JP7309194B2 - 幹細胞運搬方法 - Google Patents

Description

本発明は、幹細胞を出発地点から目的地点まで所定時間をかけて運搬する幹細胞運搬方法に関する。

幹細胞を培養する培地と、幹細胞に対して照射エネルギーが０を超え１０ジュール／ｃｍ^２以下、レーザパワー密度が０．１Ｗ／ｃｍ^２以下、照射エネルギーを０．１以上２．５ジュール／ｃｍ^２以下の低出力の炭酸ガスレーザーの照射光をデフォーカスして培地全体に照射し、幹細胞を活性化させるレーザー照射手段とを備え、幹細胞に低出力のレーザーを照射して活性化させた後、幹細胞に所定の休止期間を設けて目標増殖数まで増殖させる幹細胞培養方法が開示されている。この幹細胞培養方法によれば、ヒト、非ヒト（動物）から採取した組織またはその細胞に存在する幹細胞を活性化させて飛躍的に増殖させることができる。

特開２０１５－１８６４６５号公報

幹細胞は、各種の疾患（心血管疾患や中枢神経系疾患等）の治療や再生医療、非治療的用途に利用される。前記特許文献１に開示の幹細胞培養方法や他の幹細胞培養方法によって培養された幹細胞は、それの製造地（出発地点）からそれを使用する使用地（目的地点）まで運送車両や航空機、列車、船舶等の所定の運搬手段によって運搬（輸送）する必要がある。幹細胞の運搬（輸送）では、幹細胞を冷凍して凍結させ、凍結した状態の幹細胞を収容した収容容器を保冷バックに収容し、その保冷バックを冷凍庫を備えた運送車両や航空機、列車、船舶等で出発地点から目的地点まで搬送する。しかし、凍結させた幹細胞を解凍した場合、わずかな幹細胞のみしか生存せず、幹細胞の大部分が死滅し、幹細胞を生存させまま使用地（目的地点）に運ぶことができない。更に、生存している幹細胞の活性がきわめて低く、その幹細胞を各種の疾患に対して有効に利用することができないとともに、再生医療における再生において有効な効果を得ることができない。

又、幹細胞を冷凍せずに目的地点まで運搬すると、幹細胞の寿命が早く進み、出発地点からの運搬時間が２４時間経過後における幹細胞の生存率が５０％未満になるとともに、出発地点からの運搬時間が３６時間経過後における幹細胞の生存率が略０％になり、幹細胞の運搬に２４時間以上を要する場合、幹細胞の生存率を５０％以上に保持することができない。

本発明の目的は、幹細胞の運搬（輸送）に長時間を要したとしても、幹細胞を生存させたまま出発地点から目的地点まで運ぶことができる幹細胞運搬方法を提供することにある。本発明の他の目的は、運搬（輸送）後の幹細胞を各種の疾患に対して有効に利用することができ、その幹細胞を利用することで再生医療における再生において有効な効果を得ることができる幹細胞運搬方法を提供することにある。本発明の他の目的は、幹細胞を出発地点から目的地点まで所定時間をかけて運搬（輸送）したとしても、幹細胞の生存率を高い値に保持することができる幹細胞運搬方法を提供することにある。

前記課題を解決するための本発明の前提は、ドナーから採取した骨髄液を培養することから作られた幹細胞を出発地点から目的地点まで所定時間をかけて運搬する幹細胞運搬方法である。

前記前提における本発明の特徴として、幹細胞運搬方法は、幹細胞を収容する収容スペース及び頂部開口を気密に閉塞する開閉蓋とを有する所定容積の細胞収容容器と、複数個の細胞収容容器を収容する所定容積の容器収容スペースを有して容器収容スペースを所定の低温に保持する保温運搬容器とを利用し、細胞収容容器の収容スペースが、細胞収容容器の頂部開口から底壁に向かって上下方向へ三分されて上部収容スペースと中間収容スペースと下部収容スペースとに区分され、保温運搬容器が、密閉蓋と、真空断熱層を有して容器収容スペースを囲繞する周壁及び底壁と、容器収容スペースを冷却する保冷剤を収容する保冷剤収容スペースとを備え、幹細胞運搬方法が、幹細胞を細胞収容容器の下部収容スペースに収容し、無菌空気を溶存させた培養液を細胞収容容器の中間収容スペースに収容するとともに、無菌空気を細胞収容容器の上部収容スペースに収容し、開閉蓋によって細胞収容容器の頂部開口を気密に閉塞する第１収容工程と、第１収容工程によって幹細胞と培養液と無菌空気とを収容した細胞収容容器の複数個を保温運搬容器の容器収容スペースに収容し、保冷剤収容スペースに保冷剤を収容しつつ、密閉蓋によって保温運搬容器を気密に閉塞する第２収容工程と、第２収容工程によって容器収容スペースに収容された複数個の細胞収容容器を保冷剤収容スペースに収容された保冷剤によって所定温度に冷却しつつ、複数個の細胞収容容器を収容した保温運搬容器を所定の輸送手段によって出発地点から目的地点まで運搬する細胞運搬工程とを有することにある。

本発明の一例としては、幹細胞運搬方法が、第１収容工程によって幹細胞と培養液と無菌空気とを収容した細胞収容容器の頂部開口を開閉蓋によって気密に閉塞した後、細胞収容容器を所定の温度に冷却し、下部収容スペースに収容された幹細胞を休眠状態にする細胞休眠工程を含む。

本発明の他の一例としては、幹細胞運搬方法が、細胞収容容器の中間収容スペースに収容する培養液に無菌空気を溶存させる無菌空気溶存工程を含む。

本発明の他の一例としては、幹細胞運搬方法が、運搬工程によって目的地点に運搬された保温運搬容器の保冷剤収容スペースから保冷剤を取り外し、保温運搬容器に収容された複数個の細胞収容容器を所定時間静的に放置して細胞収容容器を室温に戻す温度戻し工程を含む。

本発明の他の一例として、細胞収容容器では、細胞収容容器の上部収容スペースが収容スペースの１９～２１％を占め、細胞収容容器の中間収容スペースが収容スペースの４１～４５％を占めるとともに、細胞収容容器の下部収容スペースが収容スペースの３６～３８％を占め、細胞収容容器の収容スペースに対する無菌空気の収容割合が１９～２１％の範囲、細胞収容容器の収容スペースに対する無菌空気を溶存させた培養液の収容割合が４１～４５％の範囲にあり、細胞収容容器の収容スペースに対する幹細胞の収容割合が３６～３８％の範囲にある。

本発明の他の一例として、保温運搬容器では、保冷剤によって保温運搬容器の容器収容スペースの温度が２～４℃の範囲に保持される。

本発明の他の一例としては、幹細胞の出発地点から目的地点までの運搬時間が、２４～４８時間であり、出発地点からの運搬時間が３６時間経過後における幹細胞の生存率が、８７～８９％の範囲にあり、出発地点からの運搬時間が４８時間経過後における幹細胞の生存率が、７４～７６％の範囲にある。

本発明の他の一例としては、幹細胞が、幹細胞を所定期間保存した後の休眠状態にある休眠幹細胞を活性化させた活性化幹細胞であり、幹細胞運搬方法が、活性化幹細胞を細胞収容容器に収容する前に、休眠幹細胞を活性化させて活性化幹細胞を作る幹細胞活性化手段を含み、幹細胞活性化手段が、休眠幹細胞と所定の培養液と休眠幹細胞の保存前の幹細胞の培養過程において生成された培養生成液とを所定容量かつ所定面積の底面を有する第１培養容器に注入し、休眠幹細胞を第１培養容器の底面に定着させる休眠幹細胞定着工程と、休眠幹細胞定着工程によって第１培養容器の底面に定着させた休眠幹細胞を培養し、第１培養容器の底面面積に対する休眠幹細胞の総平面面積が第１目標割合に達するまで休眠幹細胞を増殖かつ活性化させ、休眠幹細胞を活性化幹細胞に変質させる休眠幹細胞培養工程とを有し、休眠幹細胞定着工程では、第１培養容器を２～５°の傾斜角度で第１の方向へ傾斜させた状態で第１培養容器を体温と略同一の温度で１２～２４時間静的に放置した後、第１培養容器を２～５°の傾斜角度で第１の方向とは逆方向の第２の方向へ傾斜させた状態で第１培養容器を体温と略同一の温度で１２～２４時間静的に放置しつつ、第２の方向へ傾斜させた第１培養容器内の休眠幹細胞の初期平面形状からの変形を前記１２～２４時間の間において約１～２時間の間隔で観察し、休眠幹細胞が初期平面形状から所定の平面形状に変形した場合、休眠幹細胞が第１培養容器の底面に定着したと判断し、休眠幹細胞培養工程では、第１培養容器を２～５°の傾斜角度で傾斜させた状態で第１培養容器を体温と略同一の温度で静的に放置しつつ、第１培養容器の底面面積に対する休眠幹細胞の総平面面積が第１目標割合に達したかを判断する。

本発明の他の一例としては、第１培養容器の底面面積に対する休眠幹細胞の総平面面積の第１目標割合が、７０～８０％であり、休眠幹細胞培養工程では、休眠幹細胞定着工程によって休眠幹細胞を第１培養容器の底面に定着させた後、培養液と培養生成液との混合培養液を第１培養容器から排出しつつ、あらたな培養液とあらたな培養生成液とを第１培養容器に注入し、第１培養容器の底面に定着させた休眠幹細胞をあらたな培養液とあらたな培養生成液とのあらたな混合培養液を利用して活性化させる。

本発明の他の一例としては、幹細胞活性化手段が、第１培養容器の底面面積に対する休眠幹細胞の総平面面積が第１目標割合に達した時点で第１培養容器から活性化幹細胞を抽出し、抽出した活性化幹細胞とあらたな培養液とあらたな培養生成液とを所定容量かつ所定面積の底面を有して第１培養容器よりも大きい容量の第２培養容器に注入し、活性化幹細胞を第２培養容器の底面に定着させる活性化幹細胞定着工程と、活性化幹細胞定着工程によって第２培養容器の底面に定着させた活性化幹細胞を培養し、第２培養容器の底面面積に対する活性化幹細胞の総平面面積が第２目標割合に達するまで活性化幹細胞を増殖かつ活性化させる活性化幹細胞培養工程とを含み、活性化幹細胞定着工程では、第２培養容器を２～５°の傾斜角度で第１の方向へ傾斜させた状態で第２培養容器を体温と略同一の温度で１２～２４時間静的に放置した後、第２培養容器を２～５°の傾斜角度で第１の方向とは逆方向の第２の方向へ傾斜させた状態で第２培養容器を体温と略同一の温度で１２～２４時間静的に放置しつつ、第２の方向へ傾斜させた第２培養容器内の活性化幹細胞の初期平面形状からの変形を１２～２４時間の間において約１～２時間の間隔で観察し、活性化幹細胞が初期平面形状から所定の平面形状に変形した場合、活性化幹細胞が第２培養容器の底面に定着したと判断し、活性化幹細胞培養工程では、第２培養容器を２～５°の傾斜角度で傾斜させた状態で第２培養容器を体温と略同一の温度で静的に放置し、第２培養容器の底面面積に対する活性化幹細胞の総平面面積が第２目標割合に達したかを判断する。

本発明の他の一例としては、第２培養容器の底面面積に対する活性化幹細胞の総平面面積の第２目標割合が、８８～９２％であり、活性化幹細胞培養工程では、活性化幹細胞定着工程によって活性化幹細胞を第２培養容器の底面に定着させた後、培養液と培養生成液との混合培養液を第２培養容器から排出しつつ、あらたな培養液とあらたな培養生成液とを第２培養容器に注入し、第２培養容器の底面に定着させた活性化幹細胞をあらたな培養液とあらたな培養生成液とのあらたな混合培養液を利用して活性化させる。

本発明の他の一例としては、培養生成液が、幹細胞の培養過程において幹細胞から分泌された所定の代謝物質を含む。

本発明に係る幹細胞運搬方法によれば、幹細胞を細胞収容容器の下部収容スペースに収容し、無菌空気を溶存させた培養液を細胞収容容器の中間収容スペースに収容するとともに、無菌空気を細胞収容容器の上部収容スペースに収容し、開閉蓋によって細胞収容容器の頂部開口を気密に閉塞する第１収容工程と、第１収容工程によって幹細胞と培養液と無菌空気とを収容した細胞収容容器の複数個を保温運搬容器の容器収容スペースに収容し、保冷剤収容スペースに保冷剤を収容しつつ、密閉蓋によって保温運搬容器を気密に閉塞する第２収容工程と、第２収容工程によって容器収容スペースに収容された複数個の細胞収容容器を保冷剤収容スペースに収容された保冷剤によって所定温度に冷却しつつ、複数個の細胞収容容器を収容した保温運搬容器を所定の輸送手段によって出発地点から目的地点まで運搬する細胞運搬工程とを有し、細胞運搬工程において細胞収容容器に収容された幹細胞を所定温度に冷却することで幹細胞を休眠状態に維持することができるから、幹細胞の寿命がゆっくりと進み、幹細胞を出発地点から目的地点まで所定時間をかけて運搬（輸送）したとしても、幹細胞の生存率を高い値に保持することができ、幹細胞の運搬（輸送）に長時間を要したとしても、幹細胞を生存させたまま出発地点から目的地点まで運ぶことができる。幹細胞運搬方法は、幹細胞を生存させたまま目的地点に運ぶことができるから、生存する幹細胞を各種の疾患（心血管疾患や中枢神経系疾患等）に対して有効に利用することができ、生存する幹細胞を利用することで、再生医療における再生において有効な効果を得ることができる。

第１収容工程によって幹細胞と培養液と無菌空気とを収容した細胞収容容器の頂部開口を開閉蓋によって気密に閉塞した後、細胞収容容器を所定の温度に冷却し、下部収容スペースに収容された幹細胞を休眠状態にする細胞休眠工程を含む幹細胞運搬方法は、幹細胞と培養液と無菌空気とを収容した細胞収容容器を所定の温度に冷却して幹細胞を休眠状態にするとともに、細胞運搬工程において細胞収容容器に収容された幹細胞を所定温度に冷却した状態で運搬（輸送）することで、幹細胞の休眠状態を維持することができるから、幹細胞の寿命をゆっくりと進めることができ、幹細胞を出発地点から目的地点まで所定時間をかけて運搬（輸送）したとしても、幹細胞の生存率を高い値に保持することができ、幹細胞の運搬（輸送）に長時間を要したとしても、幹細胞を生存させたまま出発地点から目的地点まで運ぶことができる。

細胞収容容器の中間収容スペースに収容する培養液に無菌空気を溶存させる無菌空気溶存工程を含む幹細胞運搬方法は、無菌空気溶存工程によって培養液に無菌空気を溶存させ、無菌空気を溶存させた培養液に幹細胞を浸漬させた状態で運搬（輸送）するから、培養液中において幹細胞の生存が確実に維持され、幹細胞を出発地点から目的地点まで所定時間をかけて運搬（輸送）したとしても、幹細胞の生存率を高い値に保持することができ、幹細胞の運搬（輸送）に長時間を要したとしても、幹細胞を生存させたまま出発地点から目的地点まで運ぶことができる。

運搬工程によって目的地点に運搬された保温運搬容器の保冷剤収容スペースから保冷剤を取り外し、保温運搬容器に収容された複数個の細胞収容容器を所定時間静的に放置して細胞収容容器を室温に戻す温度戻し工程を含む幹細胞運搬方法は、所定温度に冷却された細胞収容容器を所定時間静的に放置して細胞収容容器を室温に戻すことで、細胞収容容器に収容された休眠状態の幹細胞を死滅させることなく休眠状態から活動状態に戻すことができ、活動状態に戻した幹細胞を各種の疾患（心血管疾患や中枢神経系疾患等）に対して有効に利用することができ、活動状態に戻した幹細胞を利用することで、再生医療における再生において有効な効果を得ることができる。

細胞収容容器の上部収容スペースが収容スペースの１９～２１％を占め、細胞収容容器の中間収容スペースが収容スペースの４１～４５％を占めるとともに、細胞収容容器の下部収容スペースが収容スペースの３６～３８％を占め、細胞収容容器の収容スペースに対する無菌空気の収容割合が１９～２１％の範囲、細胞収容容器の収容スペースに対する無菌空気を溶存させた培養液の収容割合が４１～４５％の範囲にあり、細胞収容容器の収容スペースに対する幹細胞の収容割合が３６～３８％の範囲にある幹細胞運搬方法は、無菌空気の収容スペースに対する収容割合が前記範囲にあり、無菌空気を溶存させた培養液の収容スペースに対する収容割合が前記範囲にあるから、細胞収容容器の収容スペースにおいて無菌空気が充満し、無菌空気によって培養液中の幹細胞の生存が確実に維持され、幹細胞を出発地点から目的地点まで所定時間をかけて運搬（輸送）したとしても、幹細胞の生存率を高い値に保持することができ、幹細胞の運搬（輸送）に長時間を要したとしても、幹細胞を生存させたまま出発地点から目的地点まで運ぶことができる。

