KR100295395B1 - 인플루엔자바이러스a형감기의치료및예방기능을갖는항바이러스성약제및기능성식품 - Google Patents

인플루엔자바이러스a형감기의치료및예방기능을갖는항바이러스성약제및기능성식품 Download PDF

Info

Publication number
KR100295395B1
KR100295395B1 KR1019980018465A KR19980018465A KR100295395B1 KR 100295395 B1 KR100295395 B1 KR 100295395B1 KR 1019980018465 A KR1019980018465 A KR 1019980018465A KR 19980018465 A KR19980018465 A KR 19980018465A KR 100295395 B1 KR100295395 B1 KR 100295395B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
prevention
peony
virus
functional food
extract
Prior art date
Application number
KR1019980018465A
Other languages
English (en)
Other versions
KR19990085819A (ko
Inventor
고병섭
김호경
정재득
이광희
박갑주
정승원
전원경
Original Assignee
신민규
한국 한의학 연구원
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 신민규, 한국 한의학 연구원 filed Critical 신민규
Priority to KR1019980018465A priority Critical patent/KR100295395B1/ko
Publication of KR19990085819A publication Critical patent/KR19990085819A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR100295395B1 publication Critical patent/KR100295395B1/ko

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/31—Brassicaceae or Cruciferae (Mustard family), e.g. broccoli, cabbage or kohlrabi
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/38—Other non-alcoholic beverages
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/52—Adding ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/23—Apiaceae or Umbelliferae (Carrot family), e.g. dill, chervil, coriander or cumin
    • A61K36/234—Cnidium (snowparsley)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/35—Caprifoliaceae (Honeysuckle family)
    • A61K36/355—Lonicera (honeysuckle)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/58—Meliaceae (Chinaberry or Mahogany family), e.g. Azadirachta (neem)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/65—Paeoniaceae (Peony family), e.g. Chinese peony
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2250/00—Food ingredients
    • A23V2250/20—Natural extracts
    • A23V2250/21—Plant extracts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2300/00—Processes
    • A23V2300/14—Extraction
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
    • A61K2236/331—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using water, e.g. cold water, infusion, tea, steam distillation, decoction
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/37—Extraction at elevated pressure or temperature, e.g. pressurized solvent extraction [PSE], supercritical carbon dioxide extraction or subcritical water extraction
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/39—Complex extraction schemes, e.g. fractionation or repeated extraction steps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)

Abstract

본 발명은 나복자, 천련자, 금은화, 작약 및 천궁의 추출물을 포함하여 이루어지는 감기 예방 및 치료용 항바이러스성 약제 및 기능성 식품에 관한 것이다.
본 발명에 의하면, 인플루엔자 바이러스 A형의 예방 및/또는 치료 효과가 탁월하고 세포 독성이 거의 없는 약제 및 기능성 식품을 얻을 수 있다.

