CN102573870B - 预防和治疗流感病毒感染的组合物和含姜黄提取物的用于抑制神经氨酸苷酶活性的组合物 - Google Patents

预防和治疗流感病毒感染的组合物和含姜黄提取物的用于抑制神经氨酸苷酶活性的组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN102573870B
CN102573870B CN201080030907.2A CN201080030907A CN102573870B CN 102573870 B CN102573870 B CN 102573870B CN 201080030907 A CN201080030907 A CN 201080030907A CN 102573870 B CN102573870 B CN 102573870B
Authority
CN
China
Prior art keywords
influenza
rhizoma curcumae
virus
purposes
curcumae longae
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201080030907.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN102573870A (zh
Inventor
李雨松
鲁文喆
朴修珍
柳永培
张终仙
郑炯在
权亨俊
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology KRIBB
Original Assignee
Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology KRIBB
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology KRIBB filed Critical Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology KRIBB
Priority claimed from PCT/KR2010/004455 external-priority patent/WO2011005043A2/ko
Publication of CN102573870A publication Critical patent/CN102573870A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102573870B publication Critical patent/CN102573870B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/12—Ketones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L27/00—Spices; Flavouring agents or condiments; Artificial sweetening agents; Table salts; Dietetic salt substitutes; Preparation or treatment thereof
    • A23L27/10—Natural spices, flavouring agents or condiments; Extracts thereof
    • A23L27/14—Dried spices
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/164—Amides, e.g. hydroxamic acids of a carboxylic acid with an aminoalcohol, e.g. ceramides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/88—Liliopsida (monocotyledons)
    • A61K36/906—Zingiberaceae (Ginger family)
    • A61K36/9066—Curcuma, e.g. common turmeric, East Indian arrowroot or mango ginger
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material

Abstract

本文公开的是一种组合物，所述组合物包含用于预防和治疗流感病毒感染并用于抑制神经氨酸苷酶活性的姜黄提取物。姜黄提取物、其馏分和自其分离的类姜黄色素基的化合物可抑制神经氨酸苷酶活性并对于流感病毒具有抗病毒的和细胞变性抑制效果，并可用于预防和治疗流感病毒感染。

