトル 臭化カリウム錠にて測定した赤外吸収スペクトルを第２
図に示す。その吸収極大値（波紋ｃｍ、’）を以下に示
す。

３５２５．３５００，３４５５．２９５５，２９３０゜
２８７０．２３４０．２１６０．１９２０．１８４０゜
１７３０．１７００，１６５０，１６４０，１４５０゜
１４１０．１３９５，１３７５，１３６５．１３４５゜
１３００．１２９０，１２７０，１２３０，１２００゜
１）８０．１）７０，１）２５．１）１５，１）１０゜
１）００．１０９０，１０７０，１０５０，１０１０゜
１００５．９８５，９７５，９５０，９２０，９１０゜
９００．８８０，８６５，８４０，８２０，８００゜７
８５．７７０，７４５，７２０，７０５，６７５゜（１
））水素核磁気共鳴スペクトル 重クロロホルム中で測定した水素核磁気共鳴スペクトル
を第３図に示す。

（］２）炭素核磁気共鳴スペクトル 重クロロホルム中で測定した炭素核磁気共鳴スペクトル
を第４図に示す。その化学シフト（δ−値）を以下に示
す。

２２０．２６，２２０．１４，２０３．１２，１６４．
９８゜１４９．１），１３７．２０，１３２．２４，１
３０．６３゜１２９．８７．１２２．５８．１０１．１
３．８３．１０゜７６．０１．７２．９９．７２．６７
、７２．０４．７１．０２゜６７１０．６４．６０．　
４６．６０，４６．１４，４５．９６゜４３．９５，４
１．８７．　４１．７４．４０．３４，３８．３８゜３
６．７９（Ｘ２）、３５．９９．３３．６３，３１．２
０゜３０．７０，２８．６８，２５．０４．２１．８８
，２１．０６゜１７．９１，１４．５５．　１３．９８
．　１３、Ｉ　１．　　ｌ　３．０８゜１２．１）．　
９．４４．　８．４０．　５．９９゜（１３）呈色反応
；リンモリブデン酸反応、硫酸、過マンガン酸カリウム
反応忙陽性 パウリ−反応、ライドンスミス反応陰性を示す。

本発明化合物は後記の如く、抗真菌、抗腫瘍、血管新生
抑制剤などの医薬品として又、殺虫剤として期待される
。

本発明化合物を医薬品として使用する場合には、単独ま
たは賦形剤と混合して注射剤、経口剤、坐剤等として投
与する。賦形剤は薬剤学的に許容されるものであればい
ずれでもよく、その種類および組成は投与経路や投与方
法によって決まる。例えば、液状賦形剤としては水、ア
ルコールもしくは大豆油、ビーナツツ油、ゴマ油、ミネ
ラル油等の動植物油または合成油を用いることができる
。固体賦形剤としてはマルトース、シュクロースなどの
糖類、各種アミノ酸類、ヒドロキシプロピルセルロース
などのセルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウムな
どの有機酸塩類などを使用することができる。

注射剤の場合には、賦形剤としては、生理食塩水、各種
緩衝液、グルコース、イノシトール、マンニトール等の
糖類溶液、エチレングリコール、ポリエチレングリコー
ル等のグリコール類溶液が望ましい。また、イノシトー
ル、マンニトール、グルコース、マンノース、マルトー
ス、シュクロース等の糖類やフェニルアラニン等のアミ
ノ酸類の賦形剤と共に凍結乾燥剤となし、投与時に注射
剤の適当な溶剤、例えば、滅菌水、ブドウ糖溶液、電解
質溶液、アミノ酸溶液等に溶解して静脈および筋肉内に
投与することもできる。

経口剤の場合には、前記液状賦形剤もしくは固体賦形剤
とともに錠剤、カプセル剤、粉剤、顆粒剤、液剤、ドラ
イシロップ剤等の形態にするのがよい。また、ペレット
剤として経皮、粘膜剤などの局所投与剤としてもよい。

