JP7255942B2 - 蛍光イムノクロマトグラフィー用イムノクロマトキット及びこのイムノクロマトキットを備えたハウジングケース - Google Patents
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Description
第一発明
少なくともメンブレンとバッキングシートとを備えたイムノクロマトキットにおいて、上記メンブレンと上記バッキングシートとの間に発光抑制シートを備え、当該発光抑制シートに波長365nmの励起光を照射した際に、絶対PL量子収率測定装置C11347(浜松ホトニクス株式会社製)にて測定した量子収率が0.40%以下であることを特徴とするイムノクロマトキット。
第二発明
少なくともメンブレンとバッキングシートとを備えたイムノクロマトキットにおいて、上記メンブレンと上記バッキングシートとの間に発光抑制シートを備え、当該発光抑制シートに波長254nmの励起光を照射した際に、絶対PL量子収率測定装置C11347(浜松ホトニクス株式会社製)にて測定した量子収率が0.40%以下であることを特徴とするイムノクロマトキット。
第三発明
メンブレンとバッキングシートとを備えたイムノクロマトキットにおいて、上記バッキングシートに波長365nmの励起光を照射した際に、絶対PL量子収率測定装置C11347(浜松ホトニクス株式会社製)にて測定した量子収率が0.40%以下であることを特徴とするイムノクロマトキット。
第四発明
メンブレンとバッキングシートとを備えたイムノクロマトキットにおいて、上記バッキングシートに波長254nmの励起光を照射した際に、絶対PL量子収率測定装置C11347(浜松ホトニクス株式会社製)にて測定した量子収率が0.40%以下であることを特徴とするイムノクロマトキット。
第五発明
メンブレンとバッキングシートとを備えたイムノクロマトキットをハウジングケースの底板表面に載置したイムノクロマトグラフィー装置において、当該イムノクロマトグラフィー装置に波長365nmの励起光を照射した際に、絶対PL量子収率測定装置C11347(浜松ホトニクス株式会社製)にて測定した量子収率が0.40%以下であることを特徴とするイムノクロマトグラフィー装置。
第六発明
第一発明及び第二発明のイムノクロマトキットを黒色のハウジングケースに配置したことを特徴とするイムノクロマトグラフィー装置。
第七発明
メンブレンへの検体の滴下後に当該メンブレンに表示される抗体ラインの検出方法であって、上記メンブレンとバッキングシートとの間に第一発明又は第二発明の発光抑制シートを配置し、または、上記メンブレンの下側に第三発明又は第四発明のバッキングシートを配置し、または、上記メンブレンとバッキングシートの下側に第五発明又は第六発明のハウジングケースを配置した状態で、上記メンブレンに光照射を行うことを含む、前記検出方法。
まず、本実施例の発光抑制シートの量子収率を調べた。測定対象の発光抑制シートとして、ビニルテープ(Horyku)を用いた試料1(黒色)、および試料2(白色)マスキングテープ(Copeflap)を用いた試料3(緑色)、試料4(赤色)、試料5(青色)、試料6(クリーム色)、および試料7(ピンク色)を採用した。そして上記各試料を一辺が約1 cmの正方形にカットし、量子収率測定装置(Quantaurus-QY絶対PL量子収率測定装置C11347、浜松ホトニクス株式会社、日本)の計測用シャーレ上にテープを粘着部分が下になるように載置した。そして上記計測用シャーレを試料台にセットし、各試料の量子収率を測定した。測定条件として、室温下で固体測定、励起光365 nmまたは254 nmに設定した。当該測定結果について、各試料とその量子収率との関係を表1に示す。測定の結果、365nm、254nmのいずれも同じような傾向にあり、表1に示す如く試料1、3~5の量子収率は0.4%以下の比較的低い値を示したのに対し、試料2、6、7については1.30%以上の高い値を示した。
次に、抗体ラインを含まないメンブレンに励起光(波長365 nm)を照射したときの量子収率の測定実験を行った。この測定に先立ち、抗体を固定していないメンブレン、各種テープおよびバッキングシートからなるイムノクロマトキットを作製した。すなわち、バッキングシート(Lohmann(G&L))を配置し、当該バッキングシートの中央部に各試料(試料1~7)を張り付けた。そして上記各試料の上に、上記メンブレンを当該試料にぴったり重なるように張り付け、メンブレン、各試料およびバッキングシートからなるイムノクロマトキットを作製した(図2参照)。また、図7に示す如くバッキングシートの表面に試料を配置することなく直接メンブレンを配置した従来のイムノクロマトキットについても同様に作製した。測定結果を以下の表2に示す。
1次抗体として、抗マウスIgGウサギ抗体(イムノ・プローブ)を使用した。メンブレン(支持体:ポリエチレンテレフタラート(PET)フィルム)に、1次抗体を含むPBS(1.5 mg/mL)を、ステンレス製の管を用いて直線状に添加し、ドライオーブンを用いて60℃、30分間乾燥させ、ブロッキングバッファー(1.0%カゼイン、0.1 Mホウ酸バッファー pH8.5)に浸し、30分間静置させた。ブロッキングを行ったメンブレンは、洗浄バッファー(10.0 %スクロース、0.1%コール酸ナトリウム、0.1 Mトリス(ヒドロキシメチル)アミノエタン バッファー pH 7.5)に浸し、30分間振とうさせ、余分な水分をふき取り湿度20%以下で一晩乾燥させた。
バッキングシート(Lohmann(G&L))を粘着部分が上になるように用意し、バッキングシート中央部に試料1~7を粘着部分が上になるように張り付けた。そして張り付けた試料の上に、上記の如く抗体を固定したメンブレンをテープにぴったり重なるように張り付け、当該メンブレン、各試料、およびバッキングシートからなるイムノクロマトキットを作製した。また同様に、上記試料を張り付けない従来のイムノクロマトキットについても同様に作製した
上記の如く作製した各イムノクロマトキットをハウジングケース内に収納し、当該イムノクロマトキットを蛍光標識したマウスIgG(抗インフルエンザA型抗体)(2次抗体として使用)を含むPBS(100 μg/mL)と反応させた。ここで使用した蛍光標識は、最大蛍光波長510 nmの蛍光色素を内包したポリスチレンビーズである。また、蛍光色素は、シロール誘導体を使用した(Yamaguchiら, Chem. Eur. J., 6(9):1683-1692 2000を参照のこと)。 反応終了後、イムノクロマトキットを蛍光リーダー(武蔵オプティカルシステム株式会社)にセットし、励起光(波長365 nm)をメンブレンに照射して、抗体ラインの観察を行った。観察した画像を図4に示す。
1次抗体として、抗マウスIgGウサギ抗体(イムノ・プローブ)を使用した。メンブレン(支持体:ポリエチレンテレフタラート(PET)フィルム)に、1次抗体を含むPBS(1.5 mg/mL)を、ステンレス製の管を用いて直線状に添加し、ドライオーブンを用いて60℃、30分間乾燥させ、ブロッキングバッファー(1.0%カゼイン、0.1 Mホウ酸バッファー pH8.5)に浸し、30分間静置させた。ブロッキングを行ったメンブレンは、洗浄バッファー(10.0 %スクロース、0.1%コール酸ナトリウム、0.1 Mトリス(ヒドロキシメチル)
アミノエタン バッファー pH 7.5)に浸し、30分間振とうさせ、余分な水分をふき取り湿度20%以下で一晩乾燥させた。
本実施例のバッキングシートに該当する上記試料1を、粘着部分側を表にして配置し、上記の如く作製したメンブレンを試料1にぴったり重なるように張り付け、メンブレンおよび試料1からなるイムノクロマトキットを作製した。またこれと同様に、従来のバッキングシートを用いたイムノクロマトキットを作製した。
まず、抗体ラインを含まない上記各イムノクロマトキットのメンブレンに励起光(波長365 nm)を照射したときの量子収率を、上記実施例1と同様に測定した。その結果を表3に示す。尚、表3において「実施例2」との表示は試料1のバッキングシートを用いたイムノクロマトキットであり、「従来例」との表示は従来のバッキングシート(Lohmann(G&L))を用いたイムノクロマトキットであることを意味する。
実施例2及び従来例の各イムノクロマトキットを、ハウジングケースに収納した状態で蛍光標識したマウスIgG(抗インフルエンザA型抗体)(2次抗体として使用)を含むPBS(100 μg/mL)と反応させた。ここで使用した蛍光標識は、最大蛍光波長510 nmの蛍光色素を内包したポリスチレンビーズである。また、蛍光色素は、シロール誘導体を使用した(Yamaguchiら, Chem. Eur. J., 6(9):1683-1692 2000を参照のこと)。反応終了後、各イムノクロマトキットを蛍光リーダー(武蔵オプティカルシステム株式会社)にセットし、励起光(波長365 nm)をメンブレンに照射して、抗体ラインの観察を行った。観察した画像を図4に示す。図4より、従来例の場合と比較して、実施例2の方が、メンブレンのバックグラウンド発光の低減効果が顕著であることが確認できた。
1次抗体として、抗マウスIgGウサギ抗体(イムノ・プローブ)を使用した。メンブレン(支持体:ポリエチレンテレフタラート(PET)フィルム)に、1次抗体を含むPBS(1.5 mg/mL)を、ステンレス製の管を用いて直線状に添加し、ドライオーブンを用いて60℃、30分間乾燥させ、ブロッキングバッファー(1.0%カゼイン、0.1 Mホウ酸バッファー pH8.5)に浸し、30分間静置させた。ブロッキングを行ったメンブレンは、洗浄バッファー(10.0 %スクロース、0.1%コール酸ナトリウム、0.1 Mトリス(ヒドロキシメチル)アミノエタン バッファー pH 7.5)に浸し、30分間振とうさせ、余分な水分をふき取り湿度20%以下で一晩乾燥させた。
従来のバッキングシート(Lohmann(G&L))を粘着部分が上になるように配置し、当該バッキングシートの中央部に各種試料(試料1~7)を、粘着部分が上になるように張り付けた。そして上記各試料の上に、上記メンブレンをテープにぴったり重なるように張り付け、メンブレン、試料1の発光抑制シート、およびバッキングシートからなるイムノクロマトキットを作製した(図参照)。そしてこのイムノクロマトキットを、図5に示す黒色及び白色のハウジングケースに各々収納し、イムノクロマトグラフィー装置を作製した。
上記の如く作製したイムノクロマトキットを、蛍光標識したマウスIgG(抗インフルエンザA型抗体)(2次抗体として使用)を含むPBS(100 μg/mL)と反応させた。ここで使用した蛍光標識は、最大蛍光波長510 nmの蛍光色素を内包したポリスチレンビーズである。また、蛍光色素は、シロール誘導体を使用した(Yamaguchiら, Chem. Eur. J., 6(9):1683-1692 2000を参照のこと)。反応終了後、各イムノクロマトキットを蛍光リーダー(武蔵オプティカルシステム株式会社)にセットし、励起光(波長365 nm)をメンブレンに照射して、抗体ラインの観察を行った。観察した画像を図6に示す。図6から、白色のハウジングケースを使用したものと比較して、黒色のハウジングケースを使用したものの方が、メンブレンのバックグラウンド発光の低減効果が更に顕著であることが確認できた。
Claims (5)
- 少なくともメンブレンとバッキングシートとを備えたイムノクロマトキットにおいて、上記メンブレンと上記バッキングシートとの間に発光抑制シートを備え、当該発光抑制シートに波長365nmの励起光を照射した際の量子収率が0.40%以下であることを特徴とするイムノクロマトキット。
- 少なくともメンブレンとバッキングシートとを備えたイムノクロマトキットにおいて、上記メンブレンと上記バッキングシートとの間に発光抑制シートを備え、当該発光抑制シートに波長254nmの励起光を照射した際の量子収率が0.40%以下であることを特徴とするイムノクロマトキット。
- メンブレンとバッキングシートとを備えたイムノクロマトキットをハウジングケースの底板表面に載置したイムノクロマトグラフィー装置において、当該イムノクロマトグラフィー装置に波長365nmの励起光を照射した際の量子収率が0.40%以下となることを特徴とするイムノクロマトグラフィー装置。
- 請求項1または2のイムノクロマトキットを黒色のハウジングケースに配置したことを特徴とするイムノクロマトグラフィー装置。
- メンブレンへの検体の滴下後に当該メンブレンに表示される抗体ラインの検出方法であって、上記メンブレンとバッキングシートとの間に請求項1又は請求項2の発光抑制シートを配置した状態で、上記メンブレンに光照射を行うことを含む、前記検出方法。
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