JP7262449B2 - 酵素産物 - Google Patents
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Description
1.DNAを加水分解するために、ヌクレアーゼ(すなわち、ヌクレアーゼ酵素)により処理するステップ、
2.沈殿剤及び/又は凝集剤を使用するステップ、これにより、不溶性複合体を形成させることにより、加水分解されたDNAを析出させる、及び
3.後続するマイクロ濾過ステップを実施するステップ
を組み合わせた場合にのみ、組換えDNAの所望の低下を実現することが明らかとなった:
(i)組換え酵素、核酸、及び任意選択で細胞デブリを含む組成物Iを提供するステップと、
(ii)核酸を分解するために組成物Iにヌクレアーゼを添加し、これにより酵素、分解された核酸、及び任意選択で細胞デブリを含む組成物IIを提供するステップと、
(iii)分解された核酸を複合体化させるために、組成物IIに分解された核酸用の沈殿剤を添加するステップと、これにより酵素、複合体化した分解された核酸、及び任意選択で細胞デブリを含む組成物IIIを提供し、
(iv)任意選択で、固体/液体分離により組成物IIIを精製するステップと、これにより複合体化した分解された核酸、及び任意選択で細胞デブリを含む分離固相、並びに酵素を含む液体組成物IVを提供し、
(v)マイクロ濾過により組成物III又は組成物IVを精製するステップと、これにより酵素を含む組成物Vを提供する、
を含む。
- 酸化還元酵素、トランスフェラーゼ、ヒドロラーゼ、リアーゼ、イソメラーゼ、リガーゼからなる群から選択され、及び好ましくはアルコールデヒドロゲナーゼ、グルコースオキシダーゼ、スルフヒドリルオキシダーゼ、アミノトランスフェラーゼ、グリコシルトランスフェラーゼ、ホスホリラーゼ、ペプチダーゼ、トランスグルタミナーゼ、ニトリラーゼ、リパーゼ、アスパラギナーゼ、ホスホリパーゼ、グルコアミラーゼ、アミラーゼ、キシラナーゼ、プロテアーゼ、ペプチダーゼ、ペクチナーゼ、セルラーゼ、β-グルカナーゼエステラーゼ、タンナーゼ、ウレアーゼ、セルラーゼ、デカルボキシラーゼ、キシロースイソメラーゼからなる群から選択され;並びに/或いは
- (b-1)炭水化物修飾酵素、例えばグリコシルヒドロラーゼ、グリコシルトランスフェラーゼ、ポリサッカライドリアーゼ、炭水化物エステラーゼ等;(b-2)アミノ酸、ペプチド、又はタンパク質修飾酵素、例えばアミノトランスフェラーゼ、プロテアーゼ、ペプチダーゼ等;及び(b-3)脂質修飾酵素、例えばリパーゼ又はホスホリパーゼ等からなる群から選択され;並びに/或いは
- 炭水化物修飾酵素であり、且つ糖ホスホリラーゼ、スクロースホスホリラーゼ、トレハロースホスホリラーゼ、セロビオースホスホリラーゼ、グリコシルトランスフェラーゼ、すなわちUDP-グリコシルトランスフェラーゼ、グルコシルトランスフェラーゼ、スクロースシンターゼ、ガラクトシルトランスフェラーゼ、フコシルトランスフェラーゼ、シアリルトランスフェラーゼ、アセチルグルコサミントランスフェラーゼ、又はN-アセチルガラクトシルトランスフェラーゼの酵素クラスのうちの少なくとも1つに属する。
a)サイズ排除限界が
- 1000kDaを超える、500kDaを超える、400kDaを超える、300kDaを超える、200kDaを超える、150kDaを超える、100kDaを超える、90kDaを超える、80kDaを超える、70kDaを超える、60kDaを超える、50kDaを超える、40kDaを超える、30kDaを超える、若しくは20kDaを超える;及び/又は
- 5μmを超える、4μmを超える、3μmを超える、2μmを超える、1μmを超える、0.5μmを超える、0.4μmを超える、0.3μmを超える、0.2μmを超える、若しくは0.1μmを超える
メンブレン;或いは
b)同等の分子量排除特性を有するフィルター、好ましくはデプスフィルター
を含み、いずれの場合にも、組成物Vは、マイクロ濾過の濾液である。
(vi)追加のマイクロ濾過又は限外濾過により組成物Vを精製し、これにより酵素を含む組成物VIを提供する
追加のステップを含む。
a)100kDaを超える、80kDaを超える、60kDaを超える、50kDaを超える、40kDaを超える、30kDaを超える、20kDaを超える、15kDaを超える、10kDaを超える、5kDaを超える、若しくは1kDaを超えるサイズ排除限界を有するメンブレン;又は
b)同等の分子量排除特性を有するフィルター、好ましくはデプスフィルター
を含み、及び組成物VIは、マイクロ濾過の濾液又は限外濾過の保持液である。
a.カチオン性ポリアミンに基づく凝集剤、例えばジメチルアミン-エピクロロヒドリンコポリマー(CAS Reg No.25988-97-0)、メチルアミン-エピクロロヒドリンコポリマー(CAS Reg No.31568-35-1)、ジメチルアミン-エピクロロヒドリン-エチレンジアミンターポリマー(CAS Reg No.42751-79-1)等;並びに