Description

인플루엔자 바이러스 A형 감기의 치료 및 예방 기능을 갖는 항바이러스성 약제 및 기능성 식품
본 발명은 인플루엔자 바이러스 A형에 대하여 매우 우수한 저해활성을 가지므로, 감기의 치료 및 예방 효과가 뛰어난 항바이러스성 약제 및 기능성 식품에 관한 것이다.
현재 화학적으로 합성하여 인플루엔자 바이러스 A형 저해제로 사용되고 있는 염산아만타딘은 항인플루엔자 바이러스 활성을 보이나, 적혈구에 대하여 세포 독성을 가지므로 인체에 유해하다는 단점이 있다.
한편, 한방 생약재의 엑기스를 사용하여 인플루엔자를 치료하기도 한다. 예를 들면, 나복자는 천식에 효과를 보이며, 금은화는 열을 내리고, 생강은 기운을 순하게 함으로써 속을 시원하게 하고 발한하도록 하는 등의 효과를 보이므로, 이와 같은 약재 조합의 추출물을 사용하여 한방 엑기스 제제를 생산하고 있다.
본 발명의 발명자들은 이러한 종래의 양방 및 한방 감기 약제에 비하여 인플루엔자 바이러스 A형에 대한 저해 활성이 우수하고 세포독성을 나타내지 않는 새로운 한방 제제를 알아내고자 100여종의 생약원료를 선정하여 1차 인플루엔자 바이러스 A형에 대한 in vitro 활성 억제 및 세포독성 시험을 한 후, 이 중 효과가 우수한 단미제들을 군신좌사 및 칠정이론에 근거하여 새로이 조합한 복합 약제의 추출물을 만들고 이에 대하여 2차 활성 및 독성실험을 한 결과, 인플루엔자 바이러스 A형 억제 효과가 매우 탁월할 뿐 아니라 세포 독성도 거의 없는 추출 약제를 발견하게 되어, 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명에서는 인플루엔자 바이러스 A형의 예방 및/또는 치료 효과가 탁월하고 세포 독성이 거의 없는 새로운 추출 약제 또는 기능성 식품를 제공하는 것을 목적으로 한다.
제1도는 본 발명에 따른 추출 약제 및 음성 대조군의 적혈구 응집 억제 반응 시험 결과를 보여주는 사진이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에 의하면, 나복자, 천련자, 금은화, 작약 및 천궁 추출물을 포함하여 이루어지는 감기 예방 및 치료용 항바이러스성 약제가 제공된다.
나복자(Raphani Semen)는 무(Raphanus sativus Linne) 및 동속식물(십자화과 Cruciferae)의 씨이며, 기운을 순하게 하고, 담을 녹이고, 적을 삭히는 효능이 있는 한방 단미제이다. 담, 천식, 해수, 식적, 설사, 이질 등의 적응증에 효과가 있는 것으로 사용되어 왔다.
천련자(Meline fructs)는 멀구슬나무(Melia azedarach Linne var. japonica Makino)의 열매로서, 이기지통(理氣止痛), 살충요선(殺蟲療癬) 등의 효능이 인정되어, 근육통, 요통, 심통, 산통, 살출, 두선 등에 사용되어 왔다.
금은화(Lonicerae Flos)는 인동덩굴(Lonicera japonica Thunberg)의 꽃 봉오리이다. 열을 내리고 독을 푸는 효능이 인정되어, 옹저창독, 혈리, 열병 등의 적응증에 사용되어 왔다.
작약(Peony Root)은 참작약(Paeonia albiflora Pallas var. trichocarpa Bunge) 및 동속근연식물(미나리아제비과 Ranunculaceae)의 뿌리로서, 간을 부드럽게 하고 피를 보호하고 수렴하는 작용을 나타낸다. 월경 부조, 가슴, 옆구리, 배가 아플 때, 다한증 등의 적응증에 사용되고 있다.
천궁(Cnidium Rhizome)은 Cnidium of ficinale Makino의 뿌리줄기를 그대로 또는 열탕에 데친 것이다. 한방에서 기와 혈과 풍을 다스린다고 보아, 월경부조, 두통, 가슴과 옆구리가 벅차면서 아픈 적응증에 사용하여 왔다.
본 발명자들은 이 5가지 한약재를 조합 추출하여 얻은 추출 약제가 인플루엔자 바이러스 A형에 대하여 뛰어난 저해 활성을 나타낼 뿐만 아니라 세포독성도 거의 나타나지 않는다는 놀라운 사실을 발견하였다
