JP7278577B2

JP7278577B2 - 皮膚外用剤又は内用剤

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Publication number: JP7278577B2
Application number: JP2019058317A
Authority: JP
Inventors: 和寿大隅; 凌輔奥野; 紘介深田; 勉坂井田
Original assignee: Nippon Menard Cosmetic Co Ltd
Current assignee: Nippon Menard Cosmetic Co Ltd
Priority date: 2019-03-26
Filing date: 2019-03-26
Publication date: 2023-05-22
Anticipated expiration: 2039-03-26
Also published as: JP2020158424A

Description

本発明は、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果、フィラグリン産生促進効果に優れた新規な皮膚外用剤又は内用剤に関する。

コラーゲンは、哺乳動物組織の約１／３を占める主要な構造タンパク質であり、軟骨、骨、腱、及び皮膚等の、多くのマトリックス組織の必須な成分である。ＭＭＰに属するコラゲナーゼ（ＭＭＰ－１）により一箇所を切断されると、通常の組織内では安定なコラーゲン分子は、変性して一本鎖のゼラチンとなり、他の様々なプロテアーゼにより分解されるようになる。その結果、マトリックス組織の構造の完全性が失われてしまう。

ＭＭＰに属するゼラチナーゼ（ＭＭＰ－２）は、線維芽細胞や内皮細胞、ガン細胞等が産生する酵素であり、コラーゲン、ゼラチン、エラスチン（動脈、腱、皮膚等の弾性組織の特殊成分をなす構造タンパク質）等の基質を分解する。従って、ゼラチナーゼに対して阻害活性を有する物質は、ガン組織における血管新生やガンの転移を抑制する効果が期待され、ガン疾患の予防、治療に有用であると考えられる。さらにＭＭＰの阻害はガン疾患のみならず、潰瘍形成、慢性関節リウマチ、骨粗鬆症、歯周炎等、ＭＭＰの亢進が原因で起こる各種疾患の予防、治療及び改善に有用である。

コラゲナーゼの阻害活性を有する素材として、例えば、カカオ豆皮であるカカオハスク抽出物（特許文献１）、バラ科オニイチゴ抽出物（特許文献２）、ラクトフェリン（特許文献３）等が提案されている。

角質層の保湿性に重要な役割を果たしているのがＮＭＦであることは古くから知られており、これまでＮＭＦ成分は保湿剤の開発に応用されてきた。角質層におけるＮＭＦの減少は、その保湿性を低下させ乾燥を招く。その結果として乾燥性のカユミが引き起こされる。近年、ＮＭＦの主体をなすアミノ酸は、ケラトヒアリン顆粒の主成分であるフィラグリンというタンパク質の分解により産生されることが明らかとなった（非特許文献１）。すなわち、表皮顆粒層において合成されたプロフィラグリンはケラトヒアリン顆粒に蓄積された後、顆粒層上層から角質層に至る過程で脱リン酸化、加水分解を経てフィラグリンに分解される。さらにフィラグリンは角質層上層に至る過程でアミノ酸に分解されＮＭＦの主体となる。一方、乾燥肌を呈する病態とフィラグリンに関する研究が進められ、老人性乾皮症やアトピー性皮膚炎等の角質層中ではアミノ酸が減少していることが知られているが、それらの皮膚ではフィラグリンの発現が低下していることが明らかにされている（非特許文献２）。したがって、角質層の保湿性維持の目的でＮＭＦの産生を高めるためにはケラチノサイトにおけるフィラグリンあるいはプロフィラグリンの生成促進が重要であると考えられるようになり、特許文献４、５等の植物成分を用いたフィラグリンあるいはプロフィラグリンの生成促進剤が報告されている。

一方で、ツバキの抽出物のマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果、フィラグリン産生促進効果については、知られていない。