b.カチオン性ポリアクリルアミドに基づく凝集剤、例えばホルムアルデヒド及びジメチルアミンと共に縮合させることにより改変されたポリアクリルアミド(CAS Reg No.67953-80-4)、アクリルアミド-アクリロキシエチルトリメチルアンモニウムクロライドコポリマー(CAS Reg No.69418-26-4)等;並びに
c.陰イオン性ポリアミンに基づく凝集剤、例えばアクリルアミド-アクリル酸コポリマー(CAS Reg No.25987-30-8;CAS Reg No.9003-06-9)等;並びに
d.硫酸アンモニウム(CAS Reg No.10043-01-3);並びに
e.塩化カルシウム(CAS Reg No.10035-04-8;CAS Reg No.10043-52-4)
が挙げられるが、これらに限定されない。
(i-a)酵素の遺伝子を発現ベクターにクローニングするサブステップ、
(i-b)遺伝子を有する発現ベクターを微生物宿主に導入するサブステップ、
(i-c)微生物宿主において酵素を細胞内発現させるサブステップ、すなわち組換え酵素を細胞内発現させる条件下で、微生物宿主を発酵させるサブステップ、及び
(i-d)細胞破壊により、微生物宿主から酵素(及び核酸)を放出させるサブステップ、これにより組成物Iを提供する;すなわち組換え酵素を放出させるために、細胞破壊により発酵させた細胞を破壊するサブステップ、これにより組換え酵素産物を含む未精製のライセートをもたらす
のうちの1つ又は複数を含む。
(ii-a)組成物Iにヌクレアーゼを添加するサブステップ、
(ii-b)核酸を分解し、これにより組換え酵素を含む組成物II、分解された核酸、及び細胞デブリを提供するために、細胞破壊により微生物宿主から組換え酵素及び核酸を放出させるサブステップ;すなわち組換え酵素及び核酸を放出させるために細胞破壊により発酵させた細胞を破壊して、組換え酵素、分解された核酸、及び細胞デブリ(及びヌクレアーゼ)を含む未精製のライセートをもたらすサブステップ
を含む。
- 大腸菌、好ましくは研究室株大腸菌K-12W3110の遺伝的に改変された派生株、及び最も好ましくはLE1B109であり、並びに/或いは
- 酵素、好ましくは大腸菌酵素のホスホグルコムターゼ、アルカリホスファターゼ、グルコース-1-ホスフェートホスファターゼ、UDP-グルコース-6-デヒドロゲナーゼ、セルロースシンターゼ(UDP形成型)、α,α-トレハロースホスフェートシンターゼ(UDP形成型)、UDP-グルコース-ヘキソース-1-ホスフェートウリジリルトランスフェラーゼ、UTP-グルコース-1-ホスフェートウリジリルトランスフェラーゼ、UTP-グルコース-1-ホスフェートウリジリルトランスフェラーゼ、UDP-糖ジホスファターゼ、ヌクレオチドジホスファターゼ、UDP-グルコース-4-エピメラーゼ、リボヌクレオシドジホスフェートレダクターゼ、リボヌクレオシドジホスフェートレダクターゼ、リポポリサッカライド-N-アセチルマンノースアミノウロノシルトランスフェラーゼ、脂質-A-二糖合成酵素、ウンデカプレニルジホスホムラモイルペンタペプチド-β-N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ、ウンデカプレニルホスフェート-4-デオキシ-4-ホルムアミド-L-アラビノーストランスフェラーゼ、6-ホスホフルクトキナーゼ、ピルビン酸キナーゼ、ウリジンキナーゼ、UMPキナーゼ、ヌクレオシドジホスフェートキナーゼ、ポリリボヌクレオチドヌクレオチジルトランスフェラーゼ、UDP-N-アセチルグルコサミン-2-エピメラーゼ(非加水分解型)、β-ガラクトシダーゼ、N-アセチルノイラミン酸リアーゼ、N-アセチルマンノサミンキナーゼ、推定N-アセチルマンノサミン-6-ホスフェート-2-エピメラーゼ、α-ガラクトシダーゼ、ガラクトシド-O-アセチルトランスフェラーゼをコードする遺伝子からなる群から選択される1つ又は複数の追加の遺伝子の欠損により改変されている。
a.微生物宿主において組換え酵素を細胞内で発現させるステップと、
b.細胞破壊により組換え酵素を放出させて、未精製ライセートをもたらすステップと、
c.プロセス溶液を含有する酵素産物内で核酸を分解するためにヌクレアーゼを添加するステップ、これにより酵素処理されたライセートをもたらす、
d.核酸と複合体化するように沈殿剤を添加するステップ、これにより複合体化したライセートをもたらす、
e.液相から細胞デブリ及び核酸/沈殿剤複合体を取り除くために液体/固体分離を行うステップ、これにより清澄化したライセートをもたらす、