製剤中における本化合物の含量は、通常０００１〜１重
量％であり、好ましくは０．０１〜０．１重量％である
。例えば、注射剤の場合には、通常０．０１〜０．０５
重ｌ９がよい。経口剤の場合にはｏ、ｏｏｓ〜１重量％
、好ましくは０．０５〜０．５重量％とし、残部を賦形
剤とする。

投与量は、患者の年令、体重、症状、治療目的等忙より
決定されるが、−船釣には、非経口投与で０．１〜５μ
ｇ　／　ｋｇ　／日、経口投与で０．５〜３０μｇ　／
　ｋｇ　／日である。また、マウスに対するＮＫ８６−
０２７９の急性毒性値（ＬＤｓｏ）は、１．６７使用目
的に応じてそのまま単体で使用できるが効果を助長ある
いは安定にするために農薬補助剤を配合して製剤とし、
これを直接使用するか必要に応じ希釈するなどして適用
するのが一般的である。本発明化合物の製剤化にあたっ
ては何ら特別の条件を必要とせず、農薬製造分野におい
て一般的に行われている方法により、粉剤、粒剤、微粒
剤、水利剤、フロアブル剤、乳剤、マイクロカプセル剤
、油剤、エアゾール、加熱燻蒸剤（蚊取線香、電気蚊取
など）、フォラキングなどの煙霧剤、非加熱燻蒸剤、毒
餌などの任意の製剤形態にして使用できる。

ここに言う農薬補助剤としては担体（希釈剤）およびそ
の他の補助剤、たとえば展着剤、乳化剤、湿展剤、分散
剤、固着剤、崩壊剤などを挙げることができる。

又、その使用量は剤形、施用する方法、時期、その他の
条件によって変るが、農園芸用剤、森林防害虫用剤及び
牧野害虫用剤は通常１０アール当り有効成分量で１０〜
３００ｇ、好ましくは１５〜２００ｇが使用され、衛生
防害虫用剤は通常１　ｍ”当り有効成分量で２〜２００
■、好ましくは５〜１）００ｆｆ１が使用される。たと
えば粉剤は１０アールあたり有効成分で１５〜１２０ｇ
、粒剤は有効成分で３０〜２４０ｇ、また乳剤、水利剤
は有効成分で４０〜２５０ｇの範囲である。しかしなが
ら特別の場合には、これらの範囲を越えることが、また
は下まわることが可能であり、また時には必要でさえあ
る。

又、製剤中の有効成分含量は製剤形態、施用する方法そ
の他の条件により異なり場合によっては有効成分化合物
のみでもよいが通常は０．２〜９５％（重量）好ましく
は０．５〜８０％（重量）の範囲である。

（作　用） 次に本化合物の作用を説明する。

試験例１゜ 本化合物の抗カビスペクトルを検討した。

ＮＫ８６−０２７９のツアペック寒天培地による抗カビ
スペクトルを第１表に示す。

ＮＫ８６−０２７９は表１に示すようにペニシリウム・
クリソゲナム、アスペルギルス・オリーゼ、トルラ・ヘ
ルバルムなどの真菌類に対し、強い発育阻止作用を示し
た。

表１ 本　ポテト・シ１ｖＭ寒天培地による。

試験例２゜ 本化合物のｆ（ｅ　Ｌａ　Ｓ３培養細胞に対する増殖抑
制作用を検討した。Ｈｅ　Ｌａ　Ｓ３細胞を１．５Ｘ１
０”個／′大の割合で９６穴テストプレートに接種し１
日後本化合物を種々な濃度で培養液に添加した。添加３
日後細胞数を色素法により測定し、本化合物の種々の濃
度におけるＨｅ　Ｌａ　Ｓ３細胞の増殖抑制率を求めた
。