Description

预防和治疗流感病毒感染的组合物和含姜黄提取物的用于抑制神经氨酸苷酶活性的组合物
背景
发明领域
本发明涉及包含姜黄提取物的用于预防和治疗流感病毒感染并抑制神经氨酸苷酶活性的组合物。
相关技术描述
流感病毒是引起急性呼吸疾病的最具传染性的病毒之一，且在严重的情况下，在全世界引起群体传染或广泛流行，特别是在儿童、老年人、心肺疾病患者等中产生严重的呼吸症状(Hien，T.T.等.N.Eng.J.Med.，350，1179，2004)。流感病毒是正粘液病毒(Orthomyxovirus)的一种，并有三种类型，为A、B和C。其中特别是A和B类型通常在人群中传播。流感病毒有八个RNA基因节段，和两个糖蛋白、血凝素(HA)和神经氨酸苷酶(NA)是在流感病毒表面发现的表面抗原类型。血凝素是具有头和柄的三聚体，并且该三聚体的头包括大部分的抗原变体。血凝素结合至宿主细胞表面上的末端的唾液酸残基以使得病毒能附着并顺序进入宿主细胞(Chandrasekaran，A.等.Nature biotechnology 26，107，2008)。神经氨酸苷酶是具有头和柄的蘑菇状的四聚体，并且该四聚体的头在其顶部表面具有活性位点。神经氨酸苷酶裂解细胞表面的寡糖和末端神经氨酸残基之间的α-酮苷键以协助在感染的细胞中复制和增殖的病毒出到宿主细胞外并进入呼吸粘膜细胞(a.Mark，V.I.Nature review 6，967，2007.b.Huberman，K.等.Virology 214，294，1995)。
每年相同亚型的病毒表面抗原产生抗原变体以产生新的抗原变体。特别是，在流感病毒中，禽流感病毒，其仍为经历抗原转变以感染不同种类的乌的威胁，所述乌包括鸡、火鸡、鸭、野生乌等。禽流感病毒扩散如此的快以致一旦一只鸡被感染，80％或更多的鸡则被杀死。在世界上对养禽业形成最大的损害和威胁的禽流感病毒引起病毒疾病，且该蔓延的效果不仅限制于养禽业。已报道禽流感病毒可感染人类，这引起疾病在人类之间传播(Gubareva，L.V.等.Lancet.355，2000)。在过去的多年中，流感病毒已被得知引起许多疾病。特别地，在二十世纪已经有三次流感大流行。西班牙流感大流行(H1N1)杀死约三千万，亚洲流感(H2N2)估计杀死一百万，香港流感(H3N2)估计也杀死一百万。最近，在2003至2008，385被感染，243死亡。最近，世界卫生组织(WHO)官方宣布新的猪源的流感2009年4月突发，为大流行。至2009年6月29日，在超过115个国家有70,893人(包括311人死亡)被感染，并且为志愿者工作访问墨西哥的一韩国尼姑于2009年5月2日被确认为第一例流感患者。至2009年8月16日，在韩国报道累计数量2,089的流感患者(包括2名死亡)。
为了预防和治疗流感病毒感染，可考虑抑制上皮细胞的吸收，侵入至细胞，基因的转录或复制，蛋白的合成，或自细胞的释放，每种都已经是抗病毒研究的焦点。
为了治疗流感病毒引起的疾病，四种物质，Amatadine，Rimatadine，扎那米韦(Zanamivir)，和奥塞米韦(Oseltamivir)已被食品药品管理局(FDA)批准使用。作为较老的M2抑制剂，Amatadine和Rimatadine通过阻断对于病毒的增殖是重要的膜蛋白，特别是M2蛋白，的离子通道，以抑制病毒的脱壳，具有抗病毒效果，但仅是对抗流感A病毒有效。同样，据报道作为超过40年的使用的结果，该病毒变得对这些物质更加耐受和抵抗的，并且严重的副作用发生于神经系统和胃(Bantia，S.等.Antiviral Research69，39，2006)。从1999年起，作为治疗病毒感染的新药，认为是神经氨酸苷酶抑制剂的扎那米韦和奥塞米韦被使用，它们在病毒增殖中发挥重要作用，具有低患病率的耐受性，并且对抗流感A和B病毒都有活性(Zhang，J.等.Bioorg.Med.Chem.Lett.16，3009，2006)。
然而，扎那米韦具有高抗病毒效果的优点但在低生物利用度且从肾脏快速释放方面是不利的，且奥塞米韦引起严重的呕吐(Ryan，D.M.等.Antimicrob.Agents Chemother.，39，2583，1995)。
如上述，现存的抗病毒物质具有严重的副作用并且在它们的应用中需要相当的谨慎。同样，在疫苗病毒与循环病毒不配对时疫苗的开发效果是低的。因此对于新的流感抗病毒物质具有优良的感染抑制作用和稳定性有增加的需求。
为了满足该需要，本发明人在发现姜黄提取物、它的馏分或从其中分离的类姜黄色素基的化合物具有神经氨酸苷酶抑制活性、和抗病毒和细胞变性抑制效果之后发明了本发明。
公开
本发明的一个目的是提供用于预防和治疗流感病毒感染的药物组合物和使用该药物组合物的治疗方法。
本发明的另一目的是提供用于预防和减少流感病毒感染的食物组合物。
本发明的还另一目的是提供一种用于预防和减少流感病毒感染的准标准药物组合物。
本发明的还另一目的是提供用于抑制存在于多种生物种类中的神经氨酸苷酶活性以治疗由此引起的疾病的神经氨酸苷酶抑制剂组合物，和使用该神经氨酸苷酶抑制剂组合物的抑制方法。
发明效果
本发明的包含姜黄提取物、馏分和从其中分离的类姜黄色素基的化合物的组合物可抑制神经氨酸苷酶活性并具有抗病毒和细胞变性抑制效果，因此可用于预防和治疗流感病毒感染。
最佳方式
为实现该目的，本发明一个方面，提供了包含姜黄提取物或其馏分作为预防和治疗流感病毒感染的活性成分的组合物。
本发明的另一方面，提供了包含通过如下化学式1代表的化合物的组合物，所述化合物作为活性成分以预防和治疗流感病毒感染：
[化学式1]
其中R独立地为氢、羟基或C1-C10烷氧基。
本发明的另一方面，提供了姜黄提取物、姜黄馏分或以下化学式1代表的化合物在预防和治疗流感病毒感染方面的用途，或姜黄提取物、姜黄馏分或以下化学式1代表的化合物在制备用于预防和治疗流感病毒感染的药物方面的用途。
本发明的另一方面，提供了用于治疗流感病毒感染的方法，所述方法包括对流感病毒感染的个体或将被流感病毒感染的个体给予包含姜黄提取物、姜黄馏分或以下化学式1代表的化合物作为预防和治疗流感病毒感染的活性成分的组合物：
[化学式1]
其中R独立地为氢、羟基或C1-C10烷氧基。
本发明的另一方面，提供了包含姜黄提取物、姜黄馏分或以下化学式1代表的化合物作为抑制神经氨酸苷酶活性的活性成分的组合物：
[化学式1]
其中R独立地为氢、羟基或C1-C10烷氧基。
本发明的另一方面，提供了用于抑制神经氨酸苷酶活性的方法，所述方法包括将该组合物与包含神经氨酸苷酶的样品接触。
以下，本发明更详细地被描述。
本发明提供包含姜黄提取物或其馏分作为预防和治疗流感病毒感染的活性成分的组合物。
本发明的组合物可抑制神经氨酸苷酶的活性，该神经氨酸苷酶发现于流感病毒表面并在复制该病毒中发挥重要作用，本发明的组合物可防止流感病毒扩散至呼吸器官的其他细胞，因此减少、预防和治疗流感病毒感染。
本文中描述的术语“预防”指通过给予组合物抑制流感病毒感染或延缓流感病毒感染的发病。
本文中描述的术语“治疗”指通过给予组合物改进或有利地改变流感病毒感染的症状的所有活动。
流感病毒是指可对人类或动物个体引起疾病的流感病毒株，可为流感A病毒，流感B病毒或流感C病毒，它们以核蛋白和基质蛋白中的差异来鉴别。流感A病毒、流感B病毒和流感C病毒可包括它们的变体。流感病毒亚型主要基于血凝素(HA)和神经氨酸苷酶(NA)的特征来分类，迄今为止已报道6类HA(H1-H6)和9类NA(N1-N9)。优选地，流感病毒可为H1N1流感病毒或H9N2流感病毒，更优选rvH1N1流感A病毒，H1N1流感病毒(A/PR/8/34)或H9N2流感病毒(A/鸡/韩国/MS96/96)。流感病毒可引起流感、感冒、咽喉炎、支气管炎、肺炎，特别是禽流感(bird flu)、猪流感或羊流感。
一般来说，姜黄为姜黄林奈种(Curcuma longa Linne)的块状根本身或在去除周皮后蒸的和干燥的姜黄林奈种的块状根(韩国药典第九版)，且“块状根”所称的存储根为增厚的根。
本发明中，姜黄指姜黄样品的植物的块状根，所述姜黄样品包括，但不限于温郁金(Curcuma wenyujin)(Y.H.Chen et C.Ling)，姜黄林奈种(Curcuma longa Linne)，郁金(Curcuma longa Salisb.)，莪术(Curcuma zedoaria)，广西莪术(Curcuma kwansiensis)(S.G.Lee et C.F.Liang)，蓝心姜(Curcuma aeruginosa)，蓬莪术(Curcuma phaeocaulisVal.)(Zingiberaceae)和姜黄(Curcuma domestica)。
例如，姜黄林奈种(Curcuma longa Linne)具有为姜黄根状茎(Curcuma longa Rhizoma)的根状茎(韩国药典第九版)，并且“根状茎”所说的主根是指在地下像根一样蔓延的植物的茎。
姜黄样品的植株具有“块状根”和“根状茎”。