f.残留固体及び/又は高分子量コンポーネントを取り除くためにマイクロ濾過ステップを実施するステップ、これにより濾液をもたらす
を含み、上記方法は、好ましくは、それぞれヌクレアーゼ酵素を用いて、ステップeの液体/固体分離の後に行われる清澄化したライセートの処理、又はマイクロ濾過ステップfの後に行われる濾液の処理を含まない、食品グレード酵素産物を製造する方法に関する。
(i)組換え酵素産物、核酸、及び任意選択で細胞デブリを含む組成物Iを提供するステップと、
(ii)核酸を分解するために組成物Iにヌクレアーゼを添加するステップ、これにより酵素産物、分解された核酸、及び任意選択で細胞デブリを含む組成物IIを提供する、
(iii)分解された核酸を複合体化させるために、組成物IIに分解された核酸用の沈殿剤を添加するステップ、これにより酵素産物、複合体化した分解された核酸、及び任意選択で細胞デブリを含む組成物IIIを提供する、
(iv)任意選択で、固体/液体分離により組成物IIIを精製するステップ、これにより、複合体化した分解された核酸、及び任意選択で細胞デブリを含む分離固相、並びに酵素産物を含む液体組成物IVを提供する、
(v)マイクロ濾過により組成物III又は組成物IVを精製するステップ、これにより酵素産物を含む組成物Vを提供する
を含み、上記方法は、それぞれ、液体/固体分離ステップ(iv)の後にヌクレアーゼ酵素を用いて行われる清澄化したライセート(組成物IV)の処理、又はマイクロ濾過ステップ(v)の後にヌクレアーゼ酵素を用いて行われる濾液(組成物V)の処理を含まないことが好ましい。
(i)組換え酵素産物、核酸、及び任意選択で細胞デブリを含む組成物Iを提供するステップと、
(ii)核酸を分解するために組成物Iにヌクレアーゼを添加するステップ、これにより酵素産物、分解された核酸、及び任意選択で細胞デブリを含む組成物IIを提供する、
(iii)分解された核酸と複合体化させるために、組成物IIに分解された核酸用の沈殿剤を添加するステップ、これにより酵素産物、複合体化した分解された核酸、及び任意選択で細胞デブリを含む組成物IIIを提供する、
(iv)任意選択で、固体/液体分離により組成物IIIを精製するステップ、これにより主に複合体化した分解された核酸、及び任意選択で細胞デブリ、及び任意選択で組成物IIIに由来する酵素産物の残渣物を含む分離固相、並びに主に酵素産物、及び任意選択で細胞デブリの残渣物、組成物IIIに由来する複合体化した分解された核酸を含む液体組成物IVを提供する、
(v)マイクロ濾過により組成物III又は組成物IVを精製するステップ、これにより酵素産物を含む組成物Vを提供する
を含み、上記方法は、それぞれ、液体/固体分離ステップ(iv)の後にヌクレアーゼ酵素を用いて行われる清澄化したライセート(組成物IV)の処理、又はマイクロ濾過ステップ(v)の後にヌクレアーゼ酵素を用いて行われる濾液(組成物V)の処理を含まないことが好ましい。
a.酵素産物遺伝子を発現ベクターにクローニングするステップ、
b.酵素産物遺伝子を有する発現ベクターを微生物宿主に導入するステップ、
c.組換え酵素産物を細胞内発現させる条件下で、上記ステップ(b)の微生物宿主を発酵させるステップ。
d.組換え酵素産物を放出させるために、細胞破壊により上記ステップ(c)の発酵させた細胞を破壊するステップ、これにより組換え酵素産物を含有する未精製のライセートをもたらす、
e.未精製のライセートに由来する核酸を分解するために、未精製のライセートをヌクレアーゼと共にインキュベートするステップ、これにより酵素処理されたライセートをもたらす、
f.核酸と複合体形成するように沈殿剤を酵素処理されたライセートに添加するステップ、これにより組換え酵素産物を含有する複合体化したライセートをもたらす、
g.液相から細胞デブリ及び核酸と沈殿剤の複合体を取り除くために複合体化したライセートの液体及び/又は固体分離を行うステップ、これにより組換え酵素産物を含有する清澄化したライセートをもたらす、並びに
h.残留固体及び/又は高分子量コンポーネントを取り除くために、酵素処理され、及び任意選択で清澄化したライセートをマイクロ濾過ステップに供するステップ、
のうちの1つ又は複数のステップを含むことを特徴とし、
上記方法は、それぞれ、ヌクレアーゼ酵素を用いて行われる、ステップgの液体/固体分離後の清澄化したライセートの処理、又はステップhのマイクロ濾過後の濾液の処理を含まないことが好ましい。
- 酸化還元酵素、トランスフェラーゼ、ヒドロラーゼ、リアーゼ、イソメラーゼ、リガーゼからなる群から選択され、及び好ましくはアルコールデヒドロゲナーゼ、グルコースオキシダーゼ、スルフヒドリルオキシダーゼ、アミノトランスフェラーゼ、グリコシルトランスフェラーゼ、ホスホリラーゼ、ペプチダーゼ、トランスグルタミナーゼ、ニトリラーゼ、リパーゼ、アスパラギナーゼ、ホスホリパーゼ、グルコアミラーゼ、アミラーゼ、キシラナーゼ、プロテアーゼ、ペプチダーゼ、ペクチナーゼ、セルラーゼ、β-グルカナーゼエステラーゼ、タンナーゼ、ウレアーゼ、セルラーゼ、デカルボキシラーゼ、キシロースイソメラーゼからなる群から選択され、並びに/或いは