본 발명에 의한 추출 약제는 나복자, 천련자, 금은화, 작약 및 천궁의 혼합 약제를 적절한 추출 용매를 이용하여 추출한 후, 여과, 분리, 농축, 동결 건조하여 제조한다.
추출 용매로는 열수, 메탄올 등을 사용할 수 있다.
원료 단미제는 국산 생약제를 사용하는 것이 바람직하다.
추출용매로 열수를 사용하는 경우, 나복자, 천련자, 금은화, 작약 및 천궁으로 이루어진 혼합 원료에 원료 1kg당 10-40ℓ 의 증류수를 넣고 2-4시간 끓인 후 가제를 이용하여 1차 여과하고 8000xg에서 10-20분간 원심분리한 후 2차 여과하여 농축기로 농축시킨 후 동결 건조하여 제조한다.
메탄올을 추출용매로 사용하는 경우에는 혼합 원료에 원료 1kg당 5-20ℓ 량의 메탄올을 넣고 50-70°C 수조에서 15 내지 20시간 침적하여 추출한 후, 8000xg에서 10-20분간 원심분리한 후 2차 여과하여 농축기로 농축시킨 후 동결 건조하여 최종 추출 약제를 제조한다.
본 발명에 의하여 제조되는 추출 약제는 뛰어난 인플루엔자 바이러스 A형 억제활성을 나타내고 독성이 거의 없으므로, 감기 치료용 약제로 사용할 수 있다.
약제로 사용할 경우, 나복자, 천련자, 금은화, 작약 및 천궁을 동등 비율로 총 60g 사용하여 얻어진 약제 추출물을 1일 3회로 나누어 투여하는 것이 바람직하다.
또한, 본 발명에 따른 나복자, 천련자, 금은화, 작약 및 천궁 혼합 처방 원료의 추출액을 이용하여 감기예방용 기능성 식품을 제조할 수 있다.
예를 들어, 기능성 음료를 제조하는 경우, 나복자, 천련자, 금은화, 작약 및 천궁에 정제수를 원료 1kg당 5-10ℓ의 양으로 투입한 후, 고온(100-200℃), 고압(1-2kg/m2) 하에서 2-3시간 달인 후 여과하고, 여과 잔사에 동량의 물을 더 가하여 동일한 조건하에서 2-3시간 다시 달인 후 여과한다. 얻어진 여과액을 잘 교반하면서 음료에 통상 첨가되는 첨가물, 예들들어 글루코스, 말토오즈, 사카로스, 올리고당, 천연꿀 등을 넣어서 잘 섞어주고 살균한 후 통상의 음료제법에 따라 제품화 할 수 있다.
다음에 본 발명의 실시예를 기재한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명의 이해를 보다 용이하게 하기 위하여 제공되는 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예로 한정되는 것은 아니다.
[실시예 1]
나복자, 천련자, 금은화, 작약 및 천궁 각 12g씩 총60g에 증류수 1300m1를 넣어 2시간 30분 동안 끓인 후 가제를 이용하여 1차 여과하였다. 이어 추출된 용액을 8000xg에서 15분간 원심분리한 후 여과하여 농축기로 농축하고 동결건조하여 약 6g의 약제를 얻었다.
[실시예 2]
나복자, 천련자, 금은화, 작약 및 천궁 각 12g씩 총 60g에 500m1의 80%-메탄올을 넣은 후 60℃ 수조에서 18시간 침적하여 추출하였다. 추출된 메탄올 용액은 8000xg에서 15분간 원심분리한 후 여과하여 농축기로 농축하고 동결건조하여 약 2g의 약제를 얻었다.
[실시예 3]
나복자, 천련자, 금은화, 작약 및 천궁 각 200g씩 총 1kg에 정제수 6ℓ 를 넣고, 120°C, 1.5kg/m2의 압력하에서 2시간 달인 후 여과하고, 여과 잔사에 동량의 물을 더 가하여 동일한 조건하에서 3시간 다시 달인 후 여과하였다. 얻어진 여과액을 잘 교반하면서 천연꿀을 원료 1kg당 50g 가하고 잘 섞어준 후 순간살균기(110-120°C)를 통과시켜 살균하였다. 살균된 음료를 120mℓ 캔전용기에 120mℓ씩 주입하고 시민한 후, 냉각시켜 포장하여 기능성 음료를 제조하였다.
[시험예 1]
본 발명에 사용된 각각의 단미제 추출물, 본 발명에 따른 추출 약제, 종래의 항 바이러스제인 염산 아만타딘 및 국내외에 시판중인 한약 엑기스제에 대해서 항 바이러스 활성과 세포독성을 비교하기 위하여 적혈구응집억제시험(Haemagglutination Inhibition Test: HIT) 및 적혈구응집시험(Haemagglutination Assay)을 실시하였다