在姜黄样品的植株中，对于区域的姜黄林奈种乙醇提取物中姜黄衍生物的含量的测量结果显示在块状根中检测到17.0g/kg的姜黄、5.3g/kg的去甲氧基姜黄和3.4g/kg的双去甲氧基姜黄，这些化合物在茎中没检测到，而在根状茎中检测到2.8g/kg姜黄、0.4g/kg的去甲氧基姜黄和6.8g/kg的双去甲氧基姜黄(实施例4)。
本发明中，姜黄提取物可从天然植物，杂种或变种，的不同器官获得，优选块状根或植物组织培养物。
本发明中，姜黄可购自市场，可在自然状态收集，或可得自培养的产物。
本发明的另一方面，提供了用于制备具有对抗神经氨酸苷酶的活性的组合物的方法，所述方法包括用水、C1-C4醇或其混合物的溶剂提取姜黄以得到姜黄提取物。
并且，所述方法还可包含用己烷、乙酸乙酯或水分馏所述姜黄提取物。
并且，所述方法可包含分离和纯化所述姜黄馏分。
姜黄提取物的获得可使用本领域常规提取技术，包括，但不限于，例如超声提取、浸渍、热提取、冷提取、过滤、回流提取等。所述提取可在室温进行或通过在例如消除活性成分的破坏或使其最小化的条件下加热进行。同样，该提取可使用本领域已知的多种溶剂，包括，但不限于，例如，水、C1-C4醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿或其混合物。优选，姜黄提取物可通过以下获得：洗涤姜黄根来去除杂质、干燥、磨细和用水、C1-C4醇或其混合物的溶剂，更优选C1-C4醇，最优选甲醇或乙醇，提取。在这方面，提取剂的含量，即，使用的溶剂的含量可优选地为多至姜黄干重的两倍至二十倍。例如，该醇提取物可通过以下获得：将姜黄干燥、切细、置于提取容器中、加入低级C1-C4醇或其混合物的溶剂、优选为甲醇或乙醇，置于室温预定的时间，以及过滤。该情况下，所述预定的时间优选为一周，并且浓缩或冻干可被进一步执行。
本发明的提取物可包括以下种类的至少一种：通过提取得到的提取物、提取物的稀释液或浓缩液、通过干燥提取物得到的干燥的提取物和通过粗纯化或纯化提取物得到的产物。
本发明的姜黄馏分可通过分馏所述姜黄提取物获得。为得到该姜黄馏分，可使用本领域已知的多种溶剂。例如，该溶剂可包括戊烷、己烷、2，2，4-三甲基戊烷、地卡因(dicainum)、环己烷、二硫化碳、四氯化碳、氯丁烷、二异丙醚、氯仿、丙酮、硝基丙烷、丁酮、二氯乙烷、吡啶、丙醇、甲醇、乙酸乙酯和丁醇。更具体地，该姜黄馏分可通过将该姜黄提取物悬浮于水获得，然后用己烷和乙酸乙酯分馏以得到己烷馏分、乙酸乙酯馏分和水馏分。
并且，本发明提供包含以下化学式1代表的化合物作为预防和治疗流感病毒感染的活性成分的组合物。
[化学式1]
其中R独立地为氢、羟基或C1-C10烷氧基。
此情况下，化学式1代表的化合物可从姜黄提取物或姜黄馏分分离。更具体地讲，化学式1代表的化合物可为以下化学式2至4的任一种代表的化合物。
[化学式2]
[化学式3]
[化学式4]
并且，本发明提供用于从姜黄分离化学式1代表的化合物的方法，所述方法包括：a)用水、C1-C4醇或其混合物的溶剂提取姜黄，得到姜黄提取物，b)从该提取物获得己烷馏分，乙酸乙酯馏分或水馏分，和c)分离并纯化该馏分。
更具体地，本发明的化学式1代表的化合物可为存在于姜黄中的代表性的活性成分，并且用于分离该化合物的方法可在以下进行。
首先，姜黄可用水、C1-C4醇或其混合物的溶剂提取以得到姜黄提取物(步骤1)。所述姜黄不受特定的限制，可购自市场或来自培养的产物。姜黄可在洗涤和干燥后使用。所述醇可为低级醇例如甲醇、乙醇、丙醇或丁醇，优选甲醇或乙醇。
步骤1中，所述姜黄提取物可通过以下获得：在阴凉处干燥姜黄，切细，磨细以改善提取效率，置于提取容器中，加入合适量的醇，置于室温5天并通过滤纸等过滤。该工艺科被重复几次，其后浓缩或冻干可被进一步执行。
随后，步骤1中得到的姜黄提取物可悬浮于水中，并随后用己烷和乙酸乙酯分馏以得到姜黄馏分(步骤2)。该情况下，典型的分馏提取可被使用，优选使用分液漏斗。所述姜黄馏分可为己烷馏分、乙酸乙酯馏分或水馏分。
接下来，步骤2中得到的姜黄馏分可通过硅胶层析分离，然后通过纯化，以得到化学式1代表的化合物(步骤3)。当硅胶层析被用于分离时，正己烷、正己烷/乙酸乙酯、氯仿/丙酮和甲醇的溶剂可优选用作流动相。并且，还可使用正己烷/丙酮的混合溶剂。这种情况下，正己烷和乙酸乙酯的体积比可优选为50∶1至1∶50，氯仿和丙酮的体积比可优选为150∶1至1∶4。该层析可进行1至数次直到获得单一化合物，当需要时，浓缩和再结晶可被执行。
并且，本发明的化学式1代表的化合物可以药学可接受的盐的形式使用，优选通过药学可接受的游离酸生成的酸加成盐。该酸加成盐可得自无机酸，例如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、亚硝酸、亚磷酸等，或非毒性的有机酸，例如脂族单羧酸盐、脂族二羧酸盐、苯基取代的烷酸盐、羟基烷酸盐、羟基烷二酸盐、芳族酸、脂族和芳族磺酸等。药学非毒性的盐可包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸钠，亚硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐氯化物、溴化物、碘化物、氟化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐(caprylate)、辛酸盐、丙烯酸酯、甲酸盐、异丁酸盐、癸酸盐(caprate)、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1，4-二酸盐、己烷-1，6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、氯代苯磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯基乙酸盐、苯基丙酸盐、苯基丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、β-羟基丁酸盐、乙醇酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、甲基磺酸盐、丙基磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐或扁桃酸盐。
本发明的酸加成盐可通过常规方法生产，例如，通过将化学式1代表的化合物溶解于过量的酸性水溶液，并使用与水混溶的有机溶剂沉淀所述盐进行，所述有机溶剂例如，甲醇，乙醇，丙酮或乙腈。
并且，本发明的化学式1代表的化合物可以通过使用碱的药学可接受的金属盐的形式使用。例如，碱金属或碱土金属盐可通过以下方式得到：将化学式1代表的化合物溶解于过量的碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物溶液，滤除不溶解的化合物盐，蒸发并干燥该滤液。在这种情况下，作为金属盐，钠盐、钾盐或钙盐在制药方面是合适的。并且，对应的银盐可通过将碱金属或碱土金属盐与合适的银盐，例如硝酸银反应来获得。
同时，本发明的用于为预防和治疗流感病毒感染的组合物可为药物组合物。
当本发明的组合物为药物组合物时，该组合物可包括药学上可接受的载体。包括药学上可接受的载体的组合物可被不同地配制为用于口腔或肠胃外给予。对于制备，稀释剂或赋形剂，如填充剂，膨胀剂，粘合剂，润湿剂，脱变剂(desintegrant)，表面活性剂等通常可被添加。用于口腔给予的固形制剂可以片、丸、粉末、颗粒、胶囊等使用，并可通过将至少一种化合物与至少一种赋形剂混合获得，所述赋形剂例如，淀粉、碳酸钙，蔗糖或乳糖，明胶等。除了基本的赋形剂，润滑剂，如硬脂酸镁或滑石粉都可以使用。用于经口给予的液体制剂可以悬液、溶液、乳液、糖浆等使用，并且可包括普通的稀释剂例如水或液体石蜡、以及各种赋形剂，例如，润湿剂，甜味剂，调味剂，防腐剂等。用于胃肠外给予的制剂可以灭菌的水溶液，非水溶剂，悬液，乳液，冻干的制剂，栓剂等使用。作为非水性溶剂或悬浮剂，可使用丙烯、丙二醇、植物油例如橄榄油、或可注射的酯例如油酸乙酯。作为栓剂基础，witepsol，聚乙二醇(macrogol)，61、可可油，或甘油明胶(glycerolgelatin)可被使用。
药物组合物可被配制为选自以下的至少一种：片、丸、粉、颗粒、胶囊、悬液、液体、乳液、糖浆、灭菌的水溶液、非水溶剂、冻干的制品和栓剂。
本发明的组合物可以药学有效剂量给予。本文描述的术语“药学有效剂量”指足以以合理的收益/危险比治疗疾病的量，所述合理的收益/危险比在可应用至药物治疗的范围内，且有效剂量水平可基于以下测定：类型、疾病严重度、年龄和个体的性别、感染的病毒的类型、药物效力、对药物的敏感度、给予的时间和途径、排泄比率、治疗时间、药物并用和在医药领域公知的因素。
然而，对于优选的效果，根据本发明的姜黄提取物或其馏分的剂量可为每天0.0001至100mg/kg，优选每天0.001至100mg/kg，且化学式1代表的化合物的剂量可为每天0.0001至100mg/kg，优选为每天0.001至10mg/kg。本发明的组合物可单独或与药物组合给予，并可顺序地或与常规药物同时给予。并且，该组合物可以单倍或多倍剂量给予。考虑到上述所有因素，重要的是给予例如以下剂量：以在最小量获得无副作用的最大效果，且该剂量可容易地被本领域普通技术人员测定。
