JPH0495095A - 新規抗生物質ｎｋ１３０１６２、その製法及びその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規抗生物質ＮＫ１３０１６２、その製法及び
その用途に関する。

本発明の化合物は抗腫瘍、血管新生抑制、殺虫および抗
コクシジウム作用を有し、悪性腫瘍に対する化学療法剤
として、あるいは血管の異常増殖によって発症する疾患
、例えばり＝ウマチ性関節炎、糖尿病性網膜症、未熟児
網膜症、老人性黄斑部変性、創傷治癒時の過剰搬痕形成
の予防または治療薬として又、殺虫剤、抗コクシジウム
剤として期待される。

〔従来の技術〕

従来、抗腫瘍剤としては、シスプラチン、フレオマイシ
ン、アドリアマイシン等々が知られている。また血管新
生抑制作用を有する物質として、例えばイノドメタゾノ
、メトロキンプロゲステロン、コーチシンとヘパリ／の
併用、牛軟骨、大動脈壁の粗抽出液等が知られている。

〔発明が解決しようとする課題〕

しかし、従来の抗生物質や、抗腫瘍剤はｌｉｔ性細胞の
出現のため、常（て新しいものが要望されており、又血
管新生抑制剤に至っては、医薬品として実用化されてい
るものは無い。そのため、抗腫瘍作用、血管新生抑制作
用、殺虫作用及び抗コクシジウム作用を有する新規物質
の創生が期待されている。

〔課題を解決するための手段〕

そこで、本発明者らは、微生物の代謝産物について種々
検索した結果、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓ　）属に属する一菌株が抗腫瘍、血管新生抑制、
殺虫及び抗コクシジウム作用を有する式（１）で示され
る新規物質ＮＫ１３０１６２を産出することを見い出し
た。

本発明は上記知見に基づいて完成されたものである。

上記新規抗生物質Ｎ　Ｋ　１３０１６２は、ストレプト
ミセス属に属するＮ　Ｋ　１３０１６２生産菌を培養し
、抗生物質Ｎ　Ｋ　１３０１６２を生成蓄積せしめこの
培養物より抗生物質Ｎ　Ｋ　１３０１６２を採取するこ
と（こより得られる。抗生物質Ｎ　Ｋ　１３０１６２の
生産菌の代表的なものとして、昭和６１年８月千葉県船
橋市内の土壌より分離したストレプトミセス・ボトロペ
ンシスＮ　Ｋ　８６−０２７９（微工研条寄第１７８５
号；以下ｒ　Ｎ　Ｋ　８６−０２７９株」と略称する）
があげられる。

以下Ｎ　Ｋ　８６−０２７９株の菌学的性状を示す。

ＮＫ８６　０２７９株の菌学的性状 形　　態 ＮＫ８６　０２７９株は顕微鏡下で分枝した基中菌糸よ
りらせん状の気菌糸を形成し、輪生枝はみとめられない
。成熟した胞子鎖は２０個以上の胞子の連鎖をみとめ、
胞子の大きさは０６〜０．８　Ｘ　１．２〜１４ミクロ
７位で胞子の表面は平滑である。また胞子のうはみとめ
られない。

２　各種培地における生育状態 色の記載については（財）日本色彩研死所の色の標準を
用いた。

（１）　　シュクロース・硝酸塩寒天培地（２７°Ｃ培
養） うす黄茶の発育上に白色の気菌糸を着生し溶解性色素は
わずかに黄色味をおびる程度である。

（２）　　グルコース・アスパラギン寒天培地（２７０
Ｃ培養） うす黄〜うす黄茶の発育上に白〜明るい茶入の気菌糸を
着生し、溶解性色素はみとめられない。

（３）　　スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−培地４
．２７°Ｃ培養） うす黄茶の発育上に明るい茶入〜茶入の気菌糸を着生し
、溶解性色素はわずかに茶色味をおびる程度である。

（４）チロシン寒天培地（ＩＳＰ−培地７．２７０Ｃ培
養） 暗い茶入の発育上に灰白〜明るい茶入の気菌糸を着生し
、溶解性色素は黒褐色である。

（５）　　栄養寒天培地（２７°Ｃ培養）うす黄茶の発
育上に気菌糸は着生せず、溶解性色素は茶色味をおびる
程度である。

（６）　　イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−培地２．
２７°Ｃ培養） うす黄茶の発育上に灰白〜茶入の気菌糸を着生し、溶解
性色素はみとめられない。