- (b-1)炭水化物修飾酵素、例えばグリコシルヒドロラーゼ、グリコシルトランスフェラーゼ、ポリサッカライドリアーゼ、炭水化物エステラーゼ等;(b-2)アミノ酸、ペプチド、又はタンパク質修飾酵素、例えばアミノトランスフェラーゼ、プロテアーゼ、ペプチダーゼ等;及び(b-3)脂質修飾酵素、例えばリパーゼ又はホスホリパーゼ等からなる群から選択され、並びに/或いは
- 炭水化物修飾酵素であり、且つ、糖ホスホリラーゼ、スクロースホスホリラーゼ、トレハロースホスホリラーゼ、セロビオースホスホリラーゼ、グリコシルトランスフェラーゼ、すなわちUDP-グリコシルトランスフェラーゼ、グルコシルトランスフェラーゼ、スクロースシンターゼ、ガラクトシルトランスフェラーゼ、フコシルトランスフェラーゼ、シアリルトランスフェラーゼ、アセチルグルコサミントランスフェラーゼ、又はN-アセチルガラクトシルトランスフェラーゼの酵素クラスのうちの少なくとも1つに属し、
微生物宿主大腸菌内で、好ましくは研究室株大腸菌K-12W3110の遺伝的に改変された派生株内で、及び最も好ましくはLE1B109内で、発現された方法とも関連する。
a.カチオン性ポリアミンに基づく凝集剤、例えばジメチルアミン-エピクロロヒドリンコポリマー(CAS Reg No.25988-97-0)、メチルアミン-エピクロロヒドリンコポリマー(CAS Reg No.31568-35-1)、ジメチルアミン-エピクロロヒドリン-エチレンジアミンターポリマー(CAS Reg No.42751-79-1)等;並びに
b.カチオン性ポリアクリルアミドに基づく凝集剤、例えばホルムアルデヒド及びジメチルアミンと共に縮合させることにより改変されたポリアクリルアミド(CAS Reg No.67953-80-4)、アクリルアミド-アクリロキシエチルトリメチルアンモニウムクロライドコポリマー(CAS Reg No.69418-26-4)等;並びに
c.陰イオン性ポリアミンに基づく凝集剤、例えばアクリルアミド-アクリル酸コポリマー(CAS Reg No.25987-30-8;CAS Reg No.9003-06-9)等;並びに
d.硫酸アンモニウム(CAS Reg No.10043-01-3);並びに
e.塩化カルシウム(CAS Reg No.10035-04-8;CAS Reg No.10043-52-4)
の凝集剤からなる群より選択される。
- 「Enter Query Sequence」欄:クエリサブレンジ:無し
- 「Choose Search Set」欄:データベース:非冗長性のタンパク質配列(nr);任意選択のパラメーター:無し
- 「Program Selection」欄:アルゴリズム:blastp(タンパク質-タンパク質BLAST)
- アルゴリズムパラメーター:「General parameters」欄:最大標的配列:100~20000、好ましくは20000;ショートクエリ:短いインプット配列についてパラメーターを自動的に調整する;期待閾値:10;ワードサイズ:6;クエリ範囲内の最大一致:0
- アルゴリズムパラメーター:「Scoring parameters」欄:マトリックス:BLOSUM62;ギャップコスト:既存:11エクステンション:1;組成調整(compositional adjustments):条件成分に応じたマトリックス調整(Conditional compositional score matrix adjustment)
- アルゴリズムパラメーター:「Filters and Masking」欄:フィルター:無し;マスク:無し
の設定を使用して望み通り調節可能である。
a.炭水化物修飾酵素、例えばグリコシルヒドロラーゼ、グリコシルトランスフェラーゼ、ポリサッカライドリアーゼ、炭水化物エステラーゼ等、
b.アミノ酸、ペプチド、又はタンパク質修飾酵素、例えばアミノトランスフェラーゼ、プロテアーゼ、及びペプチダーゼ等、並びに
c.脂質修飾酵素、例えばリパーゼ又はホスホリパーゼ等
からなる群から選択される方法に関する。
a.組換え酵素産物を含有する細胞破壊未精製ライセートを、ヌクレアーゼを用いて処理するステップと、これにより組換え酵素産物、分解された核酸、及び任意選択で細胞デブリを含む組成物IIを提供し、
b.核酸と複合体化するように沈殿剤を添加するステップ、これにより酵素産物、複合体化した分解された核酸、及び任意選択で細胞デブリを含む組成物IIIを提供し、
c.液相から細胞デブリ及び核酸/沈殿剤複合体を取り除くために液体/固体分離を行うステップと、これにより、複合体化した分解された核酸、及び任意選択で細胞デブリを含む分離固相、並びに酵素産物を含む液体組成物IVを提供し、
