KR101160743B1 - 녹차를 유효성분으로 함유하는 조류 인플루엔자에 대한 항바이러스제 - Google Patents
녹차를 유효성분으로 함유하는 조류 인플루엔자에 대한 항바이러스제 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 음수투여제 또는 사료첨가제의 형태로 녹차를 유효성분으로 함유하는 조류 인플루엔자에 대한 항바이러스제에 관한 것으로, 상기 항바이러스제를 이용하면 백신의존도가 높고 기존 치료제 효과가 제한된 대표적 호흡기 질병인 독감질환에 대해 거부감이 적고 비용이 저렴한 식품 즉, 녹차를 이용하여 조류 독감을 치료하거나 예방할 수 있다.
Description
본 발명은 백신의존도가 높고 기존 치료제 효과가 제한된 대표적 호흡기 질병인 독감질환에 대해 거부감이 적고 비용이 저렴한 식품 즉, 녹차를 이용하여 조류 독감을 치료하거나 예방할 수 있는 녹차를 유효성분으로 함유하는 조류 인플루엔자에 대한 항바이러스제에 관한 것이다.
20세기 동안에 인플루엔자 바이러스에 의한 4번의 팬더믹 인플루엔자 (고병원성 인플루엔자에 의한 대유행 감염병)의 발생으로 수많은 인명의 피해와 막대한 경 제적 손실이 있었다.
이러한 신종 인플루엔자 바이러스의 출현으로 대유행이 다시 임박한 것이라는 예측이 나오게 되었으며 그 중 H5N1은 고병원성을 나타내어 닭에서는 다양한 내장 장기에 감염되어 48시간 이내에 90~100%의 치사율을 보이는데, 1997년 H5N1으로 인해 홍콩에서 18명의 사람이 감염되어 그 중 6명이 사망하고 이후 2003년 말 아시아에서 시작되어 유럽과 아프리카로 확산 되었으며 현재까지 WHO에 보고된 H5N1의 사람 감염예는 총 382 명으로 그중 241명이 사망하여 60% 이상의 사망률로 인해 전 세계적으로 공포의 대상이 되고 있다.
WHO는 최근 Global Influenza Preparedness Plan (May 2005)을 발표하였으며 팬데믹 발생 시 전 세계적으로 10만 명이 사망할 것으로 추정되는 등 막대한 인명피해는 물론 심각한 사회 경제적 위기를 초래할 우려가 있음을 경고하였으며, 조류인플루엔자에 의한 인체감염의 주요 원인은 H5N1, H7N7, 그리고 H9N2형 바이러스로 밝혀지고 있어, 전 세계적으로 인명폐해와 공황상태 및 경제마비를 야기할 수 있음을 세계보건기구 (WHO)가 지속적으로 경고하며 국제적인 대책마련을 촉구하고 있다.
한편, 녹차의 다양한 생리활성에 대한 논문의 숫자가 급격히 증가하고 있으며, 이는 기존 음료로서의 기호성 식품으로의 증대 외에 이의 인체에 미치는 활성을 기능적으로 이용하려는 전 세계의 관심도를 반영하고 있다.
본 발명자들은 녹차 성분이 실제적으로 닭으로부터 H9N2 바이러스의 감염을 유의성있게 저해함을 밝혀냄으로써 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 녹차의 조류인플루엔자 바이러스 (Avian influenza virus; AI)에 대한 항바이러스 기능을 검증하고 이를 농가에서의 AI 확산방지 기술로의 적용함에 있다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 일상생활에서 사용하는 식품소재 즉, 녹차를 활용함으로써 AI의 농가발생과 이의 인체감염 우려 등 사회적 불안감 해소와 녹차의 신기능을 이용한 신규 제품의 개발에 활용함에 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 녹차를 유효성분으로 함유하는 조류 인플루엔자에 대한 항바이러스제를 제공한다.
본 발명에 따른 항바이러스제에 있어서, 상기 녹차는 항바이러스제 총 100 중량부에 대하여 0.01 내지 10 중량부로 함유될 수 있고, 보다 바람직하게는 0.4 내지 1 중량부로 함유될 수 있다. 만약, 녹차가 상기 함량범위를 벗어나 소량 함유되면 조류 인플루엔자에 대한 항바이러스 효과가 미미한 반면, 과량 함유되면 경제적인 측면에서 바람직하지 않다.