特開平３－４４３３１号公報特開２００３－１３７８０１号公報特開平５－１８６３６８号公報特開２００１－２６１５６８号公報特開２００２－２０１１２５号公報

ＳｃｏｔｔＩ．Ｒ．，ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＡｃｔａ，Ｖｏｌ．７１９，ｐｐ１１０－１１７，１９８２ＳｅｇｕｃｈｉＴ．，ＡｒｃｈＤｅｒｍａｔｏｌＲｅｓ，Ｖｏｌ．２８８，ｐｐ４４２－４４６，１９９６

本発明は、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果、フィラグリン産生促進効果等に優れた新規な皮膚外用剤又は内用剤を提供することを課題とする。

本発明者らは、この問題点を解決すべく、鋭意研究を重ねた結果、ツバキの抽出物が、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果、フィラグリン産生促進効果に優れていることを発見し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、以下の（１）～（５）からなる。

（１）ツバキの抽出物を含有することを特徴とするマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤。
（２）ツバキの品種が、Ｃａｍｅｌｌｉａｊａｐｏｎｉｃａｖａｒｄｅｃｕｍｂｅｎｓ系の品種であることを特徴とする、（１）に記載のマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害剤。
（３）ツバキの抽出物を含有することを特徴とするフィラグリン産生促進剤。
（４）ツバキの品種が、Ｃａｍｅｌｌｉａｊａｐｏｎｉｃａｖａｒｄｅｃｕｍｂｅｎｓ系の品種であることを特徴とする、（３）に記載のフィラグリン産生促進剤。
（５）ツバキの抽出物を含有することを特徴とするガン疾患、潰瘍形成、慢性関節リウマチ、骨粗鬆症、歯周炎、老人性乾皮症及びアトピー性皮膚炎の予防改善用食品組成物。

本発明のツバキの抽出物は、優れたマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果、フィラグリン産生促進効果を有しており、医薬品、医薬部外品、化粧品、食品等の分野において貢献できるものである。

以下に、本発明について詳細に述べる。

本発明に用いるツバキの抽出物とは、ツバキ科ツバキ属のツバキ（学名：Ｃａｍｅｌｌｉａｊａｐｏｎｉｃａ）から抽出したものである。使用部位としては、花、実、種子、茎、葉、根等の植物体の一部又は全草を使用することができるが、効果の面で種子を用いることが好ましい。種子は、そのまま用いることもできるが、抽出や搾油等により脱油した残渣を用いることが経済的であり、効果の面でも好ましい。

本発明に用いるツバキの品種としては、野生種であるヤブツバキ、ヤマツバキ等を含むカメリアジャポニカヴァルジャポニカ（Ｃａｍｅｌｌｉａｊａｐｏｎｉｃａｖａｒｊａｐｏｎｉｃａ）、多雪地域に適応したオクツバキ、ハイツバキ、ユキツバキ等を含むカメリアジャポニカヴァルデクンベンス（Ｃａｍｅｌｌｉａｊａｐｏｎｉｃａｖａｒｄｅｃｕｍｂｅｎｓ）、両者の中間型（ユキバタツバキ等）、リンゴツバキ、オオミツバキ、ヤクシマツバキ等を含む南方適応型のカメリアジャポニカヴァルマクロカルパ（Ｃａｍｅｌｌｉａｊａｐｏｎｉｃａｖａｒｍａｃｒｏｃａｒｐａ）が挙げられ、それらの交配種及び、それらとの近縁種との交配によって生じた園芸種も含まれる。たとえばＣａｍｅｌｌｉａｊａｐｏｎｉｃａｖａｒｊａｐｏｎｉｃａ系の園芸品種としては、赤ワビスケ、玉之浦、宵おけさ、佐渡ワビスケ、天倫寺月光、小泰子、胡蝶ワビスケ、紅ワビスケ、黄泉銀花、一子ワビスケ、香紫、三原雲龍、東海、はじらい、銀葉椿、花仙山、塩見白花、門の内、四ヶ村、大山白、加賀八朔、祐閑寺名月、野々市、雛鶴、谷間の鶴、幸作絞、加賀小絞、西王母等が挙げられ、Ｃａｍｅｌｌｉａｊａｐｏｎｉｃａｖａｒｄｅｃｕｍｂｅｎｓ系の園芸品種としては、オトメツバキ、阿賀の里、朝桜、荒磯、一楽、祝の盃、桂姫、北の洋、五知の娘、島千鳥、島の錦、寂光、雪宝山、田代、東洋の光、錦麒麟、日本髪、起の香、牡丹雪、松波、雪景色、雪小町、雪衣、陽春、小倉の里、白妙、太刀山、富樫白、初時雨、宝珠、本法寺、桃雀、雪明り、雪燈籠、加賀の鶴、八千代等が挙げられ、Ｃａｍｅｌｌｉａｊａｐｏｎｉｃａｖａｒｍａｃｒｏｃａｒｐａ系としては、熊谷、紅唐子が挙げられる。

その抽出方法は特に限定されず、例えば、加熱抽出したものであっても良いし、常温抽出したものであっても良いし、低温抽出したものであっても良い。また、生のまま用いることも、乾燥して用いることもでき、目的によって使い分けることができる。

抽出溶媒としては、例えば、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１‐プロパノール、２‐プロパノール、１‐ブタノール、２‐ブタノール等）、液状多価アルコール類（１，３‐ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）が挙げられる。好ましくは、水、低級アルコール及び液状多価アルコール等の極性溶媒が良く、特に好ましくは、水、エタノール、１，３‐ブチレングリコール及びプロピレングリコールが良い。これらの溶媒は一種でも二種以上を混合して用いても良い。

上記抽出物は、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、希釈及び濾過処理、活性炭等による脱色、脱臭処理等をして用いても良い。

本発明の外用剤又は内用剤には、これらの効果を損なわない範囲内で、化粧品、医薬部外品、医薬品に用いられる成分である油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤、賦形剤、皮膜剤、甘味料、酸味料等の成分を含有することもできる。

本発明の剤型としては、例えば、化粧水、クリーム、マッサージクリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、軟膏、パップ剤、ペースト剤、プラスター剤、エッセンス、散剤、丸剤、錠剤、注射剤、坐剤、乳剤、カプセル剤、顆粒剤、液剤（チンキ剤、流エキス剤、酒精剤、懸濁剤、リモナーデ剤等を含む）、錠菓、飲料、ティーバッグ、スパイス等が挙げられる。

本発明に用いる上記抽出物の含有量は、外用の場合、全量に対し、固形物に換算して０．０００１重量％以上が好ましく、０．００１～５重量％がより好ましい。さらに、０．００５～０．５重量％が最も好ましい。０．０００１重量％未満では十分な効果は望みにくい。５重量％を越えて含有した場合、効果の増強は認められにくく不経済である。一方、内用の場合、投与量は年齢、体重、症状、治療効果、投与方法、処理時間等により異なるが、通常、成人１人当たりの１日の量としては、５ｍｇ以上が好ましく、１０ｍｇ～５ｇがより好ましい。さらに、１００ｍｇ～１ｇが最も好ましい。

次に本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いるツバキの抽出物の製造例、実験例及び処方例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。また、実施例に示す％とは重量％を示す。

製造例１Ａ熱水抽出物
Ｃａｍｅｌｌｉａｊａｐｏｎｉｃａｖａｒｄｅｃｕｍｂｅｎｓの種子の搾油残渣の乾燥物３０ｇに精製水３００ｍＬを加え、９５～１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して抽出物３．２ｇを得た。

製造例２Ａ熱水抽出物
Ｃａｍｅｌｌｉａｊａｐｏｎｉｃａｖａｒｊａｐｏｎｉｃａの種子の搾油残渣の乾燥物３０ｇに精製水３００ｍＬを加え、９５～１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して抽出物３．７ｇを得た。

製造例３Ａ熱水抽出物
Ｃａｍｅｌｌｉａｊａｐｏｎｉｃａｖａｒｄｅｃｕｍｂｅｎｓの葉の乾燥物３０ｇに精製水３００ｍＬを加え、９５～１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して抽出物４．４ｇを得た。