（７）　　オートミール寒天培地Ｃｌ５Ｐ−培地３、２
７°Ｃ培養） 無色の発育上に灰白〜明るい茶入の気菌糸を着生し、溶
解性色素はみとめられない。

（８）スターチ寒天培地（２７°Ｃ培養）うす黄〜うす
黄茶の発育上に白〜明るい茶入の気菌糸を着生し、溶解
性色素はわずかに茶色味をおびる程度である。

（９）リンゴ酸石灰寒天培地（２７°Ｃ培養）うす黄〜
うす黄茶の発育上にうつすらと白色の気菌糸を着生し、
溶解性色素はみとめられない。

（１０）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ−
培地５．２７°Ｃ培養） うす黄の発育上に茶白〜明るい茶入の気菌糸を着生し、
溶解性色素はみとめられな（ゝ。

（１１）グリセリン・硝酸塩寒天培地（２７°Ｃ培養） うす黄茶の発育上に白色の気菌糸を着生し、溶解性色素
はわずかに茶色味をおびる程度である。

（１２）ゼラチン穿刺培養 単純ゼラチン培地（２００Ｃ培養）及びグルコース・ペ
プトン・ゼラチン培地（２４０Ｃ培養）双方でうす黄〜
うす黄茶の発育上に、気菌糸は着生せず、溶解性色素は
茶色味をおびる。

（１３）脱脂牛乳（３２°Ｃ培養） うす黄〜うす黄茶の発育上に白色の気菌糸を着生し、溶
解性色素は茶色味をおびる。

３、生理学的性質 （１）生育温度範囲 イースト・スターチ寒天培地（可溶性デンプン１０％、
イースト・エキス（大玉）０、２　％、粉末寒天（栄研
）２０％、ｐＨ７，０）を用い５．　１０．　２４．　
２７．　３２．　３７．　４５℃の各温度で試験の結果
５と４５°Ｃを除いて、そのいずれの温度でも発育した
が、最適温度は２４〜３２°Ｃ付近と思われる。

（２）　　ゼラチンの液化（１５％単純ゼラチン培地、
２００Ｃ培養、グルコース・ペプトン・ゼラチン培地、
２７°Ｃ培養） 双方共１７日目子ろから液化が始まり、その作用は弱い
方である。

（３）　　スターチの加水分解（スターチ無機塩寒天培
地及びスターチ寒天培地、いずれも２７°Ｃ培養） いずれの培地においても培養後１０日目子から氷解性が
みとめられ、その作用は中等度である。

（４）　　脱脂牛乳の凝固・ペプトン化（脱脂牛乳３２
°Ｃ培養） 培養２１日目子も凝固、ペプトン化はみとめられない。

（５）　　メラニン様色素の生成（トリゾ）　７　ｍイ
ースト・プロスＩＳＰ−Ｊａｍ　１　；　ヘット７・イ
′−スト・鉄寒天培地、ｌ５Ｐ−培地６；チロシン寒天
培地、ｌ５Ｐ＝培地７、いずれも２７°Ｃ培養）いずれ
の培地でもメラニン様色素の生成をみとめる。

（６）　　炭素源の利用（プリトノ・ム・ゴトリーフ寒
天培地、ｌ５Ｐ−培地９．２７°Ｃ培養）グルコース、
Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、シュクロース、イ
ノシトール、Ｄ−フラジ）−ス、Ｄ−マンニトール、ラ
ムノース、ラフィノース、ガラクトースを利用する。

（７）リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰寒天培地、２
７°Ｃ培養） 溶解性をみとめる。

（８）硝酸塩の還元反応（０１％硝酸カリウム含有ベプ
ト／水、ｌ５Ｐ−培地８．２７°Ｃ培養） 陰性である。

以上の性状を要約するとＮＫ８６−０２７９株はストレ
プトミセス（Ｓ□ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　）属に属し
、細胞壁に含まれる２、６−ジアミツビメリン酸はＬＬ
−型である。又胞子の５をみとめず、気菌糸はらせん状
を有し、輪生枝はみとめられない。

胞子の表面は平滑である。種々の培地でうす黄〜うす黄
茶の発育上に灰白〜明るい茶入の気菌糸を着生し、溶解
性色素はわずかに茶色味をおびる。メラニン様色素は陽
性、蛋白分解力は弱い方で、スターチの氷解性は中等度
である。

これらの性状よりＮＫ８６−０２７９株に近縁の既知菌
種を検索するとインターナンヨナル・ジャーナル・オブ
・システマティク・バクテリオロジー（Ｉｎｔｅｒｎａ
ｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａ
ｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒ−ｉｏｌｏｇｙ　）　　１９巻、
４１０頁、１９６９年に記載すしているストレプトミセ
ス・ポトロペノシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｂｏ
ｔｔｒｏｐｅｎｓｉｓ　）があげられる。この菌株と文
献上比較すると、種々の培地上での気菌糸の色、糖の利
用性、メラニン様色素の生成など完全に一致している。

以上のことにより本［ＮＫ８６−０２７９株はストレプ
トミセス・ボトロベ７　シス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓ　ｂｏｔｔｒｏｐｅｎｓｉｓ　）に属することが明ら
かになり、ストレプトミセス・ポトロベンシスＮＫ８６
−０２７９と命名した。

この発明で使用するストレプトミセス・ボトロベンシス
ＮＫ８６−０２７９は例えば、紫外線、ｃｏ等の照射処
理、ナイトロジエンマスタード、亜硝酸、Ｎ−メチル−
Ｎ′−二トローＮ−二トロソグアニジン（ＮＴＧ）、２
−アミノプリン等の変異誘起剤による変異処理、形質導
入、形質転換、細胞融合等の通常用いられる変異処理手
段によって抗生物質Ｎ　Ｋ　１３０１６２の生産能力を
高めることができる＠ 本発明の抗生物質ＮＫ１３０１６２を製造するにはスト
レプトミセス属に属し、抗生物質ＮＫ１３０１６２を産
生する能力を有する微生物を培地中で培養し、培養物中
に抗生物質ＮＫ１３０１６２を生成蓄積せしめ、次いで
これを採取すればよい。

培養方法は原則的には放線菌の培養方法に準するが、通
常は液体培養による深部培養法が有利である。培養に用
いられる培地としては、菌株ＮＫ８６−０２７９が利用
する栄養源を含有する培地であればよい。

栄養源としては、従来から放線菌の培養に利用されてい
る公知のものが使用でき、例えば、炭素源としてはグル
コース、ガラクト一ス、マンニトール、デキストリン、
澱粉、水飴（澱粉麦芽糖化物）、大豆油など単独または
組み合せて用いることができる。無機および有機♀素源
としては塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、尿素、
硝酸アンモニウム、硝酸ソーダー　ベフトン、肉エキス
、酵母エキス、乾燥酵母、フ／・スチープ・リカー　大
豆油カス、オートミル、カザミノ酸、バクトソイト／、
ソリプル・ベジタブル・プロティンなど単独または組合
せて用（−ることかできる。その他必要に応じて食塩、
硫酸マグネシウム、硫酸銅、硫酸亜鉛、塩化マンガン、
炭酸カルシウム、燐酸塩などの無核酸類、アミノ酸、ビ
タミン類や無機物を適当に添加することができる。培養
中発泡が著しい時には、例えば大豆油、亜麻仁油等の植
物油やプロナール１（東邦化学社製）、シリコンＫＭ７
０（信越化学工業社製）等の石油系消泡剤を適宜添刀口
すればよい。培養温度は２５〜３００Ｃ，ｐＨは中性な
いし微酸性で培養を行うことが望ましい。液体培養では
通常３〜６日間培養を行うと抗生物質ＮＫ１３０１６２
が菌体中に生成蓄積される。菌体中の生成量が最大に達
したとき培養を停止し菌体をＰ別し、得られた菌体より
目的物を精製、単離する。

菌体より本物質の精製、単離には一般に微生物代謝生産
物をその菌体から単離するために用いられる分離、精製
の方法が利用される。抗生物質ＮＫＩ３０１６２はメタ
ノール、アセトン、酢酸エチル、エタノールをはじめと
する有機溶媒には溶けるが、水に溶けにくい物質で、そ
の精製には脂溶性物質の精製に用いられる方法により行
なわれる。

すなわち、各種有機溶媒による抽出、シリカゲルクロマ
トグラフィー分取用高速液体クロマトグラフィーなど適
宜組み合わせて用いることができる。

例えば、培養液を沢過し、菌体を集め、アセトンで２回
抽出し、アセトン溶液を減圧濃縮乾固した。

得られた褐色の粗粉末をクロロホルムに溶解しシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィーにより精製する。展開溶゛
媒は、クロロホルム−メタツルを用い段階的に（１００
：１→７５：１）溶出した。活性画分を集め、濃縮、乾
固することにより淡褐色粉末を得る。この粉末を再びシ
リカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製する。

展開溶媒は、ｎ−ヘキサン−アセト／を用い段階的に（
９：ｌ→７：３）溶出した。活性画分を集め、メタノー
ル−水から結晶化し無色結晶を得た。

尚、培養及び粗分両生の抗生物質ＮＫ１３０１６２の力
価は、ＨｅＬａ　Ｓ３細胞を用い増殖抑制活性を色素法
にて測定した。

以上のようにして得られた抗生物質ＮＫ１３０１６２の
理化学的性状を次に示す。

（１）外　　観；無色結晶 （２）分子量；　Ｆ　ＡＢ　Ｍ　Ｓ　（Ｍ＋Ｈ）　ｍ／
　ｚ　７８９（３）分子式；Ｃ４６Ｈ７６０，。

（４１Ｓ　　点；１６８゜５〜１７１．５°Ｃ（５）　
　比施光度；〔α〕佇−−５１　、９（Ｃ，１，００，
メタノール） （６）　　溶解性；メタノール、アセト７　　酢酸ｘチ
ル、ジメチルスルホキシドに 可溶、水、ヘキサノに難溶。

（７）　　シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲ
ｆ値。

ヘキサ／ニア七トノ（４：　１　ｖ／ν・％）、および
クロロホルム−メタノール（５０：１ｖ／ｖ％）の展開
溶媒系でそれぞれ０．２１および０．５３を示す。

（８）紫外線吸収スペクトル メタノール　　　　１％ 図１に示した通り。ＵＶ、！　　　　　（Ｅ　　）ｍａ
ｘ　　　　　　　１ｃ′ｒｎ ；　２１９ｎｍ（ｓｈ）、２２５ｎｍ（５５４，１）、
　　２３２．５ｎｍ（４８１，６）、　　２４２ｎｍ（
ｓｈ）。

（９）赤外線吸収スペクトル 臭化カリウム錠にて測定した赤外吸収スペクトルを第２
図に示す。その吸収極太値（波数ｃｍ（）を以下に示す
。

３４５０．２９６０，２９３０，２８７０．　２１５０
゜１７２０、　１６９０．　１６４０．　１６２０．　
１４５０゜１４３０、　１３８０．　１３７０．　１３
５０．　１３４０゜１３１０、　１２８０．　１２３０
．　１１９５．　１１７５゜１１５５、　１１３０．　
１１００．　１０５５．　１０３０゜１００５、　９９
５．　９９０．　９７０．　９５０．　９３５゜８６５
、　８４０．　８３０．　８００．　７７０．　７３５
゜７２５、　７１０．　６８５゜ （１０）水素核磁気共鳴スペクトル 重クロロホルム中で測定した水素核磁気共鳴スペクトル
を第３図に示す。

（１１）炭素核磁気共鳴スペクトル 重クロロホルム中で測定した炭素核磁気共鳴スペクトル
（第４図）の化学シフト（内部標準としてテトラメチル
シランを用いたδ値）は、 ２２２．６８．　２１６，５８．　１６５．５２．　１
４８．７５゜１３７．９３．　１３２，５９．　１３０
，７５．　１３０．０１゜１２３．２６．　１００．４
０．　７６．８０．　７３，１１゜７１．４３．　７０
．８９．　６９，２６．　６７．４８゜６４．９１．　
４９，４４．　４９．０１．　４７，８６゜４６．２４
．　４５，５７．　４４，３７．　４２，８１゜４０．
２８．　３７，５６．　３６．０８．　３３．４７゜３
１．６３．　３１．０５．　３０．６３．　２８．６０
゜２６．６３．　２６．４５．　２４，８６．　２１．
６９゜１８．００．　１４，５１．　１３．６７、　１
３，３２゜１２．８０’、　　１２，１２．　１１．５
０．　　９．６９゜８．１７．　５．８９　　である。

