JP7271818B2 - 抗ウイルス作用を有するリョクトウ外皮抽出物及びその抽出方法 - Google Patents
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Description
図3に示すように、King‘s Ground Biotech Co., Ltd.の調製プロセスに従って、リョクトウ外皮の原材料を用意し、生産計画して、配合、物理的、化学的、生物学的処理、測定、パッケージを行い、動物飼料添加剤や他の食品の添加剤として使用できるVIVA(商標名)という名称の製品を得た。実験室での小規模生産では、重量の単位は50グラム(g)であった。得られた動物飼料添加物50gを、10倍量、すなわち500ミリリットル(ml)の95%エタノールに添加し、超音波処理により抽出を行った。室温で1時間振動させ、粗ろ過により固体残渣を除去し、本発明のリョクトウ外皮のエタノール抽出溶液を得た。この段階での容量は約350ml~380mlで、回収率は約70~80%であった。減圧濃縮後、20g~25gの抽出液を得ることができ、原材料重量の約40~50%であった。当該抽出液を50~60℃で乾燥させ、残った水分を除去し、原材料重量の約20~30%(w/w)であるリョクトウ外皮のエタノール抽出物10g~15gを得た。
実施例1から得たリョクトウ外皮のエタノール抽出物をDMSOに溶解した。リョクトウ外皮のエタノール抽出物1.4gを、DMSO14mlに溶解した後、メタノールで100倍に希釈し、主として成分分析用HPLCで分析した。図4に示すように、標準物質と比較した結果、保持時間約25分~30分の間に生じる2つのピークはそれぞれビテキシン及びイソビテキシンであることが確認された。計算の結果、ビテキシンの絶対量は31.015ミリグラム(mg) (エタノール抽出物の2.22%)であり、イソビテキシンの絶対量は33.893mg(エタノール抽出物の2.42%)であることが分かった。
開発された薬剤は安全性要件を満たさなければならず、かつ、それらの使用濃度によって毒性をもたらさないことが必要であり、このため、本発明のエタノール抽出物の細胞毒性試験をさらに実施した。ブランク対照としてDMSOを用いた。1%の濃度のDMSOでは、細胞は増殖と形態に差を示さず、つまり毒性を示さなかった。
インフルエンザウイルスの表面にある赤血球凝集素は、赤血球上のレセプターと結合することができる。ウイルスの力価が十分に高い場合、赤血球の赤血球凝集が生じる。したがって、赤血球の赤血球凝集は、ウイルス力価を検査する方法として利用できると考えられる。これは赤血球凝集アッセイ(HA)とも呼ばれる。
0.8マイクロリットル(μL)のリョクトウ外皮のエタノール抽出物(DMSOに溶解した濃度20mg/mL、10mg/mL、5mg/mL、2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL、0mg/mL)を用意した。溶解したリョクトウ外皮のエタノール抽出物を、リン酸緩衝液69.2μL(100ミリモル(mM)、pH 6.8)及びα-グルコシダーゼ10μL(1単位/ミリリットル(U/mL)、Sigma)と混合し、37℃のインキュベーターに入れて15分間培養した。
Claims (9)
- 抗ウイルス用の医薬組成物であって、リョクトウ外皮の原材料を5~15倍容量(v/w)のC1~C6アルコールに浸し、一次抽出後に超音波処理して抽出を行い、濃縮乾燥することにより得られる、リョクトウ外皮のアルコール抽出物を含み、前記C1~C6アルコールは、50%、75%、または95%の、エタノールまたはメタノールであり、
前記リョクトウ外皮のアルコール抽出物は、2重量%~7重量%のビテキシン、及び2重量%~7重量%のイソビテキシンを含み、
前記ウイルスは、オルトミクソウイルス科、パラミクソウイルス科、ヘルペスウイルス、およびレオウイルスから選ばれる何れかであり、前記オルトミクソウイルス科はほ乳類インフルエンザウイルスH1N1(PR8)であることを特徴とする医薬組成物。 - 請求項1記載の医薬組成物であって、アルコール抽出段階において50%、75%、または95%の、エタノールまたはメタノールを、前記原材料の10倍容量(v/w)の量で使用することを特徴とする医薬組成物。
- 請求項1又は2に記載の医薬組成物であって、前記リョクトウ外皮のアルコール抽出物は、ウイルス誘発細胞変性効果を阻害することを特徴とする医薬組成物。
- 請求項1乃至3のいずれか一項に記載の医薬組成物であって、前記リョクトウ外皮のアルコール抽出物は、細胞内のウイルスのHA力価を低下させることを特徴とする医薬組成物。
- 請求項1乃至4のいずれか一項に記載の医薬組成物であって、前記リョクトウ外皮のアルコール抽出物は、α-グルコシダーゼを阻害することによって抗ウイルス効果を達成することを特徴とする医薬組成物。
- 請求項1乃至5のいずれか一項に記載の医薬組成物であって、前記リョクトウ外皮のアルコール抽出物は、ノイラミニダーゼを阻害することによって抗ウイルス効果を達成することを特徴とする医薬組成物。
- 請求項1乃至6のいずれか一項に記載の抗ウイルス用の医薬組成物を抽出する方法であって、
(1)リョクトウ外皮の原材料を供給し、
(2)前記リョクトウ外皮の原材料を、5~15倍容量(v/w)の量の抽出用のC1~C6アルコールに浸漬して浸漬液を得て、前記C1~C6アルコールは、50%、75%、または95%の、エタノールまたはメタノールであり、
(3)前記浸漬液をろ過してアルコール抽出液を得て、該アルコール抽出液を濃縮乾燥させ、
(4)リョクトウ外皮のアルコール抽出物を得ることからなる方法。 - 請求項7に記載の方法であって、アルコール抽出段階において50%、75%、または95%の、エタノールまたはメタノールを、前記原材料の10倍容量(v/w)の量で使用することを特徴とする方法。
- 請求項7又は8に記載の方法により調製した飼料添加物。
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