製造例４Ａ熱水抽出物
Ｃａｍｅｌｌｉａｊａｐｏｎｉｃａｖａｒｊａｐｏｎｉｃａの葉の乾燥物３０ｇに精製水３００ｍＬを加え、９５～１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して抽出物４．５ｇを得た。

製造例１Ｂ５０％エタノール抽出物
Ｃａｍｅｌｌｉａｊａｐｏｎｉｃａｖａｒｄｅｃｕｍｂｅｎｓの種子の搾油残渣の乾燥物２０ｇに５０％（ｗ／ｗ）エタノール１００ｍＬを加え、室温で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して抽出物２．６ｇを得た。

製造例２Ｂ５０％エタノール抽出物
Ｃａｍｅｌｌｉａｊａｐｏｎｉｃａｖａｒｊａｐｏｎｉｃａの種子の搾油残渣の乾燥物２０ｇに５０％（ｗ／ｗ）エタノール１００ｍＬを加え、室温で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して抽出物１．８ｇを得た。

製造例３Ｂ５０％エタノール抽出物
Ｃａｍｅｌｌｉａｊａｐｏｎｉｃａｖａｒｄｅｃｕｍｂｅｎｓの葉の乾燥物２０ｇに５０％（ｗ／ｗ）エタノール１００ｍＬを加え、室温で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して抽出物２．４ｇを得た。

製造例４Ｂ５０％エタノール抽出物
Ｃａｍｅｌｌｉａｊａｐｏｎｉｃａｖａｒｊａｐｏｎｉｃａの葉の乾燥物２０ｇに５０％（ｗ／ｗ）エタノール１００ｍＬを加え、室温で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して抽出物２．３ｇを得た。

製造例１Ｃエタノール抽出物
Ｃａｍｅｌｌｉａｊａｐｏｎｉｃａｖａｒｄｅｃｕｍｂｅｎｓの種子の搾油残渣の乾燥物２０ｇにエタノール１００ｍＬを加え、室温で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して抽出物１．４ｇを得た。

製造例２Ｃエタノール抽出物
Ｃａｍｅｌｌｉａｊａｐｏｎｉｃａｖａｒｊａｐｏｎｉｃａの種子の搾油残渣の乾燥物２０ｇにエタノール１００ｍＬを加え、室温で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して抽出物０．５ｇを得た。

製造例３Ｃエタノール抽出物
Ｃａｍｅｌｌｉａｊａｐｏｎｉｃａｖａｒｄｅｃｕｍｂｅｎｓの葉の乾燥物２０ｇにエタノール１００ｍＬを加え、室温で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して抽出物１．０ｇを得た。

製造例４Ｃエタノール抽出物
Ｃａｍｅｌｌｉａｊａｐｏｎｉｃａｖａｒｊａｐｏｎｉｃａの葉の乾燥物２０ｇにエタノール１００ｍＬを加え、室温で３日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して抽出物０．９ｇを得た。

実験例１フィラグリン産生促進試験
ＮＭＦ（天然保湿因子）の前駆物質であるフィラグリン産生への影響をフィラグリン遺伝子（ＦＬＧ）のｍＲＮＡ発現量を指標として評価した。すなわち、ケラチノサイト由来ＨａＣａＴ細胞を１２ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌあたり２×１０^４個播種し、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培養液にて、３７℃、５％ＣＯ_２条件下で３日間培養した。次に、各試料（最終濃度は表１に記載）を添加したＤＭＥＭ培養液にて、２４時間培養した後、総ＲＮＡの抽出を行った。
細胞からの総ＲＮＡの抽出はＲＮＡｉｓｏＰｌｕｓ（タカラバイオ）を用いて行い、総ＲＮＡ量は分光光度計（ＮａｎｏＤｒｏｐ）を用いて２６０ｎｍにおける吸光度により求めた。ｍＲＮＡ発現量の測定は、細胞から抽出した総ＲＮＡを基にしてリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ法により行った。リアルタイムＲＴ－ＰＣＲ法には、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＲＴＭａｓｔｅｒＭｉｘ（タカラバイオ）及びＳＹＢＲＳｅｌｅｃｔＭａｓｔｅｒＭｉｘ（ライフテクノロジー）を用いた。すなわち、５００ｎｇの総ＲＮＡを逆転写反応後、ＰＣＲ反応（９５℃：１５秒間、６０℃：６０秒間、４０ｃｙｃｌｅｓ）を行った。
その他の操作は定められた方法に従い、ＦＬＧｍＲＮＡの発現量を、内部標準であるＧＡＰＤＨｍＲＮＡの発現量に対する割合として求めた。ＦＬＧ発現量は、コントロールのＦＬＧｍＲＮＡの発現量に対する試料添加群のＦＬＧｍＲＮＡの発現量の比率として算出した。なお、ＦＬＧ用のプライマーは、以下に示したものを使用した。

ＦＬＧ用のプライマーセット
ＧＧＣＡＣＴＧＡＡＡＧＧＣＡＡＡＡＡＧＧ（配列番号１）
ＡＡＡＣＣＣＧＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＡＡＴＣＡ（配列番号２）
ＧＡＰＤＨ用のプライマーセット
ＴＧＣＡＣＣＡＣＣＡＡＣＴＧＣＴＴＡＧＣ（配列番号３）
ＴＣＴＴＣＴＧＧＧＴＧＧＣＡＧＴＧＡＴＧ（配列番号４）

これらの試験結果を表１に示した。その結果、本発明のツバキの抽出物、特にＣａｍｅｌｌｉａｊａｐｏｎｉｃａｖａｒｄｅｃｕｍｂｅｎｓ系ツバキに、強いフィラグリン産生促進効果が認められた。

実験例２マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）阻害効果
ＭＭＰ－１及びＭＭＰ－２ｍＲＮＡ発現量の測定を行った。ヒト皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を６０ｍｍｄｉｓｈに１×１０^５個播種し、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培養液にて、３７℃、５％ＣＯ_２条件下で培養した。コンフルエントな状態になったところで、ＭＭＰ－１及びＭＭＰ－２ｍＲＮＡ発現量測定でも各試料（最終濃度は表２及び３に記載）を添加したＤＭＥＭ培養液にて、２４時間培養した後、総ＲＮＡの抽出を行った。
細胞からの総ＲＮＡの抽出はＲＮＡｉｓｏＰｌｕｓ（タカラバイオ）を用いて行い、総ＲＮＡ量は分光光度計（ＮａｎｏＤｒｏｐ）を用いて２６０ｎｍにおける吸光度により求めた。ｍＲＮＡ発現量の測定は、細胞から抽出した総ＲＮＡを基にしてリアルタイムＲＴ－ＰＣＲ法により行った。リアルタイムＲＴ－ＰＣＲ法には、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＲＴＭａｓｔｅｒＭｉｘ（タカラバイオ）及びＳＹＢＲＳｅｌｅｃｔＭａｓｔｅｒＭｉｘ（ライフテクノロジー）を用いた。すなわち、５００ｎｇの総ＲＮＡを逆転写反応後、ＰＣＲ反応（９５℃：１５秒間、６０℃：６０秒間、４０ｃｙｃｌｅｓ）を行った。
その他の操作は定められた方法に従い、ＭＭＰ－１及びＭＭＰ－２ｍＲＮＡの発現量を、内部標準であるβ―ａｃｔｉｎｍＲＮＡの発現量に対する割合として求めた。ＭＭＰ発現抑制率は、コントロールのＭＭＰ－１及びＭＭＰ－２ｍＲＮＡの発現量に対する試料添加群のＭＭＰ－１及びＭＭＰ－２ｍＲＮＡの発現量の比率として算出した。なお、各遺伝子の発現量の測定に使用したプライマーは次の通りである。

ＭＭＰ－１用のプライマーセット
ＧＧＧＡＧＡＴＣＡＴＣＧＧＧＡＣＡＡＣＴＣ（配列番号５）
ＴＧＡＧＣＡＴＣＣＣＣＴＣＣＡＡＴＡＣＣ（配列番号６）
ＭＭＰ－２用のプライマーセット
ＣＣＧＴＣＧＣＣＣＡＴＣＡＴＣＡＡ（配列番号７）
ＣＴＴＣＴＧＣＡＴＣＴＴＣＴＴＴＡＧＴＧＴＧＴＣＣＴＴ（配列番号８）
β―Ａｃｔｉｎ用のプライマーセット
ＣＡＣＴＣＴＴＣＣＡＧＣＣＴＴＣＣＴＴＣＣ（配列番号９）
ＧＴＧＴＴＧＧＣＧＴＡＣＡＧＧＴＣＴＴＴＧ（配列番号１０）

これらの実験結果を表２及び３に示した。その結果、本発明のツバキの抽出物にＭＭＰ発現抑制効果（ＭＭＰ阻害効果）が認められた。特に、ＭＭＰ－１阻害効果については、ｄｅｃｕｍｂｅｎｓ系のツバキは、水による抽出物の効果が高く、ｊａｐｏｎｉｃａ系のツバキは、エタノールによる抽出物の効果が高かった。

処方例１化粧水
処方含有量（％）
１．製造例１Ａの抽出物０．２
２．１，３‐ブチレングリコール８．０
３．グリセリン２．０
４．キサンタンガム０．０２
５．クエン酸０．０１
６．クエン酸ナトリウム０．１
７．エタノール５．０
８．パラオキシ安息香酸メチル０．１
９．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．）０．１
１０．香料適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１～６及び１１と、成分７～１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。

処方例２クリーム
処方含有量（％）
１．製造例１Ｂの抽出物０．０１
２．スクワラン５．５
３．オリーブ油３．０
４．ステアリン酸２．０
５．ミツロウ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）３．０
８．ベヘニルアルコール１．５
９．モノステアリン酸グリセリン２．５
１０．香料０．１
１１．パラオキシ安息香酸メチル０．２５
１２．１，３‐ブチレングリコール８．５
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２～９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１１～１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。

処方例２において、製造例１Ｂの抽出物を製造例１Ａ、２Ａの等量混合抽出物、製造例３Ａ、４Ａの等量混合抽出物及び製造例１Ｂ、２Ｂの等量混合抽出物に置き換えたものを、それぞれ処方例３、４及び５とした。

処方例６乳液
処方含有量（％）
１．製造例１Ａ、３Ａの等量混合抽出物０．１
２．スクワラン５．０
３．オリーブ油５．０
４．ホホバ油５．０
５．セタノール１．５
６．モノステアリン酸グリセリン２．０
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）３．０
８．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（２０Ｅ．Ｏ．）２．０
９．香料０．１
１０．プロピレングリコール１．０
１１．グリセリン２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル０．２
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２～８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１０～１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。

処方例７ゲル剤
処方含有量（％）
１．製造例１Ｃの抽出物０．００１
２．エタノール５．０
３．パラオキシ安息香酸メチル０．１
４．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．）０．１
５．香料適量
６．１，３‐ブチレングリコール５．０
７．グリセリン５．０
８．キサンタンガム０．１
９．カルボキシビニルポリマー０．２
１０．水酸化カリウム０．２
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１～５と、成分６～１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。

処方例８パック
処方含有量（％）
１．製造例１Ａの抽出物０．１
２．製造例１Ｂの抽出物０．１
３．ポリビニルアルコール１２．０
４．エタノール５．０
５．１，３‐ブチレングリコール８．０
６．パラオキシ安息香酸メチル０．２
７．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（２０Ｅ．Ｏ．）０．５
８．クエン酸０．１
９．クエン酸ナトリウム０．３
１０．香料適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１～１１を均一に溶解し製品とする。

処方例９ファンデーション
処方含有量（％）
１．製造例１Ａ、２Ａの等量混合抽出物１．０
２．ステアリン酸２．４
３．ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート（２０Ｅ．Ｏ．）１．０
４．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）２．０
５．セタノール１．０
６．液状ラノリン２．０
７．流動パラフィン３．０
８．ミリスチン酸イソプロピル６．５
９．カルボキシメチルセルロースナトリウム０．１
１０．ベントナイト０．５
１１．プロピレングリコール４．０
１２．トリエタノールアミン１．１
１３．パラオキシ安息香酸メチル０．２
１４．二酸化チタン８．０
１５．タルク４．０
１６．ベンガラ１．０
１７．黄酸化鉄２．０
１８．香料適量
１９．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２～８を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分１９に成分９をよく膨潤させ、続いて、成分１及び１０～１３を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１４～１７を加え、ホモミキサーで撹拌し７５℃に保ち水相とする。この油相に水相をかき混ぜながら加え、乳化する。その後冷却し、４５℃で成分１８を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。

処方例１０浴用剤
処方含有量（％）
１．製造例１Ａの抽出物２．０
２．製造例１Ｂの抽出物１．０
３．炭酸水素ナトリウム５０．０
４．黄色２０２号（１）適量
５．香料適量
６．硫酸ナトリウムにて全量を１００とする
［製造方法］成分１～６を均一に混合し製品とする。

処方例１１軟膏
処方含有量（％）
１．製造例１Ｂ、２Ｂの等量混合抽出物０．５
２．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．）２．０
３．モノステアリン酸グリセリン１０．０
４．流動パラフィン５．０
５．セタノール６．０
６．パラオキシ安息香酸メチル０．１
７．プロピレングリコール１０．０
８．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２～５を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び６～８を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。

処方例１２散剤
処方含有量（％）
１．製造例１Ａ、２Ａの等量混合抽出物２０．０
２．乾燥コーンスターチ３０．０
３．微結晶セルロース５０．０
［製造方法］成分１～３を混合し、散剤とする。

処方例１３錠剤
処方含有量（％）
１．製造例１Ａの抽出物３．０
２．乾燥コーンスターチ２７．０
３．カルボキシメチルセルロースカルシウム２０．０
４．微結晶セルロース４０．０
５．ポリビニルピロリドン７．０
６．タルク３．０
［製造方法］成分１～４を混合し、次いで成分５の水溶液を結合剤として加えて顆粒成形する。成形した顆粒に成分６を加えて打錠する。１錠０．５２ｇとする。

処方例１４錠菓
処方含有量（％）
１．製造例１Ａ、２Ａの等量混合抽出物０．５
２．乾燥コーンスターチ５０．０
３．エリスリトール４０．０
４．クエン酸５．０
５．ショ糖脂肪酸エステル３．０
６．香料適量
７．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１～４及び７を混合し、顆粒成形する。成形した顆粒に成分５及び６を加えて打錠する。１粒１．０ｇとする。

処方例１５飲料
処方含有量（％）
１．製造例１Ａの抽出物２．０
２．果糖ブドウ糖液糖１２．５
３．クエン酸０．１
４．香料０．０５
５．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１～５を混合し、飲料とする。

以上のことから、本発明のツバキの抽出物は、優れたＭＭＰ阻害効果、フィラグリン産生促進効果を有していた。よって、本発明のツバキの抽出物は、皮膚の老化といった美容分野だけでなく、老化による機能低下の抑制、ガンの予防、治療等といった医療分野にも利用でき、食品、化粧品、医薬部外品及び医薬品等への応用が期待される。

Claims

ツバキの種子の水抽出物を含有することを特徴とするマトリックスメタロプロテアーゼ－１（ＭＭＰ－１）阻害剤であって、ツバキの品種が、Ｃａｍｅｌｌｉａｊａｐｏｎｉｃａｖａｒｄｅｃｕｍｂｅｎｓであり、かつ、ツバキの種子が、ツバキの種子を搾油にて脱油した搾油残渣であることを特徴とするマトリックスメタロプロテアーゼ－１（ＭＭＰ－1）阻害剤。