d.残留固体及び/又は高分子量コンポーネントを取り除くためにマイクロ濾過ステップを実施するステップ、これにより酵素産物を含む組成物Vを提供する、
を含む方法に関する。
a.組成物Iとの比較において、組成物V中の核酸含有量が低下していること、及び/又は
b.組成物Iとの比較において、組成物V中の酵素産物の触媒活性が回復していること
により特徴づけられる。
a.炭水化物修飾酵素、例えばグリコシルヒドロラーゼ、グリコシルトランスフェラーゼ、ポリサッカライドリアーゼ、炭水化物エステラーゼ等、
b.アミノ酸、ペプチド、又はタンパク質修飾酵素、例えばアミノトランスフェラーゼ、プロテアーゼ、及びペプチダーゼ等、及び
c.脂質修飾酵素、例えばリパーゼ又はホスホリパーゼ等
からなる群から選択される調製物に関する。
A)大腸菌株を提供するステップと、
B)任意選択で、栄養培地を添加するステップと、
C)発酵させるステップと、これにより発酵ブロスを取得する、
D)任意選択で、発酵ブロスの固体/液体分離を行うステップと、これによりバイオマスを取得する、
E)任意選択で、ホモジナイゼーションするステップと、
F)ヌクレアーゼを用いて処理するステップ;任意選択で、その後に沈殿剤を添加するステップと、
G)固体/液体分離を行うステップと、これにより上清を取得する、
H)任意選択で、濾過を行うステップと、これにより酵素調製物を取得する、
を含む、酵素調製物を製造する方法とも関連する。
a.炭水化物修飾酵素、例えばグリコシルヒドロラーゼ、グリコシルトランスフェラーゼ、ポリサッカライドリアーゼ、炭水化物エステラーゼ等、
b.アミノ酸、ペプチド、又はタンパク質修飾酵素、例えばアミノトランスフェラーゼ、プロテアーゼ、及びペプチダーゼ等、並びに
c.脂質修飾酵素、例えばリパーゼ又はホスホリパーゼ等
からなる群から選択される酵素調製物に関する。
a)微生物宿主において組換え酵素を細胞内発現させるステップと
b)細胞破壊により組換え酵素を放出させるステップと、これにより未精製のライセートをもたらし、
c)プロセス溶液を含有する酵素産物内で核酸を分解するためにヌクレアーゼを添加するステップと、これにより酵素処理されたライセートをもたらし、
d)核酸と複合体化するように沈殿剤を添加するステップと、これにより複合体化したライセートをもたらすステップと、
e)液相から細胞デブリ及び核酸/沈殿剤複合体を取り除くために液体/固体分離を行うステップと、これにより清澄化したライセートをもたらし、
f)残留固体及び/又は高分子量コンポーネントを取り除くためにマイクロ濾過ステップを実施するステップと、これにより濾液をもたらす、
を含み、好ましくは、液体/固体分離ステップe)の後、及び/又はマイクロ濾過ステップf)の後に、未精製のライセート若しくは濾液のいずれについてもヌクレアーゼ酵素を用いて行われる処理を含まない、食品グレード酵素産物を製造する方法。
a)酵素産物遺伝子を発現ベクターにクローニングするステップ、
b)酵素産物遺伝子を有する発現ベクターを微生物宿主に導入するステップ、
c)組換え酵素産物を細胞内発現させる条件下で、ステップ(b)の微生物宿主を発酵させるステップ、
d)組換え酵素産物を放出させるために、細胞破壊によりステップcの発酵させた細胞を破壊するステップ、これにより組換え酵素産物を含有する未精製のライセートをもたらす;
e)清澄化したライセートに由来する核酸を分解するために、清澄化したライセートをヌクレアーゼと共にインキュベートするステップ、これにより酵素処理されたライセートをもたらす、
f)核酸と複合体形成するように沈殿剤をライセートに添加するステップ、これにより組換え酵素産物を含有する複合体化したライセートをもたらす、
g)液相から細胞デブリ及び核酸と沈殿剤の複合体を取り除くために複合体化したライセートの液体及び/又は固体分離を行うステップ、これにより組換え酵素産物を含有する清澄化したライセートをもたらす、並びに
h)残留固体及び/又は高分子量コンポーネントを取り除くために、酵素処理されたライセートをマイクロ濾過ステップに供するステップ
のうちの1つ又は複数を含むことを特徴とする、組換え酵素産物を製造する方法であって、
好ましくは、液体/固体分離ステップgの後、及び/又はマイクロ濾過ステップhの後に、未精製のライセート又は濾液のいずれについても、ヌクレアーゼ酵素を用いて行われる処理を含まない方法。
a)カチオン性のポリアミンに基づく凝集剤、例えばジメチルアミン-エピクロロヒドリンコポリマー(CAS Reg No.25988-97-0)、メチルアミン-エピクロロヒドリンコポリマー(CAS Reg No.31568-35-1)、ジメチルアミン-エピクロロヒドリン-エチレンジアミンターポリマー(CAS Reg No.42751-79-1)等、
