JPH01131118A - 二本鎖ｒｎａの欠損状態を治療するための医薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 この発明は二本鎖ＲＮ＾（ｄｓＲＮＡ）の不足状態から
の回復のための医薬に関する。

〔従来の技術〕

天然ｄｓＲＮＡ＆どより演じられる宿主防御における多
様な役割が暴露されるとき、ウィルス性疾患、−船釣に
は慢性菌原体感染、癌の診断及び治療のための新規な方
法が出現する。例えば、エイズ（ＡＩＤＳ）　（レトロ
ウィルス感染／癌）の出願は、インターフェロン合成の
みならず、生物活性２−５Ａの生産、ＲＮアーゼし活性
及び種々の細胞性免疫機能を含めて本発明者がｄｓＲＮ
Ａにより触媒されることを見出した生物学的過程におけ
る徐々に深刻化する機能障害と関連する。本発明者は生
物活性ｄｓＲＮＡ又はｄｓＲＮＡに依存する酵素の特異
的減少が、特定の細胞において疾患の進行に寄与するこ
とを示す。

生物活性ｄｓＲＮＡが関与する経路における欠損状態は
また死に導く宿主防御系の種々の細胞性病変の核に位置
する。早い時期に、本発明者は、不適切な細胞内ｄｓＲ
ＮＡレベルの１つの結果（多くの内の）であるＨＩＶに
感染したＡＲＣ及びＡＩＤＳ患者のリンパ球中のＲＮア
ーゼＬの阻害物質を検出した。適切な配置の合成ｄｓＲ
ＮＡによる療法はこの阻害物質を除去し、このことは、
現在決定的な医療的介在を大きく拒み続けている慢性柱
々のウィルス血症を有する患者におけるウィルス濃度の
低下及び免疫機能の回復に関して本発明者が観察した臨
床応答の一部を説明することができる。従って、本発明
者は今や、種々の病的背景における種々のｄｓＲＮＡ欠
損状態を説明し、定量しそして修正することができる統
合的な発明を完成した。本発明者はまた、ある種のｄｓ
ＲＮＡ、例えばミスマツチｄｓＲＮＡが正常な細胞過程
のために必須の機能を維持するのを助ける天然ｄｓＲＮ
Ａを実際に代替することを見出している。この様なｄｓ
ＲＮＡ制御の不存在は、それが適当な外来ｄｓＲＮＡに
より修正されなければ、種々の異常な細胞過程を惹起す
ることがある。次に異常な細胞過程が慢性的ウィルス性
感染又は他の細胞内病原体感染、低下した免疫細胞機能
、及び最後には慢性疾患、そしておそらく死そのものを
導（。

■床前方莱 ウィルス感染はしばしば、免疫機能を直接攻撃するスト
レス及びウィルスと同様に多様な薬物による免疫系の部
分的撹乱に続いて起こる。例えば、ＡＩＤＳ　（後天性
免疫不全症候群）はヒト免疫不全ウィルスＨＩＶの感染
により惹起される免疫系の漸進的悪化に続いて起こる（
Ｃｏｆｆｉｎ等５ｃｉｅｎｃｅ　Ｖａｌ。

２３２、６９７頁、　１９８６）。なお、ＨＩＶウィル
スについては種々の命名者が存在し、ＬＡＶはフラスス
、パリ、パスツール研究所において単離されたＡＩＤＳ
ウィルスの名称であり、そしてＨＴＬＶ−１は米国、メ
リーランド、ベセスダ、Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎ５ｔｉ
ｔａｔｅｏｆ　１ｌｅａｌｔｈにおいて単離されたＡＩ
ＤＳウィルスの名称である。最近、ＨＩＶがこのウィル
スの一般的名称として使用されている。この明細書にお
いては、ＨＩＶウィルスと称し、あるいはＨＩ　Ｖ、＋
１ＴＬＶ　−ＩＩＩ又はＬＡＬをこれらを区別すること
を意図しないで用いる。さらに、この明細書中に用いる
ＨＩＶなる語は単離されているか否かを問わずＡＩＤＳ
を１しさせることに関連する他のすべてのウィルスを包
含する。

ＨＩＶ感染は進行性の疾患であるが、１つの期から他の
期への移行の速度は色々である。ＨＩＶに感染された無
症状の個体はリンパ腺症により特徴付けられる状ａ　（
ＬＡＳ又は前−ＡＲＣ）を出現することがある。患者は
Ｔ４細胞不足を示すことによりＡＩＤＳ関連コンプレッ
クス又はＡＲＣに進行し、そして後に抗原に刺激された
増殖及びＩＦＮ−Ｔ生産を行うリンパ球の能力の低下を
示す。これらの患者は種々の細胞性免疫機能、例えば遅
延皮膚過敏を失い、そして最後には完全にエネルギーと
なる。これらら宿主防御機構の破壊の証拠、例えば帯状
庖疹感染、口内カンジダ症（７０疫）、並びに長期熱、
寝汗、下痢、及び体重低下のごとき症状を示す。最後に
、これらの患者は深刻な日和見感染〔例えば１、ニュー
モシスチス・カリニイ証匹憇匹り旦辷但亘旦Ｕ肺炎〕を
経験し、そして次に成熟した＾ＩＤＳを有するものとさ
れ、１２月以内に約５０％が死ぬ。ＨＩ　Ｖウィルス感
染は、単にｄｓＲＮＡ欠損のレベルが顕著であるため例
示として選択される。多くの他の疾患、例えば無痛性ウ
ィルス感染が同様の欠損に関連し、そして本発明は予想
外に広い用途を有するであろう。

重量なことには、上記の典型的な進行は、ＨＩＶに感染
した患者、あるいはエプスタイン・バールすなわちＥＢ
感染、肝炎ウィルス感染、サイトメガロウィルス感染、
ヘルペス感染のごとき慢性疾患を有する他の多（の患者
の内で、臨床症候の顕著さを記載するものではない。Ｈ
ＩＶ感染は種々の異るタイプの細胞（例えば、血液細胞
、ダリア細胞）を出現せしめるであろう。幾らかの患者
はその最初の症状として神経の機能低下を生じさせる。

すなわち、種々の個体が非常に異る療法的要求を有し、
しかしすべてがおそら＜７４細胞からのＨＩＶの根絶を
要求するであろう。

ＡＲＣ患者を含む多くの異るウィルス感染に２つの一般
的な病理学的特徴が存在する。すなわち免疫不足の集合
及びウィルス感染の進行である（Ｆａｕｃｉ、　　Ｐｒ
ｏｃ、　　Ｎａｔｌ、　　八ｃａｄ、　　Ｓｃｉ、　　
ＬＩＳＡ、　　Ｖａ１８３．９２７８頁、１９８６）。

免疫不足のみを攻撃し、しかしウィルスの複製を制御す
ることに失敗する医療的介在は、特にその治療がＴ４細
胞を活性化する場合、逆効果のようである。例えば、Ｔ
ａｃレセプターを有するＴ−ヘルパー細胞はリンホカイ
ンＩＬ−２に対して応答性である。ＡＩＤＳ患者におい
ては、ＩＬ−２がＨＩＶ感受性細胞の拡大を生じさせ、
そして疾患の見かけ上の悪化を惹起する。

ウィルス感染、例えばＨ（Ｖ感染の直接的攻撃は、特に
、幾らかの患者においてＨＬＶ　”負荷”　。

を減少せしめそして寿命を延長することができるアジド
チミジン（Ａ　Ｚ　Ｔ）と称するウィルス性逆転写酵素
阻害物質により証明される幾らかの成功をもたらす。こ
れらの療法は常に望ましくない結果をもたらす、少数の
患者においては、ＡＺＴはまた、Ｔ４細胞の一時的上昇
及び遅延型過敏の出現により測定される場合、細胞性免
疫の一次的回復を生じさせる　（Ｆｉｓｃｈｌ等、ル止
」隙り一史エル世よ、１９８７年７月）。しかしながら
、逆転写酵素は有意な抗ウイルス効果を生じさせるのに
必要な投与量においては毒性であり、そしてそれ故に長
時間両えられない。患者の生活のために投与されるべき
抗ウィルス薬が必要である。

ＩＦＮは一船釣抗ウィルス化合物として及び抗−ＡＩＤ
Ｓ薬として有効でなく、これはおそらく、ＩＦＮが本発
明者によりここに暴露されるｄｓＲＮＡ関連欠陥に対す
る対策でないからである。確かに、ＡＲＣ／Ａ　ＩＯ３
患者はＩＦＮ経路における種々の“欠陥”、例えば欠陥
のある酸惑性ＩＦＮの生産及び医学文献に十分に記載さ
れているＩＦＮ−ｒの適切な星の生産、を有する。早く
から、本発明者は、ＡＲＣ及びＡＩＤＳ、患者における
これら種々のＩＦＮ関連欠陥が全体として又は部分的に
、リンパ球中の正常なＲＮアーゼしく末端経路介在物質
）の欠を員に関連すると結論した。このことは本発明者
の１９８７年３月３日に出願された米国出願ｍ　０２１
，３７２に記載されている。ｄｓＲＮＡ−（Ｌ存性２−
５Ａシンセターゼは＾ＲＣ／Ａ　Ｉ　ＤＳ及び他のウィ
ルス性血症を有する個体の血液リンパ球において上昇す
るが、本発明者が見出したところによれば、同じ血液細
胞が低下したレベルの真正な２−５Ａ及び低いＲＮＮア
ーゼを示す（下記参照のこと）。本発明者は低いＲＮア
ーゼし活性と２−５Ａの光親和性ルベル化類似体に結合
することができる少量のＭｒ　８０，０００蛋白質とを
関連付けた。本発明者の発見は閉じられたｄｓＲＮＡ経
路並びにＲＮＮアーゼの相体的不存在及び／又は阻害と
一致する。

ＨＩ　Ｖ及び他のウィルスに対する免疫化並びに受働抗
−ＨＩＶ抗体の使用もまた、それぞれウィルス疾患の予
防又は治療のために考慮されるが、しかしかなりの限界
を有する。例えば、ＨＩＶ（及び特にインフルエンザウ
ィルス）はひそかに容易に細胞に感染することができる
。本発明者はまた、前記の特許出願において、一般にウ
ィルスに対する、そして特にしトロウィルスに対する抗
体形成を増強するためのｄｓＲＮＡの役割を記載した。

本発明者はここに、二本鎖ＩＩＮ＾（ｄｓＲＮＡ）が、
ＨＩ　Ｖのごとき種々の亜急性／慢性ウィルス感染のウ
ィルス性病変及び免疫性病変の両者に対して効果的であ
る分子の第一の群を構成することを主張する、新しい現
象を記載する。これらの欠陥は、慢性ウィルス感染に対
する今日利用可能な療法の共通の限界である体機能への
悪影響を伴わないで、レーザーの様な正確さでこれらの
欠陥を修正することができる。本発明者は次の様に結論
する。決定的でなく且つ無活性なウィルス感染を有する
患者はしばしば活発な細胞内ｄｓＲＮＡ依存性経路に特
異的な欠陥を有し、これは外から補給されたｄｓＲＮＡ
により少なくとも部分的に逆転され又は改善され（これ
は第１図のフローチャートにおいてグラフ的に説明され
る）、そして、治療中の又はその市のこれらの経路をモ
ニターすることにより、個の患者又は特定の疾患に要求
されるｄｓＲＮＡ置換療法の程度を測定するための新規
で効果的な方法を提供する。

宿主の防御に関連する必須の酵素は活性活性の発現のた
めにｄｓＲＮＡを必要とする。自然の細胞内ｄｓＲＮＡ
のレベルが低過ぎる場合、これらの酵素は外来ｄｓＲＮ
Ａにより活性化され得る。ｄｓＲＮへの多様な作用の一
部は、ｄｓＲＮＡ−依存プロチインキナーゼ、ｄｓＲＮ
Ａ−依存２−５Ａシンセターゼ及び２−５Ａ−依存ＲＮ
アーゼＬを含む細胞内介在物質の一部を介して機能する
全範囲のＩＦＮ、すなわちα、β及びｙ−ＩＦＮの合成
を誘導するその能力に由来する。Ｌｅｎｇｙｅｌ（＾ｎ
ｎ、　Ｒｅｖ、　Ｉｌｉｏｃｈｅｍ、　Ｖｏｌ　５１＋
２５１頁、１９８２）に総説されているように、これら
のｄｓＲＮＡ−依存性酵素はＩＦＮに帰することができ
る多くの生物学的活性を行うことができる。例えば、２
−５Ａ−シンセターゼの発現をブロックするアンチセン
スＲＮＡの生産は種々のウィルスによる感染に対する動
物細胞の十分な感受性を生じさせる（Ｂｅｎｄｅｔｔｉ
等、Ｐｒａｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ。