각 단미제 추출물은 실시예 1의 방법에 따라 추출, 분리, 농축, 동결 건조하여 얻은 것을 사용하였다(본 발명에 의한 약제 추출물 제조시 사용한 혼합약제 전체량과 동등량의 단미제를 사용하여 추출함).
비교 한약 엑기스제로는 국내 시판중인 쌍화탕™(동화약품:K-1), 갈근탕™(삼영제약:K-2), 쌍감탕™(조선무약: K-3), 인삼사물탕™(해동제약: K-4), 일본에서 시판 중인(대협약품공업주식회사: J-1),(신생약품공업주식회사; J-2), 중국에서 시판중인 항병독충제™(사천성중약창· C-1), 판람근충제™(북경장성제약창: C-2), 감모청열충제™(북경동인당집단공사: C-3)를 사용 하였다.
[바이러스 준비]
본 시험에서는 인플루엔자 바이러스[A/타이완/1/86(H1N1)]형을 국립 보건원 호흡기 바이러스과로부터 분양받아 사용하였다
[바이러스 증식]
바이러스를 증식시키기 위하여 SPF 수정계란(Specific pathogen free embryonated hen's egg)을 37°C 부란기에서 10일간 부화시킨 후, 오염된 란과 무정란을 제외한 수정계란을 이용하였다. 수정계란의 장뇨액(allantoic fluid)에 바이러스(0.08HA 단위)를 0.1mℓ씩 접종 후 파라핀 왁스로 구멍을 막았다. 접종 후 37°C에서 바이러스를 3일간 증식시킨 후, 4°C에서 18시간동안 방치시키고, 장뇨액을 계란당 10m1씩 얻었다. 바이러스가 들어있는 장뇨액을 4°C, 8000xg에서 10분간 원심분리한 후 배양 상층액을 사용하였다.
[바이러스 역가 측정]
장뇨액에서 증식된 바이러스의 역가를 측정하기 위하여 적혈구 응집 실험을 실시하였다. 장뇨액에서 분리된 바이러스 배양원액을 PBS로 2배 계단 희석하여 96웰 플레이트에 0.05mℓ씩 분주하였다. PBS를 이용하여 0.5%로 희석된 적혈구 세포(RBC) 용액을 0.05mℓ씩 각 웰에 넣고 흔들어 준 후, 25°C에서 60분동안 반응시키고, 음성대조군과 비교하여 응집 역가를 측정하였다.
10일 된 SPF 수정계란 3개에 바이러스를 증식시켜 얻은 후 적혈구응집반응을 통해 역가를 측정한 결과, A SPF 수정계란에서 증식된 바이러스의 역가는 4HA unites/0,025mℓ로 나타났고, B SPF 수정계란에서 증식된 바이러스는 역가가 나타나지 않았으며, C SPF 수정계란에서 증식된 바이러스의 역가는 256HA unites/0.025mℓ로 나타났다. 이중 C SPF 수정계란에서 증식된 바이러스를 적혈구응집시험(haemagglutination assay) 및 적혈구응집억제시험(haemagglutination inhibition test)에 사용하였다.
[적혈구 용액 준비]
닭의 익하정맥에서 혈액을 채취하고, 혈액 응고를 방지하기 위하여 Alsever 용액에 모았다. 이를 1800xg에서 5분간 원심분리하여 적혈구만을 모은 후, 인산염 완충 식염수(PBS, pH7.4)로 현탁시키고, 4°C에서 5일간 보관하면서 적혈구 응집 시험(Haemagglutination assay) 및 적혈구 응집 억제 시험(Haemagglutination Inhibition Test: HIT)에 이용하였다.
[항인플루엔자 바이러스 활성 평가 : 적혈구 응집 억제 시험]
한약 처방의 항인플루엔자 바이러스 활성을 측정하기 위해 적혈구응집억제시험(Haemagglutination Inhibition Test: HIT)을 시행하였다. 원액 시료(100mg/mℓ)를 각각 2배 계단 희석하여 각 웰에 0.025mℓ씩 분주하였다. 적혈구 응집 역가 시험에서 측정된 바이러스 용액을 4 적혈구응집단위(haemagglutination units: HA 단위)로 희석시켜 각 웰에 0.025mℓ씩 넣어 잘 섞어준 후, 상온에서 30분동안 반응시켰다. 이어서, 0.5%로 희석된 RBC 용액을 각 웰에 0.05mℓ씩 분주하고 가볍게 흔들어준 후 60분동안 25°C에서 반응시켰다. 반응시킨 후, 양성대조군과 음성대조군을 비교하여 본 발명에 의하여 추출된 약제가 바이러스와 RBC가 흡착하는 과정을 저지하는 효과를 검색하였다.