本发明的组合物可单独使用或与以下组合：手术，内分泌疗法，药物治疗和使用生物反应调节剂的方法，以预防和治疗流感病毒感染。
并且，本发明提供了姜黄提取物，姜黄馏分，或以下的化学式1代表的化合物用于预防和治疗流感病毒感染的用途，或姜黄提取物，姜黄馏分，或以下化学式1代表的化合物用于制备预防和治疗流感病毒感染的药物的用途：
[化学式1]
并且，本发明提供了用于治疗流感病毒感染引起的疾病的方法，所述方法包括：对流感病毒感染的或将被流感病毒感染的个体给予用于预防和治疗流感病毒感染的药学有效量的组合物。所述流感病毒可为流感A病毒、流感B病毒或流感C病毒，优选H1N1流感病毒或H9N2流感病毒。更优选地，所述流感病毒可为rvH1N1流感A病毒、H1N1流感病毒(A/PR/8/34)或H9N2流感病毒(A/鸡/韩国/MS96/96)。通过流感病毒感染引起的疾病可为流感、感冒、咽喉炎，支气管炎，肺炎，特别是禽流感，猪流感或羊流感。
此处描述的术语“个人”指所有的动物，包括被流感病毒感染的或将被感染的人，且该疾病可通过对该个体给予包含本发明的提取物、馏分或化合物的组合物来有效预防和治疗。例如，本发明的组合物可治疗被人流感病毒的多种流感病毒亚型或变体感染的人。
并且，本发明的组合物可以治疗禽流感病毒的多种流感病毒亚型或变种感染的人。并且，本发明的组合物可治疗被禽流感病毒的多种流感病毒亚型或变体感染的鸡或猪。
本发明的组合物可与用于流感病毒感染引起的疾病的常规药物组合给予。例如，所述常规的药物可包括，但不限于，Amatadine，Rimatadine，扎那米韦和奥塞米韦。
本发明的组合物可经任何常规途径给予，只要该组合物可被递送至靶组织。本发明的组合物可经腹腔内，静脉，肌内，皮下，皮内，口腔，鼻内，肺内(intralung)或直肠途径的给予，这取决于给予的意图，然而，本发明不限于该方面。并且，该组合物可使用任何能将活性成分递送至靶细胞的设备给予。
此外，本发明提供一种食物组合物，所述食物组合物包含姜黄提取物，姜黄馏分，或从其中分离的以下化学式1代表的化合物作为预防和减少流感病毒感染的活性成分：
[化学式1]
其中R独立地为氢、羟基或C1-C10烷氧基。
此情况下，化学式1代表的化合物可从姜黄提取物或姜黄馏分分离。更具体地讲，化学式1代表的化合物可为以下化学式2至4的任一种代表的化合物。
[化学式2]
[化学式3]
[化学式4]
换句话说，本发明的姜黄提取物，姜黄馏分，或由其分离的化学式1代表的化合物，可被添加至食物组合物以预防或减少流感病毒感染。
根据本发明，所述食物组合物可为功能性食物，且该“功能性食物”是以下食物：具有身体调节功能，并涉及在特定的靶标工作并表达的使用物理的、生化的和生物技术的方法的价值增加的食物。该功能性食物的成分可被设计并加工以充分发挥身体控制功能，该功能涉及生物防御，生物节律控制，预防疾病和对身体的恢复。
当本发明的姜黄提取物，姜黄馏分或从其分离的化学式1代表的化合物被用作食物添加剂时，该提取物、馏分或化合物可以其本身使用或可与食物或食物成分一起使用，并且可通过常规方法适当地使用。活性成分的混合比例可适当根据使用的目的，例如，疾病预防或治疗性治疗被合适地测定。一般来说，当制造食物或饮料时，本发明的姜黄提取物，姜黄馏分，或自其分离的化学式1代表的化合物可以0.01至10w％的量加入，优选为0.05至1w％，基于原料组合物计算。在长期用于保健，卫生或饮食长期的情况下，该量可小于上述范围。
所述食物不限于具体的种类。例如，包含以上物质的食物可为肉，香肠，面包，巧克力，糖果，点心，饼干，比萨，拉面，面条，口香糖，包括冰淇淋的乳制品，各种汤类，饮料，茶，保健饮料，酒精饮料，维生素复合物等，并可包括所有传统的保健食物。
本发明的保健饮料组合物可能还含有调味剂或天然的糖类，像普通的饮料。该天然的糖类可为葡萄糖和果糖等单糖，二糖如麦芽糖和蔗糖，多糖如糊精和环糊精，或糖醇如木糖醇，山梨糖醇和赤藓糖醇。甜味剂可为天然的甜味剂如索马汀和甜菊提取物，或合成甜味剂如糖精和阿斯帕坦。天然糖类的含量一般可为约0.01至0.04克，优选约0.02至0.03克，每100ml本发明的组合物。
除了上述情况，本发明的组合物可含有多种添加剂，例如，营养素，维生素，电解质，调味剂，着色剂，果胶酸及其盐，海藻酸及其盐，有机酸，保护性胶体增稠剂，pH调节剂，稳定剂，防腐剂，甘油，醇，碳酸饮料的碳化剂等。该添加剂的含量并不是特别重要，但一般可在每100份重量的本发明的组合物的0.01至0.1份重量范围内选择。这些添加剂可以单独或组合使用。
此外，本发明提供一种准药物组合物，所述准药物组合物包含姜黄提取物，姜黄馏分，或自其分离的以下化学式1代表的化合物作为预防和减少流感病毒感染的活性成分：
[化学式1]
其中R独立地为氢、羟基或C1-C10烷氧基。
此情况下，化学式1代表的化合物可从姜黄提取物或姜黄馏分分离。更具体地讲，化学式1代表的化合物可为以下化学式2至4的任一种代表的化合物。
[化学式2]
[化学式3]
[化学式4]
换句话说，本发明的组合物可被加至准药物组合物以预防或减少流感病毒感染。当本发明的姜黄提取物，姜黄馏分，自其分离的化学式1代表的化合物被用作准药物添加剂时，该姜黄提取物，馏分，或化合物可以其自身使用或可与准药物或准药物成分一起使用，并可通过常规的方法被适当使用。有效成分的混合比例可被适当确定，这取决于使用的目的，例如，疾病预防，保健，或治疗性治疗。
优选地，准药物组合物可用于制造天然消毒剂，饲料添加剂，消毒剂清洁剂，沐浴泡沫，漱口水，湿纸巾，清洁剂肥皂，洗手液，加湿器填料，口罩，软膏，过滤器填料等。
并且，本发明提供了一种组合物，所述组合物包含姜黄提取物，姜黄馏分，或以下化学式1代表的化合物作为抑制神经氨酸苷酶活性的活性成分：
[化学式1]
其中R独立地为氢、羟基或C1-C10烷氧基。
在这种情况下，神经氨酸可得自流感A病毒，流感B病毒，流感C病毒，产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)或人，优选为H1N1流感病毒或H9N2流感病毒。更优选地，所述流感病毒可得自rvH1N1流感A病毒，H1N1流感病毒(A/PR/8/34)，或H9N2流感病毒(A/鸡/韩国/MS96/96)。
神经氨酸苷酶，也被称为唾液酸酶或酰基神经酰胺(acylneuraminyl)水解酶，为存在于动物和一些微生物中的酶，且许多含有神经氨酸苷酶的微生物可对人类和动物引发疾病，所述动物包括家禽，马，猪，海豹等。因此，本发明的用于抑制神经氨酸苷酶活性的组合物可用于预防和治疗许多与神经氨酸苷酶活性相关的疾病。
并且，本发明提供了一种用于抑制神经氨酸苷酶活性的方法，所述方法包括将所述组合物与包含神经氨酸苷酶的样品接触。这种情况下，该接触可通过常规方法进行，并且包含神经氨酸苷酶的样品可为活的生物体，组织或细胞培养物，或生物样品，如血，血清，尿液，脑脊液，泪液，痰，唾液，组织等，并可包括产生神经氨酸苷酶的生物，一般病原微生物如病毒。这些样品可被置于包含水或有机溶剂/水混合物的培养基中。
在本发明的组合物被给予之后，神经氨酸苷酶活性可通过任何方法观察，所述方法包括直接或间接诊断神经氨酸苷酶活性。并且，可使用定量的、定性的或半定量的神经氨酸苷酶活性诊断，和观察活有机体的生理学特征。
发明详述
在下文中，本发明将通过实施例和试验实施例详述。然而，在此主张的描述仅是仅用于说明的目的的优选实施例，并非想要限制本发明的范围，因此应当理解所述实施例被用于向本领域普通技术人员提供进一步明确解释。
实施例1：姜黄提取物的制备
该实施例中使用的姜黄一般在草药商店或市场可以得到。购买经过蒸汽和干燥的姜黄林奈种的根，为了有效获得本发明的提取物，碾碎成粉末形式。将1.6千克姜黄溶解在7.5升100％乙醇(EtOH)中，室温放置5天，然后通过滤纸过滤，获得170克姜黄乙醇提取物。
实施例2：自姜黄提取物分离姜黄馏分和类姜黄色素基化合物和纯化
将实施例1中获得的170克姜黄乙醇提取物悬浮在1升水中。放置一个分液漏斗，依次用正己烷和乙酸乙酯分级提取该悬液，产出23克正己烷可溶提取物，85克乙酸乙酯可溶提取物和34克水溶提取物。
获得的85克乙酸乙酯可溶提取物，通过硅胶柱层析(500克硅胶，筛孔70～230)，使用氯仿、甲醇溶剂和它们的混合物的溶剂(80∶1～1∶1)作为流动相，被分离为15个馏分Fr.-1～Fr.-15。其中，16克第六馏分Fr.-6通过硅胶柱层析(30g，筛孔230～400)分离为5个馏分Fr.-6-1～Fr.-6-5，该层析使用正己烷和乙酸乙酯混合溶剂(20∶1～1∶1(v/v))作为流动相。