結果を表２に示した。本化合物のＩ　Ｃｓｏ値は０．０
０２７　ｍｃｇ／”ｍｌであり、Ｈｅ　Ｌａ　Ｓ３細胞
に対し強い増殖抑制作用を認めた。

表２　本化合物の種々の濃度における 試験例３゜ 本化合物のマウス大腸ガン細胞（Ｃｏ１ｏｎ　２６　）
およびヒト大腸ガン細胞（ＳＷＩ　１）６）に対する増
殖抑制作用を検討した。マウス大腸ガン細胞を１．５Ｘ
１０３個／穴の割合で、またヒト大腸ガン細胞を３．０
Ｘ１０”個／穴で９６穴テストプレート、に接種し３７
℃５％ＣＯ２インキュベーター内で２４時間培養した後
、本物質を種々な濃度で添加した。添加後、それぞれ６
５時間後、９６時間後の細胞数を色素法により測定し、
本化合物の種々の濃度におけるマウス大腸ガン細胞およ
びヒト大腸ガン細胞の増殖抑制率を求めた。

結果を表３−１に示した。本化合物のＩＣ，。値は、マ
ウス大勝ガン細胞に対して、０，００６１ｍｃｇ／ｍｌ
以下、ヒト大腸ガン細胞に対して０．０２１ｍｃｇ／ｍ
ｌであり、両細胞に対し強い増殖抑制作用を認めた。

表３−１ 死を記録した。本化合物によるマウスの延命率（Ｔ／Ｃ
）は対照群の平均生存日数に対する本化合物各投与群の
平均生存日数の比率より求めた。

結果を表３−２に示した。本化合物の０．２５ｔｎｇ／
′ｋｇ投与群で最大の延命率１５３％が得られ対照群に
比べ有意な抗腫瘍効果が認められた。

表３−２ 本化合物のマウス大腸５ｉ！ｉ　（Ｃｏ１ｏｎ　２６）
に対する制癌作用を検討した。マウス大腸癌の組織片２
皿３を６週齢、雄ＢＡＬＢ／ｃマウスの左体側皮下に移
植し、翌日より種々な濃度の本化合物を１日１回連日９
日間腹腔内に投与した。投与開始後毎日マウスの一般状
態を観察し、その生試験例４゜ 本化合物のマウス肺ガン細胞（ＬＬ）およびヒト肺ガン
細胞（ＰＣ−３）に対する増殖抑制作用を検討した。

マウス肺ガン細胞を８．　ＯＸ　１０２個／穴、ヒト肺
ガン細胞２．５Ｘ１０”個／′穴の割合で９６大テスト
プレートに接種し、３７°Ｃ５％ＣＯ２インキュベータ
ー内で２４時間培養した後、本化合物を種々な濃度で培
養液に添加した。添加３日後、細胞数を色素法にて測定
し、本化合物の種々の濃度におけるマウス肺ガン細胞（
ＬＬ　）、ヒト肺ガン細胞（、ＰＣ−３）の増殖抑制率
を求め、た。

結果を表４−１に示した。本化合物のＩ　Ｃｓｏ値は、
マウス肺ガン細胞（ＬＬ）に対し、０．０９８ｍｃｇ／
ｍｌ、ヒト肺ガン細胞（ＰＣ−３）に対し、２、１３　
ｍｃｇ／ｍｌであり、両細胞に対し、強い増殖抑制作用
を認めた。

表４−１ 本化合物のマウス肺ｆｆｆ、　（Ｉｅｗｉｓ　Ｉｕｎｇ
ｃａｒｃｉｎｏｍａ　）およびマウス乳５ｉ！　（Ｅｈ
ｒｌｉｃｈ　Ｂ　）　Ｋ対する制癌作用を検討した。Ｉ
　Ｘ　Ｉ　Ｏ’個のマウス肺癌細胞またはマウス乳癌細
胞を８週齢、雄ＢＤＦ、またはＩＣＲマウスの右鼠渓部
皮下にそれぞれ移植し、２日後より種々な濃度の本化合
物を１日１回連日９日間腹腔内に投与した。投与終了後
２目にｐａ瘍の短径と長径を測定し、短径×長径／２の
式より腫瘍体積を求め、本化合物各投与群の対照群に対
する腫瘍体積の比率より、それぞれの腫Ｃに対する増殖
抑制率を求めた。