종래의 항 바이러스제인 염산 아만타딘 및 국내외에 시판중인 한약 엑기스제에 의한 효과를 표 1에, 각 단미제 및 본 발명에 의한 추출 약제에 의한 효과를 표 2에 각각 나타내었다.
상기 및 하기 표에서, Con.은 각 엑기스제의 희석 농도이며 , ++, +, △ 및 -은 각각 강한 양성 반응, 양성 반응, 약한 양성 반응 및 음성 반응을 나타내고, NC는 음성 대조군이다
상기 결과에서 알 수 있는 바와 같이, 염산 아만타딘은 12.5mg/mℓ에서만 항바이러스 활성을 보였고, 국내에서 시판중인 한약엑기스 제제인 K-1은 3.13mg/mℓ-6.25mg/mℓ, 50mg/mℓ-100mg/mℓ 농도에서 약한 항바이러스 활성을, 12.5mg/mℓ-25mg/mℓ 농도구간에서 강한 항바이러스 활성을 나타냈으며, K-2는 12.5mg/mℓ, 100mg/mℓ 농도에서 약한 항바이러스 활성을, 25mg/mℓ-50mg/mℓ에서 강한 항바이러스 활성을 나타내었고, K-3는 27mg/mℓ-100mg/mℓ 사이에서 강한 항바이러스 활성을 12.5mg/mℓ에서 약한 항바이러스 활성을, K-4는 25mg/mℓ-100mg/mℓ 사이에서 약한 항바이러스성 활성을 갖는 것으로 나타났다. 일본에서 시판 중인 한약 엑기스 제제인 J-1은 6.25mg/mℓ-100mg/mℓ 사이에서 강한 항바이러스 활성을 가지며, 1.56mg/mℓ-3.13mg/mℓ 사이에서 비교적 약한 항바이러스 활성을 갖는 것으로 나타났고, J-2는 6.25mg/mℓ-100mg/mℓ 사이에서 강한 항바이러스 활성을 가지며, 3.13mg/mℓ에서 비교적 약한 항바이러스 활성을 갖는 것으로 나타났다. 중국에서 시판 중인 한약 엑기스 제제인 C-1은 6.25mg/mℓ-50mg/mℓ 농도구간에서 약한 항바이러스 활성을 가지고 100mg/mℓ의 농도에서 강한 항바이러스 활성을 가지며, C-2는 100mg/mℓ에서 약한 항바이러스 활성을 갖고, C-3는 6.25mg/mℓ-25mg/mℓ 농도구간에서 약한 항바이러스 활성을, 50mg/mℓ-100mg/mℓ 농도구간에서 강한 항바이러스 활성을 갖는 것으로 나타났다.
열수 추출된 나복자, 천련자는 각각 3.13mg/ml-100mg, 1.56mg/ml-100mg/ml의 넓은 시료농도 구간에서 강한 항바이러스 활성을 나타내었으며, 이는 국내, 일본, 중국에서 시판되는 한방감기 엑기스제에 비하여도 훨씬 강한 항바이러스 활성으로 확인되었다.
열수 추출된 금은화는 12.5mg/ml-50mg/ml 농도구간에서 항바이러스 활성을 갖는 것으로 나타났고, 작약은 6.25mg/ml에서, 천궁은 3.13mg/ml-100mg/ml의 농도 구간에서 비교적 약한 항바이러스 활성을 보였다.
본 발명에 따라 제조된 실시예1의 추출 약제는 국내외 시판중인 한약 엑기스 제제들 보다도 더 넓은 농도구간에서 훨씬 강한 항바이러스 활성을 나타내었다. 제1도에 본 발명에 의한 추출 약제의 적혈구응집억제 반응 실험 결과를 사진으로 나타내었다.
[적혈구에 대한 세포 독성 시험: 적혈구 응집 시험]
원액 시료(100mg/mℓ)를 각각 2배 계단 희석하여 각 웰에 0.025mℓ씩 분주하였다. 각 웰에 PBS(pH 7.4)를 0.025mℓ씩 넣어 잘 섞어준 후, 0.5%로 희석된 RBC 용액을 각 웰에 0.05mℓ씩 분주하고 가볍게 흔들어 준 후, 60분동안 25°C에서 반응시켰다. 반응 후, 음성 대조군과 비교하여 염산아만타딘, 시판중인 한약 엑기스 제제, 각종 단미제 추출물 및 본 발명에 의한 약제 추출물이 적혈구 세포(RBC)에 미치는 세포 독성을 조사하였다.
아만타딘· HCI은 25mg/mℓ-200mg/mℓ 농도구간에서 세포독성을 보였고, 국내 및 일본에서 판매되는 한방감기 엑기스제들은 RBC에 세포독성을 전혀 나타내지 않아 화학요법제에 비해 한방 감기 엑기스제재들이 훨씬 세포에 대한 독성이 적은 것으로 나타났다.
넓은 농도 구간에서 강한 항바이러스 활성을 보인 나복자 및 천련자는 RBC에 대해 전혀 세포 독성을 나타내지 않는 반면에 금은화는 100mg/mℓ 농도간에서 약한게 세포 독성을 나타냈고, 작약은 6.25mg/ml-100mg/ml 넓은 농도 구간에서 세포 독성을 나타냈다. 넓은 농도 구간에서 약한 항바이러스 활성을 보인 천궁은 전혀 세포독성을 나타내지 않았다. 본 발명에 의한 추출 약제는 적혈구에 대한 세포 독성 시험에서 전혀 독성을 나타내지 않았다.
[In vivo에서 수정란을 이용한 항바이러스 활성 평가]
a. 수정란에서의 바이러스 증식
부란기에서 10 내지 11일간 수정란을 배양한 후 0.5 HA 농도의 인플루엔자 바이러스를 100㎕씩 수정란의 장뇨액에 접종하고 파라핀으로 밀봉한 다음, 2일간 34°C에서 배양한 후 4°C에서 18시간 이상 방치시켰다. 그 후, 주사기를 이용하여 장뇨액을 모았다. 이와 같은 과정을 수차례 반복하여 수정란에 적응된 인플루엔자 바이러스를 생산하여 25000rpm, 4°C, 2시간동안 초원심분리기를 이용하여 농축시켰다. 농축시켜 보관된 바이러스는 EID50을 구하기 위하여 사용하였다.
b. EID50값의 결정
농축된 인플루엔자 바이러스를 수정란의 장뇨액 내에 감염시킨 후 적혈구 응집 시험을 통해 EID50값을 얻을 수 있다. 10 내지 11일간 37°C에서 배양한 수정란에 농축된 바이러스를 PBS 에 10배 계단 희석하여 각각의 농도에 따른 바이러스를 100㎕씩 수정란의 장뇨액에 접종하고 접종 부위는 파라핀으로 봉입하였다. 2일간 34°C에서 배양한 후 배양된 수정란을 4°C에서 18시간 이상 방치시킨 다음 수정란의 장뇨액을 주사기로 적출하고 적출된 장뇨액에서의 바이러스 증식 여부를 확인하기 위하여 적혈구 응집 시험을 실시하여 EID50의 값을 구하였다.
본 실험에서 바이러스를 증식시켜 1차 적혈구 응집 시험한 결과, 20E1D50가 측정되었다. 약제 활성 평가를 위해서 2 × 106E1D50이상 되어야 하므로 수정란에 바이러스를 최대한으로 증식시켜 초원심 분리기를 이용하여 농축시켜, 다시 수정란을 이용하여 EID50값을 구한 결과, 2 × 1022EID50으로 나타났다
c. 약제 활성 평가
본 발명에 따른 실시예 1의 추출 약제(10㎍/mℓ, 100㎍/mℓ, 1000㎍/mℓ 농도별로 희석된 약제) 0,1mℓ와 0.2mℓ를 바이러스(2×106E1D50)와 혼합하여 11일된 수정란의 장뇨액 부위에 접종 후 파라핀 왁스로 구멍을 막는다. 접종 후 37°C에서 바이러스를 2일간 증식시킨 후 4°C에서 18시간동안 방치시키고 장뇨액을 얻었다. 바이러스가 들어있는 장뇨액을 4°C, 8000xg에서 10분간 원심분리한 후 배양 상층액을 적혈구 응집 반응을 통하여 약제 활성을 평가하였다[McLaren, L.C.: Haemagglutination Inhibition and Hemadsorption in Clinical Virology Manual(Specter S, Lancz, G, eds) pp243-249, Elsevier science publishing, New York, 1992] .
2 × 1022EID50값을 이용하여 수정란에서 NPW-31(NP-97-1) 및 NPW-7(NP-97-2)의 약제 활성을 평가한 결과, 동물 실험 모델인 수정란에서도 항인플루엔자 바이러스 활성이 강하게 나타났다(표 5)
본 발명에 의한 추출 약제는 기존에 사용중인 화학 합성제인 염산아만타딘에 비해 농도 기준 약 8배 정도, 한국, 일본, 중국의 한방진액 감기약 제제에 비해서는 농도 기준 약 4배의 인플루엔자 바이러스 A형에 대한 예방 및 억제 작용이 있으며, 세포독성은 없는 것으로 확인되었다
본 발명에 의하면, 인플루엔자 바이러스 A형의 예방 및 치료 효과가 탁월하고, 화학 합성 약제와 달리 세포 독성이 거의 없는 약제 및 이를 이용한 기능성 식품을 얻을 수 있다.

Claims (5)

  1. 나복자, 천련자, 금은화, 작약 및 천궁 추출물을 포함하여 이루어지는 인플루엔자 바이러스 A형 감기 예방 및 치료용 항바이러스성 약제.
  2. 제1항에 있어서, 상기 추출물이 나복자, 천련자, 금은화, 작약 및 천궁의 원료 1kg당 10-40ℓ의 증류수를 가하고 가열 추출하여 얻어진 것임을 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스 A형 감기 예방 및 치료용 항바이러스성 약제.
  3. 제1항에 있어서, 상기 추출물이 나복자, 천련자, 금은화, 작약 및 천궁의 원료 1kg당 5-20ℓ의 메탄올을 가하고 50-70°C의 수조에서 침적 추출하여 얻어진 것임을 특징으로 하는 인플루엔자 바이러스 A형 감기 예방 및 치료용 항바이러스성 약제.
  4. 나복자, 천련자, 금은화, 작약 및 천궁을 포함하여 이루어지는 감기 예방용 기능성 식품.
  5. 제4항에 있어서, 상기 기능성 식품이 음료이고, 상기 음료는 나복자, 천련자, 금은화, 작약 및 천궁의 원료 1kg당 5-l0ℓ 의 정제수를 가하고 고온, 고압하에서 2-3시간 달여 1차 여과액을 분리하는 단계; 여과 잔사를 동량의 정제수로 동일 조건하에서 2-3시간 달여 얻어진 2차 여과액을 분리하는 단계; 상기 1차 및 2차 여과액의 혼합액에 음료 첨가물을 가하고 살균하는 단계를 거쳐 제조되는 것임을 특징으로 하는 감기 예방용 기능성 식품.
KR1019980018465A 1998-05-22 1998-05-22 인플루엔자바이러스a형감기의치료및예방기능을갖는항바이러스성약제및기능성식품 KR100295395B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1019980018465A KR100295395B1 (ko) 1998-05-22 1998-05-22 인플루엔자바이러스a형감기의치료및예방기능을갖는항바이러스성약제및기능성식품