또한, 상기 녹차는 녹차추출물을 이용한 음료투여제 또는 녹차가루를 이용한 사료첨가제의 형태로서 제공될 수 있다.
상기 음료투여제는 녹차가루 1 중량부에 대하여 물, 에틸아세테이트, 클로로포름, 헥산, C1-C4 알코올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 용매 100 내지 1000 중량부를 첨가하여 추출할 수 있고, 바람직하게는 녹차가루 1 중량부에 대하여 물 100 내지 1000 중량부를 첨가하여 열수추출할 수 있다.
사료첨가제는 사료 100 중량부에 대하여 녹차가루를 0.01 내지 30 중량부로 함유한 것이 바람직하다. 예를들어, 기존 (주)수협사료에서 생산하는 사료의 분말원료 100 중량부에 대하여 하동군 화개농협에서 생산되는 녹차가루를 0.01 내지 30 중량부를 첨가하고, 사료의 중량당 10배수의 물을 가하여 80℃에서 중탕 추출한다. 이렇게 얻어진 추출액을 여과하여 감압하에서 농축하여 고형분 함량을 2배로 증가시켜 사료첨가제를 준비할 수 있다.
녹차를 음료투여제 또는 사료첨가제의 형태로 제공된 녹차를 일정주기로 닭에 투여하면서 저병원성 조류인플루엔자인 H9N2 바이러스로 감염하며, 일정기간 이후에 감염된 닭으로부터 바이러스 로드(load) 변화를 모니터링한다. 닭의 호흡기도 및 항문으로부터 바이러스를 분리한 후 이를 세포배양법 및 HI (hemagglutination inhibition) 분석, 플라그 분석(plaque assay) 방법을 통하여 바이러스의 역가를 측정한다.
또한, 본 발명에 따른 항바이러스제는 약학조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 항바이러스제에 포함될 수 있는 담체, 부형제 또는 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명에 따른 항바이러스제는, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제한다.
또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 항바이러스제의 사용량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으나, 1 내지 100 mg/kg의 양, 바람직하게는 16.24 내지 40.60 mg/㎏의 양을 일일 1회 내지 수회 투여할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 항바이러스제의 투여량은 투여경로, 질병의 정도, 성별, 체중, 나이 등에 따라서 증감될 수 있다. 따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
상기 항바이러스제는 쥐, 생쥐, 닭 등을 포함한 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내(intracerebroventricular)주사에 의해 투여될 수 있다.
특히, 본 발명에 따른 항바이러스제를 인체에 투여하는 경우, 천연 추출물인 관계로 다른 합성 의약품에 비하여 부작용의 우려가 없어 안정하다.
또한, 본 발명은 녹차를 유효성분으로 함유하는 조류 인플루엔자에 대한 건강보조식품을 제공한다.
상기 건강보조식품은 녹차 이외에 다른 식품 또는 식품 첨가물과 함께 사용되고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 그의 사용 목적 예를들어 예방, 건강 또는 치료적 처치에 따라 적합하게 결정될 수 있다.
상기 건강보조식품에 함유된 녹차의 유효용량은 상기 약학조성물의 유효용량에 준해서 사용할 수 있으나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있음은 확실하다.
상기 건강보조식품의 종류에는 특별한 제한이 없고, 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등을 들 수 있다.
본 발명에 따른 항바이러스제를 이용하면, 백신의존도가 높고 기존 치료제 효과가 제한된 대표적 호흡기 질병인 독감질환에 대해 거부감이 적고 비용이 저렴한 식품 즉, 녹차를 이용한 조류 독감 치료 및 예방법을 개발할 수 있고, 이미 국제화 수준에 이른 국내 녹차 산업의 활성화를 도모할 수 있다.
도 1 및 도 2는 본 실시예에서 적용한 적혈구 응집반응 절차를 나타낸 개념도 및 순서도이다.