結果を表４−２に示した。本化合物による最大増殖抑制
率はマウス肺癌に対し０．５■／″ｋｇ投与群で５９．
６％、マウス乳癌に対ｄヶ５■／′ｋｇ投与群で６７％
であり、本化合物はそれぞれの腫瘍に対し、強い抗腫瘍
効果を示した。

表４−２ 試験例５゜ （Ｓ−１） 本化合物のマウスメラノーマｉ％２（８１６）およびヒ
トメラノーマ細胞（Ａ３７５）に対する増殖抑制作用を
検討した。マウスメラノーマ細胞’ｋ１．５Ｘ１０”個
／穴、ヒトメラノーマ細胞を１、ＯＸ　１０’個／穴の
割合で９６穴テストプレートに、接種し、３７℃、５％
ＣＯｚインキュベーターで培養した後、本化合物を種々
な濃度で培養液に添加した。添加６５時閘後、細胞数を
色素法により測定し、本化合物の種々の濃度におけるマ
ウスメラノーマ細胞、ヒトメラノーマ細胞の増殖抑制率
を求めた。

結果を表５−１忙示した。本化合物のＩＣ５ｏ値は、マ
ウスメラノーマ細胞忙対して１．６２ｍｃｇ／ｍｌ、ヒ
トメラノーマ細胞に対して１．８７　ｍｃｇ／ｍｌと両
細胞に対し増殖抑制作用を示した。

表５−１ し、短径２×長径２／２の式より腫瘍体積を求め、本化
合物各投与群の対照群に対する腫瘍体積の比率より、腫
瘍増殖抑制率を求めた。

結果を表５−２に示した。本化合物による最大増殖抑制
率はｘ、Ｏｑ／ｋｇ投与群において８０％であり、マウ
ス黒色肉腫に対し強い抗腫瘍効果が認められた。

表５−２ 腹腔内投与による本化合物のマウス黒色肉腫（Ｂ　１６
　ｎ＋ｅｌａｎｏｔｉｃ　＋ｅｅｌａｎｏ１）１ａ）　
Ｉこ対する制癌作用を検討した。４ｘｌＯ５個のマウス
黒色肉腫細胞を８週齢、雄ＢＤＦ、マウスの右体側皮下
もと移植し、翌日より種々な濃度の本化合物を１日１回
連！３１０日間腹腔内りこ投与した。

移植１）日日日腫瘍の短径と長径を測定試験例５−３ 静脈内投与による本化合物のマウス黒色肉１ｆｆｉ（Ｂ
１６　ａ＋ｅｌａｎｏｔｉｃ　ｍｅｌａｎｏｍａ）に対
する制癌作用を検討した。　５Ｘ１０’個のマウス黒色
肉腫細胞を６週齢、雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスの右体側皮
下に移植し、移植後１日目または７日目より種々な濃度
の本化合物をそれぞれ１日１回５日間静脈内に投与した
。移植後１）１日目ｌｌ１ｗ１の短径と長径を測定し、
短径２×長径２／２の式より腫瘍体積を求め、本化合物
各投与群の対照群に対する腫瘍体積の比率より、それぞ
れのｍｉ増殖抑制率を求めた。

結果を表５−３に示した０本化合物による最大増殖抑制
率は腫瘍移植後７日目より５日間本化合物を静脈内投与
した時、０．４　ｍｇ／ｋｇ投与群において８１．９χ
であり、マウス黒色肉腫に対し強い抗腫瘍効果が認めら
れた。

表５−３ 試験例５−４ 経口投与による本化合物のマウス黒色肉腫（８１６ｍｅ
ｌａｎｏｔｉｃ　ａ＋ｅｌａｎｏａ＋ａ）に対する制癌
作用を検討した。　５Ｘ１０’個のマウス黒色肉腫細胞
を６週齢、ｍｃ５７ＢＬ／６マウスの右体側皮下に移植
し、移植後１日目または７日目より種々な濃度の本化合
物をそれぞれ１日１回５日間経口投与した。移植後１）
１日目腫瘍の短径と長径を測定し、短径８×長径８／２
の式よりＩｌｌ瘍体積を求め、本化合物各投与群の対照
群に対する腫瘍体積の比率より、それぞれの腫瘍増殖抑
制率を求めた。

