KR20220004118A - 인간 타우를 표적화하는 화합물 및 방법 - Google Patents

인간 타우를 표적화하는 화합물 및 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 AD, PSP 및 FTD와 같은 신경변성 질환 분야에 유용한 치료 항체, 제약 조성물 및 진단 적용을 포함하는, 인간 타우, 특히 트레오닌 (217)에서 인산화된 인간 타우 및 CNS에서만 발현되는 타우의 이소형을 표적화하는 화합물 및 방법을 제공한다.

Description

인간 타우를 표적화하는 화합물 및 방법
본 발명은 의학 분야이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 인간 타우에 대해 지정된 항체 또는 그의 단편을 포함하는 화합물, 제약 조성물, 진단 및 방법에 관한 것이다. 본 발명의 화합물 및 방법은 신경변성 질환, 특히 알츠하이머병 (AD), 진행성 핵상 마비 (PSP) 및 전두측두엽 치매 (FTD) 등을 포함한 타우병증의 치료 및 그와 관련된 진단을 포함하여 상기 질환 분야에 유용할 것으로 예상된다.
타우는 중추 신경계 ("CNS") 및 말초 둘 다에서 발현되는 축삭 미세소관 결합 단백질이며, 이는 미세소관 조립 및 안정성을 촉진한다. 인간 타우의 공지된 이소형은 CNS에서 발현되고, 뉴런내 신경원섬유 매듭 ("NFT")의 비정상적인 형성 및 응집에 수반된다. AD와 같은 신경변성 질환에서, CNS NFT의 밀도 및 신경해부학적 국재화는 치매의 중증도, 뉴런 손실의 정도 및 전반적인 질환 진행과 상관관계가 있다. PSP에서, CNS NFT 형성도 보여지며, 그의 밀도는 뉴런 손실의 중증도와 상관관계가 있다.
AD는 기억력, 사고력 및 행동에 문제를 일으키는 치매로 특징지워지는 신경변성 질환이다. 알츠하이머 협회에 따르면, 560만명의 65세 이상의 미국인 (즉, 대략 10명 중 1명)이 AD를 갖고, 또 다른 200,000명의 65세 미만의 미국인이 AD를 갖는 것으로 추정된다. 알츠하이머 협회는 또한 AD를 갖는 65세 이상의 미국인의 수가 2025년까지 26% 넘게 증가할 것으로 예상된다고 지적한다. 이는 상당한 의료 지출을 나타내고; 2019년에만 미국에서 직접적 AD 관련 의료 비용이 2900억 달러에 달하는 것으로 추정되며, 이 수치는 무급 간병인 비용을 포함하지 않는다. AD에 대한 상당한 개인 및 의료 영향에도 불구하고, 현재까지 AD의 치료를 위한 승인된 질환 조절 치료제가 없으며, 이러한 치료는 충족되지 않은 의학적 요구로 남아 있다.
또한, 질환 조절 치료의 발견 및/또는 개발을 돕기 위해서는 AD에 대한 신뢰할 수 있고 민감한 진단이 필요하다. AD에 대해 승인된 진단 적용은 아미비드(Amyvid)™이다. 플로르타우시피르는 현재 FDA 검토 중인 AD에 대한 진단 적용이다. 아미비드™ 및 플로르타우시피르 둘 다는 AD 및 다른 신경변성 질환의 검출 및 병기결정에 유용한 방사성 동위원소의 신경학적 영상화제이다. 또한, 환자 샘플에서 인간 타우의 잔기 181 (서열식별번호(SEQ ID NO): 1에 기초한 잔기 번호)에서의 인산화된 트레오닌 ("hTau-pT181")을 표적화하는 진단 검정이 최근에 개시되었다. 그러나, hTau-pT181 진단 적용은 혈액, 혈장 및 뇌척수액 ("CSF") 검정에서 환자의 상이한 AD 병기 또는 환자 예후를 식별하는 것과 같은 진단 시험에 필요한 민감도가 부족하다. 따라서, 더 저렴하고 덜 침습적인 진단 옵션을 제공하고 또한 민감하고 신뢰할 수 있는 혈액, 혈장 및/또는 CSF를 사용한 시험에 적용가능한 진단제가 필요하다. 바람직하게는, 이러한 진단제는 (예를 들어, AD의 병기 또는 예후에 기초하여) AD 환자 사이를 식별 및/또는 구별할 수 있을 것이다. 이러한 진단은 또한 바람직하게는 효과적인 치료 반응 사이를 식별 및/또는 구별할 수 있을 것이다. 실시양태에서, 이러한 진단제는 또한 바람직하게는 추가 진단 평가를 필요로 하는 환자, 예를 들어, 플로르타우시피르 및/또는 아미비드와 같은 신경학적 영상화가 적절한 환자 사이를 식별 및/또는 구별할 수 있을 것이다.
따라서, 한 실시양태에서, 본 개시내용은 잔기 217 (서열식별번호: 1에 기초한 잔기 번호)에서의 트레오닌에서 인산화된 인간 타우 ("hTau-pT217")에 대해 지정된 항체 및 그의 제약 조성물 뿐만 아니라 이러한 항체 및 제약 조성물을 사용하는 방법 및 진단 적용을 제공한다. 또한, 본 개시내용의 실시양태에 따르면, (예를 들어, CNS에서 발현되는 이소형은 인식하고 CNS 외부에서만 발현되는 인간 타우의 이소형은 인식하지 않는) CNS에서 발현되는 인간 타우의 이소형에 대해 지정된 항체 및 그의 제약 조성물이 제공된다.
일부 실시양태에 따르면, hTau-pT217에 특이적으로 결합하는 항체가 제공된다. 보다 구체적인 실시양태에서, 서열식별번호: 1의 잔기 217에서의 인산화된 트레오닌을 포함하는 인간 타우의 에피토프 영역에 결합하는 항체가 제공되며, 여기서 이러한 항체는 서열식별번호: 1의 잔기 217에서의 트레오닌이 인산화되지 않는 경우 인간 타우에 결합하지 않는다. 본 개시내용의 보다 더 구체적인 실시양태에서, 이러한 항체는 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하며, 여기서 LCVR은 상보성 결정 영역 (CDR) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, HCVR은 CDR HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하며, 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 갖고, LCDR2는 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 갖고, LCDR3은 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 갖고, HCDR1은 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖고, HCDR2는 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 갖고, HCDR3은 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, LCDR1은 서열식별번호: 13의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고, LCDR2는 서열식별번호: 14의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고, LCDR3은 서열식별번호: 15의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고, HCDR1은 서열식별번호: 10의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고, HCDR2는 서열식별번호: 11의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고, HCDR3은 서열식별번호: 12의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다. 본 개시내용에 의해 제공되는 항체의 일부 실시양태에 따르면, LCVR은 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖고 HCVR은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 갖는다. 본 개시내용에 의해 제공되는 항체의 일부 실시양태에서, LCVR은 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 갖고 HCVR은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 추가 실시양태에서, LCVR은 서열식별번호: 5의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고 HCVR은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다. 또 다른 추가의 실시양태에서, LCVR은 서열식별번호: 8의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고 HCVR은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다.
본 개시내용의 실시양태에 따르면, 인간 타우의 CNS-발현된 이소형 (예를 들어, CNS에서 발현되는 인간 타우의 공지된 이소형)에 특이적으로 결합하는 항체가 제공되며, 이러한 항체는 말초 신경계를 포함한 CNS의 외부 영역에서만 발현되는 인간 타우의 이소형에는 결합하지 않는다. 특정한 실시양태에 따르면, 인간 타우의 CNS-발현된 이소형에 특이적으로 결합하는 이러한 항체는 서열식별번호: 1의 잔기 124 (글루타민) 및 125 (알라닌)를 포함하는 인간 타우의 에피토프 영역에 결합한다. 구체적인 실시양태에서, 이러한 항체는 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하며, 여기서 LCVR은 상보성 결정 영역 (CDR) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, HCVR은 CDR HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하며, 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 갖고, LCDR2는 서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 갖고, LCDR3은 서열식별번호: 25의 아미노산 서열을 갖고, HCDR1은 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 갖고, HCDR2는 서열식별번호: 21의 아미노산 서열을 갖고, HCDR3은 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, LCDR1은 서열식별번호: 23의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고, LCDR2는 서열식별번호: 24의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고, LCDR3은 서열식별번호: 25의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고, HCDR1은 서열식별번호: 20의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고, HCDR2는 서열식별번호: 21의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고, HCDR3은 서열식별번호: 22의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다. 본 개시내용에 의해 제공된 항체의 일부 실시양태에 따르면, LCVR은 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 갖고 HCVR은 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 추가 실시양태에서, LCVR은 서열식별번호: 17의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고 HCVR은 서열식별번호: 19의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시양태에 따르면, 본 개시내용의 항체는 인간화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 IgG4 중쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 카파 경쇄를 포함한다. 또 다른 추가의 실시양태에 따르면, 본 개시내용은 본 개시내용의 항체 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
또 다른 추가의 실시양태에 따르면, 본 개시내용은 신경변성 질환의 치료를 필요로 하는 환자에게 유효량의 본 개시내용의 항체 또는 그의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 신경변성 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 이러한 실시양태에서, 신경변성 질환은 타우병증이다. 보다 더 구체적인 실시양태에서, 타우병증은 AD, PSP 및 FTD 중 하나이다.
일부 실시양태에 따르면, 본 개시내용은 요법에 사용하기 위한 본 개시내용의 항체 또는 그의 제약 조성물을 제공한다. 추가로, 본 개시내용의 항체 또는 그의 제약 조성물은 신경변성 질환의 치료에 사용하기 위해 제공된다. 일부 이러한 실시양태에서, 신경변성 질환은 타우병증이다. 일부 보다 구체적인 실시양태에서, 타우병증은 AD, PSP 및 FTD로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 개시내용의 일부 실시양태에 따르면, 신경변성 질환의 치료를 위한 의약의 제조에 사용하기 위한 본 개시내용의 항체 또는 그의 제약 조성물이 제공된다. 일부 이러한 실시양태에서, 신경변성 질환은 타우병증이다. 보다 더 구체적인 실시양태에서, 타우병증은 AD, PSP 및 FTD로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 개시내용의 추가 실시양태에 따르면, 환자 샘플에서 hTau-pT217을 검출하는 방법이 제공된다. 이러한 방법은 환자 샘플을 hTau-pT217에 특이적으로 결합하는 본 개시내용의 항체와 접촉시키는 단계, 및 상기 접촉 단계에 의해 제공되는 신호를 검출하는 단계를 포함한다.
실시양태에 따르면, 인간 타우의 CNS-발현된 이소형만을 검출하는 방법이 제공된다. 이러한 방법은 환자 샘플을 CNS에서 발현되는 인간 타우의 이소형에 특이적으로 결합하는 (즉, CNS 외부에서만 발현되는 인간 타우의 이소형에는 결합하지 않는) 본 개시내용의 항체와 접촉시키는 단계 및 상기 접촉 단계에 의해 제공되는 신호를 검출하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에 따르면, 환자 샘플에서 hTau-pT217을 정량화하는 방법이 제공된다. 이러한 방법은 환자 샘플을 hTau-pT217에 특이적으로 결합하는 본 개시내용의 항체와 접촉시키는 단계 및 상기 접촉 단계에 의해 제공되는 신호를 검출하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 이러한 방법은 대조 표준물을 항체와 접촉시키는 단계 및 대조 표준물을 접촉시키는 상기 단계에 의해 제공되는 신호를 검출하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 환자 샘플에서 hTau-pT217을 정량화하는 방법이 본 개시내용에 의해 제공된다. 이러한 방법은 환자 샘플을 hTau-pT217에 특이적으로 결합하는 본 개시내용의 항체와 접촉시키는 단계 및 환자 샘플을 인간 타우의 CNS-발현된 이소형에 특이적으로 결합하는 본 개시내용의 항체와 접촉시키며, 여기서 항체는 항체의 중첩 에피토프 영역에 결합하지 않고 항체 중 하나는 검출가능한 표지를 포함하는 것인 단계; 항체 및 hTau-pT217을 포함하는 복합체의 형성 시 검출가능한 표지에 의해 제공되는 신호를 검출하는 단계; 대조 표준물을 항체와 접촉시키는 단계; 및 항체 및 대조 표준물을 포함하는 복합체의 형성 시 검출가능한 표지에 의해 제공되는 신호를 검출하는 단계를 포함한다.