ＬＩＳＡ　Ｖｏｌ、　　８４．６５８頁、１９８７）。

ｄｓＲＮＡで活性化されたプロティンキナーゼは蛋白質
合成を阻害するｅｌＦ２をリン酸化し、これはまたウィ
ルス蛋白質を分解する蛋白質分解活性を有する。ｄｓＲ
ＮＡにより活性化された２−５Ａシンセターゼは２−５
Ａを合成し、この２−５ＡはＲＮＮアーゼを活性化し、
本発明者が示唆する経路は種々の動物ウィルスの阻害に
おいて、及び細胞増殖制御（これからの逸脱は腫瘍の形
成を導くであろう）において必須の役割を演する。２’
−５’オリゴアデニル酸は、はとんどのｄｓＲＮＡに特
徴的な正常な３　’　＋　５　’ホスホジエステル結合
が新しい生物学的性質の獲得を伴って新規なホスホジエ
ステル結合により置き換えられている点において異常で
ある。

ｄｓＲＮＡの　ウィルスゞ ｄｓＲＮＡは抗ウイルス状能のよく知られたｍＷ動物質
ある（Ｍａｒｃｕｓ等、Ｎａｔｕｒｅ、　Ｖｏｌ、　６
６＋　８１５頁、１９７７）、同様に、ｐｏｌｙ（八）
：ｐｏｌｙ（Ｕ）はＩＦＮを誘導することなく抗ウイル
ス状態を生じさせた。しかしながら、天然ｄｓＲＮＡ制
御物質が存在し、そしてそれ故に、実際のｄｓＲＮＡ欠
…状態が病原的エピソード〔ウィルス、真菌、原生動物
又は細菌の侵入等、特に、それらの生活環の価値ある又
は必要な部分として細胞内（ヒト）に存在するもの〕に
特に関連するヒトにおいて共通であることは、本発明者
のこの発明の前には知られていなかった。

ｄｓＲＮＡの　　殖 １００個以上の新鮮なヒト腫瘍検体の４２％が、軟寒天
中での研究において、ｄｓＲＮＡにわずか１回暴露され
た後に、！ＩＩ瘍細胞コロニー形成の５０％以上の減少
を示すことを、本発明者は前から見出している　（Ｊ、
　ＩＦＮ、　Ｒｅｓ、　Ｖｏｌ、　６．３７３頁、１９
８６）。

これらの細胞はｄｓＲＮＡを欠損している。本発明者は
また、種々のヒト腫瘍セルラインにおける独立のＩＦＮ
及びｄｓＲＮＡ感受性を記載し、そして次のことを見出
した。すなわち、ヌードマウス中で増殖したヒト腫瘍は
ｄｓＲＮＡに感受性であり、ｄｓＲＮＡ療法は幾らかの
腫瘍（例えば腎臓腫瘍）に対して有効であり、そして動
物は正常な生活をした（公表されたヨーロッパ特許出願
０．１１３．１６２を参照のこと）、この明細書におい
て本発明者は、ｄｓＲＮＡの投与対して二次的な検出可
能なＩＦＮ又はＩＬ−２の誘導とは反対に、臨床応答と
ｄｓＲＮＡ−酵素活性化との間の強い関連性を報告する
。

ｄｓＲＮＡの　言１１Ｌｉ 本発明者は早くから、ｄｓＲＮＡがヒト白血病細胞に対
するヒトナチュラルキラーＮＫ細胞溶解活性を増強する
ことを報告している。ＮＫの増強のためのｄｓＲＮＡの
構造的要件は、２−５Ａシンセターゼ活性化及びＴＦＮ
誘導のために必要な要件と平行的である。

ｄｓＲＮＡによ　　　　れる゛　ｋ丑肌剛５ｕｌｌｏ等
（釦旦、　Ｖｏｌ、　４３．７９３頁、１９８５）は、
ｆｏｓ及びｗ＋ｙｃと称される発癌遺伝子を含有する休
止繊維芽細胞中のコンピテント（ｃｏｍｐｅ　ｔｅｎｃ
ｅ）遺伝子をｄｓＲＮＡが誘導することを証明した。こ
の明細書において使用する場合、“コンピテント遺伝子
”とは、増殖、成長等のごとき生活作用を調節するため
に必要とされる作用を有する細胞中の遺伝子を意味する
。ｄｓＲＮＡによるＩＦＮ−β遺伝子誘導はｄｓＲＮＡ
への細胞の暴露後に除去される制御蛋白質を用いる（Ｚ
ｉｎｎ等、Ｃｅ１ｌ、　Ｖｏｌ、　４５．６１１頁、１
９８６）。

本発明者は、生物学的活性のためには、外から補充され
たｄｓＲＮＡ、例えば異種性核ＲＮＡ又はｐｏｌｙ（Ｕ
）と複合体を形成したｍＲＮＡが天然の非ウィルス性の
細胞内ｄｓＲＮＡを模倣することを決定した。例えば、
本発明者は最近、インビトロブ２−５Ａシンセターゼを
活性化することができるｌ１ｅｌａ細胞核中のＩＦＮ−
誘導性ｄｓＲＮＡを発見した。動物の進化の環において
はるかに遡る細胞性免疫の出現は、細胞分化、特にＩＦ
Ｎにより促進される細胞分化の実行へのＩＦＮ／ｄｓＲ
ＮＡ分子の進化の段階を設けており、本発明者は、ｄｓ
ＲＮＡ欠損状態の本発明者の定義の段階をセットする他
の制御蛋白質により促進される分化を行うことがｄｓＲ
ＮＡには可能であるという、さらに−船釣な洞察を確立
した。

〔発明の具体的な記載〕

本発明者はこの明細書において、ＨＩＶ等のごとき種々
の亜急性／慢性ウィルス感染のウィルス性病変及び免疫
性病変の両方に対して有効な分子の第一群を二本鎖ＲＮ
Ａ　（ｄｓＲＮＡ）が構成することを主張する新規な現
象を記載する。これらの欠陥は、慢性ウィルス感染に対
する現在利用可能な療法の共通の限界である他の体機能
への不都合な影否を伴わないでレーザーの様な精確さで
修正され得る。

本発明者は次の様に結論する。決定的でなくそして無活
動のウィルス感染を有する患者はしばしは活性な細胞内
ｄｓＲＮＡ−依存経路に特異的な欠陥を有し、これは外
部から供給されたｄｓＲＮＡにより少なくとも部分的に
は逆転され又は改善され（これは第１図のフローチャー
トにおいてグラフ的に説明される）、そして治療前又は
治療中にこれらの経路をモニターすることにより、個々
の患者又は特定の疾患に要求されるｄｓＲＮＡ置換療法
の程度を測定するための新規で効率的な方法が得られる
。

この発明は、患者のサンプル中のｄｓＲＮＡ欠…状態欠
失状態、この欠損を（もし存在するとすれば）定量する
方法を提供し、外来ｄｓＲＮＡを場合によってはリンホ
カインとの組み合わせにおいて投与することにより、同
定されたｄｓＲＮＡ欠損を回復するための療治を提供す
る。典型的には、ｄｓＲＮＡの欠損状態は免疫系の成分
細胞内で、該成分細胞が増殖又は分化の過程にあるか否
かにかかわらず証明される。ｄｓＲＮＡの欠損は例えば
、免疫系の成分細胞が生物活性ＲＮアーゼＬの十分なレ
ベルを維持することができないことにより証明される。

治療の前、治療中又はその後における細胞内ｄｓＲＮＡ
−依存経路のモニターにより、臨床医が個体ベースで要
求されるｄｓＲＮＡ置換療法の程度を決定することが可
能となる。この明細書において、“介在物質″（ｍｅｄ
ｉａｔｏｒ）とは、ｄｓＲＮＡの存在により開始される
特定の生化学的機能に影響を与える任意の細胞内成分（
例えば、特定のオリゴヌクレオチド、蛋白質、ｄｓＲＮ
Ａの単独又は組み合わせ）として作用的に定義される。

この様な生化学的機能は、単−細胞又は全体（生物体）
レベルで宿主防御機構を強化するのに寄与するであろう
。

この発明の治療法に感染性の状能は、一般に、細胞内ｄ
ｓＲＮＡレベルの欠陥が健康な個体に比べて正常な限界
より低い状態であり、ｄｓＲＮＡ欠陥は組織病変を生じ
させ、そして／又は細胞内病原体の存在と連係して又は
それと共存しての異状に低いｄｓＲＮＡレベルの存在下
においてである。さらに特定の状態又はＭ！Ｌ織病理及
び構成的症状にはウィルス感染、例えばレトロウィルス
感染、例えばＨＩＶ、ヘルペスウィルス群、パラミキン
ウィルス、ライノウィルス、肝炎、及び慢性疲労症状が
含まれる。その他には、コンピテント細胞が増殖又は分
化の過程にあるか否かにかかわらず免疫系の病気及び癌
細胞の制御されない増殖が含まれる。

“ミスマツチｄｓＲＮＡ”は、相補鎖間の水素結合（基
塩重層）が相対的に無傷であるもの、すなわち２９個の
連続する塩基中に平均１個未満の塩基対において中断さ
れているものを意味する。ミスマツチは、リボヌクレア
ーゼによる消化に対するｄｓＲＮＡの弱い点を代表する
鎖の内側へのふくらみ（ｉｎ−ｐｏｕｃｈｉｎｇ）　　
（又は外側へのふくらみ（ｏｕｔ−ｐｏｕｃｈｉｎｇ）
　）によるＲＮＡ二重螺族の正常な構造の中断である。

従って、“ミスマツチｄｓＲＮＡ”なる語は理解される
べきである。

ｄｓＲＮＡは、ウラシル塩基又はグアニジン塩基を例え
ば５塩基中１個〜３０塩基中１個含有するポリイノシン
酸とポリシチジル酸との複合体、ｐｏｌｙｌ、　Ｐｏ１
ｙ　（Ｃ４−２９Ｘ　７１１又はＧ）であることができ
る。

ｄｓＲＮＡは一般式ｒｌｎ−ｒ　（ＣＩｚＬＩＬである
ことができる。ｄｓＲＮＡの他の好ましい例を後に記載
する。

好ましいミスマツチｄｓＲＮＡ、すなわちｒｌ、・ｒ（
Ｃ，□、Ｕ）ｎにおいて、６〜１２塩基対の中断されて
いない−続きから成る領域、すなわち０．５〜１回転の
ＲＮＡ螺族のは、リンホカインの放出を惹起するバイオ
トリツガ−（ｂｉｏｔｒｉｇｇｅｒ）として、及び天然
抗ウイルス経路を構成する酵素のための必須の細胞内コ
ーファクターとしての役割を果す。

ウラシル残基から成るミスマツチ領域は、ｄｓＲＮＡの
加水分解を促進しそしてこれによって毒性を回避するた
めに、ポリピリミジン中に規則室に挿入される。

この発明において使用するのに好ましいミスマツチｄｓ
ＲＮへはｐｏｌｙ（Ｃ，＋Ｇ）　（式中ｎは４〜２９の
整数である）から選択されたコポリヌクレオチドに基礎
を置き、そしてポリリボシチジル酸（ｒＣ，）鎖にそっ
て不対合塩基（ウラシル又はグアニジン）を４人してｒ
Ｌ・ｒＣ＋ｓを変形することにより形成されるポリリボ
イノシン酸とポリリボシチジル酸との複合体のミスマツ
チ類似体である。あるいは、ｄｓＲＮＡは、ポリリボイ
ノシン酸（ｒｌ、、）のリボシル主鎖を例えば２′−Ｏ
−メチルリボシル残基の含有により変形することによっ
てｐｏｌｙ（１）　、９０１！ＩＩ（Ｃ）　ｄｓＲＮＡ
から誘導することができる。式ｒ１．・ｒＣ，で示され
るこれらのミスマツチ類似体は、その好ましいものは一
般式ｒｌ、、・ｒ　（ＣＩ＋−１１＋ｕ）ｎ、及びｒｌ
、　Ｈｒ（Ｃｚｑ、Ｇ）１１で示され、Ｃａｒｔｅｒ及
びＴｓ’。

の米国特許出願！’ｈ　４．１３０，６４１及びｌ１ｍ
　４，０２４，２２２中に記載されている。この明細書
中に記載されているｄｓＲＮＡは一般にこの発明に従っ
て使用するのに適当である。ある場合には、相補的オリ
ゴヌクレオチド・テユプレソクス（螺旋）も置換療法に
おいて十分である。

この発明において使用するためのミスマツチｄｓＲＮＡ
の他の例には次のものが含まれる。

ｐｏｌｙ　　（夏）　　・　ｐｏｌｙ　　（Ｃ４，Ｕ）
ｐｏｌｙ　　（１）　・ｐｏｌｙ　　（Ｃ７１Ｕ）ｐｏ
ｌｙ　　（［）　・ｐｏｌｙ　　（ＣＩ３．ＩＩ）ｐｏ
ｌｙ　　（１）　・ｐｏｌｙ　　（Ｃｚｚ、Ｕ）ｐｏｌ
ｙ　　（１）　・ｐｏｌｙ　　（Ｃ２１１，Ｇ）ｐｏｌ
ｙ　（１）　・ｐ、ｏｌｙ　（Ｃ２９，Ｇ）及びｐｏｌ
ｙ　　（＋）　・ｐｏｌｙ　　（ＣＩ、）　　２３Ｇ＞
Ｐｄ５ＲＮＡ　−’　７ホカイ７（Ｊ） ｄｓＲＮＡはその生物学的作用の有意な部分をＩＦＮに
より介在される特定のリンホカイン系を介して生じさせ
るので、本発明者は、これは（１）ＩＦＮ−欠損細胞に
おいてＩＦＮを誘導するはずであり、そして（ｂ）関連
あるｄｓＲＮＡ−依存性酵素介在物質を活性化するはず
であると判断する。