이하, 하기 실시예를 통해 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 다만, 이러한 실시예에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 재료 준비
1) 실험재료
실험동물은 2-3주령 SPF(specific pathogen free) 닭, SPF 계태아난을 사용하였고, 실험물질로는 하동녹차연구소에서 의뢰한 사료첨가제용 녹차가루 및 음수투여용 녹차추출물을 사용하였으며, 실험바이러스로는 Avian influenza virus - A/HS/K5/01 (H9N2)를 사용하였다.
2) 녹차가루 열수 추출
삼각플라스크에 3차 증류수를 넣고 가열하여 물의 온도를 90℃로 유지하였다. 녹차가루를 넣고 4시간 동안 회전 시키면서 추출하였다. 얻어진 추출물을 50ml 코니칼튜브에 넣고 6000 rpm, 4℃의 온도에서 30분 동안 원심분리 시켰다. 원심분리후 상층액만 새로운 코니칼튜브에 옮겨놓았다.
3) 녹차가루 및 녹차추출물 투여
녹차가루는 사료 중 녹차 함유량이 중량 기준으로 1, 0.4 및 0.1%로, 열수 추출하여 얻은 녹차추출물은 원액 희석비율 100, 200, 1000배로 각각 준비하여 2-3주령 SPF 닭에 사료 및 음수로 공급하였다.
<실시예 2> 생체 내 인플루엔자 바이러스 증식억제 시험
1) H9N2 바이러스의 생산
국내 양계장에서 분리된 H9N2 바이러스의 seed를 이용하여 실험에 사용할 바이러스 샘플을 확보하였다. 10-11일간 37℃에서 배양된 수정란에 구멍을 내고 일정량의 바이러스를 주입하였다. 실링 후, 이를 37℃의 인큐베이터에서 2-3일간을 키웠다. 요막액(allantoic fluid)를 취하고 이를 원심분리하여 뇨각등의 파편을 제거하였다. 일정양의 요막액을 순차적으로 희석하고 이를 MDCK 세포를 이용하여 플라그 분석을 통해 바이러스 역가를 정량하였다. 이때, 플라그 분석은 독감바이러스의 활성을 확인하는 가장 기본적이고 간단한 방법으로서, 바이러스액을 단계적으로 희석하여 MDCK 세포주에 감염시킨 후 overlay media를 이용하여 바이러스의 플라그 형성을 확인하였다. 이를 통해 주어진 샘플 내에 존재하는 감염성 바이러스의 양을 정량적으로 측정할 수 있다. 분취량으로 분주하여 -70℃ 상에서 보관하고 실험때마다 새로운 앰플을 동물실험에 사용하였다.
2) 저병원성 조류독감 공격접종
앞서 준비된 저병원성 조류독감 A/HS/K5/01 (H9N2)를 각 2-3주령 SPF 닭에 106.0 EID50/bird의 농도로 닭 비강을 통해 접종 시켰다.
3) 유제 및 유정란 접종
멸균한 막자사발에 샘플을 넣고 갈아버린 후 1X PBS 완충액을 약 6ml 넣었다. PBS 완충액과 혼합된 액을 6000 rpm, 4℃의 온도에서 10분 동안 원심 분리시켰다. 원심분리 후 상층액 1ml을 항생제(gentamycin: 10㎕)와 혼합한 다음 상온에서 2시간 반응시켰다.
2시간 반응 후, 1/10부터 1/100000 까지 1X PBS 완충액에 희석하였다. 샘플을 접종할 SPF 발육란을 검란하였다. SPF 발육란(11days old)에 200㎕씩 접종하였다. 파라핀을 이용하여 접종한 SPF 발육란을 실링하였다. 시료를 접종한 SPF 발육란을 37℃에서 3일간 배양하였고, 3일 후, 종란에서 요막액을 수확하였다.
4) 적혈구 응집반응(Hemagglutination assay)
유제한 장기 샘플을 유정란에 접종하여 얻은 요막액 50㎕와 닭 적혈구 50㎕를 섞은 다음 1분 후 적혈구 응집반응을 도 1과 같이 확인하였다.
5) 1차 실험
i) 사료 첨가제로서 녹차 투여시
3주령의 SPF 닭에 녹차가루를 함유한 사료를 1%, 0.4%, 0.1% (중량/중량) 인플루엔자 바이러스 공격접종 후 5일간 투여한 뒤 공격접종 바이러스의 배출 감소효과를 산정하였다. 이때, 바이러스 재분리율은 접종된 닭의 수를 바이러스 양성 닭의 수로 나눈 값이다.