본 개시내용의 일부 실시양태에 따르면, 환자를 (i) 신경변성 질환을 갖는 것; (ii) 신경변성 질환을 가질 위험이 있는 것; (iii) 신경변성 질환에 대한 치료를 필요로 하는 것; (iv) AD 브락(Braak) 병기 I, II, III, IV, V 또는 VI에 있는 것; 또는 (v) 신경학적 영상화를 필요로 하는 것 중 하나 이상으로 진단하는 방법이 제공된다. 이러한 실시양태에 따르면, 이러한 방법은 환자 샘플을 hTau-pT217에 특이적으로 결합하는 본 개시내용의 항체와 접촉시키는 단계 및 환자 샘플에서 항체와 hTau-pT217 사이의 결합을 검출하는 단계를 포함한다. 일부 이러한 실시양태에서, 방법은 환자 샘플에서 검출된 hTau-pT217의 수준이 참조 수준을 초과하는 경우에 환자를 (i) 신경변성 질환을 갖는 것; (ii) 신경변성 질환을 가질 위험이 있는 것; (iii) 신경변성 질환에 대한 치료를 필요로 하는 것; (iv) AD 브락 병기 I, II, III, IV, V 또는 VI에 있는 것; 또는 (v) 신경학적 영상화를 필요로 하는 것 중 하나로 진단하는 단계를 포함한다.
본 개시내용의 일부 실시양태에서, 환자에서 신경변성 질환을 진단 및 치료하는 방법이 제공된다. 이러한 실시양태에 따르면, 방법은 환자 샘플을 hTau-pT217에 특이적으로 결합하는 본 개시내용의 항체와 접촉시키는 단계; 환자 샘플에서 항체와 hTau-pT217 사이의 결합을 검출하는 단계; 신경변성 질환을 갖는 환자를 진단하는 단계; 및 진단된 환자에게 치료 유효량의 항-인간 타우 항체를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 진단 단계는 환자 샘플에서 hTau-pT217의 존재가 참조 수준을 초과하는 경우에 환자를 신경변성 질환을 갖는 것으로 진단하는 것을 포함한다.
본 개시내용의 방법의 일부 실시양태에 따르면, 이러한 방법은 환자 샘플에서 hTau-pT217을 정량화하는 단계를 추가로 포함한다. 이러한 실시양태에서, hTau-pT217을 정량화하는 단계는 환자 샘플에서 hTau-pT217을 참조 표준물과 대비하여 정량화하는 것을 포함한다.
본 개시내용의 방법의 일부 실시양태에 따르면, 환자 샘플은 혈액, 혈장, 혈청 또는 CSF 중 하나이다.
본 개시내용의 방법의 일부 실시양태에 따르면, 방법은 환자 샘플을 hTau-pT217에 특이적으로 결합하는 항체 및 인간 타우의 CNS-발현된 이소형에 특이적으로 결합하는 제2 항체와 접촉시키는 단계를 추가로 포함한다. 일부 이러한 방법에서, 항체 또는 제2 항체 중 하나는 검출가능한 표지를 포함하고, 상기 검출 단계는 항체, 제2 항체 및 hTau-pT217을 포함하는 복합체의 형성 시 검출가능한 표지에 의해 제공되는 신호를 검출하는 것을 포함한다. 일부 이러한 실시양태에 따르면, 항체 및 제2 항체 중 하나는 기판 상에 고정화된다. 본 개시내용의 방법의 일부 실시양태에서, 환자 샘플을 항체와 접촉시키는 단계 및 환자 샘플을 제2 항체와 접촉시키는 단계는 동시에 발생한다. 일부 보다 구체적인 실시양태에 따르면, 제2 항체는 본원에 개시된 바와 같은 인간 타우의 CNS-발현된 이소형에 특이적으로 결합하는 본 개시내용의 항체를 포함한다.
본원에 사용된 "항체"는 디술파이드 결합에 의해 상호연결된 2개의 HC 및 2개의 LC를 포함하는 이뮤노글로불린 분자이다. 각각의 LC 및 HC의 아미노 말단 부분은 그 안에 함유된 CDR을 통한 항원 인식을 주로 담당하는 약 100-120개 아미노산의 가변 영역을 포함한다. CDR은 프레임워크 영역 ("FR")으로 불리는 보다 보존된 영역에 산재되어 있다. 각각의 LCVR 및 HCVR은 아미노 말단으로부터 카르복시 말단으로 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4의 순서로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성된다. LC의 3개의 CDR은 "LCDR1, LCDR2 및 LCDR3"으로 지칭되고, HC의 3개의 CDR은 "HCDR1, HCDR2 및 HCDR3"으로 지칭된다. CDR은 항원과 특이적 상호작용을 형성하는 대부분의 잔기를 함유한다. 특정한 항원에 결합하는 항체의 기능적 능력은 6개의 CDR에 크게 영향을 받는다. 본 발명의 항체의 LCVR 및 HCVR 영역 내의 CDR 도메인에 대한 아미노산의 할당은 널리 공지된 카바트(Kabat) 넘버링 규칙을 기반으로 한다 (Kabat, et al., Ann. NY Acad. Sci. 190:382-93 (1971); Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 (1991)), and North numbering convention (North et al., A New Clustering of Antibody CDR Loop Conformations, Journal of Molecular Biology, 406:228-256 (2011)).
본 개시내용의 일부 실시양태에 따르면, LC는 카파 또는 람다로 분류되고, 각각은 관련 기술분야에 공지된 특정한 불변 영역으로 특징지어진다. 본 개시내용의 일부 실시양태에 따르면, HC는 감마, 뮤, 알파, 델타 또는 엡실론으로 분류되고, 항체의 이소타입을 각각 IgG, IgM, IgA, IgD 또는 IgE로 정의한다. 일부 실시양태에 따르면, 항체는 하위부류, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4로 추가로 분할될 수 있는 IgG HC를 포함한다. 각각의 HC의 카르복시-말단 부분은 주로 이펙터 기능을 담당하는 불변 영역을 정의한다. 특정한 실시양태에서, 본 발명의 항체는 이펙터 기능을 감소시키는 각각의 HC의 불변 영역에 하나 이상의 변형을 갖는다.
본 발명의 항체는 모노클로날 항체이다. 모노클로날 항체는, 예를 들어, 임의의 진핵생물, 원핵생물 또는 파지 클론을 포함하는 단일 카피 또는 클론으로부터 유래되는 항체이며, 그 항체를 생산하는 방법이 아니다. 모노클로날 항체는, 예를 들어 하이브리도마 기술, 재조합 기술, 파지 디스플레이 기술, 합성 기술, 예를 들어, CDR-이식, 또는 이러한 기술 또는 관련 기술분야에 공지된 다른 기술의 조합에 의해 생산될 수 있다.
항체를 생산 및 정제하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있으며, 예를 들어, 문헌 (Harlow and Lane (1988), Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring harbor, N.Y., chapters 5-8 and 15, ISBN 0-87969-314-2)에서 찾을 수 있다. 예를 들어, 마우스 또는 토끼는 hTau-pT217로 면역화될 수 있고, 생성된 항체는 관련 기술분야에 널리 공지된 통상적인 방법을 이용하여 회수되고, 정제되고, 아미노산 서열이 결정될 수 있다. 유사하게, 파지 라이브러리를 스크리닝하여 hTau-pT217과의 상호작용에 대해 수천 개의 Fab 단편을 스크리닝하고, 생성된 상호작용물을 관련 기술분야에 널리 공지된 통상적인 방법을 이용하여 회수하고, 정제하고, 아미노산 서열을 결정함으로써 초기 리드 항체 구축할 수 있다. 본 개시내용의 항체의 실시양태는 비-인간 항체로부터 유래된 CDR을 둘러싸는 하나 이상의 인간 프레임워크 영역을 함유하도록 조작된 항체를 포함한다. 인간 프레임워크 배선 서열은, 예를 들어, 웹사이트, http://imgt.cines.fr을 통해 이뮤노제네틱스(ImMunoGeneTics: INGT)로부터 또는 문헌 [The Immunoglobulin FactsBook by Marie-Paule Lefranc and Gerard Lefranc, Academic Press, 2001, ISBN 012441351]으로부터 수득될 수 있다.
본 발명의 특정한 실시양태에서, 항체 또는 그를 코딩하는 핵산은 단리된 형태로 제공된다. 본원에 사용된 용어 "단리된"은 세포 환경에서 발견되는 다른 거대분자 종이 없거나 실질적으로 없는 단백질, 펩티드 또는 핵산을 지칭한다.
본 개시내용에 의해 제공되는 항체는 환자의 치료에 사용될 수 있다. 보다 구체적으로, 본 개시내용의 항체의 실시양태는 AD, PSP 및 FTD를 포함하는 타우병증을 포함한 신경변성 질환 또는 장애의 치료에 유용할 수 있다. 본 발명의 항체가 AD, PSP 및 FTD의 치료에 유용할 수 있지만, 이러한 항체는 또한 다른 신경변성 질환, 특히 NFT 형성과 같은 타우 병리를 수반하는 질환의 치료에 유용할 수 있다. 본원에서 상호교환적으로 사용되는 "치료" 및/또는 "치료하는" 및/또는 "치료하다"는 본원에 기재된 장애의 진행을 늦추거나, 중단시키거나, 저지하거나, 제어하거나, 중지시키거나, 역전시킬 수 있는 모든 과정을 지칭하는 것으로 의도되지만, 반드시 모든 장애 증상의 완전한 제거를 나타내는 것은 아니다. 치료는 타우 응집체 형성, NFT 형성 및 뉴런 손실 중 적어도 하나가 만연하는 것의 감소로부터 이익을 얻을 인간의 질환 또는 병태의 치료를 위한 본 발명의 항체의 투여를 포함하고, (a) 질환의 추가 진행을 억제하는 것, 즉 질환의 발달을 저지하는 것; 및 (b) 질환을 경감시키는 것, 즉 질환 또는 장애의 퇴행을 유발하거나 그의 증상 또는 합병증을 완화시키는 것을 포함한다.
본원에서 상호교환적으로 사용되는 용어 "환자", "대상체" 및 "개체"는 인간을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 환자는 타우 응집체 형성, 신경원섬유 매듭 형성 및 뉴런 손실 중 적어도 하나가 만연하는 것의 감소로부터 이익을 얻을 질환, 장애 또는 병태 (예를 들어, 신경변성 장애)로 추가로 특징지어진다. 또 다른 실시양태에서, 환자는 타우 응집체 형성, NFT 형성 및 뉴런 손실 중 적어도 하나가 만연하는 것의 감소로부터 이익을 얻을 신경변성 장애, 질환, 또는 병태를 발병할 위험이 있는 것으로 추가로 특징지어진다.
본원에 사용된 용어 "hTau-pT217에 특이적으로 결합한다"는 서열식별번호: 1의 잔기 217에서의 인산화된 트레오닌을 포함하는 인간 타우의 에피토프 영역과 항체의 상호작용을 지칭한다. 이러한 결합은 서열식별번호: 1의 잔기 217에서의 트레오닌의 인산화에 의존한다. 예를 들어, 스플라이스 변이체로 인한 인간 타우의 공지된 변이 또는 이소형이 있음을 이해해야 한다. 또한, 이러한 공지된 변이체는 서열식별번호: 1에 제시된 인간 타우 서열과 관련하여 본원에서 제공되는 바와 같이 인산화된 트레오닌을 포함하는 서열식별번호: 1의 일부 아미노산 잔기에 대해 변경된 잔기 넘버링을 초래할 수 있는 것으로 이해된다.
본원에 사용된 용어 "인간 타우의 CNS-발현된 이소형에 특이적으로 결합한다"는 CNS에서 발현되는 인간 타우의 이소형에 공통적이거나 이에 존재하는 에피토프 영역과 본 개시내용의 항체의 상호작용을 지칭하며, 에피토프는 영역은 CNS 외부에서만 발현되는 인간 타우의 이소형에는 존재하지 않는다. 인간 타우의 CNS-발현된 이소형에 특이적으로 결합하는 항체는 CNS 외부에서만 발현되는 인간 타우 이소형 (예를 들어, 말초 신경계와 같은 신체의 다른 영역에서만 발현되는 이소형)에 결합하지 않는다. 일부 실시양태에 따르면, 인간 타우의 CNS-발현된 이소형에 특이적으로 결합하는 항체는 서열식별번호: 1과 관련한 잔기 번호로 잔기 124에서의 글루타민 (Q124) 및 잔기 125에서의 알라닌 (A125)을 포함하는 CNS에서 발현되는 인간 타우 이소형의 에피토프 영역에 결합하거나 그를 인식한다. 예를 들어, 스플라이스 변이체로 인한 인간 타우의 공지된 변이 또는 이소형이 있으며, 이러한 변이체는 서열식별번호: 1에 제시된 인간 타우 서열과 관련하여 본원에서 제공되는 바와 같이 글루타민 및 알라닌을 포함하는 서열식별번호: 1과 관련한 일부 아미노산 잔기에 대해 변경된 잔기 넘버링을 초래할 수 있음을 이해해야 한다.
