JP7384493B2 - 抗ｃｌｌ１抗体およびその使用 - Google Patents
抗ｃｌｌ１抗体およびその使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7384493B2 JP7384493B2 JP2022529575A JP2022529575A JP7384493B2 JP 7384493 B2 JP7384493 B2 JP 7384493B2 JP 2022529575 A JP2022529575 A JP 2022529575A JP 2022529575 A JP2022529575 A JP 2022529575A JP 7384493 B2 JP7384493 B2 JP 7384493B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- chain variable
- variable region
- cll1
- antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 8
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 8
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 8
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 7
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 4
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 claims description 3
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 claims description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 10
- 102100026094 C-type lectin domain family 12 member A Human genes 0.000 description 64
- 101710188619 C-type lectin domain family 12 member A Proteins 0.000 description 63
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 46
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 32
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 20
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 19
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 19
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 13
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 8
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 101000912622 Homo sapiens C-type lectin domain family 12 member A Proteins 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 8
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 7
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 101100496842 Homo sapiens COLEC10 gene Proteins 0.000 description 6
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 6
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 6
- 102000050908 human CLEC12A Human genes 0.000 description 6
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 5
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 108010026552 Proteome Proteins 0.000 description 5
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 5
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 4
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 4
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 4
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 3
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 239000012146 running buffer Substances 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 2
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 238000002144 chemical decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000012933 kinetic analysis Methods 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710111653 2-methylisocitrate lyase Proteins 0.000 description 1
- 102100031585 ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Human genes 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 108090000342 C-Type Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000003930 C-Type Lectins Human genes 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 102100026122 High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Human genes 0.000 description 1
- 101000777636 Homo sapiens ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000913074 Homo sapiens High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Proteins 0.000 description 1
- 101000917824 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 description 1
- 102100029205 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Human genes 0.000 description 1
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 102000007584 Prealbumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071690 Prealbumin Proteins 0.000 description 1
- 102000014400 SH2 domains Human genes 0.000 description 1
- 108050003452 SH2 domains Proteins 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 238000003491 array Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020004084 membrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000025113 myeloid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 1
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2851—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the lectin superfamily, e.g. CD23, CD72
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57426—Specifically defined cancers leukemia
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
- C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/624—Disulfide-stabilized antibody (dsFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
- G01N2333/4701—Details
- G01N2333/4724—Lectins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere in G01N2333/705
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
本願は、生物医薬の技術分野に関し、抗ＣＬＬ１抗体およびその使用に関する。
Ｃ型レクチン様分子１（ＣＬＬ１）は、Ｃ型レクチンドメインファミリー１２のメンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）とも呼ばれ、文献およびデータベースには、ＤＣＡＬ－２、ＭＩＣＬ、ＣＤ３７１等の名称もあり、ＩＩ型膜貫通タンパク質であり、全長２６５個のアミノ酸があり、分子量が３０７６２ダルトンで、コーディング遺伝子はｃｈｒ１２：９，９５１，２６８～９，９９５，６９４（ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８）に位置する。現在、いくつかの主流データベースにおいて、ＣＬＬ１遺伝子の識別コードは、Ｑ５ＱＧＺ９（ＵｎｉｐｒｏｔＫＢ）、３１７１３（ＨＧＮＣ）、１６０３６４（Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ）、ＥＮＳＧ０００００１７２３２２（Ｅｎｓｅｍｂｌ）、および（６１２０８８）ＯＭＩＭである。