시험물질인 녹차가루를 사료첨가제로 투여한 SPF 닭에서 조류인플루엔자 바이러스 증식억제 시험을 실시한 결과, 하기 표 1 및 표 2와 같이 녹차가루 0.4% 및 1% 투여군에서 공격접종 대조군에 비하여 기관 및 맹장편도에서 바이러스 재분리율과 평균역가가 저하되었다. 특히 0.4% 투여군의 맹장 편도에서 재분리된 바이러스의 역가는 양성 대조군의 맹장 편도에 비하여 P 값이 0.05 미만으로 나타나 유의성있게 감소한 것으로 확인되었다.
| 조성 | 사료 중 녹차함유량 (w/w, %) |
접종 두수 |
바이러스 재분리율 | 평균 바이러스 역가 (log10EID50/g) | ||
| 기관지 | 맹장편도 | 기관지 | 맹장편도 | |||
| 녹차 추출물 |
1% | 7 | 2/7 | 3/7 | 1.29±2.63 | 2.43±3.31 |
| 0.4% | 7 | 2/7 | 2/7 | 0.71±1.25 | 2.00±3.42* | |
| 0.1% | 7 | 6/7 | 6/7 | 3.00±2.08 | 5.86±2.61 | |
| 공격접종 대조군 |
PBS | 8 | 5/8 | 5/8 | 1.88±1.64 | 4.38±3.62 |
| 비공격접종 대조군 |
PBS | 7 | 0/7 | 0/7 | 0.00±0.00 | 0.00±0.00 |
| 바이러스 역가 (log10EID50/g) | ||||||||
| 개체 | 기관지 | 맹장편도 | ||||||
| 1% | 0.4% | 0.1% | 양성 대조군 | 1% | 0.4% | 0.1% | 양성 대조군 | |
| 1 | 7 | 0 | 3 | 2 | 0 | 7 | 7 | 7 |
| 2 | 2 | 0 | 7 | 4 | 0 | 7 | 6 | 7 |
| 3 | 0 | 0 | 0 | 0 | 3 | 0 | 7 | 7 |
| 4 | 0 | 0 | 3 | 0 | 0 | 0 | 7 | 0 |
| 5 | 0 | 3 | 3 | 3 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 6 | 0 | 0 | 3 | 0 | 7 | 0 | 7 | 0 |
| 7 | 0 | 2 | 2 | 3 | 7 | 0 | 7 | 7 |
| 8 | 3 | 7 | ||||||
| 평균 | 1.29 | 0.71 | 3.00 | 1.88 | 2.43 | 2.00 | 5.86 | 4.38 |
| 편차 | 2.63 | 1.25 | 2.08 | 1.64 | 3.31 | 3.42 | 2.61 | 3.62 |
ii) 음수 투여제로서 녹차 투여시
또한, 3주령의 SPF 닭에 녹차추출물을 100배, 200배, 1000배로 희석하여 인플루엔자 바이러스 공격접종 후 5일간 음수투여한 뒤 공격접종 바이러스의 배출 감소효과를 산정하였다.
시험물질인 녹차추출물을 음수로 투여한 SPF 닭에서 조류인플루엔자 바이러스 증식억제 시험을 실시한 결과, 하기 표 3 및 표 4와 같이 녹차 추출물을 100배 희석하여 투여한 그룹의 기관지에서, 200배 희석하여 투여한 그룹의 기관지와 맹장편도 모두에서 공격접종 바이러스의 증식이 감소함을 확인하였다. 특히 200배 희석 투여군의 맹장 편도에서 재분리된 바이러스의 역가는 양성 대조군의 맹장 편도에 비하여 P 값이 0.05 미만으로 나타나 유의성있게 감소한 것으로 확인되었다.