使用氯仿、甲醇和它们的混合物(80∶1～4∶1)的溶剂作为流动相，对Fr.-6-2和Fr.-6-3馏分(11克)进行硅胶柱层析后，获得的馏分通过制备的TLC使用正己烷和乙酸乙酯的混合溶剂(4∶1(v/v))作为流动相进行显层(develop)，产出8克纯化合物1。同样，14克第八馏分Fr.-8通过硅胶柱层析(30g，筛孔230～400)，使用正己烷和乙酸乙酯混合溶剂(20∶1～1∶1(v/v))和氯仿和甲醇混合溶剂(80∶1～20∶1(v/v))作为流动相重复分离，产出0.4克化合物2和0.2克化合物3。
实施例3：类姜黄色素类化合物的结构分析
实施例2中获得的类姜黄色素基化合物的分子量和分子式通过VG高分辨率GC/MS分光计(Election Ionization MS，Autospec-Ultima)测定。同样，该分子结构使用1H-NMR、13C-NMR和2D NMR光谱材料通过核磁共振分析(Bruker AM500)进行测定。
基于以上结果和发表的文章的那些，化学式2～4代表的姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素被鉴定(Food Chem.265-272，2009；J.Nat.Prod.1227-1231，2002；J.Nat.Prod.1531-1534，1998；J.Agric.Food Chem.3668-3672，2002)。该分析结果在下面详细显示。
化合物1：姜黄素
[化学式2]
1)性质：淡橙色粉末(m.p.183℃)
2)分子量：368.3
3)分子式：C21H20O6
4)1H-NMR(丙酮-d6，500MHz)δ7.62(2H，d，J＝15.80Hz，H-4，H-4′)，7.35(2H，d，J＝1.91Hz，H-6，H-6′)，6.83(2H，H-3，H-5)，7.20(2H，dd，J＝8.3，1.9Hz，H-10，H-10′)，6.90(2H，d，J＝8.15Hz，H-9，H-6′)，5.99(1H，s，H-1)，13C-NMR(丙酮-d6，125MHz)δ56.72，102.01，111.95，116.64，122.72，124.25，128.58，141.81，149.20，150.44，184.94.
化合物2：去甲氧基姜黄素
[化学式3]
1)性质：橙色粉末(m.p.220℃)
2)分子量：338
3)分子式：C20H18O5
4)1H-NMR(丙酮-d6，500MHz)δ7.62-7.55(4H)，7.34(1H)，7.18(1H)，6.89(3H)，6.70(2H)，5.97(1H)，13C-NMR(丙酮-d6，125MHz)δ56.38，101.79，111.53，116.30，116.89，122.12，122.35，123.98，127.77，128.24，131.06，141.13，141.48，148.87，150.13，160.64，184，66.
化合物3：双去甲氧基姜黄素
[化学式4]
1)性质：橙色粉末(m.p.224℃)
2)分子量：308
3)分子式：C19H16O4
4)1H-NMR(丙酮-d6，500MHz)δ7.62-7.56(6H)，6.91-6.87(4H)，6.68-6.65(2H)，5.98(1H)，13C-NMR(丙酮-d6，125MHz)δ101.82，116.87，122.11，127.79，131.06，141.12，160.58，184，62.
实施例4：姜黄醇提取物和馏分的HPLC分析
实施例1和2中获得的姜黄提取物、姜黄馏分和类姜黄色素基化合物通过HPLC色谱分析。该实施例中，使用带泵和可变波长检测器(VWD)的Agilent 1200系列HPLC系统。该情况下，用于最优观察的波长是260nm，和溶剂的流速是1.0ml/min。该样品制备中，注入体积是10μl和样品浓度是10mg/mL。该HPLC分析中，使用ZORBAX-SB-18柱(5μm，150mm×4.6mm)。在水(含0.1％TFA)和乙腈(含0.1％TFA)极性分布条件下，使用20％乙腈(0min)、25％乙腈(10min)、35％乙腈(20min)、50％乙腈(30min)、60％乙腈(40min)、70％乙腈(50min)、和100％乙腈(60min)作为流动相。
该实施例中，为了测定姜黄提取物和姜黄馏分每一种包含的类姜黄色素基化合物含量，在上述同样条件下使用15.625、31.25、62.5、125、250、500和1000μg/ml姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素制备校准曲线。
基于该黑线，姜黄提取物和姜黄馏分中的每种中的姜黄素、去甲氧基姜黄素和二去甲氧基姜黄素的含量测定结果表明，姜黄醇提取物中含有106.0g/kg姜黄素(提取物)、45.4g/kg去甲氧基姜黄素(提取物)和64.6g/kg双去甲氧基姜黄素(提取物)；乙酸乙酯馏分中含114.3g/kg姜黄素(馏分)、45.8g/kg去甲氧基姜黄素(馏分)和66.4g/kg二去甲氧基姜黄素(馏分)；正己烷馏分中含有21.3g/kg姜黄素(馏分)、7.3g/kg去甲氧基姜黄素(馏分)，和31.2g/kg双去甲氧基姜黄素(馏分)。
定量结果在下表1显示。
表1
此外，通过使用该黑线(black line)计算，姜黄林奈种对于区域的的醇提取物中姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素含量的测定结果表明，块状根含有17.0g/kg姜黄素(提取物)、5.3g/kg去甲氧基姜黄素(提取物)和3.4g/kg双去甲氧基姜黄素(提取物)；茎中未检测到姜黄素、去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素；根茎中检测有2.8g/kg姜黄素(提取物)、0.4g/kg去甲氧基姜黄素(提取物)和6.8g/kg双去甲氧基姜黄素(提取物)。
定量结果在下表2中显示。
表2
试验实施例1：姜黄提取物、馏分和类姜黄色素基化合物的神经氨酸苷酶A/Bervig_Mission/1/18(rvH1N1)抑制活性的测定
为了测定本发明实施例1和2中获得的姜黄提取物、姜黄馏分和由其分离的类姜黄色素基化合物的神经氨酸苷酶抑制活性，使用1918年西班牙流感病毒(A/Bervig_Mission/1/18)的重组rvH1N1流感A病毒的神经氨酸苷酶(R&D SYSTEM，4858-NM)。使用来自sigma的2′-(4-三甲基伞形基)-α-D-N-乙酰基-神经氨酸钠盐作为底物。
该姜黄提取物和实施例1和2中它的馏分溶解在甲醇中。作为底物，2′-(4-三甲基伞形基)-α-D-N-乙酰基-神经氨酸钠盐(终浓度200μM)被加入到20μL每种溶液中。该产物与含5mM CaCl2和200mM NaCl的80μL tris缓冲液(pH 7.5)混合，接着与50μL作为酶源的神经氨酸苷酶(最终酶浓度0.05ng/μL)在25℃反应10min。通过使用荧光光谱仪测定365nm处的光吸收和445nm处的光发射测定神经氨酸苷酶抑制活性。
该测定结果在下表3中显示。
表3
如表3显示，根据本发明的姜黄提取物、馏分和类姜黄色素基化合物的每种的神经氨酸苷酶抑制活性的测定结果表明，姜黄乙醇提取物对抗流感病毒神经氨酸苷酶有IC50值3.1μg/mL，姜黄己烷馏分有IC50值262.0μg/mL，姜黄乙酸乙酯馏分有IC50值0.9μg/mL，姜黄水馏分有IC50值61.5μg/mL，姜黄素和去甲氧基姜黄素各有IC50值3.0μM，双去甲氧基姜黄素有IC50值6.0μM。因此，通过以上结果可以确定，根据本发明的姜黄提取物、它的馏分和类姜黄色素基化合物有卓越的神经氨酸苷酶抑制活性。
试验实施例2：分离自姜黄提取物的类姜黄素类化合物、乙酸乙酯馏分和乙醇提取物的流感病毒抑制活性测定
为了测定分离自姜黄提取物的类姜黄色素基化合物、乙酸乙酯馏分和乙醇提取物对流感病毒H1N1(A/PR/8/34)和H9N2(A/Chicken/Korea/MS96/96)的抗病毒活性，在体外用狗的Madin-Darbycanine肾细胞(MDCK，ATCC CCL-34)进行以下测试。
首先，将MDCK细胞以1×105/孔密度放于96孔微板，在含有100单位青霉素、100μg链霉素和10％FBS的培养基(EMEM)中孵育。当MDCK细胞长至单层，用仅含有抗生素的培养基(EMEM)洗两次。H1N1和H9N2株的每一种用100 TCID50稀释，放入EP管。用二甲基亚砜(DMSO)稀释的分离自姜黄提取物的类姜黄色素基化合物、乙酸乙酯馏分和乙醇提取物基于浓度放入每个管，接着在4℃反应1小时。1小时过后该反应溶液接种至3个在每个浓度预先洗脱的MDCK细胞的孔中，接着在35℃孵育1小时(在下文中指测试样品)。在同样条件下，无-感染+未-给予的细胞(MDCK细胞没有被H1N1或H9N2毒株感染且没有给予类姜黄色素基化合物)和已感染+未-给予的细胞(MDCK细胞受H1N1或H9N2毒株感染且没有给予姜黄素)，在35℃孵育1小时，每个设置作为对照和病毒对照。1小时后，去除板中的所有培养基，用PBS洗细胞一次。在这些细胞的每个孔中分配100ml含有抗生素和10μg/mL胰岛素的培养基(EMEM)，接着在35℃孵育48～72小时。该孵育进行48～72小时直到感染的+非-给予的细胞(病毒对照)有细胞病变效果(CPE)。用倒置显微镜每天观察这些细胞状态。这些细胞孵育48～72小时后，10ml细胞计数试剂盒-8(Dojin，Kumanoto，Japan，tetrazolium salt WST-8)被加入到每个孔中，以检测细胞的存活，接着在35℃反应2小时，在450nm处测定吸光度。该情况下，分离自本发明的姜黄提取物的类姜黄色素基化合物、乙酸乙酯馏分和乙醇提取物的抗病毒效果(抑制作用(％))使用下述的数学式1对比未-感染+未-给予的细胞(对照)和感染+未-给予的细胞(病毒对照)来评估。该结果在下表4中显示。，