（１２）呈色反応；リンモリブデノ酸反応、硫酸、過マ
／ガ／酸反応に陽性。パウリ−反応、ライド／スミス反
応に陰性を示す。

本発明は後記の如（、抗腫瘍、血管新生抑制剤、殺虫剤
又は抗コクシジウム剤などの医薬品として期待される。

本発明化合物を医薬品として使用する場合には、単独ま
たは賦形剤と混合して注射剤、経口剤、坐剤等として投
与する。

賦形剤は薬剤学的に許容されるものであればいずれでも
よく、その種類および組成は投与経路や投与方法によっ
て決まる。例えば、液状賦形削としては水、アルコール
もしくは大豆油、ビーナツツ油、ゴマ油、ミネラル油等
の動植物油または合成油を用いることができる。固体賦
形剤としてはマルトース、シュクロースなどの糖類、各
種アミノ酸類、ヒドロキシフロヒルセることかできる。

注射剤の場合には、賦形剤としては、生理食塩水、各種
緩衝液、グルコース、イノシトール、マンニトール等の
糖類溶液、エチレ／グυコル、ポリエチレングリコール
等のグリコール類溶液が望ましい。また、イノシトール
、マンニトール、クルコース、マノノース、マルトース
、シュクロース等の糖類やフェニルアラニン等のアミノ
酸類の賦形剤と共に凍結乾燥剤となし、投与時に注射用
の適当な溶剤、例えば、滅菌水、ブドウ糖溶液、電解質
溶液、アミノ酸溶液等に溶解して静脈および筋肉内に投
与することもできる。

経口剤の場合には、前記液状賦形剤もしくは固体賦形剤
とともに錠剤、カプセル剤、粉剤、顆粒剤、液剤、ドラ
イシロップ剤等の形態にするのがよい。また、ペレット
剤として経皮、粘膜剤などの局所投与剤としてもよい。

製剤中における本化合物の含量は、通常０．００１〜１
重量％であり、好ましくは０．０１〜０，１重量％であ
る。例えば、注射剤の場合には、通常０６０１〜０．０
５重量％がよい。経口剤の場合には０．００５〜１重量
％、好ましくは０．０５〜０．５重量％とし、残部を賦
形剤とする。

投与量は、患者の年令、体重、症状、治療目的等により
決定されるが、−船釣には、非経口投与で０．１〜５μ
ｇ／ｋｇ／日、経口投与で０５〜３０μｇ／ｋｇ／日で
ある。また、マウスに対する抗生物質ＮＫ１３０１６２
の半致死量（ＬＤｓｏ　）は、６２５〜１２．ｓｍｇ／
ｋｇ　（ｉｐ）ノ間テアツタ。

試験例１゜ 本化合物のＨｅ　Ｌａ　Ｓ３培養細胞に対する増殖抑制
作用を検討した。Ｈｅ　Ｌａ　Ｓ、細胞を１．５Ｘ１０
’個／穴の割合で９６穴テストプレートに接種し１日後
本化合物を種々な濃度で培養液に添加した。添加３日後
細胞数を色素法により測定し、本化合物の種々の濃度に
おける！−１６：［、ａ　ｓ３細胞の増殖抑制率を求め
た。

結果を表１に示した。本化合物のＩＣ，。値は３　、１
６　ｍｃｇ　／ｍｌであり、Ｈｅ　Ｌａ　Ｓ、細胞に対
し強い増殖抑制作用を認めた。

表１ およびヒト大腸ガ／Ｉａ胞（ＳＷ１１１６）に対する増
殖抑制作用を検討した。マウス大腸ガン細胞を１．５Ｘ
１０３個／穴の割合で、またヒト大腸ガン細胞を３．５
Ｘ１０３個／穴で９６穴テストプレトに接種し３７°０
５％（？０２インキュベーター内で２４時間培養した後
、本物質を種々な濃度で添加した。添加後、それぞれ６
５時間後、９６時間後の細胞数を色素法により測定し、
本化合物の種々の濃度におけるマウス大腸ガン細胞およ
びヒト大腸ガン細胞の増殖抑制率を求めた。

結果を表２に示した。本化合物のＩＣ，。値は、マウス
大腸ガン細胞に対して、ｏ、ｏｏｃ＋４ｍｃｇ／ｍｌ以
下、ヒト大腸ガン細胞に対して０．０７５ｍｃｇ／　ｍ
ｌであり、両細胞に対し強い増殖抑制作用を認めた。

試験例２ 本化合物のマウス大腸ガン細胞（（？ｏｌｏｎ　２６　
）表２ ュベーター内で２４時間培養した後、本化合物を種々な
濃度で培養ｆｉ（で添加した。添力［後それぞれ３日後
、４日後の細胞数を色素法にて測定し、本化合物の種々
の濃度におけるマウス肺ガン細胞（ＬＬ）、ヒト肺ガン
細胞（ＰＣ，”−３）の増殖抑制率を求めた。

結果を表３に示した。本化合物のＩＣ，。値は、マウス
肺ガン細胞（ＬＬ）に町し、０．００１４ｍｃｇ　／　
ｍｌ　、　ヒト肺ガン細胞（ＰＣ＞３）に対し、０、８
１５　ｍｃｇ　／ｍｊであり、両細胞に対し、強い増殖
抑制作用を認めた。

表３ 試験例３ 本化合物のマウス肺ガン細胞（ＬＬ）およびヒト肺ガン
細胞（ＰＣ−３）に対する増殖抑制作用を検討した。

マウス肺ガン細胞を１．　ＯＸ　１０３個／穴、ヒト肺
ガン細胞２．０×１０３個／穴の割合で９６穴テストプ
レートに接種し、３７°Ｃ５％ＣＯ２インキヒトメラノ
ーマ細胞に対して４　、３２１　ｍｃｇ　／ｍｌと両細
胞に対し増殖抑制作用を示した。

表４ 試験例４゜ 本化合物のマウスメラノーマ細胞（Ｂ１６）およびヒト
メラノーマ細胞（Ｇ３６１）に対する増殖抑制作用を検
討した。マウスメラノーマ細胞を１、　ＯＸ　１０３個
／穴、ヒトメラノーマ細胞を２０×１０３個／穴の割合
で９６穴テストプレートに接種し、３７°Ｃ１５％ＣＯ
２イ／キーベーターで培養した後、本化合物を種々な濃
度で培養液に添力口した。添加７２時間後、細胞数を色
素法により測定し、本化合物の種々の濃度におけるマウ
スメラノーマ細胞、ヒトメラノーマ細胞の増殖抑制率を
求めた。

結果を表４に示した。本化合物のＩＣ３ｏ値は、マウス
メラノーマ細胞に対して０．０７２ｍｃｇ／ｍｌ、試験
例５ 本化合物の内皮細胞に対する増殖抑制作用を検討した。

牛大動脈の血管内皮泄胞を２×１０３個／穴の割合で９
６穴テストプレートに接種し、１日後本物質を種々な濃
度で培養液に添加した。

添加３目抜細胞数を色素法により測定し、本化合物の種
々の濃度における血管内皮細胞の増殖抑制率を求めた。

結果を５５に示した。本化合物のＩＣ５０値は０．０５
８ｍｃｇ／ｍＪであり、内皮細胞に対し強い増殖抑制作
用を認めた。

表５ 試験例６ 本化合物の血管新生に対する抑生作用をＮｌ、−ＡＱｉ
ｍｂｒｏｎｅらの家兎角膜内評価法（Ｊｏｕｒｎａｌ　
Ｎａｔｉｏｒ＋ａＣａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ　
　５２．　４１３．１９７４）を用いて検討した。即ち
、家兎の角膜中央部をメスを用（・て約２ｗｎ切開し、
角膜内にポケットを作製した。

ここに、あらかじめＲｏＬａｎｇｅｒらの方ｆＰ：（Ｎ
ａｔｕｒｅ２６３．７９７．１９７９）により作製して
おいたエーリソヒ癌粗抽出物１００　ｍｃｇを含む徐放
性ペレットを設置した。更に、本化合物０３−０３−８
ｌを含有する徐放性ペレットを上記ペレットに接して設
置し、設置後４．６．８および１００日目血管新生の程
度を観察した。その結果、エリノヒ癌粗抽出物による血
管の新生は本化合物の４　ｍｃｇ以上のペレット設置群
で４日目まで、２０　ｍｃｇ以上のペレット設置群では
８日目まで非投与群に比べ有意に遅延した。

試験例７゜ 本発明化合物の殺虫作用を次の方法により試験した。

（１）　　ナミノ・ダニ成虫（ケルセン耐性種）を供試
虫として茎葉虫体浸漬法により死滅率を検定した。

すなわち、処理前日に鉢植したインゲン苗の初生葉の２
葉上（他の葉は切除）に成虫を２０〜３０頭ずつ接種し
た。成虫の定着を確恒温室（２６±１°Ｃ；　Ｌ／Ｄ　
：　１６／　８　ｈｒ）に保持した。成虫の生死束数は
処理２日後に調べその際インゲンに対する薬害の有無も
調べた。