| 조성 | 원액희석 비율 |
접종 두수 |
바이러스 재분리율 | 평균 바이러스 역가 (log10EID50/g) | ||
| 기관지 | 맹장편도 | 기관지 | 맹장편도 | |||
| 녹차 추출물 (음수) |
100배 | 7 | 3/7 | 4/7 | 1.57±1.99 | 4.00±3.74 |
| 200배 | 7 | 4/7 | 2/7 | 1.57±1.62 | 2.00±3.42* | |
| 1000배 | 7 | 5/7 | 3/7 | 2.00±1.53 | 3.00±3.74 | |
| 공격접종 대조군 |
PBS | 8 | 5/8 | 5/8 | 1.88±1.64 | 4.38±3.62 |
| 비공격접종 대조군 |
PBS | 7 | 0/7 | 0/7 | 0.00±0.00 | 0.00±0.00 |
| 바이러스 역가 (log10EID50/g) | ||||||||
| 개체 | 기관지 | 맹장편도 | ||||||
| 100배 | 200배 | 1000배 | 양성 대조군 | 100배 | 200배 | 1000배 | 양성 대조군 | |
| 1 | 3 | 4 | 4 | 2 | 7 | 7 | 7 | 7 |
| 2 | 4 | 0 | 0 | 4 | 7 | 0 | 7 | 7 |
| 3 | 0 | 2 | 0 | 0 | 7 | 0 | 0 | 7 |
| 4 | 0 | 0 | 2 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 5 | 0 | 3 | 3 | 3 | 0 | 0 | 7 | 0 |
| 6 | 0 | 0 | 2 | 0 | 0 | 7 | 0 | 0 |
| 7 | 4 | 2 | 3 | 3 | 7 | 0 | 0 | 7 |
| 8 | 3 | 7 | ||||||
| 평균 | 1.57 | 1.57 | 2.00 | 1.88 | 4.00 | 2.00 | 3.00 | 4.38 |
| 편차 | 1.99 | 1.62 | 1.53 | 1.64 | 3.74 | 3.42 | 3.74 | 3.62 |
따라서, 녹차가루 및 녹차추출물을 투여한 결과, SPF 닭의 생체 내 조류인플루엔자 바이러스의 증식을 억제하여 재분리율과 바이러스 역가를 유의성 있게 감소시켰으므로 추후 사료첨가제 및 음수 투여제로의 개발 가능성이 있는 것으로 판단되었다.
6) 2차 실험
i) 사료 첨가제로서 녹차 투여시
인플루엔자 바이러스를 공격 접종한 3주령의 SPF 닭에게 녹차가루를 함유한 사료를 1%, 0.4%, 0.1% (중량/중량) 공격접종 7일전부터 공격접종 5일후까지 예방 및 치료 투여하여 공격접종 바이러스의 장기별 증식 억제효과를 산정하였다.
시험물질 녹차가루를 함유한 사료를 공격접종 7일 전부터 공격접종 5일 후까지 예방 및 치료를 위해 투여하여 장기별 인플루엔자 바이러스 증식 억제 효과를 산정한 결과, 하기 표 5 및 표 6과 같이 녹차가루 0.4% 투여군에서 공격접종 대조군에 비하여 맹장편도의 바이러스 재분리율과 평균역가가 감소하였다.
| 조성A | 사료 중 녹차함유량 (w/w, %) |
접종 두수 |
바이러스 재분리율 | 평균 바이러스 역가 (log10EID50/g) |
||
| 기관 | 맹장편도 | 기관 | 맹장편도 | |||
| 녹차 가루 |
1% | 7 | 4/7 | 4/7 | 1.43 ± 1.40 | 3.29 ± 3.55 |
| 0.4% | 7 | 3/7 | 2/7 | 1.14 ± 1.46 | 1.71 ± 2.93 | |
| 0.1% | 7 | 5/7 | 4/7 | 1.86 ± 1.46 | 3.71 ± 3.55 | |
| 공격접종 대조군 |
PBS | 7 | 4/7 | 5/7 | 1.71 ± 1.25 | 4.00 ± 3.16 |
| 비공격접종 대조군 |
PBS | 7 | 0/7 | 0/7 | 0.00 ± 0.00 | 0.00 ± 0.00 |
| 개체 | 바이러스 역가(log10EID50/g) | |||||||
| 기관 | 맹장 편도 | |||||||
| 1% | 0.4% | 0.1% | 양성 대조군 | 1% | 0.4% | 0.1% | 양성 대조군 | |
| 1 | 3 | 2 | 4 | 3 | 0 | 0 | 7 | 7 |
| 2 | 2 | 3 | 2 | 2 | 7 | 0 | 0 | 7 |
| 3 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 6 | 5 | 7 |
| 4 | 3 | 0 | 2 | 2 | 0 | 0 | 7 | 3 |
| 5 | 0 | 0 | 0 | 3 | 7 | 0 | 0 | 0 |
| 6 | 2 | 3 | 3 | 2 | 7 | 0 | 7 | 0 |
| 7 | 0 | 0 | 2 | 0 | 2 | 6 | 0 | 4 |
| 평균 | 1.43 | 1.14 | 1.86 | 1.71 | 3.29 | 1.71 | 3.71 | 4.00 |
| 편차 | 1.40 | 1.46 | 1.46 | 1.25 | 3.55 | 2.93 | 3.55 | 3.16 |
ii) 음수 투여제로서 녹차 투여시
또한, 인플루엔자 바이러스를 공격 접종한 3주령의 SPF 닭에게 100배, 200배, 1000배로 희석한 음수투여용 녹차추출물을 공격접종 7일전부터 공격접종 5일후까지 예방 및 치료 투여하여 공격접종 바이러스의 장기별 증식 억제효과를 산정하였다.
시험물질 음수투여용 녹차추출물을 공격접종 7일 전부터 공격접종 5일 후까지 예방 및 치료 투여하여 장기별 인플루엔자 바이러스 증식 억제 효과를 산정한 결과, 하기 표 7 및 표 8와 같이 그룹 간 장기별 바이러스 재분리율의 차이는 관찰되지 않았지만, 녹차 추출물을 200배 희석하여 투여한 닭의 맹장편도 내 공격접종 바이러스의 평균 역가가 감소되는 것을 확인하였다. 그러나 공격접종 대조군에 비하여 감소한 시험군의 바이러스 재분리율과 평균 역가 모두 통계적 유의차가 인정되지 않았다. 이는 시험에 사용된 그룹별 실험동물의 수가 적었고, 바이러스 평균 역가의 표준 편차가 크기 때문인 것으로 사료된다.
| 조성 | 원액 희석비율 |
접종 두수 |
바이러스 재 분리율 | 평균 역가(log10EID50/g) | ||
| 기관 | 맹장편도 | 기관 | 맹장편도 | |||
| 녹차 추출물 (음수) |
100배 | 7 | 4/7 | 5/7 | 1.43 ± 1.40 | 3.86 ± 2.79 |
| 200배 | 7 | 4/7 | 4/7 | 1.29 ± 1.25 | 2.71 ± 2.98 | |
| 1000배 | 7 | 5/7 | 5/7 | 2.00 ± 1.41 | 4.86 ± 3.34 | |
| 공격접종 대조군 |
PBS | 7 | 5/7 | 5/7 | 1.71 ± 1.25 | 4.00 ± 3.16 |
| 비공격접종 대조군 |
PBS | 7 | 0/7 | 0/7 | 0.00 ± 0.00 | 0.00 ± 0.00 |
| 바이러스 역가 (log10EID50/g) | ||||||||
| 기관 | 맹장 편도 | |||||||
| 개체 | 100배 | 200배 | 1000배 | 양성 대조군 | 100배 | 200배 | 1000배 | 양성 대조군 |
| 1 | 2 | 0 | 3 | 3 | 0 | 0 | 7 | 7 |
| 2 | 2 | 0 | 3 | 2 | 4 | 4 | 6 | 7 |
| 3 | 3 | 2 | 2 | 0 | 5 | 2 | 7 | 7 |
| 4 | 0 | 3 | 3 | 2 | 0 | 0 | 7 | 3 |
| 5 | 3 | 0 | 0 | 3 | 5 | 6 | 0 | 0 |
| 6 | 0 | 2 | 0 | 2 | 6 | 7 | 7 | 0 |
| 7 | 0 | 2 | 3 | 0 | 7 | 0 | 0 | 4 |
| 평균 | 1.43 | 1.29 | 2.00 | 1.71 | 3.86 | 2.71 | 4.86 | 4.00 |
| 편차 | 1.40 | 1.25 | 1.41 | 1.25 | 2.79 | 2.98 | 3.34 | 3.16 |
비록 유의적인 차이를 발견하지 못하였지만, 녹차가루 0.4% 투여군과 녹차추출물 200배 희석액 투여군의 맹장편도 내 바이러스 평균역가는 대조군에 비하여 각각 100배와 10배 이상 감소하였다. 따라서 닭에서 조류 인플루엔자 바이러스의 주요 증식 장기가 장관계임을 고려할 때, 녹차 제제의 야외 농장 적용시 장관 내 바이러스 증식 억제를 통한 배출 감소 효과를 나타내어 환경 내 바이러스 농도를 감소시키는 데 효과적일 것으로 판단되었다.
종합적으로 살펴보면, 일반적으로 녹차추출물 함유하는 음료 또는 사료를 줄 경우 닭들은 녹차함유량이 높은 경우 식이 초기에 거부반응을 나타내는 경향이 있었다. 즉, 녹차함유량이 높은 경우(예; 음수 100배 희석; 녹차가루 1% 조건)에 낮은 경우보다 역가가 감소하였다.
전체적인 연구결과를 비교 시 음수의 형태보다는 사료로 줄 경우 항바이러스 효과가 높게 나타났다. 이는 사료에 포함된 녹차가루로부터 비교적 장기간에 걸쳐 녹차성분이 위장관에 유리되어 음수의 형태보다 좀더 장기간에 걸쳐 항바이러스 기능을 나타내는 것으로 판단된다.
따라서, 본 시험을 통하여 녹차가루 및 녹차추출물의 SPF 닭 생체 내 인플루엔자 바이러스 증식억제 효능을 확인하였다.
이하, 본 발명의 녹차를 함유하는 항바이러스제의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
<제제예 1> 산제의 제조
녹차가루 100 mg, 유당 100 mg 및 탈크 10 mg을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
<제제예 2> 정제의 제조
녹차가루 20 mg, 옥수수전분 100 mg, 유당 100 mg 및 스테아린산 마그네슘 2 mg을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
<제제예 3> 캡슐제의 제조
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 녹차가루 20 mg, 옥수수전분 100 mg, 유당 100 mg 및 스테아린산 마그네슘 2 mg을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<제제예 4> 주사제의 제조
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플 당(2㎖) 녹차가루 20 mg, 주사용 멸균 증류수 적량 및 pH 조절제 적량을 함유하여 제조하였다.
<제제예 5> 액제의 제조
통상의 액제의 제조방법에 따라 적량의 정제수에 녹차가루 50 mg, 이성화당 10 g 및 만니톨 5 g을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 후 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체 100㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조하였다.
<제제예 6> 건강식품의 제조
녹차가루 200 ㎎, 비타민 혼합물 적량(비타민 A 아세테이트 70 ㎍, 비타민 E 1.0 ㎎, 비타민 B 1 0.13 ㎎, 비타민 B 2 0.15 ㎎, 비타민 B 6 0.5 ㎎, 비타민 B 12 0.2 ㎍, 비타민 C 10 ㎎, 비오틴 10 ㎍, 니코틴산아미드 1.7 ㎎, 엽산 50 ㎍, 판토텐산 칼슘 0.5 ㎎) 및 무기질 혼합물 적량(황산제1철 1.75 ㎎, 산화아연 0.82 ㎎, 탄산마그네슘 25.3 ㎎, 제1인산칼륨 15 ㎎, 제2인산칼슘 55 ㎎, 구연산칼륨 90 ㎎, 탄산칼슘 100 ㎎, 염화마그네슘 24.8 ㎎)을 혼합한 다음 과립을 제조하고 통상의 방법에 따라 건강식품을 제조하였다.
Claims (6)
- 녹차를 유효성분으로 하며,
총 100 중량부의 항바이러스제에 대하여 0.4 중량부의 녹차가 포함된 H9N2형 조류 인플루엔자에 대한 항바이러스제. - 삭제
- 청구항 1에 있어서, 상기 녹차는 녹차추출물을 이용한 음료투여제 또는 녹차가루를 이용한 사료첨가제의 형태로서 제공된, H9N2형 조류 인플루엔자에 대한 항바이러스제.
- 삭제
- 삭제
- 삭제
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