JP7291250B2 - ヒトタウを標的とする化合物および方法 - Google Patents

Description

本発明は、医薬の分野に属する。より特定すると、本発明は、ヒトタウに対する抗体またはそのフラグメントを含む化合物、医薬組成物、診断法および方法に関する。本発明の化合物および方法は、神経変性疾患、特に、アルツハイマー病（ＡＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）および前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）などを含むタウオパチーの分野において有用であることが予想され、その治療およびそれに関連する診断法を含む。

タウは、中枢神経系（「ＣＮＳ」）および末梢の両方で発現される、軸索微小管結合タンパク質であり、これは、微小管のアセンブリおよび安定性を促進する。ＣＮＳにおいて発現されるヒトタウの既知のアイソフォームは、ニューロン内神経原線維変化（「ＮＦＴ」）の異常な形成および凝集に関与する。ＡＤなどの神経変性疾患において、ＣＮＳ ＮＦＴの密度および神経解剖学的局在は、認知症の重篤度、ニューロン欠損の程度、および全体的な疾患進行と相関する。ＰＳＰにおいて、また、ＣＮＳ ＮＦＴ形成が見られ、その密度もニューロン欠損の重篤度と相関する。

ＡＤは、認知症によって特徴付けられる神経変性疾患であり、記憶、思考および行動についての問題を引き起こす。アルツハイマー病協会によれば、ＡＤを有する推定５６０万人の６５歳以上のアメリカ人（すなわち、およそ１０人に１人）、およびさらに２０万人のＡＤを有する６５歳未満のアメリカ人が存在する。アルツハイマー病協会はまた、ＡＤを有する６５歳以上のアメリカ人の数が２０２５年までに２６％を超えて増加するとの予想を示している。このことは重大な医療支出を表しており、２０１９年のみで、直接的なＡＤ関連医療費は、米国において２９００億ドルに達すると推定されており、この数字には未払いの介護者の費用は含まれていない。ＡＤの個人およびヘルスケアへの重大な影響にもかかわらず、今日までに、ＡＤの治療のために承認された疾患修飾治療法は存在せず、そのような治療は満たされていない医療ニーズのままである。

さらに、疾患修飾治療の発見および／または開発を支援するために、ＡＤのための信頼性の高い高感度の診断法が必要とされている。ＡＤのために承認された診断適用は、Ａｍｙｖｉｄ（登録商標）である。ｆｌｏｕｒｔａｕｃｉｐｉｒは、現在ＦＤＡ審査中のＡＤのための診断適用である。Ａｍｙｖｉｄ（登録商標）およびｆｌｏｒｔａｕｃｉｐｉｒの両方は、ＡＤおよび他の神経変性疾患の検出およびステージ分類において有用な放射性同位体神経学的イメージング剤である。さらに、患者サンプルにおけるヒトタウの残基１８１（配列番号１に基づく残基番号）におけるリン酸化スレオニン（「ｈＴａｕ－ｐＴ１８１」）を標的とする診断アッセイが最近開示された。しかしながら、ｈＴａｕ－ｐＴ１８１診断適用は、血液、血漿および脳脊髄液（「ＣＳＦ」）アッセイにおける、患者の様々なＡＤステージまたは患者の予後の特定などの、診断試験のために必要な感度を欠いている。したがって、血液、血漿および／またはＣＳＦを用いた試験に適用可能な、より安価でかつより侵襲性の低い診断オプションを提供し、また、高感度で信頼性の高い診断法が必要とされている。Ｈ好ましくは、そのような診断法は、ＡＤ患者間の特定および／または区別をすることができる（例えば、ＡＤのステージまたは予後に基づいて）。そのような診断法はまた、好ましくは、有効な治療応答間の特定および／または区別をすることができる。複数の実施形態では、そのような診断法はまた、好ましくは、さらなる診断評価の必要性がある患者、例えば、そのためにｆｌｏｕｒｔａｕｃｉｐｉｒおよび／またはａｍｙｖｉｄなどの神経学的イメージングが適切である患者間の特定および／または区別をすることができる。

したがって、一実施形態では、本開示は、残基２１７（配列番号１に基づく残基番号）におけるスレオニンでリン酸化されたヒトタウ（「ｈＴａｕ－ｐＴ２１７」）に対する抗体、およびその医薬組成物、ならびにそのような抗体および医薬組成物を使用する方法および診断適用を提供する。さらに、本開示の一実施形態によれば、ＣＮＳにおいて発現されるヒトタウのアイソフォームに対する抗体（例えば、ＣＮＳにおいて発現されるアイソフォームを認識し、もっぱらＣＮＳの外側で発現されるヒトタウのアイソフォームを認識しない）、およびその医薬組成物が提供される。

（原文に記載なし）

いくつかの実施形態によれば、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７に特異的に結合する抗体が提供される。より特定の実施形態では、配列番号１の残基２１７におけるリン酸化スレオニンを含むヒトタウのエピトープ領域に結合する抗体が提供され、ここで、配列番号１の残基２１７におけるスレオニンがリン酸化されていない場合、そのような抗体はヒトタウに結合しない。本開示のさらにより特定の実施形態では、そのような抗体は、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、提供され、ここで、ＬＣＶＲは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、ＨＣＶＲは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３のＣＤＲを含み、ここで、ＬＣＤＲ１は、配列番号１３のアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ２は、配列番号１４のアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ３は、配列番号１５のアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ２は、配列番号１１のアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ３は、配列番号１２のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＬＣＤＲ１は、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ２は、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ３は、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ１は、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ２は、配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ３は、配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有する。本開示によって提供される抗体のいくつかの実施形態によれば、ＬＣＶＲは、配列番号５のアミノ酸配列を有し、ＨＣＶＲは、配列番号３のアミノ酸配列を有する。本開示によって提供される抗体のいくつかの実施形態では、ＬＣＶＲは、配列番号８のアミノ酸配列を有し、ＨＣＶＲは、配列番号６のアミノ酸配列を有する。いくつかのさらなる実施形態では、ＬＣＶＲは、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＨＣＶＲは、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有する。なおさらなる実施形態では、ＬＣＶＲは、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＨＣＶＲは、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有する。

本開示の実施形態によれば、ヒトタウのＣＮＳ発現アイソフォーム（例えば、ＣＮＳにおいて発現されるヒトタウの既知のアイソフォーム）に特異的に結合する抗体が提供され、そのような抗体は、もっぱらＣＮＳの外側の領域（末梢神経系を含む）において発現されるヒトタウのアイソフォームに結合しない。特定の実施形態によれば、ヒトタウのＣＮＳ発現アイソフォームに特異的に結合するそのような抗体は、配列番号１の１２４（グルタミン）と１２５（アラニン）とを含むヒトタウのエピトープ領域に結合する。特定の実施形態では、そのような抗体は、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、提供され、ここで、ＬＣＶＲは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、ＨＣＶＲは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３のＣＤＲを含み、ここで、ＬＣＤＲ１は、配列番号２３のアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ２は、配列番号２４のアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ３は、配列番号２５のアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ１は、配列番号２０のアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ２は、配列番号２１のアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ３は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＬＣＤＲ１は、配列番号２３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ２は、配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ３は、配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ１は、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ２は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ３は、配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有する。本開示によって提供される抗体のいくつかの実施形態によれば、ＬＣＶＲは、配列番号１７のアミノ酸配列を有し、ＨＣＶＲは、配列番号１９のアミノ酸配列を有する。いくつかのさらなる実施形態では、ＬＣＶＲは、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＨＣＶＲは、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態によれば、本開示の抗体はヒト化されていてもよい。いくつかの実施形態では、本開示の抗体はＩｇＧ４重鎖を含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体はカッパ軽鎖を含む。なおさらなる実施形態によれば、本開示は、本開示の抗体と、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、医薬組成物を提供する。

なおさらなる実施形態によれば、本開示は、有効量の本開示の抗体、またはその医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む、神経変性疾患を治療する方法を提供する。いくつかのそのような実施形態では、神経変性疾患はタウオパチーである。さらにより特定の実施形態では、タウオパチーは、ＡＤ、ＰＳＰおよびＦＴＤのうちの１つである。

いくつかの実施形態によれば、本開示は、治療における使用のための本開示の抗体、またはその医薬組成物を提供する。さらに、本開示の抗体、またはその医薬組成物は、神経変性疾患の治療における使用のために提供される。いくつかのそのような実施形態では、神経変性疾患はタウオパチーである。いくつかのより特定の実施形態では、タウオパチーは、ＡＤ、ＰＳＰおよびＦＴＤからなる群から選択される。

本開示のいくつかの実施形態によれば、本開示の抗体、またはその医薬組成物は、神経変性疾患の治療のための医薬の製造における使用のために提供される。いくつかのそのような実施形態では、神経変性疾患はタウオパチーである。さらにより特定の実施形態では、タウオパチーは、ＡＤ、ＰＳＰおよびＦＴＤからなる群から選択される。

本開示のさらなる実施形態によれば、患者サンプルにおけるｈＴａｕ－ｐＴ２１７を検出する方法が提供される。そのような方法は、患者サンプルを、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７に特異的に結合する本開示の抗体と接触させるステップと、接触させるステップによって提供されるシグナルを検出するステップとを含む。

複数の実施形態によれば、ヒトタウのＣＮＳのみで発現されるアイソフォームを検出する方法が提供される。そのような方法は、患者サンプルを、ＣＮＳにおいて発現されるヒトタウのアイソフォームに特異的に結合する（すなわち、もっぱらＣＮＳの外側で発現されるヒトタウのアイソフォームに結合しない）本開示の抗体と接触させるステップと、接触させるステップによって提供されるシグナルを検出するステップとを含む。

いくつかの実施形態によれば、患者サンプルにおけるｈＴａｕ－ｐＴ２１７を定量化する方法が提供される。そのような方法は、患者サンプルを、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７に特異的に結合する本開示の抗体と接触させるステップと、接触させるステップによって提供されるシグナルを検出するステップとを含む。いくつかの実施形態では、そのような方法は、対照標準を抗体と接触させるステップと、対照標準を接触させるステップによって提供されるシグナルを検出するステップとをさらに含む。

いくつかの実施形態では、患者サンプルにおけるｈＴａｕ－ｐＴ２１７を定量化する方法が、本開示によって提供される。そのような方法は、患者サンプルを、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７に特異的に結合する本開示の抗体と接触させるステップと、患者サンプルを、ヒトタウのＣＮＳ発現アイソフォームに特異的に結合する本開示の抗体と接触させるステップであって、ここで、抗体は、抗体の重複するエピトープ領域に結合せず、抗体のうちの１つは、検出可能な標識を含む、ステップと、抗体およびｈＴａｕ－ｐＴ２１７を含む複合体の形成に際して検出可能な標識によって提供されるシグナルを検出するステップと、対照標準を抗体と接触させるステップと、抗体および対照標準を含む複合体の形成に際して検出可能な標識によって提供されるシグナルを検出するステップとを含む。

本開示のいくつかの実施形態によれば、患者を（ｉ）神経変性疾患を有する、（ｉｉ）神経変性疾患を有するリスクがある、（ｉｉｉ）神経変性疾患のための治療の必要性がある、（ｉｖ）ＡＤブラーク（Ｂｒａａｋ）ステージＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、ＶもしくはＶＩにある、または（ｖ）神経学的イメージングの必要性がある、のうちの１つ以上として診断する方法が提供される。そのような実施形態によれば、そのような方法は、患者サンプルを、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７に特異的に結合する本開示の抗体と接触させるステップと、患者サンプル中のｈＴａｕ－ｐＴ２１７と抗体との間の結合を検出するステップとを含む。いくつかのそのような実施形態では、方法は、患者サンプルにおいて検出されるｈＴａｕ－ｐＴ２１７のレベルが参照レベルを上回る場合に、特許を（ｉ）神経変性疾患を有する、（ｉｉ）神経変性疾患を有するリスクがある、（ｉｉｉ）神経変性疾患のための治療の必要性がある、（ｉｖ）ＡＤブラークステージＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、ＶもしくはＶＩにある、または（ｖ）神経学的イメージングの必要性がある、のうちの１つとして診断するステップをさらに含む。