成虫の生死束数の調査後、生存成虫は除去し、一定面積
上の生卵数を調べ、恒温室に保持した。処理９日後に殺
卵効果を調べ　同時に薬害の有無も調べた。

（２）　　チカイエ力幼虫（感受性様）を供試虫として
虫体浸漬法により死滅率を検定した。

すなわち、所定濃度に希釈した薬液Ｑ、　１　ｍｌを井
水１０ｍ１と３令幼虫３頭のはいったプラスチックケー
ス（６穴プレート；１穴の直径３５１＋０１）に所定濃
度になるよう滴下処理した。

滴下後、静かに攪拌し、固形飼料を与えて恒温室に保持
した。処理３日後、６日後と９日後に生死束数を調査し
た。試験は１区３連制で実施した。

結果を表６に示す。この表から明らかなように本発明化
合物は殺ダニ、殺蚊作用を有する。

表６゜ 試験例８ 本発明化合物の抗コクシジウム作用を家禽のコクシジウ
ムによる生存率及び盲腸病変程度により検討した。即ち
、家禽の詳化後、８日令のブロイラー雄雛を次の３群に
分は試験を行った。

１）コクシジウム非感染・抗生物質ＮＫ１３０１６２非
投与群５羽　２）コクシジウム感染・抗生物質ＮＫ　１
３０１６２非投薬群５羽　３）コクシジウム感染・抗生
物質ＮＫ１３０１６２投薬群３羽。

コクシジウム感染は飼料給与と同時に１羽当り５Ｘ１０
’個のＥｉｍｅｒｉａ　Ｔｅｎｅｌｌａの胞子形成オー
シストを経口投与した。抗生物質ＮＫ１３０１６２の投
与は、飼料中に抗生物質ＮＫ１３０１６２をｓ　ｏ　ｐ
ｐｍの割合で添加した飼料を屠殺時まで連日与えた。

計価は３群について試験期間中（８日間）の生存率につ
いて検討した。また、投与後８目子に雛を屠殺剖検し盲
腸病変程度を観察してコクシジウム症の程度を観察した
。盲腸病変の程度は、正常から病変の悪性度の程度が高
くなるに従い度数を０〜４と５段階設定し、次のような
判定基準とした。

（０）・・・・・・盲腸は全く正常 ＋（１）・・・・・・盲腸の形は正常。内容物はやや流
動性を帯び色も黄色かがる。

盲腸粘膜は部分的に軽度の腫張があ り白っぽくなる。

＋（２）・・・・・・盲腸の形はほぼ正常。粘膜の腫張
は全面的にみられる。内容に出血はな く、粘液は黄色みをおびネＬ色してい る。粘膜内には少数の白色点壊死巣 や出血斑が見られる。

＋ｌ−＋（３１・・・・・・盲腸の萎縮・変形は明瞭で
直腸よりもやや長い程度となる。正常な内容 物は全くな（凝血または灰白色チー ズ状の変性物が充満していることが 多い。盲腸壁の肥厚は顕著でもろく なり、点状出血斑がまだ残っている こともある。病変は盲腸基部まで達 するが、直腸までは達しない。

曲（４）・・・・・・盲腸の萎縮・変形は顕著、一般に
ソーセージ状を呈し、その長さは直腸 と同じかまたは短かくなっている。

病変は直腸の１／３〜１／４位の所ま で達する。その他は＋ｌ＋（３１と同様である。

結果は表７に示すように抗生物質ＮＫ　１３０１６２は
Ｅｉｍｅｒｉａ　Ｔｅｎｅｌｌａによるコクシジウム症
に対して明らかな抗コクシジウム作用を示した。

表７゜ 非感染・非投薬群　　　　　　　５　　　１００　　　
　０．４感染・非投薬群　　　　　　　　５　　　２０
　　　　４感染ΦＮＫ１３０１６２投薬群　　３　　　
１００　　　２．３盲腸病変の度数は平均値である。

〔効　果〕

以上の結果から、本化合物は制癌作用、血管新生に対す
る抑制作用、殺虫作用、抗コクシジウム作用を有し、新
規な制癌剤、血管新生抑制剤、殺虫剤、抗コクシジウム
剤として期待される。