結果を表５−４に示した０本化合物による最大増殖抑制
率は腫瘍移植後１日目より５日間本化合物を経口投与し
た時、１　ｍｇ／ｋｇ投与群において９４．６χであり
、マウス黒色肉腫に対し強い抗腫瘍効果が認められた。

表５−４ 試験例６゜ 本化合物の、内皮細胞に対する増殖抑制作用を検討した
。牛副腎の毛細血管内皮細胞を１×１０４個／大の割合
で６穴テストプレートに接種し、１日後本物質を種々な
濃度で培養液に添加した。添加３日後細胞数をコールタ
−カウンターにより測定し、本化合物の種々の濃度にお
ける血管内皮細胞の増殖抑制率を求めた。結果を表６に
示した。本化合物のＩ　Ｃｓｏ値は０．０００３ｍｃｇ
／ｉｎｌであり、内皮細胞に対し強い増殖抑制作用を認
めた。

表６　本化合物の種々の濃度にける 血管内皮細胞の増殖抑制率 試験例７゜ 本化合物の血管新生に対する抑制作用をＭ、Ａ。

Ｑｉｍｂｒｏｎｅらの家兎角膜内評価法（Ｊｏｕｒｎａ
ｌ　Ｎａｔｉ−ｏｎａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔ−ｔ
ｔｕｔｅ　５２ｅ　４１　：Ｌ　１９７４）を用いて検
討した。即ち、家兎の角膜中央部をメスを用いて約２　
ｍｍ切開し、角膜内にポケットを作製した。ここに、あ
らかじめＲ，Ｌａｎｇｅｒらの方法（Ｎａ、ｔｕｒｅ２
６３．７９７．１９７９）Ｋより作製しておいたエーリ
ッヒ癌粗抽出物１００　ｍＣｇを含む徐放性ペレットを
設置した。更Ｋ、本化合物０．３〜８１　ｍｃｇを含有
する徐放性ペレットを上記ペレットに接して設置し、設
置後４．６．８および１００日目血管新生の程度を観察
した。その結果、エーリッヒ癌粗抽出物による血管の新
生は本化合物のｌ　ｍｃｇ以上のペレット設置群で４日
目まで、２．７　ｍｃｇ以上のペレット設置群では８日
目まで非投与群に比べ有意に遅延した。

試験例８゜ 本発明化合物の殺虫作用を次の方法により試験した。

（１）ナミハダニ成虫（ケルセン耐性種）を供試虫とし
て通常の方法（細辻豊二編：農薬生物検定法、３２７頁
）により死滅率を検定した。

すなわち、本化合物のアセトン溶液（０，１％）をシラ
糖水溶液（１％）　０．５　ｍｌに所定の濃度になるよ
うに加えた。容器（２０ｍｌビーカー）にナミハダニ成
虫１０頭を成虫しバラフィルムでフタをした。このバラ
フィルム上に上記薬液をのせてさらにバラフィルムを覆
い恒温室（２０士１°Ｃ）に所定時間放置後、供試虫の
生、死を調査した。

（２）チカイエ力幼虫（感受性様）を供試虫として通常
の方法（ソフトサイエンス社：農薬実験法ｌ、殺虫剤綿
、１０９頁）により死滅率を検定した。

すなわち、容器（１５ｍｌシャーレ）に井水１０ｍ１を
入れチカイエカ３令幼虫を５頭放虫した。これに本化合
物のアセトン溶液（０，１％）を所定の濃度になるよう
に加え恒温室（２６士１　’Ｃ）に所定時間放置後、供
試虫の生、死を調査した。

結果を表８に示す。この表から明らかなように本発明化
合物は殺ダニ、段数作用を有する。

表８ 〔効　果〕 以上の結果から、本化合物は抗真菌作用、制剤、殺虫剤
として期待される。

以下本発明の化合物の製法を実施例忙より示す。

実施例１゜ ５００　ｍｌ容三角フラスコに溶性デンプン２％、グル
コース０，５％、ヘフトン０．５％、酵母エキス０．５
％、燐酸第２カリウム０．０５％、硫酸マグネシウム０
．０５％、大豆粉０．５％の培地（ｐＨ７，２）１００
ｍｌを分注し、１２０℃２０分間オートクレーブにより
滅菌した。これにＮＫ８６−０２７９株（微工研条寄１
７８５号）の１白金耳を接種し、ロータリーシェーカー
にて１９０回転／分２７℃の条件下で２日間振盪培養し
た。これとは別に５００　ｍｌ容三角フラスコにグリセ
リン４％、ポリペプトン０．５％、粉末酵母エキス０．
３％、肉エキス０．５％、塩化ナトリウム０．３％、硫
酸マグネシウム０．０５％の培地（ｐＨ７，００）　１
００ｍｌを分注し、１２０℃、２０分間オートクレーブ
滅菌した。このフラスコに前記培養液２　ｍｌを移植し
、ロータリーシェカーにて１９０回転／分２７℃の条件
下で、５日間振盪培養を行なった。本方法における培養
物１０２を濾過することにより、菌体３　ｋｇを得た。

得られた菌体を３２の蒸留水で洗浄した後３ノのアセト
ンを加え一晩撹拌し、抽出を行なった。濾過により菌体
な戸別し、更に２２のアセトンにて抽出を繰り返した。

得られたアセトン抽出液４．８２を減圧乾固し、５．０
ｇの粗抽出物を得た。これを−度へキサンで洗浄し、得
られた粗抽出物４．２ｇをクロロホルムに溶解し、あら
かじめクロロホルム：メタノール（５０：１）で平衡化
したシリカゲルカラム（４００ｍｌ）にかけ、同溶媒を
用いてクロマトグラフィーな行なった。活性画分を集め
、減圧下濃縮乾固し、黄白色の粗粉末１２２．８■を得
た。

次にこの粉末をヘキサン−アセトン（３：２）に溶解し
、あらかじめ同溶媒で平衡化したシリカゲルカラム（２
０ｍｌ）にかけ同溶媒でクロマトグラフィーを行なった
。活性画分を集め、減圧下濃縮乾固し、淡黄白色の粗粉
末６８．５　ｆｆ１ｇを得た。

次にこの粗粉末を、メタノールに溶解し、同溶媒で平衡
化したセファデックス！’ＬＨ−２０カラム（１５０ｍ
ｌ）にかけ、クロマトグラフィーを行なった。

活性画分を集め、減圧下濃縮乾固した後メタノール−水
より結晶化し、ＮＫ８６−０２７９の無色結晶２２６０
■を得た。

【図面の簡単な説明】

第１図はＮＫ８６−０２７９物質の紫外部吸収スペクト
ルを示す。実線（−）は、２０　ｍｃｇ／ｍｌのメタノ
ール溶液、破線（・・・・・・）は２０　ｍｃｇ　／ｍ
ｌのｏ、ｉＮ塩酸−９０％メタノール溶液、鎖線（−−
−−）は２０　ｍｃｇ　／　ｍｌの０、ＩＮ苛性ソーダ
ー９０％メタノール溶液。 第２図は臭化カリウム錠として測定したＮＫ８６−０２
７９の赤外吸収スペクトルである。 第３図は、ＮＫ８６−０２７９の重クロロホルム中で測
定した水素核磁気共鳴スペクトルである。 第４図は、ＮＫ８６−０２７９の重クロロホルム中で測
定した、炭素核磁気共鳴スペクトルである。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される新規抗生物質ＮＫ８６−０２７９
2. （２）ストレプトミセス属に属し、抗生物質ＮＫ８６−
   ０２７９を産生する能力を有する微生物を培地中で培養
   し、培養物中に抗生物質ＮＫ８６−０２７９を生成蓄積
   せしめ、次いでこれを採取することを特徴とする抗生物
   質ＮＫ８６−０２７９の製造方法
3. （３）抗生物質ＮＫ８６−０２７９を有効成分とする抗
   真菌剤、抗腫瘍剤、血管新生抑制剤又は殺虫剤。