本開示のいくつかの実施形態では、患者における神経変性疾患を診断および治療する方法が提供される。そのような実施形態によれば、方法は、患者サンプルを、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７に特異的に結合する本開示の抗体と接触させるステップと、患者サンプル中のｈＴａｕ－ｐＴ２１７と抗体との間の結合を検出するステップと、神経変性疾患を有する患者を診断するステップと、治療有効量の抗ヒトタウ抗体を、診断された患者に投与するステップとを含む。いくつかの実施形態では、診断するステップは、患者サンプルにおけるｈＴａｕ－ｐＴ２１７の存在が参照レベルを上回る場合に、患者を神経変性疾患を有するとして診断することを含む。

本開示の方法のいくつかの実施形態によれば、そのような方法は、患者サンプルにおけるｈＴａｕ－ｐＴ２１７を定量化するステップをさらに含む。そのような実施形態では、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７を定量化するステップは、患者サンプルにおけるｈＴａｕ－ｐＴ２１７を参照標準に対して定量化することを含む。

本開示の方法のいくつかの実施形態によれば、患者サンプルは、血液、血漿、血清またはＣＳＦのうちの１つである。

本開示の方法のいくつかの実施形態によれば、方法は、患者サンプルを、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７に特異的に結合する抗体および第２の抗体と接触させるステップであって、第２の抗体は、ヒトタウのＣＮＳ発現アイソフォームに特異的に結合する、ステップをさらに含む。いくつかのそのような方法において、抗体または第２の抗体のうちの１つは、検出可能な標識を含み、検出するステップは、抗体、第２の抗体およびｈＴａｕ－ｐＴ２１７を含む複合体の形成に際して検出可能な標識によって提供されるシグナルを検出することを含む。いくつかのそのような実施形態によれば、抗体および第２の抗体のうちの１つは、基材上に固定化されている。本開示の方法のいくつかの実施形態では、患者サンプルを抗体と接触させるステップと、患者サンプルを第２の抗体と接触させるステップとは、同時に行われる。いくつかのより特定の実施形態によれば、第２の抗体は、本明細書に開示されるヒトタウのＣＮＳ発現アイソフォームに特異的に結合する本開示の抗体を含む。

本明細書で使用される場合、「抗体」は、ジスルフィド結合によって相互結合された２つのＨＣおよび２つのＬＣを含む免疫グロブリン分子である。各ＬＣおよびＨＣのアミノ末端部分は、その中に含まれるＣＤＲを介した抗原認識を主に担う約１００～１２０アミノ酸の可変領域を含む。ＣＤＲには、フレームワーク領域（「ＦＲ」）と呼ばれる、より保存された領域が散在している。各ＬＣＶＲおよびＨＣＶＲは、アミノ末端からカルボキシ末端へ、以下のＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順で配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成される。ＬＣの３つのＣＤＲは、「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３」と呼ばれ、ＨＣの３つのＣＤＲは、「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３」と呼ばれる。ＣＤＲは、抗原との特異的相互作用を形成する残基の大部分を含む。抗体が特定の抗原に結合する機能的能力は、６つのＣＤＲによって大きく影響される。本発明の抗体のＬＣＶＲおよびＨＣＶＲ領域内のＣＤＲドメインへのアミノ酸の割り当ては、周知のＫａｂａｔ番号付け規則（Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９０：３８２－９３（１９７１）、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２（１９９１））、およびＮｏｒｔｈ番号付け規則（Ｎｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ａ Ｎｅｗ Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ＣＤＲ Ｌｏｏｐ Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４０６：２２８－２５６（２０１１））に基づいている。

ＬＣは、本開示のいくつかの実施形態によれば、カッパまたはラムダとして分類され、これらは各々、当該技術分野で既知の特定の定常領域によって特徴付けられる。ＨＣは、本開示のいくつかの実施形態によれば、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロンとして分類され、それぞれ、抗体のアイソタイプをＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥとして定義する。いくつかの実施形態によれば、抗体はＩｇＧ ＨＣを含み、これは、サブクラス、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４にさらに分けられ得る。各ＨＣのカルボキシ末端部分は、エフェクター機能を主に担う定常領域を定義する。特定の実施形態では、本発明の抗体は、エフェクター機能を低減する、各ＨＣの定常領域内の１つ以上の修飾を有する。

本発明の抗体は、モノクローナル抗体である。モノクローナル抗体は、単一のコピーまたはクローン（例えば、任意の真核生物、原核生物、もしくはファージクローンを含む）に由来する抗体であり、それが産生される方法ではない。モノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ技術、組換え技術、ファージ提示技術、合成技術、例えばＣＤＲ移植、またはそのような技術または当該技術分野で既知の他の技術の組み合わせにより産生することができる。

抗体を産生および精製する方法は当該技術分野で周知であり、例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８），Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，ｃｈａｐｔｅｒｓ ５－８ ａｎｄ １５，ＩＳＢＮ ０－８７９６９－３１４－２に見出すことができる。例えば、マウスまたはウサギをｈＴａｕ－ｐＴ２１７で免疫化してもよく、得られた抗体を回収、精製し、当該技術分野で周知の従来の方法を使用してアミノ酸配列を決定することができる。同様に、ファージライブラリをスクリーニングしてもよく、それによって、数千のＦａｂフラグメントをｈＴａｕ－ｐＴ２１７との相互作用についてスクリーニングし、得られた相互作用を回収、精製し、当該技術分野で周知の従来の方法を使用してアミノ酸配列を決定することができ、それによって、最初のリード抗体を構築することができる。本開示の抗体の実施形態は、非ヒト抗体に由来するＣＤＲを囲む１つ以上のヒトフレームワーク領域を含むように操作された抗体を含む。ヒトフレームワークの生殖系列配列は、例えば、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＮＧＴ）から、そのウェブサイト（ｈｔｔｐ：／／ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ）を通して、またはＴｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ＦａｃｔｓＢｏｏｋ ｂｙ Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃ ａｎｄ Ｇｅｒａｒｄ Ｌｅｆｒａｎｃ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，２００１，ＩＳＢＮ０１２４４１３５１から得ることができる。

本発明の特定の実施形態では、抗体、または抗体をコードする核酸は、単離された形態で提供される。本明細書で使用される場合、「単離された」という用語は、細胞環境において見出される他の高分子種を含まないか、または実質的に含まない、タンパク質、ペプチド、または核酸を指す。

本開示によって提供される抗体は、患者の治療において使用され得る。より特定すると、本開示の抗体の実施形態は、ＡＤ、ＰＳＰおよびＦＴＤを含むタウオパチーを含む、神経変性疾患または障害の治療において有用であり得る。本発明の抗体は、ＡＤ、ＰＳＰおよびＦＴＤの治療において有用であり得るが、そのような抗体はまた、他の神経変性疾患、特にＮＦＴ形成などのタウ病態が関与する疾患の治療において有用であり得る。本明細書で互換的に使用される場合、「治療」および／または「治療すること」および／または「治療する」は、本明細書に記載の障害の進行の緩徐化、妨害、抑止、制御、停止、または逆転が存在し得るすべてのプロセスを指すことが意図されるが、すべての障害の症状の完全な排除を必ずしも示すものではない。治療は、タウ凝集形成、ＮＦＴ形成およびニューロン欠損のうちの少なくとも１つの伝播の低減から利益を得る、ヒトにおける疾患または状態の治療のための本発明の抗体の投与を含み、（ａ）疾患のさらなる進行を阻害すること、すなわち、その発達を抑止すること、および（ｂ）疾患を軽減すること、すなわち、疾患または障害の退縮を引き起こすか、またはその症状もしくは合併症を緩和することを含む。

本明細書で互換的に使用される場合、「患者」、「対象」、および「個体」という用語は、ヒトを指す。特定の実施形態では、患者はさらに、タウ凝集体形成、神経原線維変化形成、およびニューロン欠損のうちの少なくとも１つの伝播の低減から利益を得る疾患、障害、または状態（例えば、神経変性障害）で特徴付けられる。別の実施形態では、患者はさらに、タウ凝集体形成、ＮＦＴ形成、およびニューロン欠損のうちの少なくとも１つの伝播の低減から利益を得る神経変性障害、疾患、または状態を発達させるリスクがあるとして特徴付けられる。

本明細書で使用される場合、「ｈＴａｕ－ｐＴ２１７に特異的に結合する」という用語は、配列番号１の残基２１７におけるリン酸化スレオニンを含むヒトタウのエピトープ領域との抗体の相互作用を指す。そのような結合は、配列番号１の残基２１７におけるスレオニンのリン酸化に依存する。例えば、スプライスバリアントから生じる、ヒトタウの既知のバリエーションまたはアイソフォームが存在することが理解されるべきである。そのような既知のバリアントは、配列番号１に記載のヒトタウ配列を参照して本明細書において提供されるようなリン酸化スレオニンを含む配列番号１のいくつかのアミノ酸残基についての残基番号付けの変更をもたらし得ることも理解される。

本明細書で使用される場合、「ヒトタウのＣＮＳ発現アイソフォームに特異的に結合する」という用語は、ＣＮＳにおいて発現されるヒトタウのアイソフォームに共通の、またはその上に存在するエピトープ領域であって、そのエピトープ領域は、もっぱらＣＮＳの外側で発現されるヒトタウのアイソフォーム上には存在しない、エピトープ領域との、本開示の抗体の相互作用を指す。ヒトタウのＣＮＳ発現アイソフォームに特異的に結合する抗体は、もっぱらＣＮＳの外側で発現されるヒトタウアイソフォーム（例えば、末梢神経系などの体の他の領域のみで発現されるアイソフォーム）に結合しない。いくつかの実施形態によれば、ヒトタウのＣＮＳ発現アイソフォームに特異的に結合する抗体は、配列番号１を参照した残基番号で、残基１２４におけるグルタミン（Ｑ１２４）と残基１２５におけるアラニン（Ａ１２５）とを含むＣＮＳにおいて発現されるヒトタウアイソフォームのエピトープ領域に結合するか、またはそれを認識する。例えば、スプライスバリアントから生じるヒトタウの既知のバリエーションまたはアイソフォームが存在すること、および、そのようなバリアントは、配列番号１に記載のヒトタウ配列を参照して本明細書において提供されるようなグルタミンとアラニンとを含む配列番号１を参照したいくつかのアミノ酸残基についての残基番号付けの変更をもたらし得ることが理解されるべきである。

本明細書で使用される場合、「エピトープ領域」という用語は、本発明の抗体によって全体的または部分的のいずれかで認識される抗原の別個の三次元部位を指す。エピトープ領域のアミノ酸は、ヒトタウの化学的に活性な表面群を提供し、ヒトタウの特異的三次元構造を形成し、特異的電荷特性を提供し得る。立体配座エピトープと非立体配座／直鎖状エピトープとは、立体配座エピトープ領域への結合は変性溶媒の存在下で失われるが、一方、直鎖状エピトープ領域はそうでないという点で区別され得る。

本発明の抗体は、当該技術分野で周知の方法によって調製することができ、本発明の抗体と、１つ以上の薬学的に許容される担体および／または希釈剤と、を含む、医薬組成物に組み込むことができる（例えば、一般に開業医に知られている製剤化技術の概要を提供する、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２^ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｏｙｄ Ｖ．，Ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，２０１２）。医薬組成物に好適な担体には、本発明の抗体と組み合わせたときに分子の活性を保持し、かつ患者の免疫系と非反応性である、任意の材料が含まれる。本発明の抗体を含む医薬組成物は、親経路（例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、または経皮）によって、本明細書に記載の疾患または障害のリスクがあるか、またはそれを呈する患者に投与することができる。本発明の医薬組成物は、「有効」量または「治療有効」量（本明細書で互換的に使用される）の本発明の抗体を含有する。有効量は、所望の治療結果を達成するのに必要な量（投与量および期間および投与手段で）を指す。抗体の有効量は、個体の病状、年齢、性別、および体重、ならびに抗体が個体において所望の応答を誘発する能力などの要因に応じて変動し得る。有効量はまた、本発明の抗体の任意の毒性効果または有害効果よりも治療的に有益な効果が上回る量である。

２つ以上のアミノ酸配列の文脈で、本開示において言及される、相同性パーセントは、配列比較アルゴリズム（例えば、ＢＬＡＳＴＰおよびＢＬＡＳＴＮ、または当業者が利用可能な他のアルゴリズム）を使用して、または目視検査によって測定されて、最大一致について比較および整列されたときに、特定される割合の同じアミノ酸残基を有する２つ以上の配列を指す。用途に応じて、相同性パーセントは、比較される配列の領域にわたって、例えば、機能的ドメインにわたって存在するか、あるいは比較される２つの配列の全長にわたって存在することができる。例として、配列の相同性パーセントを参照配列と比較することができる。例えば、配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験配列と参照配列をコンピュータに入力することができる（必要に応じて、配列アルゴリズムプログラムのパラメータとともにサブシーケンス座標をさらに指定することができる）。次に、配列比較アルゴリズムは、指定されたプログラムのパラメータに基づいて、参照配列に対する試験配列の配列同一性または相同性パーセントを計算する。例示的な配列アラインメントおよび／または相同性アルゴリズムは、Ｓｍｉｔｈ ＆ Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ＆ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）、Ｐｅａｒｓｏｎ ＆ Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４（１９８８）、ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ（ｔｈｅ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）を通じて利用可能であるか、または目視検査（一般的に、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．、下記、を参照されたい）による。配列同一性および配列類似性パーセントを決定するために好適なアルゴリズムの一例は、ＢＬＡＳＴアルゴリズムであり、これは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０（１９９０）に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を行うためのソフトウェアは、国立生物工学情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）を通じて公開されている。

本明細書で使用される場合、患者「サンプル」は、ヒトサンプルを指す。本発明における使用のためのサンプルの非限定的な供給源には、血液、血漿、血清、およびＣＳＦが含まれる。さらに、サンプルはまた、リンパ液、生検吸引物、腹水、流体抽出物、固形組織、皮膚の外部切片、呼吸器、鼻道、腸管、および泌尿生殖器、涙、唾液、乳汁、腫瘍、臓器、細胞培養物および／または細胞培養物構成物を指し得る。

本開示はまた、本明細書に開示される方法を使用して医療専門家によって行われる対象の臨床診断、予後、またはセラノーシス（ｔｈｅｒａｎｏｓｉｓ）の方法にも関する。本明細書に記載される方法は、例えば、個人、医療従事者、または第三者、例えば、対象からの情報を解釈するサービスプロバイダによって行われ得る。本明細書で説明されるように、医療専門家は、本開示の診断方法に関する情報を受け取った後に治療を開始または変更することができる。例えば、医療専門家は、治療法、治療法の変更または追加の診断評価（例えば、神経学的イメージング）を推奨し得る。

ｈＴａｕ－ｐＴ２１７に特異的に結合する本開示の抗タウ抗体を使用して、アフィニティクロマトグラフィー、免疫沈降、免疫組織化学またはＥＬＩＳＡベースのアッセイなどの技術によって、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７を単離、検出および／または定量化することができる。そのようなアッセイを使用して、臨床試験手順の一部として（例えば、所与の治療レジメンの有効性を決定するために）、ポリペプチドレベル（例えば、血清、血漿、血液またはＣＳＦにおける）をモニターする診断、予後、またはセラノスティクス目的のために、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７の発現の検出ならびに／またはその存在量および／もしくはパターンの評価をすることができる。

ヒトタウのＣＮＳ発現アイソフォームに特異的に結合する本開示の抗タウ抗体を使用して、アフィニティクロマトグラフィー、免疫沈降、免疫組織化学またはＥＬＩＳＡベースのアッセイなどの技術によって、ＣＮＳにおいて発現されるヒトタウのアイソフォーム（もっぱらＣＮＳの外側で発現されるヒトタウのアイソフォームを除く）を単離および／または検出することができる。そのようなアッセイを使用して、臨床試験手順の一部として（例えば、所与の治療レジメンの有効性を決定するために）、ポリペプチドレベル（例えば、血清、血漿、血液またはＣＳＦにおける）をモニターする診断、予後、またはセラノスティクス目的のために、ヒトタウのＣＮＳ発現アイソフォームの発現の検出ならびに／またはその存在量および／もしくはパターンの評価をすることができる。当該技術分野において理解されるように、本発明の抗体は、その検出を容易にするために、検出可能な物質または標識に結合され得る。検出可能な物質または標識の例には、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、化学発光物質および放射性物質が含まれる。好適な酵素の例には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが含まれ、好適な補欠分子族複合体の例には、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが含まれ、好適な蛍光物質の例には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトナジニルアミン（ｄｉｃｈｌｏｒｏｔｎａｚｉｎｙｌａｍｉｎｅ）フルオレセイン、塩化ダンシル、またはフィコエリスン（ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｎｎ）が含まれ、発光物質の例には、ルミノールが含まれ、生物発光物質の例には、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、ルテニウムおよびエクオリンが含まれ、好適な放射性物質の例には、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^３５Ｓ、または^３Ｈが含まれる。本発明の抗体はまた、薬理ゲノム分析においても有用であり得る。そのような実施形態は、特定のもしくは修飾された治療手法から利益を得ることができる個体を特定するために、および／または現在の治療レジメンの有効性をモニターするために使用され得る。

本発明のアッセイによって提供されるｈＴａｕ－ｐＴ２１７のレベルまたは測定値は、絶対値（例えば、生物学的サンプル内の濃度）または相対値（例えば、参照と比較した濃度）であり得る。本明細書で使用される場合、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７を検出するための方法が、患者サンプルにおけるｈＴａｕ－ｐＴ２１７のレベルまたは濃度が基準値よりも高いことを示す場合、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７は、患者サンプルにおいて「増加した」といわれる。逆に、患者サンプルにおけるｈＴａｕ－ｐＴ２１７レベルまたはｈＴａｕ－ｐＴ２１７の濃度が基準値、または例えば、以前の患者サンプルにおいて測定されたｈＴａｕ－ｐＴ２１７値よりも低い場合、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７は、患者サンプルにおいて「減少した」といわれる。

本明細書で使用される場合、「基準値」は、特定の状態に関連する既知の、またはおおよそのｈＴａｕ－ｐＴ２１７の濃度を指す。基準値における濃度レベルは、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７の絶対量もしくは相対量、量の範囲、または最小量、平均量、および／もしくは中央値の量であり得る。基準値はまた、それに対して患者サンプルが比較されるｈＴａｕ－ｐＴ２１７のベースラインとして作用し得る。

本明細書で使用される場合、「対照標準」は、本発明の方法において患者サンプルから得られた結果を比較するために使用され得るサンプルを指す。対照標準は、細胞、血液、血漿、ＣＳＦ、組織または培地中にスパイクされた既知のタンパク質の濃度であり得る。対照標準における濃度レベルは、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７の絶対量もしくは相対量、量の範囲、または最小量、平均量、および／もしくは中央値の量であり得る。対照標準はまた、それに対して患者サンプルが比較されるｈＴａｕ－ｐＴ２１７のベースラインとして作用し得る。対照標準には、同じ患者からの濃度値、またはｈＴａｕ－ｐＴ２１７の既知の正常な参照が含まれ得る。さらに、いくつかの実施形態では、対照標準は、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７濃度を標準曲線の形態で表し得る。

本明細書で使用される場合、「捕捉抗体」という用語は、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７に結合する抗体を指す。そのような実施形態では、捕捉抗体は、適切な条件下で、患者サンプルにおけるｈＴａｕ－ｐＴ２１７に結合し、それを捕捉することができ、例えば、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７に特異的に結合することができ（例えば、配列番号１の残基２１７におけるスレオニンがリン酸化されていない場合は、ヒトタウに結合しない）、その結果、捕捉抗体－ｈＴａｕ－ｐＴ２１７複合体は、サンプルの残りの部分から分離され得る。いくつかの実施形態では、捕捉抗体は、ヒトタウのＣＮＳ発現アイソフォーム（例えば、残基２１７におけるスレオニンでリン酸化されたｈＴａｕを含み得る）に特異的に結合する抗体であり得、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７に特異的に結合する抗体は、「第２の（または検出）抗体」として使用される。いくつかの実施形態では、捕捉抗体は、固定化されている。いくつかの実施形態では、検出抗体は、検出可能な標識で標識されている。いくつかの実施形態では、捕捉抗体は、「サンドイッチ」イムノアッセイにおいて固定化されており、捕捉または第１の抗体は、配列番号１の残基２１７におけるリン酸化スレオニンを含むヒトタウのエピトープ領域に特異的に結合する。そのようなサンドイッチイムノアッセイでは、「検出（または第２の）抗体」も利用される。いくつかの実施形態によれば、検出または第２の抗体は、捕捉抗体に特異的に結合することができ、検出可能な標識で標識され得る。いくつかの実施形態では、第２の抗体の検出は、捕捉または第１の抗体によって既に結合または捕捉されているｈＴａｕ－ｐＴ２１７に特異的に結合する。そのような実施形態では、検出抗体は、第１のまたは捕捉抗体と重複しない第２のエピトープ領域でｈＴａｕ－ｐＴ２１７に結合し、検出可能な標識で標識され得る。いくつかのそのような実施形態では、第２の抗体は、ヒトタウのＣＮＳ発現アイソフォームに特異的に結合する本発明の抗体である。

本明細書で使用される場合、「検出可能な標識」は、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７に特異的に結合する本発明の抗体とｈＴａｕ－ｐＴ２１７との間の複合体の形成を検出するために使用され得る部分、組成物または技術である。いくつかの実施形態によれば、検出可能な標識は、抗体（場合によって、捕捉または検出のいずれか）に直接的または間接的にコンジュゲートされ得る。検出可能な標識の例示的な実施形態には、ビオチン、放射性同位体、フルオロフォアまたは他の蛍光部分、および酵素部分が含まれる。

本明細書で互換的に使用される場合、「診断」または「診断する」という用語は、当業者が、患者が所与の疾患または状態に罹患しているか否かの確率（「可能性」）を推定および／または決定することができる方法を指す。本発明の場合、患者を「診断する」ことは、ＡＤ、ＰＳＰまたはＦＴＤなどの神経学的障害を特定または診断するために、ならびに、患者（例えば、神経学的疾患もしくは障害または治療の必要性の存在もしくは発生）を、あるいは患者についての神経学的疾患に対する治療の有効性を特定するために、本発明のアッセイの結果を使用することを含む。本発明によれば、診断は、診断に到達するために、医療従事者が理解する他の臨床徴候の組み合わせに基づいてもよい。本発明のいくつかの実施形態によれば、本発明の診断適用は、患者がＡＤブラークステージＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、ＶまたはＶＩにあるとして診断するために使用され得る。ＡＤブラークステージは、当該技術分野で知られており、Ｂｒａａｋ，ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ １１２（４）：３８９－４０４に記載されている。

抗ｈＴａｕ－ｐＴ２１７抗体
本開示の抗ｈＴａｕ－ｐＴ２１７抗体、またはｈＴａｕ－ｐＴ２１７に特異的に結合する抗体を、ハイブリドーマ方法を用いて生成する（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載されたように）。簡単に言えば、例示として、ウサギを、配列番号１によって表される、リン酸化スレオニンおよびそのようなスレオニンのＮ末端およびＣ末端の４つ以上のアミノ酸を含むペプチドで免疫化する（免疫化において使用され得ペプチドの例示は、配列番号２６によって提供される）。ｈＴａｕ－ｐＴ２１７に結合する抗体を産生することができるリンパ球を単離し、ハイブリドーマ細胞を形成するのに好適な融合剤を使用して骨髄腫細胞株と融合させる（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９－１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。ハイブリドーマを好適な培養培地（好ましくは、融合していない骨髄腫細胞の生存を阻害する１つ以上の物質を含有する）に播種し、増殖させる。次に、ハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性を、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７および残基２１７（配列番号１への参照に基づく番号）におけるスレオニンでリン酸化されていない組換えタウの両方を使用するインビトロ結合アッセイ（例えば、免疫沈降、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、または酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ））によって決定する。ｈＴａｕ－ｐＴ２１７に特異的に結合する抗体（例えば、配列番号１に基づく番号付けで、残基２１７でリン酸化されていないヒトタウに結合しない）を同定する。好ましいハイブリドーマを、限界希釈手順によりサブクローニングし、動物の腹水腫瘍としてのインビボを含む標準的な方法により増殖させることができる（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９－１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。ハイブリドーマ（およびまたはサブクローン）によって分泌されたモノクローナル抗体を、例えば、アフィニティクロマトグラフィー（例えば、プロテインＡもしくはプロテインＧ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）またはイオン交換クロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析などの従来の手順に従って精製する。

本発明の抗体をコードするｃＤＮＡを、従来の手順を使用して配列決定する。実質的に本明細書に記載の手順に従って生成された例示的なウサギ抗ｈＴａｕ－ｐＴ２１７抗体（「ｍＡｂ Ａ」）は、配列番号２の重鎖および配列番号４の軽鎖を含む。配列決定した抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）または可変領域を、キメラもしくはヒト化抗体への変換において使用し得、そして／または他の哺乳動物ＩｇＧ形態に変換し得る。例えば、クローンを、配列番号６の重鎖可変領域および配列番号７の重鎖および配列番号８の軽鎖可変領域および配列番号９の軽鎖を有する、例示的なウサギ可変領域、マウスＩｇＧ定常領域キメラ抗ｈＴａｕ－ｐＴ２１７抗体（「ｍＡｂ Ｂ」）などのマウスＩｇＧキメラ抗体に変換し得る。次に、結合特異性を再評価し得る。重鎖および軽鎖をコードするｃＤＮＡ配列を、ＧＳ（グルタミンシンテターゼ）発現ベクター中にクローン化および操作し得る。次に、操作した免疫グロブリン発現ベクターを、ＣＨＯ細胞に安定的にトランスフェクトし得る。当業者が理解するように、抗体の哺乳動物発現は、典型的にはＦｃ領域の高度に保存されたＮ－グリコシル化部位でグリコシル化をもたらすであろう。安定なクローンを、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７に特異的に結合する抗体の発現について確認し得る。陽性クローンを、バイオリアクターでの抗体産生のために無血清培養培地中に拡大し得る。抗体が分泌された培地を、従来の技術によって精製し得る。例えば、培地を、リン酸緩衝生理食塩水などの適合性のある緩衝液で平衡化されたプロテインＡまたはＧ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦカラムに都合よく適用し得る。カラムを洗浄して、非特異的結合成分を除去する。結合した抗体を、例えば、ｐＨ勾配によって溶出し、抗体画分を、例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって検出し、次にプールする。抗体を、一般的な技術を使用して濃縮および／または滅菌濾過し得る。可溶性凝集体および多量体を、サイズ排除、疎水性相互作用、イオン交換、またはヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーを含む一般的な技術によって効果的に除去し得る。産生物を、例えば－７０℃で直ちに凍結し得るか、または凍結乾燥し得る。

ｈＴａｕのＣＮＳのみで発現されるアイソフォームに特異的な抗体
ヒトタウのＣＮＳ発現アイソフォームに特異的に結合する本開示の抗体を、ハイブリドーマ方法を用いて生成し得る（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載されたように）。簡単に言えば、例示として、非ヒト哺乳動物（例えば、マウスまたはウサギ）を、配列番号１によって表される番号付けで、残基１２４におけるグルタミンと残基１２５におけるアラニンとを含むヒトタウタンパク質（例えば、配列番号１によって与えられるｈＴａｕ）、またはそのペプチドで免疫化し得る。ヒトタウのＣＮＳ発現アイソフォームに特異的に結合する抗体を産生することができるリンパ球を単離し、ハイブリドーマ細胞を形成するのに好適な融合剤を使用して骨髄腫細胞株と融合させ得る（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９－１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。ハイブリドーマを好適な培養培地（好ましくは、融合していない骨髄腫細胞の生存を阻害する１つ以上の物質を含有する）に播種し、増殖させ得る。次に、ハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性を、ヒトタウのＣＮＳ発現アイソフォーム（例えば、配列番号１の配列を有するペプチドおよび／またはおよびヒトタウの末梢発現アイソフォーム（例えば、配列番号１によって表される残基１２５におけるアラニンに隣接する残基１２４におけるグルタミンを含まない、配列番号２７によって与えられる配列を有するペプチド）の両方に対するインビトロ結合アッセイ（例えば、免疫沈降、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、または酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ））によって決定する。ヒトタウのＣＮＳ発現アイソフォームに特異的に結合する抗体（例えば、末梢発現ヒトタウに結合しない）を同定することができる。好ましいハイブリドーマを、限界希釈手順によりサブクローニングし、動物の腹水腫瘍としてのインビボを含む標準的な方法により増殖させることができる（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９－１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。ハイブリドーマ（およびまたはサブクローン）によって分泌されたモノクローナル抗体を、例えば、アフィニティクロマトグラフィー（例えば、プロテインＡもしくはプロテインＧ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）またはイオン交換クロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析などの従来の手順に従って精製することができる。

本発明の抗体をコードするｃＤＮＡを、従来の手順を使用して配列決定し得る。実質的に本明細書に記載の手順に従って生成された、ヒトタウのＣＮＳ発現アイソフォームに特異的に結合する本開示の例示的なマウス抗体（「ｍＡｂ Ｃ」）は、配列番号１６の重鎖および配列番号１８の軽鎖を含む。配列決定した抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）または可変領域を、キメラもしくはヒト化抗体への変換において使用し得、そして／または他の哺乳動物ＩｇＧ形態に変換し、ＣＨＯ細胞などのコンポーネント宿主細胞において発現させ得る。

結合キネティクスおよび親和性
ＦｏｒｔｅＢｉｏから入手可能なＯｃｔｅｔ Ｒｅｄ９６（登録商標）機器を用いて測定されるバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）アッセイ（２５℃のＨＢＳ－ＥＰ＋ランニングバッファー（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ ｐＨ７．４＋１５０ｍＭ ＮａＣｌ＋３ｍＭ ＥＤＴＡ＋０．０５％界面活性剤Ｐ２０）を使用）を使用して、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７に特異的に結合する本発明の抗体の、配列番号１のアミノ酸配列を有する組換えｈＴａｕ－ｐＴ２１７タンパク質への結合を測定する。

記載のものを除き、すべての試薬および材料は、ＦｏｒｔｅＢｉｏ（Ｆｒｅｅｍｏｎｔ，ＣＡ）からのものである。プロテインＡバイオセンサーを使用して、分析のために目的の抗体を固定化する。例示的な本発明の抗体サンプル（ｍＡｂ Ａ）を、ランニングバッファー中への希釈によって５μｇ／ｍＬに調製する。組換えｈＴａｕ－ｐＴ２１７タンパク質を、ランニングバッファー中への希釈によって、３００、１００、３３．３、１１．１、３．７、１．２４、０．４１１５、および０（ブランク）ｎＭの濃度に調製する。各分析は、（１）抗体サンプルをバイオセンサー上に２４０秒間捕捉すること、（２）抗体をロードしたバイオセンサーをランニングバッファーとともに６０秒間インキュベートすることによってベースラインを確立すること、（３）抗体をロードしたバイオセンサーを系列希釈した組換えｈＴａｕ－ｐＴ２１７タンパク質とともに３００秒間インキュベートして、会合相をモニターすること、（４）バイオセンサーをランニングバッファーに戻して、解離相をモニターすることからなる。

結合データを、標準的な二重参照を使用して処理し、Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｖ９．０評価ソフトウェアを使用して１：１結合モデルに適合させて、会合速度（ｋ_ｏｎ、Ｍ^－１ｓ^－１単位）、および解離速度（ｋ_ｏｆｆ、ｓ^－１単位）を決定する。Ｋ_Ｄ＝ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎの関係から平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）を計算し、これはモル単位でのものである。結果を表１に示す。

ｈＴａｕ－ｐＴ２１７への結合特異性
ｈＴａｕ－ｐＴ２１７に特異的に結合する本発明の例示的な抗体（ｍＡｂ ＡおよびｍＡｂ Ｂ）の特異性を、合成ペプチドを使用し、ＦｏｒｔｅＢｉｏから入手可能なＯｃｔｅｔ Ｒｅｄ９６（登録商標）機器を用いて測定する、ＢＬＩアッセイ（２５℃のＨＢＳ－ＥＰ＋ランニングバッファー（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ ｐＨ７．４＋１５０ｍＭ ＮａＣｌ＋３ｍＭ ＥＤＴＡ＋０．０５％界面活性剤Ｐ２０）を使用）を使用して決定する。残基７におけるリン酸化スレオニン有りまたは無しの、配列番号２６のＮ末端ビオチン標識ペプチドを、ストレプトアビジンバイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）に固定化する。ペプチドを、ランニングバッファー中に５μｇ／ｍＬに希釈したｍＡｂ ＡおよびｍＡｂ ＢのＩｇＧとともに３００秒間インキュベートし、続いて３００秒間の解離を行う。結合データを、Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｖ９．０評価ソフトウェアを使用して決定する。解離の終了時の各ペプチドについての結合シグナル（ｎｍ）を表２に示す。

ｈＴａｕ－ｐＴ２１７イムノアッセイ
血漿におけるｈＴａｕ－ｐＴ２１７を測定するためのイムノアッセイを、ＡＤ患者における疾患関連差異を測定するように設計する。例示として、本開示のイムノアッセイを、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）プラットフォームを使用してストレプトアビジンスモールスポットプレート上で実施する。ｍＡｂ ＡまたはｍＡｂ Ｂのいずれかを、捕捉抗体として使用し、ビオチン化する。ｍＡｂ Ｃ（ヒトタウのＣＮＳ発現アイソフォームに特異的に結合する本開示の抗体）などのＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ第２の抗体を、検出抗体として利用する。抗体を、製造元のプロトコルに従って、Ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ－Ｂｉｏｔｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号、２１３２９）またはＭＳＤ ＧＯＬＤ ＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ ＮＨＳ－Ｅｓｔｅｒ（ＭＳＤ、カタログ番号、Ｒ９１ＡＯ－１）とコンジュゲートさせる。アッセイを、グリコーゲンシンターゼキナーゼ３との反応を使用してインビトロでリン酸化され、質量分析によって特徴付けられた組換えタウ（４Ｒ２Ｎ、ＮＣＢＩタウｖ２）タンパク質を使用して較正する。サンプルを湿潤氷上で解凍し、短時間ボルテックスし、血漿をサンプルバッファー（ｍＡｂ Ａについては（リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、０．５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、０．５％Ｔｗｅｅｎ２０、５ｍＭ ＥＤＴＡ、５ｍＭ ＥＧＴＡ）、ｍＡｂ Ｂについては５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、３００ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＥＤＴＡ、５ｍＭ ＥＧＴＡ、１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、１％ＭＳＤ Ｂｌｏｃｋｅｒ Ａ、２％ＰＥＧ））中で１：４希釈し、Ｈｅｔｅｒｏｐｈｉｌｉｃ Ｂｌｏｃｋｉｎｇ Ｒｅａｇｅｎｔ １を２００ｕｇ／ｍＬの濃度に添加する（Ｓｃａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｉｎｃ、カタログ番号、３ＫＣ５３３）。キャリブレーター希釈液を、サンプルバッファーを５０／５０でＫｎｏｃｋ－Ｏｕｔ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（Ｇｉｂｃｏ、１０８２８－０１０）と混合することによって作製する。

ＭＳＤスモールスポットストレプトアビジン（ＭＳＤ、Ｌ４５ＳＡ）でコーティングしたプレートを、プレートシェーカー上で６５０ｒｐｍで振とうしながらＰＢＳ中の３％ＢＳＡ ２００ｕＬを用いて室温で１時間ブロックする。プレートを、２００ｕＬの洗浄バッファー（ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０）で３回洗浄し、０．４６４ｕｇ／ｍＬのビオチン化捕捉抗体（ｍＡｂ Ａ）（ＤＰＢＳ＋０．１％ＢＳＡ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０中で希釈、ｍＡｂ Ｂについてはプラス２％ＰＥＧ）２５ｕＬをｈＴａｕ－ｐＴ２１７プレートに添加し、プレートシェーカー上で６５０ｒｐｍで振とうしながら室温で１時間インキュベートする。プレートを再度２００ｕＬの洗浄バッファーで３回洗浄し、５０ｕＬの希釈したキャリブレーターまたはサンプルをプレートに添加し、プレートシェーカー上で６５０ｒｐｍで振とうしながら室温で２時間インキュベートする。次に、プレートを２００ｕＬの洗浄バッファーで３回洗浄し、２５ｕＬのＳＵＬＦＯタグ付き検出抗体（ｍＡｂ Ｃ）を０．２５ｕｇ／ｍＬで（ＭＳＤ Ｄｉｌｕｅｎｔ ３５中で希釈、ｍＡｂ Ｂについてはプラス２％ＰＥＧ）ｈＴａｕ－ｐＴ２１７プレートに添加し、プレートシェーカー上で６５０ｒｐｍで振とうしながら室温で１時間インキュベートする。プレートを最後に２００ｕＬの洗浄バッファーで洗浄し、１５０ｕＬの２Ｘ ＭＳＤ Ｒｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ Ｔ ｗｉｔｈ Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ（ＭＳＤ、Ｒ９２ＴＣ）を各プレートに添加し、リードバッファーの添加の１０分以内にＭＳＤ ＳＱ１２０上で読み取る。結果を、式Ｙ＝ｂ_１＋（（ｂ_２－ｂ_１）／（１＋（ｘ／ｂ_３）^ｂ４））を使用し、４ＰＬ、内挿のための標準曲線の重み１／ｙ^２を使用して、ＭＳＤソフトウェアによって計算する。

神経学的イメージングのための予後アッセイとしてのｈＴａｕ－ｐＴ２１７イムノアッセイ
ｈＴａｕ－ｐＴ２１７およびｈＴａｕ－ｐＴ１８１のレベルを、ＡＤ臨床試験に登録された対象の血液において評価する。本明細書に記載のｈＴａｕ－ｐＴ２１７イムノアッセイを使用して、２つの研究（研究１、Ｎ＝４２、研究２、Ｎ－１８５）からのＡＤ対象の血漿におけるｈＴａｕ－ｐＴ２１７を評価する。また、当該技術分野において以前に記載されたｈＴａｕ－ｐＴ１８１イムノアッセイを使用して、同じ患者におけるｈＴａｕ－ｐＴ１８１を測定する。すべての患者は、ｆｌｏｒｔａｕｃｉｐｉｒ神経学的イメージングによって測定されるタウポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）を有する。サンプルを、２つの独自の臨床試験の間に取得し（ベースラインを含む）、将来のバイオマーカー研究のために－８０℃で貯蔵する。ｆｌｏｒｔａｕｃｉｐｉｒ ＳＵＶＲを、白質における参照シグナルに対して、目的の新皮質領域において決定する。ｆｌｏｒｔａｕｃｉｐｉｒ ＳＵＶＲおよび血漿のｐＴａｕ（それぞれ、ｐＴ１８１およびｐＴ２１７）の相関を、スピアマンの順位相関を用いて評価する。受信者動作特性（ＲＯＣ）曲線分析には、年齢および性別を共変量として組み込んだロジスティック回帰モデルならびに、ＳＵＶＲ≧１．１のｆｌｏｒｔａｕｃｉｐｉｒ陽性カットオフを使用する。将来の認知機能低下を予測するベースラインｐＴａｕを、四分位数によってｐＴａｕを評価する混合効果モデルを使用して評価する。

ｈＴａｕ－ｐＴ２１７イムノアッセイは、表３に示すように、両方の研究においてＦｌｏｒｔａｕｃｉｐｉｒ ＰＥＴとの統計的に有意なより高い相関を示す（ｐ値＜０．０５）。

ＡＤおよび疾患進行のための診断指標としてのｈＴａｕ－ｐＴ２１７イムノアッセイ
記載されるイムノアッセイを使用したＣＳＦにおけるｈＴａｕ－ｐＴ２１７のレベルを、ｈＴａｕ－ｐＴ１８１イムノアッセイの評価に対して評価および比較する。簡単に言えば、Ｓｗｅｄｉｓｈ ＢｉｏＦＩＮＤＥＲ研究からの、障害なしの高齢者（ＣＵ、ｎ＝６５）、ＡＤに起因する軽度認知障害を有する患者（ＭＣＩ－ＡＤ、ｎ＝２９）、ＡＤ認知症（ｎ＝４３）および他の神経変性障害（ｎ＝５７）のＣＳＦサンプルを、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７およびｈＴａｕ－ｐ１８１イムノアッセイを用いて評価する。１８４人の参加者が、^１８Ｆ－Ｆｌｏｒｔａｕｃｉｐｉｒポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）を受けた。^１８Ｆ－Ｆｌｏｒｔａｕｃｉｐｉｒの取り込みを、タウブラークステージＩ～ＩＩ、ＩＩＩ～ＩＶおよびＶ～ＶＩを含むＡＤにおけるタウ病理に関連付けられる先験的に定義された領域および下側テンプ（ｉｎｆｅｒｉｏｒ ｔｅｍｐ）において定量化する。

ＣＵ患者では、ｈＴａｕ－ＰＴ２１７イムノアッセイおよびｈＴａｕ－ｐＴ１８１イムノアッセイの両方は、ブラークステージＩ～ＩＩで^１８Ｆ－Ｆｌｏｒｔａｕｃｉｐｉｒと相関し、ＡＤ患者では、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７イムノアッセイおよびｈＴａｕ－ｐＴ１８１イムノアッセイの両方は、ブラークステージＩＩＩ～ＩＶおよびＶ～ＶＩでの領域において相関し、ＭＣＩ患者では、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７は、ブラークステージＩＩＩ～ＩＶおよびＶ～ＶＩでの領域Ｉ～ＩＩにおいて^１８Ｆ－Ｆｌｏｒｔａｕｃｉｐｉｒと相関し、一方、ｈＴａｕ－ｐＴ１８１は、ブラークステージＩ～ＩＩでの領域においてのみ相関する。重要なことに、領域的な^１８Ｆ－ＦｌｏｒｔａｕｃｉｐｉｒとｈＴａｕ－ｐＴ２１７イムノアッセイとの間の相関は、３つすべての診断群において（ＣＵ、ＭＣＩおよびＡＤ）、すべての領域にわたって（ブラークステージＩ～ＩＩ、ＩＩＩ～ＩＶおよびＶ～ＶＩ）、ｈＴａｕ－ｐＴ１８１イムノアッセイと^１８Ｆ－Ｆｌｏｒｔａｕｃｉｐｉｒとの間の相関を上回る統計的に有意なｐ＜０．００１～０．０１６）改善を示す。

ｈＴａｕ－ｐＴ２１７イムノアッセイの相関係数は、すべての領域にわたって、^１８Ｆ－Ｆｌｏｒｔａｕｃｉｐｉｒについて、ｈＴａｕ－ｐＴ１８１イムノアッセイと比較して一貫してより高い、統計的に有意な（すべてｐ＜０．００１）値、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７（０．６９８～０．７５２）対ｈＴａｕ－ｐＴ１８１（０．５７２～０．７０６）、を示す。さらに、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７イムノアッセイは、すべての領域において、病理学的^１８Ｆ－Ｆｌｏｒｔａｕｃｉｐｉｒ状態の統計的に有意な（ｐ＜０．００１）より正確な予測因子であると判明する（ｈＴａｕ－ｐＴ２１７、ＡＵＣ ０．８９０～０．９２９、ｈＴａｕ－ｐＴ１８１イムノアッセイ、ＡＵＣ ０．８５９～０．９０４）。さらに、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７イムノアッセイは、ＡＤ神経変性疾患の非ＡＤ神経変性疾患からの区別において、ｈＴａｕ－ｐＴ１８１イムノアッセイを上回る統計的に有意な（ｐ＝０．０２６）改善されたパフォーマンスを示す（ｈＴａｕ－ｐＴ２１７、ＡＵＣ ０．９４３、ｈＴａｕ－ｐＴ１８１、ＡＵＣ ０．９１４）。これらの結果は、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７イムノアッセイが、^１８Ｆ－Ｆｌｏｒｔａｕｃｉｐｉｒ神経学的イメージングと相関し、ＡＤを他の神経学的障害およびステージから区別することができ、ｈＴａｕ－ｐＴ１８１イムノアッセイを上回る有意な改善を示すことを示す。

ｈＴａｕ－ｐＴ２１７イムノアッセイはタウＰＥＴ ＳＵＶｒと関連する
タウＰＥＴ ＳＵＶｒは、文献においてタウ病理と関連することが示されている。本明細書に開示されるｈＴａｕ－ｐＴ２１７イムノアッセイは、軽度のＡＤを有する患者からの血漿、血清およびＣＳＦにおけるｈＴａｕ－ｐＴ２１７を測定する研究において、タウＰＥＴ ＳＵＶｒと相関する。簡単に言えば、１９０人の対象は、ベースラインでの血漿におけるｈＴａｕ－ｐＴ２１７イムノアッセイの実施を受ける。この１９０人の対象のうち、１８５人の患者は、タウＰＥＴ ＳＵＶｒアッセイの実施を受ける。データを、スピアマン検定を使用して分析し、有意な相関は、スピアマンρ＝０．４９および未補正ｐ値＜０．００１で観察される。さらに、１８７人の対象は、ベースラインでの血清におけるｈＴａｕ－ｐＴ２１７の決定を受ける。この１８７人の対象のうち、１８２人は、タウＰＥＴ ＳＵＶｒアッセイの実施を受ける。データを、スピアマン検定を使用して分析し、有意な相関は、スピアマンρ＝０．４１、未補正ｐ値＜０．００１で観察される。さらに、８６人の対象は、ベースラインでのＣＳＦにおけるｈＴａｕ－ｐＴ２１７の決定を受ける。この８６人の対象のうち、２９人は、タウＰＥＴ ＳＵＶｒアッセイの実施を受ける。データを、スピアマン検定を使用して分析し、有意な相関は、スピアマンρ＝０．７０、未補正ｐ値＜０．００１で観察される。結果は、タウの病理を特定するための、ＣＳＦ、血漿または血清において測定されるｐＴａｕ２１７レベルの使用を支持する。

ｈＴａｕ－ｐＴ２１７イムノアッセイは軽度のＡＤ認知状態と関連する
軽度のＡＤ対象の血漿、血清およびＣＳＦにおけるｈＴａｕ－ｐＴ２１７の平均値を、上記のイムノアッセイに従って計算する。各マトリックスにおける結果を表４に示す。

本明細書に開示されるｈＴａｕ－ｐＴ２１７イムノアッセイは、軽度のＡＤ患者の認知状態（ミニメンタルステート検査、ＭＭＳＥに基づく）およびＭＭＳＥについてのプラセボに対するベースラインからの変化と関連する。ｈＴａｕ－ｐＴ２１７を、軽度のＡＤを有する患者からの血漿、血清およびＣＳＦにおけるイムノアッセイによって評価する。簡単に言えば、マトリックス（血漿、血清およびＣＳＦ）の各々について、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７の測定（本明細書に記載の）およびベースラインでのＭＭＳＥ評価、ならびにベースライン評価からの変化を有する対象を、スピアマン検定での有意性について評価する。ｈＴａｕ－ｐＴ２１７イムノアッセイは、血漿および血清における認知状態およびベースラインからの変化の両方と統計的に有意な関連を示す（ＣＳＦサンプル数は、統計的有意性のためには低すぎるが、データは、血清および血漿についての評価のようにサンプル数を増加すれば、ＣＳＦが、ＭＭＳＥおよびベースラインからのＭＭＳＥ変化の両方について統計的有意性の関連を有することが予想されるような関連を示す）。結果を表５に示す。

これらの結果は、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７の、認知の尺度であるＭＭＳＥとの横断的関連を示し、認知機能低下の将来のリスクを決定するためのｈＴａｕ－ｐＴ２１７の有用性を示す。

ｈＴａｕ－ｐＴ２１７イムノアッセイはアミロイド状態と関連する
本明細書に開示されるｈＴａｕ－ｐＴ２１７イムノアッセイは、アミロイド状態と関連する。簡単に言えば、ＡＤおよびアミロイド状態（ＰＥＴ神経学的イメージングに基づく）既知の４つの異なる患者群からの血漿サンプルを、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７関連について評価する：（ｉ）未罹患高齢者アミロイド陽性（ＣＵ－Ａ＋）、（ｉｉ）未罹患高齢者アミロイド陰性（ＣＵ－Ａ－）、（ｉｉｉ）高齢者アミロイド陽性ＡＤ（ＡＤ－Ａ＋）、および（ｉｖ）臨床的未罹患若齢者（ＣＵＹ－Ａ－）。各群からのサンプルを、本明細書に記載されるｈＴａｕ－ｐＴ２１７イムノアッセイを用いて分析する。結果を表６に示す。

アミロイド陽性対象の特定のためのｈＴａｕ－ｐＴ２１７イムノアッセイの評価を、スチューデントｔ検定を使用した個別の群についての表６に示す結果の評価によって決定する。結果を表７に示す。

本明細書において提供されるデータは、本開示のｈＴａｕ－ｐＴ２１７アッセイが、アミロイド陽性対象を特定すること、ＡＤのための診断法として作用し、ＡＤに関連する対象の認知状態を決定すること、ＡＤのリスクがある、および／またはＡＤの初期段階にある対象を特定すること、ならびにＡＤの進行の診断法として作用することができることを示す。データはまた、本開示のｈＴａｕ－ｐＴ２１７アッセイが、神経学的イメージング化と相関し、血清、血漿およびＣＳＦのマトリックスにおいて機能的であり、既知のｈＴａｕ－ｐＴ１８１アッセイよりも優れていることを示す。

本開示の例示的な実施形態
１．配列番号１の残基２１７におけるスレオニンでリン酸化されたヒトタウ（「ｈＴａｕ－ｐＴ２１７」）に特異的に結合する抗体。

２．軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む抗体であって、ＬＣＶＲが、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、ＨＣＶＲが、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３のＣＤＲを含み、
ＬＣＤＲ１は、配列番号１３のアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ２は、配列番号１４のアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ３は、配列番号１５のアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ２は、配列番号１１のアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ３は、配列番号１２のアミノ酸配列を有する、抗体。

３．軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む抗体であって、ＬＣＶＲが、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、ＨＣＶＲが、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３のＣＤＲを含み、
ＬＣＤＲ１は、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ２は、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ３は、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ１は、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ２は、配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ３は、配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有する、抗体。

４．
ａ．配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲ、および配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、ならびに
ｂ．配列番号８のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲ、および配列番号６のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、から選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む、実施形態２または３の抗体。

５．
ａ．配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有するＬＣＶＲ、および配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、ならびに
ｂ．配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有するＬＣＶＲ、および配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、から選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む、実施形態２または３の抗体。

６．抗体がヒト化されている、実施形態１～５のいずれかの抗体。

７．抗体がＩｇＧ４重鎖を含む、実施形態１～６のいずれかの抗体。

８．抗体がカッパ軽鎖を含む、実施形態１～７のいずれかの抗体。

９．実施形態１～８のいずれか１つの抗体と、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と、を含む、医薬組成物。

１０．ヒトタウのＣＮＳ発現アイソフォームに特異的に結合する抗体。

１１．抗体が、配列番号１の残基１２４におけるグルタミンと残基１２５におけるアラニンとを含むヒトタウのエピトープ領域に結合する、実施形態１０の抗体。

１２．軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む抗体であって、ＬＣＶＲが、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、ＨＣＶＲが、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３のＣＤＲを含み、
ＬＣＤＲ１は、配列番号２３のアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ２は、配列番号２４のアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ３は、配列番号２５のアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ１は、配列番号２０のアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ２は、配列番号２１のアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ３は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する、抗体。

１３．軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む抗体であって、ＬＣＶＲが、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、ＨＣＶＲが、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３のＣＤＲを含み、
ＬＣＤＲ１は、配列番号２３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ２は、配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ３は、配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ１は、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ２は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ３は、配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有する、抗体。

１４．配列番号１７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、および配列番号１９のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む、実施形態１２または１３の抗体。

１５．配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、および配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む、実施形態１２または１３の抗体。

１６．抗体がヒト化されている、実施形態１０～１５のいずれかの抗体。

１７．抗体がＩｇＧ４重鎖を含む、実施形態１０～１６のいずれかの抗体。

１８．抗体がカッパ軽鎖を含む、実施形態１０～１７のいずれかの抗体。

１９．実施形態１０～１８のいずれか１つの抗体と、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、医薬組成物。

２０．神経変性疾患を治療する方法であって、有効量の、実施形態１～１９のいずれか１つの抗体、またはその医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む、方法。

２１．神経変性疾患がタウオパチーである、実施形態２０の方法。

２２．タウオパチーが、ＡＤ、ＰＳＰおよびＦＴＤのうちの１つである、実施形態２１の方法。

２３．治療における使用のための、実施形態１～１９のいずれか１つの抗体、またはその医薬組成物。

２４．神経変性疾患の治療における使用のための、実施形態１～１９のいずれか１つの抗体、またはその医薬組成物。

２５．神経変性疾患がタウオパチーである、実施形態２４の抗体、またはその医薬組成物。

２６．タウオパチーが、ＡＤ、ＰＳＰおよびＦＴＤからなる群から選択される、実施形態２５の抗体、またはその医薬組成物。

２７．神経変性疾患の治療のための医薬の製造における使用のための、実施形態１～１９のいずれか１つの抗体、またはその医薬組成物。

２８．神経変性疾患がタウオパチーである、実施形態２７の抗体、またはその医薬組成物。

２９．タウオパチーが、ＡＤ、ＰＳＰおよびＦＴＤからなる群から選択される、実施形態２８の抗体、またはその医薬組成物。

３０．患者サンプルにおけるｈＴａｕ－ｐＴ２１７を検出する方法であって、
患者サンプルを、実施形態１～８のいずれか１つの抗体と接触させるステップと、接触させるステップによって提供されるシグナルを検出するステップと、を含む、方法。

３１．患者サンプルにおけるｈＴａｕ－ｐＴ２１７を定量化する方法であって、
患者サンプルを、実施形態１～８のいずれか１つの抗体と接触させるステップと、接触させるステップによって提供されるシグナルを検出するステップと、を含む、方法。

３２．対照標準を抗体と接触させるステップと、対照標準を接触させるステップによって提供されるシグナルを検出するステップとをさらに含む、実施形態３１の方法。

３３．患者サンプルにおけるｈＴａｕ－ｐＴ２１７を定量化する方法であって、患者サンプルを、実施形態１～８の抗体と接触させるステップと、患者サンプルを第２の抗体と接触させるステップであって、第２の抗体は、実施形態１０～１８の抗体であり、抗体および第２の抗体のうちの１つは、検出可能な標識を含む、ステップと、抗体、第２の抗体およびｈＴａｕ－ｐＴ２１７を含む複合体の形成に際して検出可能な標識によって提供されるシグナルを検出するステップと、対照標準を抗体と接触させるステップと、対照標準を第２の抗体と接触させるステップであって、抗体および第２の抗体のうちの１つは、検出可能な標識を含む、ステップと、抗体、第２の抗体および対照標準を含む複合体の形成に際して検出可能な標識によって提供されるシグナルを検出するステップと、を含む、方法。

３４．患者を（ｉ）神経変性疾患を有する、（ｉｉ）神経変性疾患を有するリスクがある、（ｉｉｉ）神経変性疾患のための治療の必要性がある、または（ｉｖ）神経学的イメージングの必要性がある、のうちの１つ以上として診断する方法であって、患者サンプルを、実施形態１～８のいずれか１つの抗体と接触させるステップと、患者サンプル中のｈＴａｕ－ｐＴ２１７と抗体との間の結合を検出するステップと、を含む、方法。

３５．患者サンプルにおいて検出されるｈＴａｕ－ｐＴ２１７のレベルが参照レベルを上回る場合に、特許を（ｉ）神経変性疾患を有する、（ｉｉ）神経変性疾患を有するリスクがある、（ｉｉｉ）神経変性疾患のための治療の必要性がある、または（ｉｖ）神経学的イメージングの必要性がある、のうちの１つとして診断するステップをさらに含む、実施形態３４の方法。

３６．患者における神経変性疾患を診断および治療する方法であって、患者サンプルを、実施形態１～１８のいずれか１つの抗体と接触させるステップと、患者サンプル中のｈＴａｕ－ｐＴ２１７と抗体との間の結合を検出するステップと、神経変性疾患を有する患者を診断するステップと、治療有効量の抗ヒトタウ抗体を、診断された患者に投与するステップと、を含む、方法。

３７．診断するステップが、患者サンプルにおけるｈＴａｕ－ｐＴ２１７の存在が参照レベルを上回る場合に、患者を神経変性疾患を有するとして診断することを含む、実施形態３６の方法。

３８．患者サンプルにおけるｈＴａｕ－ｐＴ２１７を定量化するステップをさらに含む、実施形態３１～３７のいずれかの方法。

３９．ｈＴａｕ－ｐＴ２１７を定量化するステップが、患者サンプルにおけるｈＴａｕ－ｐＴ２１７を参照標準に対して定量化することを含む、実施形態３８の方法。

４０．患者サンプルが、血液、血漿、血清またはＣＳＦのうちの１つである、実施形態３０～３９のいずれかの方法。

４１．患者サンプルを第２の抗体と接触させるステップをさらに含み、第２の抗体が、抗体と重複しないｈＴａｕ－ｐＴ２１７のエピトープ領域に結合する、実施形態３０～３２および３４～４０のいずれかの方法。

４２．抗体または第２の抗体のうちの１つが、検出可能な標識を含み、検出するステップが、抗体、第２の抗体およびｈＴａｕ－ｐＴ２１７を含む複合体の形成に際して検出可能な標識によって提供されるシグナルを検出することを含む、実施形態４１の方法。

４３．抗体および第２の抗体のうちの１つが、基材上に固定化されている、実施形態４１～４２のいずれかの方法。

４４．患者サンプルを抗体と接触させるステップと、患者サンプルを第２の抗体と接触させるステップとが、同時に行われる、実施形態３０～４３のいずれかの方法。

４５．第２の抗体が、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ＬＣＶＲが、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、ＨＣＶＲが、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３のＣＤＲを含み、
ＬＣＤＲ１は、配列番号２３のアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ２は、配列番号２４のアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ３は、配列番号２５のアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ１は、配列番号２０のアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ２は、配列番号２１のアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ３は、配列番号２２のアミノ酸配列を有する、実施形態３２および４１～４４のいずれかの方法。

４６．第２の抗体が、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ＬＣＶＲが、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、ＨＣＶＲが、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３のＣＤＲを含み、
ＬＣＤＲ１は、配列番号２３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ２は、配列番号２４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ３は、配列番号２５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ１は、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ２は、配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ３は、配列番号２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有する、実施形態３３および４１～４４のいずれかの方法。

４７．第２の抗体が、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ＬＣＶＲが、配列番号１９のアミノ酸配列を有し、ＨＣＶＲが、配列番号１７のアミノ酸配列を有する、実施形態４６～４７のいずれかの方法。

４８．第２の抗体が、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、
ＬＣＶＲが、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有し、ＨＣＶＲが、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の相同性を有するアミノ酸配列を有する、実施形態４６～４７のいずれかの方法。

４９．第１の抗体と、第２の抗体と、ＣＮＳにおいて発現され、配列番号１の残基２１７のスレオニンでリン酸化されたヒトタウとの間で複合体を形成する方法であって、患者サンプルを第１の抗体と接触させることであって、第１の抗体は、実施形態１～８のうちの１つの抗体である、接触させることと、患者サンプルを第２の抗体と接触させることであって、第２の抗体は、実施形態１０～１８のうちの１つの抗体である、接触させることと、を含む、方法。

５０．ＣＮＳにおいて発現され、配列番号１の残基２１７のスレオニンでリン酸化されたヒトタウを検出するためのアッセイであって、実施形態１～８のうちの１つの抗体と、実施形態１０～１８のうちの１つの抗体と、を含む、アッセイ。

５１．抗体のうちの１つが、検出可能な標識を含む、実施形態５０のアッセイ。

配列表
配列番号１（ｈＴａｕ－ｐＴ２１７）
ＭＡＥＰＲＱＥＦＥＶＭＥＤＨＡＧＴＹＧＬＧＤＲＫＤＱＧＧＹＴＭＨＱＤＱＥＧＤＴＤＡＧＬＫＥＳＰＬＱＴＰＴＥＤＧＳＥＥＰＧＳＥＴＳＤＡＫＳＴＰＴＡＥＤＶＴＡＰＬＶＤＥＧＡＰＧＫＱＡＡＡＱＰＨＴＥＩＰＥＧＴＴＡＥＥＡＧＩＧＤＴＰＳＬＥＤＥＡＡＧＨＶＴＱＡＲＭＶＳＫＳＫＤＧＴＧＳＤＤＫＫＡＫＧＡＤＧＫＴＫＩＡＴＰＲＧＡＡＰＰＧＱＫＧＱＡＮＡＴＲＩＰＡＫＴＰＰＡＰＫＴＰＰＳＳＧＥＰＰＫＳＧＤＲＳＧＹＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲＴＰＳＬＰＴＰＰＴＲＥＰＫＫＶＡＶＶＲＴＰＰＫＳＰＳＳＡＫＳＲＬＱＴＡＰＶＰＭＰＤＬＫＮＶＫＳＫＩＧＳＴＥＮＬＫＨＱＰＧＧＧＫＶＱＩＩＮＫＫＬＤＬＳＮＶＱＳＫＣＧＳＫＤＮＩＫＨＶＰＧＧＧＳＶＱＩＶＹＫＰＶＤＬＳＫＶＴＳＫＣＧＳＬＧＮＩＨＨＫＰＧＧＧＱＶＥＶＫＳＥＫＬＤＦＫＤＲＶＱＳＫＩＧＳＬＤＮＩＴＨＶＰＧＧＧＮＫＫＩＥＴＨＫＬＴＦＲＥＮＡＫＡＫＴＤＨＧＡＥＩＶＹＫＳＰＶＶＳＧＤＴＳＰＲＨＬＳＮＶＳＳＴＧＳＩＤＭＶＤＳＰＱＬＡＴＬＡＤＥＶＳＡＳＬＡＫＱＧＬ

配列番号２（例示的なウサギ抗ｈＴａｕ－ｐＴ２１７抗体のＨＣ）
ＱＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＬＳＰＳＷＹＧＶＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＬＲＡＧＳＨＴＹＹＡＧＷＡＫＧＲＦＡＩＳＫＴＳＴＴＶＡＬＫＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＩＹＦＣＧＳＶＧＲＧＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＬＧＱＰＫＡＰＳＶＦＰＬＡＰＣＣＧＤＴＰＳＳＴＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＬＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧＴＬＴＮＧＶＲＴＦＰＳＶＲＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＳＶＴＳＳＳＱＰＶＴＣＮＶＡＨＰＡＴＮＴＫＶＤＫＴＶＡＰＳＴＣＳＫＰＴＣＰＰＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＤＤＰＥＶＱＦＴＷＹＩＮＮＥＱＶＲＴＡＲＰＰＬＲＥＱＱＦＮＳＴＩＲＶＶＳＴＬＰＩＡＨＱＤＷＬＲＧＫＥＦＫＣＫＶＨＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＲＧＱＰＬＥＰＫＶＹＴＭＧＰＰＲＥＥＬＳＳＲＳＶＳＬＴＣＭＩＮＧＦＹＰＳＤＩＳＶＥＷＥＫＮＧＫＡＥＤＮＹＫＴＴＰＡＶＬＤＳＤＧＳＹＦＬＹＳＫＬＳＶＰＴＳＥＷＱＲＧＤＶＦＴＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＩＳＲＳＰＧＫ

配列番号３（例示的なウサギ抗ｈＴａｕ－ｐＴ２１７抗体のＨＣＶＲ）
ＱＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＬＳＰＳＷＹＧＶＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＬＲＡＧＳＨＴＹＹＡＧＷＡＫＧＲＦＡＩＳＫＴＳＴＴＶＡＬＫＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＩＹＦＣＧＳＶＧＲＧＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＬ

配列番号４（例示的なウサギ抗ｈＴａｕ－ｐＴ２１７抗体のＬＣ）
ＡＱＶＬＴＱＴＡＳＰＶＳＡＴＶＧＧＴＶＴＩＮＣＱＡＳＬＡＶＹＮＮＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＲＬＩＹＬＡＳＳＬＳＳＧＶＳＳＨＦＫＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＤＶＱＡＤＤＡＡＴＹＦＣＱＧＳＹＤＣＴＩＡＤＣＶＡＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＧＤＰＶＡＰＴＶＬＩＦＰＰＡＡＤＱＶＡＴＧＴＶＴＩＶＣＶＡＮＫＹＦＰＤＶＴＶＴＷＥＶＤＧＴＴＱＴＴＧＩＥＮＳＫＴＰＱＮＳＡＤＮＴＹＮＬＳＳＴＬＴＬＴＳＴＱＹＮＳＨＫＥＹＴＣＫＶＴＱＧＴＴＳＶＶＱＳＦＮＲＧＤＣ

配列番号５（例示的なウサギ抗ｈＴａｕ－ｐＴ２１７抗体のＬＣＶＲ）
ＡＱＶＬＴＱＴＡＳＰＶＳＡＴＶＧＧＴＶＴＩＮＣＱＡＳＬＡＶＹＮＮＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＲＬＩＹＬＡＳＳＬＳＳＧＶＳＳＨＦＫＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＤＶＱＡＤＤＡＡＴＹＦＣＱＧＳＹＤＣＴＩＡＤＣＶＡＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫ

配列番号６（例示的なキメラ抗ｈＴａｕ－ｐＴ２１７抗体のＨＣＶＲ）
ＱＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＬＳＰＳＷＹＧＶＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＬＲＡＧＳＨＴＹＹＡＧＷＡＫＧＲＦＡＩＳＫＴＳＴＴＶＡＬＫＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＩＹＦＣＧＳＶＧＲＧＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＬ

配列番号７（例示的なキメラ抗ｈＴａｕ－ｐＴ２１７抗体のＨＣ）
ＱＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＬＳＰＳＷＹＧＶＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＶＬＲＡＧＳＨＴＹＹＡＧＷＡＫＧＲＦＡＩＳＫＴＳＴＴＶＡＬＫＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＩＹＦＣＧＳＶＧＲＧＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＬＡＫＴＴＰＰＳＶＹＰＬＡＰＧＳＡＡＱＴＮＳＭＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＰＳＳＴＷＰＳＥＴＶＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＶＰＲＤＣＧＣＫＰＣＩＣＴＶＰＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＶＬＴＩＴＬＴＰＫＶＴＣＶＶＶＤＩＳＫＤＤＰＥＶＱＦＳＷＦＶＤＤＶＥＶＨＴＡＱＴＱＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＳＶＳＥＬＰＩＭＨＱＤＷＬＮＧＫＥＦＫＣＲＶＮＳＡＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＲＰＫＡＰＱＶＹＴＩＰＰＰＫＥＱＭＡＫＤＫＶＳＬＴＣＭＩＴＤＦＦＰＥＤＩＴＶＥＷＱＷＮＧＱＰＡＥＮＹＫＮＴＱＰＩＭＤＴＤＧＳＹＦＶＹＳＫＬＮＶＱＫＳＮＷＥＡＧＮＴＦＴＣＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨＨＴＥＫＳＬＳＨＳＰＧＫ

配列番号８（例示的なキメラ抗ｈＴａｕ－ｐＴ２１７抗体のＬＣＶＲ）
ＡＱＶＬＴＱＴＡＳＰＶＳＡＴＶＧＧＴＶＴＩＮＣＱＡＳＬＡＶＹＮＮＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＲＬＩＹＬＡＳＳＬＳＳＧＶＳＳＨＦＫＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＤＶＱＡＤＤＡＡＴＹＦＣＱＧＳＹＤＣＴＩＡＤＣＶＡＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫ

配列番号９（例示的なキメラ抗ｈＴａｕ－ｐＴ２１７抗体のＬＣ）
ＡＱＶＬＴＱＴＡＳＰＶＳＡＴＶＧＧＴＶＴＩＮＣＱＡＳＬＡＶＹＮＮＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＲＬＩＹＬＡＳＳＬＳＳＧＶＳＳＨＦＫＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＤＶＱＡＤＤＡＡＴＹＦＣＱＧＳＹＤＣＴＩＡＤＣＶＡＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＮＥＣ

配列番号１０（例示的なＨＣＤＲ１）
ＧＬＳＰＳＷＹＧＶＨ

配列番号１１（例示的なＨＣＤＲ２）
ＶＬＲＡＧＳＨＴＹＹＡＧＷＡＫＧ

配列番号１２（例示的なＨＣＤＲ３）
ＶＧＲＧＩ

配列番号１３（例示的なＬＣＤＲ１）
ＱＡＳＬＡＶＹＮＮＮＹＬＡ

配列番号１４（例示的なＬＣＤＲ２）
ＬＡＳＳＬＳＳ

配列番号１５（例示的なＬＣＤＲ３）
ＬＡＳＳＬＳＳ

配列番号１６（例示的なＣＮＳのみで発現されるヒトタウ結合抗体のＨＣ）
ＱＶＱＬＱＱＷＧＡＧＬＬＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＡＶＹＧＧＳＦＳＰＹＹＷＳＷＩＲＱＰＰＤＫＧＬＥＷＩＧＥＩＮＷＳＧＤＴＮＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＬＤＴＳＫＮＱＦＳＬＮＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＦＤＲＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＲＧＰＴＩＫＰＣＰＰＣＫＣＰＡＰＮＬＬＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＩＫＤＶＬＭＩＳＬＳＰＩＶＴＣＶＶＶＤＶＳＥＤＤＰＤＶＱＩＳＷＦＶＮＮＶＥＶＨＴＡＱＴＱＴＨＲＥＤＹＮＳＴＬＲＶＶＳＡＬＰＩＱＨＱＤＷＭＳＧＫＥＦＫＣＫＶＮＮＫＤＬＰＡＰＩＥＲＴＩＳＫＰＫＧＳＶＲＡＰＱＶＹＶＬＰＰＰＥＥＥＭＴＫＫＱＶＴＬＴＣＭＶＴＤＦＭＰＥＤＩＹＶＥＷＴＮＮＧＫＴＥＬＮＹＫＮＴＥＰＶＬＤＳＤＧＳＹＦＭＹＳＫＬＲＶＥＫＫＮＷＶＥＲＮＳＹＳＣＳＶＶＨＥＧＬＨＮＨＨＴＴＫＳＦＳＲＴＰＧＫ

配列番号１７（例示的なＣＮＳのみで発現されるヒトタウ結合抗体のＨＣＶＲ）
ＱＶＱＬＱＱＷＧＡＧＬＬＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＡＶＹＧＧＳＦＳＰＹＹＷＳＷＩＲＱＰＰＤＫＧＬＥＷＩＧＥＩＮＷＳＧＤＴＮＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＬＤＴＳＫＮＱＦＳＬＮＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＦＤＲＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

配列番号１８（例示的なＣＮＳのみで発現されるヒトタウ結合抗体のＬＣ）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＲＳＮＹＦＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＶＳＲＲＡＦＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＡＳＬＩＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ

配列番号１９（例示的なＣＮＳのみで発現されるヒトタウ結合抗体のＬＣＶＲ）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＲＳＮＹＦＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＶＳＲＲＡＦＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＡＳＬＩＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫ

配列番号２０（例示的なＣＮＳのみで発現されるヒトタウ結合抗体のＨＣＤＲ１）
ＡＶＹＧＧＳＦＳＰＹＹＷＳ

配列番号２１（例示的なＣＮＳのみで発現されるヒトタウ結合抗体のＨＣＤＲ２）
ＥＩＮＷＳＧＤＴＮ

配列番号２２（例示的なＣＮＳのみで発現されるヒトタウ結合抗体のＨＣＤＲ３）
ＡＲＳＦＤＲ

配列番号２３（例示的なＣＮＳのみで発現されるヒトタウ結合抗体のＬＣＤＲ１）
ＲＡＳＱＳＶＲＳＮＹＦＡ

配列番号２４（例示的なＣＮＳのみで発現されるヒトタウ結合抗体のＬＣＤＲ２）
ＹＧＶＳＲＲＡＦ

配列番号２５（例示的なＣＮＳのみで発現されるヒトタウ結合抗体のＬＣＤＲ３）
ＱＱＹＧＡＳＬＩＴ

配列番号２６（例示的な免疫化のためのペプチド）
ＲＴＰＳＬＰＴＰＰＴＲ
ここで、残基７におけるＴはリン酸化されている

配列番号２７（例示的な免疫化のためのペプチド）
ＡＥＰＲＱＥＦＥＶＭＥＤＨＡＧＴＹＧＬＧＤＲＫＤＱＧＧＹＴＭＨＱＤＱＥＧＤＴＤＡＧＬＫＥＳＰＬＱＴ ＰＴＥＤＧＳＥＥＰＧＳＥＴＳＤＡＫＳＴＰＴＡＥＤＶＴＡＰＬＶＤＥＧＡＰＧＫＱＡＡＡＱＰＨＴＥＩＰＥ ＧＴＴＡＥＥＡＧＩＧＤＴＰＳＬＥＤＥＡＡＧＨＶＴＱＥＰＥＳＧＫＶＶＱＥＧＦＬＲＥＰＧＰＰ ＧＬＳＨＱＬＭＳＧＭＰＧＡＰＬＬＰＥＧＰＲＥＡＴＲＱＰ ＳＧＴＧＰＥＤＴＥＧＧＲＨＡＰＥＬＬＫＨＱ ＬＬＧＤＬＨＱＥＧＰＰＬＫＧＡＧＧＫＥ ＲＰＧＳＫＥＥＶＤＥＤＲＤＶＤＥＳＳＰＱ ＤＳＰＰＳＫＡＳＰＡ
ＱＤＧＲＰＰＱＴＡＡＲＥＡＴＳＩＰＧＦＰＡＥＧＡＩＰＬＰＶＤＦＬＳＫＶＳＴＥＩＰＡＳＥＰＤＧＰＳＶＧ ＲＡＫＧＱＤＡＰＬＥＦＴＦＨＶＥＩＴＰＮＶＱＫＥＱＡＨＳＥＥＨＬＧＲＡＡＦＰＧＡＰＧＥＧＰＥＡＲＧＰ ＳＬＧＥＤＴＫＥＡＤ ＬＰＥＰＳＥＫＱＰＡＡＡＰＲＧＫＰＶＳＲＶＰＱＬＫＡＲＭＶＳ ＫＳＫＤＧＴＧＳＤＤ ＫＫＡＫＴＳＴＲＳＳＡＫＴＬＫＮＲＰＣＬＳＰＫＨＰＴＰＧＳＳＤＰＬＩＱＰＳＳＰＡＶＣＰＥＰＰＳＳＰＫＹＶＳＳＶＴ ＳＲＴＧ ＳＳＧＡＫＥＭＫＬＫＧＡＤＧＫＴＫＩＡＴ ＰＲＧＡＡＰＰＧＱＫＧＱＡＮＡＴＲＩＰＡＫＴＰＰ ＡＰＫＴＰＰＳＳＧＥＰＰＫＳＧＤＲＳＧＹＳＳＰＧＳＰＧＴＰＧＳＲＳＲＴＰ ＳＬＰＴＰＰＴＲＥＰ
ＫＫＶＡＶＶＲＴＰＰＫＳＰＳＳＡＫＳＲＬＱＴＡＰＶＰＭＰＤＬＫＮＶＫＳＫＩＧＳＴＥＮＬＫＨＱＰＧＧＧ ＫＶＱＩＩＮＫＫＬＤＬＳＮＶＱＳＫＣＧＳＫＤＮＩＫＨＶＰＧＧＧＳＶＱＩＶＹＫＰＶＤＬＳＫＶＴＳＫＣ ＧＳＬＧＮＩＨＨＫＰＧ ＧＧＱＶＥＶＫＳＥＫＬＤＦＫＤＲＶＱＳＫＩＧＳＬＤＮＩＴＨＶＰＧＧＧ ＮＫＫＩＥＴＨＫＬＴＦＲ ＥＮＡＫＡＫＴＤＨＧＡＥＩＶＹＫＳＰＶＶＳＧＤＴ
ＳＰＲＨＬＳＮＶＳＳＴＧＳＩＤＭＶＤＳＰＱＬＡＴＬＡＤＥＶＳＡＳＬＡＫＱＧＬ

Claims (18)

1. 患者から採取されたサンプルにおける配列番号１の残基２１７におけるスレオニンでリン酸化されたヒトタウ（「ｈＴａｕ－ｐＴ２１７」）を検出する方法であって、前記方法が、
   前記サンプルを、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７に特異的に結合する第１の抗体と接触させるステップと、
   前記サンプルを第２の抗体と接触させるステップであって、前記第２の抗体は、前記第１の抗体と重複しないｈＴａｕ－ｐＴ２１７のエピトープ領域に結合する、ステップと、
   前記第１の抗体のｈＴａｕ－ｐＴ２１７との結合を検出するステップと、を含むことを特徴とし、
   前記第２の抗体は、ヒトタウのＣＮＳ発現アイソフォームに特異的に結合し、前記第２の抗体は、配列番号１の残基１２４におけるグルタミンと残基１２５におけるアラニンとを含むヒトタウのエピトープ領域に結合する、方法。
2. 前記方法が、前記サンプルにおけるｈＴａｕ－ｐＴ２１７を定量化するステップをさらに含むことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
3. 患者を（ｉ）神経変性疾患を有する、（ｉｉ）神経変性疾患を有するリスクがある、（ｉｉｉ）神経変性疾患のための治療の必要性がある、または（ｉｖ）神経学的イメージングの必要性がある、のうちの１つまたはそれ以上として診断することを補助するための方法であって、前記方法が、
   患者から採取されたサンプルを、ｈＴａｕ－ｐＴ２１７に特異的に結合する第１の抗体と接触させるステップと、
   前記サンプルを第２の抗体と接触させるステップであって、前記第２の抗体は、前記第１の抗体と重複しないｈＴａｕ－ｐＴ２１７のエピトープ領域に結合する、ステップと、
   前記サンプル中のｈＴａｕ－ｐＴ２１７と前記第１の抗体との間の結合を検出するステップと、を含むことを特徴とし、
   前記第２の抗体は、ヒトタウのＣＮＳ発現アイソフォームに特異的に結合し、前記第２の抗体は、配列番号１の残基１２４におけるグルタミンと残基１２５におけるアラニンとを含むヒトタウのエピトープ領域に結合する、方法。
4. 前記方法が、前記サンプルにおいて検出されるｈＴａｕ－ｐＴ２１７のレベルが参照レベルを上回る場合に、前記患者を（ｉ）神経変性疾患を有する、（ｉｉ）神経変性疾患を有するリスクがある、（ｉｉｉ）神経変性疾患のための治療の必要性がある、または（ｉｖ）神経学的イメージングの必要性がある、のうちの１つとして診断することを補助するステップをさらに含む、請求項３に記載の方法。
5. 前記方法が、前記患者を神経変性疾患を有するとして診断することを補助するステップをさらに含み、前記神経変性疾患がタウオパチーである、請求項３に記載の方法。
6. 前記タウオパチーが、アルツハイマー病（ＡＤ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）および前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）からなる群から選択される、請求項５に記載の方法。
7. 前記サンプルが、血液、血漿、血清またはＣＳＦのうちの１つから採取されたものである、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
8. 前記第１の抗体または前記第２の抗体のうちの１つが、検出可能な標識を含み、前記検出するステップが、前記第１の抗体、前記第２の抗体およびｈＴａｕ－ｐＴ２１７を含む複合体の形成に際して前記検出可能な標識によって提供されるシグナルを検出することを含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
9. ｈＴａｕ－ｐＴ２１７に特異的に結合する前記第１の抗体が、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、前記ＬＣＶＲが、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、前記ＨＣＶＲが、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３のＣＤＲを含み、前記ＣＤＲのアミノ酸配列が、
   （ａ）ＬＣＤＲ１は、配列番号１３のアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ２は、配列番号１４のアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ３は、配列番号１５のアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ２は、配列番号１１のアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ３は、配列番号１２のアミノ酸配列を有するか、あるいは
   （ｂ）ＬＣＤＲ１は、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ２は、配列番号１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、ＬＣＤＲ３は、配列番号１５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ１は、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ２は、配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、ＨＣＤＲ３は、配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有することから選択される、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
10. 前記第１の抗体の前記ＬＣＶＲおよびＨＣＶＲが、
    ａ．配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲ、および配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、
    ｂ．配列番号８のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲ、および配列番号６のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、
    ｃ．配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＬＣＶＲ、および配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、ならびに
    ｄ．配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＬＣＶＲ、および配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、から選択される、請求項９に記載の方法。
11. 前記タウオパチーがアルツハイマー病（ＡＤ）である、請求項６に記載の方法。
12. 前記サンプルがＣＳＦである、請求項７に記載の方法。
13. 前記サンプルが血漿である、請求項７に記載の方法。
14. 前記第１の抗体および前記第２の抗体のうちの１つが、基材上に固定化されている、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
15. 前記基材が、マイクロウェルプレートまたはビーズのうちの１つから選択される、請求項１４に記載の方法。
16. 前記サンプルを前記第１の抗体と接触させる前記ステップと、前記サンプルを前記第２の抗体と接触させる前記ステップとが、同時に行われる、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
17. 前記検出可能な標識が、化学発光または酵素標識である、請求項８に記載の方法。
18. 前記方法が、前記患者を神経学的イメージングの必要性があるとして診断することを補助するステップをさらに含むことを特徴とし、前記神経学的イメージングがＡｍｙｖｉｄ（登録商標）またはｆｌｏｒｔａｕｃｉｐｉｒである、請求項３に記載の方法。

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