본원에 사용된 용어 "에피토프 영역"은 본 발명의 항체에 의해 전체적으로 또는 부분적으로 인식되는 항원의 분리된 3차원 부위를 지칭한다. 에피토프 영역의 아미노산은 인간 타우의 화학적 활성 표면 그룹화를 제공하고, 인간 타우의 특이적 3차원 구조를 형성하고, 특이적 전하 특징을 제공할 수 있다. 입체형태 및 비-입체형태/선형 에피토프는, 입체형태 에피토프 영역에 대한 결합은 변성 용매의 존재 하에 손실되는 반면 선형 에피토프 영역은 그렇지 않다는 점에서 구별될 수 있다.
본 발명의 항체는 관련 기술분야에 널리 공지된 방법에 의해 제조될 수 있고 본 발명의 항체 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체(들) 및/또는 희석제(들)를 포함하는 제약 조성물에 혼입될 수 있다 (예를 들어, 실무자에게 일반적으로 공지된 바와 같은 제형 기술의 개요를 제공하는 문헌 (Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Edition, Loyd V., Ed., Pharmaceutical Press, 2012)). 제약 조성물에 적합한 담체는 본 발명의 항체와 조합될 때 분자의 활성을 유지하고 환자의 면역계와 반응하지 않는 임의의 물질을 포함한다. 본 발명의 항체를 포함하는 제약 조성물은 비경구 경로 (예를 들어, 피하, 정맥내, 복강내, 근육내 또는 경피)에 의해 본원에 기재된 바와 같은 질환 또는 장애의 위험이 있거나 그를 나타내는 환자에게 투여될 수 있다. 본 발명의 제약 조성물은 본원에서 상호교환적으로 사용되는 본 발명의 항체의 "유효량" 또는 "치료 유효량"을 함유한다. 유효량은 원하는 치료 결과를 달성하기 위한 (용량으로 및 기간 동안 및 투여 수단에 대해) 필요한 양을 지칭한다. 항체의 유효량은 개체의 질환 상태, 나이, 성별 및 체중, 및 개체에서 원하는 반응을 유도하는 항체의 능력과 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 유효량은 또한 치료학적으로 유익한 효과가 본 발명의 항체의 임의의 독성 또는 해로운 영향보다 더 큰 양이다.
2개 이상의 아미노산 서열과 관련하여 본 개시내용에서 언급되는 퍼센트 상동성은, 서열 비교 알고리즘 (예를 들어, BLASTP 및 BLASTN 또는 통상의 기술자에게 이용가능한 다른 알고리즘)을 이용하거나 육안 검사에 의해 측정 시, 최대 대응을 위해 비교 및 정렬될 때, 동일한 아미노산 잔기의 특정 백분율을 갖는 2개 이상의 서열을 지칭한다. 적용에 따라, 퍼센트 상동성은 비교되는 서열의 영역에 걸쳐, 예를 들어, 기능적 도메인에 걸쳐 존재할 수 있거나, 대안적으로 비교될 2개의 서열의 전체 길이에 걸쳐 존재할 수 있다. 예로서, 서열의 퍼센트 상동성은 참조 서열과 비교될 수 있다. 예를 들어, 서열 비교 알고리즘을 이용할 때, 시험 및 참조 서열이 컴퓨터에 입력될 수 있다 (원하는 경우, 서열 알고리즘 프로그램 파라미터와 함께 하위서열 좌표가 추가로 지정될 수 있음). 이어서, 서열 비교 알고리즘은 지정된 프로그램 파라미터에 기초하여 참조 서열(들)과 비교하여 시험 서열(들)에 대한 퍼센트 서열 동일성 또는 상동성을 계산한다. 예시적인 서열 정렬 및/또는 상동성 알고리즘은 문헌 (Smith & Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981), Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970), Pearson & Lipman, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988)), GAP, BESTFIT, FASTA, 및 TFASTA (Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, Wis.)을 통해, 또는 육안 검사 (일반적으로 문헌 (Ausubel et al., 하기 참조) 참조)에 의해 이용가능하다. 퍼센트 서열 동일성 및 서열 유사성을 결정하기에 적합한 알고리즘의 한 예는 문헌 (Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990))에 기재된 BLAST 알고리즘이다. BLAST 분석을 수행하기 위한 소프트웨어는 국립 생명공학 정보 센터 (www.ncbi.nlm.nih.gov/)를 통해 공개적으로 이용가능하다.
본원에 사용된 환자 "샘플"은 인간 샘플을 지칭한다. 본 발명에서 사용하기 위한 샘플의 비제한적인 공급원은 혈액, 혈장, 혈청 및 CSF를 포함한다. 또한, 샘플은 림프액, 생검 흡인물, 복수, 유체 추출물, 고형 조직, 피부, 호흡기, 코, 장 및 비뇨생식관의 외부 섹션, 눈물, 타액, 유즙, 종양, 기관, 세포 배양물 및/또는 세포 배양 구성성분을 지칭할 수도 있다.
본 개시내용은 또한 본원에 개시된 방법을 이용하여 의료 전문가에 의해 수행된 대상체의 임상 진단, 예후 또는 테라노시스 방법에 관한 것이다. 본원에 기재된 방법은, 예를 들어, 개인, 건강 전문가, 또는 제3자, 예를 들어 대상체로부터의 정보를 해석하는 서비스 제공자에 의해 수행될 수 있다. 본원에 설명된 바와 같이, 의료 전문가는 본 개시내용의 진단 방법에 관한 정보를 수신한 후 치료를 개시하거나 변형할 수 있다. 예를 들어, 의료 전문가는 요법, 요법 변경 또는 추가 진단 평가 (예를 들어, 신경학적 영상화)를 권장할 수 있다.
hTau-pT217에 특이적으로 결합하는 본 개시내용의 항-타우 항체는 친화성 크로마토그래피, 면역침전, 면역조직화학 또는 ELISA-기반 검정과 같은 기술에 의해 hTau-pT217을 단리, 검출 및/또는 정량화하는데 사용될 수 있다. 이러한 검정은, 예를 들어 주어진 치료 요법의 효능을 결정하기 위한 임상 시험 절차의 일부로서, 예를 들어 혈청, 혈장, 혈액 또는 CSF에서 폴리펩티드 수준을 모니터링하기 위한 진단, 예후 또는 테라노시스 목적을 위해 hTau-pT217 발현의 풍부도 및/또는 패턴을 검출 및/또는 평가하는데 이용될 수 있다.
인간 타우의 CNS-발현된 이소형에 특이적으로 결합하는 본 개시내용의 항-타우 항체는 친화성 크로마토그래피, 면역침전, 면역조직화학 또는 ELISA-기반 검정과 같은 기술에 의해 CNS에서 발현되는 인간 타우의 이소형 (CNS 외부에서만 발현되는 인간 타우의 이소형은 제외)을 단리 및/또는 검출하는데 사용될 수 있다. 이러한 검정은, 예를 들어 주어진 치료 요법의 효능을 결정하기 위한 임상 시험 절차의 일부로서, 예를 들어 혈청, 혈장, 혈액 또는 CSF에서 폴리펩티드 수준을 모니터링하기 위한 진단, 예후 또는 테라노시스 목적을 위해 인간 타우 발현의 CNS-발현된 이소형의 풍부도 및/또는 패턴을 검출 및/또는 평가하는데 이용될 수 있다. 관련 기술분야에서 이해되는 바와 같이, 본 발명의 항체는 그의 검출을 용이하게 하기 위해 검출가능한 물질 또는 표지에 커플링될 수 있다. 검출가능한 물질 또는 표지의 예는 다양한 효소, 보결분자단, 형광 물질, 발광 물질, 생물발광 물질, 화학발광 물질 및 방사성 물질을 포함한다. 적합한 효소의 예는 서양고추냉이 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제, 베타-갈락토시다제, 또는 아세틸콜린에스테라제를 포함하고; 적합한 보결분자단 복합체의 예는 스트렙트아비딘/비오틴 및 아비딘/비오틴을 포함하고; 적합한 형광 물질의 예는 움벨리페론, 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 디클로로트나지닐아민 플루오레세인, 단실 클로라이드 또는 피코에리트린을 포함하고; 발광 물질의 예는 루미놀을 포함하고; 생물발광 물질의 예는 루시페라제, 루시페린, 루테늄 및 에쿼린을 포함하고, 적합한 방사성 물질의 예는 125I, 131I, 35S 또는 3H를 포함한다. 본 발명의 항체는 또한 약물유전체학적 분석에 유용할 수 있다. 이러한 실시양태는 특정한 또는 변형된 치료 양식으로부터 이익을 얻을 수 있는 개체를 식별하고/하거나 본 치료 요법의 효능을 모니터링하는데 사용될 수 있다.
본 발명의 검정에 의해 제공되는 hTau-pT217의 수준 또는 측정치는 절대값 (예를 들어, 생물학적 샘플 내의 농도) 또는 상대값 (예를 들어, 참조에 대비한 농도)일 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, hTau-pT217을 검출하는 방법이 환자 샘플에서 hTau-pT217의 수준 또는 농도가 참조 값보다 높음을 나타내는 경우에 hTau-pT217은 환자 샘플에서 "증가된" 것으로 지칭된다. 반대로, 환자 샘플에서 hTau-pT217 수준 또는 hTau-pT217 농도가 참조 값 또는 예를 들어 이전 환자 샘플에서 측정된 hTau-pT217 값보다 낮은 경우에 hTau-pT217은 환자 샘플에서 "감소된" 것으로 지칭된다.
본원에 사용된 "참조 값"은 특정한 상태와 관련된 hTau-pT217의 공지된 또는 대략적인 농도를 지칭한다. 참조 값의 농도 수준은 hTau-pT217의 절대 또는 상대 양, 양의 범위, 또는 최소 양, 평균 양, 및/또는 중간 양일 수 있다. 참조 값은 또한 환자 샘플이 비교되는 hTau-pT217의 기준선 역할을 할 수 있다.
본원에 사용된 "대조 표준물"은 본 발명의 방법에서 환자 샘플로부터 얻은 결과를 비교하는데 사용될 수 있는 샘플을 지칭한다. 대조 표준물은 배지에 스파이킹된 세포, 혈액, 혈장, CSF, 조직 또는 공지된 단백질 농도일 수 있다. 대조 표준물의 농도 수준은 hTau-pT217의 절대 또는 상대 양, 양의 범위, 또는 최소 양, 평균 양, 및/또는 중간 양일 수 있다. 대조 표준물은 또한 환자 샘플이 비교되는 hTau-pT217의 기준선 역할을 할 수 있다. 대조 표준물은 동일한 환자로부터의 농도 값 또는 hTau-pT217의 공지된 정상 참조물을 포함할 수 있다. 또한, 일부 실시양태에서, 대조 표준물은 표준 곡선의 형태의 hTau-pT217 농도를 나타낼 수 있다.
본원에 사용된 용어 "포획 항체"는 hTau-pT217에 결합할 항체를 지칭한다. 이러한 실시양태에서, 포획 항체는 포획 항체-hTau-pT217 복합체가 샘플의 나머지로부터 분리될 수 있도록 적절한 조건 하에서 환자 샘플 중의 hTau-pT217를 결합 및 포획할 수 있고, 예를 들어 hTau-pT217에 특이적으로 결합할 수 있다 (예를 들어, 서열식별번호: 1의 잔기 217에서의 트레오닌이 인산화되지 않는 경우에 인간 타우에 결합할 수 없음). 일부 실시양태에서, 포획 항체는 (예를 들어, 잔기 217의 트레오닌에서의 인산화된 hTau를 포함할 수 있는) 인간 타우의 CNS-발현된 이소형에 특이적으로 결합하는 항체일 수 있고, hTau-pT217에 특이적으로 결합하는 항체는 "제2 (또는 검출) 항체"로 사용된다. 일부 실시양태에서, 포획 항체는 고정화된다. 일부 실시양태에서, 검출 항체는 검출가능한 표지로 표지된다. 일부 실시양태에서, 포획 항체는 "샌드위치" 면역검정에서 고정화되고, 포획 또는 제1 항체는 서열식별번호: 1의 잔기 217에서의 인산화된 트레오닌을 포함하는 인간 타우의 에피토프 영역에 특이적으로 결합한다. 이러한 샌드위치 면역검정에서, "검출 (또는 제2) 항체"도 활용된다. 일부 실시양태에 따르면, 검출 또는 제2 항체는 포획 항체에 특이적으로 결합할 수 있고, 검출가능한 표지로 표지될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제2 항체의 검출은 포획 또는 제1 항체에 의해 이미 결합되거나 포획된 hTau-pT217에 특이적으로 결합한다. 이러한 실시양태에서, 검출 항체는 제1 또는 포획 항체와 중첩되지 않는 제2 에피토프 영역에서 hTau-pT217에 결합하고 검출가능한 표지로 표지될 수 있다. 이러한 일부 실시양태에서, 제2 항체는 인간 타우의 CNS-발현된 이소형에 특이적으로 결합하는 본 발명의 항체이다.
본원에 사용된 "검출가능한 표지"는 hTau-pT217에 특이적으로 결합하는 본 발명의 항체와 hTau-pT217 사이의 복합체 형성을 검출하는데 사용될 수 있는 모이어티, 조성물 또는 기술이다. 일부 실시양태에 따르면, 검출가능한 표지는 항체에 직접적으로 또는 간접적으로 접합 (경우에 따라 포획 또는 검출)될 수 있다. 검출가능한 표지의 예시적인 실시양태는 비오틴; 방사성 동위원소; 형광단 또는 다른 형광 모이어티; 및 효소 모이어티를 포함한다.
본원에서 상호교환적으로 사용되는 용어 "진단" 또는 "진단하는"은 통상의 기술자가 환자가 주어진 질환 또는 병태를 앓고 있는지의 여부에 대한 확률 ("가능성")을 추정 및/또는 결정할 수 있는 방법을 지칭한다. 본 발명의 경우, 환자를 "진단"하는 것은 본 발명의 검정 결과를 사용하여 AD, PSP 또는 FTD와 같은 신경계 장애를 식별 또는 진단할 뿐만 아니라 환자, 예를 들어, 즉 신경계 질환 또는 장애의 존재 또는 발생 또는 치료의 필요성, 또는 환자의 신경계 질환에 대한 치료의 유효성을 식별하는 것을 포함한다. 본 발명에 따르면, 진단은 진단에 도달하기 위해 의료 전문가에 의해 이해되는 바와 같은 다른 임상 지표의 조합에 기초할 수 있다. 본 발명의 일부 실시양태에 따르면, 본 발명의 진단 적용은 AD 브락 병기 I, II, III, IV, V 또는 VI으로 환자를 진단하는데 사용될 수 있다. AD 브락 병기는 관련 기술분야에 공지된 바와 같고, 문헌 (Braak, et al., (2006) Acta Neuropathol 112(4): 389-404)에 기재되어 있다.
실시예
항-hTau-pT217 항체
본 개시내용의 항-hTau-pT217 항체, 또는 hTau-pT217에 특이적으로 결합하는 항체는 하이브리도마 방법론을 이용하여 생성된다 (예를 들어, 문헌 (Kohler et al., Nature, 256:495 (1975))에 처음으로 기재된 바와 같음). 간략하게, 예시로서, 토끼를 서열식별번호: 1로 표시되는 바와 같이 인산화된 트레오닌 및 이러한 트레오닌의 4개 이상의 아미노산 N-말단 및 C-말단을 포함하는 펩티드로 면역화시킨다 (면역화에 사용될 수 있는 펩티드의 예시는 서열식별번호: 26에 의해 제공됨). hTau-pT217에 결합하는 항체를 생산할 수 있는 림프구를 단리하고, 하이브리도마 세포를 형성하기 위한 적절한 융합제를 사용하여 골수종 세포주와 융합시킨다 (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp.59-103 (Academic Press, 1986)). 하이브리도마를 (바람직하게는 융합되지 않은 골수종 세포의 생존을 억제하는 하나 이상의 물질을 함유하는) 적절한 배양 배지에 시딩하고 성장시킨다. 이어서, 하이브리도마에 의해 생산된 모노클로날 항체의 결합 특이성을 hTau-pT217 및 잔기 217 (서열식별번호: 1에 대한 참조에 기초한 번호)에서의 트레오닌에서 인산화되지 않은 재조합 타우 둘 다를 사용하여 시험관내 결합 검정 (예를 들어, 면역침전, 방사성면역검정 (RIA) 또는 효소-결합된 면역흡착 검정 (ELISA))에 의해 결정한다. hTau-pT217에는 특이적으로 결합하는 (예를 들어, 서열식별번호: 1에 기초한 넘버링으로 잔기 217에서 인산화되지 않은 인간 타우에는 결합하지 않는) 항체를 식별한다. 바람직한 하이브리도마를 제한 희석 절차에 의해 서브클로닝할 수 있고, 동물의 생체내 복수 종양을 포함하는 표준 방법에 의해 성장시킬 수 있다 (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp.59-103 (Academic Press, 1986)). 하이브리도마 (및/또는 서브클론)에 의해 분비되는 모노클로날 항체를, 예를 들어 친화성 크로마토그래피 (예를 들어, 단백질 A 또는 단백질 G-세파로스) 또는 이온-교환 크로마토그래피, 히드록실아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석 등과 같은 통상적인 절차에 따라 정제한다.
본 발명의 항체를 코딩하는 cDNA를 통상적인 절차를 이용하여 시퀀싱한다. 실질적으로 본원에 기재된 바와 같은 절차에 따라 생성된 예시된 토끼 항-hTau-pT217 항체 ("mAb A")는 서열식별번호: 2의 중쇄 및 서열식별번호: 4의 경쇄를 포함한다. 시퀀싱된 항체의 상보성 결정 영역 (CDR) 또는 가변 영역을 키메라 또는 인간화 항체로의 전환 및/또는 다른 포유동물 IgG 형태로의 전환에 사용할 수 있다. 예를 들어, 클론을 서열식별번호: 6의 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 7의 중쇄 및 서열식별번호: 8의 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 9의 경쇄를 갖는 예시된 토끼 가변 영역, 뮤린 IgG 불변 영역 키메라 항-hTau-pT217 항체 ("mAb B")와 같은 뮤린 IgG 키메라 항체로 전환시킬 수 있다. 이어서, 결합 특이성을 재평가할 수 있다. 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 cDNA 서열을 클로닝하여 GS (글루타민 신테타제) 발현 벡터로 조작할 수 있다. 이어서, 조작된 이뮤노글로불린 발현 벡터를 CHO 세포로 안정적으로 형질감염시킬 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자가 인식하는 바와 같이, 항체의 포유동물 발현은 전형적으로 Fc 영역의 고도로 보존된 N-글리코실화 부위에서 글리코실화를 초래할 것이다. hTau-pT217에 특이적으로 결합하는 항체의 발현에 대해 안정한 클론을 검증할 수 있다. 양성 클론을 생물반응기에서 항체 생산을 위해 무혈청 배양 배지로 확장시킬 수 있다. 항체가 분비된 배지를 통상적인 기술로 정제할 수 있다. 예를 들어, 배지를 포스페이트 완충된 식염수와 같은 적합한 버퍼로 평형화된 단백질 A 또는 G 세파로스 FF 컬럼에 편리하게 적용할 수 있다. 비특이적 결합 성분을 제거하기 위해 컬럼을 세척한다. 결합된 항체를, 예를 들어 pH 구배에 의해 용출시키고, 항체 분획을, 예를 들어 SDS-PAGE에 의해 검출한 다음 풀링한다. 항체를 통상적인 기술을 이용하여 농축 및/또는 멸균 여과시킬 수 있다. 가용성 응집체 및 다량체를 크기 배제, 소수성 상호작용, 이온 교환 또는 히드록시아파타이트 크로마토그래피를 포함하는 일반적인 기술에 의해 효과적으로 제거할 수 있다. 산물을, 예를 들어 -70℃에서 즉시 동결시키거나 동결건조시킬 수 있다.
hTau의 CNS-단독 발현된 이소형에 특이적인 항체
인간 타우의 CNS-발현된 이소형에 특이적으로 결합하는 본 개시내용의 항체는 하이브리도마 방법론을 이용하여 생성될 수 있다 (예를 들어, 문헌 (Kohler et al., Nature, 256:495 (1975))에 처음으로 기재된 바와 같음). 간략하게, 예시로서, 비-인간 포유동물 (예를 들어, 뮤린 또는 토끼)을 인간 타우 단백질 (예를 들어, 서열식별번호: 1에 의해 제시된 hTau), 또는 서열식별번호: 1에 의해 표시된 넘버링으로 잔기 124에서의 글루타민 및 잔기 125에서의 알라닌을 포함하는 그의 펩티드로 면역화시킬 수 있다. 인간 타우의 CNS-발현된 이소형에 특이적으로 결합하는 항체를 생산할 수 있는 림프구를 단리하고, 하이브리도마 세포를 형성하기 위한 적절한 융합제를 사용하여 골수종 세포주와 융합시킬 수 있다 (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp.59-103 (Academic Press, 1986)). 하이브리도마를 (바람직하게는 융합되지 않은 골수종 세포의 생존을 억제하는 하나 이상의 물질을 함유하는) 적절한 배양 배지에 시딩하고 성장시킬 수 있다. 이어서, 하이브리도마에 의해 생산된 모노클로날 항체의 결합 특이성을 인간 타우의 CNS-발현된 이소형 (서열식별번호: 1의 서열을 갖는 펩티드) 및 인간 타우의 말초적으로 발현된 이소형 (서열식별번호: 1에 의해 표시되는 바와 같은 잔기 125에서의 알라닌에 인접한 잔기 124에서의 글루타민을 포함하지 않는 서열식별번호 27로 제시되는 바와 같은 서열을 갖는 펩티드) 둘 다에 대해 시험관내 결합 검정 (예를 들어, 면역침전, 방사성면역검정 (RIA) 또는 효소-결합된 면역흡착 검정 (ELISA))에 의해 결정한다. (예를 들어, 말초적으로 발현된 인간 타우에는 결합하지 않는) 인간 타우의 CNS-발현된 이소형을 특이적으로 결합하는 항체를 식별할 수 있다. 바람직한 하이브리도마을 제한 희석 절차에 의해 서브클로닝할 수 있고, 동물의 생체내 복수 종양을 포함하는 표준 방법에 의해 성장시킬 수 있다 (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp.59-103 (Academic Press, 1986)). 하이브리도마 (및/또는 서브클론)에 의해 분비되는 모노클로날 항체를, 예를 들어 친화성 크로마토그래피 (예를 들어, 단백질 A 또는 단백질 G-세파로스) 또는 이온-교환 크로마토그래피, 히드록실아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석 등과 같은 통상적인 절차에 따라 정제할 수 있다.
본 발명의 항체를 코딩하는 cDNA를 통상적인 절차를 이용하여 시퀀싱할 수 있다. 실질적으로 본원에 기재된 바와 같은 절차에 따라 생성된, 인간 타우의 CNS-발현된 이소형에 특이적으로 결합하는 본 개시내용의 예시된 뮤린 항체 ("mAb C")는 서열식별번호: 16의 중쇄 및 서열식별번호: 18의 경쇄를 포함한다. 시퀀싱된 항체의 상보성 결정 영역 (CDR) 또는 가변 영역을 키메라 또는 인간화 항체로의 전환에 사용하고/하거나 다른 포유도울 IgG 형태로 전환시키고 CHO 세포와 같은 적격 숙주 세포에서 발현시킬 수 있다.
결합 동역학 및 친화도
포르테바이오(ForteBio)로부터 입수가능한 옥테트(Octet) Red96® 기기 (25℃에서 HBS-EP+ 러닝 버퍼 (지이 헬스케어(GE Healthcare), 10 mM Hepes pH7.4 + 150 mM NaCl + 3 mM EDTA + 0.05% 계면활성제 P20) 사용)로 측정되는, 바이오-층 간섭측정 (BLI) 검정을 이용하여 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 hTau-pT217 내지 재조합 hTau-pT217 단백질에 특이적으로 결합하는 본 발명의 항체의 결합을 측정한다.
명시된 경우를 제외하고는, 모든 시약 및 재료는 포르테바이오 (캘리포니아주 프리몬트)로부터의 것이다. 단백질 A 바이오센서를 분석을 위한 관심 항체를 고정화시키는데 사용한다. 본 발명의 예시된 항체 샘플 (mAb A)을 러닝 버퍼로 희석하여 5 μg/mL로 제조한다. 재조합 hTau-pT217 단백질을 러닝 버퍼로 희석하여 300, 100, 33.3, 11.1, 3.7, 1.24, 0.4115, 및 0 (블랭크) nM의 농도로 제조한다. 각각의 분석은 하기로 이루어진다: (1) 240초 동안 바이오센서에서 항체 샘플 캡처; (2) 항체 로딩된 바이오센서를 러닝 버퍼와 함께 60초 동안 인큐베이션하여 기준선을 확립; (3) 항체 로딩된 바이오센서를 연속 희석된 재조합 hTau-pT217 단백질과 함께 300초 동안 인큐베이션하여 회합 상태를 모니터링; (4) 바이오센서를 러닝 버퍼로 반환하여 해리 상태를 모니터링.
결합 데이터를 표준 이중-참조를 사용하여 처리하고, 데이터 분석 v9.0 평가 소프트웨어를 사용하여 1:1 결합 모델에 피팅하여 결합 속도 (kon, M-1s-1 단위) 및 해리 속도 (koff, s-1 단위)를 결정한다. 평형 해리 상수 (KD)를 KD = koff/kon 관계로부터 계산하며, 이는 몰 단위이다. 결과는 표 1에 제공된다.
표 1: 재조합 hTau-pT217에 대한 BLI 결합 데이터
Figure pct00001
*KD 결과는 결과가 결합활성의 영향에 대해 정규화되지 않았기 때문에 상대적인 것으로 간주된다.
hTau-pT217에 대한 결합 특이성
hTau-pT217에 특이적으로 결합하는 본 발명의 예시된 항체 (mAb A 및 mAb B)의 특이성을, 포르테바이오로부터 입수가능한 옥테트 Red96® 기기 (25℃에서 HBS-EP+ 러닝 버퍼 (지이 헬스케어, 10 mM Hepes pH7.4 + 150 mM NaCl + 3 mM EDTA + 0.05% 계면활성제 P20) 사용)로 측정되는, BLI 검정을 이용하여 합성 펩티드를 사용하여 결정한다. 잔기 7에서의 인산화된 트레오닌이 있는 서열식별번호: 26의 N-말단 비오틴 표지된 펩티드 및 잔기 7에서의 인산화된 트레오닌이 없는 서열식별번호: 26의 N-말단 비오틴 표지된 펩티드를 스트렙트아비딘 바이오센서 (포르테바이오)에 고정화시킨다. 펩타이드를 300초 동안 러닝 버퍼에 5 μg/mL로 희석된 mAb A 및 mAb B의 IgG와 함께 인큐베이션한 후, 300초 동안 해리시킨다. 결합 데이터를 데이터 분석 v9.0 평가 소프트웨어를 사용하여 결정한다. 해리 종료 시 각각의 펩티드에 대한 결합 신호 (nm)는 표 2에 제공된다.
표 2: pT217이 있는 재조합 hTau 및 pT217이 없는 재조합 hTau에 대한 mAb A 및 mAb B의 BLI 결합 데이터
Figure pct00002
hTau-pT217 면역검정
혈장에서 hTau-pT217을 측정하는 면역검정을 AD 환자에서 질환-관련된 차이를 측정하도록 설계한다. 예시로서, 본 개시내용의 면역검정을 메소 스케일 디스커버리(Meso Scale Discovery: MSD) 플랫폼을 사용하여 스트렙트아비딘 소형 스폿 플레이트에서 수행한다. mAb A 또는 mAb B를 포획 항체로 사용하고, 비오틴 처리한다. mAb C (인간 타우의 CNS-발현된 이소형에 특이적으로 결합하는 본 개시내용의 항체)와 같은 SULFO-TAG-2차 항체를 검출 항체로 활용한다. 항체를 제조사의 프로토콜에 따라 술포-NHS-비오틴(Sulfo-NHS-Biotin) (써모 사이언티픽(Thermo Scientic), 카탈로그 번호: 21329) 또는 MSD 골드 술포-태그 NHS-에스테르(MSD GOLD SULFO-TAG NHS-Ester) (MSD, 카탈로그 번호: R91AO-1)와 접합시킨다. 검정을 글리코겐 신타제 키나제-3과의 반응을 이용하여 시험관내에서 인산화되고 질량 분광측정으로 특징지어진 재조합 타우 (4R2N, NCBI 타우 v2) 단백질을 사용하여 보정한다. 샘플을 젖은 얼음에서 해동시키고, 잠시 볼텍싱하고, 이호성 차단 시약 1을 200 ug/mL (스칸티바디즈 인크(Scantibodies Inc), 카탈로그 번호: 3KC533)의 농도로 첨가하면서 mAb A에 대한 샘플 버퍼 (포스페이트 완충된 식염수 (PBS), 0.5% 소 혈청 알부민 (BSA), 0.5% 트윈(Tween) 20, 5 mM EDTA, 5 mM EGTA); mAb 2에 대한 샘플 버퍼 (50 mM HEPES, 300 mM NaCl, 5 mM EDTA, 5 mM EGTA, 1% 트리톤(Triton) X-100, 1% MSD 블로커(Blocker) A, 2% PEG)에 1:4로 혈장 희석시켰다. 보정 희석제를 샘플 버퍼를 녹아웃 혈청 대체물 (깁코(Gibco), 10828-010)과 50/50 혼합하여 제조한다.
MSD 소형-스폿 스트렙트아비딘 (MSD, L45SA) 코팅된 플레이트를 플레이트 진탕기에서 650 rpm으로 진탕시키면서 200 uL의 PBS 중 3% BSA로 실온에서 1시간 동안 차단시킨다. 플레이트를 200 uL의 세척 버퍼 (PBS + 0.05% 트윈 20)로 3회 세척하고, 0.464 ug/mL (DPBS + 0.1% BSA + 0.05% 트윈 20에 희석됨, mAb 2에 대해서는 2% PEG가 추가됨)의 25 uL의 비오틴 처리된-포획 항체 (mAb A)를 hTau-pT217 플레이트에 첨가하고, 플레이트 진탕기에서 650 rpm으로 진탕시키면서 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한다. 플레이트를 다시 200 uL의 세척 버퍼로 3회 세척하고, 50 uL의 희석된 보정제 또는 샘플을 플레이트에 첨가하고, 플레이트 진탕기에서 650 rpm으로 진탕시키면서 실온에서 2시간 동안 인큐베이션한다. 이어서, 플레이트를 200 uL의 세척 버퍼로 3회 세척하고, 25 uL의 술포-태그부착된 검출 항체 (mAb C)를 0.25 ug/mL (MSD 희석제 35에 희석됨, mAb 2에 대해서는 2% PEG가 추가됨)로 hTau-pT217 플레이트에 첨가하고, 플레이트 진탕기에서 650 rpm으로 진탕시키면서 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한다. 플레이트를 마지막으로 200 uL의 세척 버퍼로 세척하고, 계면활성제를 갖는 150 uL의 2X MSD 판독 버퍼 T (MSD, R92TC)를 각각의 플레이트에 첨가하고, 판독 버퍼를 첨가한 지 10분 이내에 MSD SQ120에서 판독한다. 결과를 하기 수학식을 사용하여 보간을 위해 표준 곡선의 4PL, 1/y2 가중치를 사용하는 MSD 소프트웨어에 의해 계산한다: Y = b1 + ((b2 - b1) / (1 + (x / b3)b4)).
신경학적 영상화를 위한 예후 검정으로의 hTau-pT217 면역검정
hTau-pT217 및 hTau-pT181의 수준을 AD 임상 시험에 등록된 대상체의 혈액에서 평가한다. 본원에 기재된 바와 같은 hTau-pT217 면역검정을 이용하여 2개의 연구 (연구 1: N=42; 연구 2: N-185)로부터 AD 대상체의 혈장에서 hTau-pT217을 평가한다. 또한, 기술분야에서 이미 기재된 hTau-pT181 면역검정을 이용하여 동일한 환자에서 hTau-pT181을 측정한다. 모든 환자는 플로르타우시피르 신경학적 영상화로 측정된 타우 양전자 방출 단층촬영 (PET)을 갖는다. 샘플을 기준선에서를 포함하여 2개의 고유한 임상 시험 동안 수득하고, 향후 바이오마커 연구를 위해 -80℃에서 저장한다. 플로르타우시피르 SUVR을 백질의 참조 신호와 관련하여 관심 신피질 영역에서 결정한다. 플로르타우시피르 SUVR 및 혈장 pTau (각각 pT181 및 pT217)의 상관관계를 스피어만(spearman) 순위 상관관계로 평가한다. 수신자 작동 특징 (ROC) 곡선 분석은 나이 및 성별을 공변량으로 통합하고 SUVR ≥1.1의 플로르타우시피르 양성 컷오프를 통합하는 로지스틱 회귀 모델을 사용한다. 향후 인지 저하를 예측하는 기준선 pTau를 사분위수로 pTau를 평가하는 혼합 효과 모델을 사용하여 평가한다.
hTau-pT217 면역검정은 표 3에 제시된 바와 같이 연구 둘 다에서 플로르타우시피르 PET와 통계적으로 유의하게 더 높은 상관관계를 제시한다 (p-값 < 0.05).
표 3. hTau-pT217 및 hTau-pT181 면역검정과 플로르타우시피르 PET의 상관관계
Figure pct00003
플로르타우시피르 양성에 대한 ROC 아래 면적은 연구 둘 다에서 hTau-pT181에 비해 hTau-pT217에 대해 더 높은 값을 제시한다 (각각, 연구 1: 0.88 v. 0.79; 연구 2: 0.83 v. 0.81). 또한, 사분위수에 의한 hTau-pT271의 혼합 효과 모델은 인지 저하의 상당한 증가를 제시한다. 본 실시예의 결과가 입증하는 바와 같이, 본 개시내용의 hTau-pT217 면역검정은 신경학적 영상화에 적합하고 신경변성 질환으로 인한 인지 저하의 위험이 있는 대상체를 식별할 수 있고, hTau-pT181 면역검정에 비해 상당한 개선을 제시한다.
AD 및 질환 진행에 대한 진단 지시자로서의 hTau-pT217 면역검정
기재된 바와 같은 면역검정을 사용하여 CSF에서 hTau-pT217의 수준을 평가하고, hTau-pT181 면역검정의 평가와 비교한다. 간략하게, 손상되지 않은 노인 (CU, n=65); AD로 인해 경도 인지 손상을 갖는 환자 (MCI-AD, n=29); AD 치매 (n=43) 및 스웨덴 BioFINDER 연구로부터의 다른 신경변성 장애 (n=57)로부터의 CSF 샘플을 hTau-pT217 및 hTau-p181 면역검정으로 평가한다. 184명의 참가자가 18F-플로르타우시피르 양전자 방출 단층촬영 (PET)을 받았다. 18F-플로르타우시피르의 흡수를 타우 브락 병기 I-II, III-IV 및 V-VI 및 하측두를 포함하여 AD에서 타우 병리와 연결된 선험적으로 정의된 영역에서 정량화한다.
CU 환자에서, hTau-pT217 면역검정 및 hTau-pT181 면역검정 둘 다는 브락 병기 I-II에서 18F-플로르타우시피르와 상관관계가 있고; AD 환자에서, hTau-pT217 면역검정 및 hTau-pT181 면역검정 둘 다는 브락 병기 III-IV 및 V-VI의 영역에서 상관관계가 있고; MCI 환자에서, hTau-pT217은 영역 I-II, 브락 병기 III-IV 및 V-VI에서 18F-플로르타우시피르와 상관관계가 있는 반면, hTau-pT181은 브락 병기 I-II의 영역에서만 상관관계가 있다. 중요하게도, 영역 18F-플로르타우시피르와 hTau-pT217 면역검정 사이의 상관관계는 3개의 진단 그룹 모두 (CU, MCI 및 AD)에서 및 모든 영역 (브락 병기 I-II, III-IV 및 V-VI)에 걸쳐 hTau-pT181 면역검정과 18F-플로르타우시피르 사이의 상관관계보다 통계적으로 유의한 (p<0.001-0.016) 개선을 제시한다.
hTau-pT217 면역검정의 상관관계 계수는 모든 영역에 걸쳐 18F-플로르타우시피르에 대한 hTau-pT181 면역검정과 비교하여 일관되게 더 높고 통계적으로 유의한 (모두 p<0.001) 값을 제시한다: hTau-pT217 (0.698-0.752) vs. hTau-pT181 (0.572-0.706). 또한, hTau-pT217 면역검정은 모든 영역에서 병리학적 18F-플로르타우시피르 상태의 통계적으로 유의한 (p<0.001) 보다 정확한 예측자임을 입증한다 (hTau-pT217: AUC 0.890-0.929; hTau-pT181 면역검정: AUC 0.859-0.904). 또한, hTau-pT217 면역검정은 AD와 비-AD 신경변성 질환을 구별하는데 있어 hTau-pT181 면역검정에 비해 통계적으로 유의한 (p=0.026) 개선된 성능을 나타낸다 (hTau-pT217: AUC 0.943; hTau-pT181: AUC 0.914). 이들 결과는 hTau-pT217 면역검정이 18F-플로르타우시피르 신경학적 영상화와 상관관계가 있고, AD와 다른 신경학적 장애 및 병기를 구별할 수 있음을 나타내며, hTau-pT181 면역검정에 비해 상당한 개선을 제시한다.
hTau-pT217 면역검정은 타우 PET SUVr과 연관됨
타우 PET SUVr은 문헌에서 타우 병리와 연관되는 것으로 제시된 바 있다. 본원에 개시된 hTau-pT217 면역검정은 경도 AD 환자로부터의 혈장, 혈청 및 CSF에서 hTau-pT217을 측정하는 연구에서 타우 PET SUVr과 상관관계가 있다. 간략하게, 190명의 대상체에 대해 기준선에서 혈장에서 hTau-pT217 면역검정이 수행된다. 이 190명의 대상체 중 185명의 환자에 대해 타우 PET SUVr 검정이 수행된다. 데이터는 스피어만 시험을 이용하여 분석되고, 스피어만 ρ = 0.49 및 수정되지 않은 p-값 < 0.001로 유의한 상관관계가 관찰된다. 추가로, 187명의 대상체에 대해 기준선에서 혈청에서 hTau-pT217이 결정된다. 이 187명의 대상체 중 182명에 대해 타우 PET SUVr 검정이 수행된다. 데이터는 스피어만 시험을 이용하여 분석되고, 스피어만 ρ = 0.41, 수정되지 않은 p-값 < 0.001로 유의한 상관관계가 관찰된다. 추가로, 86명의 대상체에 대해 기준선에서 CSF에서 hTau-pT217이 결정된다. 이 86명의 대상체 중 29명에 대해 타우 PET SUVr 검정이 수행된다. 데이터는 스피어만 시험을 이용하여 분석되고, 스피어만 ρ = 0.70, 수정되지 않은 p-값 < 0.001로 유의한 상관관계가 관찰된다. 결과는 타우 병리를 식별하기 위해 CSF, 혈장 또는 혈청에서 측정된 pTau217 수준의 사용을 뒷받침한다.
hTau-pT217 면역검정은 경도 AD 인지 상태와 연관됨
경도 AD 대상체의 혈장, 혈청 및 CSF에서 hTau-pT217의 평균 값을 상기 기재된 면역검정에 따라 계산한다. 각각의 기질의 결과는 표 4에 제공된다.
표 4. 경도 AD 대상체의 혈장, 혈청 및 CSF에서 hTau-pT217의 평균 값
Figure pct00004
본원에 개시된 hTau-pT217 면역검정은 경도 AD 환자의 인지 상태 (간이 정신 상태 검사: MMSE에 기반) 및 MMSE에 대한 기준선 대 위약으로부터의 변화와 연관된다. hTau-pT217을 경도 AD 환자로부터의 혈장, 혈청 및 CSF에서 면역검정에 의해 평가한다. 간략하게, 각각의 기질 (혈장, 혈청 및 CSF)에 대해, 대상체는 (본원에 기재된) hTau-pT217 측정 및 기준선에서의 MMSE 평가를 갖고, 기준선 평가로부터의 변화는 스피어만 시험으로 유의성에 대해 평가된다. hTau-pT217 면역검정은 인지 상태 및 혈장 및 혈청의 기준선으로부터의 변화 둘 다와 통계적으로 유의한 연관성을 제시한다 (CSF 샘플 수는 통계적 유의성에 대해 너무 낮지만, 데이터는 혈청 및 혈장에 대해 평가된 것과 같이 샘플 수가 증가함에 따라 연관성이 있음을 제시하였으며, CSF는 MMSE 및 기준선으로부터의 MMSE 변화 둘 다에 대해 통계적으로 유의한 연관성을 가질 것으로 예상됨). 결과는 표 5에 제공된다.
표 5. 경도 AD로 진단된 대상체에서 MMSE 및 기준선에서의 MMSE 변화로 혈장, 혈청 및 CSF에서 hTau-pT217 면역검정 평가
Figure pct00005
*기준선으로부터 MMSE 변화에 대해 평가된 환자의 작은 샘플 크기로 인해 통계적으로 유의한 것으로 간주되지 않음.
이들 결과는 hTau-pT217의 인지 측정 MMSE와의 횡단면 연관성을 입증하고, 인지 저하의 향후 위험을 결정하기 위한 hTau-pT217의 유용성을 입증한다.
hTau-pT217 면역검정은 아밀로이드 상태와 연관됨
본원에 개시된 hTau-pT217 면역검정은 아밀로이드 상태와 연관된다. 간략하게, 공지된 AD 및 아밀로이드 상태 (PET 신경학적 영상화에 기반)의 4개의 분리된 환자 그룹으로부터의 혈장 샘플을 hTau-pT217 연관성에 대해 평가한다: (i) 이환되지 않은 노인 아밀로이드 양성 (CU-A+); (ii) 이환되지 않은 노인 아밀로이드 음성 (CU-A-); (iii) 노인 아밀로이드 양성 AD (AD-A+); 및 (iv) 임상적으로 이환되지 않은 청년 (CUY-A-). 각각의 그룹으로부터 샘플을 본원에 기재된 바와 같은 hTau-pT217 면역검정으로 분석한다. 결과는 표 6에 제공된다.
표 6. AD 및 아밀로이드 상태와 연관된 hTau-pT217
Figure pct00006
아밀로이드 양성 대상체의 식별을 위한 hTau-pT217 면역검정의 평가는 스튜던트 t-검정을 이용하여 별도의 그룹에 대해 표 6에 제공된 결과의 평가에 의해 결정된다. 결과는 표 7에 제공된다.
표 7. AD 및 아밀로이드 상태와 연관된 혈장 hTau-pT217의 평균 차이의 스튜던트 t-검정
Figure pct00007
표 6 및 7에서 제시된 바와 같이, AD-A+ 그룹에 대한 평균은 11.4 pg/mL이고, 3.6의 나이 일치된 CU-A- 그룹보다 3배 높아, 4.60E-06의 수정되지 않은 p-값이 생성된다. 수신자 작동 특징 (ROC) 곡선 분석이 또한 아밀로이드 양성 대상체의 식별에서 hTau-pT217에 대한 민감도 및 특이도를 평가하는데 사용된다. ROC 곡선 아래 면적은 도 1에 나타난 바와 같이 0.94이다.
본원에 제공된 데이터는 본 개시내용의 hTau-pT217 검정이 아밀로이드 양성 대상체를 식별하고; AD에 대한 진단 역할을 하고 AD와 관련된 대상체의 인지 상태를 결정하고; AD의 위험이 있거나 및/또는 AD의 초기 병기에 있는 대상체를 식별하고; AD의 진행을 진단하는 역할을 할 수 있음을 입증한다. 데이터는 또한 본 개시내용의 hTau-pT217 검정이 신경학적 영상화와 상관관계가 있고, 혈청, 혈장 및 CSF 기질에서 기능적이며, 공지된 hTau-pT181 검정보다 우수함을 입증한다.
본 개시내용의 예시적인 실시양태:
1. 서열식별번호: 1의 잔기 217에서의 트레오닌에서 인산화된 인간 타우 ("hTau-pT217")에 특이적으로 결합하는 항체.
2. 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하는 항체로서, 여기서 LCVR은 상보성 결정 영역 (CDR) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, HCVR은 CDR HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하며,
여기서 LCDR1은 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 갖고; LCDR2는 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 갖고, LCDR3은 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 갖고, HCDR1은 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖고, HCDR2는 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 갖고, HCDR3은 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 갖는 것인
항체.
3. 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하는 항체로서, 여기서 LCVR은 상보성 결정 영역 (CDR) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, HCVR은 CDR HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하며,
여기서 LCDR1은 서열식별번호: 13의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고; LCDR2는 서열식별번호: 14의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고, LCDR3은 서열식별번호: 15의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고, HCDR1은 서열식별번호: 10의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고, HCDR2는 서열식별번호: 11의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고, HCDR3은 서열식별번호: 12의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 것인
항체.
4. 실시양태 2 또는 3에 있어서, 하기로부터 선택된 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하는 항체:
a. 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 LCVR 및 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 HCVR; 및
b. 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 갖는 LCVR 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 HCVR.
5. 실시양태 2 또는 3에 있어서, 하기로부터 선택된 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하는 항체:
a. 서열식별번호: 5의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 LCVR 및 서열식별번호: 3의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 HCVR; 및
b. 서열식별번호: 8의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 LCVR 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 HCVR.
6. 실시양태 1-5 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 항체가 인간화된 것인 항체.
7. 실시양태 1-6 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 항체가 IgG4 중쇄를 포함하는 것인 항체.
8. 실시양태 1-7 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 항체가 카파 경쇄를 포함하는 것인 항체.
9. 실시양태 1-8 중 어느 한 실시양태의 항체 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
10. 인간 타우의 CNS-발현된 이소형에 특이적으로 결합하는 항체.
11. 실시양태 10에 있어서, 항체가 서열식별번호: 1의 잔기 124에서의 글루타민 및 잔기 125에서의 알라닌을 포함하는 인간 타우의 에피토프 영역에 결합하는 것인 항체.
12. 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하는 항체로서, 여기서 LCVR은 상보성 결정 영역 (CDR) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, HCVR은 CDR HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하며,
여기서 LCDR1은 서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 갖고, LCDR2는 서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 갖고, LCDR3은 서열식별번호: 25의 아미노산 서열을 갖고, HCDR1은 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 갖고, HCDR2는 서열식별번호: 21의 아미노산 서열을 갖고, HCDR3은 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 갖는 것인
항체.
13. 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하는 항체로서, 여기서 LCVR은 상보성 결정 영역 (CDR) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, HCVR은 CDR HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하며,
여기서 LCDR1은 서열식별번호: 23의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고; LCDR2는 서열식별번호: 24의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고, LCDR3은 서열식별번호: 25의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고, HCDR1은 서열식별번호: 20의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고, HCDR2는 서열식별번호: 21의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고, HCDR3은 서열식별번호: 22의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 것인
항체.
14. 실시양태 12 또는 13에 있어서, 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하는 항체.
15. 실시양태 12 또는 13에 있어서, 서열식별번호: 17의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 서열식별번호: 19의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 것인 항체.
16. 실시양태 10-15 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 항체가 인간화된 것인 항체.
17. 실시양태 10-16 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 항체가 IgG4 중쇄를 포함하는 것인 항체.
18. 실시양태 10-17 중 어느 한 실시양태에 있어서, 상기 항체가 카파 경쇄를 포함하는 것인 항체.
19. 실시양태 10-18 중 어느 한 실시양태의 항체 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
20. 신경변성 질환의 치료를 필요로 하는 환자에게 유효량의 실시양태 1-19 중 어느 한 실시양태의 항체 또는 그의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 신경변성 질환을 치료하는 방법.
21. 실시양태 20에 있어서, 신경변성 질환이 타우병증인 방법.
22. 실시양태 21에 있어서, 타우병증이 AD, PSP 및 FTD 중 하나인 방법.
23. 요법에 사용하기 위한 실시양태 1-19 중 어느 한 실시양태의 항체 또는 그의 제약 조성물.
24. 신경변성 질환의 치료에 사용하기 위한 실시양태 1-19 중 어느 한 실시양태의 항체 또는 그의 제약 조성물.
25. 실시양태 24에 있어서, 상기 신경변성 질환이 타우병증인 항체 또는 그의 제약 조성물.
26. 실시양태 25에 있어서, 상기 타우병증이 AD, PSP 및 FTD로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 항체 또는 그의 제약 조성물.
27. 신경변성 질환의 치료를 위한 약제의 제조에 사용하기 위한 실시형태 1-19 중 어느 한 실시양태의 항체 또는 그의 제약 조성물.
28. 실시양태 27에 있어서, 상기 신경변성 질환이 타우병증인 항체 또는 그의 제약 조성물.
29. 실시양태 28에 있어서, 상기 타우병증이 AD, PSP 및 FTD로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 항체 또는 그의 제약 조성물.
30. 환자 샘플을 실시양태 1-8 중 어느 한 실시양태의 항체와 접촉시키는 단계; 및 상기 접촉 단계에 의해 제공되는 신호를 검출하는 단계를 포함하는, 환자 샘플에서 hTau-pT217을 검출하는 방법.
31. 환자 샘플을 실시양태 1-8 중 어느 한 실시양태의 항체와 접촉시키는 단계; 및 상기 접촉 단계에 의해 제공되는 신호를 검출하는 단계를 포함하는, 환자 샘플에서 hTau-pT217을 정량화하는 방법.
32. 실시양태 31에 있어서, 대조 표준물을 항체와 접촉시키는 단계; 및 대조 표준물을 접촉시키는 상기 단계에 의해 제공되는 신호를 검출하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
33. 환자 샘플을 실시양태 1-8의 항체와 접촉시키는 단계; 환자 샘플을 제2 항체와 접촉시키는 접촉시키며, 여기서 제2 항체는 실시양태 10-18의 항체이고, 항체 및 제2 항체 중 하나는 검출가능한 표지를 포함하는 것인 단계; 항체, 제2 항체 및 hTau-pT217을 포함하는 복합체의 형성 시 검출가능한 표지에 의해 제공되는 신호를 검출하는 단계; 대조 표준물을 항체와 접촉시키는 단계; 대조 표준물을 제2 항체와 접촉시키며, 항체 및 제2 항체 중 하나는 검출가능한 표지를 포함하는 것인 단계; 및 항체, 제2 항체 및 대조 표준물을 포함하는 복합체의 형성 시 검출가능한 표지에 의해 제공되는 신호를 검출하는 단계를 포함하는, 환자 샘플에서 hTau-pT217을 정량화하는 방법.
34. 환자 샘플을 실시양태 1-8 중 어느 한 실시양태의 항체와 접촉시키는 단계; 및 환자 샘플에서 항체와 hTau-pT217 사이의 결합을 검출하는 단계를 포함하는, 환자를 (i) 신경변성 질환을 갖는 것; (ii) 신경변성 질환을 가질 위험이 있는 것; (iii) 신경변성 질환에 대한 치료를 필요로 하는 것; 또는 (iv) 신경학적 영상화를 필요로 하는 것 중 하나 이상으로 진단하는 방법.
35. 실시양태 34에 있어서, 환자 샘플에서 검출된 hTau-pT217의 수준이 참조 수준을 초과하는 경우에 환자를 (i) 신경변성 질환을 갖는 것; (ii) 신경변성 질환을 가질 위험이 있는 것; (iii) 신경변성 질환에 대한 치료를 필요로 하는 것; 또는 (iv) 신경학적 영상화를 필요로 하는 것 중 하나로 진단하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
36. 환자 샘플을 실시양태 1-8 중 어느 한 실시양태의 항체와 접촉시키는 단계; 환자 샘플에서 항체와 hTau-pT217 사이의 결합을 검출하는 단계; 신경변성 질환을 갖는 환자를 진단하는 단계; 및 진단된 환자에게 치료 유효량의 항-인간 타우 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 환자에서 신경변성 질환을 진단 및 치료하는 방법.
37. 실시양태 36에 있어서, 상기 진단 단계가 환자 샘플에서 hTau-pT217의 존재가 참조 수준을 초과하는 경우에 환자를 신경변성 질환을 갖는 것으로 진단하는 것을 포함하는 것인 방법.
38. 실시양태 31-37 중 어느 한 실시양태에 있어서, 환자 샘플에서 hTau-pT217을 정량화하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
39. 실시양태 38에 있어서, hTau-pT217을 정량화하는 상기 단계가 환자 샘플에서 hTau-pT217을 참조 표준물과 대비하여 정량화하는 것을 포함하는 방법.
40. 실시양태 30-39 중 어느 한 실시양태에 있어서, 환자 샘플이 혈액, 혈장, 혈청 또는 CSF 중 하나인 방법.
41. 실시양태 30-32 및 34-40 중 어느 한 실시양태에 있어서, 환자 샘플을 제2 항체와 접촉시키며, 상기 제2 항체는 항체와 중첩되지 않는 hTau-pT217의 에피토프 영역에 결합하는 것인 단계를 추가로 포함하는 방법.
42. 실시양태 41에 있어서, 항체 또는 제2 항체 중 하나가 검출가능한 표지를 포함하고, 상기 검출 단계가 항체, 제2 항체 및 hTau-pT217를 포함하는 복합체의 형성 시 검출가능한 표지에 의해 제공되는 신호를 검출하는 것을 포함하는 것인 방법.
43. 실시양태 41 또는 42에 있어서, 항체 및 제2 항체 중 하나가 기판 상에 고정화되는 것인 방법.
44. 실시양태 30-43 중 어느 한 실시양태에 있어서, 환자 샘플을 항체와 접촉시키는 상기 단계 및 환자 샘플을 제2 항체와 접촉시키는 상기 단계가 동시에 발생하는 것인 방법.
45. 실시양태 32 및 41-44 중 어느 한 실시양태에 있어서, 제2 항체가 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하며, 여기서 LCVR은 상보성 결정 영역 (CDR) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, HCVR은 CDR HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하며,
여기서 LCDR1은 서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 갖고, LCDR2는 서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 갖고, LCDR3은 서열식별번호: 25의 아미노산 서열을 갖고, HCDR1은 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 갖고, HCDR2는 서열식별번호: 21의 아미노산 서열을 갖고, HCDR3은 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 갖는 것인
방법.
46. 실시양태 33 및 41-44 중 어느 한 실시양태에 있어서, 제2 항체가 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하며, 여기서 LCVR은 상보성 결정 영역 (CDR) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, HCVR은 CDR HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하며,
여기서 LCDR1은 서열식별번호: 23의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고; LCDR2는 서열식별번호: 24의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고, LCDR3은 서열식별번호: 25의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고, HCDR1은 서열식별번호: 20의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고, HCDR2는 서열식별번호: 21의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고, HCDR3은 서열식별번호: 22의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 것인
방법.
47. 실시양태 46 또는 47에 있어서, 제2 항체가 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하고, LCVR은 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 갖고, HCVR은 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 갖는 것인 방법.
48. 실시양태 46 또는 47에 있어서, 제2 항체가 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하며, 여기서 LCVR은 서열식별번호: 19의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고, HCVR은 서열식별번호: 17의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 것인 방법.
49. 환자 샘플을 실시양태 1-8 중 하나의 항체인 제1 항체와 접촉시키는 단계; 및 환자 샘플을 실시양태 10-18 중 하나의 항체인 제2 항체와 접촉시키는 단계를 포함하는, 제1 항체, 제2 항체 및 CNS에서 발현되고 서열식별번호: 1의 잔기 217의 트레오닌에서 인산화된 인간 타우 사이의 복합체를 형성하는 방법.
50. 실시양태 1-8 중 하나의 항체 및 실시양태 10-18 중 하나의 항체를 포함하는, CNS에서 발현되고 서열식별번호: 1의 잔기 217의 트레오닌에서 인산화된 인간 타우를 검출하기 위한 검정.
51. 실시양태 50에 있어서, 항체 중 하나가 검출가능한 표지를 포함하는 것인 검정.
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
SEQUENCE LISTING <110> ELI LILLY AND COMPANY <120> COMPOUNDS AND METHODS TARGETING HUMAN TAU <130> X22196 <150> PCT/US2020/034274 <151> 2020-05-22 <150> 62/855,331 <151> 2019-05-31 <160> 27 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 441 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence <400> 1 Met Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly 1 5 10 15 Thr Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Thr Met His 20 25 30 Gln Asp Gln Glu Gly Asp Thr Asp Ala Gly Leu Lys Glu Ser Pro Leu 35 40 45 Gln Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser 50 55 60 Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr Ala Glu Asp Val Thr Ala Pro Leu Val 65 70 75 80 Asp Glu Gly Ala Pro Gly Lys Gln Ala Ala Ala Gln Pro His Thr Glu 85 90 95 Ile Pro Glu Gly Thr Thr Ala Glu Glu Ala Gly Ile Gly Asp Thr Pro 100 105 110 Ser Leu Glu Asp Glu Ala Ala Gly His Val Thr Gln Ala Arg Met Val 115 120 125 Ser Lys Ser Lys Asp Gly Thr Gly Ser Asp Asp Lys Lys Ala Lys Gly 130 135 140 Ala Asp Gly Lys Thr 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Asp Asn Ile Thr His Val Pro Gly Gly Gly Asn 355 360 365 Lys Lys Ile Glu Thr His Lys Leu Thr Phe Arg Glu Asn Ala Lys Ala 370 375 380 Lys Thr Asp His Gly Ala Glu Ile Val Tyr Lys Ser Pro Val Val Ser 385 390 395 400 Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser 405 410 415 Ile Asp Met Val Asp Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala Asp Glu Val 420 425 430 Ser Ala Ser Leu Ala Lys Gln Gly Leu 435 440 <210> 2 <211> 433 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 2 Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Leu Ser Pro Ser Trp Tyr Gly 20 25 30 Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Val Leu Arg Ala Gly Ser His Thr Tyr Tyr Ala Gly Trp Ala Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Ala Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Ala Leu Lys Ile Thr 65 70 75 80 Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Phe Cys Gly Ser Val Gly 85 90 95 Arg Gly Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Leu 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Lys 305 310 315 320 Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Pro Leu Glu Pro Lys Val Tyr Thr 325 330 335 Met Gly Pro Pro Arg Glu Glu Leu Ser Ser Arg Ser Val Ser Leu Thr 340 345 350 Cys Met Ile Asn Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ser Val Glu Trp Glu 355 360 365 Lys Asn Gly Lys Ala Glu Asp Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Ala Val Leu 370 375 380 Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Pro Thr 385 390 395 400 Ser Glu Trp Gln Arg Gly Asp Val Phe Thr Cys Ser Val Met His Glu 405 410 415 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Ile Ser Arg Ser Pro Gly 420 425 430 Lys <210> 3 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence <400> 3 Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Leu Ser Pro Ser Trp Tyr Gly 20 25 30 Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Val Leu Arg Ala Gly Ser His Thr Tyr Tyr Ala Gly Trp Ala Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Ala Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Ala Leu Lys Ile Thr 65 70 75 80 Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Phe Cys Gly Ser Val Gly 85 90 95 Arg Gly Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Leu 100 105 110 <210> 4 <211> 217 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence <400> 4 Ala Gln Val Leu Thr Gln Thr Ala Ser Pro Val Ser Ala Thr Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Leu Ala Val Tyr Asn Asn 20 25 30 Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Arg 35 40 45 Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Ser Leu Ser Ser Gly Val Ser Ser His Phe 50 55 60 Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val 65 70 75 80 Gln Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gly Ser Tyr Asp Cys 85 90 95 Thr Ile Ala Asp Cys Val Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val 100 105 110 Lys Gly Asp Pro Val Ala Pro Thr Val Leu Ile Phe Pro Pro Ala Ala 115 120 125 Asp Gln Val Ala Thr Gly Thr Val Thr Ile Val Cys Val Ala Asn Lys 130 135 140 Tyr Phe Pro Asp Val Thr Val Thr Trp Glu Val Asp Gly Thr Thr Gln 145 150 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Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Leu Ser Pro Ser Trp Tyr Gly 20 25 30 Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Val Leu Arg Ala Gly Ser His Thr Tyr Tyr Ala Gly Trp Ala Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Ala Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Ala Leu Lys Ile Thr 65 70 75 80 Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Phe Cys Gly Ser Val Gly 85 90 95 Arg Gly Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Leu 100 105 110 <210> 7 <211> 434 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence <400> 7 Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Leu Ser Pro Ser Trp Tyr Gly 20 25 30 Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Val Leu Arg Ala Gly Ser His Thr Tyr Tyr Ala Gly Trp Ala Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Ala Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Ala Leu Lys Ile Thr 65 70 75 80 Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Phe Cys Gly Ser Val Gly 85 90 95 Arg Gly Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Leu Ala Lys 100 105 110 Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln 115 120 125 Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro 130 135 140 Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val 145 150 155 160 His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser 165 170 175 Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys 180 185 190 Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val 195 200 205 Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val 210 215 220 Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile 225 230 235 240 Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp 245 250 255 Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His 260 265 270 Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg 275 280 285 Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 290 295 300 Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu 305 310 315 320 Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr 325 330 335 Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu 340 345 350 Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp 355 360 365 Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile 370 375 380 Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln 385 390 395 400 Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His 405 410 415 Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro 420 425 430 Gly Lys <210> 8 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence <400> 8 Ala Gln Val Leu Thr Gln Thr Ala Ser Pro Val Ser Ala Thr Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Leu Ala Val Tyr Asn Asn 20 25 30 Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Arg 35 40 45 Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Ser Leu Ser Ser Gly Val Ser Ser His Phe 50 55 60 Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val 65 70 75 80 Gln Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gly Ser Tyr Asp Cys 85 90 95 Thr Ile Ala Asp Cys Val Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val 100 105 110 Lys <210> 9 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence <400> 9 Ala Gln Val Leu Thr Gln Thr Ala Ser Pro Val Ser Ala Thr Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Leu Ala Val Tyr Asn Asn 20 25 30 Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Arg 35 40 45 Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Ser Leu Ser Ser Gly Val Ser Ser His Phe 50 55 60 Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val 65 70 75 80 Gln Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gly Ser Tyr Asp Cys 85 90 95 Thr Ile Ala Asp Cys Val Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val 100 105 110 Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser 115 120 125 Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu 145 150 155 160 Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr 180 185 190 Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr 195 200 205 Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 210 215 220 <210> 10 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence <400> 10 Gly Leu Ser Pro Ser Trp Tyr Gly Val His 1 5 10 <210> 11 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence <400> 11 Val Leu Arg Ala Gly Ser His Thr Tyr Tyr Ala Gly Trp Ala Lys Gly 1 5 10 15 <210> 12 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence <400> 12 Val Gly Arg Gly Ile 1 5 <210> 13 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence <400> 13 Gln Ala Ser Leu Ala Val Tyr Asn Asn Asn Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 14 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence <400> 14 Leu Ala Ser Ser Leu Ser Ser 1 5 <210> 15 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence <400> 15 Leu Ala Ser Ser Leu Ser Ser 1 5 <210> 16 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence <400> 16 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Pro Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Asp Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asn Trp Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Leu Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Asn Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Ser Phe Asp Arg Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 105 110 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 115 120 125 Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 130 135 140 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 145 150 155 160 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 165 170 175 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 180 185 190 Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 195 200 205 Arg Val Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro 225 230 235 240 Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser 260 265 270 Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His 275 280 285 Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile 290 295 300 Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn 305 310 315 320 Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys 325 330 335 Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu 340 345 350 Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe 355 360 365 Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu 370 375 380 Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr 385 390 395 400 Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg 405 410 415 Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His 420 425 430 Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys 435 440 <210> 17 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence <400> 17 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Pro Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Asp Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asn Trp Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Leu Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Asn Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Ser Phe Asp Arg Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 18 <211> 215 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence <400> 18 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Ser Asn 20 25 30 Tyr Phe Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Val Ser Arg Arg Ala Phe Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ala Ser Leu 85 90 95 Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110 Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 115 120 125 Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140 Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160 Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205 Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 19 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence <400> 19 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Ser Asn 20 25 30 Tyr Phe Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Val Ser Arg Arg Ala Phe Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ala Ser Leu 85 90 95 Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 20 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence <400> 20 Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Pro Tyr Tyr Trp Ser 1 5 10 <210> 21 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence <400> 21 Glu Ile Asn Trp Ser Gly Asp Thr Asn 1 5 <210> 22 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence <400> 22 Ala Arg Ser Phe Asp Arg 1 5 <210> 23 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence <400> 23 Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Ser Asn Tyr Phe Ala 1 5 10 <210> 24 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence <400> 24 Tyr Gly Val Ser Arg Arg Ala Phe 1 5 <210> 25 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence <400> 25 Gln Gln Tyr Gly Ala Ser Leu Ile Thr 1 5 <210> 26 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> wherein T at residue 7 is phosphorylated <400> 26 Arg Thr Pro Ser Leu Pro Thr Pro Pro Thr Arg 1 5 10 <210> 27 <211> 757 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Sequence <400> 27 Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly Thr 1 5 10 15 Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Thr Met His Gln 20 25 30 Asp Gln Glu Gly Asp Thr Asp Ala Gly Leu Lys Glu Ser Pro Leu Gln 35 40 45 Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser Asp 50 55 60 Ala Lys Ser Thr Pro Thr Ala Glu Asp Val Thr Ala Pro Leu Val Asp 65 70 75 80 Glu Gly Ala Pro Gly Lys Gln Ala Ala Ala Gln Pro His Thr Glu Ile 85 90 95 Pro Glu Gly Thr Thr Ala Glu Glu Ala Gly Ile Gly Asp Thr Pro Ser 100 105 110 Leu Glu Asp Glu Ala Ala Gly His Val Thr Gln Glu Pro Glu Ser Gly 115 120 125 Lys Val Val Gln Glu Gly Phe Leu Arg Glu Pro Gly Pro Pro Gly Leu 130 135 140 Ser His Gln Leu Met Ser Gly Met Pro Gly Ala Pro Leu Leu Pro Glu 145 150 155 160 Gly Pro Arg Glu Ala Thr Arg Gln Pro Ser Gly Thr Gly Pro Glu Asp 165 170 175 Thr Glu Gly Gly Arg His Ala Pro Glu Leu Leu Lys His Gln Leu Leu 180 185 190 Gly Asp Leu His Gln Glu Gly Pro Pro Leu Lys Gly Ala Gly Gly Lys 195 200 205 Glu Arg Pro Gly Ser Lys Glu Glu Val Asp Glu Asp Arg Asp Val Asp 210 215 220 Glu Ser Ser Pro Gln Asp Ser Pro Pro Ser Lys Ala Ser Pro Ala Gln 225 230 235 240 Asp Gly Arg Pro Pro Gln Thr Ala Ala Arg Glu Ala Thr Ser Ile Pro 245 250 255 Gly Phe Pro Ala Glu Gly Ala Ile Pro Leu Pro Val Asp Phe Leu Ser 260 265 270 Lys Val Ser Thr Glu Ile Pro Ala Ser Glu Pro Asp Gly Pro Ser Val 275 280 285 Gly Arg Ala Lys Gly Gln Asp Ala Pro Leu Glu Phe Thr Phe His Val 290 295 300 Glu Ile Thr Pro Asn Val Gln Lys Glu Gln Ala His Ser Glu Glu His 305 310 315 320 Leu Gly Arg Ala Ala Phe Pro Gly Ala Pro Gly Glu Gly Pro Glu Ala 325 330 335 Arg Gly Pro Ser Leu Gly Glu Asp Thr Lys Glu Ala Asp Leu Pro Glu 340 345 350 Pro Ser Glu Lys Gln Pro Ala Ala Ala Pro Arg Gly Lys Pro Val Ser 355 360 365 Arg Val Pro Gln Leu Lys Ala Arg Met Val Ser Lys Ser Lys Asp Gly 370 375 380 Thr Gly Ser Asp Asp Lys Lys Ala Lys Thr Ser Thr Arg Ser Ser Ala 385 390 395 400 Lys Thr Leu Lys Asn Arg Pro Cys Leu Ser Pro Lys His Pro Thr Pro 405 410 415 Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ile Gln Pro Ser Ser Pro Ala Val Cys Pro 420 425 430 Glu Pro Pro Ser Ser Pro Lys Tyr Val Ser Ser Val Thr Ser Arg Thr 435 440 445 Gly Ser Ser Gly Ala Lys Glu Met Lys Leu Lys Gly Ala Asp Gly Lys 450 455 460 Thr Lys Ile Ala Thr Pro Arg Gly Ala Ala Pro Pro Gly Gln Lys Gly 465 470 475 480 Gln Ala Asn Ala Thr Arg Ile Pro Ala Lys Thr Pro Pro Ala Pro Lys 485 490 495 Thr Pro Pro Ser Ser Gly Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly 500 505 510 Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr 515 520 525 Pro Ser Leu Pro Thr Pro Pro Thr Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Val 530 535 540 Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln 545 550 555 560 Thr Ala Pro Val Pro Met Pro Asp Leu Lys Asn Val Lys Ser Lys Ile 565 570 575 Gly Ser Thr Glu Asn Leu Lys His Gln Pro Gly Gly Gly Lys Val Gln 580 585 590 Ile Ile Asn Lys Lys Leu Asp Leu Ser Asn Val Gln Ser Lys Cys Gly 595 600 605 Ser Lys Asp Asn Ile Lys His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile 610 615 620 Val Tyr Lys Pro Val Asp Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly Ser 625 630 635 640 Leu Gly Asn Ile His His Lys Pro Gly Gly Gly Gln Val Glu Val Lys 645 650 655 Ser Glu Lys Leu Asp Phe Lys Asp Arg Val Gln Ser Lys Ile Gly Ser 660 665 670 Leu Asp Asn Ile Thr His Val Pro Gly Gly Gly Asn Lys Lys Ile Glu 675 680 685 Thr His Lys Leu Thr Phe Arg Glu Asn Ala Lys Ala Lys Thr Asp His 690 695 700 Gly Ala Glu Ile Val Tyr Lys Ser Pro Val Val Ser Gly Asp Thr Ser 705 710 715 720 Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val 725 730 735 Asp Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala Asp Glu Val Ser Ala Ser Leu 740 745 750 Ala Lys Gln Gly Leu 755

Claims (14)

  1. 하기 단계를 포함하는, 환자 샘플에서 hTau-pT217을 검출하는 방법:
    환자 샘플을 서열식별번호: 1의 잔기 217에서의 트레오닌에서 인산화된 인간 타우 ("hTau-pT217")에 특이적으로 결합하는 항체와 접촉시키는 단계; 및
    hTau-pT217과 항체의 결합을 검출하는 단계.
  2. 제1항에 있어서,
    환자 샘플에서 hTau-pT217을 정량화하는 단계
    를 추가로 포함하는 방법.
  3. 하기 단계를 포함하는, 환자를 (i) 신경변성 질환을 갖는 것; (ii) 신경변성 질환을 가질 위험이 있는 것; (iii) 신경변성 질환에 대한 치료를 필요로 하는 것; 또는 (iv) 신경학적 영상화를 필요로 하는 것 중 하나 이상으로 진단하는 방법:
    환자 샘플을 hTau-p217에 특이적으로 결합하는 항체와 접촉시키는 단계; 및
    환자 샘플에서 항체와 hTau-pT217 사이의 결합을 검출하는 단계.
  4. 제3항에 있어서, 환자 샘플에서 검출된 hTau-pT217의 수준이 참조 수준을 초과하는 경우,
    환자를
    (i) 신경변성 질환을 갖는 것,
    (ii) 신경변성 질환을 가질 위험이 있는 것,
    (iii) 신경변성 질환에 대한 치료를 필요로 하는 것, 또는
    (iv) 신경학적 영상화를 필요로 하는 것
    중 하나로 진단하는 단계
    를 추가로 포함하는 방법.
  5. 제3항에 있어서,
    환자를 신경변성 질환을 갖는 것으로 진단하는 단계
    를 추가로 포함하며,
    상기 신경변성 질환은 타우병증인 방법.
  6. 제5항에 있어서, 타우병증이 알츠하이머병 (AD), 진행성 핵상 마비 (PSP) 및 전두측두엽 치매 (FTD)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  7. 제5항 또는 제6항에 있어서, 환자에게 치료 유효량의 항-인간 타우 항체를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 환자 샘플이 혈액, 혈장, 혈청 또는 CSF 중 하나인 방법.
  9. 제1항 또는 제8항에 있어서, 환자 샘플을 제2 항체와 접촉시키며, 상기 제2 항체는 항체와 중첩되지 않는 hTau-pT217의 에피토프 영역에 결합하는 것인 단계를 추가로 포함하는 방법.
  10. 제9항에 있어서, 제2 항체가 인간 타우의 CNS-발현된 이소형에 특이적으로 결합하는 것인 방법.
  11. 제10항에 있어서, 제2 항체가 서열식별번호: 1의 잔기 124에서의 글루타민 및 잔기 125에서의 알라닌을 포함하는 인간 타우의 에피토프 영역에 결합하는 것인 방법.
  12. 제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 제2 항체 중 하나가 검출가능한 표지를 포함하고, 상기 검출 단계가 항체, 제2 항체 및 hTau-pT217을 포함하는 복합체의 형성 시 검출가능한 표지에 의해 제공되는 신호를 검출하는 것을 포함하는 것인 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, hTau-pT217에 특이적으로 결합하는 항체가 경쇄 가변 영역 (LCVR) 및 중쇄 가변 영역 (HCVR)을 포함하며, 여기서 LCVR은 상보성 결정 영역 (CDR) LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, HCVR은 CDR HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하며, 여기서 CDR의 아미노산 서열은 하기로부터 선택되는 것인 방법:
    (a) LCDR1은 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 갖고; LCDR2는 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 갖고, LCDR3은 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 갖고, HCDR1은 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖고, HCDR2는 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 갖고, HCDR3은 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 갖는 것; 또는
    (b) LCDR1은 서열식별번호: 13의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고; LCDR2는 서열식별번호: 14의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고, LCDR3은 서열식별번호: 15의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고, HCDR1은 서열식별번호: 10의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고, HCDR2는 서열식별번호: 11의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖고, HCDR3은 서열식별번호: 12의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 것.
  14. 제13항에 있어서, 항체의 LCVR 및 HCVR이 하기로부터 선택되는 것인 방법:
    a. 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 LCVR 및 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 HCVR;
    b. 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 갖는 LCVR 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 HCVR;
    c. 서열식별번호: 5의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 LCVR 및 서열식별번호: 3의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 HCVR; 및
    d. 서열식별번호: 8의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 LCVR 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열과 적어도 95% 상동성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 HCVR.
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