数学式1
其中OD值为450nm处测定的吸光度。
同时，为了测定分离自姜黄提取物的类姜黄色素基化合物、乙酸乙酯馏分和乙醇提取物对流感病毒H1N1(A/PR/8/34)和H9N2(A/鸡/韩国/MS96/96)的细胞变性抑制效果，MDCK细胞用仅含有抗生素的培养基(EMEM)洗两次，接种流感病毒(H1N1或H9N2毒株)，35℃孵育1小时。1小时后，完全去除孵育中使用的病毒溶液，将分离自姜黄提取物的类姜黄色素基化合物、乙酸乙酯馏分和乙醇提取物分别加入病毒-孵育的MDCK细胞。随后，使用上面的数学式1测定分离自本发明的姜黄提取物的类姜黄色素基化合物、乙酸乙酯馏分和乙醇提取物的细胞变性抑制效果(抑制作用(％))。该结果在下表4中显示。
表4
a.类姜黄色素基化合物、乙酸乙酯馏分和乙醇提取物分别与病毒混合，接着4℃反应1小时，用该病毒感染MDCK细胞。1小时后，用PBS清洗细胞一次和分配含10mg/mL胰岛素的培养基(EMEM)。该细胞35℃孵育48～72小时。
b.病毒感染1小时后，去除含有病毒的介质，用含有类姜黄色素基化合物、乙酸乙酯馏分和乙醇提取物的每一种的新鲜培养基取代，然后该细胞孵育48～72小时。
c.CC50/EC50作为选择性指数(SI)
如表4显示，类姜黄色素基化合物对H1N1株有显著的抗病毒效果，显示选择性指数(SI)13.3、23.1，大于7.1。同样，类姜黄色素基化合物对抗H9N2株显示选择性指数(SI)5.1、5.3，小于1.0。因此，可以确定该类姜黄色素基化合物对多种病毒株有抗病毒效果。该姜黄乙酸乙酯馏分和姜黄乙醇提取物对H1N1株有优异的抗病毒效果，分别显示选择性指数为9.1和6.4。根据用倒置显微镜对细胞形态的观察结果，发现MDCK细胞与病毒(H1N1或H9N2)孵育为几乎变性的，导致90～100％的细胞病变效果，而病毒感染的MDCK细胞用类姜黄色素基化合物、乙酸乙酯馏分和乙醇提取物处理，显示出与未-感染+未给药对照相似的状况。
此外，该类姜黄色素基化合物对H1N1和H9N2有细胞变性抑制效果。尤其，该类姜黄色素基化合物对H9N2株有显著的细胞变性抑制效果，显示选择性指数(SI)为8.6、3.9，大于1.1；对H1N1株有细胞变性抑制效果，显示选择性指数(SI)为2.3、1.6，大于1.4。根据用倒置显微镜对细胞形态的观察结果，发现MDCK细胞与病毒(H1N1或H9N2)孵育为几乎变性的，导致90～100％的细胞病变效果，而病毒感染的MDCK细胞用类姜黄色素基化合物、乙酸乙酯馏分和乙醇提取物处理，显示出与未-感染+未给药对照相似的状况。
因此，本发明组合物可以用于预防和治疗流行性感冒病毒感染，因为该组合物通过在病毒感染细胞前直接作用于病毒，有抗病毒效果；并且通过预防病毒在已感染病毒细胞中通过复制从细胞中释放，有细胞变性抑制效果。
实验实施例3：本发明化合物急性毒性测试
为了测试本发明化合物的急性毒性，进行以下测试。
包含12雌和12雄、6周大的无特定病原菌(SPF)C57BL/6J小鼠(样品)被分成4组(3雌鼠和3雄鼠作为一个测试组)，在温度22±3℃，湿度55±10％和光照12L/12D的动物房饲养。测试前，该小鼠通过训养一周。允许该小鼠自由接近实验室动物饲料(用于小鼠和大鼠的饲料，CJ Corporation in Seoul，Republic of Korea)和无菌水。
通过加入0.5％80至实施例2中获得的用化学式2～4表示的化合物的每一种制备浓度50mg/mL的样本，按照每20克小鼠重量0.04mL(100mg/kg)、0.2mL(500mg/kg)和0.4mL(1,000mg/kg)的剂量给药。该样本用单一剂量口服给药，给药后连续7天观察副作用和存活。更确切地说，给药当天，给药后的1小时、4小时、8小时和12小时观察一般症状变化和存活，从给药后的第二天到第七天，每天的上午和下午观察一次或者更多。
该急性毒性测试结果表明所有用样本给药的小鼠没有显著的临床征兆和没有死亡的小鼠。同样，在体重变化、血液测试、血液生化检查和尸检分析中都没有发现毒性变化。
本发明的该化合物在所有小鼠中直到剂量为1,000mg/kg都没有显示出毒性变化，因此，可以确定本发明的化合物是具有口服LD50，即最小致死剂量为1,000mg/kg或更高稳定的物质。
在下文中，包含由此分离的姜黄提取物、姜黄馏分和类姜黄色素基化合物及其药学可接受盐的药物制剂和保健食物的制造实施例被描述。
制造实施例1：药物制剂的制造
1-1.粉末
2g姜黄提取物、馏分、由其分离的化合物或其盐
1g乳糖
这些成分被混合和包装进一个空气密封装置用以制造粉末形式的药物制剂。.
1-2.片
100mg姜黄提取物、馏分、由其分离的化合物或其盐
100mg玉米淀粉
100mg乳糖
2mg硬脂酸镁
这些成分被混合和通过传统的片剂制造方法压缩用以制造片剂形式的药物制剂。
1-3.胶囊
100mg姜黄提取物、馏分、由其分离的化合物或其盐
100mg玉米淀粉
100mg乳糖
2mg硬脂酸镁
这些成分被混合和通过传统的胶囊制造方法密封于胶囊中用以制造胶囊形式的药物制剂。.
1-4.注射剂
10μg/ml姜黄提取物、馏分、由其分离的化合物或其盐
稀盐酸BP以调整pH至3.5
最大量1ml氯化钠注射剂BP
姜黄提取物、馏分、由其分离的化合物或其盐溶解于适当体积的氯化钠注射剂BP中。用于调整pH至3.5的稀盐酸BP和用于调整体积的氯化钠注射剂BP与所得溶液充分混合。将5ml I型干净的玻璃安培瓶充满该溶液，通过在较高空气栅格下溶解玻璃来密封，并通过在120℃高压蒸汽灭菌器15分钟或更多时间灭菌，以制造注射剂形式的药物制剂。
制造实施例2：保健食物的制造
2-1.烹调调味品
0.2～10w％姜黄提取物、馏分、由其分离的化合物或其盐被用于制造促进健康的烹调调味品。
2-2.番茄酱和汁
0.2～1.0w％由此分离的姜黄提取物、馏分、化合物、或它的盐被加入番茄酱或汁用于制造促进健康的番茄酱和汁。
2-3.面粉食物
0.1～5.0w％由此分离的姜黄提取物、馏分、化合物、或它的盐与面粉混合，混合物被用于制作面包、蛋糕、甜饼、饼干和面条，以制造促进健康的食品。
2-4.汤和肉汁
0.1～1.0w％姜黄提取物、馏分、由其分离的化合物或其盐被加入汤和肉汁用于制造促进健康的加工的肉类产品、面条的汤和肉汁。
2-5.牛肉酱
10w％姜黄提取物、馏分、由其分离的化合物或其盐被加入牛肉酱用以制造促进健康的牛肉酱。.
2-6.乳制品
0.1～1.0w％姜黄提取物、馏分、由其分离的化合物或其盐被加入牛奶，该牛奶被用于制造各种含黄油和冰淇淋的乳制食物。
2-7.谷物粉末
未抛光的大米、大麦、黏质大米和薏苡通过已知的方法预胶化、干燥、烘干，和使用磨粉机研磨为粉末，该粉末颗粒尺寸为60筛目。
黑豆、黑芝麻和紫苏通过已知的方法蒸汽、干燥、烘干和用磨粉机研磨为粉末，该粉末颗粒尺寸为60筛目。
姜黄提取物、馏分、由其分离的化合物或其盐通过真空蒸发器在减压下脱水、喷雾、热气干燥和用磨粉机研磨为干粉末，该粉末颗粒尺寸为60筛目。
获得的谷物、种子和由此分离的姜黄提取物、馏分、化合物、或它的盐的干燥粉末按以下比率混合。
75w％谷物(包含35w％未抛光大米、15w％薏苡和25w％大麦)
23w％种子(包含7w％紫苏、9w％黑豆和7w％黑芝麻)
1w％姜黄提取物、馏分、由其分离的化合物或其盐
0.5w％灵芝
0.5w％地黄
2-8.碳酸饮料
按5～10w％糖、0.05～0.3w％柠檬酸、0.005～0.02w％焦糖和0.01～1w％微生物C混合。加入纯化的水使得总组成100w％，产生糖浆。该糖浆在85～98℃灭菌20～180秒，按1∶4的体积比与冷冻剂混合，用于制备饮料组合物。注入0.5～0.82体积％碳酸气体至饮料馏分中用以制造含姜黄提取物、馏分、由其分离的化合物或其盐的碳酸饮料。
2-9.保健饮料
1w％姜黄提取物、馏分、由其分离的化合物或其盐与包含0.5w％果糖玉米糖浆、2w％低聚糖、2w％糖、0.5w％普通盐和94w％水的添加物均匀混合。接着快速巴氏灭菌和装入小的包装容器，如小瓶、PET瓶等等，用以制造保健饮料。，
2-10.蔬菜汁
0.5g姜黄提取物、馏分、由其分离的化合物或其盐被加入1,000ml番茄或胡萝卜汁以制造促进健康的蔬菜汁。
2-11.果汁
0.1g姜黄提取物、馏分、由其分离的化合物或其盐加入1,000ml苹果或葡萄汁以制造促进健康的果汁。