細胞性ｄｓＲＮＡは外から適用されたＩＦＮに対して応
答しない細胞においては非誘導性である。

ｄｓＲＮＡがＩＦＮ系を介してのみ機能するのであれば
、そしてｄｓＲＮＡが細胞中に過剰に存在すれば、ＩＦ
Ｎのみの過剰がＩＦＮとｄｓＲＮＡとの組み合わせと同
様に高い生物活性を生じさせるであろう。

しかしながら、本発明者は今やｄｓＲＮＡ−ＩＮＦ相剰
の多くの例及び非相剰の少数の例を見出したから、前記
のことは比較的まれな条件に違いない。例えば、本発明
者は、ヒト膀胱癌、肺癌及び繊維肉腫の増殖の阻害にお
いてｄｓＲＮＡはヒトＩＮＦ−α、−β、又は−Ｔと相
乗的であることを見出した。本発明者はこれらの結果を
１５種類の他のヒトセルラインに拡張し、１つのセルラ
インのみが抗増殖相乗性を示すことに失敗した。類似の
抗１１ｉ瘍相乗性がヌードマウスに移植されたヒト腫瘍
において見られることを本発明者は観察し、そして臨床
的に、腎腫瘍及びＣＭＬの両者における抗癌療法として
ＩＦＮとｄｓＲＮＡとの組み合わせがいずれか一方のみ
に比べて卓越することを一貫して観察した。

」■Ｕ欠■秋皿 プロトタイプ経路として、２−５Ａシンセターゼ／ＲＮ
アーゼＬ経路は１又は複数のｄｓＲＮＡ、２−５Ａ、リ
ンクした酵素及び阻害物質を含む。

ｄｓＲＮＡ−依存性２−５Ａシンセターゼの産物である
２−５ＡがＲＮＮアーゼ活性のための必要な因子である
という点において、ｄｓＲＮＡとＲＮアーゼとの間に直
接の生化学的連絡が存在する。下記の例は、外から補給
されたｄｓＲＮＡにより回復し得る、ｄｓＲＮＡに介在
される経路の欠損の可能性ある多くの種類の内の少数を
例示しようとするものである。

第１図のフローチャートはまた、宿主の回復を”Ａ＜　
ｄｓＲＮＡの十分さと、宿主の不健全さを導くｄｓＲＮ
Ａの欠損との間の関係を示す。生物活性ｄｓＲＮＡは細
胞内で生産され、又は抗ウイルス状態並びに免疫細胞の
分化及び宿主の回復を導くなんらかの事象により導入さ
れる。

２−５Ａシンセターゼのインビトロ測定は２−５Ａシン
セターゼのインビボ活性を反映しないため、この測定の
価値は限定される。従って本発明者は、ミスマツチｄｓ
ＲＮＡ療法の前後における病原体に感染された患者から
、及び健康な個体の末梢血単球細胞（ＰＢＭＣ）からの
２−５Ａを抽出しそして定量する方法を開発した。２−
５Ａの濃度は、ｐｏｌｙ（Ｕ）　（”Ｐ　）　ｐＣｐを
分解するためにアフィニティー精製されたＲＮＮアーゼ
を活性する２−５Ａの能力により決定することができる
。

ゑ−上−１ ウィルスに感染された個体のＰＢＭＣ抽出物中の２−５
Ａシンセターゼ及びＲＮアーゼの細胞内２−５Ａ濃度及
びインビトロ活性 カラムＮｏ　　　　　　　　　　　１２３４５＃ＩＡＩ
ＤＳ　　　　　Ｏ４９＜０．２　　　　２６０　　　　
−　　　　　　　−＋　　　　４　　　　１０５　　　
　　ＮＯ−ＫＳ　　　　９　　　　　４　　　　＜０．
２　　　　　　　　　　−１５　　　　１０　　　　１
．８　　　　　　　　　　　１１１９　　　　２１　　
　　０．８　　　　　　　　　　−２４　　　　２６　
　　　＞１０．０　　　　　　　　　　　１１１１２８
　　　　２０　　　　＞１０．０　　　　　　　　　　
　１１１１＃２　ＡＩＤＳ　　　　−１２０５＜０．２
＋　　　　　　０　　　　　　１８０　　　　　　ＮＤ
Ｋ３　　　　　４　　　　　　１１７　　　　　１．４
＋　　　　　　８　　　　　　　１９　　　　　２．４
ＰＣＰ　　　　　２１　　　　　　　ＮＤ　　　　　　
６．８２６　　　　　　９　　　　　５．４ ＃３＾ＲＣ−６１１＜０．２ ２　　　　　　　１３　　　　　　ＮＤ４　　　　　　
　１９　　　　　　＜０．２１７　　　　　　３　　　
　　１．８ ＃４　＾ＲＣＯ１３０＜０．２ ２　　　　　　１８５　　　　　　Ｎ０４　　　　　　
１８　　　　　０．４ １３　　　　　　　　　　　　　ＮＯ＜０．２２２　　
　　　　　　　　　　Ｎ口　　　　　　　＞１０．０＋ １１＋ １１ １１１１　＋ １１１１　＋ ＋ １１１１　＋ ＃５ＬＡＳ　　　　　Ｏ３００，６２８０−−４３６＜
０．２　　　　　　　　　　　　　　　−９　　　　　
　１２　　　　　１．０　　　　　　　　　　　　　　
　１１１７　　　　　　２１　　　　　３．０　　　　
　　　　　　　　　　　１１１１（ａ）蛋白質■当り２
−５Ａに扉入されたＡＴＰ（ｎｍｏｊ！６）、ｐｏｌｙ
（１）　：　ｐｏｌｙ（Ｃ）−アガロース測定により決
定、標準偏差９％、ＮＤ＝決定されず。

（ｂ）ｎ　ｍｏｌｅ　７ｇ蛋白質、コアー−セルロース
測定（２回）により決定、標準偏差２０％（ｃ）ｄｐｍ
１５０ｘ蛋白質、放射結合測定において決定（２回）（
カラム３）、標準偏差２０％（ｄ）ｒＲＮ＾開裂測定に
おいて決定（カラム４及び５）、２回独立して測定、特
異的開裂生成物（ＳＣＰ）の生成をゲルの写真のデンシ
トメーター追跡により決定した。ｓｅｐの生成を１８３
及び２８　Ｓ　ｒＲＮＡで除して１００を乗じたもの。

−１０；＋、１０〜３０；什、３１〜６３；→、６４〜
８５；骨；８６〜１００゜ 辺二ｊ矢 ヘパリン処理した末梢血を１０人の健康な個体及び５人
の同性愛の男性患者から得た。これらはＬＡＳ　、八Ｒ
Ｃ及び八ＩＤＳを有することがＣｅｎｔｅｒｓ　ｆｏｒ
Ｄｉｓｅａｓｅ　Ｃｏｎｔｒｏｌにより決定された。こ
の研究に関連する患者（患者＃１〜５）の臨床的、ウィ
ルス学的及び免疫学的特徴は、それぞれ患者１０，８゜
１．７及び２としてＬａｎｃｅｔ、　１９８７年６月６
日の論文において、本発明者によりすでに特徴付けられ
ている。ＰＢＭＣはフィコール−ハイバク（Ｆｉｅｏｌ
ｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ）上で単離した。Ｌ９２９及びＩＩ
Ｌ９２９　（Ｌ９２９のＲＮＮアーゼ−欠損サブクロー
ン）細胞は単層培養物中に保持した。Ｌ９２９細胞及び
１１１９２９細胞からの細胞質抽出物をグリシン緩衝液
中に調製し、そしてＰＢＭＣ抽出物をＮＰ４０溶解緩衝
液中に調製した。

抽出物の蛋白質の濃度を１０〜１５ｕｇ／μｌとした。

ＫＳ＝カポシ（Ｋａｐｏｓｉ）肉腫；Ｐ　ＣＰ　−ニー
　ユーモシスチス・カルニー（力咀ｙ■旦ＬＩ暉り旦虹
１月工）肺炎。

２−５Ａシンセターゼ（カラム１）の活性をＰＢＭＣ抽
出物（５０返蛋白質／測定）中でｐｏｌｙ（Ｉ）　：ｐ
ｏｌｙ（Ｃ）−アガロースを用いて決定した。２−５Ａ
をＰＢＭＣ抽出物（１００ｆｆ蛋白質）のエタノール可
溶性画分（７０Ｖ／Ｖ％エタノール）から単離した。次
に、エタノール抽出された２−５Ａを凍結乾燥し、そし
て水（２０Ｉｉ）に再溶解した。ＰＢＭＣ抽出物中に存
在する細胞内２−５Ａの濃度（カラム２）は、ＲＮアー
ゼし源としてＬ９２９細胞抽出物を用いるコアー−セル
ロース測定において、真正な２−５Ａから得られた換算
曲線から決定した。

この測定における２−５ＡによるＲＮＮアーゼ−活性化
はｐｏｌｙ（Ｕ）　（”Ｐ　）　ｐＣｐの酸可溶性断片
への転換に基く、対照実験（２−５Ａの非存在下）にお
いて、添加された１７７００ｄｐｍのｐｏｌｙ（Ｕ）　
（”Ｐ）ｐＣｐ　（１，３μｃｔ／ｎ　ｔａｏｌｅ＞か
ら６５００ｄｐｍがガラス繊維フィルター上に保持され
た。＜　Ｉ　Ｘｌ０−１０Ｍの真正な２−５Ａの存在下
でｐｏｌｙ（Ｕ）　（”Ｐ　）　ｐＣｐはθ％分触され
、＞　Ｉ　Ｘｌ０−’の真正な２−５Ａの存在下でｐｏ
ｌｙ（Ｕ）　（”Ｐ　）　ｐＣｐは１００％分解された
。潜在ＲＮアーゼＬのレベルは２つの方法、すなわち（
ｉ　）２０．　ＯＯＯｄｐｍのｐｚＡｎ〔：１２ｐ　）
　ｐＣｐをＰＢＭＣ抽出物（５０ｐｇ蛋白質／測定）に
添加した後の放射能結合測定（カラム３）、及び（ｉｉ
）２−５Ａの存在下でのりボゾームＲＮＡ開裂測定（カ
ラム４）により測定した。Ｌ９２９細胞から調製された
抽出物（１５０ｇ蛋白質／測定）をＰＢＭＣ抽出物のエ
タノール可溶性画分５μｇ及びｌＸｌ０−”Ｍのｐ３＾
４の存在下、２０ｍの最終容量中で３０℃にて６０分間
インキュベートした。全ＲＮＡを抽出し、変性し、そし
て１．８％アガロースゲル上での電気泳動により分析し
た。臭化エチジウム染色されたＲＮＡバンドを紫外線の
もとて可視化だ。活性化されたＲＮアーゼのレベル（カ
ラム５）は添加された２−５Ａの非存在下でのりボゾー
ム開裂測定により決定した。

ＰＢＭＣ抽出物中の機能的２−５Ａの濃度は、健康なヒ
トについては０．３〜１．１ｎ　ｍｏｌｅ　７ｇ蛋白質
の範囲で量り、そしてミスマツチｄｓＲＮＡによる治療
前のウィルス感染患者からのＰＢＭＣ抽出物中では検出
可能レベル未満〜０．６ｎ　ｍｏｌｅ　７ｇ蛋白質であ
った（第１表、カラム２）。しかしながら、ミスマツチ
ｄｓＲＮＡ療法が進行するに従って、２−５Ａは１０．
０ｎ　ｍｏｊ！ｅ　／　ｇ蛋白質より高Ｌ／　ヘ／ｌ／
　ニ蓄積した。２−５Ａで活性化された部分積！！ＲＮ
アーゼＬがｐｏｌｙ（Ｕ）を優先的に開裂せしめるがし
かしｐｏｌｙ（Ｃ）を開裂せしめないことがすでに報告
されている。単離されたヒト２−５Ａは、真正な２−５
Ａと同様に、ｐｏｌｙ（Ｕ）を特異的に分解する様にＬ
　９２９細胞から又は健康なヒトのＰＢＭＣからのアフ
ィニティー精製ＲＮアーゼＮを活性化することができた
（第４表を参照のこと）。なお、ＰＢＭＣから２−５Ａ
を抽出するためにＴＣＡが使用される場合、ｐｏｌｙ（
Ｕ）分解（ＲＮアーゼし）活性に加えてｐｏｌｙ（Ｃ）
分解活性が抽出されたことが重要である。