研究によると、ＣＬＬ１は、造血細胞に制限的に発現し、主に、末梢血および骨髄中の骨髄系に由来する細胞を含み、例えば、単核細胞、樹状細胞、顆粒球およびほとんどの急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞を含む。注意すべきことに、ＣＬＬ１が末梢血および骨髄中の骨髄細胞に大量に発現するが、末梢組織中の骨髄系に由来する細胞に発現せず、例えば、組織マクロファージおよび組織樹状細胞にＣＬＬ１がいずれも発見しないことが分かった。研究によると、ＣＬＬ１がＡＭＬ幹細胞（ＣＤ３４＋／ＣＤ３８－）およびごく一部の造血前駆細胞（ＣＤ３４＋／ＣＤ３８＋、またはＣＤ３４＋／ＣＤ３３＋）に発現するが、正常の造血幹細胞（ＣＤ３４＋／ＣＤ３８－、またはＣＤ３４＋／ＣＤ３３－）に発現しないことが更に分かった。このような特殊な発現モードにより、ＣＬＬ１は、ＡＭＬを診断して治療する潜在的な標的点になることが期待されている。
現在、知られているヒトＣＬＬ１遺伝子は７つの転写物を含み、そのうちの５つはタンパク質をコードし、ヒトＣＬＬ１タンパク質は１種の膜受容体であり、従来構造の細胞外ドメインはＣ型レクチンドメインを有し、細胞内ドメインは免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）を有し、リン酸化ＩＴＩＭは、ＳＨ２ドメインを含むホスファターゼと結合し、顆粒球および単核細胞を負調節（ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）する機能を発揮する。
本願は、抗ＣＬＬ１抗体およびその使用を提供し、前記抗体は、単独でおよび／または他の薬剤と合わせて癌および自己免疫疾患の治療に使用される。
態様１において、本願は、
重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、
前記重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４で示されるＣＤＲ３を含み、
前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １１、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７で示されるＣＤＲ３を含む、
抗ＣＬＬ１抗体を提供する。
重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、
前記重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４で示されるＣＤＲ３を含み、
前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １１、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７で示されるＣＤＲ３を含む、
抗ＣＬＬ１抗体を提供する。
いくつかの具体的な実施形態において、前記重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １２で示されるＣＤＲ１を更に含む。
１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １２で示されるＣＤＲ１を更に含む。
いくつかの具体的な実施形態において、前記重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １３で示されるＣＤＲ２を更に含む。
いくつかの具体的な実施形態において、前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５で示されるＣＤＲ１を更に含む。
いくつかの具体的な実施形態において、前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６で示されるＣＤＲ２を更に含む。
本願において、抗体の重鎖可変領域のＣＤＲ１～３と軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３とが共に抗体の抗原に対する特異的な識別結合能力を決定し、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １～６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７～１１、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １２～１７を含むＣＤＲの抗体は、ＣＬＬ１タンパク質に対して著しい結合能力を有する。
１つの具体的な実施例において、前記抗ＣＬＬ１抗体２３Ｄ７の重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １で示されるＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２で示されるＣＤＲ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３で示されるＣＤＲ３を含み、
前記抗ＣＬＬ１抗体２３Ｄ７の軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４で示されるＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５で示されるＣＤＲ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６で示されるＣＤＲ３を含む。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １：ＲＹＷＭＨ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２：ＹＩＹＰＧＳＧＴＳＮＹＤＥＫＦＫＳ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３：ＥＡＲＹＴＭＤＹ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４：ＳＡＳＳＳＶＳＹＩＹ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５：ＤＴＳＮＬＡＳ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６：ＱＱＷＳＳＦＰ。
前記抗ＣＬＬ１抗体２３Ｄ７の軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４で示されるＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５で示されるＣＤＲ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６で示されるＣＤＲ３を含む。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １：ＲＹＷＭＨ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２：ＹＩＹＰＧＳＧＴＳＮＹＤＥＫＦＫＳ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３：ＥＡＲＹＴＭＤＹ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４：ＳＡＳＳＳＶＳＹＩＹ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５：ＤＴＳＮＬＡＳ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６：ＱＱＷＳＳＦＰ。
本願において、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １～３の重鎖可変領域ＣＤＲとＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４～６の軽鎖可変領域ＣＤＲとを含む抗ＣＬＬ１抗体２３Ｄ７は、ＣＬＬ１タンパク質結合活性を有する。
いくつかの具体的な実施形態において、前記抗ＣＬＬ１抗体２３Ｄ７の重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ： １９で示されるアミノ酸配列を含む。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８：
ＱＶＱＬＱＱＰＧＳＤＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＷＭＨＷＶＫＱＲＰＧＨＧＬＥＷＩＧＹＩＹＰＧＳＧＴＳＮＹＤＥＫＦＫＳＫＡＴＬＴＶＤＴＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＴＲＥＡＲＹＴＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９：
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＩＹＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＧＬＬＩＹＤＴＳＮＬＡＳＧＶＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＲＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＦＰＰＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ。
ＩＤ ＮＯ： １９で示されるアミノ酸配列を含む。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８：
ＱＶＱＬＱＱＰＧＳＤＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＲＹＷＭＨＷＶＫＱＲＰＧＨＧＬＥＷＩＧＹＩＹＰＧＳＧＴＳＮＹＤＥＫＦＫＳＫＡＴＬＴＶＤＴＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＴＲＥＡＲＹＴＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９：
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＩＹＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＧＬＬＩＹＤＴＳＮＬＡＳＧＶＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＲＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＦＰＰＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ。
１つの具体的な実施例において、前記抗ＣＬＬ１抗体１９Ｃ１の重鎖可変領域は、ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ： ７で示されるＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８で示されるＣＤＲ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９で示されるＣＤＲ３を含み、