保冷剤によって保温運搬容器の容器収容スペースの温度が２～４℃の範囲に保持される幹細胞運搬方法は、保冷剤収容スペースに収容された保冷剤を利用して細胞収容容器に収容された幹細胞を前記温度範囲に冷却することで、幹細胞を休眠状態に維持することができるから、幹細胞の寿命がゆっくりと進み、幹細胞を出発地点から目的地点まで所定時間をかけて運搬（輸送）したとしても、幹細胞の生存率を高い値に保持することができ、幹細胞の運搬（輸送）に長時間を要したとしても、幹細胞を生存させたまま出発地点から目的地点まで運ぶことができる。

幹細胞の出発地点から目的地点までの運搬時間が２４～４８時間であり、出発地点からの運搬時間が３６時間経過後における幹細胞の生存率が８７～８９％の範囲にあり、出発地点からの運搬時間が４８時間経過後における幹細胞の生存率が７４～７６％の範囲にある幹細胞運搬方法は、運搬時間が３６時間経過後における幹細胞の生存率が前記範囲にあり、運搬時間が４８時間経過後における幹細胞の生存率が前記範囲にあるから、幹細胞を出発地点から目的地点まで３６時間から４８時間をかけて運搬（輸送）したとしても、幹細胞の生存率を高い値に保持することができ、幹細胞の運搬（輸送）に３６時間から４８時間を要したとしても、幹細胞を生存させたまま出発地点から目的地点まで運ぶことができる。

幹細胞がそれを所定期間保存した後の休眠状態にある休眠幹細胞を活性化させた活性化幹細胞であり、幹細胞運搬方法が活性化幹細胞を細胞収容容器に収容する前に、休眠幹細胞を活性化させて活性化幹細胞を作る幹細胞活性化手段を含み、幹細胞活性化手段が、休眠幹細胞と所定の培養液と休眠幹細胞の保存前の幹細胞の培養過程において生成された培養生成液とを所定容量かつ所定面積の底面を有する第１培養容器に注入し、休眠幹細胞を第１培養容器の底面に定着させる休眠幹細胞定着工程と、休眠幹細胞定着工程によって第１培養容器の底面に定着させた休眠幹細胞を培養し、第１培養容器の底面面積に対する休眠幹細胞の総平面面積が第１目標割合に達するまで休眠幹細胞を増殖かつ活性化させ、休眠幹細胞を活性化幹細胞に変質させる休眠幹細胞培養工程とを有し、休眠幹細胞定着工程において、第１培養容器を２～５°の傾斜角度で第１の方向へ傾斜させた状態で第１培養容器を体温と略同一の温度で１２～２４時間静的に放置した後、第１培養容器を２～５°の傾斜角度で第１の方向とは逆方向の第２の方向へ傾斜させた状態で第１培養容器を体温と略同一の温度で１２～２４時間静的に放置しつつ、第２の方向へ傾斜させた第１培養容器内の休眠幹細胞の初期平面形状からの変形を１２～２４時間の間において約１～２時間の間隔で観察し、休眠幹細胞が初期平面形状から所定の平面形状に変形した場合、休眠幹細胞が第１培養容器の底面に定着したと判断し、休眠幹細胞培養工程において、第１培養容器を２～５°の傾斜角度で傾斜させた状態で第１培養容器を体温と略同一の温度で静的に放置しつつ、第１培養容器の底面面積に対する休眠幹細胞の総平面面積が第１目標割合に達したかを判断する幹細胞運搬方法は、休眠幹細胞定着工程において、幹細胞の培養過程で生成された培養生成液を利用することで、第１培養容器の底面に対する休眠幹細胞の定着やその休眠幹細胞の増殖が促進されるから、その培養生成液を利用して休眠幹細胞を第１培養容器の底面に速やかに定着させることができ、休眠幹細胞培養工程において、その培養生成液を利用して総平面面積が第１目標割合に達するように休眠幹細胞を速やかに活性化幹細胞に変質させることができる。幹細胞運搬方法は、第１培養容器を２～５°の傾斜角度で第１の方向へ傾斜させた状態で第１培養容器を体温と略同一の温度で１２～２４時間静的に放置した後、第１培養容器を２～５°の傾斜角度で第１の方向とは逆方向の第２の方向へ傾斜させた状態で第１培養容器を体温と略同一の温度で１２～２４時間静的に放置することで、第１培養容器の底面に休眠幹細胞を確実に定着させることができ、休眠幹細胞の活性化を確実に促進することができる。幹細胞運搬方法は、第１培養容器を２～５°の傾斜角度で傾斜させた状態で第１培養容器を体温と略同一の温度で静的に放置することで、休眠幹細胞を速やかに活性化幹細胞に変質させることができる。

第１培養容器の底面面積に対する休眠幹細胞の総平面面積の第１目標割合が７０～８０％であり、休眠幹細胞培養工程において、休眠幹細胞定着工程によって休眠幹細胞を第１培養容器の底面に定着させた後、培養液と培養生成液との混合培養液を第１培養容器から排出しつつ、あらたな培養液とあらたな培養生成液とを第１培養容器に注入し、第１培養容器の底面に定着させた休眠幹細胞をあらたな培養液とあらたな培養生成液とのあらたな混合培養液を利用して活性化させる幹細胞運搬方法は、第１培養容器の底面面積に対する休眠幹細胞の総平面面積が８０％を超過して休眠幹細胞が増殖すると、活性化幹細胞の活性が次第に失われるが、第１培養容器の底面面積に対して休眠幹細胞の総平面面積が７０～８０％に増殖した時点で、活性化させた活性化幹細胞を第１培養容器から抽出することで、活性化した活性化幹細胞の活性が維持され、休眠幹細胞を十分な活性を有する活性化幹細胞に変質させることができる。幹細胞運搬方法は、休眠幹細胞定着工程において、幹細胞の培養過程で生成されたあらたな培養生成液を利用することで、第１培養容器の底面における休眠幹細胞の増殖が促進されるから、あらたな培養生成液を利用して休眠幹細胞を第１培養容器の底面に速やかに定着させることができ、休眠幹細胞培養工程において、あらたな培養生成液を利用して総平面面積が第１目標割合に達するように休眠幹細胞を速やかに活性化幹細胞に変質させることができる。

幹細胞活性化手段が、第１培養容器の底面面積に対する休眠幹細胞の総平面面積が第１目標割合に達した時点で第１培養容器から活性化幹細胞を抽出し、抽出した活性化幹細胞とあらたな培養液とあらたな培養生成液とを所定容量かつ所定面積の底面を有して第１培養容器よりも大きい容量の第２培養容器に注入し、活性化幹細胞を第２培養容器の底面に定着させる活性化幹細胞定着工程と、活性化幹細胞定着工程によって第２培養容器の底面に定着させた活性化幹細胞を培養し、第２培養容器の底面面積に対する活性化幹細胞の総平面面積が第２目標割合に達するまで活性化幹細胞を増殖かつ活性化させる活性化幹細胞培養工程とを含み、活性化幹細胞定着工程において、第２培養容器を２～５°の傾斜角度で第１の方向へ傾斜させた状態で第２培養容器を体温と略同一の温度で１２～２４時間静的に放置した後、第２培養容器を２～５°の傾斜角度で第１の方向とは逆方向の第２の方向へ傾斜させた状態で第２培養容器を体温と略同一の温度で１２～２４時間静的に放置しつつ、第２の方向へ傾斜させた第２培養容器内の活性化幹細胞の初期平面形状からの変形を１２～２４時間の間において約１～２時間の間隔で観察し、活性化幹細胞が初期平面形状から所定の平面形状に変形した場合、活性化幹細胞が第２培養容器の底面に定着したと判断し、活性化幹細胞培養工程において、第２培養容器を２～５°の傾斜角度で傾斜させた状態で第２培養容器を体温と略同一の温度で静的に放置し、第２培養容器の底面面積に対する活性化幹細胞の総平面面積が第２目標割合に達したかを判断する幹細胞運搬方法は、活性化幹細胞定着工程において、幹細胞の培養過程で生成された培養生成液を利用することで、第２培養容器の底面に対する活性化幹細胞の定着やその活性化幹細胞の増殖が促進されるから、その培養生成液を利用して活性化幹細胞を第２培養容器の底面に速やかに定着させることができ、活性化幹細胞培養工程において、その培養生成液を利用して総平面面積が第２目標割合に達するように活性化幹細胞を速やかに増殖かつ活性化させることができる。幹細胞運搬方法は、第２培養容器を２～５°の傾斜角度で第１の方向へ傾斜させた状態で第２培養容器を体温と略同一の温度で１２～２４時間静的に放置した後、第２培養容器を２～５°の傾斜角度で第１の方向とは逆方向の第２の方向へ傾斜させた状態で第２培養容器を体温と略同一の温度で１２～２４時間静的に放置することで、第２培養容器の底面に活性化幹細胞を確実に定着させることができ、活性化幹細胞の一層の活性化を確実に促進することができる。幹細胞運搬方法は、第２培養容器を２～５°の傾斜角度で傾斜させた状態で第２培養容器を体温と略同一の温度で静的に放置することで、活性化幹細胞を速やかに増殖かつ活性化させることができる。

第２培養容器の底面面積に対する活性化幹細胞の総平面面積の第２目標割合が８８～９２％であり、活性化幹細胞培養工程において、活性化幹細胞定着工程によって活性化幹細胞を第２培養容器の底面に定着させた後、培養液と培養生成液との混合培養液を第２培養容器から排出しつつ、あらたな培養液とあらたな培養生成液とを第２培養容器に注入し、第２培養容器の底面に定着させた活性化幹細胞をあらたな培養液とあらたな培養生成液とのあらたな混合培養液を利用して活性化させる幹細胞運搬方法は、第２培養容器の底面面積に対する休眠幹細胞の総平面面積が９２％を超過して休眠幹細胞が増殖すると、活性化幹細胞の活性が次第に失われるが、第２培養容器の底面面積に対して活性化幹細胞の総平面面積が８８～９２％に増殖した時点で、活性化幹細胞を第２培養容器から抽出することで、活性化幹細胞の活性が維持され、活性化幹細胞を一層活性化した活性化幹細胞に変質させることができる。幹細胞運搬方法は、活性化幹細胞定着工程において、幹細胞の培養過程で生成されたあらたな培養生成液を利用することで、第２培養容器の底面における活性化幹細胞の増殖が促進されるから、あらたな培養生成液を利用して活性化幹細胞を第２培養容器の底面に速やかに定着させることができ、活性化幹細胞培養工程において、あらたな培養生成液を利用して総平面面積が第２目標割合に達するように活性化幹細胞を一層活性化した活性化幹細胞に速やかに変質させることができる。

培養生成液が幹細胞の培養過程において幹細胞から分泌された所定の代謝物質を含む幹細胞運搬方法は、幹細胞から分泌された所定の代謝物質が含まれる培養生成液を利用することで、その幹細胞自体の代謝物質がトリガーとなり、休眠幹細胞や活性化幹細胞が速やかに活性を開始する。従って、第１培養容器の底面に対する休眠幹細胞の定着や第２培養容器の底面に対する活性化幹細胞の定着が促進されるとともに、第１培養容器における休眠幹細胞の増殖や第２培養容器における活性化幹細胞の増殖が促進され、その培養生成液を利用して休眠幹細胞や活性化幹細胞を培養容器の底面に速やかに定着させることができ、その培養生成液を利用して総平面面積が目標割合に達するように休眠幹細胞や活性化幹細胞を速やかに活性化させることができる。

一例として示す第１扁平培養容器の斜視図。 第１の方向へ傾斜させた第１扁平培養容器の側面図。 第２の方向へ傾斜させた第１扁平培養容器の側面図。 休眠幹細胞の平面形状の一例を示す部分拡大図。 休眠幹細胞の平面形状の他の一例を示す部分拡大図。 休眠幹細胞の平面形状の他の一例を示す部分拡大図。 一例として示す細胞収容容器の斜視図。 一例として示す保温運搬容器の斜視図。 一例として示す第２扁平培養容器の斜視図。 第１の方向へ傾斜させた第２扁平培養容器の側面図。 第２の方向へ傾斜させた第２扁平培養容器の側面図。 活性化幹細胞の平面形状の一例を示す部分拡大図。 活性化幹細胞の平面形状の他の一例を示す部分拡大図。 活性化幹細胞の平面形状の他の一例を示す部分拡大図。 幹細胞第１定着工程において使用するガラス試験管の斜視図。 遠心分離後のガラス試験管の斜視図。

一例として示す第１扁平培養容器１０の斜視図である図１等の添付の図面を参照し、本発明にかかる単一種（特定種類）の活性化幹細胞の幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）の詳細を説明すると、以下のとおりである。なお、図２は、第１の方向へ傾斜させた第１扁平培養容器１０の側面図であり、図３は、第２の方向へ傾斜させた第１扁平培養容器１０の側面図である。図４は、休眠幹細胞１１ａの平面形状の一例を示す部分拡大図であり、図５は、休眠幹細胞１１ａの平面形状の他の一例を示す部分拡大図である。図６は、休眠幹細胞１１ａの平面形状の他の一例を示す部分拡大図であり、図７は、一例として示す細胞収容容器１２の斜視図である。図８は、一例として示す保温運搬容器１３の斜視図である。図２，３では、第１扁平培養容器１０を断面で示す。図４～図６は、電子顕微鏡によって撮影された休眠幹細胞１１ａの平面形状の拡大画像を示す。

幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）は、細胞収容容器１２と保温運搬容器１３とを利用し、運送車両や航空機、列車、船舶等の所定の運搬（輸送）手段（図示せず）によって活性化幹細胞１１ｂ（間葉系活性化幹細胞）を出発地点から目的地点まで所定時間をかけて運搬（輸送）する。運搬される活性化幹細胞１１ｂ（間葉系活性化幹細胞）は、所定のドナーから採取した骨髄液４３を培養することから作られた不要かつ雑多な間葉系幹細胞を含まないピュア（純粋）な単一種の幹細胞１１（間葉系活性化幹細胞）を所定期間保存した後の休眠状態にある休眠幹細胞１１ａを活性化させたものである。

活性化幹細胞１１ｂは、休眠幹細胞１１ａの保存前の休眠幹細胞１１ａの元となる幹細胞１１の培養過程において生成された培養生成液１４を利用し、休眠状態にある休眠幹細胞１１ａに休眠幹細胞定着工程と休眠幹細胞培養工程とを実施することから作られる。又、活性化幹細胞１１ｂは、休眠幹細胞１１ａの保存前の休眠幹細胞１１ａの元となる幹細胞１１の培養過程において生成された培養生成液１４を利用し、休眠状態にある休眠幹細胞１１ａに休眠幹細胞定着工程と休眠幹細胞培養工程とを実施するとともに、活性化幹細胞に活性化幹細胞定着工程と活性化幹細胞培養工程とを実施することから作られる。なお、保存する前の幹細胞１１と保存された後の休眠幹細胞１１ａとは、同一の幹細胞である。

培養生成液１４は、単一種の幹細胞１１の培養過程においてその単一種の幹細胞１１から分泌された所定の代謝物質を含んでいる。単一種の幹細胞１１から分泌された所定の代謝物質が含まれる培養生成液１４を利用することで、その幹細胞１１自体の代謝物質がトリガーとなり、休眠幹細胞１１ａや活性化幹細胞１１ｂが速やかに活性を開始するとともに、速やかに増殖を開始する。従って、休眠幹細胞１１ａや活性化幹細胞１１ｂの定着が促進されるとともに、休眠幹細胞１１ａや活性化幹細胞１１ｂの増殖が促進され、その培養生成液１４を利用して休眠幹細胞１１ａや活性化幹細胞１１ｂを速やかに定着させることができ、その培養生成液１４を利用して休眠幹細胞１１ａや活性化幹細胞１１ｂを速やかに活性化させることができるとともに、休眠幹細胞１１ａを十分な活性を有する活性化幹細胞１１ｂに変質させることができ、活性化幹細胞１１ｂを一層活性化した活性化幹細胞１１ｂに変質させることができる。

細胞収容容器１２は、無色透明又は有色透明な合成樹脂（プラスチック）又はガラスから作られて円筒状（角筒状であってもよい）に成形され、その内部が外側から視認可能である。細胞収容容器１２は、平面形状が円形の底壁１５と、底壁１５の周縁から上方へ延びる周壁１６と、頂部開口１７を開閉する開閉蓋１８とから形成され、底壁１５及び周壁１６に囲繞された所定容積の収容スペース１９を有する。開閉蓋１８は、それによって頂部開口１７を塞いだときに頂部開口１７を気密に閉塞（密閉）する。細胞収容容器１２の収容スペース１９には、単一種（特定種類）の活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）が収容される。

細胞収容容器１２の収容スペース１９は、細胞収容容器１２の頂部開口１７から底壁１５に向かって上下方向へ三分され、上部収容スペース１９ａと中間収容スペース１９ｂと下部収容スペース１９ｃとに区分されている。細胞収容容器１２の上部収容スペース１９ａは、収容スペース１９の１９～２１％を占め、細胞収容容器１２の中間収容スペース１９ｂは、収容スペース１９の４１～４５％を占めている。細胞収容容器１２の下部収容スペース１９ｃは、収容スペース１９の３６～３８％を占めている。

保温運搬容器１３は、ステンレスやアルミ合金等の金属から作られて円筒状に成形されている。保温運搬容器１３は、平面形状が円形の底壁２０と、底壁２０の周縁から上方へ延びる周壁２１と、頂部開口２２を開閉する密閉蓋２３（冷却蓋）とから形成され、底壁２０及び周壁２１に囲繞された所定容積の容器収容スペース２４を有する。保温運搬容器１３は、その容器収容スペース２４に複数個の細胞収容容器１２が収容され、容器収容スペース２４を所定の低温に保持する。密閉蓋２３は、それによって頂部開口２２を塞いだときに頂部開口２２を気密に閉塞（密閉）する。

保温運搬容器１３の底壁２０と周壁２１とは、内側壁と外側壁とを備えた２重構造であり、内側壁と外側壁との間に真空断熱層２５が形成されている。保温運搬容器１３の密閉蓋２３の中央には、容器収容スペース２４を冷却する保冷剤２６を収容する保冷剤収容スペース２７が形成されている。密閉蓋２３の頂面には、保冷剤収容スペース２７を開閉可能な旋回蓋２８が取り付けられている。旋回蓋２８を旋回させて保冷剤収容スペース２７を開放し、保冷剤収容スペース２７に保冷剤２６を収容した後、旋回蓋２８を旋回させて保冷剤収容スペース２７を閉鎖（密閉）する。保温運搬容器１３では、保冷剤２６によって容器収容スペース２４の温度が２～４℃の範囲に保持される。

幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）では、休眠幹細胞１１ａを活性化させて活性化幹細胞１１ｂを作る幹細胞活性化手段（休眠幹細胞定着工程及び休眠幹細胞培養工程、又は、休眠幹細胞定着工程及び休眠幹細胞培養工程と活性化幹細胞定着工程及び活性化幹細胞培養工程）が実施される。幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）の一例では、休眠幹細胞定着工程及び休眠幹細胞培養工程（幹細胞活性化手段）が実施された後、第１収容工程や無菌空気溶存工程、細胞休眠工程、第２収容工程、細胞運搬工程、温度戻し工程が実施される。

尚、所定のドナーから採取した骨髄液４３を培養することから作られた単一種（特定種類）の幹細胞１１（間葉系活性化幹細胞）を直ちに目的地点に運送（輸送）する場合、休眠幹細胞定着工程や休眠幹細胞培養工程、活性化幹細胞定着工程、活性化幹細胞培養工程（幹細胞活性化手段）を実施することなく、第１収容工程や無菌空気溶存工程、細胞休眠工程、第２収容工程、細胞運搬工程、温度戻し工程を実施する。

骨髄液４３を培養することから作られた単一種（特定種類）の幹細胞１１（間葉系活性化幹細胞）は、ガラスや合成樹脂から作られた幹細胞収容アンプル（幹細胞収容容器）（図示せず）に収容された状態で冷蔵庫又は冷凍庫において所定期間、所定温度（２～４℃又は冷凍）で保存されている。休眠幹細胞１１ａや活性化幹細胞１１ｂの元となる幹細胞１１の培養過程において生成された培養生成液１４は、ガラスや合成樹脂から作られた生成液収容アンプル（生成液収容容器）（図示せず）に収容された状態で冷蔵庫又は冷凍庫において所定期間、所定温度（２～４℃）で保存されている。

幹細胞収容アンプルや生成液収容アンプルを冷蔵庫又は冷凍庫から取り出し、幹細胞収容アンプルや生成液収容アンプルを恒温槽（図示せず）に収容し、幹細胞収容アンプルに収容された休眠幹細胞１１ａや生成液収容アンプルに収容された培養生成液１４を室温に戻す。又は、幹細胞収容アンプルや生成液収容アンプルを冷蔵庫又は冷凍庫から取り出し、幹細胞収容アンプルや生成液収容アンプルを室内に所定時間静的に放置し、幹細胞収容アンプルに収容された休眠幹細胞１１ａや生成液収容アンプルに収容された培養生成液１４を室温に戻す。

次に、第１扁平培養容器１０（第１培養容器）を用意し、室温に戻した休眠幹細胞１１ａを注射器又はピペットを利用して幹細胞収容アンプルから第１扁平培養容器１０に注入（収容）し、注射器又はピペットを利用して培養液２９を第１扁平培養容器１０に注入（収容）するとともに、室温に戻した培養生成液１４を注射器又はピペットを利用して生成液収容アンプルから第１扁平培養容器１０に注入（収容）する。第１扁平培養容器１０に注入する培養生成液１４の注入割合は、第１扁平培養容器１０に注入する培養液２９の総注入量を１００％としたときに５～１５％、好ましくは、８～１２％、より好ましくは、１０％である。

第１扁平培養容器１０（第１培養容器）は、図１に示すように、透明なガラス又は透明なプラスチックから作られ、小容量かつ所定面積の底面３０を有する平面形状が略正四角形の扁平な容器である。第１扁平培養容器１０として小容量かつ所定面積の底面３０を有する平面形状が円形や楕円形の扁平な容器を使用することもできる。休眠幹細胞定着工程及び休眠幹細胞培養工程で使用される第１扁平培養容器１０は、その容量が約２０～３０ｃｃ（好ましくは、２５ｃｃ）であり、その底面面積が約２５～３６ｍｍ^２である。第１扁平培養容器１０は、その一辺の長さが５～６ｍｍである。

培養液２９には、ペニシリン（約１００Ｕ／ｍｌ）、アムホテリシン（約１００ｎｇ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（約１００ｍｋｇ／ｍｌ）、Ｌ－グルタミン（約２～４ｍｌ）、２０％ウシ胎児血清を添加したミネラル塩溶液及びアミノ酸が含まれる。尚、培養液には、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ）、Ｇｒａｓｇｏｗ Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ（ＧＭＥＭ）、ＲＰＭＩ６４０等を使用することもできる。培養液には、インスリン、トランスフェリン、エタノールアミン、セレニウム、２－メルカプトエタノール、Ｌ―アラニル－Ｌ－グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、Ｌ－アラニン、Ｌ－アスパラギン、Ｌ－アスパラチン酸、グリシン、Ｌ－プロリン、Ｌ－セリン等を添加することもできる。

休眠幹細胞定着工程では、休眠幹細胞１１ａや培養液２９、培養生成液１４を第１扁平培養容器１０に注入した後、その第１扁平培養容器１０を２～５°の傾斜角度α１（好ましくは、２～３°の傾斜角度α１）で第１の方向へ傾斜させた状態で第１扁平培養容器１０を体温と略同一の温度（約３６～３７℃）に保持し、１２～２４時間静的に放置（動かすことなく静かに放置）する。その後、第１扁平培養容器１０を２～５°の傾斜角度α１（好ましくは、２～３°の傾斜角度α１）で第１の方向とは逆方向の第２の方向へ傾斜させた状態で第１扁平培養容器１０を体温と略同一の温度（約３６～３７℃）に保持し、１２～２４時間静的に放置しつつ、１２～２４時間の間において約１～２時間の間隔で第１扁平培養容器１０内の休眠幹細胞１１ａの初期平面形状からの変形を電子顕微鏡で観察し、休眠幹細胞１１ａが第１扁平培養容器１０の底面３０に定着したか否かを判断する。

具体的には、休眠幹細胞１１ａや培養液２９、培養生成液１４を第１扁平培養容器１０に注入した後、その第１扁平培養容器１０を電子顕微鏡（図示せず）の試料ホルダ３１に設置（セット）する。電子顕微鏡の試料ホルダ３１の上面３２と第１扁平培養容器１０の底部３３との間にスペーサー３４を介在させ、第１扁平培養容器１０の底部３３をスペーサー３４によって持ち上げた状態に保持し、第１扁平培養容器１０の底部３３が上となり第１扁平培養容器１０の頂部３５（注入口）が下となるように、第１扁平培養容器１０を第１の方向へ所定角度α１（２～５°、好ましくは、２～３°）傾斜させた状態で１２～２４時間静的に保持する。

次に、電子顕微鏡の試料ホルダ３１の上面３２と第１扁平培養容器１０の頂部３５との間にスペーサー３４を介在させ、第１扁平培養容器１０の頂部３５をスペーサー３４によって持ち上げた状態に保持し、第１扁平培養容器１０の頂部３５（注入口）が上となり第１扁平培養容器１０の底部３３が下となるように、第１扁平培養容器１０を第１の方向と逆方向の第２の方向へ所定角度α１（２～５°、好ましくは、２～３°）傾斜させた状態で１２～２４時間静的に保持する。

第１扁平培養容器１０に収容された休眠幹細胞１１ａは、時間の経過とともに第１扁平培養容器１０の底面３０に定着しつつ、培養液２９と培養生成液１４との混合培養液によって培養され、第１扁平培養容器１０の底面３０において次第に増殖（分化）してコロニーを形成する。休眠幹細胞定着工程において、試料ホルダ３１の上面３２に対して第１扁平培養容器１０を第１の方向及び第２の方向へ前記傾斜角度α１で傾斜させることで、第１扁平培養容器１０内において休眠幹細胞１１ａや培養液２９、培養生成液１４が第１扁平培養容器１０の頂部３５の側又は底部３３の側に偏り、第１扁平培養容器１０の頂部３５の側又は底部３３の側において休眠幹細胞１１ａや培養液２９、培養生成液１４の水圧が大きくなって休眠幹細胞１１ａが第１扁平培養容器１０の頂部３５の側又は底部３３の側に集中し、それによって休眠幹細胞１１ａどうしの活性が高まり、第１扁平培養容器１０の底面３０において休眠幹細胞１１ａを容易かつ迅速に定着させることができる。

電子顕微鏡には、撮影機能（カメラ機能）が装備され、ディスプレイ３６が接続されている。電子顕微鏡は、撮影機能によって第１扁平培養容器１０に注入された休眠幹細胞１１ａの平面形状の拡大画像を所定の時間間隔（約１～２時間間隔）で撮影し、撮影した休眠幹細胞１１ａの平面形状の拡大画像と撮影時間とをディスプレイ３６に出力（表示）する。ディスプレイ３６に表示された休眠幹細胞１１ａの平面形状の拡大画像を１２～２４時間の間において約１～２時間の間隔で確認（視認）し、休眠幹細胞１１ａの平面形状の変化を観察する。尚、電子顕微鏡の観察窓から休眠幹細胞１１ａの平面形状の変化を１２～２４時間の間において約１～２時間の間隔で直接観察してもよい。

休眠幹細胞１１ａの初期平面形状（定着前の平面形状）は略円形であり、休眠幹細胞１１ａの平面形状が略円形の場合、休眠幹細胞１１ａが第１扁平培養容器１０の底面３０（底壁内面）に定着しておらず、休眠幹細胞１１ａが増殖（分化）を開始していない。休眠幹細胞１１ａの変形後の平面形状（定着後の平面形状）は定着前の略円形を核として休眠幹細胞１１ａが一方向（所定方向）へ不定形に伸張（拡張）した扁平形状であり、休眠幹細胞１１ａが第１扁平培養容器１０の底面３０（底壁内面）に定着し、休眠幹細胞１１ａが増殖（活性化）を開始している。

休眠幹細胞定着工程における観察の結果、図４に示すように、ディスプレイ３６に出力（表示）された休眠幹細胞１１ａの平面形状の拡大画像が略円形のまま観察される場合、休眠幹細胞１１ａが第１扁平培養容器１０の底面３０（底壁内面）に定着していないと判断し、休眠幹細胞１１ａの平面形状の変化を約１～２時間の間隔で継続して観察する。図５に示すように、ディスプレイ３６に出力（表示）された休眠幹細胞１１ａの平面形状が略円形から略円形を核として不定形の扁平形状に変形した場合、休眠幹細胞１１ａが第１扁平培養容器１０の底面３０に定着したと判断する。

休眠幹細胞１１ａの定着時に容量が３０ｃｃを超過するとともに底面面積が３６ｍｍ^２を超過する大きな扁平培養容器を使用すると、休眠幹細胞１１ａが扁平培養容器の底面に定着し難くなるとともに休眠幹細胞１１ａの増殖が遅くなるが、前記容量かつ前記底面面積の第１扁平培養容器１０を使用することで、休眠幹細胞１１ａを第１扁平培養容器１０の底面３０に容易かつ迅速に定着させることができ、第１扁平培養容器１０において休眠幹細胞１１ａを素早く増殖させることができる。

第１扁平培養容器１０を第２の方向へ傾斜させた後、第１扁平培養容器１０を体温と略同一の温度で１２～２４時間静的に放置しつつ、１２～２４時間の間において約１～２時間の間隔で第１扁平培養容器１０内の休眠幹細胞１１ａの初期平面形状からの変形を観察するから、休眠幹細胞１１ａの変形を見逃すことはなく、休眠幹細胞１１ａの第１扁平培養容器１０の底面３０に対する定着を正確に確認することができる。

休眠幹細胞定着工程における観察の結果、図５に示すように、休眠幹細胞１１ａが略円形（初期平面形状）から略円形を核として不定形の扁平形状に変形し、休眠幹細胞１１ａの第１扁平培養容器１０の底面３０への定着を確認した後、休眠幹細胞培養工程が行われる。休眠幹細胞培養工程では、休眠幹細胞１１ａを増殖かつ活性化させ、休眠幹細胞１１ａを活性化幹細胞１１ｂに変質（改質）させる。

休眠幹細胞培養工程では、第１扁平培養容器１０を電子顕微鏡の試料ホルダ３１から取り外し、休眠幹細胞定着工程において第１扁平培養容器１０に注入した培養液２９と培養生成液１４との混合培養液を注射器又はピペットを利用して第１扁平培養容器１０から排出し、注射器又はピペットを利用してあらたな培養液２９を第１扁平培養容器１０に注入（収容）するとともに、注射器又はピペットを利用してあらたな培養生成液１４（休眠幹細胞１１ａの元となる幹細胞１１の培養過程において生成された培養生成液１４）を生成液収容アンプルから第１扁平培養容器１０に注入（収容）する。

あらたな培養液２９やあらたな培養生成液１４は、休眠幹細胞定着工程において第１扁平培養容器１０に注入されたそれらと同一である。第１扁平培養容器１０に注入するあらたな培養生成液１４の注入割合は、第１扁平培養容器１０に注入するあらたな培養液２９の総注入量を１００％としたときに５～１５％、好ましくは、８～１２％、より好ましくは、１０％である。

休眠幹細胞培養工程では、あらたな培養液２９やあらたな培養生成液１４を第１扁平培養容器１０に注入した後、その第１扁平培養容器１０を２～５°の傾斜角度α１（好ましくは、２～３°の傾斜角度α１）で傾斜させた状態で第１扁平培養容器１０を体温と略同一の温度（約３６～３７℃）に保持し、第１扁平培養容器１０を３６～４８時間静的に放置（動かすことなく静かに放置）しつつ、３６～４８時間の間において約１～２時間の間隔で第１扁平培養容器１０の底面３０に定着した休眠幹細胞１１ａの第１扁平培養容器１０の底面面積に対する総平面面積を観察し、第１扁平培養容器１０の底面面積に対する休眠幹細胞１１ａの総平面面積が第１目標割合に達したか否かを判断する。第１扁平培養容器１０の底面面積に対する休眠幹細胞１１ａ（活性化幹細胞１１ｂ）の総平面面積の第１目標割合は、７０～８０％（７０～８０％％コンフルエント）である。

具体的には、あらたな培養液２９とあらたな培養生成液１４とを第１扁平培養容器１０に注入した後、その第１扁平培養容器１０を電子顕微鏡の試料ホルダ３１に設置（セット）する。電子顕微鏡の試料ホルダ３１の上面３２と第１扁平培養容器１０の底部３３との間にスペーサー３４を介在させ、第１扁平培養容器１０の底部３３をスペーサー３４によって持ち上げた状態に保持し、第１扁平培養容器１０の底部３３が上となり第１扁平培養容器１０の頂部３５（注入口）が下となるように、第１扁平培養容器１０を第１の方向へ所定角度α１（２～５°、好ましくは、２～３°）傾斜させた状態で静的に保持する。又は、電子顕微鏡の試料ホルダ３１の上面３２と第１扁平培養容器１０の頂部３５との間にスペーサー３４を介在させ、第１扁平培養容器１０の頂部３５をスペーサー３４によって持ち上げた状態に保持し、第１扁平培養容器１０の頂部３５（注入口）が上となり第１扁平培養容器１０の底部３３が下となるように、第１扁平培養容器１０を第２の方向へ所定角度α１（２～５°、好ましくは、２～３°）傾斜させた状態で静的に保持する。

休眠幹細胞培養工程では、休眠幹細胞１１ａの定着を確認した後、第１扁平培養容器１０（第１培養容器）から培養液２９と培養生成液１４との混合培養液を排出しつつ、あらたな培養液２９と幹細胞１１から分泌された所定の代謝物質が含まれるあらたな培養生成液１４とを第１扁平培養容器１０に注入することで、その幹細胞１１自体の代謝物質がトリガーとなり、休眠幹細胞１１ａが速やかに活性を開始し、休眠幹細胞１１ａの増殖を確実に促進することができる。

休眠幹細胞培養工程において、試料ホルダ３１の上面３２に対して第１扁平培養容器１０を前記傾斜角度α１で傾斜させることで、第１扁平培養容器１０内において休眠幹細胞１１ａや培養液２９、培養生成液１４が第１扁平培培養容器１０の頂部３５の側又は底部３３の側に偏り、第１扁平培養容器１０の頂部３５の側又は底部３３の側において休眠幹細胞１１ａや培養液２９、培養生成液１４の水圧が大きくなって休眠幹細胞１１ａが第１扁平培養容器１０の底部３３の側又は頂部３５の側に集中し、それによって休眠幹細胞１１ａどうしの活性が高まり、第１扁平培養容器１０の底面３０において休眠幹細胞１１ａを容易かつ迅速に増殖（分化）させることができ、休眠幹細胞１１ａを速やかに活性化幹細胞１１ｂに変質（改質）させることができる。

電子顕微鏡は、撮影機能によって第１扁平培養容器１０の底面３０に定着した休眠幹細胞１１ａの平面形状の拡大画像を所定の時間間隔（約１～２時間間隔）で撮影し、撮影した休眠幹細胞１１ａの平面形状の拡大画像と撮影時間とをディスプレイ３６に出力（表示）する。ディスプレイ３６に表示された休眠幹細胞１１ａの平面形状の拡大画像を３６～４８時間の間において約１～２時間の間隔で確認（視認）し、第１扁平培養容器１０の底面３０に定着した休眠幹細胞１１ａの第１扁平培養容器１０の底面面積に対する総平面面積を観察しつつ、休眠幹細胞１１ａの総平面面積が第１扁平培養容器１０の底面面積に対して第１目標割合（７０～８０％コンフルエント）に達したか否かを判断する。尚、電子顕微鏡の観察窓から休眠幹細胞１１ａの第１扁平培養容器１０の底面面積に対する総平面面積を３６～４８時間の間において約１～２時間間隔で直接観察し、休眠幹細胞１１ａの総平面面積が第１扁平培養容器１０の底面面積に対して第１目標割合（７０～８０％コンフルエント）に達したか否かを判断してもよい。

休眠幹細胞培養工程における観察の結果、図５に示すように、ディスプレイ３６に表示された休眠幹細胞１１ａの第１扁平培養容器１０の底面面積に対する総平面面積が第１目標割合（７０～８０％コンフルエント）に達していない場合、休眠幹細胞１１ａの第１扁平培養容器１０の底面面積に対する総平面面積を約１～２時間間隔で継続して観察する。尚、ディスプレイ３６に表示された拡大画像の全面積に対して休眠幹細胞１１ａの総平面面積が第１目標割合に達した場合に、休眠幹細胞１１ａの第１扁平培養容器１０の底面面積に対する総平面面積が第１目標割合に達したものとする。

休眠幹細胞培養工程における観察の結果、休眠幹細胞１１ａが第１扁平培養容器１０の底面３０（底壁内面）において増殖して休眠幹細胞１１ａがコロニーを形成し、休眠幹細胞１１ａの平面形状が拡張することで、図６に示すように、ディスプレイ３６に表示された休眠幹細胞１１ａの第１扁平培養容器１０の底面面積に対する総平面面積が第１目標割合（７０～８０％コンフルエント）に達した場合、休眠幹細胞１１ａが十分に増殖かつ活性化し、休眠幹細胞１１ａが活性化幹細胞１１ｂに変質（改質）している。休眠幹細胞１１ａの第１扁平培養容器１０の底面面積に対する総平面面積が第１目標割合に達した時点で、第１扁平培養容器１０から活性化幹細胞１１ｂを抽出する。

第１扁平培養容器１０に注入されている混合培養液を注射器又はピペットを利用して第１扁平培養容器１０から排出し、第１扁平培養容器１０内をＰＢＳで洗浄した後、トリプシン液を第１扁平培養容器１０に注入する。第１扁平培養容器１０にトリプシン液を注入すると、第１扁平培養容器１０の底面３０に定着（増殖）した活性化幹細胞１１ｂがトリプシン液によって底面３０から剥離し、トリプシン液の水面に浮上する。ピペットを利用して活性化幹細胞１１ｂを吸引し、活性化幹細胞１１ｂをピペット内に収容する。

休眠幹細胞定着工程及び休眠幹細胞培養工程を実施した後、無菌空気溶存工程及び第１収容工程を実施する。無菌空気溶存工程では、細胞収容容器１２の中間収容スペース１９ｂに収容する培養液２９に無菌空気を溶存させる。その一例として噴射ノズルから無菌空気の微細な気泡を培養液２９中に噴射し、培養液２９中に無菌空気（無菌空気の微細な気泡）を溶存させる。尚、幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）では、無菌空気溶存工程を省略することができ、その場合、休眠幹細胞培養工程の後に第１収容工程が実施される。

幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）は、無菌空気溶存工程によって培養液２９に無菌空気を溶存させ、無菌空気を溶存させた培養液２９に休眠幹細胞１１ａを培養した活性化幹細胞１１ｂを浸漬させた状態で運搬（輸送）するから、培養液２９中において活性化幹細胞１１ｂの生存が確実に維持され、休眠幹細胞１１ａを培養した活性化幹細胞１１ｂを出発地点から目的地点まで所定時間をかけて運搬（輸送）したとしても、活性化幹細胞１１ｂの生存率を高い値に保持することができ、活性化幹細胞１１ｂの運搬に長時間を要したとしても、その活性化幹細胞１１ｂを生存させることができる（その活性化幹細胞１１ｂを生存させまま出発地点から目的地点まで運ぶことができる）。

休眠幹細胞定着工程及び休眠幹細胞培養工程によって休眠幹細胞１１ａを活性化させた活性化幹細胞１１ｂは、ピペットから細胞収容容器１２に収容される。第１収容工程では、開閉蓋１８を細胞収容容器１２の頂部開口１７から取り外し、細胞収容容器１２の頂部開口１７を開放し、活性化幹細胞１１ｂをピペットから細胞収容容器１２の下部収容スペース１９ｃに収容する。次に、無菌空気を溶存させた培養液２９を細胞収容容器１２の中間収容スペース１９ｂに収容するとともに、無菌空気の微細な気泡を噴射ノズルから細胞収容容器１２に噴射し、無菌空気を細胞収容容器１２の上部収容スペース１９ａに収容する。活性化幹細胞１１ｂ、無菌空気を溶存させた培養液２９、無菌空気を細胞収容容器１２の収容スペース１９に収容した後、開閉蓋１８によって細胞収容容器１２の頂部開口１７を気密に閉塞（密閉）する。

細胞収容容器１２の収容スペース１９（上部収容スペース１９ａ）に対する無菌空気の収容割合は、１９～２１％の範囲にあり、細胞収容容器１２の収容スペース１９（中間収容スペース１９ｂ）に対する無菌空気を溶存させた培養液２９の収容割合は、４１～４５％の範囲にある。細胞収容容器１２の収容スペース１９（下部収容スペース１９ｃ）に対する活性化幹細胞１１ａの収容割合は、３６～３８％の範囲にある。

幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）は、無菌空気の収容スペース１９に対する収容割合が前記範囲にあり、無菌空気を溶存させた培養液２９の収容スペース１９に対する収容割合が前記範囲にあるから、細胞収容容器１２の収容スペース１９において無菌空気が充満し、休眠幹細胞１１ａを培養した幹細胞１１（活性化幹細胞１１ｂ）の生存が無菌空気の雰囲気によって確実に維持され、幹細胞１１を出発地点から目的地点まで所定時間をかけて運搬（輸送）したとしても、幹細胞１１の生存率を高い値に保持することができ、活性化幹細胞１１ｂの運搬に長時間を要したとしても、その活性化幹細胞１１ｂを生存させることができる（その活性化幹細胞１１ｂを生存させまま出発地点から目的地点まで運ぶことができる）。

第１収容工程を実施した後、細胞休眠工程及び第２収容工程を実施する。細胞休眠工程では、活性化幹細胞１１ｂ、無菌空気を溶存させた培養液２９、無菌空気を収容したそれら細胞収容容器１２を冷蔵庫（図示せず）又は冷凍庫（図示せず）に収納し、それら細胞収容容器１２を所定温度（２～４℃）に冷却し、細胞収容容器１２の下部収容スペース１９ｃに収容された活性化幹細胞１１ｂを休眠状態にする。尚、幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）では、細胞休眠工程を省略することができ、その場合、第１収容工程の後に第２収容工程が実施される。

第２収容工程では、保温運搬容器１３から密閉蓋２３（冷却蓋）を取り外し、保温運搬容器１３の頂部開口２２を開放するとともに、旋回蓋２８を旋回させて保冷剤収容スペース２７を開放し、密閉蓋２３の保冷剤収容スペース２７に保冷剤２６を収容した後、旋回蓋２８を旋回させて保冷剤収容スペース２７を閉鎖する。次に、冷蔵庫又は冷凍庫からそれら細胞収容容器１２を取り出し、細胞休眠工程によって休眠状態にした活性化幹細胞１１ｂ、無菌空気を溶存させた培養液２９、無菌空気を収容した細胞収容容器１２の複数個（細胞休眠工程を実施しない場合、第１収容工程によって幹細胞１１と培養液２９と無菌空気とを収容した細胞収容容器１２の複数個）を保温運搬容器１３の容器収容スペース２４に収容し、密閉蓋２３によって保温運搬容器１３の頂部開口２２を気密に閉塞（密閉）する。

保温運搬容器１３の容器収容スペース２４（細胞収容容器１２）は、密閉蓋２３の保冷剤収容スペース２７に収容された保冷剤２６によって所定温度（２～４℃）に保持され、細胞収容容器１２の下部収容スペース１９ｃに収容された活性化幹細胞１１ｂの休眠状態が維持される。尚、図８では、１０個の細胞収容容器１２を保温運搬容器１３の容器収容スペース２４に収容しているが、保温運搬容器１３の容器収容スペース２４に収容する細胞収容容器１２の個数について特に制限はない。

第２収容工程によって複数個の細胞収容容器１２を保温運搬容器１３の容器収容スペース２４に収容した後、細胞運搬工程を実施する。細胞運搬工程では、それら細胞収容容器１２を密閉蓋２３の保冷剤収容スペース２７に収容された保冷剤２６によって所定温度に冷却しつつ、複数個の細胞収容容器１２を収容した保温運搬容器１３を運送車両や航空機、列車、船舶等の所定の輸送手段によって出発地点（幹細胞１１の製造場所）から目的地点（活性化幹細胞１１ｂの使用場所）まで運搬（輸送）する。

幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）は、休眠幹細胞１１ａを培養した活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）と無菌空気を溶存させた培養液２９と無菌空気とを収容した細胞収容容器１２を所定の温度に冷却して活性化幹細胞１１ｂを休眠状態にするとともに、細胞運搬工程において細胞収容容器１２に収容された活性化幹細胞１１ｂを所定温度に冷却した状態で運搬（輸送）することで、活性化幹細胞１１ｂの休眠状態を維持することができ、活性化幹細胞１１ｂの寿命をゆっくりと進めることができ、休眠幹細胞１１ａを培養した活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）を出発地点から目的地点まで所定時間をかけて運搬（輸送）したとしても、活性化幹細胞１１ｂの生存率を高い値に保持することができるとともに、活性化幹細胞１１ｂの運搬に長時間を要したとしても、活性化幹細胞１１ｂを確実に生存させることができる（その活性化幹細胞１１ｂを生存させまま出発地点から目的地点まで運ぶことができる）。

幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）における休眠幹細胞１１ａを培養した活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）の出発地点から目的地点までの運搬時間は、２４～４８時間であり、出発地点からの運搬時間が３６時間経過後における休眠幹細胞１１ａを培養した活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）の生存率は、８７～８９％の範囲にある。又、出発地点からの運搬時間が４８時間経過後における休眠幹細胞１１ａを培養した活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）の生存率は、７４～７６％の範囲にある。

幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）は、運搬時間が３６時間経過後における休眠幹細胞１１ａを培養した活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）の生存率が前記範囲にあり、運搬時間が４８時間経過後における休眠幹細胞１１ａを培養した活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）の生存率が前記範囲にあるから、休眠幹細胞１１ａを培養した活性化幹細胞１１ｂを出発地点から目的地点まで３６時間から４８時間をかけて運搬（輸送）したとしても、その活性化幹細胞１１ｂを生存させることができ（その活性化幹細胞１１ｂを生存させまま輸送することができ）、活性化幹細胞１１ｂの運搬（輸送）に３６時間から４８時間を要したとしても、活性化幹細胞１１ｂの生存率を高い値に保持することができる。

保温運搬容器１３を目的地点（活性化幹細胞の使用場所）まで運搬（輸送）した後、温度戻し工程を実施する。温度戻し工程では、細胞運搬工程によって目的地点に運搬された保温運搬容器１３の密閉蓋２３の保冷剤収容スペース２７から保冷剤２６を取り外し、保温運搬容器１３（密閉蓋２３を装着した状態又は密閉蓋２３を取り外した状態）を所定時間静的に放置し、保温運搬容器１３に収容された複数個の細胞収容容器１２を所定時間静的に放置して細胞収容容器１２を室温に戻す。

幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）では、保温運搬容器１３の密閉蓋２３を取り外して保温運搬容器１３の頂部開口２２を開放し、保温運搬容器１３の容器収容スペース２４から細胞収容容器１２を取り出し、細胞収容容器１２に収容された休眠幹細胞１１ａを培養した活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）を各種の疾患（心血管疾患や中枢神経系疾患等）の治療や再生医療、非治療的用途に利用する。尚、幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）では、温度戻し工程を省くことができ、その場合、細胞収容容器１３に収容された休眠幹細胞１１ａを培養した活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）が各種の疾患の治療や再生医療、非治療的用途に利用される。

幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）は、所定温度（２～４℃）に冷却された細胞収容容器１２を所定時間静的に放置して細胞収容容器１２を室温に戻すことで、細胞収容容器１２に収容された休眠状態の活性化幹細胞１１ｂ（休眠幹細胞１１ａを培養した休眠状態の活性化幹細胞１１ｂ）を死滅させることなく休眠状態から活動状態に戻すことができ、活動状態に戻した活性化幹細胞１１ｂ（休眠幹細胞１１ａを培養した活性化幹細胞１１ｂ）を各種の疾患（心血管疾患や中枢神経系疾患等）に対して有効に利用することができ、活動状態に戻した活性化幹細胞１１ｂを利用することで、再生医療における再生において有効な効果を得ることができる。

幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）は、休眠幹細胞１１ａを培養した活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）を細胞収容容器１２の下部収容スペース１９ｃに収容し、無菌空気を溶存させた培養液２９を細胞収容容器１２の中間収容スペース１９ｂに収容するとともに、無菌空気を細胞収容容器１２の上部収容スペース１９ａに収容し、開閉蓋１７によって細胞収容容器１２の頂部開口１７を気密に閉塞するとともに、休眠幹細胞１１ａを培養した活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）と培養液２９と無菌空気とを収容した細胞収容容器１２の複数個を保温運搬容器１２の容器収容スペース２４に収容しつつ、保冷剤収容スペース２７に保冷剤２６を収容した密閉蓋２３によって保温運搬容器１３の頂部開口２２を気密に閉塞し、容器収容スペース２４に収容された複数個の細胞収容容器１２を保冷剤収容スペース２７に収容された保冷剤２６によって所定温度に冷却しつつ、複数個の細胞収容容器１２を収容した保温運搬容器１３を所定の輸送手段によって出発地点から目的地点まで運搬するから、細胞収容容器１２に収容された活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）が所定温度（２～４℃）に冷却され、活性化幹細胞１１ｂ（休眠幹細胞１１ａを培養した活性化幹細胞１１ｂ）の休眠状態を確実に維持することができる。

幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）は、休眠幹細胞１１ａを培養した活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）の寿命がゆっくりと進み、不要かつ雑多な幹細胞を含まないピュア（純粋）な単一種の幹細胞１１（間葉系活性化幹細胞）を出発地点から目的地点まで所定時間をかけて運搬（輸送）したとしても、休眠幹細胞１１ａを培養した活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）を生存させたまま目的地点に運ぶことができ、活性化幹細胞１１ｂの運搬（輸送）に長時間を要したとしても、活性化幹細胞１１ｂの生存率を高い値に保持することができる。幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）は、休眠幹細胞１１ａを培養した活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）を生存させたまま目的地点に運ぶことができるから、生存する活性化幹細胞１１ｂ（休眠幹細胞１１ａを培養した活性化幹細胞１１ｂ）を各種の疾患（心血管疾患や中枢神経系疾患等）に対して有効に利用することができ、生存する活性化幹細胞１１ｂを利用することで、再生医療における再生において有効な効果を得ることができる。

図９は、一例として示す第２扁平培養容器３７の斜視図であり、図１０は、第１の方向へ傾斜させた第２扁平培養容器３７の側面図である。図１１は、第２の方向へ傾斜させた第２扁平培養容器３７の側面図であり、図１２は、活性化幹細胞１１ｂの平面形状の一例を示す部分拡大図である。図１３は、活性化幹細胞１１ｂの平面形状の他の一例を示す部分拡大図であり、図１４は、活性化幹細胞１１ｂの平面形状の他の一例を示す部分拡大図である。図１０，１１では、第２扁平培養容器３７を断面で示す。図１２～図１４は、電子顕微鏡によって撮影された活性化幹細胞１１ｂの平面形状の拡大画像を示す。

幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）の他の一例では、休眠幹細胞定着工程と休眠幹細胞培養工程と活性化幹細胞定着工程と活性化幹細胞培養工程と（幹細胞活性化手段）が実施された後、第１収容工程や無菌空気溶存工程、細胞休眠工程、第２収容工程、細胞運搬工程、温度戻し工程が実施される。幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）の他の一例では、既述の休眠幹細胞定着工程及び休眠幹細胞培養工程によって休眠幹細胞１１ａを定着・培養し、休眠幹細胞１１ａを活性化幹細胞１１ｂに変質（改質）させた後、活性化幹細胞定着工程及び活性化幹細胞培養工程を実施する。

活性化幹細胞定着工程では、注射器又はピペットを利用して活性化幹細胞１１ｂを第１扁平培養容器１０（第１培養容器）から第２扁平培養容器３７（第２培養容器）に注入（収容）し、注射器又はピペットを利用して培養液２９を第２扁平培養容器３７に注入（収容）するとともに、注射器又はピペットを利用して培養生成液１４を生成液収容アンプルから第２扁平培養容器３７に注入（収容）する。第２扁平培養容器３７に注入する培養生成液１４の注入割合は、第２扁平培養容器３７に注入する培養液２９の総注入量を１００％としたときに５～１５％、好ましくは、８～１２％、より好ましくは、１０％である。培養液２９や培養生成液１４は、第１扁平培養容器１０に注入したそれらと同一である。

第２扁平培養容器３７（第２培養容器）は、図９に示すように、透明なガラス又は透明なプラスチックから作られ、中容量かつ所定面積の底面３８を有する平面形状が略四角形の扁平な容器である。第２扁平培養容器３７（第２培養容器）は、底面３８の面積が第１扁平培養容器１０（第１培養容器）の約２倍であり、その容量が第１扁平培養容器１０（第１培養容器）のそれよりも大きい。第２扁平培養容器３７として中容量かつ所定面積の底面３８を有する平面形状が円形や楕円形の扁平な容器を使用することもできる。活性化幹細胞定着工程及び活性化幹細胞培養工程で使用される第２扁平培養容器３７は、その容量が約４０～６０ｃｃ（好ましくは、５０ｃｃ）であり、その底面面積が約５０～７２ｍｍ^２である。第２扁平培養容器３７は、その一辺の長さが約７～８．５ｍｍである。

活性化幹細胞定着工程では、活性化幹細胞１１ｂや培養液２９、培養生成液１４を第２扁平培養容器３７に注入した後、図１０に示すように、その第２扁平培養容器３７を２～５°の傾斜角度α１（好ましくは、２～３°の傾斜角度α１）で第１の方向へ傾斜させた状態で第２扁平培養容器３７を体温と略同一の温度（約３６～３７℃）に保持し、１２～２４時間静的に放置（動かすことなく静かに放置）する。その後、図１１に示すように、第２扁平培養容器３７を２～５°の傾斜角度α１（好ましくは、２～３°の傾斜角度α１）で第１の方向とは逆方向の第２の方向へ傾斜させた状態で第２扁平培養容器３７を体温と略同一の温度（約３６～３７℃）に保持し、１２～２４時間静的に放置しつつ、１２～２４時間の間において約１～２時間の間隔で第２扁平培養容器３７内の活性化幹細胞１１ｂの初期平面形状からの変形を電子顕微鏡で観察し、活性化幹細胞１１ｂが第２扁平培養容器３７の底面３８に定着したか否かを判断する。

具体的には、活性化幹細胞１１ｂや培養液２９、培養生成液１４を第２扁平培養容器３７に注入した後、その第２扁平培養容器３７を電子顕微鏡（図示せず）の試料ホルダ３１に設置（セット）する。電子顕微鏡の試料ホルダ３１の上面３２と第２扁平培養容器３７の底部３９との間にスペーサー３４を介在させ、第２扁平培養容器３７の底部３９をスペーサー３４によって持ち上げた状態に保持し、第２扁平培養容器３７の底部３９が上となり第２扁平培養容器３７の頂部４０（注入口）が下となるように、第２扁平培養容器３７を第１の方向へ所定角度α１（２～５°、好ましくは、２～３°）傾斜させた状態で１２～２４時間静的に保持する。

次に、電子顕微鏡の試料ホルダ３１の上面３２と第２扁平培養容器３７の頂部４０との間にスペーサー３４を介在させ、第２扁平培養容器３７の頂部４０をスペーサー３４によって持ち上げた状態に保持し、第２扁平培養容器３７の頂部４０（注入口）が上となり第２扁平培養容器３７の底部３９が下となるように、第２扁平培養容器３７を第１の方向と逆方向の第２の方向へ所定角度α１（２～５°、好ましくは、２～３°）傾斜させた状態で１２～２４時間静的に保持する。

第２扁平培養容器３７に収容された活性化幹細胞１１ｂは、時間の経過とともに第２扁平培養容器３７の底面３８に定着しつつ、培養液２９と培養生成液１４との混合培養液によって培養され、第２扁平培養容器３７の底面３８において次第に増殖（分化）してコロニーを形成する。活性化幹細胞定着工程において、試料ホルダ３１の上面３２に対して第２扁平培養容器３７を第１の方向及び第２の方向へ前記傾斜角度α１で傾斜させることで、第２扁平培養容器３７内において活性化幹細胞１１ｂや培養液２９、培養生成液１４が第２扁平培養容器３７の頂部４０の側又は底部３９の側に偏り、第２扁平培養容器３７の頂部４０の側又は底部３７の側において活性化幹細胞１１ｂや培養液２９、培養生成液１４の水圧が大きくなって活性化幹細胞１１ｂが第２扁平培養容器３７の頂部４０の側又は底部３９の側に集中し、それによって活性化幹細胞１１ｂどうしの活性が高まり、第２扁平培養容器３７の底面３８において活性化幹細胞１１ｂを容易かつ迅速に定着させることができる。

電子顕微鏡は、撮影機能によって第２扁平培養容器３７に注入された活性化幹細胞１１ｂの平面形状の拡大画像を所定の時間間隔（約１～２時間間隔）で撮影し、撮影した活性化幹細胞１１ｂの平面形状の拡大画像と撮影時間とをディスプレイ３６に出力（表示）する。ディスプレイ３６に表示された活性化幹細胞１１ｂの平面形状の拡大画像を１２～２４時間の間において約１～２時間の間隔で確認（視認）し、活性化幹細胞１１ｂの平面形状の変化を観察する。尚、電子顕微鏡の観察窓から活性化幹細胞１１ｂの平面形状の変化を１２～２４時間の間において約１～２時間の間隔で直接観察してもよい。

活性化幹細胞１１ｂの初期平面形状（定着前の平面形状）は略円形であり、活性化幹細胞１１ｂの平面形状が略円形の場合、活性化幹細胞１１ｂが第２扁平培養容器３７の底面３８（底壁内面）に定着しておらず、活性化幹細胞１１ｂが増殖（分化）を開始していない。活性化幹細胞１１ｂの変形後の平面形状（定着後の平面形状）は定着前の略円形を核として活性化幹細胞１１ｂが一方向（所定方向）へ不定形に伸張（拡張）した扁平形状であり、活性化幹細胞１１ｂが第２扁平培養容器３７の底面３８（底壁内面）に定着し、活性化幹細胞１１ｂが増殖（活性化）を開始している。

活性化幹細胞定着工程における観察の結果、図１２に示すように、ディスプレイ３６に出力（表示）された活性化幹細胞１１ｂの平面形状の拡大画像が略円形のまま観察される場合、活性化幹細胞１１ｂが第２扁平培養容器３７の底面３８（底壁内面）に定着していないと判断し、活性化幹細胞１１ｂの平面形状の変化を約１～２時間の間隔で継続して観察する。図１３に示すように、ディスプレイ３６に出力（表示）された活性化幹細胞１１ｂの平面形状が略円形から略円形を核として不定形の扁平形状に変形した場合、活性化幹細胞１１ｂが第２扁平培養容器３７の底面３８に定着したと判断する。

活性化幹細胞１１ｂの定着時に容量が６０ｃｃを超過するとともに底面面積が７２ｍｍ^２を超過する大きな扁平培養容器を使用すると、活性化幹細胞１１ｂが扁平培養容器の底面に定着し難くなるとともに活性化幹細胞１１ｂの増殖が遅くなるが、前記容量かつ前記底面面積の第２扁平培養容器３７を使用することで、活性化幹細胞１１ｂを第２扁平培養容器３７の底面３８に容易に定着させることができ、第２扁平培養容器３７において活性化幹細胞１１ｂを素早く増殖させることができる。第２扁平培養容器３７を第１の方向又は第２の方向へ傾斜させた後、第２扁平培養容器３７を体温と略同一の温度で３６～４８時間静的に放置しつつ、１２～２４時間の間において約１～２時間の間隔で第２扁平培養容器３７内の活性化幹細胞１１ｂの初期平面形状からの変形を観察するから、活性化幹細胞１１ｂの変形を見逃すことはなく、活性化幹細胞１１ｂの第２扁平培養容器３７の底面３８に対する定着を正確に確認することができる。

活性化幹細胞定着工程における観察の結果、図１３に示すように、活性化幹細胞１１ｂが略円形（初期平面形状）から略円形を核として不定形の扁平形状に変形し、活性化幹細胞１１ｂの第２扁平培養容器３７の底面３８への定着を確認した後、活性化幹細胞培養工程が行われる。活性化幹細胞培養工程では、活性化幹細胞１１ｂを増殖かつ活性化させる。活性化幹細胞培養工程では、第２扁平培養容器３７を電子顕微鏡の試料ホルダ３１から取り外し、活性化幹細胞定着工程において第２扁平培養容器３７に注入した培養液２９と培養生成液１４との混合培養液を注射器又はピペットを利用して第２扁平培養容器３７から排出し、注射器又はピペットを利用してあらたな培養液２９を第２扁平培養容器３７に注入（収容）するとともに、注射器又はピペットを利用してあらたな培養生成液１４（休眠幹細胞１１ａの保存前（休眠幹細胞１１ａの元となる）幹細胞１１の培養過程において生成された培養生成液１４）を生成液収容アンプルから第２扁平培養容器３７に注入（収容）する。

あらたな培養液２９やあらたな培養生成液１４は、活性化幹細胞定着工程において第２扁平培養容器３７に注入されたそれらと同一である。第２扁平培養容器３７に注入するあらたな培養生成液１４の注入割合は、第２扁平培養容器３７に注入するあらたな培養液２９の総注入量を１００％としたときに５～１５％、好ましくは、８～１２％、より好ましくは、１０％である。

活性化幹細胞培養工程では、あらたな培養液２９やあらたな培養生成液１４を第２扁平培養容器３７に注入した後、その第２扁平培養容器３７を２～５°の傾斜角度α１（好ましくは、２～３°の傾斜角度α１）で傾斜させた状態で第２扁平培養容器３７を体温と略同一の温度（約３６～３７℃）に保持し、第２扁平培養容器３７を３６～４８時間静的に放置（動かすことなく静かに放置）しつつ、３６～４８時間の間において約１～２時間の間隔で第２扁平培養容器３７の底面３８に定着した活性化幹細胞１１ｂの第２扁平培養容器３７の底面面積に対する総平面面積を観察し、第２扁平培養容器３７の底面面積に対する活性化幹細胞１１ｂの総平面面積が第２目標割合に達したか否かを判断する。第２扁平培養容器３７の底面面積に対する活性化幹細胞１１ｂの総平面面積の第２目標割合は、８８～９２％（８８～９２％コンフルエント）である。

具体的には、あらたな培養液２９とあらたな培養生成液１４とを第２扁平培養容器３７に注入した後、その第２扁平培養容器３７を電子顕微鏡の試料ホルダ３１に設置（セット）する。電子顕微鏡の試料ホルダ３１の上面３２と第２扁平培養容器３７の底部３９との間にスペーサー３４を介在させ、第２扁平培養容器３７の底部３９をスペーサー３４によって持ち上げた状態に保持し、第２扁平培養容器３７の底部３９が上となり第２扁平培養容器３７の頂部４０（注入口）が下となるように、第２扁平培養容器３７を第１の方向へ所定角度α１（２～５°、好ましくは、２～３°）傾斜させた状態で静的に保持する。又は、電子顕微鏡の試料ホルダ３１の上面３２と第２扁平培養容器３７の頂部４０との間にスペーサー３４を介在させ、第２扁平培養容器３７の頂部４０をスペーサー３４によって持ち上げた状態に保持し、第２扁平培養容器３７の頂部４０（注入口）が上となり第２扁平培養容器３７の底部３９が下となるように、第２扁平培養容器３７を第２の方向へ所定角度α１（２～５°、好ましくは、２～３°）傾斜させた状態で静的に保持する。

活性化幹細胞培養工程では、活性化幹細胞１１ｂの定着を確認した後、第２扁平培養容器３７（第２培養容器）から培養液２９と培養生成液１４との混合培養液を排出しつつ、あらたな培養液２９と幹細胞１１から分泌された所定の代謝物質が含まれるあらたな培養生成液１４とを第２扁平培養容器３７に注入することで、その幹細胞１１自体の代謝物質がトリガーとなり、活性化幹細胞１１ｂが速やかに活性を開始し、活性化幹細胞１１ｂの増殖を確実に促進することができる。

活性化幹細胞培養工程において、試料ホルダ３１の上面３２に対して第２扁平培養容器３７を前記傾斜角度α１で傾斜させることで、第２扁平培養容器３７内において活性化幹細胞１１ｂや培養液２９、培養生成液１４が第２扁平培養容器３７の頂部４０の側又は底部３９の側に偏り、第２扁平培養容器３７の頂部４０の側又は底部３９の側において活性化幹細胞１１ｂや培養液２９、培養生成液１４の水圧が大きくなって活性化幹細胞１１ｂが第２扁平培養容器３７の底部３９の側又は頂部４０の側に集中し、それによって活性化幹細胞１１ｂどうしの活性が高まり、第２扁平培養容器３７の底面３８において活性化幹細胞１１ｂを容易かつ迅速に増殖（分化）させることができ、活性化幹細胞１１ｂの一層の活性化を確実に促進させることができる。

電子顕微鏡は、撮影機能によって第２扁平培養容器３７の底面３８に定着した活性化幹細胞１１ｂの平面形状の拡大画像を所定の時間間隔（約１～２時間間隔）で撮影し、撮影した活性化幹細胞１１ｂの平面形状の拡大画像と撮影時間とをディスプレイ３６に出力（表示）する。ディスプレイ３６に表示された活性化幹細胞１１ｂの平面形状の拡大画像を３６～４８時間の間において約１～２時間の間隔で確認（視認）し、第２扁平培養容器３７の底面３８に定着した活性化幹細胞１１ｂの第２扁平培養容器３７の底面面積に対する総平面面積を観察しつつ、活性化幹細胞１１ｂの総平面面積が第２扁平培養容器３７の底面面積に対して第２目標割合（８８～９２％コンフルエント）に達したか否かを判断する。尚、電子顕微鏡の観察窓から活性化幹細胞１１ｂの第２扁平培養容器３７の底面面積に対する総平面面積を３６～４８時間の間において約１～２時間間隔で直接観察し、活性化幹細胞１１ｂの総平面面積が第２扁平培養容器３７の底面面積に対して第２目標割合（８８～９２％コンフルエント）に達したか否かを判断してもよい。

活性化幹細胞培養工程における観察の結果、図１３に示すように、ディスプレイ３６に表示された活性化幹細胞１１ｂの第２扁平培養容器３７の底面面積に対する総平面面積が第２目標割合（８８～９２％コンフルエント）に達していない場合、活性化幹細胞１１ｂの第２扁平培養容器３７の底面面積に対する総平面面積を約１～２時間間隔で継続して観察する。尚、ディスプレイ３６に表示された拡大画像の全面積に対して活性化幹細胞１１ｂの総平面面積が第２目標割合に達した場合に、活性化幹細胞１１ｂの第２扁平培養容器３７の底面面積に対する総平面面積が第２目標割合に達したものとする。

活性化幹細胞培養工程における観察の結果、活性化幹細胞１１ｂが第２扁平培養容器３７の底面３８（底壁内面）において増殖して活性化幹細胞１１ｂがコロニーを形成し、活性化幹細胞１１ｂの平面形状が拡張することで、図１４に示すように、ディスプレイ３６に表示された活性化幹細胞１１ｂの第２扁平培養容器３７の底面面積に対する総平面面積が第２目標割合（８８～９２％コンフルエント）に達した場合、活性化幹細胞１１ｂが十分に増殖かつ活性化し、活性化幹細胞１１ｂが一層活性化している。活性化幹細胞１１ｂの第２扁平培養容器３７の底面面積に対する総平面面積が第２目標割合に達した時点で、第２扁平培養容器３７から活性化幹細胞１１ｂを抽出する。

第２扁平培養容器３７に注入されている混合培養液を注射器又はピペットを利用して第２扁平培養容器３７から排出し、第２扁平培養容器３７内をＰＢＳで洗浄した後、トリプシン液を第２扁平培養容器３７に注入する。第２扁平培養容器３７にトリプシン液を注入すると、第２扁平培養容器３７の底面３８に定着（増殖）した活性化幹細胞１１ｂがトリプシン液によって底面３８から剥離し、トリプシン液の水面に浮上する。ピペットを利用して活性化幹細胞１１ｂを吸引し、活性化幹細胞１１ｂをピペット内に収容する。

活性化幹細胞定着工程及び活性化幹細胞培養工程を実施した後、無菌空気溶存工程及び第１収容工程を実施する。活性化幹細胞定着工程及び活性化幹細胞培養工程を実施した後に実施する無菌空気溶存工程は、休眠幹細胞定着工程及び休眠幹細胞培養工程を実施した後に実施する無菌空気溶存工程と同一である。尚、幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）では、無菌空気溶存工程を省略することができ、その場合、活性化幹細胞培養工程の後に第１収容工程が実施される。

幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）は、無菌空気溶存工程によって培養液２９に無菌空気を溶存させ、無菌空気を溶存させた培養液２９に活性化幹細胞１１ｂを一層活性化させた活性化幹細胞１１ｂを浸漬させた状態で運搬（輸送）するから、培養液２９中において活性化幹細胞１１ｂの生存が確実に維持され、活性化幹細胞１１ｂを一層活性化させた活性化幹細胞１１ｂを出発地点から目的地点まで所定時間をかけて運搬（輸送）したとしても、活性化幹細胞１１ｂの生存率を高い値に保持することができ、活性化幹細胞１１ｂの運搬に長時間を要したとしても、その活性化幹細胞１１ｂを生存させることができる（その活性化幹細胞１１ｂを生存させまま輸送することができる）。

活性化幹細胞定着工程及び活性化幹細胞培養工程を実施した後に実施する第１収容工程は、休眠幹細胞定着工程及び休眠幹細胞培養工程を実施した後に実施する第１収容工程と同一である。細胞収容容器１２の収容スペース１９（上部収容スペース１９ａ）に対する無菌空気の収容割合は、１９～２１％の範囲にあり、細胞収容容器１２の収容スペース１９（中間収容スペース１９ｂ）に対する無菌空気を溶存させた培養液２９の収容割合は、４１～４５％の範囲にある。細胞収容容器１２の収容スペース１９（下部収容スペース１９ｃ）に対する活性化幹細胞１１ｂの収容割合は、３６～３８％の範囲にある。

幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）は、無菌空気の収容スペース１９に対する収容割合が前記範囲にあり、無菌空気を溶存させた培養液２９の収容スペース１９に対する収容割合が前記範囲にあるから、細胞収容容器１２の収容スペース１９において無菌空気が充満し、活性化幹細胞１１ｂを一層活性化させた活性化幹細胞１１ｂの生存が無菌空気の雰囲気によって確実に維持され、活性化幹細胞１１ｂを出発地点から目的地点まで所定時間をかけて運搬（輸送）したとしても、活性化幹細胞１１ｂの生存率を高い値に保持することができ、活性化幹細胞１１ｂの運搬に長時間を要したとしても、活性化幹細胞１１ｂを生存させることができる（活性化幹細胞１１ｂの生存させたまま目的地点に運ぶことができる）。

第１収容工程を実施した後、細胞休眠工程及び第２収容工程を実施する。細胞休眠工程は、休眠幹細胞定着工程や休眠幹細胞培養工程、無菌空気溶存工程、第１収容工程を実施した後に実施する細胞休眠工程と同一である。第２収容工程は、休眠幹細胞定着工程や休眠幹細胞培養工程、無菌空気溶存工程、第１収容工程を実施した後に実施する第２収容工程と同一である。第２収容工程を実施した後、細胞運搬工程を実施する。細胞運搬工程は、休眠幹細胞定着工程や休眠幹細胞培養工程、無菌空気溶存工程、第１収容工程、細胞休眠工程、第２収容工程を実施した後に実施する細胞運搬工程と同一である。

幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）は、活性化幹細胞１１ｂを一層活性化させた活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）と無菌空気を溶存させた培養液２９と無菌空気とを収容した細胞収容容器１２を所定の温度に冷却して活性化幹細胞１１ｂを休眠状態にするとともに、細胞運搬工程において細胞収容容器１２に収容された活性化幹細胞１１ｂを所定温度に冷却した状態で運搬（輸送）することで、活性化幹細胞１１ｂの休眠状態を維持することができ、活性化幹細胞１１ｂの寿命をゆっくりと進めることができ、活性化幹細胞１１ｂを一層活性化させた活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）を出発地点から目的地点まで所定時間をかけて運搬（輸送）したとしても、活性化幹細胞１１ｂの生存率を高い値に保持することができるとともに、活性化幹細胞１１ｂの運搬に長時間を要したとしても、活性化幹細胞１１ｂを生存させることができる（活性化幹細胞１１ｂを生存させまま目的地点に運ぶことができる）。

幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）における活性化幹細胞１１ｂを一層活性化させた活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）の出発地点から目的地点までの運搬時間は、２４～４８時間であり、出発地点からの運搬時間が３６時間経過後における活性化幹細胞１１ｂを一層活性化させた活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）の生存率は、８７～８９％の範囲にある。又、出発地点からの運搬時間が４８時間経過後における活性化幹細胞１１ｂを一層活性化させた活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）の生存率は、７４～７６％の範囲にある。

幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）は、運搬時間が３６時間経過後における活性化幹細胞１１ｂを一層活性化させた活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）の生存率が前記範囲にあり、運搬時間が４８時間経過後における活性化幹細胞１１ｂを一層活性化させた活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）の生存率が前記範囲にあるから、活性化幹細胞１１ｂを一層活性化させた活性化幹細胞１１ｂを出発地点から目的地点まで３６時間から４８時間をかけて運搬（輸送）したとしても、活性化幹細胞１１ｂの生存率を高い値に保持することができ、活性化幹細胞１１ｂの運搬（輸送）に３６時間から４８時間を要したとしても、その活性化幹細胞１１ｂを生存させることができる（その活性化幹細胞１１ｂを生存させまま運ぶことができる）。

保温運搬容器を目的地点（活性化幹細胞の使用場所）まで運搬（輸送）した後（細胞運搬工程を実施した後）、温度戻し工程を実施する。温度戻し工程は、休眠幹細胞定着工程や休眠幹細胞培養工程、無菌空気溶存工程、第１収容工程、細胞休眠工程、第２収容工程、細胞運搬工程を実施した後に実施する温度戻し工程と同一である。

幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）では、保温運搬容器１３の密閉蓋２３を取り外して保温運搬容器１３の頂部開口２２を開放し、保温運搬容器１３の容器収容スペース２４から細胞収容容器１２を取り出し、細胞収容容器１２に収容された活性化幹細胞１１ｂを一層活性化させた活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）を各種の疾患（心血管疾患や中枢神経系疾患等）の治療や再生医療、非治療的用途に利用する。尚、幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）では、温度戻し工程を省くことができ、その場合、細胞収容容器１２に収容された活性化幹細胞１１ｂを一層活性化させた活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）が各種の疾患の治療や再生医療、非治療的用途に利用される。

幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）は、所定温度（２～４℃）に冷却された細胞収容容器１２を所定時間静的に放置して細胞収容容器１２を室温に戻すことで、細胞収容容器１２に収容された休眠状態の活性化幹細胞１１ｂ（活性化幹細胞１１ｂを一層活性化させた休眠状態の活性化幹細胞１１ｂ）を死滅させることなく休眠状態から活動状態に戻すことができ、活動状態に戻した活性化幹細胞１１ｂ（活性化幹細胞１１ｂを一層活性化させた活性化幹細胞１１ｂ）を各種の疾患（心血管疾患や中枢神経系疾患等）に対して有効に利用することができ、活動状態に戻した活性化幹細胞１１ｂを利用することで、再生医療における再生において有効な効果を得ることができる。

幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）は、活性化幹細胞１１ｂを一層活性化させた活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）を細胞収容容器１２の下部収容スペース１９ｃに収容し、無菌空気を溶存させた培養液２９を細胞収容容器１２の中間収容スペース１９ｂに収容するとともに、無菌空気を細胞収容容器１２の上部収容スペース１９ａに収容し、開閉蓋１８によって細胞収容容器１２の頂部開口１７を気密に閉塞（密閉）するとともに、活性化幹細胞１１ｂを一層活性化させた活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）と培養液２９と無菌空気とを収容した細胞収容容器１２の複数個を保温運搬容器１３の容器収容スペース２４に収容しつつ、保冷剤収容スペース２７に保冷剤２６を収容した密閉蓋２３によって保温運搬容器１３の頂部開口２２を気密に閉塞（密閉）し、容器収容スペース２４に収容された複数個の細胞収容容器１２を保冷剤収容スペース２７に収容された保冷剤２６によって所定温度に冷却しつつ、複数個の細胞収容容器１２を収容した保温運搬容器１３を所定の輸送手段によって出発地点から目的地点まで運搬するから、細胞収容容器１２に収容された活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）が所定温度（２～４℃）に冷却され、活性化幹細胞１１ｂ（活性化幹細胞１１ｂを一層活性化させた活性化幹細胞１１ｂ）の休眠状態を維持することができる。

幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）は、活性化幹細胞１１ｂを一層活性化させた活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）の寿命がゆっくりと進み、不要かつ雑多な幹細胞を含まないピュア（純粋）な単一種の活性化幹細胞１１ｂ（間葉系活性化幹細胞）を出発地点から目的地点まで所定時間をかけて運搬（輸送）したとしても、活性化幹細胞１１ｂの生存率を高い値に保持することができ、幹細胞１１ｂの運搬（輸送）に長時間を要したとしても、活性化幹細胞１１ｂを一層活性化させた活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）を生存させたまま目的地点に運ぶことができる。幹細胞運搬方法（幹細胞運搬システム）は、活性化幹細胞１１ｂを一層活性化させた活性化幹細胞１１ｂ（幹細胞１１）を生存させたまま目的地点に運ぶことができるから、生存する活性化幹細胞１１ｂ（活性化幹細胞１１ｂを一層活性化させた活性化幹細胞１１ｂ）を各種の疾患（心血管疾患や中枢神経系疾患等）に対して有効に利用することができ、生存する活性化幹細胞１１ｂを利用することで、再生医療における再生において有効な効果を得ることができる。

図１５は、幹細胞第１定着工程において使用するガラス試験管４１の斜視図であり、図１６は、遠心分離後のガラス試験管４４の斜視図である。運搬（輸送）対象の休眠幹細胞１１ａを培養した活性化幹細胞１１ｂや活性化幹細胞１１ｂを一層活性化させた活性化幹細胞１１ｂの元となる単一種の幹細胞１１は、ドナー（人）から採取した原料骨髄液４２を利用し、幹細胞培養方法によって幹細胞第１定着工程、幹細胞第１培養工程、幹細胞第２定着工程、幹細胞第２培養工程を実施することから作られる。幹細胞培養方法は、原料骨髄液４２に含まれる複数種類の幹細胞（間葉系幹細胞）の中から特定種類の単一種の幹細胞１１を培養する。

幹細胞第１定着工程では、ドナーから採取した原料骨髄液４２を層状に分離させる。骨髄液採取では、それらドナーの胸骨または腸骨（骨盤）から２～３ｃｃ（２～３ｍｌ）の原料骨髄液４２が採取される。ドナーから採取された２～３ｃｃの原料骨髄液４２は、図１５に示すように、上下方向へ延びるガラス試験管４１（分離容器）内に注入（収容）される。なお、２～３ｃｃの原料骨髄液４２には、０．５～１ｍｌ（約５×１０^７（ｃｅｌｌｓ／ｍｌ））の複数種類の幹細胞（間葉系幹細胞）が含まれる。

原料骨髄液４２を注入したガラス試験管４１は、試験管立てにセットされ、試験管立てとともに恒温槽（図示せず）の内部に収容される。試験管立てを恒温槽の内部に収容し、原料骨髄液４２を注入したガラス試験管４１を恒温槽において所定時間（約２時間）静的に放置（動かすことなく静かに放置）する。恒温槽の内部の温度は、体温と略同一の約３６～３７℃に保持されている。ガラス試験管４１を恒温槽に所定時間（約２時間）静的に放置することで、図１５に示すように、試験管４１に注入された原料骨髄液４２が試験管４１内において上下方向へ何層かの層状に分離する（図１５では３層に分離）。

原料骨髄液４２を層状に分離させた後、骨髄液４３の抽出が行われる。骨髄液４３の抽出では、層状に分離した原料骨髄液４２から中間層骨髄液４３を抽出する。恒温槽から試験管立てを取り出し、試験管立てからガラス試験管４１を引き抜き、原料骨髄液４２が層状に分離したことを確認した後、層状に分離した原料骨髄液４２の特定の層に存在する中間層骨髄液４３を抽出する。注射器又はピペットを利用して層状に分離した原料骨髄液４２のうちの中間層に位置する３～４ｍｍの層厚みの中間層骨髄液４３を吸引する。多種雑多な幹細胞（間葉系幹細胞）を含む原料骨髄液４２を上下方向へ層状に分離させた後、原料骨髄液４２から特定の中間層骨髄液４３を抽出することで、原料骨髄液４２に含まれる不要かつ雑多な幹細胞を除去する。

原料骨髄液４２から中間層に位置する特定の中間層骨髄液４３を抽出した後、注射器又はピペットを利用して中間層骨髄液４３及び培養液２９を第３扁平培養容器（第３培養容器）に注入（収容）し、第３扁平培養容器を体温と略同一の温度（約３６～３７℃）に保持しつつ、１２～２４時間静的に放置（動かすことなく静かに放置）し、１２～２４時間の間において約１～２時間の間隔で第３扁平培養容器内の中間層骨髄液４３に含まれる幹細胞１１の初期平面形状からの変形を電子顕微鏡で観察し、幹細胞１１が第３扁平培養容器の底面に定着したか否かを判断する。

幹細胞第１定着工程や幹細胞第１培養工程で使用される第３扁平培養容器は、休眠幹細胞定着工程や休眠幹細胞培養工程に使用された第１扁平培養容器１０（第１培養容器）と同一（同形同大）である（図１参照）。第３扁平培養容器は、その容量が約２０～３０ｃｃ（好ましくは、２５ｃｃ）であり、その底面面積が約２５～３６ｍｍ^２である。第３扁平培養容器は、その一辺の長さが５～６ｍｍである。

第３扁平培養容器を電子顕微鏡の試料ホルダ３１に設置（セット）する。電子顕微鏡の試料ホルダ３１の上面３２と第３扁平培養容器の底部との間にスペーサーを介在させ、第３扁平培養容器の底部をスペーサーによって持ち上げた状態に保持し、第３扁平培養容器の底部が上となり第３扁平培養容器の頂部（注入口）が下となるように、第３扁平培養容器を第１の方向へ所定角度α１（２～５°、好ましくは、２～３°）傾斜させた状態で１２～２４時間静的に保持する（図２参照）。

次に、電子顕微鏡の試料ホルダ３１の上面３２と第３扁平培養容器の頂部との間にスペーサーを介在させ、第３扁平培養容器の頂部をスペーサーによって持ち上げた状態に保持し、第３扁平培養容器の頂部（注入口）が上となり第３扁平培養容器の底部が下となるように、第３扁平培養容器を第１の方向と逆方向の第２の方向へ所定角度α１（２～５°、好ましくは、２～３°）傾斜させた状態で１２～２４時間静的に保持する（図３参照）。

第３扁平培養容器に収容された幹細胞１１は、時間の経過とともに第３扁平培養容器の底面に定着しつつ、培養液２９によって培養され、第３扁平培養容器の底面において次第に増殖（分化）してコロニーを形成する。試料ホルダ３１の上面３２に対して第３扁平培養容器を第１の方向及び第２の方向へ前記傾斜角度α１で傾斜させることで、第３扁平培養容器内において幹細胞１１や培養液２９が第３扁平培養容器の頂部の側又は底部の側に偏り、第３扁平培養容器の頂部の側又は底部の側において幹細胞１１や培養液２９の水圧が大きくなって幹細胞１１が第３扁平培養容器の頂部の側又は底部の側に集中し、それによって幹細胞１１どうしの活性が高まり、第３扁平培養容器の底面において幹細胞１１を容易かつ迅速に定着させることができる。

電子顕微鏡は、撮影機能によって第３扁平培養容器に注入された幹細胞１１の平面形状の拡大画像を所定の時間間隔（約１～２時間間隔）で撮影し、撮影した幹細胞１１の平面形状の拡大画像と撮影時間とをディスプレイ３６に出力（表示）する。ディスプレイ３６に表示された幹細胞１１の平面形状の拡大画像を１２～２４時間の間において約１～２時間の間隔で確認（視認）し、幹細胞１１の平面形状の変化を観察する。

幹細胞１１の初期平面形状（定着前の平面形状）は略円形であり、幹細胞１１の平面形状が略円形の場合、幹細胞１１が第３扁平培養容器の底面（底壁内面）に定着しておらず、幹細胞１１が増殖（分化）を開始していない。幹細胞１１の変形後の平面形状（定着後の平面形状）は定着前の略円形を核として幹細胞１１が一方向（所定方向）へ不定形に伸張（拡張）した扁平形状であり、幹細胞１１が第３扁平培養容器の底面（底壁内面）に定着し、幹細胞１１が増殖（活性化）を開始している。

幹細胞第１定着工程における観察の結果、ディスプレイ３６に出力（表示）された幹細胞１１の平面形状の拡大画像が略円形のまま観察される場合（図４参照）、幹細胞１１が第３扁平培養容器の底面（底壁内面）に定着していないと判断し、幹細胞１１の平面形状の変化を約１～２時間の間隔で継続して観察する。ディスプレイ３６に出力（表示）された幹細胞１１の平面形状が略円形から略円形を核として不定形の扁平形状に変形した場合（図５参照）、幹細胞１１が第３扁平培養容器の底面に定着したと判断する。

幹細胞第１定着工程における観察の結果、幹細胞１１が略円形（初期平面形状）から略円形を核として不定形の扁平形状に変形し（図５参照）、幹細胞１１の第３扁平培養容器の底面への定着を確認した後、幹細胞第１培養工程が行われる。幹細胞第１培養工程では、幹細胞１１を増殖かつ活性化させ、幹細胞１１を培養する。幹細胞第１培養工程では、第３扁平培養容器を電子顕微鏡の試料ホルダ３１から取り外し、幹細胞第１定着工程において第３扁平培養容器に注入した培養液２９を注射器又はピペットを利用して第３扁平培養容器から排出し、注射器又はピペットを利用してあらたな培養液２９を第３扁平培養容器に注入（収容）する。

幹細胞第１培養工程では、あらたな培養液２９を第３扁平培養容器に注入した後、その第３扁平培養容器を２～５°の傾斜角度α１（好ましくは、２～３°の傾斜角度α１）で傾斜させた状態で第３扁平培養容器を体温と略同一の温度（約３６～３７℃）に保持し、第３扁平培養容器を３６～４８時間静的に放置（動かすことなく静かに放置）しつつ、３６～４８時間の間において約１～２時間の間隔で第３扁平培養容器の底面に定着した幹細胞１１の第３扁平培養容器の底面面積に対する総平面面積を観察し、第３扁平培養容器の底面面積に対する幹細胞の総平面面積が第３目標割合に達したか否かを判断する。第３扁平培養容器の底面面積に対する幹細胞１１の総平面面積の第３目標割合は、７０～８０％（７０～８０％％コンフルエント）である。

あらたな培養液２９を第３扁平培養容器に注入した後、その第３扁平培養容器を電子顕微鏡の試料ホルダ３１に設置（セット）する。電子顕微鏡の試料ホルダ３１の上面３２と第３扁平培養容器の底部との間にスペーサーを介在させ、第３扁平培養容器の底部をスペーサーによって持ち上げた状態に保持し、第３扁平培養容器の底部が上となり第３扁平培養容器の頂部（注入口）が下となるように、第３扁平培養容器を第１の方向へ所定角度α１（２～５°、好ましくは、２～３°）傾斜させた状態で静的に保持する。又は、電子顕微鏡の試料ホルダ３１の上面３２と第３扁平培養容器の頂部との間にスペーサーを介在させ、第３扁平培養容器の頂部をスペーサーによって持ち上げた状態に保持し、第３扁平培養容器の頂部（注入口）が上となり第３扁平培養容器の底部が下となるように、第３扁平培養容器を第２の方向へ所定角度α１（２～５°、好ましくは、２～３°）傾斜させた状態で静的に保持する。

ディスプレイ３６に表示された幹細胞１１の平面形状の拡大画像を３６～４８時間の間において約１～２時間の間隔で確認（視認）し、第３扁平培養容器の底面に定着した幹細胞１１の第３扁平培養容器の底面面積に対する総平面面積を観察しつつ、幹細胞１１の総平面面積が第３扁平培養容器の底面面積に対して第３目標割合（７０～８０％コンフルエント）に達したか否かを判断する。

休眠幹細胞培養工程における観察の結果、ディスプレイ３６に表示された幹細胞１１の第３扁平培養容器の底面面積に対する総平面面積が第３目標割合（７０～８０％コンフルエント）に達していない場合（図５参照）、幹細胞１１の第３扁平培養容器の底面面積に対する総平面面積を約１～２時間間隔で継続して観察する。尚、ディスプレイ３６に表示された拡大画像の全面積に対して幹細胞の１１総平面面積が第３目標割合に達した場合に、幹細胞１１の第３扁平培養容器の底面面積に対する総平面面積が第３目標割合に達したものとする。

幹細胞第１培養工程における観察の結果、幹細胞１１が第３扁平培養容器の底面（底壁内面）において増殖して幹細胞１１がコロニーを形成し、幹細胞１１の平面形状が拡張することで、ディスプレイ３６に表示された幹細胞１１の第３扁平培養容器の底面面積に対する総平面面積が第３目標割合（７０～８０％コンフルエント）に達した場合（図６参照）、幹細胞１１が十分に増殖かつ活性化している。幹細胞１１の第３扁平培養容器の底面面積に対する総平面面積が第３目標割合に達した時点で、第３扁平培養容器から幹細胞１１を抽出する。

第３扁平培養容器に注入されている培養液２９を注射器又はピペットを利用して第３扁平培養容器から排出し、第３扁平培養容器内をＰＢＳで洗浄した後、トリプシン液を第３扁平培養容器に注入する。第３扁平培養容器にトリプシン液を注入すると、第３扁平培養容器の底面に定着（増殖）した幹細胞１１がトリプシン液によって底面から剥離し、トリプシン液の水面に浮上する。ピペットを利用して幹細胞１１を吸引し、幹細胞１１をピペット内に収容する。

第３扁平培養容器から幹細胞１１を抽出した後、幹細胞第２定着工程が行われる。幹細胞第２定着工程では、抽出された幹細胞１１を遠心分離器（図示せず）によって層状に遠心分離する。幹細胞１１を第３扁平培養容器からピペットに吸引した後、ピペット内の幹細胞１１をガラス試験管４４に注入（収容）し、ガラス試験管４４を遠心分離器に設置（セット）する。幹細胞１１を遠心分離器によって所定時間遠心分離した後、ガラス試験管４４を遠心分離器から取り出す。ガラス試験管４４内の幹細胞１１は、遠心分離器によって上下方向へ何層かの層状に分離する。

遠心分離器によって幹細胞１１を上下方向へ層状に分離させた後、ガラス試験管４４を遠心分離器から取り出し、層状に分離した幹細胞１１から最下層に位置する幹細胞１１を抽出する。不要かつ雑多な幹細胞１１を含む幹細胞１１を遠心分離器で遠心分離して上下方向へ層状に分離させ、層状に遠心分離した幹細胞１１のうちの最下層に位置する幹細胞１１を抽出することで、幹細胞１１から特定（単一）の幹細胞１１を確実に抽出することができ、幹細胞１１から不要かつ雑多な幹細胞１１を除去することができる。

幹細胞第２定着工程や幹細胞第２培養工程で使用される第４扁平培養容器は、活性化幹細胞定着工程や活性化幹細胞培養工程に使用された第２扁平培養容器３７（第２培養容器）と同一（同形同大）である（図９参照）。第４扁平培養容器は、その容量が約４０～６０ｃｃ（好ましくは、５０ｃｃ）であり、その底面面積が約５０～７２ｍｍ^２である。第４扁平培養容器は、その一辺の長さが約７～８．５ｍｍである。

ガラス試験管４４において層状に分離した幹細胞１１のうちの最下層に存在する幹細胞１１を注射器又はピペットを利用して抽出した後、その幹細胞１１及び培養液２９を第４扁平培養容器（第４培養容器）に注入（収容）し、その第４扁平培養容器を２～５°の傾斜角度α１（好ましくは、２～３°の傾斜角度α１）で第１の方向へ傾斜させた状態で第４扁平培養容器を体温と略同一の温度（約３６～３７℃）に保持し、１２～２４時間静的に放置（動かすことなく静かに放置）する（図１０参照）。その後、第４扁平培養容器を２～５°の傾斜角度α１（好ましくは、２～３°の傾斜角度α１）で第１の方向とは逆方向の第２の方向へ傾斜させた状態で第４扁平培養容器を体温と略同一の温度（約３６～３７℃）に保持し（図１１参照）、１２～２４時間静的に放置しつつ、１２～２４時間の間において約１～２時間の間隔で第４扁平培養容器内の幹細胞１１の初期平面形状からの変形を電子顕微鏡で観察し、幹細胞１１が第４扁平培養容器の底面に定着したか否かを判断する。

幹細胞１１と培養液２９とを第４扁平培養容器に注入した後、その第４扁平培養容器を電子顕微鏡（図示せず）の試料ホルダ３１に設置（セット）する。電子顕微鏡の試料ホルダ３１の上面３２と第４扁平培養容器の底部との間にスペーサーを介在させ、第４扁平培養容器の底部をスペーサーによって持ち上げた状態に保持し、第４扁平培養容器の底部が上となり第４扁平培養容器の頂部（注入口）が下となるように、第４扁平培養容器を第１の方向へ所定角度α１（２～５°、好ましくは、２～３°）傾斜させた状態で１２～２４時間静的に保持する。

次に、電子顕微鏡の試料ホルダ３１の上面３２と第４扁平培養容器の頂部との間にスペーサーを介在させ、第４扁平培養容器の頂部をスペーサーによって持ち上げた状態に保持し、第４扁平培養容器の頂部（注入口）が上となり第４扁平培養容器の底部が下となるように、第４扁平培養容器を第１の方向と逆方向の第２の方向へ所定角度α１（２～５°、好ましくは、２～３°）傾斜させた状態で１２～２４時間静的に保持する。

第４扁平培養容器に収容された幹細胞１１は、時間の経過とともに第４扁平培養容器の底面に定着しつつ、培養液２９によって培養され、第４扁平培養容器の底面において次第に増殖（分化）してコロニーを形成する。幹細胞第２定着工程において、試料ホルダ３１の上面３２に対して第４扁平培養容器を第１の方向及び第２の方向へ前記傾斜角度α１で傾斜させることで、第４扁平培養容器内において幹細胞１１や培養液２９が第４扁平培養容器の頂部の側又は底部の側に偏り、第４扁平培養容器の頂部の側又は底部の側において幹細胞１１や培養液２９の水圧が大きくなって幹細胞１１が第４扁平培養容器の頂部の側又は底部の側に集中し、それによって幹細胞１１どうしの活性が高まり、第４扁平培養容器の底面において幹細胞１１を容易かつ迅速に定着させることができる。

ディスプレイ３６に表示された幹細胞１１の平面形状の拡大画像を１２～２４時間の間において約１～２時間の間隔で確認（視認）し、幹細胞１１の平面形状の変化を観察する。幹細胞１１の初期平面形状（定着前の平面形状）は略円形であり、幹細胞１１の平面形状が略円形の場合、幹細胞１１が第４扁平培養容器の底面（底壁内面）に定着しておらず、幹細胞１１が増殖（分化）を開始していない。幹細胞１１の変形後の平面形状（定着後の平面形状）は定着前の略円形を核として幹細胞１１が一方向（所定方向）へ不定形に伸張（拡張）した扁平形状であり、幹細胞１１が第４扁平培養容器の底面（底壁内面）に定着し、幹細胞１１が増殖（活性化）を開始している。

幹細胞第２定着工程における観察の結果、ディスプレイ３６に出力（表示）された幹細胞１１の平面形状の拡大画像が略円形のまま観察される場合（図１２参照）、幹細胞１１が第４扁平培養容器の底面（底壁内面）に定着していないと判断し、幹細胞１１の平面形状の変化を約１～２時間の間隔で継続して観察する。ディスプレイ３６に出力（表示）された幹細胞１１の平面形状が略円形から略円形を核として不定形の扁平形状に変形した場合（図１３参照）、幹細胞１１が第４扁平培養容器の底面に定着したと判断する。

幹細胞第２定着工程における観察の結果、幹細胞１１が略円形（初期平面形状）から略円形を核として不定形の扁平形状に変形し、幹細胞１１の第４扁平培養容器の底面への定着を確認した後、幹細胞第２培養工程が行われる。幹細胞第２培養工程では、幹細胞１１を増殖かつ活性化させる。幹細胞第２培養工程では、第４扁平培養容器を電子顕微鏡の試料ホルダ３１から取り外し、幹細胞第２定着工程において第４扁平培養容器に注入した培養液２９を注射器又はピペットを利用して第４扁平培養容器から排出し、注射器又はピペットを利用してあらたな培養液２９を第４扁平培養容器に注入（収容）する。

幹細胞第２培養工程では、あらたな培養液２９を第４扁平培養容器に注入した後、その第４扁平培養容器を２～５°の傾斜角度α１（好ましくは、２～３°の傾斜角度α１）で傾斜させた状態で第４扁平培養容器を体温と略同一の温度（約３６～３７℃）に保持し、第４扁平培養容器を３６～４８時間静的に放置（動かすことなく静かに放置）しつつ、３６～４８時間の間において約１～２時間の間隔で第４扁平培養容器の底面に定着した幹細胞１１の第４扁平培養容器の底面面積に対する総平面面積を観察し、第４扁平培養容器の底面面積に対する幹細胞１１の総平面面積が第４目標割合に達したか否かを判断する。第４扁平培養容器の底面面積に対する幹細胞１１の総平面面積の第４目標割合は、８８～９２％（８８～９２％コンフルエント）である。

あらたな培養液２９を第４扁平培養容器に注入した後、その第４扁平培養容器を電子顕微鏡の試料ホルダ３１に設置（セット）する。電子顕微鏡の試料ホルダ３１の上面３２と第４扁平培養容器の底部との間にスペーサーを介在させ、第４扁平培養容器の底部をスペーサーによって持ち上げた状態に保持し、第４扁平培養容器の底部が上となり第４扁平培養容器の頂部（注入口）が下となるように、第４扁平培養容器を第１の方向へ所定角度α１（２～５°、好ましくは、２～３°）傾斜させた状態で静的に保持する。又は、電子顕微鏡の試料ホルダ３１の上面３２と第４扁平培養容器の頂部との間にスペーサーを介在させ、第４扁平培養容器の頂部をスペーサーによって持ち上げた状態に保持し、第４扁平培養容器の頂部（注入口）が上となり第４扁平培養容器の底部が下となるように、第４扁平培養容器を第２の方向へ所定角度α１（２～５°、好ましくは、２～３°）傾斜させた状態で静的に保持する。ディスプレイ３６に表示された幹細胞１１の平面形状の拡大画像を３６～４８時間の間において約１～２時間の間隔で確認（視認）し、第４扁平培養容器の底面に定着した幹細胞１１の第４扁平培養容器の底面面積に対する総平面面積を観察しつつ、幹細胞１１の総平面面積が第４扁平培養容器の底面面積に対して第４目標割合（８８～９２％コンフルエント）に達したか否かを判断する。

活性化幹細胞培養工程における観察の結果、ディスプレイ３６に表示された幹細胞１１の第４扁平培養容器の底面面積に対する総平面面積が第４目標割合（８８～９２％コンフルエント）に達していない場合（図１３参照）、幹細胞１１の第４扁平培養容器の底面面積に対する総平面面積を約１～２時間間隔で継続して観察する。尚、ディスプレイ３６に表示された拡大画像の全面積に対して幹細胞１１の総平面面積が第４目標割合に達した場合に、幹細胞１１の第４扁平培養容器の底面面積に対する総平面面積が第４目標割合に達したものとする。

幹細胞第２培養工程における観察の結果、幹細胞１１が第４扁平培養容器の底面（底壁内面）において増殖して幹細胞１１がコロニーを形成し、幹細胞１１の平面形状が拡張することで、ディスプレイ３６に表示された幹細胞１１の第４扁平培養容器の底面面積に対する総平面面積が第４目標割合（８８～９２％コンフルエント）に達した場合（図１４参照）、幹細胞１１が十分に増殖かつ活性化している。幹細胞１１の第４扁平培養容器の底面面積に対する総平面面積が第４目標割合に達した時点で、第４扁平培養容器から増殖（分化）した単一種の幹細胞１１を抽出する。尚、第４扁平培養容器に収容された（残存する）培養液２９には単一種の幹細胞１１（間葉系幹細胞）の培養過程（増殖過程）においてその幹細胞１１から分泌された所定の代謝物質が含まれ、第４扁平培養容器に残存する培養液２９が培養生成液１４になっている。

幹細胞１１の第４扁平培養容器の底面面積に対する総平面面積が第４目標割合に達したことを確認した後、ピペットを利用して第４扁平培養容器に注入されている培養生成液１４（培養液２９）を第４扁平培養容器から吸引し、培養生成液１４をピペット内に収容する。次に、第４扁平培養容器内をＰＢＳで洗浄した後、トリプシン液を第４扁平培養容器内に注入する。第４扁平培養容器にトリプシン液を注入すると、第４扁平培養容器の底面に定着した幹細胞１１がトリプシン液によって底面から剥離し、トリプシン液の水面に浮上する。ピペットを利用して幹細胞１１を吸引し、幹細胞１１をピペット内に収容する。

培養生成液１４と幹細胞１１とを抽出した後、幹細胞収容アンプル（幹細胞収容容器）と生成液収容アンプル（生成液収容容器）とを用意し、幹細胞１１をピペットから幹細胞収容アンプルに注入（収容）する。幹細胞収容アンプルに注入された単一種の幹細胞１１は、不要かつ雑多な幹細胞が除去された活性を有する培養対象の特定種類の単一種の幹細胞１１（間葉系幹細胞）である。幹細胞１１（単一種の間葉系幹細胞）をピペットから幹細胞収容アンプルに注入した後、その幹細胞収容アンプルを冷蔵庫又は冷凍庫に収納する。単一種の幹細胞１１（間葉系幹細胞）は、幹細胞収容アンプルに収容された状態で冷蔵庫又は冷凍庫において所定期間、所定温度（２～４℃）で保存される。

培養生成液１４をピペットから生成液収容アンプルに注入（収容）する。生成液収容アンプルに注入された培養生成液１４は、不要かつ雑多な幹細胞が除去された活性を有する培養対象の特定種類の単一の幹細胞１１（間葉系幹細胞）から分泌された所定の代謝物質を含んでいる。培養生成液１４をピペットから生成液収容アンプルに注入した後、その生成液収容アンプルを冷蔵庫又は冷凍庫に収納する。培養生成液１４は、生成液収容アンプルに収容された状態で冷蔵庫又は冷凍庫において所定期間、所定温度（２～４℃）で保存される。

１０ 第１扁平培養容器（第１培養容器）
１１ 幹細胞
１１ａ 休眠幹細胞
１１ｂ 活性化幹細胞
１２ 細胞収容容器
１３ 保温運搬容器
１４ 培養生成液
１５ 底壁
１６ 周壁
１７ 頂部開口
１８ 開閉蓋
１９ スペース
１９ａ 上部収容スペース
１９ｂ 中間収容スペース
１９ｃ 下部収容スペース
２０ 底壁
２１ 頂壁
２２ 頂部開口
２３ 密閉蓋
２４ 容器収容スペース
２５ 真空断熱層
２６ 保冷剤
２７ 保冷剤収容スペース
２８ 旋回蓋
２９ 培養液
３０ 底面
３１ 資料ホルダ
３２ 上面
３３ 底部
３４ スペーサー
３５ 頂部
３６ ディスプレイ
３７ 第２扁平培養容器（第２培養容器）
３８ 底面
３９ 底部
４０ 頂部
４１ ガラス試験管
４２ 原料骨髄液
４３ 骨髄液
４４ ガラス試験管

Claims (12)

1. ドナーから採取した骨髄液を培養することから作られた幹細胞を出発地点から目的地点まで所定時間をかけて運搬する幹細胞運搬方法において、
   前記幹細胞運搬方法は、前記幹細胞を収容する収容スペース及び頂部開口を気密に閉塞する開閉蓋とを有する所定容積の細胞収容容器と、複数個の前記細胞収容容器を収容する所定容積の容器収容スペースを有して該容器収容スペースを所定の低温に保持する保温運搬容器とを利用し、前記細胞収容容器の収容スペースが、該細胞収容容器の頂部開口から底壁に向かって上下方向へ三分されて上部収容スペースと中間収容スペースと下部収容スペースとに区分され、前記保温運搬容器が、密閉蓋と、真空断熱層を有して前記容器収容スペースを囲繞する周壁及び底壁と、前記容器収容スペースを冷却する保冷剤を収容する保冷剤収容スペースとを備え、
   前記幹細胞運搬方法が、前記幹細胞を前記細胞収容容器の下部収容スペースに収容し、無菌空気を溶存させた培養液を前記細胞収容容器の中間収容スペースに収容するとともに、前記無菌空気を前記細胞収容容器の上部収容スペースに収容し、前記開閉蓋によって前記細胞収容容器の頂部開口を気密に閉塞する第１収容工程と、前記第１収容工程によって前記幹細胞と前記培養液と前記無菌空気とを収容した細胞収容容器の複数個を前記保温運搬容器の容器収容スペースに収容し、前記保冷剤収容スペースに保冷剤を収容しつつ、前記密閉蓋によって前記保温運搬容器を気密に閉塞する第２収容工程と、前記第２収容工程によって前記容器収容スペースに収容された前記複数個の細胞収容容器を前記保冷剤収容スペースに収容された保冷剤によって所定温度に冷却しつつ、該複数個の細胞収容容器を収容した前記保温運搬容器を所定の輸送手段によって前記出発地点から前記目的地点まで運搬する細胞運搬工程とを有することを特徴とする幹細胞運搬方法。
2. 前記幹細胞運搬方法が、前記第１収容工程によって前記幹細胞と前記培養液と前記無菌空気とを収容した細胞収容容器の頂部開口を前記開閉蓋によって気密に閉塞した後、前記細胞収容容器を所定の温度に冷却し、前記下部収容スペースに収容された前記幹細胞を休眠状態にする細胞休眠工程を含む請求項１に記載の幹細胞運搬方法。
3. 前記幹細胞運搬方法が、前記細胞収容容器の中間収容スペースに収容する培養液に無菌空気を溶存させる無菌空気溶存工程を含む請求項１又は請求項２に記載の幹細胞運搬方法。
4. 前記幹細胞運搬方法が、前記運搬工程によって前記目的地点に運搬された前記保温運搬容器の保冷剤収容スペースから前記保冷剤を取り外し、該保温運搬容器に収容された複数個の細胞収容容器を所定時間静的に放置して該細胞収容容器を室温に戻す温度戻し工程を含む請求項１ないし請求項３いずれかに記載の幹細胞運搬方法。
5. 前記細胞収容容器では、該細胞収容容器の上部収容スペースが収容スペースの１９～２１％を占め、該細胞収容容器の中間収容スペースが収容スペースの４１～４５％を占めるとともに、該細胞収容容器の下部収容スペースが収容スペースの３６～３８％を占め、前記細胞収容容器の収容スペースに対する前記無菌空気の収容割合が１９～２１％の範囲、前記細胞収容容器の収容スペースに対する前記無菌空気を溶存させた培養液の収容割合が４１～４５％の範囲にあり、前記細胞収容容器の収容スペースに対する前記幹細胞の収容割合が３６～３８％の範囲にある請求項１ないし請求項４いずれかに記載の幹細胞運搬方法。
6. 前記保温運搬容器では、前記保冷剤によって該保温運搬容器の容器収容スペースの温度が２～４℃の範囲に保持される請求項１ないし請求項５いずれかに記載の幹細胞運搬方法。
7. 前記幹細胞の出発地点から目的地点までの運搬時間が、２４～４８時間であり、前記出発地点からの運搬時間が３６時間経過後における前記幹細胞の生存率が、８７～８９％の範囲にあり、前記出発地点からの運搬時間が４８時間経過後における前記幹細胞の生存率が、７４～７６％の範囲にある請求項１ないし請求項６いずれかに記載の幹細胞運搬方法。
8. 前記幹細胞が、前記幹細胞を所定期間保存した後の休眠状態にある休眠幹細胞を活性化させた活性化幹細胞であり、前記幹細胞運搬方法が、前記活性化幹細胞を前記細胞収容容器に収容する前に、前記休眠幹細胞を活性化させて前記活性化幹細胞を作る幹細胞活性化手段を含み、前記幹細胞活性化手段が、前記休眠幹細胞と所定の培養液と該休眠幹細胞の保存前の前記幹細胞の培養過程において生成された培養生成液とを所定容量かつ所定面積の底面を有する第１培養容器に注入し、前記休眠幹細胞を前記第１培養容器の底面に定着させる休眠幹細胞定着工程と、前記休眠幹細胞定着工程によって前記第１培養容器の底面に定着させた前記休眠幹細胞を培養し、前記第１培養容器の底面面積に対する前記休眠幹細胞の総平面面積が第１目標割合に達するまで該休眠幹細胞を増殖かつ活性化させ、前記休眠幹細胞を前記活性化幹細胞に変質させる休眠幹細胞培養工程とを有し、前記休眠幹細胞定着工程では、前記第１培養容器を２～５°の傾斜角度で第１の方向へ傾斜させた状態で該第１培養容器を体温と略同一の温度で１２～２４時間静的に放置した後、前記第１培養容器を２～５°の傾斜角度で前記第１の方向とは逆方向の第２の方向へ傾斜させた状態で該第１培養容器を体温と略同一の温度で１２～２４時間静的に放置しつつ、前記第２の方向へ傾斜させた第１培養容器内の休眠幹細胞の初期平面形状からの変形を前記１２～２４時間の間において約１～２時間の間隔で観察し、前記休眠幹細胞が初期平面形状から所定の平面形状に変形した場合、該休眠幹細胞が前記第１培養容器の底面に定着したと判断し、前記休眠幹細胞培養工程では、前記第１培養容器を２～５°の傾斜角度で傾斜させた状態で該第１培養容器を体温と略同一の温度で静的に放置しつつ、前記第１培養容器の底面面積に対する前記休眠幹細胞の総平面面積が第１目標割合に達したかを判断する請求項１ないし請求項７いずれかに記載の幹細胞運搬方法。
9. 前記第１培養容器の底面面積に対する前記休眠幹細胞の総平面面積の第１目標割合が、７０～８０％であり、前記休眠幹細胞培養工程では、前記休眠幹細胞定着工程によって前記休眠幹細胞を前記第１培養容器の底面に定着させた後、前記培養液と前記培養生成液との混合培養液を前記第１培養容器から排出しつつ、あらたな培養液とあらたな培養生成液とを該第１培養容器に注入し、前記第１培養容器の底面に定着させた前記休眠幹細胞をあらたな培養液とあらたな培養生成液とのあらたな混合培養液を利用して活性化させる請求項８に記載の幹細胞運搬方法。
10. 前記幹細胞活性化手段が、前記第１培養容器の底面面積に対する前記休眠幹細胞の総平面面積が前記第１目標割合に達した時点で該第１培養容器から該活性化幹細胞を抽出し、抽出した前記活性化幹細胞とあらたな前記培養液とあらたな前記培養生成液とを所定容量かつ所定面積の底面を有して前記第１培養容器よりも大きい容量の第２培養容器に注入し、前記活性化幹細胞を前記第２培養容器の底面に定着させる活性化幹細胞定着工程と、前記活性化幹細胞定着工程によって前記第２培養容器の底面に定着させた前記活性化幹細胞を培養し、前記第２培養容器の底面面積に対する前記活性化幹細胞の総平面面積が第２目標割合に達するまで該活性化幹細胞を増殖かつ活性化させる活性化幹細胞培養工程とを含み、前記活性化幹細胞定着工程では、前記第２培養容器を２～５°の傾斜角度で第１の方向へ傾斜させた状態で該第２培養容器を体温と略同一の温度で１２～２４時間静的に放置した後、前記第２培養容器を２～５°の傾斜角度で前記第１の方向とは逆方向の第２の方向へ傾斜させた状態で該第２培養容器を体温と略同一の温度で１２～２４時間静的に放置しつつ、前記第２の方向へ傾斜させた第２培養容器内の活性化幹細胞の初期平面形状からの変形を前記１２～２４時間の間において約１～２時間の間隔で観察し、前記活性化幹細胞が初期平面形状から所定の平面形状に変形した場合、該活性化幹細胞が前記第２培養容器の底面に定着したと判断し、前記活性化幹細胞培養工程では、前記第２培養容器を２～５°の傾斜角度で傾斜させた状態で該第２培養容器を体温と略同一の温度で静的に放置し、前記第２培養容器の底面面積に対する前記活性化幹細胞の総平面面積が第２目標割合に達したかを判断する請求項８又は請求項９に記載の幹細胞運搬方法。
11. 前記第２培養容器の底面面積に対する前記活性化幹細胞の総平面面積の第２目標割合が、８８～９２％であり、前記活性化幹細胞培養工程では、前記活性化幹細胞定着工程によって前記活性化幹細胞を前記第２培養容器の底面に定着させた後、前記培養液と前記培養生成液との混合培養液を前記第２培養容器から排出しつつ、あらたな培養液とあらたな培養生成液とを該第２培養容器に注入し、前記第２培養容器の底面に定着させた前記活性化幹細胞をあらたな培養液とあらたな培養生成液とのあらたな混合培養液を利用して活性化させる請求項１０に記載の幹細胞運搬方法。
12. 前記培養生成液が、前記幹細胞の培養過程において該幹細胞から分泌された所定の代謝物質を含む請求項８ないし請求項１１いずれかに記載の幹細胞運搬方法。

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