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1019980018465A KR100295395B1 (ko) 1998-05-22 1998-05-22 인플루엔자바이러스a형감기의치료및예방기능을갖는항바이러스성약제및기능성식품

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR19990085819A KR19990085819A (ko) 1999-12-15
KR100295395B1 true KR100295395B1 (ko) 2001-09-17

Family

ID=37527724

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1019980018465A KR100295395B1 (ko) 1998-05-22 1998-05-22 인플루엔자바이러스a형감기의치료및예방기능을갖는항바이러스성약제및기능성식품

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR100295395B1 (ko)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2497482A4 (en) * 2009-11-05 2013-05-01 Korea Inst Oriental Medicine COMPOSITION FOR PROPHYLAXIS AND TREATMENT OF INFLUENZA AVIRUSED INDUCED DISEASES
US9186385B2 (en) 2009-03-03 2015-11-17 Viva Pharmaceutical Inc. Plant extract compositions for prevention and treatment of influenza
KR20240045546A (ko) 2022-09-30 2024-04-08 (주)예스킨 항 인플루엔자 바이러스제

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9186385B2 (en) 2009-03-03 2015-11-17 Viva Pharmaceutical Inc. Plant extract compositions for prevention and treatment of influenza
EP2497482A4 (en) * 2009-11-05 2013-05-01 Korea Inst Oriental Medicine COMPOSITION FOR PROPHYLAXIS AND TREATMENT OF INFLUENZA AVIRUSED INDUCED DISEASES
US8591962B2 (en) 2009-11-05 2013-11-26 Korea Institute Of Oriental Medicine Composition for preventing and treating influenza-virus-induced diseases
KR20240045546A (ko) 2022-09-30 2024-04-08 (주)예스킨 항 인플루엔자 바이러스제

Also Published As

Publication number Publication date
KR19990085819A (ko) 1999-12-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7471393B2 (ja) 呼吸器疾患の予防、改善又は効果がある茶組成物及びこれを含む薬学組成物
US6455070B1 (en) Composition for treating symptoms of influenza
Ashraf et al. Phytochemical composition and potent biological activities of ficus benjamina VAR. comosa leaves extract
JP5704484B2 (ja) アシュワガンダ葉水抽出物を有効成分として含む組成物及びその製造方法
CN113101310B (zh) 预防或/和治疗冠状病毒感染的药物及其制备方法
US20030054047A1 (en) Pharmaceutical composition for the treatment of viral infection
KR100295389B1 (ko) 인플루엔자바이러스a형감기의치료및예방기능을갖는항바이러스성약제및기능성식품
CN103393908B (zh) 治疗系统性红斑狼疮及风湿病的制品及其制备方法
KR100295395B1 (ko) 인플루엔자바이러스a형감기의치료및예방기능을갖는항바이러스성약제및기능성식품
CN108186866B (zh) 金贝口服液在抗病毒中的应用
CN105726742B (zh) 一种抗鸡新城疫病毒病和禽流感的中兽药及其制备方法
Jabareen et al. Effect of extracts of passiflora edulis leaves on herpes viruses infection
CN105412898A (zh) 一种中药组合物在制备治疗急性肾炎的药物中的应用
CN105535927A (zh) 一种用于治疗流感、上呼吸道感染、病毒性肺炎的药物
CN104906206A (zh) 一种抗鸭和兔病毒性肝损伤的中药复方
KR20120017811A (ko) 애엽 추출물 및 연근 추출물을 유효성분으로 함유하는 헬리코박터 파일로리에 대한 항균 조성물
JP2011079817A (ja) 植物抽出物からなるウイルス感染症の予防及び／又は治療用組成物、それらを有効成分とするウイルス感染症の予防及び／又は治療剤、並びにウイルスの細胞への吸着阻害剤
Singh et al. Herbal-based resources against exanthematous viral infections and other viral diseases
KR20150067826A (ko) 관절염에 효능이 있는 부자사심 조성물
JP7271818B2 (ja) 抗ウイルス作用を有するリョクトウ外皮抽出物及びその抽出方法
KR20000022593A (ko) 감기의 치료 및 예방 기능을 갖는 항바이러스성 약제 및 기능성 식품
TWI304342B (en) An herbal extract having anti- enterovirus activity and preparation of same
CN1883530B (zh) 具抗病毒、抗炎和/或抗菌作用的六棱菊属提取物及其用途
Goswami et al. Andrographis paniculata (Kalmegh): A critical study on medicinal effects
GR1010387B (el) Συνδυασμος φυτικων εκχυλισματων με αντι-ιικη δραση με εμφαση στους ιους της γριπης η1ν1 και η3ν2

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20130409

Year of fee payment: 13

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20140205

Year of fee payment: 14

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20150312

Year of fee payment: 15

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20160405

Year of fee payment: 16

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20160428

Year of fee payment: 17

LAPS Lapse due to unpaid annual fee