前記抗ＣＬＬ１抗体１９Ｃ１の軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０で示されるＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５で示されるＣＤＲ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １１で示されるＣＤＲ３を含む。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７：ＳＹＷＩＥ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８：ＥＩＦＰＧＳＧＳＩＫＹＮＥＫＦＫＧ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９：ＧＧＴＹＮＤＹＳＬＦＤＹ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０：ＳＡＳＳＳＶＳＹＭＹ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １１：ＱＱＷＳＳＹＰ。
Ｑ ＩＤ ＮＯ： ７で示されるＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８で示されるＣＤＲ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９で示されるＣＤＲ３を含み、
前記抗ＣＬＬ１抗体１９Ｃ１の軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０で示されるＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５で示されるＣＤＲ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １１で示されるＣＤＲ３を含む。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７：ＳＹＷＩＥ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８：ＥＩＦＰＧＳＧＳＩＫＹＮＥＫＦＫＧ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９：ＧＧＴＹＮＤＹＳＬＦＤＹ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０：ＳＡＳＳＳＶＳＹＭＹ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １１：ＱＱＷＳＳＹＰ。
本願において、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７～９の重鎖可変領域ＣＤＲとＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５、１０～１１の軽鎖可変領域ＣＤＲとを含む抗ＣＬＬ１抗体１９Ｃ１は、ＣＬＬ１タンパク質結合活性を有する。
いくつかの具体的な実施形態において、前記抗ＣＬＬ１抗体１９Ｃ１の重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１で示されるアミノ酸配列を含む。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０：
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＭＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＴＧＹＴＦＳＳＹＷＩＥＷＶＫＱＲＰＧＨＧＬＥＷＩＧＥＩＦＰＧＳＧＳＩＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＦＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＨＹＣＡＲＧＧＴＹＮＤＹＳＬＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１：
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＹＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＲＬＬＩＦＤＴＳＮＬＡＳＧＶＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＲＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０：
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＭＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＴＧＹＴＦＳＳＹＷＩＥＷＶＫＱＲＰＧＨＧＬＥＷＩＧＥＩＦＰＧＳＧＳＩＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＦＴＡＤＴＳＳＮＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＨＹＣＡＲＧＧＴＹＮＤＹＳＬＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１：
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＹＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＲＬＬＩＦＤＴＳＮＬＡＳＧＶＰＶＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＲＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ。
１つの具体的な実施例において、前記抗ＣＬＬ１抗体２７Ｈ４の重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １２で示されるＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １３で示されるＣＤＲ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４で示されるＣＤＲ３を含み、
前記抗ＣＬＬ１抗体２７Ｈ４の軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５で示されるＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６で示されるＣＤＲ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７で示されるＣＤＲ３を含む。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １２：ＧＹＨＭＨ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １３：ＲＩＮＰＹＮＧＡＡＳＨＮＱＫＦＫＤ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４：ＧＷＤＹＤＧＧＹＹＡＭＤＹ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５：ＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＮＱＫＮＹＬＡ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６：ＷＡＳＴＲＥＳ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７：ＱＱＹＹＴＹＰ。
前記抗ＣＬＬ１抗体２７Ｈ４の軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５で示されるＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６で示されるＣＤＲ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７で示されるＣＤＲ３を含む。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １２：ＧＹＨＭＨ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １３：ＲＩＮＰＹＮＧＡＡＳＨＮＱＫＦＫＤ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４：ＧＷＤＹＤＧＧＹＹＡＭＤＹ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５：ＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＮＱＫＮＹＬＡ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６：ＷＡＳＴＲＥＳ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７：ＱＱＹＹＴＹＰ。
本願において、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １２～１４の重鎖可変領域ＣＤＲとＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５～１７の軽鎖可変領域ＣＤＲとを含む抗ＣＬＬ１抗体２７Ｈ４は、ＣＬＬ１タンパク質結合活性を有する。
いくつかの具体的な実施形態において、前記抗ＣＬＬ１抗体２７Ｈ４の重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２３で示されるアミノ酸配列を含む。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２２：
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＧＹＨＭＨＷＶＫＱ
ＳＨＶＫＳＬＥＷＩＧＲＩＮＰＹＮＧＡＡＳＨＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＨＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＷＤＹＤＧＧＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２３：
ＤＩＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＴＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２２：
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＧＹＨＭＨＷＶＫＱ
ＳＨＶＫＳＬＥＷＩＧＲＩＮＰＹＮＧＡＡＳＨＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＨＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＷＤＹＤＧＧＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２３：
ＤＩＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＹＹＴＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ。