以下本発明の化合物の製法を実施例により示す。

実施例１ ５００Ｍ容三角フラスコに溶性テノン゛／２％、グルコ
ース０．５％、ペプト１０５％、酵母エキス０５％、燐
酸第２カリクム０．０５％、硫酸マグネシウム０．０５
％、大豆粉０５％の培地（ｐＨ７２）１００ｍｌを分注
し、１２００Ｃ”、２０分間オートクレーブにより滅菌
した。これＫＮＫ８６０２７９株（微工研条寄１７８５
号）の−白金耳を接種し、ロータリーシェーカーにて１
９０回転／分、２７°Ｃの条件下で２日間振盪培養した
。これとは別に５１容三角フラスコに前記培地１ノを分
注し、１２００ｃ、２０分間オートクレーブにより滅菌
した。

これに前記培養液２０ｍ１を移殖し、ロータリーシェー
カーにて１９０回転／分、２７°Ｃの条外下で２日間振
盪培養した。

次に、１４０１タンクにグリセリン４％、ポリペプトン
０５％、粉末酵母エキス０．３％、肉エキス０５％、塩
化ナトリウム０３％、硫酸マグ坏シウム０．０５％の培
地（ｐＨ７，００）１２０沼を分注し、１２０°０１３
０分滅菌した。このタンクに前記培養液２．４　Ｌを移
殖し、２７°Ｃで５日間通気攪拌培養した。

（通気１２０　Ｌ　／ｒｎｉｎ、　　２７０回転／分〕
得られた培養物２４０Ｌを濾過助剤３％を用（・濾過し
た。このようにして得られた菌体画分に５０Ｌのアセト
ンを加え、攪拌して抽出を行なった。濾過によりアセト
ン抽出液を集めた後、残直に３０Ｌのアセトンを加え再
び抽出を行なった。以上のようにして得られたアセトン
抽出物を減圧上乾固し、２２０ｇの褐色油状物質を得る
。これをクロロホルムに溶解した後、あらかじめクロロ
ホルムで平衡化したシリカゲルカラム（３，５Ｌ）Ｋか
け、クロロホルム−メタノール濃度を１００＝１．７５
：１と段階的にがえ溶出を行なった。

活性画分を集め減圧下濃縮乾固し、淡褐色の粉末２８．
８　ｇを得る。

これを再びクロロホルムに溶解し、シＩｊ力ゲルを加え
ドライゲルを作製する。これをあらかじめｎ−ヘキサン
−アセトン（９：１）で平衡化したシリカゲルカラム（
２，５Ｌ）にかけ、ｎ−ヘキサン−アセトン８：１．７
：３と段階的にかえながらクロマトグラフィーを行なっ
た。

活性画分を集め、減圧下濃縮乾固し、淡黄色粉末７６０
　ｍｇを得る。　これを水−メタノールより結晶化しｓ
　ｏ　ｏ　ｍｇの無色結晶を得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は、抗生物質ＮＫ１３０１６２の紫外部吸収スペ
クトルを示す。実１１！（→は、２０　ｍｃｇ　／ｍｔ
　のメタノール溶液、破＃（・・・・・）は２０　ｍｃ
ｇ　／ｍＡの０、　Ｉ　Ｎ塩酸−９０％メタノール溶液
、鎖線（−・−）は２０　ｍｃｇ　／ｍｌの０．ＩＮ苛
性ソーダー９０％メタノール溶液。 第２図は、臭化カリウム錠として測定した抗生物質Ｎ　
Ｋ　１３０１６２赤外吸収スペクトルである。 第３図は、抗生物質Ｎ　Ｋ　１３０１６２の重クロロホ
ルム中で測定した水素核磁気共鳴スペクトルである。 第４図は、抗生物質Ｎ　Ｋ　１３０１６２の重クロロホ
ルム中で測定した炭素核磁気共鳴スペクトルである。 特許出願人　　日本化薬株式会社

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される新規抗生物質ＮＫ１３０１６２
2. （２）ストレプトミセス属に属し、抗生物質ＮＫ１３０
   １６２を産生する能力を有する微生物を培地中で培養し
   、培養物中に抗生物質ＮＫ １３０１６２を生成蓄積せしめ、次いでこれを採取する
   ことを特徴とする抗生物質ＮＫ １３０１６２の製造方法
3. （３）抗生物質ＮＫ１３０１６２を有効成分とする抗腫
   瘍剤、血管新生抑制剤、殺虫剤又は抗コクシジウム剤。