このＴＣＡで抽出されるｐｏｌｙ（Ｃ）分解活性はプロ
テアーゼ消化又はさらなるエタノール抽出により除去さ
れた。ｐｏｌｙ（Ｃ）分解活性はすべてのヒトからのＰ
ＢＭＣのＴＣＡ可溶性画分中に見出されたが、しかし試
験された永久セルライン（すなわら、１ｌｅＬａ　Ｌ９
２９．ＨＬ９２９）のいずれかにも見出されなかった。

ｐｏｌｙ（Ｃ）分解活性はＰＢＭＣのエタノール可溶性
画分のいずれにおいても検出されなかった。

玉−主一犬 呼吸器シンシチアル（Ｓｙｎｃｉｔｉａｌ）ウィルスに
感染したＣＣＬ　２５細胞による感染中心の形成に対す
るｄｓＲＮＡの効果 Ｏｎ／ｙｄ　　　４９　、４４　、１５　、３３　　４
２．００．５ｎｇ／ｍ１　　３Ｂ、３６．２６，１６　
　３３．０　　２１．７１、Ｏｎ／ｄ　　　５４．４４
，４２．５３　　４８．５　　１５．５２．５ｘ／ｍ１
　　３７，３２，２４，３０　　３０．８　　２６．７
５．０μ／ｄ　　　２７　、１４　、１７　、１８　　
１９．０　　５４．８１０．０Ｉｔｇ／ｄ　　　１　、
１　、７　、５　　３．５　　９１．７＊：平均カウン
トを計算するために使用しなかったデータ。

ミスマツチｄｓＲＮＡ　（ｒｌ、ｒ（Ｃ＋ｉ＋Ｕ）ｎ）
の最高濃度２５μｇ／ｍｌはＣＣＬ　２５細胞に対して
非毒性であった。

（ａ＞２４ウエルプレート中４連のウェルのコンフルエ
ントＣＣＬ　２５細胞に、上に示された濃度で、ｄｓＲ
ＮＡを含有する維持培地１．５−を、Ｒ３Ｖ−感染細胞
をプレートする１時間前に再供給した。模倣処理細胞に
ｄｓＲＮＡを含有しない維持培地を再供給した。

（ｂ）懸濁液中４Ｘ１０’個のＣＣＬ　２５細胞を、５
Ｘ１０’ＰＦＵのＲ３Ｖを含有する合計容量１　ｍｌ中
に感染せしめた（Ｍｏｌ　＝　１２）。細胞の間欠的な
再懸濁を伴う３７℃での２時間のインキュベーションの
間にウィルスの吸収が生じた。この期間の終りにおいて
、懸濁液を維持培地中に１／１００に稀釈した。０．５
　ｍｆのアリコートの感染細胞懸濁液を各実験ウェル、
及び各感染中心一対照ウェルに直接添加した。すべての
培養物を３７℃にて５％ＣＯ□／９５％空気中で７２時
間インキュベートし、メタノールで固定し、そしてギー
ムザ（Ｇｉｅｍｓａ）により染色した。プラーク（感染
中心）を顕微鏡により観察した。

畦は、多重感染度、すなわち各標的細胞に感染せしめる
のに用いられるウィルス粒子の概数である。ＰＦＵはプ
ラーク形成ユニット、すなわち細胞毒性（死細胞）を計
数することによって決定されるウィルスユニットの数で
ある。

未処理動物から単離された組織中の２−５Ａの存在及び
ｄｓＲＮＡにより処理されたマウスからの組織中の２−
５Ａの蓄積についての報告は存在するが、ヒトの組織中
の２−５Ａの蓄積の第一報は存在しない。真正な２−５
ＡがＲＮＮアーゼに結合しそしてこれを活性化してｒＲ
ＮＡを高度に特徴的な開裂生成物（Ｓ　ＣＰ）に分解す
るようにすることが、よく確立される。従って、本発明
者は、ＰＢＭＣ抽出物から単離された２−５Ａの活性を
ｒＲＮＡ開裂測定において特徴付けた。ＲＮＮアーゼと
エタノール抽出２−５４とにより生ずる特異的開裂パタ
ーンは真正な２−５Ａの存在下で得られたそれと同じで
あった。これらの結果は、ウィルスに感染した患者への
ミスマツチｄｓＲＮＡのｉ、ｖ、投与により血液細胞中
の２−５Ａが検出可能な濃度より低い濃度から初まって
劇的に上昇することを示している。

退１１上山ｉＬ阪性 ＨＩＶに感染した個体におけるＲＮ７−ゼＬ活性の不存
在が確認され、そして拡張された（第１表、カラム３　
、４　、５）。２−５Ａにより活性化されたＲＮＮアー
ゼ−ｒＲＮＡに対する開裂特異性に基く鋭敏な方法が、
ｌ　ｍｌという少量の末梢血から単離されたＰＢＭＣの
抽出物中の活性化ＲＮアーゼの測定を可能にした。Ｌ９
２９セルラインのＲＮＮアーゼ−欠（貝サブクローン（
ＨＬ　９２９）をリボゾーム源として使用した。ＨＩ　
Ｖに感染された患者のＰＢＭＣ抽出物は、放射能結合測
定とおいて決定した場合健康な固体のそれよりも５〜７
倍低いレベルの潜在的ＲＮアーゼＬを有していた（第１
表、カラム３゜２４０〜２８０ｄｐｍ：１３５０ｄｐｍ
）。類似の観察がＷｕ等（ＡＩＤＳ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ
、　Ｖｏ１２．１２７−１３１頁、１９８６）により報
告された。放射能結合測定の適用は潜在的ＲＮアーゼＬ
の決定に関して、ミスマツチｄｓＲＮＡにより治療され
た患者において限定される。なぜなら、これらの患者か
らのＰＢＭＣサンプル中に存在する蓄積された２−５Ａ
　（第１表、カラム２）はＲＮＮアーゼ−の結合につい
て競争することができるからである。

第一に、活性化されたＲＮＮアーゼ−レベルが、外部か
ら添加された２−５への存在下ＰＢＭＣ抽出物によるｒ
ＲＮＡの特異的開裂を測定することにより決定された（
第１表、カラム５）。この測定を用い゛て、本発明者は
、治療前のＨＩＶ惑染感染のＰＢＭＣ抽出物中でＲＮＮ
アーゼ−活性化されなかったことを示した（第３図に示
すポリアクリルアミドゲル）。細胞内２−５Ａのレベル
がこれらのＰＢＭＣサンプル中で低いことを知った場合
（第３表、カラム２）、上記の結果は予想外であった。

しかしながら、試験されたすべての健康な個体からのＰ
ＢＭＣの抽出物は、幾らかの健康な患者における２−５
Ａが０．３Ａｍｏ１ｅ／蛋白質と低くても、ｒＲＮＡ開
裂測定において特異的開裂生成物を生産する活性化され
たＲＮＮアーゼ−存在を示した（ｍ３表、カラム５）。

治療前のＨＩＶ惑染感染からのサンプル中のＲＮＮアー
ゼ活性の不存在が、報告されているように（Ｃａｙｌｅ
ｔ等、影」」阻邦−ムーｌ旦０ユＶｏｌ　１４３．　１
６５−１７７頁、１９８４）　　２−５　Ａの競争阻害
物質の蓄積によるものではあり得ないことは確かである
。ＲＮＮアーゼ活性は真正な２−５Ａの添加によって回
復することができなかった（第１表、カラム４）。

次に、潜在的ＲＮアーゼＬのレベルが２つの独立した測
定により決定された。潜在的ＲＮＮアーゼ活性はｒＲＮ
Ａ特異的開裂測定において、しかし添加された２−５Ａ
の存在下で決定された（第３表、カラム４）。ミスマツ
チ治療の前に採取されたサンプル中で、試験された５人
の患者のいずれにおいても潜在的ＲＮアーゼ活性は検出
されなかった。

ｐ、八ｓ　（”Ｐ　）　ｐＣｐによるフォトアフィニテ
ーラベル法を用いて、）ＩＩＶ惑染感染のＰＢＭＣ中で
ＲＮＮアーゼ−失けているか又は変化しているか否かを
さらに決定した。事前のフォトアフィニティーラベル研
究により、ｐＪｎ　（”Ｐ　）　ｐＣｐに対する結合ア
フィニティー及びＮＲアーゼＬと同様の特異的ｐｏｌｙ
（Ｕ）エンドリボヌクレオチド分解活性を有するＭｒ　
８０．０００の蛋白質が同定された。ＰＢＭＣ抽出物中
に存在するＲＮＮアーゼ−アフィニティーラベルが１］
３Ａ４　（”Ｐ　）　ｐＣｐを用いて決定された。正常
個体からのＰＢＭＣ抽出物（５０Ｊｔｇ蛋白質）からの
ＲＮＮアーゼ−ＡＲＣ患者（ミスマツチｄｓＲＮＡ治療
前の患者）又はＬ９２９細胞抽出物（５０ｎ蛋白質）と
比較され、真正なｐ３＾４（Ｉ　Ｘｌ０−’Ｍ）の非存
在下又は存在下でのｐ３３Ａ　（３２Ｐ　）　ｐＣｐ　
（３０，０００ｄｐｍ。

３０００Ｃｉ／ｍ　ｍｏ　ｌ　ｅ）の添加の後にフォト
ラベルされた。正常固体からのＰＢＭＣ抽出物（１００
■蛋白質）からのＲＮＮアーゼ−２−５Ａコアー−セル
ロース上で精製し、そしてｐ、八４　（”Ｐ　）　ＰＣ
ｐ（３０，０００ｄｐｍ；３０００Ｃｉ　／　ｃｍ　ｍ
ｏ　Ｉｔ　ｅ）の添加後にフォトラベルした。

０℃にて９０分間のインキュベーションの後、サンプル
を氷冷した磁製スポットプレートに移し、そして２５４
ｎｍ　ＵＶＧ−１１Ｍｉｎｅｒａｌｉｇｈｔランプ（Ｕ
ｌｔｒａ−ｖｉｏｌｅｔ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社製）を２
ｃｍの距離（１，ＯＪ／　ｍ　）で用いて３分間光分解
した。蛋白質マーカー及びＭｒ　８０，０ＯＯＲＮアー
ゼＬの位置を決定した。

本発明者のフォトラベル研究により、ｐｚＡａ（”Ｐ　
）　ｐＣｐが健康なヒトからのＰｔｌＭＣの抽出物中の
Ｍｒ　８０，０００の蛋白質に共有結合的に連結された
ことが示された。しかしながら、慢性的的にウィルス感
染された患者からのＰＢＭＣの抽出物中では蛋白質はラ
ベルされなかった。同一の実験条件下で、Ｍｒ　８０．
０００の蛋白質はＬ９２９細胞抽出物中で特異的に光ラ
ベルされた。Ｐ３八４　（”Ｐ　］　ｐＣｐを含有する
インキュベーション混合物へのＩ）Ｊ４（Ｉ　Ｘｌ０−
”Ｍ）の添加がフォトラベル化を防止し、そして本発明
者に、フォトラベル化がＲＮアーゼしに対して非常に特
異的であるいう証拠を与えた。コアーセルロース法によ
り健康なヒトからのＰＢＭＣ抽出物から１１１製された
蛋白質を用いるフォトラベル化研究は、真正な２−４Ａ
の存在下でｐｏｌｙ（１１）を分解するが、しかしｐｏ
ｌｙ（Ａ）、ｐｏｌｙ（Ｃ）及びｐｏｌｙ（Ｇ）のいず
れも分解することができないＭｒ　８０，０００の蛋白
質への共有結合を示した。合わせ考えれば、これらの結
果は健康な個体のＰＢＭＣから精製され、そしてｐＪ＊
　（”Ｐ　）　ｐＣｐによりフォトラベルされた蛋白質
を確認する。

ミスマツチｄｓＲＮへ治療の後４〜１７週間で、慢性的
に感染した患者５人すべてからのＰＢＭＣ抽出物中に活
性化されたＲＮＮアーゼが最初に検出され、ミスマツチ
治療の１７〜２８週間後、５人すべての患者について活
性化されたＲＮアーゼし活性は健全な個体において観察
されたＲＮアーゼしレベルと同等であった（第１表、カ
ラム５）。活性化されたＲＮＮアーゼのレベルは同じサ
ンプルから単離された機能的２−５Ａの濃度との非常に
密接な関連性を示した（第１表、カラム２及び５と比較
）。

非常に興味あることには、患者＃１は、ミスマツチｄｓ
ＲＮＡ治療を停止した３週間後である２８週間目に、上
昇した細胞内２−５Ａレベル及び十分に活性化されたＲ
ＮＮアーゼを維持した（第１表、カラム２及び５）。