好ましくは、抗ＣＬＬ１抗体２７Ｈ４に対してヒト化改造を行い、２７Ｈ４のフレーム領域を最適化し、取得したヒト化Ｈ２７Ｈ４抗体は、ＣＬＬ１とのより強い親和性を持ち、前記抗ＣＬＬ１抗体Ｈ２７Ｈ４の重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２５、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ： ２６またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２７で示されるアミノ酸配列を含む。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２４：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＨＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＭＧＲＩＮＰＹＮＧＡＡＳＨＮＱＫＦＫＤＲＶＴＩＴＲＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＷＤＹＤＧＧＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２５：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＴＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２６：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＮＱＫＮＹＬＡＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＹＹＴＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２７：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＹＹＴＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ。
ＮＯ： ２６またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２７で示されるアミノ酸配列を含む。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２４：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＨＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＭＧＲＩＮＰＹＮＧＡＡＳＨＮＱＫＦＫＤＲＶＴＩＴＲＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＷＤＹＤＧＧＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２５：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＹＴＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２６：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＮＱＫＮＹＬＡＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＹＹＴＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２７：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＤＮＱＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＹＹＴＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ。
好ましくは、前記抗ＣＬＬ１抗体はモノマーであり、１グループの重鎖および軽鎖で形成され、前記重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間は、鎖間ジスルフィド結合を介して連結される。
好ましくは、前記抗ＣＬＬ１抗体はポリマーであり、複数グループの重鎖および軽鎖で形成され、前記重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間は、鎖間ジスルフィド結合を介して連結され、異なる重鎖可変領域間は、鎖間ジスルフィド結合を介して連結される。
好ましくは、前記抗ＣＬＬ１抗体は定常領域を更に含む。
好ましくは、前記抗ＣＬＬ１抗体にグリコシル化基が修飾されている。
態様２において、本願は、態様１に記載の抗ＣＬＬ１抗体をコードするＤＮＡ断片を含む核酸分子を提供する。
態様３において、本願は、態様２に記載の核酸分子を含む発現ベクターを提供する。
態様４において、本願は、態様１に記載の抗ＣＬＬ１抗体を発見する組換え細胞を提供する。
好ましくは、前記組換え細胞のゲノムに、態様２に記載の核酸分子が組み込まれている。
好ましくは、前記組換え細胞は態様３に記載の発現ベクターを含む。
態様５において、本願は、
（１）抗ＣＬＬ１抗体のコード核酸をプラスミドに連結し、コンピンテントセルに転移し、培養した後、モノクローナル細胞を選抜してスクリーニングすることと、
（２）スクリーニングした陽性クローンの発現ベクターを抽出し、宿主細胞にトランスフェクションし、培養して上清を収集し、分離精製して前記抗体を取得することと、
を含む態様１に記載の抗ＣＬＬ１抗体の調製方法を提供する。
（１）抗ＣＬＬ１抗体のコード核酸をプラスミドに連結し、コンピンテントセルに転移し、培養した後、モノクローナル細胞を選抜してスクリーニングすることと、
（２）スクリーニングした陽性クローンの発現ベクターを抽出し、宿主細胞にトランスフェクションし、培養して上清を収集し、分離精製して前記抗体を取得することと、
を含む態様１に記載の抗ＣＬＬ１抗体の調製方法を提供する。
態様６において、本願は、態様１に記載の抗ＣＬＬ１抗体を含む医薬組成物を提供する。
好ましくは、前記医薬組成物は抗腫瘍薬を更に含む。
好ましくは、前記医薬組成物は、医薬的に許容されるベクター、希釈剤、または賦形剤のいずれか１種または少なくとも２種の組み合わせを更に含む。
態様７において、本願は、態様１に記載の抗ＣＬＬ１抗体、態様２に記載の核酸分子、態様３に記載の発現ベクター、態様４に記載の組換え細胞、または態様６に記載の医薬組成物の、疾患検出試薬および／または疾患治療薬の調製における使用であって、
好ましくは、前記疾患は急性骨髄性白血病を含む、
使用を提供する。
好ましくは、前記疾患は急性骨髄性白血病を含む、
使用を提供する。
態様８において、本願は、患者に有効用量の態様１に記載の抗ＣＬＬ１抗体を投与することを含む癌の治療方法を提供する。
好ましくは、前記方法は、１種または複数種の抗腫瘍薬を抗ＣＬＬ１抗体と同時、別々、または順次投与することを更に含む。
好ましくは、前記癌症は急性骨髄性白血病を含む。
従来技術と比べ、本願は、以下のような有益な効果を有する。
（１）本願の抗ＣＬＬ１抗体２３Ｄ７、２７Ｈ４、１９Ｃ１は、ＣＬＬ１に対して著しい結合能力を有し、ｃｈ２３Ｄ７、ｃｈ２７Ｈ４およびｃｈ１９Ｃ１の抗原ＣＬＬ１と結合する親和性は、それぞれ２．１９ｎＭ、３．８３ｎＭおよび１０．９ｎＭであり、対照抗体１０７５．７に相当する。
（２）本願の抗ＣＬＬ１抗体２３Ｄ７、２７Ｈ４、１９Ｃ１は、細胞表面のＣＬＬ１タンパク質と結合することができ、結合力は抗体濃度の上昇に伴って増大する。
（３）本願の抗体は、ヒト化改造を経た後、抗体と遊離したおよび／または細胞表面のＣＬＬ１との親和性を更に向上させる。
（４）本願の抗体およびそのヒト化改造された抗体は、ＣＬＬ１陽性腫瘍の治療におい
て重要な応用の見通しを有する。
て重要な応用の見通しを有する。
本願が講じた技術的手段およびその効果を更に説明するために、以下、実施例および図面を参照しながら本願について更に説明する。ここで説明する具体的な実施形態は、本願を解釈するためのものに過ぎず、本願を限定するものではないことが理解できる。
実施例に具体的な技術または条件が明記されていないものは、本分野内の文献に記載されている技術もしくは条件、または製品の説明書に従って行われる。使用される試薬または機器におけるメーカーが明記されていないものは、いずれも正規のルートから購入可能な通常の製品である。
実施例１ 抗体の取得
１０匹の７～８週齢のＢＡＬＢ／Ｃの健康な雌のマウスを選択し、免疫原ＣＬＬ１－ｍＦｃ（ＣＬＬ１細胞外ドメインとマウスＩｇＧ１ Ｆｃ断片との融合タンパク質、ＣＬＬ１細胞外ドメインのアミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２８に示すとおりである）を用いて免疫を行い、２回目の免疫を行ってから２週間後に、マウスの尾静脈から採血して血清を分離し、ＥＬＩＳＡで抗体価を検出し、抗体価が融合可能な要求に達した２匹のマウスを選択し、融合の３日前に抗原を５０μｇ／１００μＬ／匹で腹腔内に注射してショック免疫を行い、それと同時に、抗体価検出の１週間前に骨髄腫細胞ＳＰ２／０を蘇生させ、３７℃にて５％のＣＯ２インキュベーターで培養し、融合の前日に骨髄腫細胞を継代し、または新鮮な培地に交換し、細胞を最適な状態に保持させた。
１０匹の７～８週齢のＢＡＬＢ／Ｃの健康な雌のマウスを選択し、免疫原ＣＬＬ１－ｍＦｃ（ＣＬＬ１細胞外ドメインとマウスＩｇＧ１ Ｆｃ断片との融合タンパク質、ＣＬＬ１細胞外ドメインのアミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２８に示すとおりである）を用いて免疫を行い、２回目の免疫を行ってから２週間後に、マウスの尾静脈から採血して血清を分離し、ＥＬＩＳＡで抗体価を検出し、抗体価が融合可能な要求に達した２匹のマウスを選択し、融合の３日前に抗原を５０μｇ／１００μＬ／匹で腹腔内に注射してショック免疫を行い、それと同時に、抗体価検出の１週間前に骨髄腫細胞ＳＰ２／０を蘇生させ、３７℃にて５％のＣＯ２インキュベーターで培養し、融合の前日に骨髄腫細胞を継代し、または新鮮な培地に交換し、細胞を最適な状態に保持させた。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２８：
ＨＶＴＬＫＩＥＭＫＫＭＮＫＬＱＮＩＳＥＥＬＱＲＮＩＳＬＱＬＭＳＮＭＮＩＳＮＫＩＲＮＬＳＴＴＬＱＴＩＡＴＫＬＣＲＥＬＹＳＫＥＱＥＨＫＣＫＰＣＰＲＲＷＩＷＨＫＤＳＣＹＦＬＳＤＤＶＱＴＷＱＥＳＫＭＡＣＡＡＱＮＡＳＬＬＫＩＮＮＫＮＡＬＥＦＩＫＳＱＳＲＳＹＤＹＷＬＧＬＳＰＥＥＤＳＴＲＧＭＲＶＤＮＩＩＮＳＳＡＷＶＩＲＮＡＰＤＬＮＮＭＹＣＧＹＩＮＲＬＹＶＱＹＹＨＣＴＹＫＫＲＭＩＣＥＫＭＡＮＰＶＱＬＧＳＴＹＦＲＥＡ。
ＨＶＴＬＫＩＥＭＫＫＭＮＫＬＱＮＩＳＥＥＬＱＲＮＩＳＬＱＬＭＳＮＭＮＩＳＮＫＩＲＮＬＳＴＴＬＱＴＩＡＴＫＬＣＲＥＬＹＳＫＥＱＥＨＫＣＫＰＣＰＲＲＷＩＷＨＫＤＳＣＹＦＬＳＤＤＶＱＴＷＱＥＳＫＭＡＣＡＡＱＮＡＳＬＬＫＩＮＮＫＮＡＬＥＦＩＫＳＱＳＲＳＹＤＹＷＬＧＬＳＰＥＥＤＳＴＲＧＭＲＶＤＮＩＩＮＳＳＡＷＶＩＲＮＡＰＤＬＮＮＭＹＣＧＹＩＮＲＬＹＶＱＹＹＨＣＴＹＫＫＲＭＩＣＥＫＭＡＮＰＶＱＬＧＳＴＹＦＲＥＡ。
ショック免疫を行ったマウスを頸採血し、７５％のアルコールで１０ｍｉｎ消毒した後、脾臓を取り出し、結合組織を除去し、脾細胞懸濁液を調製し、脾細胞懸濁液を５０ｍＬの遠心チューブに移し、ＲＰＭＩ１６４０を３０ｍＬまで加え、１０００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心し、上清を捨て、ＲＰＭＩ１６４０を３０ｍＬまで加え、細胞カウントを行い、成長状態が良好な骨髄腫細胞（生細胞数＞９５％）を５０ｍＬの遠心チューブに移し、ＲＰＭＩ１６４０を３０ｍＬまで加え、１０００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心し、上清を捨て、ＲＰＭＩ１６４０を３０ｍＬまで加え、細胞カウントを行った。
脾細胞と骨髄腫細胞とを４：１の割合で混合させ、１０００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心し、上清を捨て、沈殿した細胞塊をペースト状にしてから３７℃の水浴に置き、１ｍｉｎ内に１ｍＬの融合剤を入れて均一に撹拌し、３７℃の水浴に４５～６０ｓ置き、１ｍｉｎ内にＲＰＭＩ１６４０を入れて融合剤の融合作用を終了させ、１０００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心し、上清を捨てた。
細胞を軽く均一にし、ＨＡＴを含む完全培養液を徐々に加え、細胞懸濁液を予め用意した完全培地に加え、ピペットで９６孔プレートに滴下し、各孔に１５０～２００μＬとし、３７℃にてＣＯ２のインキュベーターで培養して観察した。
細胞融合後の初日から細胞の成長状態を観察し、培養液が汚染されていないことを確定し、７～１０日間培養した後、ＨＡＴ培養液をＨＴ培養液に交換し、３～４日間培養し続け、各孔から上清を取り出してＥＬＩＳＡ検出を行った。
ＥＬＩＳＡのスクリーニングステップは、以下のとおりであった。
（１）抗原の被覆：濃度５０ｎｇ／ｍＬの純抗原ｈｕｍａｎ ＣＬＬ１ ＥＣＤ－Ｈｉｓ（ヒトＣＬＬ１細胞外ドメインにＨｉｓタグが連結されている）を被覆液で希釈した後、１００μＬ取ってポリスチレン酵素結合検出プレートの各孔に入れ、４℃で一晩置いた。
（２）ブロッキング：翌日、ＥＬＩＳＡプレートを室温にバランスさせ、ＰＢＳで３回洗浄し、各孔に１００μＬのブロッキング液を加え、室温で１時間インキュベートした後、ＰＢＳで３回洗浄し、叩いて乾燥させた。
（３）測定待ちサンプルの添加：無菌条件で融合細胞を取って上清を培養し、３５～５０μＬ／孔でサンプルをブロッキングされたＥＬＩＳＡプレートに加え、それと同時に、ネガティブコントロール孔（細胞成長がない）およびポジティブコントロール孔（陽性血清が添加された）を設け、室温で１ｈインキュベートし、ＰＢＳＴ（０．０５％トゥイーン）で３回洗浄し、ＰＢＳで２回洗浄した。
（４）二次抗体の添加：５０μＬ／孔の添加量で希釈された酵素標識二次抗体を加え、３７℃で３０ｍｉｎインキュベートし、ＰＢＳで３回洗浄し、叩いて乾燥させた。
（５）発色：二成分ＴＭＢ発色液終了液（Ｓｏｌａｒｂｉｏ、Ｃａｔ＃ＰＲ１２１０）を５０μＬ／孔で添加し、添加前に均一に混合させ、３７℃で１５～３０ｍｉｎ発色し、その後、５０μＬ／孔で終了液を加えて反応を終了させた。
（６）値の読み取り：単波長４５０ｎＭで各孔のＯＤ値を測定し、高い順に読み取り値が高い複数のクローンを選択して次の機能のスクリーニングを行った。
ＥＬＩＳＡ初回スクリーニングの陽性孔を選択し、合流率の高い陽性孔の細胞を２４孔プレートに継代し、更に機能実験を行い、サブクローンを行うクローン番号を確定し、限界希釈法で細胞サブクローンを行うとともに、凍結して種を保存し、具体的には、細胞クローンを希釈してから９６孔プレートに敷き、クローン毎に１つのプレートを敷き、ＨＴ培地で７～１０日間培養し、７日目以降顕微鏡で観察し、モノクローナル細胞を選択して上清をＥＬＩＳＡで更に陽性クローンをスクリーニングした。
クローンをシーケンシングし、クローン２３Ｄ７、１９Ｃ１、２７Ｈ４のアミノ酸配列を取得し、ここで、２３Ｄ７の重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８に示すとおりであり、軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９に示すとおりであり、１９Ｃ１の重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０に示すとおりであり、軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１に示すとおりであり、２７Ｈ４の重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２２に示すとおりであり、軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２３に示すとおりであった。
実施例２ 抗体の発現および精製
本実施例は、モノクローナル鑑定シーケンシング結果に基づき、特異的なプライマーを設計し、ＰＣＲで抗体２３Ｄ７、１９Ｃ１、２７Ｈ４の遺伝子を取得し、遺伝子をヒトＩｇＧ１重鎖定常領域のＦｃ断片のコーディング遺伝子の上流にクローンし、組換え真核発現ベクターを構築し、ヒト－マウスキメラ抗体発現プラスミドを取得した。
本実施例は、モノクローナル鑑定シーケンシング結果に基づき、特異的なプライマーを設計し、ＰＣＲで抗体２３Ｄ７、１９Ｃ１、２７Ｈ４の遺伝子を取得し、遺伝子をヒトＩｇＧ１重鎖定常領域のＦｃ断片のコーディング遺伝子の上流にクローンし、組換え真核発現ベクターを構築し、ヒト－マウスキメラ抗体発現プラスミドを取得した。
前記ヒト－マウスキメラ抗体発現プラスミドを２９３Ｆ細胞に一過性トランスフェクションし、一過性発現およびアフィニティ精製により、２３Ｄ７、１９Ｃ１、２７Ｈ４を親としてのキメラ抗体ｃｈ２３Ｄ７、ｃｈ１９Ｃ１、ｃｈ２７Ｈ４を取得した。
実施例３ 抗体の親和性試験
本実施例は、ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定方法（Ｐ． Ｅｓｔｅｐら、Ｈｉｇｈ ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｏｌｕｔｉｏｎ－ｂａｓｅｄ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ａｎｔｉｇｅｎ ａｆｆｉｎｉｔｙ ａｎｄ ｅｐｉｔｏｐｅ ｂｉｎｎｉｎｇ．ＭＡｂｓ、２０１３．５（２）：２７０～２７８．）を採用してキメラ抗体ｃｈ２３Ｄ７、ｃｈ１９Ｃ１、ｃｈ２７Ｈ４に対して親和性検出を行い、対照抗体（Ａｎｔｉ－ＣＬＬ１－Ｒｅｆ）は、抗ヒトＣＬＬ－１抗体１０７５．７（特許ＵＳ８５３６３１０Ｂ２）のＶＬおよびＶＬ鎖（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２９）を選択した。
本実施例は、ＦｏｒｔｅＢｉｏ親和性測定方法（Ｐ． Ｅｓｔｅｐら、Ｈｉｇｈ ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｏｌｕｔｉｏｎ－ｂａｓｅｄ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ａｎｔｉｇｅｎ ａｆｆｉｎｉｔｙ ａｎｄ ｅｐｉｔｏｐｅ ｂｉｎｎｉｎｇ．ＭＡｂｓ、２０１３．５（２）：２７０～２７８．）を採用してキメラ抗体ｃｈ２３Ｄ７、ｃｈ１９Ｃ１、ｃｈ２７Ｈ４に対して親和性検出を行い、対照抗体（Ａｎｔｉ－ＣＬＬ１－Ｒｅｆ）は、抗ヒトＣＬＬ－１抗体１０７５．７（特許ＵＳ８５３６３１０Ｂ２）のＶＬおよびＶＬ鎖（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２９）を選択した。
簡単に言えば、ベースラインを確立するために、抗体を抗ヒトＩｇＧ捕捉（ＡＨＣ）バイオセンサに搭載し、センサを測定緩衝液内においてオフラインで３０ｍｉｎバランスさせ、オンラインで６０ｓ監視した。抗体を搭載したセンサと１００ｎＭの抗原ｈｕｍａｎ
ＣＬＬ１ ＥＣＤ－Ｈｉｓとを共に５ｍｉｎインキュベートした後、測定緩衝液内に移し、５ｍｉｎ後に解離速度を測定し、１：１の結合モデルで動力学分析を行った。
ＣＬＬ１ ＥＣＤ－Ｈｉｓとを共に５ｍｉｎインキュベートした後、測定緩衝液内に移し、５ｍｉｎ後に解離速度を測定し、１：１の結合モデルで動力学分析を行った。
結果は、表１および図１に示すように、ｃｈ２３Ｄ７、ｃｈ２７Ｈ４およびｃｈ１９Ｃ１の抗原ＣＬＬ１と結合する親和性は、それぞれ２．１９ｎＭ、３．８３ｎＭおよび１０．９ｎＭであり、対照抗体１０７５．７の抗原ＣＬＬ１と結合する親和性は１．０８ｎＭであった。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２９：
ＥＮＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＲＡＳＳＮＶＩＳＳＹＶＨＷＹＱＱＲＳＧＡＳＰＫＬＷＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＹＳＧＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＳＬＳＬＴＣＳＶＴＧＹＳＩＴＳＡＹＹＷＮＷＩＲＱＦＰＧＮＫＬＥＷＭＧＹＩＳＹＤＧＲＮＮＹＮＰＳＬＫＮＲＩＳＩＴＲＤＴＳＫＮＱＦＦＬＫＬＮＳＶＴＴＥＤＴＡＴＹＹＣＡＫＥＧＤＹＤＶＧＮＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ。
ＥＮＶＬＴＱＳＰＡＩＭＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＲＡＳＳＮＶＩＳＳＹＶＨＷＹＱＱＲＳＧＡＳＰＫＬＷＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＹＳＧＹＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＳＬＳＬＴＣＳＶＴＧＹＳＩＴＳＡＹＹＷＮＷＩＲＱＦＰＧＮＫＬＥＷＭＧＹＩＳＹＤＧＲＮＮＹＮＰＳＬＫＮＲＩＳＩＴＲＤＴＳＫＮＱＦＦＬＫＬＮＳＶＴＴＥＤＴＡＴＹＹＣＡＫＥＧＤＹＤＶＧＮＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ。
実施例４ 抗体とＨＥＫ２９３細胞におけるＣＬＬ１との結合
本実施例は、抗体ｃｈ２３Ｄ７、ｃｈ２７Ｈ４、ｃｈ１９Ｃ１とＨＥＫ２９３細胞におけるＣＬＬ１との結合をフローサイトメトリー法で検出し、ステップは以下のとおりであった。
本実施例は、抗体ｃｈ２３Ｄ７、ｃｈ２７Ｈ４、ｃｈ１９Ｃ１とＨＥＫ２９３細胞におけるＣＬＬ１との結合をフローサイトメトリー法で検出し、ステップは以下のとおりであった。
ＰＢＳ＋５％ＢＳＡを採用してＣＬＬ１を過剰発現した５×１０５個のＨＥＫ２９３細胞を再懸濁し、４℃で３０ｍｉｎインキュベートし、異なる濃度の抗体（１μｇ／ｍＬ～０．０１μｇ／ｍＬ、１０倍段階希釈）を加え、４℃で６０ｍｉｎインキュベートし、遠心して洗浄した後、ＦＩＴＣ－標識ヒツジ抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ二次抗体（１：２００、ｓｉｇｍａ、Ｆ９５１２）を含むＰＢＳ＋５％ＢＳＡ溶液を加え、氷上で遮光して３０ｍｉｎインキュベートし、細胞を３回洗浄した後、フローサイトメトリー法で分析した。
対照グループＣＬＬ１－ＲｅｆＡｂ（ｃｈ１０７５．７）、Ｃｅｌｌ＋二次抗体、およびＢｌａｎｋを設けた。
結果は、図２に示すように、キメラ抗体ｃｈ２３Ｄ７、ｃｈ２７Ｈ４、ｃｈ１９Ｃ１、ｃｈ１０７５．７は、いずれもＨＥＫ２９３－ＣＬＬ１細胞と効果的に結合することができ、抗体濃度の上昇に伴い、平均蛍光強度（ＭＦＩ）も上昇した。
実施例５ 抗体のヒト化改造
本実施例は、２７Ｈ４に対してヒト化改造を行った。簡単に言えば、２７Ｈ４抗体の遺伝子配列をヒト抗体Ｇｅｒｍｌｉｎｅデータベースと比較し、相同性が高い配列を見出したとともに、一般的に使用しないまたは小さな種類のＧｅｒｍｌｉｎｅを回避した。ヒト化テンプレートを選択した後、抗体の特定のＦＲサイトにおけるアミノ酸の出現頻度を並べ替え（ｒｅａｒｒａｎｇｅｄ）、ＣＤＲ移植を行い、グリコシル化等のタンパク質修飾サイトおよび化学分解しやすいサイトの導入を回避し、ＣＤＲ移植後の配列の親和性が低下すると、復帰変異を行い、変異原則は、ＦＲ領域に対して段階的な単一サイトの変異を行うことであり、ＣＤＲ領域に修飾サイトまたは化学分解サイトが存在し、且つタンパク質の品質制御に影響を及ぼす場合、サイトに対して段階的な単一サイトの変異を行い、毎ラウンドの変異の後に、親和性（ＫＤ／Ｋｏｎ／Ｋｏｆｆ）検出を行い、最終的に取得したヒト化配列は、親和性（親と比べて３倍以内の差がある）、安定性、タンパク質の品質
（プレアルブミンＰＡ＞９０％）等の面でいずれも最適な表現を有する。
本実施例は、２７Ｈ４に対してヒト化改造を行った。簡単に言えば、２７Ｈ４抗体の遺伝子配列をヒト抗体Ｇｅｒｍｌｉｎｅデータベースと比較し、相同性が高い配列を見出したとともに、一般的に使用しないまたは小さな種類のＧｅｒｍｌｉｎｅを回避した。ヒト化テンプレートを選択した後、抗体の特定のＦＲサイトにおけるアミノ酸の出現頻度を並べ替え（ｒｅａｒｒａｎｇｅｄ）、ＣＤＲ移植を行い、グリコシル化等のタンパク質修飾サイトおよび化学分解しやすいサイトの導入を回避し、ＣＤＲ移植後の配列の親和性が低下すると、復帰変異を行い、変異原則は、ＦＲ領域に対して段階的な単一サイトの変異を行うことであり、ＣＤＲ領域に修飾サイトまたは化学分解サイトが存在し、且つタンパク質の品質制御に影響を及ぼす場合、サイトに対して段階的な単一サイトの変異を行い、毎ラウンドの変異の後に、親和性（ＫＤ／Ｋｏｎ／Ｋｏｆｆ）検出を行い、最終的に取得したヒト化配列は、親和性（親と比べて３倍以内の差がある）、安定性、タンパク質の品質
（プレアルブミンＰＡ＞９０％）等の面でいずれも最適な表現を有する。
以上の原則に基づき、ヒト化ｈｚ２７Ｈ４抗体の１本の重鎖可変領域であるｈｚ２７Ｈ４Ｈ１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２４）と、３本の軽鎖可変領域であるｈｚ２７Ｈ４Ｌ１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２５）、ｈｚ２７Ｈ４Ｌ２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２６）およびｈｚ２７Ｈ４Ｌ３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２７）とを取得した。
実施例６ ヒト化前後の抗体のＣＬＬ１との親和性の差のＦｏｒｔｅＢＩｏによる分析
簡単に言えば、ベースラインを確立するために、４μｇ／ｍＬの抗体を抗ヒトＩｇＧ捕捉（ＡＨＣ）バイオセンサに搭載し、センサを測定緩衝液内においてオフラインで３０ｍｉｎバランスさせ、オンラインで６０ｓ監視し、抗体を搭載したセンサと６０ｎＭの抗原ｈｕｍａｎ ＣＬＬ１ ＥＣＤ－Ｈｉｓとを共に３ｍｉｎインキュベートし、その後、測定緩衝液に移し、３ｍｉｎ後に解離速度を測定し、１：１の結合モデルで動力学分析を行った。
簡単に言えば、ベースラインを確立するために、４μｇ／ｍＬの抗体を抗ヒトＩｇＧ捕捉（ＡＨＣ）バイオセンサに搭載し、センサを測定緩衝液内においてオフラインで３０ｍｉｎバランスさせ、オンラインで６０ｓ監視し、抗体を搭載したセンサと６０ｎＭの抗原ｈｕｍａｎ ＣＬＬ１ ＥＣＤ－Ｈｉｓとを共に３ｍｉｎインキュベートし、その後、測定緩衝液に移し、３ｍｉｎ後に解離速度を測定し、１：１の結合モデルで動力学分析を行った。
結果は、表２に示すように、３つのヒト化抗体（ｈｚ２７Ｈ４Ｈ１Ｌ１、ｈｚ２７Ｈ４Ｈ１Ｌ２およびｈｚ２７Ｈ４Ｈ１Ｌ３）は、親抗体（ｃｈ２７Ｈ４）と比べ、いずれも高い親和性を保留した。
実施例７ ヒト化抗体とＣＬＬ１との結合のフローサイトメーターによる検出
本実施例は、フローサイトメトリー法で抗体ｈｚ２７Ｈ４Ｈ１Ｌ１、ｈｚ２７Ｈ４Ｈ１Ｌ２とＨＥＫ２９３細胞におけるＣＬＬ１との結合を検出し、ステップは以下のとおりであった。
本実施例は、フローサイトメトリー法で抗体ｈｚ２７Ｈ４Ｈ１Ｌ１、ｈｚ２７Ｈ４Ｈ１Ｌ２とＨＥＫ２９３細胞におけるＣＬＬ１との結合を検出し、ステップは以下のとおりであった。
ＰＢＳ＋５％ＢＳＡを採用してＣＬＬ１を過剰発現した２×１０５個のＨＥＫ２９３細胞を再懸濁し、４℃で３０ｍｉｎインキュベートし、異なる濃度の抗体（５μｇ／ｍＬ～０．００２２８６μｇ／ｍＬ、３倍段階希釈）を加え、４℃で６０ｍｉｎインキュベートし、遠心して洗浄した後、ＦＩＴＣ－標識ヒツジ抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ二次抗体（１：２００、ｓｉｇｍａ、Ｆ９５１２）を含むＰＢＳ＋５％ＢＳＡ溶液を加え、氷上で遮光して３０ｍｉｎインキュベートし、細胞を３回洗浄した後、フローサイトメトリー法で分析し、Ｇｒａｐｈｐａｄソフトウェアで計算してＥＣ５０を得た。
対照グループｃｈ２７Ｈ４、ＣＬＬ１－ＲｅｆＡｂ（ｃｈ１０７５．７）、およびＮＣ－ｈｕＩｇＧ１を設けた。
結果は、図３、図４および表３に示すように、ｃｈ２７Ｈ４は用量依存の方式でＣＬＬ１と結合し、ＥＣ５０（ｎ＝１）は０．３５８３μｇ／ｍＬであり、ｈｚ２７Ｈ４Ｈ１Ｌ１は用量依存の方式でＣＬＬ１と結合し、ＥＣ５０値（ｎ＝１）は０．２６８１μｇ／ｍ
Ｌであり、ｈｚ２７Ｈ４Ｈ１Ｌ２は用量依存の方式でＣＬＬ１と結合し、ＥＣ５０値（ｎ＝１）は０．３２１４μｇ／ｍＬであり、ＣＬＬ１－ｒｅｆＡｂは用量依存の方式でＣＬＬ１と結合し、ＥＣ５０値（ｎ＝１）は０．２２４６μｇ／ｍＬであり、ｃｈ２７Ｈ４、ｈｚ２７Ｈ４Ｈ１Ｌ１およびｈｚ２７Ｈ４Ｈ１Ｌ２は、ＣＬＬ１－ｒｅｆＡｂに類似するＥＣ５０でヒトＣＬＬ１と結合した。
Ｌであり、ｈｚ２７Ｈ４Ｈ１Ｌ２は用量依存の方式でＣＬＬ１と結合し、ＥＣ５０値（ｎ＝１）は０．３２１４μｇ／ｍＬであり、ＣＬＬ１－ｒｅｆＡｂは用量依存の方式でＣＬＬ１と結合し、ＥＣ５０値（ｎ＝１）は０．２２４６μｇ／ｍＬであり、ｃｈ２７Ｈ４、ｈｚ２７Ｈ４Ｈ１Ｌ１およびｈｚ２７Ｈ４Ｈ１Ｌ２は、ＣＬＬ１－ｒｅｆＡｂに類似するＥＣ５０でヒトＣＬＬ１と結合した。
実施例８ 抗体の特異性の膜プロテオームアレイによる評価
本実施例は、膜プロテオームアレイ（Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｐｒｏｔｅｏｍｅ Ａｒｒａｙ、ＭＰＡ）を採用して抗体の非標的点結合の相互作用を検証した。膜プロテオームアレイ（ＭＰＡ）は、特異的な抗体および他のリガンドを標的とするヒト膜タンパク質を分析する１つのプラットフォームであり、抗体の標的点の特異性を確定することに使用できる。
本実施例は、膜プロテオームアレイ（Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｐｒｏｔｅｏｍｅ Ａｒｒａｙ、ＭＰＡ）を採用して抗体の非標的点結合の相互作用を検証した。膜プロテオームアレイ（ＭＰＡ）は、特異的な抗体および他のリガンドを標的とするヒト膜タンパク質を分析する１つのプラットフォームであり、抗体の標的点の特異性を確定することに使用できる。
約６０００個の膜タンパク質クローン（ヒト膜プロテオームの９４％以上を占める）を含むプラスミドを、それぞれＨＥＫ－２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ－３２１６）またはＱＴ６細胞（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ－１７０８）にトランスフェクションし、１８０００個の細胞／孔の密度で３８４孔の細胞培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、３７６４）に接種し、３６時間インキュベートした後、試験抗体を予め確定された濃度で膜プロテオームアレイマトリックスプレートに加え、フローサイトメーターで抗体ｓｃＦｖと約６０００種の膜タンパク質の発現細胞との結合状況を直接検出した。全ての標的タンパク質は、いずれも天然配座および適当な翻訳後修飾を有し、哺乳動物が発現した一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）はＶＬ－（Ｇ４Ｓ）３－ＶＨ構造であり、Ｃ末端はヒトｈＩｇＧ１－Ｆｃを融合発現し、具体的な情報は表４に示すとおりであった。
試験結果は、図５Ａ、図５Ｂ、図５Ｃおよび図５Ｄに示すように、２３Ｄ７－ｓｃＦｖ－ｈＦｃ、２７Ｈ４－ｓｃＦｖ－ｈＦｃ、１９Ｃ１－ｓｃＦｖ－ｈＦｃ、Ｈｚ２７Ｈ４－ｓｃＦｖ－ｈＦｃは、いずれもＣＬＬ１標的抗原と特異的に結合することができ、ここで、ＦＣＧＲ１Ａ、ＦＣＧＲ２Ｂ、ＦＣＧＲ３ＢはＩｇＧ Ｆｃ受容体（ＩｇＧ Ｆｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ）であった。
実施例９ 抗体親和性の表面プラズモン共鳴による測定
本実施例は、表面プラズモン共鳴技術（Ｓｕｒｆａｃｅ Ｐｌａｓｍｏｎ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ、ＳＰＲ）を採用して２種のＣＬＬ－１抗原（組換えヒト由来ＣＬＬ－１、Ａｃｒｏ、商品番号：ＣＬＡ－Ｈ５２４５、ロット番号：３４１３ａ－９Ｂ８Ｆ１－ＳＱ。組換えカニクイサルＣＬＬ－１、Ａｃｒｏ、商品番号：ＣＬＡ－Ｈ５２６３、ロット番号：３７６５－２０７９Ｆ１－ＳＳ）と６つの抗体との親和性を検出して比較し、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）はＶＬ－（Ｇ４Ｓ）３－ＶＨ構造であり、Ｃ末端はヒトｈＩｇＧ１－Ｆｃを融合発現し、サンプル情報テーブルは表５に示すとおりであった。
本実施例は、表面プラズモン共鳴技術（Ｓｕｒｆａｃｅ Ｐｌａｓｍｏｎ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ、ＳＰＲ）を採用して２種のＣＬＬ－１抗原（組換えヒト由来ＣＬＬ－１、Ａｃｒｏ、商品番号：ＣＬＡ－Ｈ５２４５、ロット番号：３４１３ａ－９Ｂ８Ｆ１－ＳＱ。組換えカニクイサルＣＬＬ－１、Ａｃｒｏ、商品番号：ＣＬＡ－Ｈ５２６３、ロット番号：３７６５－２０７９Ｆ１－ＳＳ）と６つの抗体との親和性を検出して比較し、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）はＶＬ－（Ｇ４Ｓ）３－ＶＨ構造であり、Ｃ末端はヒトｈＩｇＧ１－Ｆｃを融合発現し、サンプル情報テーブルは表５に示すとおりであった。
（１）サンプルの配合
抗体希釈液（リガンド）：抗体を１×ＨＢＳ－ＥＰ＋ランニング緩衝液で５μｇ／ｍＬに希釈した。
組換えヒト由来ＣＬＬ－１希釈液（分析物１）：組換えヒト由来ＣＬＬ－１（２５０μｇ／ｍＬ）をランニング緩衝液で５０ｎＭに希釈し、２倍段階希釈して５０ｎＭ、２５ｎＭ、１２．５ｎＭ、６．２５ｎＭ、３．１２５ｎＭ、０ｎＭの組換えヒト由来ＣＬＬ－１希釈液を取得した。
組換えカニクイサルＣＬＬ－１希釈液（分析物２）：組換えカニクイサルＣＬＬ－１（２５０μｇ／ｍＬ）をランニング緩衝液で５０ｎＭに希釈し、２倍段階希釈して５０ｎＭ、２５ｎＭ、１２．５ｎＭ、６．２５ｎＭ、３．１２５ｎＭ、０ｎＭの組換えカニクイサルＣＬＬ－１希釈液を取得した。
抗体希釈液（リガンド）：抗体を１×ＨＢＳ－ＥＰ＋ランニング緩衝液で５μｇ／ｍＬに希釈した。
組換えヒト由来ＣＬＬ－１希釈液（分析物１）：組換えヒト由来ＣＬＬ－１（２５０μｇ／ｍＬ）をランニング緩衝液で５０ｎＭに希釈し、２倍段階希釈して５０ｎＭ、２５ｎＭ、１２．５ｎＭ、６．２５ｎＭ、３．１２５ｎＭ、０ｎＭの組換えヒト由来ＣＬＬ－１希釈液を取得した。
組換えカニクイサルＣＬＬ－１希釈液（分析物２）：組換えカニクイサルＣＬＬ－１（２５０μｇ／ｍＬ）をランニング緩衝液で５０ｎＭに希釈し、２倍段階希釈して５０ｎＭ、２５ｎＭ、１２．５ｎＭ、６．２５ｎＭ、３．１２５ｎＭ、０ｎＭの組換えカニクイサルＣＬＬ－１希釈液を取得した。
（２）組換えヒト由来ＣＬＬ－１抗原の分析
Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａチップで検出し、５μｇ／ｍＬの抗体希釈液に１０μＬ／ｍｉｎの流速で実験流路（Ｆｃ２、Ｆｃ４）を通過させ、捕捉量が約４５４ＲＵとなるように２０ｓ捕捉し、その後、流速を３０μＬ／ｍｉｎに調節し、異なる濃度の組換えヒト由来ＣＬＬ－１希釈液（０、３．１２５ｎＭ、６．２５ｎＭ、１２．５ｎＭ、２５ｎＭ、５０ｎＭ）を順次添加しながら、実験流路（Ｆｃ２、Ｆｃ４）およびリファレンス流路（Ｆｃ１、Ｆｃ３）の表面を通過させ、結合時間を８５ｓとし、解離時間を７０ｓとし、最後にグリシン液（Ｇｌｙｃｉｎｅ、ｐＨ＝１．５）を６０ｓ添加し、チップを再生して次のサイクルに進んだ。
Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａチップで検出し、５μｇ／ｍＬの抗体希釈液に１０μＬ／ｍｉｎの流速で実験流路（Ｆｃ２、Ｆｃ４）を通過させ、捕捉量が約４５４ＲＵとなるように２０ｓ捕捉し、その後、流速を３０μＬ／ｍｉｎに調節し、異なる濃度の組換えヒト由来ＣＬＬ－１希釈液（０、３．１２５ｎＭ、６．２５ｎＭ、１２．５ｎＭ、２５ｎＭ、５０ｎＭ）を順次添加しながら、実験流路（Ｆｃ２、Ｆｃ４）およびリファレンス流路（Ｆｃ１、Ｆｃ３）の表面を通過させ、結合時間を８５ｓとし、解離時間を７０ｓとし、最後にグリシン液（Ｇｌｙｃｉｎｅ、ｐＨ＝１．５）を６０ｓ添加し、チップを再生して次のサイクルに進んだ。
（３）組換えカニクイサルＣＬＬ－１抗原の分析
Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａチップで検出し、５μｇ／ｍＬの抗体希釈液に１０μＬ／ｍｉｎの流速で実験流路（Ｆｃ２、Ｆｃ４）を通過させ、捕捉量が約４５４ＲＵとなるように２０
ｓ捕捉し、その後、流速を３０μＬ／ｍｉｎに調節し、異なる濃度の組換えカニクイサルＣＬＬ－１希釈液（０、３．１２５ｎＭ、６．２５ｎＭ、１２．５ｎＭ、２５ｎＭ、５０ｎＭ）を順次添加しながら、実験流路（Ｆｃ２、Ｆｃ４）およびリファレンス流路（Ｆｃ１、Ｆｃ３）の表面を通過させ、結合時間を８５ｓとし、解離時間を７０ｓとし、最後にグリシン液（Ｇｌｙｃｉｎｅ、ｐＨ＝１．５）を６０ｓ添加し、チップを再生して次のサイクルに進んだ。
Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａチップで検出し、５μｇ／ｍＬの抗体希釈液に１０μＬ／ｍｉｎの流速で実験流路（Ｆｃ２、Ｆｃ４）を通過させ、捕捉量が約４５４ＲＵとなるように２０
ｓ捕捉し、その後、流速を３０μＬ／ｍｉｎに調節し、異なる濃度の組換えカニクイサルＣＬＬ－１希釈液（０、３．１２５ｎＭ、６．２５ｎＭ、１２．５ｎＭ、２５ｎＭ、５０ｎＭ）を順次添加しながら、実験流路（Ｆｃ２、Ｆｃ４）およびリファレンス流路（Ｆｃ１、Ｆｃ３）の表面を通過させ、結合時間を８５ｓとし、解離時間を７０ｓとし、最後にグリシン液（Ｇｌｙｃｉｎｅ、ｐＨ＝１．５）を６０ｓ添加し、チップを再生して次のサイクルに進んだ。
（４）データの分析
データ分析ソフトウェアＥｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ３．１で試験結果を分析し、サンプル試験流路から収集したセンシング信号に対してリファレンス流路、サンプルブランクの二重差し引きを行い、動力学「１：１」モデルを用いてフィッティングし、各ロットのサンプルおよびｓｈＴＮＦ－αの動力学的パラメータ（ｋａ：結合速度、ｋｄ：解離速度、ｋＤ：結合解離平衡定数）を取得した。６つの抗体の、組換えヒト由来ＣＬＬ－１との結合の動力学的フィッティング結果は、表６および図６Ａに示すとおりであった。組換えカニクイサルＣＬＬ－１との結合の動力学的フィッティング結果は図６Ｂに示すとおりであった。
データ分析ソフトウェアＥｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ３．１で試験結果を分析し、サンプル試験流路から収集したセンシング信号に対してリファレンス流路、サンプルブランクの二重差し引きを行い、動力学「１：１」モデルを用いてフィッティングし、各ロットのサンプルおよびｓｈＴＮＦ－αの動力学的パラメータ（ｋａ：結合速度、ｋｄ：解離速度、ｋＤ：結合解離平衡定数）を取得した。６つの抗体の、組換えヒト由来ＣＬＬ－１との結合の動力学的フィッティング結果は、表６および図６Ａに示すとおりであった。組換えカニクイサルＣＬＬ－１との結合の動力学的フィッティング結果は図６Ｂに示すとおりであった。
結果により、２３Ｄ７－ｓｃＦｖ－ｈＦｃと組換えヒト由来ＣＬＬ－１との結合親和性が低かったほか、別の５つの抗体と組換えヒト由来ＣＬＬ－１結合との親和性がいずれも１ｎＭ～６ｎＭの間にあり、６つの抗体が組換えカニクイサルＣＬＬ－１といずれも結合しなかったことを示した（図６Ｂ）。
上記をまとめ、本願の抗ＣＬＬ１抗体２３Ｄ７、２７Ｈ４、１９Ｃ１は、ＣＬＬ１に対して著しい結合能力を有し、ヒト化改造を経た後、抗体とＣＬＬ１との親和性を更に向上させ、腫瘍の臨床診断および／または治療の面で重要な応用の見通しを有する。
本願は、上記実施例により本願の詳細方法を説明するが、本願は上記詳細方法に限定されるものではなく、即ち、本願は上記詳細方法に依存して実施しなければならないことを意味するものではないことを、出願人より声明する。当業者であれば、本願に対するいかなる改良、本願の製品の各原料に対する等価的な置換および補助成分の追加、具体的な形態の選択等は、全て本願の保護範囲および開示範囲内に含まれることを理解すべきである。
Claims (10)
- 抗ＣＬＬ１抗体であって、
前記抗ＣＬＬ１抗体の重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １で示されるＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２で示されるＣＤＲ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３で示されるＣＤＲ３を含み、且つ、前記抗ＣＬＬ１抗体の軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４で示されるＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５で示されるＣＤＲ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６で示されるＣＤＲ３を含み、または
前記抗ＣＬＬ１抗体の重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７で示されるＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８で示されるＣＤＲ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９で示されるＣＤＲ３を含み、且つ、前記抗ＣＬＬ１抗体の軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０で示されるＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５で示されるＣＤＲ２、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ： １１で示されるＣＤＲ３を含み、または
前記抗ＣＬＬ１抗体の重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １２で示されるＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １３で示されるＣＤＲ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４で示されるＣＤＲ３を含み、且つ、前記抗ＣＬＬ１抗体の軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５で示されるＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６で示されるＣＤＲ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７で示されるＣＤＲ３を含む、
前記抗ＣＬＬ１抗体。 - 前記抗ＣＬＬ１抗体の重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９で示されるアミノ酸配列を含み、または
前記抗ＣＬＬ１抗体の重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１で示されるアミノ酸配列を含み、または
前記抗ＣＬＬ１抗体の重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２２で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２３で示されるアミノ酸配列を含み、または
前記抗ＣＬＬ１抗体の重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２４で示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２６、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２７で示されるアミノ酸配列を含む、
請求項１に記載の抗ＣＬＬ１抗体。 - 前記抗ＣＬＬ１抗体の重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間は、鎖間ジスルフィド結合を介して連結され、かつ、前記抗ＣＬＬ１抗体の重鎖可変領域間は、鎖間ジスルフィド結合を介して連結される、
請求項１または２に記載の抗ＣＬＬ１抗体。 - 前記抗ＣＬＬ１抗体は定常領域を更に含む、
請求項１から３のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ１抗体。 - 前記抗ＣＬＬ１抗体にグリコシル化基が修飾されている、
請求項１から４のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ１抗体。 - 請求項１から５のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ１抗体をコードするＤＮＡ断片を含む、
核酸分子。 - 請求項６に記載の核酸分子を含む、
発現ベクター。 - 請求項１から５のいずれか１項に記載の抗ＣＬＬ１抗体を発現する、
組換え細胞。 - 前記組換え細胞のゲノムに請求項６に記載の核酸分子が組み込まれている、
請求項８に記載の組換え細胞。 - 前記組換え細胞は、請求項７に記載の発現ベクターを含む、
請求項８に記載の組換え細胞。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011458917.8A CN113045658B (zh) | 2020-12-11 | 2020-12-11 | 抗cll1抗体及其应用 |
| CN202011458917.8 | 2020-12-11 | ||
| PCT/CN2020/138286 WO2022120943A1 (zh) | 2020-12-11 | 2020-12-22 | 抗cll1抗体及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2023509821A JP2023509821A (ja) | 2023-03-10 |
| JP7384493B2 true JP7384493B2 (ja) | 2023-11-21 |
Family
ID=76508000
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2022529575A Active JP7384493B2 (ja) | 2020-12-11 | 2020-12-22 | 抗ｃｌｌ１抗体およびその使用 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20220396626A1 (ja) |
| EP (1) | EP4039708A4 (ja) |
| JP (1) | JP7384493B2 (ja) |
| KR (1) | KR102712484B1 (ja) |
| CN (3) | CN113045658B (ja) |
| AU (1) | AU2020480236A1 (ja) |
| GB (1) | GB2610467A (ja) |
| WO (1) | WO2022120943A1 (ja) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2023254830A1 (en) * | 2022-04-11 | 2024-10-17 | Vor Biopharma Inc. | Binding agents and methods of use thereof |
| CN117106086A (zh) * | 2022-08-09 | 2023-11-24 | 合源康华医药科技(北京)有限公司 | 一种cll1抗体及其应用 |
| WO2024032247A1 (zh) * | 2022-08-09 | 2024-02-15 | 合源康华医药科技(北京)有限公司 | 一种cll1抗体及其应用 |
| WO2024141063A1 (zh) * | 2022-12-30 | 2024-07-04 | 甘李药业股份有限公司 | 抗rsv病毒抗体、组合物、制剂及其应用 |
| WO2024149225A1 (zh) * | 2023-01-10 | 2024-07-18 | 合源康华医药科技(北京)有限公司 | 一种人源化cll1抗体、嵌合抗原受体及其应用 |
| CN116640211A (zh) * | 2023-02-28 | 2023-08-25 | 浙江康佰裕生物科技有限公司 | 特异性结合cll1蛋白的单域抗体及其应用 |
| CN116462761B (zh) * | 2023-06-14 | 2023-09-08 | 浙江时迈药业有限公司 | 针对cll1的抗体及其用途 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015519336A (ja) | 2012-05-07 | 2015-07-09 | セレラント セラピューティクス インコーポレイテッド | Ｃｌｌ−１に対して特異的な抗体 |
| JP2017534256A (ja) | 2014-09-12 | 2017-11-24 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | Ａｎｔｉ−ｃｌｌ−１抗体及び免疫複合体 |
| JP2018522541A5 (ja) | 2016-06-14 | 2019-07-18 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009051974A1 (en) | 2007-10-17 | 2009-04-23 | Nuvelo, Inc. | Antibodes to cll-1 |
| MX2017009181A (es) * | 2015-01-26 | 2017-11-22 | Cellectis | Receptores de antigenos quimericos de cadena sencilla especificos de anti-cll1 para inmunoterapia de cancer. |
| CN107847568B (zh) * | 2015-06-16 | 2022-12-20 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 抗cll-1抗体和使用方法 |
| EP3380524A4 (en) * | 2015-11-24 | 2019-07-24 | Cellerant Therapeutics, Inc. | HUMANIZED ANTI-CLL-1 ANTIBODIES |
| SG10201606949QA (en) * | 2016-08-19 | 2018-03-28 | Singapore Health Serv Pte Ltd | Immunosuppressive composition for use in treating immunological disorders |
| CN110357960A (zh) * | 2018-04-10 | 2019-10-22 | 广州爱思迈生物医药科技有限公司 | 抗体及抗体改造方法 |
| CN111116753A (zh) * | 2018-10-30 | 2020-05-08 | 上海泰因生物技术有限公司 | 一种双特异性抗体的制备方法 |
| CN112961242B (zh) * | 2020-06-30 | 2022-01-04 | 广州百暨基因科技有限公司 | 抗b7h3抗体及其应用 |
-
2020
- 2020-12-11 CN CN202011458917.8A patent/CN113045658B/zh active Active
- 2020-12-11 CN CN202111276097.5A patent/CN113980134B/zh active Active
- 2020-12-11 CN CN202111276003.4A patent/CN113896795B/zh active Active
- 2020-12-22 EP EP20958916.7A patent/EP4039708A4/en active Pending
- 2020-12-22 WO PCT/CN2020/138286 patent/WO2022120943A1/zh unknown
- 2020-12-22 GB GB2207720.0A patent/GB2610467A/en active Pending
- 2020-12-22 AU AU2020480236A patent/AU2020480236A1/en active Pending
- 2020-12-22 US US17/609,340 patent/US20220396626A1/en active Pending
- 2020-12-22 KR KR1020227007231A patent/KR102712484B1/ko active IP Right Grant
- 2020-12-22 JP JP2022529575A patent/JP7384493B2/ja active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015519336A (ja) | 2012-05-07 | 2015-07-09 | セレラント セラピューティクス インコーポレイテッド | Ｃｌｌ−１に対して特異的な抗体 |
| JP2017534256A (ja) | 2014-09-12 | 2017-11-24 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | Ａｎｔｉ−ｃｌｌ−１抗体及び免疫複合体 |
| JP2018522541A5 (ja) | 2016-06-14 | 2019-07-18 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GB2610467A (en) | 2023-03-08 |
| EP4039708A4 (en) | 2023-11-08 |
| AU2020480236A1 (en) | 2022-07-28 |
| CN113980134B (zh) | 2022-05-31 |
| CN113896795B (zh) | 2022-07-15 |
| JP2023509821A (ja) | 2023-03-10 |
| EP4039708A1 (en) | 2022-08-10 |
| CN113045658B (zh) | 2021-12-24 |
| CN113896795A (zh) | 2022-01-07 |
| CN113045658A (zh) | 2021-06-29 |
| KR102712484B1 (ko) | 2024-10-04 |
| KR20220084013A (ko) | 2022-06-21 |
| CN113980134A (zh) | 2022-01-28 |
| WO2022120943A1 (zh) | 2022-06-16 |
| US20220396626A1 (en) | 2022-12-15 |
| GB202207720D0 (en) | 2022-07-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7384493B2 (ja) | 抗ｃｌｌ１抗体およびその使用 | |
| CN108137684B (zh) | 抗ox40抗体及其应用 | |
| CN108026169A (zh) | 抗人cd137的完全人抗体及其应用 | |
| US20220098290A1 (en) | Antibodies that bind to cleaved form of mutant calreticulin, and diagnostic, preventive, or therapeutic agent for myeloproliferative neoplasm | |
| WO2021143914A1 (zh) | 一种激活型抗ox40抗体、生产方法及应用 | |
| CN111349163A (zh) | 针对cd123的单克隆抗体 | |
| CN112500485A (zh) | 一种抗b7-h3抗体及其应用 | |
| WO2022247804A1 (zh) | 抗gprc5d抗体、其制备方法与用途 | |
| CN111205371B (zh) | 一种抗淋巴细胞激活基因3的抗体及应用 | |
| CN112010972B (zh) | 与人lag-3蛋白结合的抗体及其编码基因和应用 | |
| CN111662385B (zh) | 全人源抗人gpc3单克隆抗体及其用途 | |
| TWI698643B (zh) | 用於檢測米田堡血型抗原的抗體及其片段、試劑盒及方法 | |
| CN116761889A (zh) | 抗原结合蛋白及其用途 | |
| CN114437227A (zh) | 双特异抗体及其应用 | |
| RU2815960C2 (ru) | Антитела, которые связываются с расщепленной формой мутантного кальретикулина, и средство для диагностики, профилактики или лечения миелопролиферативного новообразования | |
| CN116640216B (zh) | 抗cd19抗体的抗体、抗cd22抗体的抗体及其应用 | |
| CN116761822A (zh) | 抗pd-1抗体及其用途 | |
| TW202302641A (zh) | 針對IL-13Rα2的抗體及其應用 | |
| CN117843788A (zh) | 一种抗gprc5d的抗体及其多特异性抗体和相关应用 | |
| TW202436355A (zh) | 抗原結合分子及使用方法 | |
| CN115433279A (zh) | 靶向cd123兔重组单克隆抗体的制备及应用 | |
| CN114075284A (zh) | Cd47结合分子及其用途 | |
| CN117229412A (zh) | 包含抗cldn18.2抗体的双特异性抗体、药物组合物及用途 | |
| CN116848144A (zh) | 抗pd-l1抗体及其用途 | |
| CN114316047A (zh) | 一组pd-1单克隆抗体及其医药用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20220519 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230530 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230829 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20231003 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20231101 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7384493 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |