JP7399096B2 - 神経変性を検出するためのアッセイ - Google Patents
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Description
別の定義がなされない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般的に理解されるものと同じ意味を有する。そうでない場合、本明細書で使用される特定の用語は、本明細書に記載される意味を有するものである。本明細書に引用する全ての特許、公開された特許出願及び刊行物は、参照によって恰もその全体が本明細書に記載されているものと同様にして組み込まれる。本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される単数形「a」、「an」及び「the」は、特に文脈上明らかでない限り、複数の指示対象物を含むことに留意すべきである。
(i)Kabat:「相補性決定領域」又は「CDR」は、配列の変動性に基づく(Wu and Kabat,J Exp Med.132:211-50,1970)。一般に、抗原結合部位は、各可変領域に3つのCDR(例えば、重鎖可変領域(VH)にHCDR1、HCDR2、及びHCDR3、並びに軽鎖可変領域(VL)にLCDR1、LCDR2、及びLCDR3)を有する。
(ii)Chothia:用語「超可変領域」、「HVR」は、Chothia及びLesk(Chothia and Lesk,J Mol Biol.196:901-17,1987)により定義されているように、構造中の超可変性である抗体可変ドメインの領域を指す。一般的に、抗原結合部位は、各VH(H1、H2、H3)及びVL(L1、L2、L3)に3つの超可変領域を有する。符番システム、並びにCDR及びHVRのアノテーションは、Abhinandan及びMartin(Abhinandan and Martin,Mol Immunol.45:3832-9,2008)により改訂されている。
(iii)IMGT:抗原結合部位を形成する領域の別の定義が、免疫グロブリン及びT細胞受容体由来のVドメインの比較に基づいて、Lefranc(Lefranc et al.,Dev Comp Immunol.27:55-77,2003)によって提案されている。International ImMunoGeneTics(IMGT)データベース(http://www_imgt_org)は、これら領域についての標準化された付番及び定義を提供する。CDR、HVR、及びIMGTの記述間の対応については、Lefranc et al.,2003,同上に記載されている。
(iv)抗原結合部位はまた、「特異性決定残基の使用」(SDRU)(Almagro,Mol Recognit.17:132-43,2004)に基づいて記述することもでき、この場合、SDRは、抗原接触に直接関与する免疫グロブリンのアミノ酸残基を指す。
一般的な一態様では、本発明は、捕捉抗体によって固定化されているタウタンパク質に結合する、単離された検出抗体又はその抗原結合断片に関する。このような抗タウ抗体は、タウにおけるリン酸化エピトープに結合するか又はタウにおける非リン酸化エピトープに結合する特性を有し得る。抗タウ検出抗体は、生体サンプル中のタウを検出するための研究又は診断試薬として有用であり得る。
本発明は、例えば、捕捉されたp217+タウ種の検出を可能にするレポーターエレメントで標識された抗タウ検出抗体と組み合わせて、p217+タウ種を選択的に固定化するpT3などの捕捉抗体を使用することによる、ADにおいて多く含まれるp217+タウ種の測定に関する。本発明の方法は、例えば、対象のAD又は他のタウオパチーを診断するため、治療の有効性をモニタリングするため、抗p217+タウ治療に適している対象を特定するためなど、様々な診断目的に使用することができる。
別の一般的な態様では、本発明は、(a)p217+タウエピトープに対する捕捉抗体、任意選択で、タウタンパク質のアミノ酸150~250のタウエピトープに対するリン酸化非依存性捕捉抗体と、(b)タウタンパク質のアミノ酸残基7~20又は116~127を含むタウタンパク質エピトープに対する少なくとも1つの検出抗体と、を含む、キットに関する。キットを使用して、p217+タウペプチドの量を測定し、これは、サンプル中のショートp217+タウペプチドの量のロングp217+タウペプチドの量に対する比、及び/又はショートp217+タウペプチドの量の総ショートタウペプチドの量に対する比に使用される。
本発明は以下の非限定的な実施形態も提供する。
(i)当該サンプルを、p217+タウエピトープに対する捕捉抗体と接触させて、当該サンプル中のp217+タウペプチドを捕捉することと、
(ii)捕捉されたp217+タウペプチドを、タウタンパク質のアミノ酸残基119~126、例えばアミノ酸残基116~127を含むエピトープ、又はタウタンパク質のアミノ酸残基7~20を含有するエピトープに対する検出抗体と接触させて、それぞれ、p217+タウペプチドの量又はロングp217+タウペプチドの量を測定することと、を含む、方法である。
(i)当該サンプルを、p217+タウエピトープに対する捕捉抗体と接触させて、当該サンプル中のp217+タウペプチドを捕捉することと、
(ii)捕捉されたp217+タウペプチドを、タウタンパク質のアミノ酸残基119~126を含むエピトープに対する第1の検出抗体と接触させて、p217+タウペプチドの量を測定することと、
(iii)当該捕捉されたp217+タウペプチドを、タウタンパク質のアミノ酸残基7~20を含むエピトープに対する第2の検出抗体と接触させて、ロングp217+タウペプチドの量を測定することと、
(iv)当該p217+タウペプチドの量及び当該ロングp217+タウペプチドの量に基づいてロングp217+タウペプチド又はショートp217+タウペプチドの相対量を求めることと、を含む、方法である。
i.当該対象から生体サンプルを得ることと、
ii.当該生体サンプルを、抗体に結合しているp217+タウを含有するIgG富化サンプルと、抗体を含まないp217+タウを含有するIgG枯渇サンプルとに分離することと、
iii.当該IgG富化サンプル及び当該IgG枯渇サンプルのそれぞれを、当該タウタンパク質のリン酸化T212及び/又はリン酸化T217を含むエピトープに対する捕捉抗体と接触させて、当該サンプルのそれぞれにおけるp217+タウペプチドを捕捉することと、
iv.捕捉されたp217+タウペプチドを、タウタンパク質のアミノ酸残基7~20又は116~127を含むエピトープに対する検出抗体と接触させて、当該生体サンプル中の当該抗体に結合しているp217+タウの量及び当該抗体を含まないp217+タウの量を測定することと、
v.当該抗体に結合しているp217+タウの当該抗体を含まないp217+タウに対する比を計算することと、
vi.計算された比に基づいて、当該対象における当該抗p217+タウ抗体による治療をモニタリングすることと、を含む、方法である。
i.当該対象から生体サンプルを得ることと、
ii.総p217+タウを含有する生体サンプルから半変性サンプルを得、抗体を含まないp217+タウを含有する生体サンプルから非変性サンプルを得ることであって、その際、当該半変性サンプルを加熱して当該サンプル中の当該抗体を変性させる、ことと、
iii.当該半変性サンプル及び当該非変性サンプルのそれぞれを、当該タウタンパク質のリン酸化T212及び/又はリン酸化T217を含むエピトープに対する捕捉抗体と接触させて、当該サンプルのそれぞれにおける当該p217+タウペプチドを捕捉することと、
iv.捕捉されたp217+タウペプチドを、タウタンパク質のアミノ酸残基7~20又は116~127を含むエピトープに対する検出抗体と接触させて、当該生体サンプル中の当該総p217+タウの量及び当該抗体を含まないp217+タウの量を測定することと、
v.当該総p217+タウの量から当該抗体を含まないp217+タウの量を差し引くことによって、当該サンプル中の抗体に結合しているp217+タウの量を計算することと、
vi.当該抗体に結合しているp217+タウの当該抗体を含まないp217+タウに対する比を計算することと、
vii.計算された比に基づいて、当該対象における当該抗p217+タウ抗体による治療をモニタリングすることと、を含む、方法である。
a.それぞれ配列番号2、3及び4のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖HCDR1、HCDR2、及びHCDR3と、
b.それぞれ配列番号5、6及び7のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖LCDR1、LCDR2、及びLCDR3と、を含む、単離された検出抗体又はその抗原結合断片である。
a.それぞれ配列番号12、13及び14のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖HCDR1、HCDR2、及びHCDR3と、
b.それぞれ配列番号15、16及び17のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖LCDR1、LCDR2、及びLCDR3と、を含む、単離された検出抗体又はその抗原結合断片である。
a.タウタンパク質のリン酸化T212及び/又はリン酸化T217を含む、単一又は多重リン酸化タウタンパク質エピトープに対する捕捉抗体と、
b.タウタンパク質のアミノ酸残基7~20又は116~127を含むタウタンパク質エピトープに対する検出抗体と、を含む、キットであって、
サンプル中のp217+タウペプチドの量を測定するために使用される、キットである。
アッセイ特異的な試薬は、以下のとおりであった:Simoa Homebrewキット(Quanterix、カタログ番号101351)、ヘルパービーズ(Quanterix、カタログ番号101732)、pT3マウスモノクローナル抗体(mAb)、hT43 mAb、pT82 mAb、及びhT7 mAb。pT3は、p217+タウを認識する、Janssenで開発された親抗体であり、そのヒト化バージョンを本明細書ではヒト化pT3 mAbと称する。
Quanterixマニュアルに提供されているプロトコルに従って、捕捉ビーズを0.3mg/mL捕捉Abでコーティングした。コーティングされた捕捉ビーズをビーズ希釈バッファで200,000ビーズ/mLに希釈し、ビーズの総濃度が400,000ビーズ/mLとなるように200,000ビーズ/mLのヘルパービーズを添加した。
捕捉Ab、サンプル、及び検出Abと共に35分間、及び洗浄、続いて、ストレプトアビジンβ-ガラクトシダーゼ(SBG)と共に5分間を含む2工程プロトコルを含む、カスタムSimoaアッセイを作成した。各反応は、25μLのビーズ溶液、100μLのサンプル又は較正物質、20μLの検出溶液、100μLのSBGを含んでいた。抗体に名前を割り当て、最大5つの捕捉抗体及び5つの検出抗体を一度にロードすることができた。機器によってSimoaキュベット内で反応を実施し、最後に1回洗浄し、β-ガラクトシダーゼ基質(RGP)を有する測定ディスクにロードした後、機器によって測定を行った。
試薬は以下のとおりであった:トリフルオロ酢酸(HPLCグレード)、水(HPLCグレード)、アセトニトリル(HPLCグレード)、リン酸(分析グレード)、及びHPLC二成分勾配系、イムノアッセイバッファ(100mM TrisHCl、100mM NaCl、0.05% Tween、及びBSA、pH7.8)。
追加の上流サンプル操作を用いて、患者内で産生されるか又は外因的に投与されるかのいずれかの抗体、例えばヒト化pT3 mAbによって、p217+タウの結合を測定するために、高感度pT3ベースのアッセイを使用することができる。この技術は、治療用抗p217+タウ抗体、例えば、ヒト化pT3 mAbを研究するための薬物動態アッセイとして使用することができる。例えば、以下の方法を使用して、抗体を含まない対抗体に結合しているp217+タウを測定することができる。
生物学的流体(例えば、CSF)を、タンパク質A/Gでコーティングされた磁気ビーズ(CSF 0.5mL当たり15μLのビーズスラリー)と共に室温で揺動させながら2時間インキュベートして、サンプル中の免疫グロブリンを捕捉した。ビーズを磁石によって沈殿させ、上清を第2のチューブに移した(サンプル=「IgG枯渇上清」)。ビーズを、1mLの冷リン酸緩衝生理食塩水(PBS)で4回洗浄した。次いで、0.5mLの6M GuHClを、(a)洗浄したビーズ及び(b)IgG枯渇上清を含有するチューブに添加し、室温で揺動させながら当該チューブを20分間インキュベートした。次いで、ビーズを磁石によって沈殿させ、得られた上清を第3のチューブ(サンプル=「IgG濃縮上清」)に移した。最後に、実施例2と同様に実施したrpHPLCによる分離の前に、0.1Mリン酸(pH2)を2つの溶液に添加した(1.0mLのリン酸を変性IgG枯渇上清に添加し、1.5mLのリン酸をIgG濃縮上清に添加して、サンプルの最終体積を2.0mLにした)。得られたrpHPLC画分を実施例2に記載のとおりに再構成し、実施例1のSimoa p217+タウアッセイを用いて測定した。IgG枯渇上清からのシグナルは、遊離p217+タウ(すなわち、抗体に結合していない)を表し、一方、IgG濃縮上清からのシグナルは、結合p217+タウ(すなわち、ヒト化pT3mAbなどの抗体に結合している)を表す。対照として又は遊離及び結合測定のための正規化因子として、総p217+タウシグナルを評価するために、免疫捕捉/枯渇プロセスに供されなかった同じ親生物学的流体(例えば、CSF)のrpHPLC分離及びSimoa p217+測定を同時に分析した。
目的の生物学的流体(例えば、CSF)のアリコートを95℃で4分間加熱し、続いて、氷上で4分間冷却した(サンプル=「半変性流体」)。並行して、同じ流体の第2のアリコートを、氷上で8分間冷却した(サンプル=非変性流体」)。次いで、実施例1のSimoa p217+タウアッセイを用いて、両サンプルを測定した。半変性流体シグナルは、総p217+タウを表し、一方、非変性流体は、遊離p217+タウを表す。前者から後者を差し引くと、結合タウの測定値が得られる。正確な加熱時間及び温度は、Simoa p217+タウアッセイをそれ以上妨げることができないように流体中の任意の抗体を不可逆的に修飾するように決定したが、p217+タウシグナル自体には、いかなる影響も残らなかった。このアッセイは、抗体がp217+タウに結合しているかどうかの直接的な尺度ではなく、アッセイ競合抗体が存在することを実証する。しかしながら、このアッセイからは、より面倒なアッセイ1の結果と同様の結果が得られた。
アッセイの開発及び技術的認定に使用されるサンプル
実施例1~3のアッセイは、高いタウレベルを有するヒト対象からプールしたCSFを使用して開発した。いくつかの実験はまた、第1相試験における健常ボランティアの試験に必要とされるアッセイ感度を確保するために、低いタウレベルを有するヒト対象からプールしたCSFを用いて行った。Neu Encepharm GmbH(動物試験CRO)から入手したカニクイザル(Macaca fascicularis)及びコマンマーモセット(Callithrix jacchus)由来のCSFも、実施例1~3のアッセイを用いて測定した。加えて、認知的に正常なヒト対象及びコモンマーモセット由来の急速凍結した脳サンプルをホモジナイズし、実施例1及び3のアッセイを用いて測定した。いくつかの実験は、臨床的に定義されたHV対象及びAD対象由来の個々の血清を用いて実施した。
コホート1(「アッセイ間補正コホート」):正常圧水頭症(NPH)を有する対象(n=11)から、脳室液(VF)及び腰椎液(LF)CSFサンプルを入手した(University of Kuopio、Ville Lenoinen教授)。これらのサンプルを、University of Sahlgrenska(Kaj Blennow教授)で実施されたInnotestアッセイによって求められたCSF Aβ42、総タウ(tタウ)、及びpタウ181測定値によって、並びに脳生検アミロイド及びタウ免疫組織化学的検査(IHC)測定値によって分別した。rpHPLC及びSimoa p217+タウ測定は、Janssen Neuroscience Biomarkers(La Jolla)で行った。
プラセボ又はJNJ63733657(単回IV注射)で治療したHV対象(n=40)由来のLF CSFをJanssen治験JNJ63733657EDI1001から入手した。pT3xpT82アッセイは、Janssen Neuroscience Biomarkers(La Jolla)で行った。pT3xhT43アッセイは、Quanterix Corporation(Lexington MA)で行った。
Janssen Neuroscience Discoveryによる以前のレポート及び文献(例えば、Meredith et al.PLoS One.8(10):e76523,2013;Barthelemy et al.,J Alzheimers Dis.51(4):1033-43,2016;Russell et al.,J Alzheimers Dis.55(1):303-313,2017;Hanger et al.J Biol Chem.282(32):23645-54,2007)は、アミノ酸200~220を含有するタウ断片、特にアミノ酸212、214、217におけるリン酸化の何らかの組み合わせがADにおいて多く含まれることを示している。したがって、この特定のタウ種(「p217+タウ」)を測定するアッセイを開発することにより、AD診断及び/若しくはステージ分類のための改善されたバイオマーカーに加えて、このタウ部分を標的とする新たな薬物についての潜在的予測及び/又は薬力学的アッセイを得ることができた。しかしながら、タウは、健常ボランティアにおいて低レベル(<200pg/mL)で存在し得、p217+タウは総タウの少数構成成分であるため、p217+タウアッセイは、最適な抗体対及び高感度を必要とする。
一連の最適化実験は、Simoaプラットフォームにおける最適化アッセイと共に、一般的なQuanterix経験に基づいて行った。10%マウス血清又は500μg/mLマウスIgGを検出剤希釈剤に添加したが、アッセイ感度は改善しなかった。検出剤mAb濃度(0.15、0.3、0.6、1.2、及び1.8μg/mL)、SβG濃度(100、200、又は300pM)、及び捕捉mAbビーズ濃度(300K/ウェル、150K+200Kヘルパービーズ)の用量設定について評価した。プロトコルのインキュベーション時間(65分間対35分間)及びサンプル体積(100対150μL)についても評価した。両アッセイについての理想的な試薬濃度は、それぞれ、150Kの捕捉ビーズ+200Kのヘルパービーズ、1.8μg/mLの検出剤、及び200pMのSBGであった。サンプルの体積及びインキュベーション時間は、アッセイに最小限の影響しか及ぼさなかったので、100μLのサンプル及び35分間のインキュベーションの下方条件を選択した。
較正物質の線形範囲
実施例1に記載の較正ペプチドを作製した。較正ペプチドは、PEG4リンカーによって分離されたpT3及びhT43又はpT3及びpT82のコアエピトープを含有しており、これらを使用して標準曲線を作成した。代表的な標準曲線を図1に示す。アッセイバッファで1:3ジャンプにて30pg/mLから0.041pg/mLまで較正ペプチドを用量設定し、pT3xhT43及びpT3xpT82アッセイで測定した。4パラメータ曲線フィットデータ整理方法(4PL、1/y2重み付け)を使用して較正曲線を作成した。検出下限(LLOD)を計算された較正レベルとして定義し、10%変動係数(CV)を含む、ゼロ較正子の平均+2.5標準偏差(SD)に等しいAEBを得た。これらの基準により、代表的なデータから約0.002pg/mLのLLODが得られた。アッセイの線形範囲、定量下限(LLOQ)、及び定量上限(ULOQ)は、予想されるCV<20%及び回収率80~120%を達成する最低及び最高の標準曲線点として定義した。これらの基準によれば、pT3xhT43及びpT3xpT82アッセイの両方についての線形範囲は0.041~30pg/mLであった(図1、表2)。
希釈の線形性を評価し、CSFサンプルを試験するための理想的な希釈を決定するために、AD対象(高タウ、低AB42)由来の4つのCSFサンプルのパネルを、アッセイバッファにおける1:2希釈から1:4096希釈まで用量設定し、p217+タウアッセイで測定した。1:512を超えて希釈されたサンプルは、典型的には、LLOQ未満と測定された。1:4~1:512のサンプル測定値は、希釈線形であり、その結果、CSFサンプルを測定するための規定の範囲であった。認知正常対象で確認するために、低タウ及び高AB42の対象由来のCSFのプールを同様に測定した。ここでも、1:4~1:256希釈について希釈線形性が観察され、この範囲を超えると、測定値はLLOQ未満に低下した(図2)。
測定値の精度を評価するために、pT3xhT43の標準曲線を準備し、別個の3つの日に測定した(図3及び表3)。較正ペプチドを、30から0.041pg/mLに連続1:3ジャンプで希釈し、pT3xhT43アッセイにおいて重複測定した。同じ施設で、同じ技術者によって、連続する3日間にわたって手順を繰り返した。曲線の中央の4点(CSFサンプルが測定される)の分析は、ラン内の精度(試験内CV%)が常に<10%であり、平均して2.46~5.18% CVであり、試験間精度は平均して6.46% CVであったことを示した。これらは、研究用途に限る(research use only、RUO)アッセイについては十分に20% CVの許容限度の範囲内であり、部分的には、Simoa HD-1 Analyzerにおいて全てのELISA工程が自動化されているという性質に起因する。
試験施設間のp217+タウアッセイの精度を評価するために、同じAD CSFプールを、Janssen Neuroscience Biomarkers及びQuanterix Corporationにおいて同じロットの試薬を用いて適正用量設定にて測定した。図4は、2つの試験施設におけるpT3xhT43及びpT3xpT82アッセイについて測定値が非常に類似していることを示す。
アッセイの正確度を評価するために、2つの異なるプールのHV CSFに既知の濃度の較正ペプチド(0、2、又は20pg/mL)をスパイクし、推奨される1:4希釈に希釈し、次いで、pT3xhT43及びpT3xpT82アッセイで測定した。これは、サンプルマトリックスの構成成分によって提示される潜在的干渉の1つの尺度である。2及び20pg/mLのスパイク測定値から内因性シグナルのレベルを差し引き、次いで、較正物質の観察濃度を予想濃度と比較して回収率を計算した。測定濃度を予想濃度と比較して、スパイク回収率を計算し、114%の平均回収率を得た(表4)。これは、十分にRUOアッセイについての回収率80~120%の許容限度の範囲内であり、これは、≧1:4希釈で試験したときにCSFにおいて有意な干渉のないことを示す。
CSFにおけるpT3xhT43及びpT3xpT82アッセイシグナルの正確度を確認し、p217+タウに対する抗体の臨床試験における薬力学的アッセイとしてのその潜在的な有用性を評価するために、AD CSFのプールに適正用量設定のpT3 mAb又はヒト化pT3 mAbをスパイクし、室温で2時間インキュベートした後にpT3xhT43及びpT3xpT82アッセイで測定した(図5)。可溶性pT3及びヒト化pT3抗体の投与によって、pT3ベースのアッセイにおけるシグナルが用量依存的に低下した。同等の濃度でmsIgG(陰性対照)をスパイクしても、いずれの測定にも影響がなかった。ヒト化pT3 mAb対pT3の競合能がより低いことは、p217+タウに対するpT3の親和性がより高いことに起因し得る。
pT3xhT43及びpT3xpT82アッセイで得られたCSF中のシグナルを確認することは、実際には、リン酸化エピトープに基づいており、ADのCSFをアルカリホスファターゼで処理して全ての残基を脱リン酸化した。次いで、サンプルをpT3アッセイ及び2つのhT7ベースのアッセイ、hT7xpT82又はhT7xBT2で分析した。hT7はリン酸化に依存しないことが知られているので、陰性対照として使用した。
粗CSFの測定から得られたp217+タウシグナルの性質を調べるために、Meredith et al.PLoS One.8(10):e76523,2013に記載の方法と同様の方法を介して、AD CSFのサンプルをrpHPLCによって分画した。画分を回収し、pT3xhT43及びpT3xpT82アッセイを用いて測定した(図7)。このクロマトグラフィーフォーマットでは、より小さなタウ画分がより早く溶出し(より小さい画分番号)、一方、より大きな画分はより後に溶出する(より大きい画分番号)。完全長タウは、画分19において溶出する。タウ断片プロファイルは、以前のレポート(Meredith et al.PLoS One.8(10):e76523,2013,Barthelemy et al.,J Alzheimers Dis.51(4):1033-43,2016)と一致して、アッセイのいずれかによって検出された完全長タウが非常に少ないことを示した。pT3xpT82アッセイは、完全長タウ(画分12及び14)よりも小さい2つの主なピーク(タウ種)を検出したが、pT3xhT43アッセイは、これらの主ピークのうちの1つのみを検出した(画分14)。これは、CSF中のp217+タウが少なくとも2つの断片で存在することを示し、より大きな断片は、少なくともhT43からpT3までの領域(タウのaa7~220)をコードしており、より小さな断片は、少なくともpT82からpT3までの領域(タウのaa116~220)をコードしているが、はるかに遠くのhT43エピトープまでは到達しない。すなわち、任意の所与の時点でタウ分子のサブセットにおいてのみ切断される、aa20とaa116との間にタンパク質分解切断部位が存在する可能性が高い。プロファイルは、p217+特異的ではなく、それは、タウの類似の領域を認識するが、リン酸化特異的ではない他のタウアッセイでの測定から同様の所見が得られるためである(データは示さない)。
内因性p217+タウエピトープの安定性を様々な温度で評価した。AD CSFのプールをアリコート化し、各アリコートを4℃、22℃、又は37℃で1、2、又は4時間保管した。また、アリコートのサブセットを2又は3回凍結解凍(-80℃~22℃)した。次いで、全てのサンプルを1:20希釈し、pT3xhT43及びhT7xpT82アッセイを用いて分析した(図8)。試験した条件のいずれにおいてもシグナルの有意な変化は観察されず、これは、これらのアッセイによって認識される4つのエピトープ全てが、標準的な保管/試験手順を可能にするのに十分に安定であることを示す。最後に、CSFを4人のドナーから前向きに採取し、次いで、アリコート化し、-70℃で凍結させ、pT3xpT82アッセイで測定するために3ヶ月毎にサンプルを取り出した。3、6、又は9ヶ月の時点では、シグナルの有意な変化は観察されなかった(図9)。
ADの診断及びステージ分類におけるpT3xhT43及びpT3xpT82アッセイの有用性を評価するために、p217+タウを測定するためのCSFサンプルの3つのコホートを得た。認知スコアと他の古典的なADバイオマーカーとの相関について測定値を分析した。
CSFサンプル、VF及びLF、並びに脳生検(脳室)を、脳内での過剰な間質液産生を特徴とし、ADでは高頻度で存在する病態である、神経変性障害の正常圧水頭症(NPH)を有する10人の対象から入手した。p217+タウ測定を粗CSFに対して実施し、従来のADバイオマーカーとの相関について分析した。
生化学的に定義されたAD対象対HV対象由来のCSFサンプル(LF)(n=20/群)を、University of Sahlgrenskaから入手した。Aβ42及びtタウのレベルをInnotest ELISA(古典的測定)によって求めて、群を細分類した(AD=CSF Aβ42<400pg/mLかつCSF tタウ>600pg/mL、HV=CSF Aβ42>400pg/mLかつCSF tタウ<600pg/mL)。粗CSFに対するpT3xhT43、pT3xpT82、及びhT7xpT82アッセイ、並びにrpHPLCで分画されたCSFのサブセットを使用して、測定を実施した。結果を従来のADバイオマーカーとの相関について分析した(図12)。図12のパネルA及びBのデータは、pT3エピトープが、初期AD(insipient AD)に急速に進行するリスクが高い患者の指標であることを実証した。pT3エピトープは、高総タウ及び低Aβ42を示す患者において大きく上昇した。逆に、pT3エピトープは、低総タウ及び高Aβ42を有する対象では低レベルで存在していた。図11Cでは、hT7xpT82総タウアッセイによって実証されるように、上昇したpT3エピトープ含有タウが、総タウレベルの上昇によって少なくとも部分的に推進されたが、全てではないことを確認した(図12D)。これは、タウの量、及びp217+エピトープでリン酸化される程度の両方がADで上昇することを示す。
臨床的に定義された正常(CDR0)対軽度記憶愁訴(CDR0.5)対象(n=20/群)由来のCSFサンプル(LF)を、Janssen研究ALZ1005/2002から入手した。Aβ42、tタウ、及びpタウ181のレベルをInnotest ELISAにより測定した。CDR及びCSF Aβ42スコアに基づいて、対象を、(a)HV=CDR0かつAβ42>600pg/mL、(b)ARAD=CDR0かつAβ42<600pg/mL、(c)潜在的に非AD認知症=CDR0.5かつAβ42>600pg/mL、及び(d)初期AD=CDR0.5かつAβ42<600pg/mLに分類した。
臨床的に定義された正常(臨床的認知症尺度0;CDR0)対軽度記憶愁訴(CDR1)の対象(n=5/群)由来のLF CSFサンプルを、Washington Universityから入手した。CDR及びMMSE、並びにInnotestアッセイによるCSF Aβ42、tタウ、及びpタウ181の測定値は、Washington Universityで得た。発送前に、Janssenにサンプルのアイデンティティ又は特徴が分からないようにサンプルにコードを付けた。Janssen Neuroscience Biomarkers(La Jolla)でrpHPLC並びにSimoa tタウ及びp217+タウ測定を行い、分析のためにWashington Universityに送付した。
臨床的及び生化学的に(Innotest AB42>600pg/mL)定義されたHV(n=7)由来のLF CSFサンプルを、Precision Medicine(San Diego,CA)から入手した。臨床的及び生化学的に(Innotest AB42<600pg/mL)定義されたMCI(n=28)及びAD(n=12)由来のLF CSFサンプルを、University of Antwerpから入手した。rpHPLC及びSimoa p217+タウ測定は、Janssen Neuroscience Biomarkers(La Jolla)で行った。
臨床的に定義されたAD(臨床認知症尺度1+)対象(n=235)由来のサンプルを、Janssen研究ELN115727301/302から入手した。これらのサンプルは、治験における全ての対象由来のベースライン(投与前)サンプルであった。加えて、プラセボ対象(n=90)の78週間経過観察後のCSFサンプルを含めて、疾患進行のバイオマーカーを評価した。認知評価(ADAS-COG、MMSE、NTB、及びCDR.SOB)、ApoE遺伝子型、性別、及び年齢を治験から得た。Innotest AB42、Innotest AB40、Simoa neurofilament light(NFL)、pT3xpT82、pT3xhT43、及びhT7xpT82アッセイは、Janssen Neuroscience Biomarkers(La Jolla)で行った。対象は、0.09のAB42/40比カットオフに基づいてアミロイド陽性又は陰性であると確認された(例えば、<0.09の比を有する対象=アミロイド陽性=AD、一方、>0.09の対象=アミロイド陰性=AD以外の原因による認知症)。235人の対象のうち27人がアミロイド陰性と判定されたので、各群を別々に分析した。
実施例3に記載のアッセイを、以下のとおり実施した。
アッセイは、抗体をCSFサンプルにスパイクすることによって試験した。プールしたAD CSFに、10μgのpT3 mAb、ヒト化pT3 mAb、msIgG、又は同等の体積のPBS(モック)をスパイクし、4℃で24時間インキュベートした後、免疫捕捉した。サンプル、並びに免疫捕捉に供されていない親CSFをrpHPLCで分画し、各画分についてpT3xhT43アッセイを用いて測定して、総及び結合p217+タウの量を評価した。親サンプル(総p217+タウ)及びpT3 mAb又はヒト化pT3 mAb免疫捕捉(結合p217+タウ)では、実施例7及び図7にみられたものと同様に、1つの主要なピークにおいて実質的なシグナルが観察されたが、モック又はIgG免疫捕捉では観察されなかった(図19)。
生体サンプル(例えば、CSF)を、沸点付近で4分間加熱し、続いて、氷上で冷却し、その後、pT3xhT43及び/又はpT3xpT82アッセイで測定した。このプロセスの正確な時間は、アッセイを妨げることはできないが、p217+タウシグナル自体には影響を与えない(図21)ように、サンプル中の抗体に不可逆的に損傷を与えるように決定された(図21)。これは、タウタンパク質において特定の三次構造が欠如していることに起因しているので、それを高温で特に安定にすることができると考えられる。このサンプルを総p217+タウと命名し、一方、熱処理に供されなかった並行測定のサンプルを、遊離p217+タウと命名した。総濃度から遊離を差し引いて、結合p217+タウの測定値を得た。
前臨床試験をサポートするために、様々な一般的な実験動物由来のナイーブサンプルを、pT3ベースのアッセイを用いて評価し、及び/又は配列をアラインメントして交差反応性を予測した。
2頭のカニクイザル由来のCSFを、pT3ベース及びhT7ベースのアッセイを使用して様々な希釈度で測定した(図23)。比較するために、同じ検出抗体を2つの捕捉抗体のそれぞれと対にした。一部の場合には、2つの個々のCSFを別々に試験し(カニクイザル1又はカニクイザル2)、他の場合には、CSFサンプルをプールして体積を節約した。検出抗体にかかわらず、捕捉抗体としてhT7を使用した全てのアッセイにおいて実質的なシグナル(AEB)がみられたが、捕捉抗体としてpT3を使用したアッセイのいずれにおいてもシグナルは検出されなかった。更に、pT3によるプレートベースのアッセイは、ADヒト脳における大きなシグナルにもかかわらず、カニクイザルの脳のホモジネートであっても、pT3ベースのシグナルがほとんど又は全く存在しないことが示された(データは示さない)。これは、高いレベルのタウにもかかわらず、pT3エピトープがこの種において保存されていないことを示唆する。実際に、公開されているタンパク質配列の解析は、pT3コアエピトープにおいてヒトとカニクイザルとの間で1つのアミノ酸が異なることを示唆し、タウを有するヒト化pT3 mAbの結晶構造に基づく構造モデリングは、この変化によってpT3が結合しなくなり得ることを示唆している(データは示さない)。
コモンマーモセット由来のCSFを、pT3ベース及びhT7ベースのアッセイを使用して試験した(図24)。3頭のコモンマーモセット由来のCSFを、pT3xhT43、pT3xpT82、及びhT7xpT82アッセイを用いて様々な希釈度で測定した。比較のために、プールしたカニクイザルCSF(陰性対照)及びプールしたADヒトCSF(陽性対照)を同時に試験した。pT3xpT82(図24B)及びhT7xpT82(図20C)アッセイを使用したマーモセットCSFでは実質的なシグナル(AEB)がみられたが、pT3xhT43アッセイではみられなかった(図24A)。
マウス、ラット、イヌ、又はブタ(それぞれ、NCBIアクセッション番号NP_001033698.1、NP_058908.2、NP_001104271.1、及びAGJ26517.1)におけるヒト配列による予測タウタンパク質配列のアラインメントは、pT3がこれらの種において100%保存されていることを示唆する。しかしながら、マウス、ラット、イヌ、及びブタのhT43及びpT82配列は、ヒトの配列と同一ではなく、したがって、これら由来のサンプルは、pT3xhT43及びpT3xpT82アッセイを使用して評価する必要がある。
CSF中のタウの測定は、神経変性障害の診断及びステージ分類において大きな有用性が示されているが、CSFの採取は、制約(例えば、患者の負担、臨床施設の経験、採取体積、及び頻度の制約)を有する。したがって、血液産物(例えば、血清、血漿)に対して使用するためにタウ測定を適応させることは大変興味深い。しかしながら、最近の文献は、粗血清又は血漿中のタウ測定が理想的な診断性能を示さず、感度及びマトリクス干渉のハードルに悩まされる場合があることを示している。しかし、pT3ベースのアッセイは、その高い感度及び特異性から新たな好機となり得る。
Abhinandan and Martin,Mol Immunol.45:3832-9,2008
Almagro,Mol Recognit.17:132-43,2004
Barthelemy et al.,J Alzheimers Dis.51(4):1033-43,2016
Butner and Kirschner,J Cell Biol.115(3):717-30,1991
Chothia and Lesk,J Mol Biol.196:901-17,1987
Chothia et al.,J.Mol.Biol.227:799-817,1992
Clavaguera et al.,Nat Cell Biol.11:909-13,2009
D’Abramo et al Neurobiol Aging.37:58-65,2016
Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology,Vol.66,G.E.Morris,Ed.(1996)
Fishwild et al.,Nat Biotechnol.14:845-51,1996
Frost et al.,J Biol Chem.284:12845-52,2009
Hanger et al.J Biol Chem.282(32):23645-54,2007
Hanger et al.,Trends Mol Med.15:112-9,2009
Iqbal et al.,Curr Alzheimer Res.7(8):656-664,2010
Knappik et al.,J Mol Biol.296:57-86,2000
Kohler and Milstein,Nature.256:495-7,1975
Krebs et al.,J Immunol Methods.254:67-84,2001
Lefranc et al.,Dev Comp Immunol.27:55-77,2003
Lonberg et al.,Nature.368:856-9,1994
Mendez et al.,Nat Genet.15:146-56,1997
Meredith et al.PLoS One.8(10):e76523,2013
Morris et al.,Neuron,70:410-26,2011
Russell et al.,J Alzheimers Dis.55(1):303-313,2017
Shi et al.,J Mol Biol.397:385-96,2010
Tramontano et al.,J.Mol.Biol.215:175-182,1990
Wu and Kabat,J Exp Med.132:211-50,1970
本発明は次の実施態様を含む。
[請求項1]
サンプル中のp217+タウペプチドを測定する方法であって、
(i)前記サンプルを、p217+タウエピトープに対する捕捉抗体と接触させて、前記サンプル中の前記p217+タウペプチドを捕捉することと、
(ii)前記捕捉されたp217+タウペプチドを、タウタンパク質のアミノ酸残基119~126を含むエピトープに対する第1の検出抗体及びタウタンパク質のアミノ酸残基7~20を含有するエピトープに対する第2の検出抗体のうちの少なくとも1つと接触させて、それぞれ、前記p217+タウペプチドの量及びロングp217+タウペプチドの量のうちの少なくとも1つを測定することと、を含み、
前記アミノ酸の付番が、配列番号1に記載のアミノ酸配列を参照する、方法。
[請求項2]
前記捕捉されたp217+タウペプチドを前記第1の検出抗体及び前記第2の検出抗体と接触させて、それぞれ前記p217+タウペプチドの量及び前記ロングp217+タウペプチドの量を測定することと、任意選択で、前記ロングp217+タウペプチドの量の前記p217+タウペプチドの量に対する比を求めることと、を含む、請求項1に記載の方法。
[請求項3]
(i)前記p217+タウペプチドの量から前記ロングp217+タウペプチドの量を差し引くことを介して、ショートp217+タウペプチドの量を求めることと、
(ii)任意選択で、前記ショートp217+タウペプチドの量の前記p217+タウペプチドの量に対する比、又は前記ロングp217+タウペプチドの量の前記ショートp217+タウペプチドの量に対する比を求めることと、を更に含む、請求項2に記載の方法。
[請求項4]
サンプル中のp217+タウペプチドを測定する方法であって、
(i)前記サンプルを、p217+タウエピトープに対する捕捉抗体と接触させて、前記サンプル中のp217+タウペプチドを捕捉し、前記サンプルを、タウタンパク質のアミノ酸150~250のエピトープ、好ましくはタウタンパク質のアミノ酸159~163を含むエピトープに対するリン酸化非依存性捕捉抗体と接触させて、前記サンプル中の総タウペプチドを捕捉することと、
(ii)
a.前記捕捉されたp217+タウペプチドを、タウタンパク質のアミノ酸残基119~126を含むエピトープに対する第1の検出抗体と接触させて、p217+タウペプチドの量を測定し、捕捉された総タウペプチドを、前記第1の検出抗体と接触させて、総タウペプチドの量を測定し、前記p217+タウペプチドの量の前記総タウペプチドの量に対する比を求めること、及び
b.前記捕捉されたp217+タウペプチドを、タウタンパク質のアミノ酸残基7~20を含むエピトープに対する第2の検出抗体と接触させて、ロングp217+タウペプチドの量を測定し、前記捕捉された総タウペプチドを、前記第2の検出抗体と接触させて、総ロングタウペプチドの量を測定し、前記ロングp217+タウペプチドの量の前記総ロングタウペプチドの量に対する比を求めること、
のうちの少なくとも1つを実行することと、を含み、
前記アミノ酸の付番が、配列番号1に記載のアミノ酸配列を参照する、方法。
[請求項5]
前記p217+タウペプチドの量から前記ロングp217+タウペプチドの量を差し引くことを介してショートp217+タウペプチドの量を求めることと、前記総タウペプチドの量から前記総ロングタウペプチドの量を差し引くことを介して総ショートタウペプチドの量を求めることと、前記ショートp217+タウペプチドの量の前記総ショートタウペプチドの量に対する比を求めることと、を更に含む、請求項4に記載の方法。
[請求項6]
前記サンプルが、対象由来の血液、脳ホモジネート、又は脳脊髄液(CSF)からなる群から選択される前記対象由来の生体サンプルである、請求項1~5のいずれか一項に記載の方法。
[請求項7]
前記生体サンプルが血液である、請求項6に記載の方法。
[請求項8]
前記生体サンプルがCSFである、請求項6に記載の方法。
[請求項9]
前記生体サンプルが、逆相高速液体クロマトグラフィー(rpHPLC)を使用して分画されている、請求項6に記載の方法。
[請求項10]
a.前記対象がタウオパチーに罹患しているかどうか又はタウオパチーを発症するリスクがあるかどうかを判定すること、
b.前記対象が、抗p217+タウ抗体による治療に適しているかどうかを判定すること、
c.前記対象におけるタウオパチーの治療の有効性を判定すること、又は
d.対象における抗p217+タウ抗体による治療をモニタリングすること、
を更に含み、
前記判定又はモニタリングが、前記対象由来の前記p217+タウペプチドの量、前記ロングp217+タウペプチドの量、前記ショートp217+タウペプチドの量、及びこれらの比のうちの少なくとも1つを、対応するベースライン値と比較すること、を含む、請求項6に記載の方法。
[請求項11]
対象における抗p217+タウ抗体による治療をモニタリングすること、を含む、請求項10に記載の方法であって、前記方法が、
(i)前記対象から生体サンプルを得ることと、
(ii)前記生体サンプルを、前記抗p217+タウ抗体を含まないp217+タウペプチドを含有する第1のサンプル、及び前記抗p217+タウ抗体に結合しているp217+タウペプチドを含有する第2のサンプルに分離することと、
(iii)好ましくはrpHPLCを介して、前記第2のサンプルを分離して、抗p217+タウ抗体を含まないp217+タウペプチドを含有する第3のサンプルを得ることと、
(iv)前記第1のサンプル及び前記第3のサンプルのそれぞれを、p217+タウエピトープに対する捕捉抗体と接触させて、前記第1のサンプル及び前記第3のサンプルのそれぞれにおけるp217+タウペプチドを捕捉することと、
(v)(a)前記捕捉されたp217+タウペプチドを、タウタンパク質のアミノ酸残基119~126を含むエピトープに対する第1の検出抗体と接触させて、前記第1のサンプル及び前記第3のサンプルのそれぞれにおけるp217+タウペプチドの量を測定すること、及び(b)前記捕捉されたp217+タウペプチドを、タウタンパク質のアミノ酸残基7~20を含むエピトープに対する第2の検出抗体と接触させて、前記第1のサンプル及び前記第3のサンプルのそれぞれにおけるロングp217+タウペプチドの量を測定すること、のうちの少なくとも1つと、任意選択で、(c)前記第1のサンプル及び前記第3のサンプルのそれぞれにおける前記p217+タウペプチドの量から前記ロングp217+タウペプチドの量を差し引くことを介してショートp217+タウペプチドの量を求めることと、を実行することと、
(vi)前記第1のサンプル及び前記第3のサンプルのそれぞれにおける前記p217+タウペプチドの量、前記ロングp217+タウペプチドの量、前記ショートp217+タウペプチドの量、及びこれらの比のうちの少なくとも1つに基づいて、前記抗p217+タウ抗体による治療をモニタリングすることと、を含む、方法。
[請求項12]
対象における抗p217+タウ抗体による治療をモニタリングすること、を含む、請求項10に記載の方法であって、前記方法が、
(i)前記対象から生体サンプルを得ることと、
(ii)総p217+タウペプチドを含有する生体サンプルから半変性サンプルを得ることであって、その際、前記半変性サンプルを加熱して前記サンプル中の前記抗体を変性させる、こと、及び前記抗p217+タウ抗体を含まないp217+タウペプチドを含有する生体サンプルから非変性サンプルを得ることと、
(iii)前記半変性サンプル及び前記非変性サンプルのそれぞれを、p217+タウエピトープに対する捕捉抗体と接触させて、前記サンプルのそれぞれにおけるp217+タウペプチドを捕捉することと、
(iv)(a)前記捕捉されたp217+タウペプチドを、タウタンパク質のアミノ酸残基119~126を含むエピトープに対する第1の検出抗体と接触させて、前記サンプルのそれぞれにおけるp217+タウペプチドの量を測定すること、及び(b)前記捕捉されたp217+タウペプチドを、タウタンパク質のアミノ酸残基7~20を含むエピトープに対する第2の検出抗体と接触させて、前記サンプルのそれぞれにおけるロングp217+タウペプチドの量を測定すること、のうちの少なくとも1つと、任意選択で、(c)前記第1のサンプル及び前記第3のサンプルのそれぞれにおける前記p217+タウペプチドの量から前記ロングp217+タウペプチドの量を差し引くことを介してショートp217+タウペプチドの量を求めることと、を実行することと、
(v)前記サンプルのそれぞれにおける前記p217+タウペプチドの量、前記ロングp217+タウペプチドの量、前記ショートp217+タウペプチドの量、及びこれらの比のうちの少なくとも1つに基づいて、前記抗p217+タウ抗体による治療をモニタリングすることと、を含む、方法。
[請求項13]
前記捕捉抗体がビーズにコンジュゲートされており、前記検出抗体がビオチン化されている、請求項1~12のいずれか一項に記載の方法。
[請求項14]
前記方法の定量下限が、約40fg/mLの前記p217+タウペプチドであり、前記方法の検出下限が、約2fg/mLの前記p217+タウペプチドである、請求項1~13のいずれかに記載の方法。
[請求項15]
前記タウオパチーが、家族性アルツハイマー病、散発性アルツハイマー病、17番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症(FTDP-17)、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、進行性皮質下神経膠症、神経原線維変化優位型認知症(tangle only dementia)、石灰化を伴うびまん性神経原線維変化病、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症/パーキンソン認知症複合、ダウン症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、ハラーフォルデン-シュパッツ病、封入体筋炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、多系統萎縮症、ニーマン・ピック病C型、プリオンタンパク質脳アミロイドアンギオパチー、亜急性硬化性全脳炎、筋強直性ジストロフィー、神経原線維変化を伴う非グアム型運動ニューロン疾患、脳炎後パーキンソン症候群、慢性外傷性脳症、及び拳闘家認知症(ボクサー病)からなる群から選択され、好ましくは、前記タウオパチーが、アルツハイマー病である、請求項7~14のいずれか一項に記載の方法。
[請求項16]
前記捕捉抗体が、それぞれ配列番号32、33、及び34のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖HCDR1、HCDR2、及びHCDR3、並びにそれぞれ配列番号35、36、及び37のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、好ましくは、前記捕捉抗体が、配列番号28のポリペプチド配列を含む重鎖可変領域及び配列番号29のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を有する、請求項1~15のいずれか一項に記載の方法。
[請求項17]
前記第1の検出抗体が、それぞれ配列番号2、3、及び4のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖HCDR1、HCDR2、及びHCDR3、並びにそれぞれ配列番号5、6、及び7のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、好ましくは、前記第1の検出抗体が、配列番号8のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号9のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、請求項1~16のいずれか一項に記載の方法。
[請求項18]
前記第2の検出抗体が、それぞれ配列番号12、13、及び14のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖HCDR1、HCDR2、及びHCDR3、並びにそれぞれ配列番号15、16、及び17のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、好ましくは、前記検出抗体が、配列番号18のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号19のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、請求項1~17のいずれか一項に記載の方法。
[請求項19]
キットであって、
a.p217+タウエピトープに対する捕捉抗体、任意選択で、タウタンパク質のアミノ酸150~250のタウエピトープに対するリン酸化非依存性捕捉抗体と、
b.タウタンパク質のアミノ酸残基7~20又は116~127を含むタウタンパク質エピトープに対する少なくとも1つの検出抗体と、を含む、キット。
[請求項20]
前記捕捉抗体が、それぞれ配列番号32、33、及び34のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖HCDR1、HCDR2、及びHCDR3、並びにそれぞれ配列番号35、36、及び37のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、好ましくは、前記捕捉抗体が、配列番号28のポリペプチド配列を含む重鎖可変領域及び配列番号29のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を有し、前記リン酸化非依存性捕捉抗体が、タウタンパク質のアミノ酸159~163を含むタウエピトープに対する、請求項19に記載のキット。
[請求項21]
a.前記第1の検出抗体が、それぞれ配列番号2、3、及び4のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖HCDR1、HCDR2、及びHCDR3、並びにそれぞれ配列番号5、6、及び7のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、好ましくは、前記第1の検出抗体が、配列番号8のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号9のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含み、
b.前記第2の検出抗体が、それぞれ配列番号12、13、及び14のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖HCDR1、HCDR2、及びHCDR3、並びにそれぞれ配列番号15、16、及び17のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、好ましくは、前記検出抗体が、配列番号18のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号19のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、請求項19又は20に記載のキット。
Claims (35)
- サンプル中のp217+タウペプチドを測定する方法であって、
(i)前記サンプルを、p217+タウエピトープに対する捕捉抗体と接触させて、前記サンプル中の前記p217+タウペプチドを捕捉することであって、前記捕捉抗体が、それぞれ配列番号32、33、及び34のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖HCDR1、HCDR2、及びHCDR3、並びにそれぞれ配列番号35、36、及び37のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含むことと、
(ii)前記捕捉されたp217+タウペプチドを、タウタンパク質のアミノ酸残基119~126を含むエピトープに対する第1の検出抗体及びタウタンパク質のアミノ酸残基7~20を含有するエピトープに対する第2の検出抗体のうちの少なくとも1つと接触させて、それぞれ、前記p217+タウペプチドの量及びロングp217+タウペプチドの量のうちの少なくとも1つを測定することと、を含み、
前記アミノ酸の付番が、配列番号1に記載のアミノ酸配列を参照する、方法。 - 前記捕捉されたp217+タウペプチドを前記第1の検出抗体及び前記第2の検出抗体と接触させて、それぞれ前記p217+タウペプチドの量及び前記ロングp217+タウペプチドの量を測定することを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記ロングp217+タウペプチドの量の前記p217+タウペプチドの量に対する比を求めることをさらに含む、請求項2に記載の方法。
- 前記p217+タウペプチドの量から前記ロングp217+タウペプチドの量を差し引くことを介して、ショートp217+タウペプチドの量を求めることを更に含む、請求項2または3に記載の方法。
- 前記ショートp217+タウペプチドの量の前記p217+タウペプチドの量に対する比、又は前記ロングp217+タウペプチドの量の前記ショートp217+タウペプチドの量に対する比を求めることを更に含む、請求項4に記載の方法。
- サンプル中のp217+タウペプチドを測定する方法であって、
(i)前記サンプルを、p217+タウエピトープに対する捕捉抗体と接触させて、前記サンプル中のp217+タウペプチドを捕捉し、前記サンプルを、タウタンパク質のアミノ酸150~250のエピトープに対するリン酸化非依存性捕捉抗体と接触させて、前記サンプル中の総タウペプチドを捕捉することであって、前記捕捉抗体が、それぞれ配列番号32、33、及び34のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖HCDR1、HCDR2、及びHCDR3、並びにそれぞれ配列番号35、36、及び37のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含むことと、
(ii)
a.前記捕捉されたp217+タウペプチドを、タウタンパク質のアミノ酸残基119~126を含むエピトープに対する第1の検出抗体と接触させて、p217+タウペプチドの量を測定し、捕捉された総タウペプチドを、前記第1の検出抗体と接触させて、総タウペプチドの量を測定し、前記p217+タウペプチドの量の前記総タウペプチドの量に対する比を求めること、及び
b.前記捕捉されたp217+タウペプチドを、タウタンパク質のアミノ酸残基7~20を含むエピトープに対する第2の検出抗体と接触させて、ロングp217+タウペプチドの量を測定し、前記捕捉された総タウペプチドを、前記第2の検出抗体と接触させて、総ロングタウペプチドの量を測定し、前記ロングp217+タウペプチドの量の前記総ロングタウペプチドの量に対する比を求めること、
のうちの少なくとも1つを実行することと、を含み、
前記アミノ酸の付番が、配列番号1に記載のアミノ酸配列を参照する、方法。 - 前記p217+タウペプチドの量から前記ロングp217+タウペプチドの量を差し引くことを介してショートp217+タウペプチドの量を求めることと、前記総タウペプチドの量から前記総ロングタウペプチドの量を差し引くことを介して総ショートタウペプチドの量を求めることと、前記ショートp217+タウペプチドの量の前記総ショートタウペプチドの量に対する比を求めることと、を更に含む、請求項6に記載の方法。
- 前記サンプルが、対象由来の血液、脳ホモジネート、又は脳脊髄液(CSF)からなる群から選択される前記対象由来の生体サンプルである、請求項1~7のいずれか一項に記載の方法。
- 前記生体サンプルが血液である、請求項8に記載の方法。
- 前記生体サンプルがCSFである、請求項8に記載の方法。
- 前記生体サンプルが、逆相高速液体クロマトグラフィー(rpHPLC)を使用して分画されている、請求項8に記載の方法。
- 前記対象由来の前記p217+タウペプチドの量、前記ロングp217+タウペプチドの量、前記ショートp217+タウペプチドの量、及びこれらの比のうちの少なくとも1つを、対応するベースライン値と比較すること、をさらに含む、請求項4、5または7に記載の方法。
- 対象における抗p217+タウ抗体による治療をモニタリングすること、を含む、請求項12に記載の方法であって、前記方法が、
(i)生体サンプルを、前記抗p217+タウ抗体を含まないp217+タウペプチドを含有する第1のサンプル、及び前記抗p217+タウ抗体に結合しているp217+タウペプチドを含有する第2のサンプルに分離することであって、前記生体サンプルは、対象由来のものであることと、
(ii)前記第2のサンプルを分離して、抗p217+タウ抗体を含まないp217+タウペプチドを含有する第3のサンプルを得ることと、
(iii)前記第1のサンプル及び前記第3のサンプルのそれぞれを、p217+タウエピトープに対する捕捉抗体と接触させて、前記第1のサンプル及び前記第3のサンプルのそれぞれにおけるp217+タウペプチドを捕捉することと、
(iv)(a)前記捕捉されたp217+タウペプチドを、タウタンパク質のアミノ酸残基119~126を含むエピトープに対する第1の検出抗体と接触させて、前記第1のサンプル及び前記第3のサンプルのそれぞれにおけるp217+タウペプチドの量を測定すること、及び(b)前記捕捉されたp217+タウペプチドを、タウタンパク質のアミノ酸残基7~20を含むエピトープに対する第2の検出抗体と接触させて、前記第1のサンプル及び前記第3のサンプルのそれぞれにおけるロングp217+タウペプチドの量を測定すること、のうちの少なくとも1つを実行することと、
(v)前記第1のサンプル及び前記第3のサンプルのそれぞれにおける前記p217+タウペプチドの量、前記ロングp217+タウペプチドの量、前記ショートp217+タウペプチドの量、及びこれらの比のうちの少なくとも1つに基づいて、前記抗p217+タウ抗体による治療をモニタリングすることと、を含む、方法。 - 前記第1のサンプル及び前記第3のサンプルのそれぞれにおける前記p217+タウペプチドの量から前記ロングp217+タウペプチドの量を差し引くことを介してショートp217+タウペプチドの量を求めることをさらに含む、請求項13に記載の方法。
- 対象における抗p217+タウ抗体による治療をモニタリングすること、を含む、請求項12に記載の方法であって、前記方法が、
(i)総p217+タウペプチドを含有する生体サンプルから半変性サンプルを得ることであって、その際、前記半変性サンプルを加熱して前記サンプル中の前記抗体を変性させる、こと、及び前記抗p217+タウ抗体を含まないp217+タウペプチドを含有する生体サンプルから非変性サンプルを得ることであって、前記生体サンプルは、対象由来のものであることと、
(ii)前記半変性サンプル及び前記非変性サンプルのそれぞれを、p217+タウエピトープに対する捕捉抗体と接触させて、前記サンプルのそれぞれにおけるp217+タウペプチドを捕捉することと、
(iii)(a)前記捕捉されたp217+タウペプチドを、タウタンパク質のアミノ酸残基119~126を含むエピトープに対する第1の検出抗体と接触させて、前記サンプルのそれぞれにおけるp217+タウペプチドの量を測定すること、及び(b)前記捕捉されたp217+タウペプチドを、タウタンパク質のアミノ酸残基7~20を含むエピトープに対する第2の検出抗体と接触させて、前記サンプルのそれぞれにおけるロングp217+タウペプチドの量を測定すること、のうちの少なくとも1つを実行することと、
(iv)前記サンプルのそれぞれにおける前記p217+タウペプチドの量、前記ロングp217+タウペプチドの量、前記ショートp217+タウペプチドの量、及びこれらの比のうちの少なくとも1つに基づいて、前記抗p217+タウ抗体による治療をモニタリングすることと、を含む、方法。 - 前記第1のサンプル及び前記第3のサンプルのそれぞれにおける前記p217+タウペプチドの量から前記ロングp217+タウペプチドの量を差し引くことを介してショートp217+タウペプチドの量を求めることをさらに含む、請求項15に記載の方法。、
- 前記捕捉抗体がビーズにコンジュゲートされており、前記検出抗体がビオチン化されている、請求項1~16のいずれか一項に記載の方法。
- 前記方法の定量下限が、約40fg/mLの前記p217+タウペプチドであり、前記方法の検出下限が、約2fg/mLの前記p217+タウペプチドである、請求項1~17のいずれかに記載の方法。
- 前記捕捉抗体が、配列番号28のポリペプチド配列を含む重鎖可変領域及び配列番号29のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を有する、請求項1~18のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第1の検出抗体が、それぞれ配列番号2、3、及び4のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖HCDR1、HCDR2、及びHCDR3、並びにそれぞれ配列番号5、6、及び7のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含む、請求項1~19のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第2の検出抗体が、それぞれ配列番号12、13、及び14のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖HCDR1、HCDR2、及びHCDR3、並びにそれぞれ配列番号15、16、及び17のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含む、請求項1~20のいずれか一項に記載の方法。
- キットであって、
a.p217+タウエピトープに対する捕捉抗体であって、前記捕捉抗体が、それぞれ配列番号32、33、及び34のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖HCDR1、HCDR2、及びHCDR3、並びにそれぞれ配列番号35、36、及び37のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含む、捕捉抗体と、
b.タウタンパク質のアミノ酸残基7~20又は116~127を含むタウタンパク質エピトープに対する少なくとも1つの検出抗体と、を含む、キット。 - 前記捕捉抗体は、タウタンパク質のアミノ酸150~250のタウエピトープに対するリン酸化非依存性捕捉抗体である、請求項22に記載のキット。
- 前記捕捉抗体が、配列番号28のポリペプチド配列を含む重鎖可変領域及び配列番号29のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を有する、請求項22に記載のキット。
- a.前記第1の検出抗体が、それぞれ配列番号2、3、及び4のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖HCDR1、HCDR2、及びHCDR3、並びにそれぞれ配列番号5、6、及び7のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含み、
b.前記第2の検出抗体が、それぞれ配列番号12、13、及び14のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖HCDR1、HCDR2、及びHCDR3、並びにそれぞれ配列番号15、16、及び17のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖LCDR1、LCDR2、及びLCDR3を含む、請求項22~24のいずれか一項に記載のキット。 - 前記リン酸化非依存性捕捉抗体が、タウタンパク質のアミノ酸159~163を含むタウエピトープに対するものである、請求項6に記載の方法。
- 前記第2のサンプルが、rpHPLCを介して分離される、請求項13に記載の方法。
- 前記第1の検出抗体が、配列番号8のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号9のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、請求項20に記載の方法。
- 前記検出抗体が、配列番号18のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号19のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、請求項21に記載の方法。
- 前記リン酸化非依存性捕捉抗体が、タウタンパク質のアミノ酸159~163を含むタウエピトープに対するものである、請求項24に記載のキット。
- 前記第1の検出抗体が、配列番号8のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号9のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、請求項25に記載のキット。
- 前記検出抗体が、配列番号18のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域及び配列番号19のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、請求項25に記載のキット。
- 前記サンプルが対象から得られた生体サンプルであり;かつ、
a.対応するベースライン値よりも有意に高い、生体サンプル中の前記p217+タウペプチドの量、ショートp217+タウペプチドの量のロングp217+タウペプチドの量に対する比、または、ショートp217+タウペプチドの量の総ショートタウペプチドの量に対する比が、対象がタウオパチーに罹患している又はタウオパチーを発症するリスクがあることを示す、 b.対応するベースライン値よりも有意に高い、生体サンプル中のp217+タウペプチドの量、ショートp217+タウペプチドの量のロングp217+タウペプチドの量に対する比、又は当該ショートp217+タウペプチドの量の総ショートタウペプチドの量に対する比が、当該対象が抗p217+タウ抗体療法に適していることを示す、又は
c.治療の過程にわたって減少する、生体サンプル中の当該p217+タウペプチドの量が、対象におけるタウオパチーの治療の有効性を示す、請求項12に記載の方法。 - 前記タウオパチーが、家族性アルツハイマー病、散発性アルツハイマー病、17番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症(FTDP-17)、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、進行性皮質下神経膠症、神経原線維変化優位型認知症(tangle only dementia)、石灰化を伴うびまん性神経原線維変化病、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症/パーキンソン認知症複合、ダウン症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、ハラーフォルデン-シュパッツ病、封入体筋炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、多系統萎縮症、ニーマン・ピック病C型、プリオンタンパク質脳アミロイドアンギオパチー、亜急性硬化性全脳炎、筋強直性ジストロフィー、神経原線維変化を伴う非グアム型運動ニューロン疾患、脳炎後パーキンソン症候群、慢性外傷性脳症、及び拳闘家認知症(ボクサー病)からなる群から選択される、請求項33に記載の方法。
- 前記タウオパチーが、アルツハイマー病である、請求項34に記載の方法。
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Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2014011972A1 (en) | 2012-07-13 | 2014-01-16 | Bristol-Myers Squibb Company | Tau immunoassay |
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---|---|---|---|---|
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AU2414092A (en) | 1991-08-01 | 1993-03-02 | Paul H. Voorheis | Diagnostic method for alzheimer's disease |
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DZ3209A1 (fr) | 1999-07-06 | 2001-01-11 | Lilly Co Eli | Antagonistes selectifs du recepteur iGLuR5 utilises dans le traitement de la migraine. |
DE60141752D1 (de) | 2000-06-30 | 2010-05-20 | Innogenetics Nv | Differentielle diagnose von neurologischen krankheiten |
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EP3160999B1 (en) * | 2014-06-26 | 2018-11-28 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Antibodies and antigen-binding fragments that specifically bind to microtubule-associated protein tau |
MX2017010919A (es) * | 2015-03-05 | 2017-12-07 | Ab2 Bio Sa | Proteina de union il-18 (il-18bp) y anticuerpos en enfermedades inflamatorias. |
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US20180186855A1 (en) * | 2016-03-23 | 2018-07-05 | Alector Llc | Chimeric receptors and methods of use thereof |
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Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
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WO2014011972A1 (en) | 2012-07-13 | 2014-01-16 | Bristol-Myers Squibb Company | Tau immunoassay |
WO2017191561A1 (en) | 2016-05-02 | 2017-11-09 | Prothena Biosciences Limited | Antibodies recognizing tau |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
A Validated Antibody Panel for the Characterization of Tau Post-Translational Modifications,Molecular Neurodegeneration,2017年,Vol.12,Article Number 87 (1-19),https://doi.org/10.1186/s13024-017-0229-1 |
高島 明彦,認知症とタウ蛋白との関係,埼玉医科大学雑誌,2017年,第43巻, 第2号,134-141頁 |
Also Published As
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---|---|
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