この明細書に記載される実験は、ＨＩＶに感染された５
人の患者が血液単核細胞中の共通の分子表現型：低下し
たレベルの２−５Ａ及び検出可能なＲＮＮアーゼ活性の
不存在を有することを示している。健康な個体の血液単
核球レベルは、２−５Ａレベルが概して高く、そしてＲ
ＮＮアーゼ活性が容易に検出し得る点において異る表現
型を示した。後者の表現型は機能的２−５Ａシンセター
ゼ／ＲＮアーゼＬ経路の予想されたそれと一層よく一致
する。正常な個体において、２−５Ａの定常状態のプー
ルは検出可能であり、この細胞内２−５Ａのかなりの部
分がＲＮＮアーゼと密接に会合するようになり、これに
よりＲＮＮアーゼを活性化するであろう。ここに記載さ
れる実験方法において次のことが明確に確立される。す
なわち、慢性的にウィルス感染されたヒトの血液単核細
胞においては、２−５Ａの細胞内レベルは検出限界より
低（、そして現在利用可能な投法により決定する場合活
性化されたＲＮＮアーゼは存在しない。

要約すれば、重要な発見は、２−５Ａシンセターゼ／Ｒ
Ｎアーゼし経路の欠損はミスマツチｄｓＲＮＡを用いる
治療により回復した。ＲＮＮアーゼのインビトロ活性は
ＰＢＭＣ抽出物に２−５Ａを添加することによっては回
復しなかったから、本発明者の結果は２−５Ａを伴わな
いＲＮＮアーゼ下白質の正常レベルによっては説明され
ない。ＲＮアーゼ蛋白質は存在しないか又は阻害される
はずであり、２−５Ａのフォトアフィニティーラベル化
類似体による結合の欠１員により確認される結論である
。

この明細書に記載する治療された患者において、ＰＢＭ
Ｃ中＜７）　ＩＩＩＶ−ＲＮＡレヘレベ１０〜２０日以
内に低下し、そしてＨＩ　Ｖ−感染ＰＢＭＣの感染中心
の数（同時培養）はさらに徐々に低下した。ここで決定
された細胞内２−５Ａ及びＲＮＮアーゼ活性の上昇はこ
れらの患者における感染中心の喪失とより密接に平行す
る。２−５Ａシンセターゼ／ＲＮアーゼし経路が処置さ
れたＨＩＶ感染患者において、ミスマツチｄｓＲＮＡに
よる処置の数週間後に健康な患者におけるよりも一層活
性となる。従って本発明者の結果は、ある種の慢性ウィ
ルス感染がｄｓＲＮＡ欠損状態を示し、この状態は生物
活性ｄｓＲＮＡの多からの適用により回復され得る。

次に、この発明をさらに具体的に例により説明する。こ
れらの例中、特にことわらない限り、すべての部及び％
は重量による。

ｌ　　　　Ｌｌｌ）之　ＩＦＮ　　　び　ｄｓＲＮ　＾
ン１５、ｄｓＲＮＡ欠損状態は、ＩＦＮで処理された腫
瘍細胞がＩＦＮで誘導される増殖阻止をほとんど又は全
く示さない状態である。これは、必要であれば下記の種
々の生化学的測定により厳密に確認され得るｄｓＲＮＡ
欠損の機能的又は操作的テストである。

多くの場合において、“ｄｓＲＮＡ欠損”の臨床的診断
は、本発明者の発明が一層広範囲に実施されるようにな
れば、十分なものとなろう。ＩＦＮ’腫瘍はＩＦＮリセ
プターを欠くことがほとんどなく、そして長いか又は低
いレベルの介在物質を含有するであろうことが知られる
が、しかしいずれの場合にはこれらが外から供給された
ｄｓＲＮＡに応答することを発明者は見出す。これらの
例は臨床的に有意義である。なぜならこれらは特にイン
ターフェロン、そしてさらに他のリンホカイン、例えば
ＩＬ−２、種々のコロニー刺激因子及びＴＮＦの療法範
囲を有意に拡張するからである。慢性骨髄性白血病（Ｃ
ＭＬ）がこの点の例である。約６０％のＣＭＬ患者がＩ
ＦＮのみに応答し、４０％は応答しない。後者は、Ｒｏ
ｓｅｎｂｌｕａ＋等、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ。

Ｖｏｌ、　４６．４８４８頁（１９８６）に記載されて
いるように、血液単核細胞（ＭＮＣ）中の２−５Ａシン
セターゼの誘導に失敗する。第２図ＡはＩＦＮ耐性の例
であり、この場合、本発明者はミスマツチｄｓＲＮＡ＋
ＩＦＮで処理し、次に短期間（７日）の後にＩＦＮのみ
で、そして次にミスマツチＲＮＡとＩＦＮとの組み合わ
せにより処理した。この患者はＩＦＮのみを投与される
間２−５Ａシンセターゼ活性を誘導しなかったが、ＩＦ
ＮとミスマツチｄｓＲＮＡとの組み合わせによりこの介
在物質の活性の実質的な上昇を示した。２−５Ａシンセ
ターゼの誘導には、前の化学療法の中断により惹起され
た血液細胞数の一時的増加の後、数ケ月続く完全な血液
学的軽快が伴った。ＲＮアーゼＬの活性も決定され、そ
して正常（第３Ａ図、レーン１）より１０〜３００倍高
く、正常なＲＮアーゼＬの通常のｒＲＮＡ開裂生成物を
越えるさらなる分解を代表するインビトロＲＮＡ開裂生
成物が得られる。ＩＦＮ／ｄｓＲＮＡ組み合わせによる
治療の３０日後、ＲＮＡアーゼ活性開裂プロフィールは
正常にもどる（第３図Ａル−ン２）。なお、この種の応
答は常に観察された。

貫太　Ｔ４　１のウィルス感賞 他のｄｓＲＮＡ欠損状態は、ＩＦＮ及びその介在物質が
ウィルス感染により誘導されても、介在物質の活性化の
ための阻害ｄｓＲＮＡ又は部分的に生物活性なｄｓＲＮ
Ａを動物ウィルス自体（又はその複製中間体）が供給す
る場合である。宿主中の慢性症状と関連する多くのウィ
ルスがこのカテゴリーに属するであろう、Ｔ４細胞への
ＨＩ　Ｖの感染も、第１図に示すようにこのような状態
を構成することができる。Ｔ４細胞中でのＨＩＶの複製
はＵ織培養においてミスマツチｄｓＲＮＡにより効果的
にブロックされた（本発明者のヨーロッパ特許出願陽０
．２１３．９２１を参照のこと）。これらの同じ細胞中
でのＨＩＶの複製がＩＦＮ−α、−β又は−γのみによ
りあるいは生理的混合物中で中程度でのみ抑制されると
いう事実にもかかわらずである。ＨＩＶ　ＲＮＡそれ自
体はそれ自体の発現をブロックしないかなりの二次構造
を示すから、異るｄｓＲＮＡはおそらく異る生物学的応
答を惹起するであろう。旧Ｖ　ｍＲＮＡの５′末端の広
範なｄｓＲＮＡ構造の１つの領域はＨＩＶ）ランスアク
ト（ｔ　ａ　ｔ）蛋白質であると予想されるＭｒ　１５
０００のポリペプチド（Ｍｕｅｓｉｎｇ等、Ｃｅ１ｌ、
　Ｖｏｌ、　４８．６９１頁、１９Ｂ？）を結合し、そ
して本発明者はミスマツチｄｓＲＮＡがｔａｔ蛋白質に
対して旧Ｖ　ＲＮＡと競争することを示唆する。効果的
なＨＩＶ惑染感染他の慢性ウィルス血症を支持する性質
はＡＲＣ及びＡＩＤＳにおける第二のｄｓＲＮＡ欠損状
態であるかも知れない。

±１　基土ヱ患象豊凶 第三のｄｓＲＮＡ欠損状態が、ＡＲＣ及びＡＩＤＳにお
けるＨ　Ｉ　Ｖのごとき慢性ウィルス感染を有する唾液
リンパ中に観察される＊　Ｐｒｅｂｌｅ等（Ｊ、　Ｉｎ
ｆｅｃｔ。

Ｄｒｓ、、　Ｖｏｌ、　１５２．１９８５）は、これら
の細胞が上界したレベルのｄｓＲＮＡ依存性２−５Ａシ
ンセターゼを有することを報告しており、本発明者はこ
れを確認した。この結果は、一連の連続するＡＲＣ及び
ＡＩＤＳ患者に典型的であり、そして宿主の回復におけ
るｄｓＲＮＡの中心的な役割及びｄｓＲＮＡの欠損状態
を適当な外来ｄｓＲＮＡ系で置き換える必要性の観点か
ら本発明の基礎を形成するのを助けた。

本発明者はＲＮＮアーゼがＡＲＣ及びＡＩＤＳ患者にお
いてしばしば涸渇することを報告した血Ｌａｎｃｅｔ、
　１９８７年６月６日）が、しかしながら本発明者はあ
るケースにおいてミスマツチｄｓＲＮＡによる治療の数
週間後により正常な活性にもどり得ることを報告した。

第３図Ｂ、レーン４が示唆するように、ＡＲＣリンパ球
抽出物はある条件下で正常なＲＮＮアーゼの活性を■害
することができる。

トリクロル酢酸（ＴＣＡ）及びエタノール可溶性抽出物
は選書活性を欠くので、ＡＲＣ患者のＭＮＣ中に観察さ
れる移動性阻害物質は肝炎感染細胞においてＷｉｌｌｉ
ａｍｓ等により記載されたもの（■皿扱■、　Ｖｏｌ、
　１５１．２３３頁、１９８６）ではあり得ない。さら
に、本発明者は今まで研究した健康な固体からのＭＮＣ
抽出物（レーン５）中に阻害物質を見なかった。

ミスマツチｄｓＲＮＡはこれらの細胞に直接作用するか
ら、これらもまたｄｓＲＮＡ欠損でなければならない。

従って、本発明者は、異るｄｓＲＮＡは異る生物活性を
有する（ＨＩＶ　ｄｓＲＮＡは阻害的であり、他方ミス
マツチｄｓＲＮＡはそうではない）ことを示した。

ＡＲＣ及びＡＩＤＳ患者からのリンパ球は、必要なｄｓ
ＲＮＡ−依存機能のＬがのみが行われるという意味にお
いてｄｓＲＮＡ−依存性である。少なくとも１つの機能
、すなわち生物活性ＲＮアーゼＬの十分なレベル維持は
、外来ｄｓＲＮ八が添加されない限り行われない。

肛　慢性疲労症候群 適切な置換療法を必要とするｄｓＲＮＡ欠損の例は慢性
疲労症候群（Ｃｈｒｏｖｘｉｃ　Ｆａｔｉｇｕｅ　Ｓｙ
ｎｄｒｏｍｅ　：　ＣＦＳ）であり、これは１千万〜１
千２００万人の米国人が罹患しており、診断が困難な多
面的な不全であって、極度の疲労、リンパ腺の肥大及び
構成的（ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ）症状、例えば
体重低下、食欲の減退等により特徴付けられる。幾らか
のＣＦＳ患者は神経精神的変化、例えば抑制、記憶喪失
及び類偵の障害を生じさせるが、慢性疲労症候群は時と
して完全に神経学的な不全、特に抑制から区別すること
が困難である。種々の実験室的研究が示すところによれ
ば、多くの異るウィルスが慢性疲労症候群を有する患者
において複製することができ、そしてこれらの個体は実
際に“ウィルス排出者”となる。エプスタイン−バール
ウィルス、サイトメガロウィルス、レトロウィルス、肝
炎ウィルス等はしばしばこの様な固体中に存在する。

正常個体及び慢性疲労症候群を有する対象における２’
−５’Ａ分子のインビボ濃度、及び生化学的に関連する
細胞内ｄｓＲＮＡレベルの正確な測定は次の様にして行
われる。患者からのサンプル（フィコール・ハイパ・り
により精製された末梢血リンパ球）のエタノール可溶性
画分を、２′−５’Ａコアー−セルロース測定（ｐｏｌ
ｙ　Ｕ−（”Ｐ）−ｐｃｐを用いるアフィニティークロ
マトグラフィー）においてそれらの２’−５’Ａ含量に
ついて分析した。この測定においては、ｐｏｌｙ（Ｕ）
を加水分解する２’−５’Ａ−活性化ＲＮアーゼＬの能
力を用いて機械的２’−５’Ａの濃度を決定する。

発熱がないこと、構成的症状がないこと、皮疹等により
証明される、ウィルス感染の最近の病歴を有しない１５
人の工状な対象を試験することにより参照値を確立した
。これらのリンパ球２′−５’Ａレベルの濃度は、真正
な２’−５’Ａ分子を用いて得られた換算曲線を用いて
決定された。

正常な個体の参照値は、ＰＢＭＣ細胞ｇ当り０．３〜１
．１ｎｍｏｌｅの範囲内の２’−５’Ａを示す。

この測定法を用いて、慢性疲労症候群の通常の症状を示
す患者を試験し、そして次の結果を得た。

以下余白 １じし炙 １　　　　　　　　　　　　＜０．０８２　　　　　　
　　　　　　　　　　＜０．０５３　　　　　　　　　
　　　＜０．０５４　　　　　　　　　　　　　　　　
＜０．０５５　　　　　　　　　　　　　　　　　　ｎ
ｄ”６　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ｎｄゝ
７　　　　　　　　　　　　＜０．０１８　　　　　　
　　　　　　＜０．０１９＜０．０１ ＊：検出されず。

慢性疲労症候群を有する患者はリンパ球蛋白質ｇ当り＝
般に０．１ｎｍｏＡｅより低く、常に０．２ｎｍｏ１ｅ
より低い２’−５’Ａを有する。慢性疲労症候群を有す
るこの様な個体の決定的治療は、２’−５’Ａオリゴヌ
クレオチドの細胞内レベルが正常に達し、細胞内ｄｓＲ
ＮＡレベルが正常に戻り、そして／又は患者の臨床症状
が軽減するまで外来ｄｓＲＮＡを供給することにより与
えられる。慢性疲労症候群及び日和見ウィルスに対する
患者の抵抗性は、患者の細胞内２’−５’Ａオリゴヌク
レオチドレベルの測定を続け、そして要求されるように
２’−５’Ａレベルを正常値、通常はリンパ球蛋白質ｇ
当り０．２ｍｍｏｌｅ過剰の２’−５’Ａを維持するこ
とにより保持される。

天然ｄｓＲＮＡは、慢性疲労症候群のごときウィルス疾
患にチャレンジされた場合の宿主防御において役割を演
する。生物活性ｄｓＲＮＡ、又はｄｓＲＮＡに依存する
酵素、特に特定の細胞内で末梢血リンパ球中の異状に低
いレベルの２　’−５’　Ａと関連するＲＮアーゼＬの
ウィルス関連阻害物質、の特異的減少は疾患の進行に寄
与する。ｄｓＲＮＡ、特にミスマツチｄｓＲＮＡは疾患
の進行を逆転せしめる。

慢性疲労症候群を有する患者は、２００〜６００■（疾
患の重症度及びウィルス負荷等に依存する）のｒｌ−ｒ
（Ｃｚ−＋ｍ＋Ｕ）を１週間に２回ずつ静脈内注入する
ことにより治療され、そして２’−５’Ａレベルは臨床
的改善と共に上界する。投与されたｄｓＲＮＡの■及び
投与の頻度は、患者の臨床的改善と共に、測定される２
’−５’Ａレヘルによりガイドされる。投与されるｄｓ
ＲＮＡの量は、注入点から遠位点において投与の直後に
おいて、患者の全身循環血−当り０．０１〜１．ＯＯＯ
ＩｌｇのｄｓＲＮＡを提供する量である。

貰五　Ｔ４　−す−・に・するーウイルスを外部から投
与されたｄｓＲＮＡ、特にミスマツチｄｓＲＮＡは、ウ
ィルスのチャレンジに応答するウィルス感染患者の能力
を同腹する。ウィルス状態の例示として、最も害の大き
いものの１つとしてＩＩ　Ｉ　Ｖを選択した。ＨＩＶ惑
染感染次標的はＴ４リンパ球であり、ウィルス感染が進
行するに従ってその集団は劇的に減少する。さらに、Ｔ
４細胞集団の減少は歓迎されない量的な疾患パラメータ
ーであり、その減少は疾患の悪化を反映する。逆に、Ｔ
４１１Ｉ胞集団の増加は療法的介在の改善を示す好まし
い診断的指標である。

健康な固体の正常なＴ４細胞集団は血液１１ｍ’当り４
００細胞である。前−ＡＲＣ又はＡＲＣの範晴に属する
と診断された３９人の患者（第４図を参照のこと）を測
定し、そして血液ｍｓ’中のＴ４細胞の絶対数に基いて
３つの範昭に分類した。（ａ）３００より多数（１８患
者、データーは示されていない）、（ｂ　Ｈ５０〜３０
０（１３患者）、及び１５０未満（８患者、平均＝９２
）。（ｂ）及び（ｃ）群の患者を、１００〜２００■の
ｒｌｎ　Ｈ（ｃ＋ｚ、ｕ）　（アンプリゲン）を週２回
３〜１６ケ月（平均８．４ケ月）にわたりｉ、ｖ、注入
することにより治療した。比較のため、未治療のＨＩＶ
惑染感染（１８１）からのＴ４細胞集団データーを含め
（三角印）、この様な個体におけるＴ４集団の不可避的
な低下を示す。

ベースラインは治療を開始する前のＴ４リンパ球の最初
の絶対濃度である。第４図に示すように、改善はこのベ
ースラインからの変化の％＋、−として示される。患者
を最初に観察し、そしてＴ４細胞濃度を測定した。患者
の（ｂ）群は第４図中中空円で示され、１５０〜３００
細胞／■１３のＴ４細胞？農度を有する。これらの患者
はまず予防的に１００ｍｇのアンプリゲン（週２回ｉ、
ｖ、投与）が投与され、不都合な反応について観察され
、次に投与量が２００　ｒｒｔｚに増加され、同じ頻度
で投与された。

そのＴ４細胞濃度が１５０細胞／禦１３未満である患者
の第２群には３００■のアンブリゲンが投与された（１
週間に２回ｉ、ｖ、投与）。ベースラインからの変化の
％を黒円を結ぶ線で示す。アブゾルートＴ４リンパ球を
有する未治療の患者（１８１）三角形を結ぶ線で示され
るように急速な低下を続けた。

Ｔ４細胞の平均は３０患者において４ケ月後に４．３％
増加し、１０患者において８ケ月後に８．。

％増加し、そして６患者において１２ケ月後に１７％に
増加した。わずか２人の患者（平均ベースラインＴ４＝
８２細胞）が連続的なｒＬ　Ｈ（Ｃ＋ｚ＋Ｕ）ｎ治療を
受けながらＡＩＤＳに発展し、そして２ケ月１■治療を
中断した。他の１人のＡＲＣ患者はカポシ肉腫になった
。

これらのデータが示すところによれば、その絶対Ｔ４リ
ンパ球レベルが１５０細胞／１１３未満である感染固体
はＴ４細胞の減少速度を下げるためにかなりの量の薬物
を必要とするが、しかしながら、１５０〜３００の範囲
の患者は低い投与レベルにおいて効果的に維持される。

これらのデーターはまた、ＨＩＶ患者の状態の極端な悪
化の前に治療を開始することが重要であることを示して
いる。

これらのデーターはまた、ｄｓＲＮＡ欠損の程度（Ｔ４
細胞の絶対数により間接的に、しかし正確に評価される
）と、欠損を修正しそして患者を完全な健康に回復せし
めるために必要な外来ｄｓＲＮＡＯ量（重く感染してい
ないか、又は感染していない個体におけるＴ４細胞数に
近い値へのＴ４細胞数の回復として）との間の直接的関
連を示す。すなわち、Ｔ４欠損が大きくなるに従って、
欠損を回復するのに必要なｄｓＲＮＡの旧が多くなる。

適切な置換（ｒｅｐｌａｃｅ＋ｍｅｎｔ）療法を必要と
する一時的ｄｓＲＮＡ欠損の他の例は、小児の免疫系が
十分に発達していない場合の小児の発育及び新生児の種
々の時期である。これらの場合において、青年期又は成
人の自己限定的感染であるべき感染から生命を什かす可
能性のある感染が起こるかもしれない。特定の例は次の
通りである。パラミキソウイルス科の構成員、例えば呼
吸器シンシチアルウイルス（Ｒ３Ｖ）は、まだ十分に発
達していない免疫イントリアシック（ｉｎｔｒｉａｓｉ
ｃ）抗ウイルス防御系を有する小児（典型的には１後６
〜１８ケ月）において急性気管支情炎を生じさせる場合
がある。

この様な場合に、本発明者は下に、ｄｓＲＮＡ　（ｒｌ
、。

ｒ（Ｃ，□、Ｕ）、、）を用いる置換療法が決定的であ
り、そして、さもなければ致命的である事態を回避せし
めることを示す。

この新規な洞察を発展せしめるため、本発明者は標準的
実験室条件下でＣＣＬ　２５と称するヒト羊膜由来のセ
ルラインを増殖せしめた。ＣＣＬ　２５細胞（アメリカ
ン・タイプ・カルチュアー・コレクションから得られる
）はヒト新生児気管支梢Ｍｉ織と類似の態様でＲ３Ｖの
増殖及び複製を支持する。

添付された表は、本発明者が独立してヒトにおいてよく
耐えられることを示したｄｓＲＮＡの量において本発明
者はＲ３Ｖの増幅を約９９％低下せしめることができた
ことを、結論的に示している。

玉−１−表 ヒトのＰＢＭＣから単離された２−５Ａ及びＲＮアーゼ
Ｌのホモポリリボヌクレオチドに対する活性Ｐ［ＩＭＣ
から単離　３４　　　　　０　　　　　４５　　　　　
０された２−５＾ （１）３回の独立した決定の平均、標準偏差２０％１失 健康な個体からのＰ［ＩＭＣの抽出物（蛋白質１００ｇ
）から又はＬ９２９細胞から精製されたＲＮアーゼＬを
コアー−セルロース測定条件下で、ｐｏｌｙ（υ）　（
”Ｐ　）ｐＣｐ（１１０００ｄｐｍ、　０．１０μＣｉ
／Ｉｍｍｏｌｅ）又はｐｏｌｙ（Ｃ）（”Ｐ　）　ｐＣ
ｐ（１２４００ｓｐｍ、　　０．３３ｐＣｉ１０　ｍｏ
ｌｅ）の存在下で、真正な２　５Ａ　（ｐｚｌｈ、５　
ｘｌＯ−’Ｍ）又は患者＃５　（ミスマツチｄｓＲＮＡ
治療の９週間目）からのＰＢＭＣの抽出物（蛋白質１２
．５μｇ）の添加の後に、インキュベートした。ｐｏｌ
ｙ（Ｕ）　（”Ｐ　）　ｐＣｐ及びｐｏｌｙ（Ｃ）　（
”Ｐ　］　ｐＣｐは、ｐｏｌｙ（Ｕ）又はｐｏｌｙ（Ｃ
）（シグマ）及び（３２Ｐ　）　ｐＣｐ（アメルシャム
）からＴ４リガーゼ（ベセスダ・リサーチ・ラボラトリ
ーズ）により合成した。対照実験（ｐＪｓの非存在下）
において、３３００ｄｐｍのｐｏｌｙ（Ｕ）　（”Ｐ　
）ｐＣｐ及び１ｌ１０００ｄｐのｐｏｌｙ（Ｃ）　（３
２Ｐ　）　ｐＣｐがガラス繊維フィルター上に維持され
、そして分解無しく０％）とした。

Ｒ３Ｖにより誘導される感染中心の形成はウィルスの細
胞から細胞への直接的拡散を含むことが確立されるので
、本発明者は今や、ｄｓＲＮＡの細胞内濃度を単に上昇
せしめることにより、本発明者は他の体Ｕ織に有意な不
都合な効果を伴わないでＲ３Ｖの細胞から細胞への拡散
を効果的に減少せしめることができることを確立した。

すなわち、他の潜在的に自己限定的な病原体、例えばＲ
３Ｖ　（パラミキソウイルス科）、及び鼻／気管／気管
支−木に影響を与える他のＲＮＡ生成ウィルス、例えば
ライノウィルス、又はインフルエンザウィルスが、ｄｓ
ＲＮＡ置換療法機構に効果的に含まれるであろう。病原
体の極所的侵入量、例えば（限定的ではないが）誘導は
、本質的に又は−時的に低いｄｓＲＮＡ含量を有するで
あろう（ここでｄｓＲＮＡは、病原体の複製／組織誘導
病理を妨害する免疫／抗ウイルス防御カスケードを開始
する分子のいずれかとして機能的に定義される）。

炭１　肛文ｑ准遼 ＡＩＤＳを伴う患者における肝疾患についての多くの総
説が過去２〜３年間にわたり文献に登場している。繰り
返されるテーマは、針でねらった生検体及び検死の際の
検体の両者における広範なＭ１織学的知見である。下記
の研究において、ＡＩＤＳの診断のためのＵ、　Ｓ、　
Ｃｅｎｔｅｒ　ｏｆ　Ｄｉｓｅａｓｅ　Ｃｏｎｔｒｏｌ
。

アトランタ、ジョーシア、米国の規準が満足された。広
範な肝炎疾患を有することが見出された患者典型的な症
状は全く非特異的であり、そして体重の低下、熱、リン
パ腺症、肝牌腫、腹痛を含む。

血清トランスアミナーゼは典型的にはほとんどのＡＩＤ
Ｓ患者において上昇する。不相応に高い上昇したアルカ
リホスファターゼの傾向が存在する。アルカリホスファ
ターゼのこの様な上昇は肉芽腫疾患の組織学的診断と関
連する。選択されない患者（すなわち、胚種及び肝機能
試験の上昇を有する患者における生検試験ではなく、偏
らない患者選択）において行われた検死研究は不透的に
広範な肝内病理を示している。　ＡＩＤＳ患者の全検死
ケースの約８０〜９０％が異状な肝解剖所見を示す。肝
障害には血管うっ血、門脈炎症、脂肪症、病巣壊死、肉
芽腫、胆汁うつ滞、硬変、及びリッペル細胞増生（頻度
のおよその順序）が含まれる。興味あることには、検死
におけるカポシ肉腫の肝内診断は１つの研究において最
も一般的に、特異的肝内病原（１８％）であった（Ｓｃ
ｈｎｅｉｄｅｒｍａｎ等、ＡｎｎａｌｓＩｎｔｅｒｎａ
ｌ　Ｍｅｄ−＋　Ｖｏｌ、　１０５＋　２０７真、１９
８７）。

胆のう疾患が最近少数のＡＩＤＳ患者において記載され
ている。分離された臨床報告は硬化性胆管炎、肝内破壊
胆道病変、及び良性胚珠胆汁閉鎖を記載した。これらの
ケースにおいて特定の病原体は報告されておらず、サイ
トメガロウィルスが、生検に基く組織病理学的知見に対
して二次的な可能性ある原因として記載されている。良
性の胚珠胆汁閉鎖を有する＾■ＤＳ患者において、共通
の症状は肝臓右上４分の１の痛み及び中程度のビリルビ
ン上昇である。検死又は腹壁切除術において、線維症に
対して二次的なパター（ｖａｔｅｒ）のアンプライ（ａ
ｍｐｕｌａｉ）構造の診断が行われた。胚珠閉鎖の少な
くとも２つの例において、胆のう樹（ｂｉｌｉａｒｙｔ
ｒｅｅ）からクリプトスポリジア（ｃｒｙｐｔｏｓｐｏ
ｒｉｄｉａ）が単離された。他の例において、バーター
（ｖａｔｅｒ）のアンプラエ（ａｍｐｕｌａｅ）の近傍
でサイトメガロウィルス封入体が顕著であった。肝内胆
管炎の上記の例において、特定の病原体は知られておら
ず、そして特定の病原体はこれらの不全の病原性におい
て偶然的な役割を有するに過ぎないであろう。

ｄｓＲＮＡ注入（ｒｌ、ｒ（Ｃ＋ｚ＋Ｕ）１１、２００
■、週２回、ｉ、ｖ、）はまた肝炎Ｂウィルス（ＨＶＢ
）増殖に伴う基本的な細胞異状を修正し、そして有意に
軽減することを本発明者は決定した。この洞察を確立す
るため次の方法を用いた。

１−Ｉ　Ｂ　Ｖ−１・ＤＮＡについての　°゛は　１拌
の用囁 肝炎Ｂウィルスの存在を示す、血清又は血漿に関連する
ＩＩＢＶ　ＤＮＡの存在はスロットプロットハイブリダ
イゼーションにより決定された。血清サンプルをＮ１１
４０ＡＣに１Ｍ塩の最終濃度に稀釈した。

７２−壁のマイクロ濾過装置（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ　
＆５ｃｈｕｅｌｌ＋　Ｋｅｅｎｅ、　Ｎ、　ｔｌ、）を
用いて、サンプルを直接、Ｉ　Ｍ　ＮＨ４０Ａｃに１０
分間あらかじめ浸漬したニトロセルロースフィルターに
直接適用した。

ＤＮＡをその場でアルカリにより変性し、そして中和し
た。正常ヒト血清中の精製＋１ＢＶ　ＤＮＡの稀釈物を
同じ方法において測定し各スロット−プロットハイブリ
ダイゼーションを定量した。フィルターを加熱し、ブレ
パイプリダイズせしめ、ハイブリダイズせしめ、そして
高ストリンジエンシー条件下で洗浄し、そして標準的条
件下で（Ｍａｎｉａｔｉｓ。

Ｔ、、　Ｆｒ１ｔｓｃｈ、　Ｅ、　Ｆ、及びＳａｗ＋ｂ
ｒｏｏｋ＋　Ｊ、、　ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎ
ｇ　　：　Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ＋
　　Ｃｏ１ｄ　　ＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｙ、Ｃｏ１ｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　ｆｌａｒｂｏ
ｒ＋　　１９８２）オートラジオグラフ処理した。ハイ
ブリダイゼーションにおいて使用したＨＢＶプローブＤ
ＮＡは、ｆ！ｃｏＲ１部位にクローン化したＨＢＶ　Ｄ
ＮＡ（ＨＢ、ＡＧ血清型ａｄｗ　２　）の単一の単位長
さのコピーを含有する組換プラスミドから得られた。プ
ラスミドをＥｃｏＲｌで消化し、そしてＨＢＶ　ＤＮＡ
を２回、分取用アガロースゲル電気泳動及び電気溶出に
より精製した。

精製されたＨＢＶ　ＤＮＡを、ランダムプライムレベル
化法（Ｆｅｉｎｂｅｒｇ、　Ａ、　Ｐ、及びＶｏｇｅｌ
ｓｔｅｉｎ＋　８．＋幻す１ＬＬ−４し旦垣堕工１３２
　：　６−１３．１９８３）を用いて、”Ｐ−ｄＣＴＰ
により１〜２　Ｘ　１０”ｃｐ＋ａ／　ｎの比活性にラ
ベルした。この測定により得られる感度レベルは１ｐｇ
のＨＢＶ　ＤＮＡである。この感度レベルにおいて、本
発明者は２．９Ｘ１０’分子のＨＢＶ　ＤＮＡを検出し
ている。

得られたオートラジオグラフを相対強所の程度について
評価し、そして観察された強度に従って数値的にランク
付けし、そして次の表に報告する。

治療の日数を（）内に示す。

第一１−表 体液中のＨＢＶ　（肝炎Ｂウィルス）ＤＮＡの濃度の低
下に対するｄｓＲＮＡの投与の効果 Ｔ”　　　　３＋　　（０）　　　　３＋　　（０）　
　　　３＋　　（０）１　　　３＋　　（２０）　　　
３＋　　（２１）　　　３＋　　（３１）２　　　３＋
　　（６４）　　　２゜５＋　（４２）　　　３＋　　
（７２）３　　　３＋　　（１０６）　　　２＋　　（
５６）　　　３＋　　（８Ｇ）４　　　２＋　　（１６
２）　　　２＋　　（８４）　　　３＋　　（１１５）
５　　　２＋　　（２１９）　　　１．５＋（１４０）
　　　２＋　　（１７０）６　　　２＋　　（２６６）
　　　１　　　（１８０）　　　２＋　　（２２７）７
　　　１．５＋　（３１０）　　　　　　　　　　１．
５＋　（２７０）８　　　　　　　１＋　　　（３５３
）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．５＋　
　（２９Ｇ）９　　　１＋　　（４０Ｇ）　　　　　　
　　　　１．５＋　（３２４）ｔｏ　　　　１＋　　（
４５０）　　　　　　　　　　１．５＋　（３Ｂ７）注
：Ｔ”＝Ｏ（治療前）。＋は３２Ｐを含有するウィルス
ＤＮＡに５日間暴露したＸ線フィルムの相対シグナル強
度である。十が多くなるに従って（例えば１＋に対する
３＋）はＸ線フィルム上のシグナル強度がより高く、そ
してスロット−プロットがより大きいことを意味し、ウ
ィルスＤＮＡがより多く存在することを示す。ウィルス
測定の感度を増強するため、患者の血清の種々の稀釈物
、典型的には１：４０．１：２００　、ｔ：４ｏｏ、及
び１　：　１５００の稀釈物を用いた。スロットプロッ
トをデンシトメーターで追跡することにより確認的結果
が得られた。この方法は５ｃｈｌｅｉｃｈｅｒ　＆　５
ｃｈｎｅｌｌにより提供される試薬（物質番号１’に３
７０２／２８４）に基いた。＾ｂｂｏｔｔ　Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｉｅｓから入手されるウィルス特異抗原分析（
ヒト血清又は血漿中の肝炎８表面抗原の検出のための免
疫測定）キット（１９８５年７月、８３−０８０４／Ｒ
１２）を用いて補足的結果が得られた。

本発明者の発明が公に知られ、さらに開発され、そして
他の状Ｂ／感染／不全に適用されるに従って、広範な実
験室データに頼ることなく、そしておそらく本発明者が
この明１１Ｉ＠に記載する科学的洞察及び新規さにも頼
らないでｄｓＤＮへ欠１員の臨床的診断を行うことが可
能となる。多くの自明でないｄｓＲＮＡ欠…状態が存在
し得る。例えば、ＩＦＮは増殖経路のフィードバック阻
害物質として自然に機能する（＾ｕｌｌｏ等、Ｃｅ１ｌ
、　Ｖｏｌ、　４３．７９３頁、１９８５）ので、そし
てｄｓＲＮＡ依存性介在物質がこれらの事象を行うので
、分化を行い、又は発癌／転移の可能性を有する細胞は
ｄｓＲＮＡ−依存性であろう。

上記の例から次のことが明らかである。生物的機能（例
えば、外来ＴＦＮに対する細胞の応答）又は生化学的機
能＜　Ｖ／＋Ｉえば、２−５Ａシンセターゼの上昇）又
は２’−５’オリゴアデニレート経路の中間体の存在の
相互関連により、本発明者はｄｓＲＮＡ欠…状態を容易
に診断することができ、そして次記の種々の方法により
障害の程度を定量することができる。　　　　　　　　
　　以下余白（ａ）内因性２’、５’オリゴアデニレー
トの濃度の決定； （ｂ）高圧液体クロマトグラフィーによる患者のサンプ
ルからの２−５Ａの分子サイズ及び２−５Ａ？７４度の
定量分析； （ｃ）リボゾームＲＮＡ開裂測定による、患者において
生体内で合成された２−５への生物学的機能の証明； （ｄ）患者のサンプル中の′Ｍ離（非結合）ＲＮアーゼ
Ｌ°のレベルを決定するための、２’、５’−ｐＩＡ４
　（”Ｐ　）　−３’−ｐｃｐニヨル結合測定；（ｅ）
患者のサンプル中で合成された２−５ＡによるＲＮアー
ゼＬの活性化の特異性を特徴付けるためのｐｏｌｙ　Ｕ
−（”Ｐ　］　−ｐＣｐによるコアー−セルロース測定
（アフィニティークロマトグラフィー）； （ｆ）患者のサンプル中で合成された２−５Ａにより活
性化されたＲＮアーゼＬのレベルを決定するための、リ
ボゾームＲＮＡ開裂測定；以下余白 （ｇ）患者のサンプル中の活性化されたＲＮアーゼＬの
レベルを決定するためのりポゾームＲＮＡ開裂測定。

これらの方法の幾つかは、本発明者の、１９８７年８月
１２０に出願された”Ｅｌａｂｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　
ｌ１ｏｓｔＤｅｆｅｎｓｅ　Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ　１ｎ
ｔｏ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｆｌｕｉｄ”と題する米
国出願Ｎ１１０２８．８２３号明細書、及び１９８７年
７月１７日に出願された”Ｄｏｕｂｌｅ　５ｔｒａｎｄ
ｅｄ　ＲＮＡ　Ｃｏｒｒｅｃ−ｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｂｅ
ｒｒａｎｔ　Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　Ｐａｔｈｗａｙｓ”
と題する米国出願Ｎａ　０７４，６４９号明細書に記載
されている。

ｄｓＲＮＡ充足状態も存在し得る。例えば、ＣＭＬ及び
ハーリー（ｈａｉｒｙ）細胞白血病（ＨＣＬ）はしばし
ば唯一の療法として与えられたＩＦＮに対して応答性で
あり、そして天然ｄｓＲＮＡ充足の細胞内状態を反映す
る。この概念を支持するため、本発明者は、ＩＦＮで処
理された１ｌｅｌａ細胞の核におけるのと同様の、ＨＣ
Ｌを有する未治療の患者からの単核血液細胞の核におけ
る２−５Ａシンセターゼを活性化するｄｓＲＮＡのレベ
ルを見出した。

以下余白 ミスマツチｄｓＲＮＡ 多くのｄｓＲＮＡが種々のリンホカイン、例えばＩＦＮ
を誘導することができ、そして２−５Ａシンセターゼを
活性化することができるが“、すべてのｄｓＲＮＡがこ
れらの性質を有するわけではない。

合成ｄｓＲＮＡの内、ｐｏｌｙ（１）　：　ｐｏｌｙ（
Ｃ）はＩＦＮの卓越した誘導物質であり、そして２−５
Ａシンセターゼの活性化物質であるが、しかしまた非常
に毒性が高い。ｐｏｌｙ（１）　：　ｐｏｌｙ（Ｃ＋ｚ
、Ｕ）は、“ミスマツチｄｓＲＮＡ”、又はアンプリゲ
ン（Ａｍｐｌｉｇｅｎ）（ＨＥＭリサーチ社、ロックビ
ル、メリーランド、米国）とも称され、ポリピリミジン
鎖中にウラシル残基を規則的に含有する。このミスマツ
チは生物学的活性を破壊することなく迅速な生物分解を
誘導する。例えば、ｐｏｌｙ（１）　：　ｐｏｌｙ（Ｃ
＋ｚ、Ｕ）は抗ウィルス、抗腫瘍及び免疫増強活性を示
し、そして非毒性である。

ミスマツチｄｓＲＮＡは、広範囲の抗ウィルス及び免疫
増強薬であるため、ＡＲＣ治療を含む慢性ウィルス感染
治療のために特に適し、そして高投与量においても長期
毒性を実質上行しない。２００〜２５０　ｔｒｙのｐｏ
ｌｙ（１）　：　ｐｏｌｙ（Ｃ，ｚ、Ｕ）により週２回
静脈内投与された４５人の患者についての本発明者のデ
ーターは、有意な副作用を伴わない、改善された性能を
伴うＴ及びＢｌ胞免疫の持続的な増強及びウィルス（Ｈ
ＩＶ、ＣＭＶ及びヘルペス）濃度の急速な低下を示す。

多（の、患者において、νｎ床応答は約１８ケ月間にわ
たり続き、又はｄｓｌ？ＮＡ療法（１００〜４００■、
週２回）を続ける限り続く。

幾つかのケースにおいてはさらに多くの投与量及びさら
に頻繁な投与が必要である。ＡＩＤＳ患者におけるウィ
ルス感染及び免疫障害は患者ごとに異り、そして単一の
薬物がすべての可能性ある臨床問題を解決することは期
待できない。しかしながら、ｄｓＲＮＡは種々の治療法
において中心的役割を演するであろう。例えば、ミスマ
ツチｄｓＲＮＡはＴ４細胞のＨＩ　Ｖ感染のブロックに
おいＡＺＴとの相乗性を示しく本発明者の係属中の米国
特許出願隘０２８、８２３）、ミスマツチｄｓＲＮＡと
非常に低投与量のＡＺＴが、ＡＲＣを含む感染の初期に
おいて重量な組み合わせである。ｄｓＲＮＡ及びＩＬ−
２の両者はＴ細胞、ＮＫ細胞及びＬＡＫ細胞の活性を増
強し、そしてそれ故にさらに、組み合わせた場合、本発
明者は２種類の生物学的物質が付加的な毒性を伴わない
で療法的相乗作用を演じたことを示した。

さらに、ＩＦＮがＢ細胞及び単球の分化を増強する限り
、ある種のリンホカインが、ＨＩＶに対する特異的中和
抗体を促進しそして単球殺作用を増強するｄｓＲＮＡの
能力を増加することを、本発明者は明らかにする。同様
に、レチノイドがＴ４細胞の数を増加し、そしてＩＦＮ
によるＴ細胞及びＢ細胞の両方の分化を促進するので、
ｄｓＲＮＡとレチノイドとの組み合わせもＡＲＣ及び＾
ＩＤＳにおいて追加の利点を提供するであろう。ｄｓＲ
ＮＡ及び胸腺ペプチドの組み合わせもまた、特に非常に
低いＴ４細胞数ををする患者において特に、Ｔ４４細胞
復効果を有するであろう。最後に、ｄｓＲＮＡが、ｔＦ
Ｎα又はＩＬ−２のいずれかの添加により増強され得る
カボシ肉腫細胞に対する直接的抗増殖活性を示す事実は
、進行した疾患における新しい制癌療法を示唆する。Ａ
ＩＤＳにおける血液細胞パラメーターの調節が増加した
ＣＮＳの問題を明らかにするであろう。この目的のため
、ミスマツチｄｓＲＮＡはネズミの血液脳関門を脳実質
細胞中のオリゴ２′５′アデニレートシンセターゼを活
性化するのに十分な量で通過し、従って、ｄｓＲＮＡと
血液脳関門を通過するリンホカインのでとき他の薬物と
の組み合わせがウィルス関連痴呆において有用であろう
。リンホカインは、インターフェロン、好ましくはイン
ターフェロン−α、インターロイキン、特にインターロ
イキン−２（ＩＬ−２）及び組換インターロイキン−２
（ｒｌＬ−２）　、並びに腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）を包
含するものと理解される。さらに、リンホカインへの暴
露に応答して動物中で形成されるリンホカイン−活性化
キラー（ＬＡＫ）細胞も含まれる。

リンホカインとしてインターフェロン（α）が使用され
る場合、患者の体液当り０．０１〜１００，０００ＩＲ
ＵＯ量で使用される。リンホカインがＩＬ−２、特にｒ
ｌＬ−２である場合、投与される量は患者の体重に、当
り約１０”　ＩＬ−２ユニット−患者における許容され
ない毒性レベルに近い値（これは１０ｈＩＬ−２ユニツ
トと高い）までの範囲にわたる。しかしながら、最も効
果的な、毒性応答を管理し得る値は体重ｋｇ当り約１０
３〜約１０’　ＩＬ−２ユニツトである。

ｄｓＲＮＡの通常の投与量は、患者の体液−当り０、１
〜１．ＯＯＯＩｒｇである。ここで体液なる語は、生物
体を循環しそして組織を満たしている血清、塩類、ビタ
ミン等の溶液を意味する。両薬物（ｄｓＲＮＡ及びリン
ホカイン）が投与される場合、これらは混合物として、
別々にしかし同時に、又は逐次に投与され得る。

ｄｓＲＮＡ及びリンホカインの“組み合わせ”投与は、
両薬物を療法混合物として一緒に投与する方法、二種類
の薬物を別々にしかし同時に投与する方法を包含する。

第１図は、宿主の病的状態を導く典型的なｄｓＲＮＡ欠
損及び宿主の回復を導＜　ｄｓＲＮＡの充足を示すフロ
ーチャートである。生物活性ｄｓＲＮＡが細胞内で生産
され又はある種のウィルス（例えば、ＥＭＣ）により導
入され、そしてリンホカインの生産及び介在物質の活性
化を含む一連の酵素的事象を開始し、これが抗ウイルス
状態並びに免疫細胞の分化及び宿主の回復を４く。種々
のウィルス（例えばＨＩＶ）又は腫瘍細胞により導入さ
れるｄｓＲＮＡは阻害物質として作用することによりこ
の経路を破壊することができる。生理的事象はｄｓＲＮ
Ａ生産を制限し、又は異常なｄｓＲＮＡの生産を惹起す
ることができる。このような異状は慢性感染及び宿主の
病的状態を導＜、ＨＩＶ及び他の慢性感染において、免
疫機能低下はまた、ＲＮＮアーゼの阻害物質からも生じ
（他の経路として示される）、これは適切に構成された
外来ｄｓＲＮＡの供給により克服される。

第２図Ａ及びＢは、ＭＮＣ又はＣＭＬ患者におけるミス
マツチｄｓＲＮＡによる２′５′オリゴアデニレートシ
ンセターゼの誘導を示す。ＣＭＬ患者をＩＦＮのみによ
り７日間治療しく第２図Ａ）、そしてミスマツチｄｓＲ
ＮＡ及びＩＦＮにより治療した（第２図Ｂ）。治療の前
又は治療中の時点で、シンセターゼ活性をフィコールで
精製されたＭＮＣにおいて測定した。

第３図Ａは、ポリアクリルアミドゲル電気泳動プレート
の写真であり、トラックの番号及び各トラックのバンド
又はゾーンを示す。ＣＭＬ患者のＭＮＣ中の新しい開裂
生成物と関連するＲＮＮアーゼの活性の上昇がこのプレ
ート上に示される。

ｒＲＮＡを供給するがしかしＲＮＮアーゼを供給しない
ハンガリアンＬ９２９細胞はブタペスト条約に基き、ア
メリカン・タイプ・カルチュア・コレクションにへＴＣ
Ｃ隘ＣＲＬ　９６５９として寄託されており、Ｌ９２９
細胞はＣＣＬ　１として寄託されており、ＣＭＬ患者か
らのＭＮＣはＫａｒｉｋ、　Ｌｕｄｗｉｇ及びＳｉｌｖ
ｅｒｍａｎ等に従って調製され、そしてＭＮＣからのＲ
ＮＮアーゼは、１９８７年７月１７日に出願された本発
明者の米国特許出願１１ｋＬ０７９．６４９に記載され
ているようにして測定した。

第３図Ｂもまた、ポリアクリルアミドゲル電気泳動プレ
ートの写真であり、ｒＲＮＡ開裂測定により決定する場
合、ＡＲＣ患者のＰＢＭＣ抽出物中のＲＮアーゼし阻害
因子の存在を示す。Ｌ９２９細胞ＲＮアーゼＬ及びｒＲ
ＮＡの両者を提供する）抽出物及びＭＮＣはＫａｒｉｋ
ｏ、　Ｌｕｄｗｉｇ及びＳｉｌｖｅｒｍａｎ等の方法に
より調製した。

レーンｌ：１８ｊ１１のＬ９２９細胞抽出物（全蛋白質
１５０ｘ）をＭＮＣ溶解のために使用されるＮＰ４０ｆ
ｆｌ衝液４Ｊｌｌ十水５．５　Ｉｌｌの存在下でインキ
ュベートした。

レーン２：レーン１と同じであるが、水の代りに５．５
　ｐｌの５Ｘ１０−”Ｍの真正なｐ、＾、をインキュベ
ーションに加えた。

レーン４：１１のＬ９２９細胞抽出物をＡＲＣ患者から
のＭＮＣ抽出物４Ｉｉ（全蛋白質１００ｇ）及び５．５
　ｔｔｌの水と共にインキュベートした。

レーン５：１１のＬ９２９細胞抽出物を健康な個体から
のＭＮＣ抽出物４Ｊ１１（全蛋白質１００ｘ）及び５．
５１Ｊ１の水と共にインキュベートした。２８Ｓ及び１
８Ｓ　ｒＲＮＡ、並びに正常なレベルの２’５’Ａ活性
化ＲＮアーゼし特異的開裂生成物を示す。

【図面の簡単な説明】

第１図は、宿主の病的状態への経路及び宿主の回復への
経路を示すフローチャートである。 第２図において、Ａは示された量でのＩＦＮ療法の開始
の前後の日数とシンセターゼ活性との関係を示すグラフ
であり、Ｂは治療の１２０日後のミスマツチｄｓＲＮＡ
の量及び白血球数を比較するグラフである。 第３図は、各トラックの種々のゾーン及びバンドを示す
ポリアクリルアミドゲル電気泳動プレートの写真である
。 第４図は、血液能３当りのＴ４リンパ球の絶対数を、ベ
ースラインからの変化の％として、治療後の経過月に関
して比較するグラフである。 以下余自 ＦＩＧ、３ Ｔ４細胞のベースラインからの変化の平均（％）手続補
正書（方式） ％式％ １、事件の表示 昭和６３年特許願第２１９６５４号 ２、　発明の名称 二本鎖ＲＮＡの欠損状態を治療するための医薬３、補正
をする者 事件との関係　　　　　特許出願人 名称　エイチイーエム　リサーチ。 インコーホレイティド ４、代理人 住所　〒１０５東京都港区虎ノ門−丁目８番１０号静光
虎ノ門ビル　電話５０４−０７２１５、補正命令の日付 ６、補正の対象 （１）　　願書の「出願人の代表者」の欄（２）委任状 （３）明細書 （４）明細書の「図面の簡単な説明」の欄（５）図面（
第３図） ７、補正の内容 （１）（２）　　別紙の通り （３）　　明細書の浄書（内容に変更なし）（４）　（
５）に関しましては、添付の上申書をもって代えさせて
いただきます。 ８、添付書類の目録 （１）訂正願書　　　　　１通 （２）委任状及び訳文　　　　　　　　　各１通（３）
浄書明細書　　　　　　　１通

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、疾患状態がＨＩＶ感染又は癌でない場合の二本鎖（
   ｄｓ）ＲＮＡ欠損疾患状態を治療するための医薬であっ
   て、ｄｓＲＮＡを含んで成る医薬。 ２、前記ｄｓＲＮＡ欠損疾患状態が免疫不全又はウィル
   ス感染によるものである、請求項１に記載の医薬。 ３、前記ｄｓＲＮＡ欠損疾患状態が慢性疲労症候群によ
   るものである、請求項１に記載の医薬。 ４、前記ｄｓＲＮＡ欠損状態が肝炎ウィルス感染による
   ものである、請求項１に記載の医薬。 ５、前記ｄｓＲＮＡがミスマッチｄｓＲＮＡである、請
   求項１に記載の医薬。 ６、前記ｄｓＲＮＡがｒＩ＿ｎ・ｒ（Ｃ＿１＿１＿−＿
   １＿４）＿ｎである請求項５に記載の医薬。 ７、患者の血清サンプル中のｄｓＲＮＡレベルを決定す
   るための診断的方法であって、血清サンプル中のｄｓＲ
   ＮＡの量を生体外分析によって測定し、そして健康な個
   体からの血清サンプル中のｄｓＲＮＡ量と比較する、こ
   とを含んで成る方法。