Claims (20)

1.一种姜黄提取物或其馏分作为单一活性成分在其制备作为预防和治疗流感病毒感染的活性成分的组合物中的用途，其中所述姜黄为块状根或根状茎，且所述姜黄提取物或其馏分包含如下化学式1所代表的化合物：
其中R独立地为氢、羟基或C1-C10烷氧基。
2.权利要求1的用途，其中所述姜黄为温郁金、姜黄林奈种、郁金、莪术、广西莪术、蓝心姜、蓬莪术或姜黄。
3.权利要求1的用途，其中所述提取物用水、C1-C4醇或其混合物的溶剂获得。
4.权利要求1的用途，其中所述馏分为己烷馏分、乙酸乙酯馏分或水馏分。
5.权利要求1的用途，其中所述流感病毒为流感A病毒、流感B病毒或流感C病毒。
6.权利要求1的用途，其中所述流感病毒为H1N1流感病毒或H9N2流感病毒。
7.权利要求1的用途，其中所述流感病毒为rvH1N1流感A病毒、H1N1流感病毒或H9N2流感病毒，其中所述H1N1流感病毒是A/PR/8/34流感病毒，所述H9N2流感病毒是A/鸡/韩国/MS96/96流感病毒。
8.权利要求1的用途，其中所述组合物为药物组合物、食物组合物或准标准药物组合物。
9.权利要求8的用途，其中所述药物组合物被配制成选自以下的至少一种：片、丸、粉、颗粒、胶囊、悬液、液体、乳液、糖浆、灭菌的水溶液、非水溶剂、冻干的制品和栓剂。
10.权利要求8的用途，其中所述食物组合物为选自以下的至少一种：肉、香肠、面包、巧克力、糖果、点心、饼干、比萨、面条、口香糖、冰淇淋、汤、饮料、茶、保健饮料、酒精饮料和维他命复合物。
11.权利要求8的用途，其中所述准标准药物组合物被用于生产选自以下的至少一种：中性消毒剂、饲料添加剂、消毒清洁剂、淋浴泡沫、漱口水、湿纸巾、清洁剂肥皂、洗手液、增湿器填充剂、面具、药膏和滤器填充剂。
12.一种化学式1代表的化合物在其制备作为预防和治疗流感病毒感染的活性成分的组合物中的用途：
其中R独立地为氢、羟基或C1-C10烷氧基。
13.权利要求12的用途，其中所述化学式1代表的化合物为以下化学式2至4的任一种代表的化合物：
14.权利要求12的用途，其中所述流感病毒为流感A病毒、流感B病毒或流感C病毒。
15.权利要求12的用途，其中所述流感病毒为H1N1流感病毒或H9N2流感病毒。
16.权利要求12的用途，其中由所述流感病毒感染引起的疾病为流感、感冒、咽喉炎、支气管炎、肺炎、禽流感、猪流感或羊流感。
17.权利要求12的用途，其中所述组合物为药物组合物、食物组合物或准标准药物组合物。
18.权利要求17的用途，其中所述药物组合物被配制成选自以下的至少一种：片、丸、粉、颗粒、胶囊、悬液、液体、乳液、糖浆、灭菌的水溶液、非水溶剂、冻干的制品和栓剂。
19.权利要求17的用途，其中所述食物组合物为选自以下的至少一种：肉、香肠、面包、巧克力、糖果、点心、饼干、比萨、面条、口香糖、冰淇淋、汤、饮料、茶、保健饮料、酒精饮料和维他命复合物。
20.权利要求17的用途，其中所述准标准药物组合物被用于生产选自以下的至少一种：中性消毒剂、饲料添加剂、消毒清洁剂、淋浴泡沫、漱口水、湿纸巾、清洁剂肥皂、洗手液、增湿器填充剂、面具、药膏和滤器填充剂。
CN201080030907.2A 2009-07-08 2010-07-08 预防和治疗流感病毒感染的组合物和含姜黄提取物的用于抑制神经氨酸苷酶活性的组合物 Active CN102573870B (zh)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20090062321 2009-07-08
KR10-2009-0062321 2009-07-08
KR1020090085112A KR101077920B1 (ko) 2009-07-08 2009-09-09 울금 추출물을 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 및 치료용 조성물 및 뉴라미니데이즈 활성의 억제용 조성물
KR10-2009-0085112 2009-09-09
PCT/KR2010/004455 WO2011005043A2 (ko) 2009-07-08 2010-07-08 울금 추출물을 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 및 치료용 조성물 및 뉴라미니데이즈 활성의 억제용 조성물