b)カチオン性のポリアクリルアミドに基づく凝集剤、例えばホルムアルデヒド及びジメチルアミンと共に縮合させることにより改変されたポリアクリルアミド(CAS Reg No.67953-80-4)、アクリルアミド-アクリロキシエチルトリメチルアンモニウムクロライドコポリマー(CAS Reg No.69418-26-4)等、
c)陰イオン性のポリアミンに基づく凝集剤、例えばアクリルアミド-アクリル酸コポリマー(CAS Reg No.25987-30-8;CAS Reg No.9003-06-9)等、
d)硫酸アンモニウム(CAS Reg No.10043-01-3)、
e)塩化カルシウム(CAS Reg No.10035-04-8;CAS Reg No.10043-52-4)
の凝集剤からなる群より選択される、条項1から6のいずれか1項に記載の方法。
a)炭水化物修飾酵素、例えばグリコシルヒドロラーゼ、グリコシルトランスフェラーゼ、ポリサッカライドリアーゼ、炭水化物エステラーゼ等、
b)アミノ酸、ペプチド、又はタンパク質修飾酵素、例えばアミノトランスフェラーゼ、プロテアーゼ、及びペプチダーゼ等、並びに
c)脂質修飾酵素、例えばリパーゼ又はホスホリパーゼ等
からなる群から選択される、条項1から20のいずれか1項に記載の方法。
a)組換え酵素産物を含有する細胞破壊未精製ライセートを、ヌクレアーゼを用いて処理するステップと、
b)沈殿剤を添加するステップと、これにより核酸を複合体化させ、
c)液相から細胞デブリ及び核酸/沈殿剤複合体を取り除くために、液体/固体分離を行うステップと、
d)残留固体及び/又は高分子量コンポーネントを取り除くために、マイクロ濾過ステップを実施するステップと
を含む、条項1から23のいずれか1項に記載の方法。
a)炭水化物修飾酵素、例えばグリコシルヒドロラーゼ、グリコシルトランスフェラーゼ、ポリサッカライドリアーゼ、炭水化物エステラーゼ等、
b)アミノ酸、ペプチド、又はタンパク質修飾酵素、例えばアミノトランスフェラーゼ、プロテアーゼ、及びペプチダーゼ等、並びに
c)脂質修飾酵素、例えばリパーゼ又はホスホリパーゼ等
からなる群から選択される調製物。
a)炭水化物修飾酵素、例えばグリコシルヒドロラーゼ、グリコシルトランスフェラーゼ、ポリサッカライドリアーゼ、炭水化物エステラーゼ等、
b)アミノ酸、ペプチド、又はタンパク質修飾酵素、例えばアミノトランスフェラーゼ、プロテアーゼ、及びペプチダーゼ等、並びに
c)脂質修飾酵素、例えばリパーゼ又はホスホリパーゼ等、
からなる群から選択される、条項29から32のいずれか1項に記載の酵素調製物。
<組成物Iを用いた組換え酵素産物の処理>
発現プラスミドpLE1A27(よく知られたベクターpRSF-1bの派生体)上にコードされるスクロースシンターゼ遺伝子を有し、スクロースシンターゼを細胞内で発現する組換え発現宿主LE1B109のバイオマスのホモジナイゼーションにより、シロイヌナズナから組換えスクロースシンターゼの未精製細胞抽出物(NCBI参照配列:NP_197583.1,配列番号33)を調製する。ホモジナイズされるバイオマスは、発酵ブロスの濃縮により取得された濃縮済みの細胞調製物であり、600g/Lのバイオマス当量に調整される。ホモジナイゼーション後に、組成物Iが得られる。
<野生型シロイヌナズナのスクロースシンターゼの発現及びその処方物>
野生型シロイヌナズナのスクロースシンターゼをコードする遺伝子(NCBI参照配列:NP_197583.1、配列番号33)を、発現ベクターpLE1A17(pRSF-lbの派生体、Novagen社)にクローン化する。得られたプラスミドは、大腸菌BL21(DE3)細胞の形質転換に使用する。
<野生型トマトのUDP-グリコシルトランスフェラーゼの発現及びその処方物>
野生型トマトのUDP-グリコシルトランスフェラーゼをコードする遺伝子(UGTSL2)(GenBank受託番号XP_004250485.1、配列番号55)を、発現ベクターpLE1A17(pRSF-1bの派生体、Novagen社)にクローン化する。得られたプラスミドは、大腸菌BL21(DE3)細胞の形質転換に使用する。
<野生型ステビア・レバウディアナのグリコシルトランスフェラーゼの発現及びその処方物>
野生型ステビア・レバウディアナのグリコシルトランスフェラーゼをコードする遺伝子(UGT76G1)(GenBank受託番号AAR06912.1、配列番号4)を、発現ベクターpLE1A17(pRSF-1bの派生体、Novagen社)にクローン化する。得られたプラスミドは、大腸菌BL21(DE3)細胞の形質転換に使用する。
Claims (15)
- 組換え酵素処方物を製造する方法であって、
(i)組換え酵素及び核酸を含む組成物Iを提供するステップと、
(ii)前記核酸を分解するために前記組成物Iにヌクレアーゼを添加するステップと、これにより酵素及び分解された核酸を含む組成物IIを提供し、
(iii)前記分解された核酸と複合体化させるために、組成物IIに前記分解された核酸用の沈殿剤を添加するステップと、これにより前記酵素及び複合体化した分解された核酸を含む組成物IIIを提供し、
(v)マイクロ濾過により前記組成物IIIを精製するステップと、これにより前記酵素を含む組成物Vを提供する、
を含み、前記ステップ(i)、(ii)、(iii)および(v)を番号順で連続的に実施する方法。 - 前記ステップ(iii)および(v)の間に、追加のステップ:
(iv)固体/液体分離により前記組成物IIIを精製するステップであって、これにより前記複合体化した分解された核酸を含む分離固相、並びに前記酵素を含む液体組成物IVを提供する、ステップ
をさらに含む請求項1に記載の方法。 - 前記ヌクレアーゼが、エンドヌクレアーゼ、エキソヌクレアーゼ、又は混合したエキソ/エンドヌクレアーゼからなる群から選択され、
前記ヌクレアーゼが、配列番号1又は配列番号2の配列と、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%、又は少なくとも99%同一である、
請求項1に記載の方法。 - 追加のステップ:
(vi)追加のマイクロ濾過又は限外濾過により前記組成物Vを精製するステップであって、これにより前記酵素を含む組成物VIを提供する、ステップ
を含む、請求項1~3のいずれか1項に記載の方法。 - 前記沈殿剤が、カチオン性ポリマーである、請求項1~4のいずれか1項に記載の方法。
- 前記沈殿剤が、キトサン、ポリアミン、ポリアミノ酸、及びポリジアリルジメチルアンモニウムクロライドからなる群から選択される、請求項1~5のいずれか1項に記載の方法。
- 前記沈殿剤が、
- ポリアリルアミン、ポリビニルアミン、ポリエチレンイミン、及びポリ-N-メチルビニルアミン;並びに
- ポリアルギニン、ポリリジン、及びポリアクリルアミド
からなる群から選択される、請求項1~6のいずれか1項に記載の方法。 - 前記沈殿剤が、
- カチオン性のポリアミンに基づく凝集剤、
- カチオン性のポリアクリルアミドに基づく凝集剤、
- 陰イオン性のポリアミンに基づく凝集剤、
- 硫酸アンモニウム、及び
- 塩化カルシウム
からなる群から選択される凝集剤である、又はそれを含む、請求項1~7のいずれか1項に記載の方法。 - 前記沈殿剤が、
- ジメチルアミン-エピクロロヒドリンコポリマー、メチルアミン-エピクロロヒドリンコポリマー、及びジメチルアミン-エピクロロヒドリン-エチレンジアミンターポリマー、並びに
- ホルムアルデヒド及びジメチルアミンと共に縮合させることにより改変されたポリアクリルアミド、及びアクリルアミド-アクリロキシエチルトリメチルアンモニウムクロライドコポリマー、並びに
- アクリルアミド-アクリル酸コポリマー
からなる群から選択される凝集剤である、又はそれを含む、請求項1~8のいずれか1項に記載の方法。 - 前記ステップ(i)が、
(i-a)前記酵素の遺伝子を発現ベクターにクローニングするサブステップ、
(i-b)前記遺伝子を有する前記発現ベクターを微生物宿主に導入するサブステップ、
(i-c)微生物宿主において前記酵素を細胞内発現させるサブステップ、すなわち前記組換え酵素を細胞内発現させる条件下で、前記微生物宿主を発酵させるサブステップ、及び
(i-d)細胞破壊により、前記微生物宿主から前記酵素を放出させるサブステップ、これにより前記組成物Iを提供する、すなわち、前記組換え酵素を放出させるために、細胞破壊により前記発酵させた細胞を破壊するサブステップ、これにより組換え酵素産物を含む未精製のライセートをもたらす、
のうちの1つ又は複数を含む、請求項1~9のいずれか1項に記載の方法。 - a)微生物宿主において組換え酵素を細胞内発現させるステップと、
b)細胞破壊により前記組換え酵素を放出させるステップと、これにより未精製のライセートをもたらし、
c)プロセス溶液を含有する前記酵素産物内で核酸を分解するためにヌクレアーゼを添加するステップと、これにより酵素処理されたライセートをもたらし、
d)核酸を複合体化させるための沈殿剤を添加するステップと、これにより複合体化したライセートをもたらし、
e)液相から細胞デブリ及び核酸/沈殿剤複合体を取り除くために液体/固体分離を行うステップと、これにより清澄化したライセートをもたらし、
f)残留固体及び/又は高分子量コンポーネントを取り除くためにマイクロ濾過ステップを実施するステップと、これにより濾液をもたらす、
を含み、前記ステップa)~f)をアルファベット順で連続的に実施する食品グレードの酵素産物を製造する方法。 - 前記ステップd)において、1つ又は複数の適する凝集剤が添加される、請求項11に記載の方法。
- 前記凝集剤が、
a)カチオン性のポリアミンに基づく凝集剤、例えばジメチルアミン-エピクロロヒドリンコポリマー(CAS Reg No.25988-97-0)、メチルアミン-エピクロロヒドリンコポリマー(CAS Reg No.31568-35-1)、ジメチルアミン-エピクロロヒドリン-エチレンジアミンターポリマー(CAS Reg No.42751-79-1)等、
b)カチオン性のポリアクリルアミドに基づく凝集剤、例えばホルムアルデヒド及びジメチルアミンと共に縮合させることにより改変されたポリアクリルアミド(CAS Reg No.67953-80-4)、アクリルアミド-アクリロキシエチルトリメチルアンモニウムクロライドコポリマー(CAS Reg No.69418-26-4)等、
c)陰イオン性のポリアミンに基づく凝集剤、例えばアクリルアミド-アクリル酸コポリマー(CAS Reg No.25987-30-8;CAS Reg No.9003-06-9)等、
d)硫酸アンモニウム(CAS Reg No.10043-01-3)、
e)塩化カルシウム(CAS Reg No.10035-04-8;CAS Reg No.10043-52-4)
からなる群から選択される、請求項12に記載の方法。 - 前記沈殿剤が、ポリエチレンイミン及びポリジアリルジメチルアンモニウムクロライドからなる群から選択される、請求項11~13のいずれか1項に記載の方法。
- 使用される機能的に活性なヌクレアーゼが、配列番号1又は配列番号2の配列と少なくとも70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、又は99%同一である、請求項1~14のいずれか1項に記載の方法。
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Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002520033A (ja) | 1998-07-17 | 2002-07-09 | スミスクライン・ビーチャム・パブリック・リミテッド・カンパニー | β−ラクタムシンセターゼ活性を有するポリペプチドを用いることを特徴とするクラバム誘導体の製法 |
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Family Cites Families (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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DK210085D0 (da) * | 1985-05-10 | 1985-05-10 | Benzon As Alfred | Fremgangsmaade til fremstilling af bakterielle enzymer |
US5173418A (en) * | 1985-05-10 | 1992-12-22 | Benzon Pharma, A/S | Production in Escherichia coli of extracellular Serratia spp. hydrolases |
EP0252588A3 (en) * | 1986-05-12 | 1989-07-12 | Smithkline Beecham Corporation | Process for the isolation and purification of p. falciparum cs protein expressed in recombinant e. coli, and its use as a vaccine |
JPH04354585A (ja) * | 1991-05-31 | 1992-12-08 | Kao Corp | 発酵液の処理方法 |
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ATE412737T1 (de) * | 2005-04-11 | 2008-11-15 | Crucell Holland Bv | Virusreinigung mit ultrafiltration |
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JP2002520033A (ja) | 1998-07-17 | 2002-07-09 | スミスクライン・ビーチャム・パブリック・リミテッド・カンパニー | β−ラクタムシンセターゼ活性を有するポリペプチドを用いることを特徴とするクラバム誘導体の製法 |
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