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102573870A CN102573870A (zh) 2012-07-11
CN102573870B true CN102573870B (zh) 2015-06-03

Family

ID=43612185

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201080030907.2A Active CN102573870B (zh) 2009-07-08 2010-07-08 预防和治疗流感病毒感染的组合物和含姜黄提取物的用于抑制神经氨酸苷酶活性的组合物

Country Status (3)

Country Link
US (1) US8545903B2 (zh)
KR (2) KR101077920B1 (zh)
CN (1) CN102573870B (zh)

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101069396B1 (ko) * 2011-03-23 2011-09-30 (주)에스앤비푸드 울금을 이용한 기능성 소시지 및 그 제조방법
KR101811848B1 (ko) 2011-06-13 2017-12-22 한국생명공학연구원 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 커큐미노이드계 화합물/스테비오사이드 함유 복합체
KR101496834B1 (ko) * 2013-03-08 2015-03-04 한국생명공학연구원 울금 유래 생리활성물질을 유효성분으로 함유하는 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물
KR20150086928A (ko) * 2014-01-21 2015-07-29 한국생명공학연구원 커큐미노이드계 화합물, 및 감초 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 조성물
KR101710081B1 (ko) * 2014-10-22 2017-02-24 한국생명공학연구원 아출의 추출물을 포함하는 조성물 및 그의 용도
KR101643972B1 (ko) * 2014-12-18 2016-07-29 구덕자 조류독감 면역력 증진을 위한 사료 첨가제 및 이의 제조방법
KR101664452B1 (ko) * 2015-02-06 2016-10-10 고려대학교 산학협력단 봉출 추출물을 함유하는 항바이러스용 조성물
EP3103464A1 (en) 2015-06-10 2016-12-14 Raman Mehta Formulations for the treatment of disorders of the mouth, throat and respiratory tract
EP3103465A1 (en) 2015-06-10 2016-12-14 Raman Mehta Formulations for the treatment of mucosal lesions
US11053531B2 (en) 2019-05-31 2021-07-06 Linda Marie Petter Tester paper and methods of use thereof for detecting a bacterial infection
KR102210919B1 (ko) 2019-07-02 2021-02-02 한국식품연구원 보리잎 유래 다당 분획물을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 개선, 예방 또는 치료용 조성물
CN114845707A (zh) * 2019-10-25 2022-08-02 韩国生命工学研究院 用于预防或治疗猪流行性腹泻病毒感染的包含含有基于类姜黄色素的化合物和甘草提取物或其级分的复合物的组合物
US11311597B2 (en) * 2020-02-18 2022-04-26 Bich Van T Nguyen Whitened turmeric product for the prevention of viral infections
KR102456749B1 (ko) 2020-04-28 2022-10-21 서울대학교산학협력단 울금 (Curcuma longa) 추출물 또는 이로부터 분리한 세스퀴테르페노이드계 화합물을 유효성분으로 포함하는 돼지 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 조성물
KR102579726B1 (ko) * 2020-11-30 2023-09-19 서울대학교산학협력단 백지(Angelica dahurica), 울금(Curcuma longa) 및 송지(Resina Pini) 추출물을 유효성분으로 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 조성물
KR102278545B1 (ko) 2021-03-15 2021-07-16 홍성창 항바이러스 효과가 우수한 천연 항바이러스 조성물 및 그 제조방법
CN113907097B (zh) * 2021-10-15 2022-12-09 清远海贝生物技术有限公司 一种用于抑制高盐度水环境哈维弧菌的复合植物提取物及其制备方法和应用
KR20240045546A (ko) 2022-09-30 2024-04-08 (주)예스킨 항 인플루엔자 바이러스제
KR102537367B1 (ko) 2022-11-14 2023-05-26 이용광 철갑상어 분말을 함유하는 인플루엔자 바이러스 감염차단 및 억제용 조성물
KR102583992B1 (ko) 2023-03-15 2023-10-05 이용광 철갑상어 수용성 오일을 함유하는 아토피 피부염 치료용 제제

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1674875A (zh) * 2002-08-06 2005-09-28 奎格利公司 抗微生物组合物及其应用方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7166435B2 (en) 2001-08-06 2007-01-23 The Quigley Corporation Compositions and methods for reducing the transmissivity of illnesses
JP2008280333A (ja) * 2007-04-10 2008-11-20 Yoshinari Matsui 末期癌等治療用医薬組成物

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1674875A (zh) * 2002-08-06 2005-09-28 奎格利公司 抗微生物组合物及其应用方法

Also Published As

Publication number Publication date
KR20110004763A (ko) 2011-01-14
US20120107429A1 (en) 2012-05-03
KR101566441B1 (ko) 2015-11-05
CN102573870A (zh) 2012-07-11
KR101077920B1 (ko) 2011-10-31
US8545903B2 (en) 2013-10-01
KR20110093975A (ko) 2011-08-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102573870B (zh) 预防和治疗流感病毒感染的组合物和含姜黄提取物的用于抑制神经氨酸苷酶活性的组合物
JP5340409B2 (ja) インフルエンザウイルス由来疾病の予防又は治療用組成物
KR101782532B1 (ko) 백지 추출물 또는 이로부터 분리된 퓨라노쿠마린을 함유하는 조류 인플루엔자, 돼지 인플루엔자 또는 코로나 바이러스의 예방 또는 치료용 조성물
KR101334143B1 (ko) 폴리갈라 카렌시움 추출물 및 이로부터 분리된 잔톤계 화합물을 함유하는 감기, 조류 인플루엔자, 돼지 인플루엔자 또는 신종플루의 예방 또는 치료용 조성물
KR101271601B1 (ko) 인플루엔자 바이러스 유래 질병의 예방 또는 치료용 조성물
KR101087759B1 (ko) 꾸지뽕나무 추출물을 포함하는 뉴라미니데이즈 활성의 억제용 조성물 및 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 치료용 약제학적 조성물
KR101138461B1 (ko) 감초 추출물을 포함하는 로타바이러스 감염의 예방 또는 치료용 조성물
KR101189823B1 (ko) 폴리페놀성 화합물을 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 및 치료용 조성물 및 뉴라미니데이즈 활성의 억제용 조성물
KR101128088B1 (ko) 코로나 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 조성물 및 ３ｃｌ 프로테아제 활성의 억제용 조성물
KR101811848B1 (ko) 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 커큐미노이드계 화합물/스테비오사이드 함유 복합체
KR101427096B1 (ko) 관중 추출물 또는 이로부터 분리된 플로로글루시놀 유도체를 함유하는 코로나 바이러스 관련 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR101160743B1 (ko) 녹차를 유효성분으로 함유하는 조류 인플루엔자에 대한 항바이러스제
KR101115063B1 (ko) 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 및 치료용 조성물 및 뉴라미니데이즈 활성의 억제용 조성물
KR20110086473A (ko) 감태 추출물을 포함하는 코로나 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 조성물 및 3ｃｌ 프로테아제 활성의 억제용 조성물
KR20150086928A (ko) 커큐미노이드계 화합물, 및 감초 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 조성물
KR20150095605A (ko) 진세노사이드를 함유하는 감기, 조류 인플루엔자 또는 돼지 인플루엔자의 예방 또는 치료용 조성물
KR20160143628A (ko) 커큐미노이드계 화합물, 및 감초 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 조성물
US20220054574A1 (en) Pharmaceutical compositions and use thereof
US20220054572A1 (en) Pharmaceutical compositions and use thereof
KR101310033B1 (ko) 여우오줌풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 항인플루엔자용 조성물
KR20110121493A (ko) 쿠마린계 화합물을 포함하는 뉴라미니데이즈 활성의 억제용 조성물 및 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 예방 및 치료용 조성물
KR20230054297A (ko) 산자나무 열매 추출물 또는 분획물을 포함하는 항바이러스용 약학적 조성물
KR20230039782A (ko) 선학초(Agrimonia pilosa) 추출물과 오배자(Galla rhois) 추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염증 예방, 치료 또는 개선용 조성물
KR20230123906A (ko) 선학초(Agrimonia pilosa) 추출물과 오배자(Galla rhois)추출물의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염증 예방, 치료 또는 개선용 조성물
KR20230067118A (ko) 타우로데옥시콜린산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 바이러스 감염 질환 예방 또는 치료용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant