JP2010528294A - 活性化された化学発光基質からエネルギー受容体色素へのエネルギー転移により生体分子を検出するための試薬、キットおよび方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、一般には、試料中の生体分子を検出するための試薬、キットおよび方法に関する。
生物検定法の需要家は、単純で少ない段階(例えば、分離段階なし)、すなわち結果を得るための少ない労力と短時間を好んで、不均一検定法の代わりに均一検定様式をどんどん採用しつつある。
下記を含む製造物品を提供する;
表面を有する支持体;
支持体表面上の化学発光増強物質;
支持体表面上のエネルギー受容体色素;および
支持体表面上の1つまたは複数の生体分子プローブ。
1つまたは複数の生体分子プローブが、分析物に結合することができるプローブ、または分析物があれば分析物に結合するプローブを含む、前述の製造物品;
化学発光基質;および
任意で、酵素標識生体分子または酵素標識分析物。酵素標識生体分子は、分析物が表面に結合したプローブに結合すると、分析物に結合することができる。酵素標識分析物は、表面に結合したプローブへの結合について、試料中の非標識分析物と競合することができる。
試料を前述の製造物品と接触させる段階であって、1つまたは複数の生体分子プローブが分析物に結合することができるプローブを含む、段階;
試料中の分析物をプローブに結合させる段階であって、(a)分析物が酵素であるか、(b)分析物が酵素で標識されているか、(c)支持体表面を、分析物に結合する酵素標識生体分子と接触させるか、または(d)分析物が非標識であり、酵素標識分析物を試料に加えて、プローブへの結合について試料中の酵素標識分析物を非標識分析物と競合させる、段階;
支持体表面を酵素によって活性化される化学発光基質と接触させ、ここで活性化された化学発光基質はエネルギー受容体色素を励起して、そこからの放射を引き起こす段階;および
エネルギー受容体色素からの放射を検出する段階。
表面を有する支持体、支持体表面上のエネルギー受容体色素、および支持体表面上の1つまたは複数の生体分子プローブを含む製造物品であって、1つまたは複数の生体分子プローブが、分析物に結合することができるかまたは分析物があれば分析物に結合する1つまたは複数の生体分子プローブを含む、製造物品;
化学発光基質;および
任意で、酵素標識生体分子または酵素標識分析物。酵素標識生体分子は、分析物が表面に結合したプローブに結合すると、分析物に結合することができる。酵素標識分析物は、表面に結合したプローブへの結合について、試料中の非標識分析物と競合することができる。
表面を有する支持体、支持体表面上の第一の化学発光増強物質、支持体表面上の第一のエネルギー受容体色素、および支持体表面上の第一の生体分子プローブを含む第一の製造物品を試料と接触させる段階であって、第一の生体分子プローブが第一の分析物に結合することができる、段階;
表面を有する支持体、支持体表面上の第二の化学発光増強物質、支持体表面上の第二のエネルギー受容体色素、および支持体表面上の第二の生体分子プローブを含む第二の製造物品を試料と接触させる段階であって、第二の生体分子プローブが第二の分析物に結合することができる、段階;
試料中の第一の分析物を第一の生体分子プローブに結合させる段階であって、(a)第一の分析物が第一の酵素であるか、(b)第一の分析物が第一の酵素で標識されているか、(c)第一の製造物品の支持体表面を、第一の酵素で標識されかつ第一の分析物に結合する生体分子と接触させるか、または(d)第一の分析物は非標識であり、第一の酵素で標識された第一の分析物を試料に加えて、第一の生体分子プローブへの結合について試料中の酵素標識された第一の分析物を非標識の第一の分析物と競合させる、段階;
試料中の第二の分析物を第二の生体分子プローブに結合させる段階であって、(a)第二の分析物が第二の酵素であるか、(b)第二の分析物が第二の酵素で標識されているか、(c)第二の製造物品の支持体表面を、第二の酵素で標識されかつ第二の分析物に結合する生体分子と接触させるか、または(d)第二の分析物が非標識であり、第二の酵素で標識された第二の分析物を試料に加えて、第二の生体分子プローブへの結合について試料中の酵素標識された第二の分析物を非標識の第二の分析物と競合させる、段階;
第一の製造物品を第一の酵素によって活性化される第一の化学発光基質と接触させ、ここで活性化された第一の化学発光基質は第一のエネルギー受容体色素を励起して、そこからの放射を引き起こし、かつ第二の製造物品を第二の酵素によって活性化される第二の化学発光基質と接触させ、ここで活性化された第二の化学発光基質は第二のエネルギー受容体色素を励起して、そこからの放射を引き起こす段階;および
第一のエネルギー受容体色素からの放射を検出し、かつ第二のエネルギー受容体色素からの放射を検出する段階であって、第一のエネルギー受容体色素からの放射は第二のエネルギー受容体色素からの放射と識別可能である、段階。
下記を含む第一の製造物品:表面を有する第一の支持体、支持体表面上の第一の化学発光増強物質、支持体表面上の第一のエネルギー受容体色素、および支持体表面上の第一の生体分子プローブであって、第一の分析物に結合することができるか、または第一の分析物があれば第一の分析物に結合する第一の生体分子プローブ;
下記を含む第二の製造物品:表面を有する支持体、支持体表面上の第二の化学発光増強物質、支持体表面上の第二のエネルギー受容体色素、および支持体表面上の第二の生体分子プローブであって、第二の分析物に結合することができるか、または第二の分析物があれば第二の分析物に結合する第二の生体分子プローブ;
第一の化学発光基質、ここで活性化された第一の化学発光基質は第一のエネルギー受容体色素を励起して、そこからの放射を引き起こす;
第二の化学発光基質、ここで活性化された第二の化学発光基質は第二のエネルギー受容体色素を励起して、そこからの放射を引き起こし、ここで第一のエネルギー受容体色素からの放射は第二のエネルギー受容体色素からの放射と識別可能である;
任意で、第一の酵素標識生体分子または第一の酵素で標識された第一の分析物;
任意で、第二の酵素標識生体分子または第二の酵素で標識された第二の分析物。
本明細書を説明するために、下記の定義を適用し、適当な場合はいつでも、単数形で用いられる用語は複数形も含み、逆も同様である。以下に示す任意の定義が、参照により本明細書に組み入れられる任意の文書を含む任意の他の文書におけるその用語の用法と矛盾する場合、反対の意味が明らかに意図される(例えば、その用語が元々用いられている文書を説明する)以外は、本明細書およびその関連する特許請求の範囲を説明するために以下に示す定義が常に支配することになる。本明細書における「または」の使用は、そうではないと記載されているか、または「および/または」の使用が明らかに不適当である場合以外は、「および/または」を意味する。本明細書における「一つの(a)」の使用は、そうではないと記載されているか、または「1つまたは複数の」の使用が明らかに不適当である場合以外は、「1つまたは複数の」を意味する。「含む(comprise)」、「含む(comprises)」、「含む(comprising)」、「含む(include)」、「含む(includes)」、および「含む(including)」の使用は交換可能で、限定する意図はない。さらに、1つまたは複数の態様の記載が「含む(comprising)」なる用語を使用する場合、当業者であれば、いくつかの特定の場合には、その態様を「から基本的になる」および/または「からなる」なる言葉を用いて代わりに記載しうることを理解するであろう。
式中、X=COO-またはSO3 -、mは0〜9の整数であり、かつnは1〜9の整数である。これらの色素は文献に記載されており、市販されている(例えば、FEW Chemicals, Wolfen, Germany)。
上式中、各基、R1、R2およびR3はそれぞれ独立に下記を表す:
1から20(両端を含む)の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖無置換アルキルまたはアルケニル基(例えば、メチル、エチル、n-ブチル、t-ブチル、セチルなど);
1つまたは複数のヒドロキシ、アルコキシ(例えば、メトキシ、エトキシ、ベンジルオキシ、またはポリエチレンオキシ)、アリールオキシ(例えば、フェノキシ)、アミノもしくは置換アミノ(例えば、アセトアミドまたはコレステリルオキシカルボニルアミド)、またはハロゲンもしくはフルオロアルカンもしくはフルオロアリール(例えば、ヘプタフルオロブチル)基で置換された、1から20(両端を含む)の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖アルキル基;
3から12(両端を含む)の環炭素原子を有する無置換モノシクロアルキル基(例えば、シクロヘキシルまたはシクロオクチル);
1つまたは複数のアルキル、アルコキシ、ハロアキル(haloakyl)、または縮合ベンゾ基(例えば、ジメチルシクロヘキシルまたはテトラヒドロナフチル)で置換された、3から12(両端を含む)の環炭素原子を有する置換モノシクロアルキル基(例えば、ジメチルシクロヘキシルまたはテトラヒドロナフチル);
それぞれ5から12(両端を含む)の炭素原子を有し、無置換または1つもしくは複数のアルキル、アルコキシもしくはアリール基で置換された、複数の縮合環を有するポリシクロアルキル(例えば、1-アダマンチルまたは3-フェニル-1-アダマンチル);
少なくとも1つの環および合計6から20(両端を含む)の炭素原子を有し、無置換または1つもしくは複数のアルキル、アリール、ハロゲン、フルオロアルキルもしくはフルオロアリール基で置換された、アリール、アルカリール、またはアラルキル基(例えば、フェニル、ナフチル、ペンタフルオロフェニル、エチルフェニル、ベンジル、クロロもしくはフルオロベンジルまたはフェニルベンジル);
上式中、Mは窒素、またはリンでありうる。R1、R2およびR3基のそれぞれ、ならびに各X-は前述の定義のとおりである。式IVにおいて、側鎖オニウム部分の1つにおけるM、R1、R2またはR3置換基の1つまたは複数は他の側鎖オニウム部分における対応する置換基とは異なる。記号、xおよびyは、コポリマーを構成する個々のモノマーのモル分率を表す。したがって、記号、xおよびyは個別に0.01から0.99まで変動してもよく、xおよびyの和は1に等しい。
X-(R4)3A+CH2 - [リンク] - CH2A+(R5)3X-
式中:
各Aはリンおよび窒素原子からなる群より独立に選択され;
X-はアニオン対イオンであり;
R4およびR5はそれぞれ、R4およびR5が同じでも異なっていてもよいような、1から20の炭素原子を含む無置換および置換アルキルおよびアラルキル基からなる群より独立に選択され;かつ
[リンク]は4から20の炭素原子を含むジアルキレンアリール、アリール、アルキレン、アルケニレンおよびアルキニレン基からなる群より選択される炭素鎖である。化学発光増強剤として用いることができるジカチオン界面活性剤は米国特許第5,451,347号に記載されており、これはその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
ポリ-N-ビニルオキサゾリジノン;
ポリビニルカーバメート(例えば、ポリビニルプロピレンカーバメート);
ポリヒドロキシアクリレートおよびメタクリレート[例えば、ポリ(β-ヒドロキシエチル)メタクリレートおよびポリエチレングリコールモノメタクリレート];
アルキル化またはアラルキル化剤によって4級化された、アミン含有オリゴマー(例えば、Jeffamine);
合成ポリペプチド(例えば、ポリリジンまたはフェニルアラニン);
ポリビニルアルキルエーテル(例えば、ポリビニルメチルエーテル);
ポリ酸およびその塩[例えば、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリビニル安息香酸、ポリエチレンスルホン酸、ポリアクリルアミドメチルプロパンスルホン酸、ポリマレイン酸およびポリ(N-ビニルスクシンアミド酸)];
アンモニアまたは環式もしくは非環式1級もしくは2級アミンから誘導される、ポリアクリルアミドおよびポリメタクリルアミド;
ポリビニルアルコールおよび酢酸ビニル、エチレンなどとのポリビニルアルコールコポリマー;
複素環窒素原子が前述の式IのR1、R2およびR3について定義した基に結合している、ポリ2-、3-または4-ビニルピリジニウム塩;
ポリビニルアルキルピロリジノン(例えば、ポリビニルメチルピロリジノン);
ポリビニルアルキルオキサゾリドン(例えば、ポリビニルメチルオキサゾリドン);
分枝ポリエチレンイミン、アシル化分枝ポリエチレンイミン、またはアルキルもしくはアラルキル基でさらに4級化されたアシル化分枝ポリエチレンイミン;
アンモニアまたは環式もしくは非環式1級もしくは2級アミンから誘導される、ポリN-ビニルアミン、およびその4級塩;
ポリビニルピペリジン;あるいは
正に荷電した窒素原子上の他の置換基が前述の式Iで定義したR1、R2およびR3基のいずれであってもよい、ポリアクリロイル、ポリメタクリロイル、もしくは4-ビニルベンゾイルアミンイミドまたはポリビニルベンジルアミンイミド。
他の例示的化学発光増強ポリマーには、
ポリ(塩化ビニルベンジルジメチルベンジルアンモニウム)(BDMQ)、
ポリ(塩化ビニルベンジルトリメチルアンモニウム)(TMQ)、
ポリ(塩化ビニルベンジルトリブチルアンモニウム)(TBQ)、
ポリ(塩化ビニルベンジルトリブチルホスホニウム)(TB)、ポリ(塩化ビニルベンジルトリオクチルホスホニウム)(TO)およびそのコポリマーが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
1,2-ジオキセタン化学発光基質はCSPD(登録商標)でありえ、これもApplied Biosystemsから市販されている。CSPD(登録商標)は3-(4-メトキシスピロ{1,2-ジオキセタン-3,2'-(5'-クロロ)トリシクロ[3.3.1.13,7]デカン}-4-イル)-1-フェニルリン酸2ナトリウムなる化学名および下記の化学構造を有する:
1,2-ジオキセタン化学発光基質はTFE-CDP-Star(登録商標)でありえ、これもApplied Biosystemsから市販されており、下記の化学構造を有する:
前述の1,2-ジオキセタン化学発光基質は単なる例示であって、他の1,2-ジオキセタン基質を用いることもできる。
本発明の教示の局面は下記の実施例に照らせばさらに理解されると思われるが、これらの実施例はいかなる様式でも本発明の教示の範囲を限定すると解釈されるべきではない。
いくつかの理由により、モデル生物検定試験のための支持体としてPOROS(登録商標)-Aを用いた。プロテインAでコーティングしたPOROS(登録商標)は全体に弱い負の表面電荷を示し、これはTPQなどのカチオン性ポリマー化学発光増強剤でのコーティングと、続くアニオン性シアニン色素でのコーティングを可能にする(例えば、図1に示すものなどの、POROS(登録商標)/TPQ/シアニン色素構築物を形成する)。POROS(登録商標)-HSも全体に負の電荷を有し、この上でJ会合を誘導するのが容易であるということに基づき、POROS(登録商標)-Aにコーティングしたアニオン性シアニン色素も支持体表面上でJ会合体を形成すると予想された。
POROS(登録商標)構築物の調製
1. 0.15ml(約25mg)のPOROS(登録商標)-20Aスラリーをピペットで取り、0.85mlのH2Oに懸濁する。
2. 遠心分離して上清を廃棄する。
3. ビーズを1mlのH2Oで3回洗浄する。
4. ビーズを1mlのTPQ保存溶液(2mg/ml H2O)に懸濁する。
5. プレート振盪機で60分間インキュベートする。
6. 上清を廃棄し、ビーズを1mlの水で2回と1mlの40%MeOH/H2Oで1回逐次洗浄する。
7. ビーズを40%MeOH/H2Oに懸濁し、20μlの色素保存溶液(100mg/2ml MeOH)を加える。
8. アルミホイルに包み、プレート振盪機で60分間インキュベートする。
9. 水溶液中で桃色乳濁液を生成する橙色上清を廃棄する。
10. 桃色のビーズを1mlのH2Oと1mlのBSA/PBSで3回逐次洗浄する。
11. 最終ビーズを1mlのBSA/PBSに懸濁し、冷蔵庫内の暗所で保存する。
1. 一連の1:10 IgG-AP希釈物を調製する。
2. 10μlのPOROS(登録商標)構築物を試験管に入れる。
3. 10μlのIgG-AP希釈物を試験管に加える。
4. 混合物を室温で10分間インキュベートする。
5. 80μlの0.4mM COP-Star(登録商標)を加える。
6. 混合物を室温で30または60分間緩やかに振盪する。
7. 試験管を37℃でTurner光度計に設置し、ただちにシグナルを10分間収集する。
検出限界:IgG-APの1:1億希釈でS/N>2(0.4mM CDP-Star(登録商標)60分間インキュベーション:読み出し用のフィルターはなし)
検出限界(S/N>2)は、CDP-Star(登録商標)インキュベーション時間を2倍の60分にすることで、IgG-APの1:1000万から1:1億希釈まで10倍改善された。
cAMPの競合均一検定法の支持体を提供するために、J会合体支持体構築物を用いた。図2に示すとおり、cAMP抗体をPOROS(登録商標)-A/TPQ/J会合体構築物上に層化した。POROS(登録商標)-A表面をTPQ増強剤およびJ会合体シアニン色素でコーティングした。図3に示すとおり、試料に加えた分析物(cAMP)およびcAMP-アルカリ性ホスファターゼ結合体はcAMP抗体による捕捉について競合した。cAMP-アルカリ性ホスファターゼのcAMP分析物との競合を、J会合体でコーティングした表面の近く、または表面上で起こるシグナル生成の近接性(例えば、励起状態のジオキセタン断片によるJ会合体コーティングの化学励起)に基づいて検出した。
A. cAMP構築物の調製
1. 0.3ml(約50mg)のPOROS(登録商標)-20Aスラリーをピペットで取り、0.7mlのPBSに懸濁する。
2. 遠心分離して上清を廃棄する。
3. ビーズを1mlのPBSで4回洗浄する。
4. ビーズを1mlのPBSに懸濁し、40μlのウサギcAMP抗体を加える。
5. プレート振盪機で60分間インキュベートする。
6. 上清を廃棄し、ビーズを1mlのPBSで5回と1mlのH2Oで1回逐次洗浄する。
7. ビーズを1mlのTPQ保存溶液(2mg/2ml H2O)に懸濁する。
8. プレート振盪機で60分間インキュベートする。
9. 上清を廃棄し、ビーズを各1mlの水と20%MeOH/H2Oで次洗浄する。
10. ビーズを20%MeOH/H2Oに懸濁し、30μlの色素保存溶液(100mg/2ml MeOH)を加える。
11. アルミホイルに包み、プレート振盪機で60分間インキュベートする。
12. 水溶液中で桃色乳濁液を生成する橙色上清を廃棄する。
13. 桃色のビーズを1mlのH2O、1mlのBSA/PBSで3回、および1mlのトリス緩衝液(pH=7.0)で2回逐次洗浄する。
14. 最終ビーズを1mlのトリス緩衝液に懸濁し、冷蔵庫内の暗所で保存する。
1. 一連のcAMP標準溶液の1:10希釈物50μl/ウェルおよび希釈したcAMP-AP結合体25μl/ウェルを96穴マイクロタイタープレートのウェルに加え、プレート振盪機で10分間混合する。
2. 5μl/ウェルのPOROS(登録商標)cAMP構築物を加える。
3. プレート振盪機で60分間インキュベートする。
4. 60μlの0.4mM CDP-Star(登録商標)を加え、プレート振盪機で10分間混合する。
5. プレートを29℃で光度計TR 717に設置し、20および50分後にシグナルを測定する。
Claims (67)
- 表面を有する支持体;
支持体表面上の化学発光増強物質;
支持体表面上のエネルギー受容体色素;および
支持体表面上の1つまたは複数の生体分子プローブ
を含む製造物品。 - エネルギー受容体色素がJ会合体色素である、請求項1記載の物品。
- 化学発光増強物質が、正に荷電したオニウム基を含むカチオン性ホモポリマーまたはコポリマーである、請求項1記載の物品。
- 化学発光増強物質が、ポリ(塩化ビニルベンジルジメチルベンジルアンモニウム)(BDMQ)、ポリ(塩化ビニルベンジルトリメチルアンモニウム)(TMQ)、ポリ(塩化ビニルベンジルトリブチルアンモニウム)(TBQ)、ポリ(塩化ビニルベンジルトリ(n-ペンチル)アンモニウム)(TPQ)、ポリ(塩化ビニルベンジルトリブチルホスホニウム)(TB)、ポリ(塩化ビニルベンジルトリオクチルホスホニウム)(TO)、前述の2つ以上、または前述の1つもしくは複数を含むコポリマーを含む、請求項3記載の物品。
- 支持体が粒子である、請求項1記載の物品。
- 支持体が、ラテックス、ポリスチレン、ナイロン、ポリアクリルアミド、またはポリ(スチレンジビニルベンゼン)ビーズを含む、請求項1記載の物品。
- J会合体色素がシアニン色素である、請求項2記載の物品。
- 1つまたは複数の生体分子プローブが、抗体、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ポリペプチド、タンパク質、受容体、レクチン、またはアプタマーを含む、請求項1記載の物品。
- 支持体がアニオン性表面を有し、化学発光増強物質が支持体表面上のカチオン性ホモポリマーまたはコポリマーであり、かつJ会合体色素が該カチオン性ホモポリマーまたはコポリマー上のアニオン性色素である、請求項2記載の物品。
- 表面に結合した生体分子プローブの1つまたは複数が、分析物に結合することができるプローブ、または分析物があれば分析物に結合するプローブを含む、請求項1記載の物品;
化学発光基質;および
任意で、酵素標識生体分子または酵素標識分析物
を含む、試料中の分析物を検出するためのキット。 - 化学発光基質が、ジオキセタン、アクリジニウムエステル、アクリジニウムスルホンイミド、アクリダン、アクリダンエノールホスフェート、ルシフェリン、またはルミノールである、請求項11記載のキット。
- 化学発光基質が1,2-ジオキセタン基質である、請求項12記載のキット。
- 酵素標識が加水分解酵素である、請求項11記載のキット。
- 酵素標識が、アルカリ性ホスファターゼ、β-ガラクトシダーゼ、グルクロニダーゼ、およびノイラミニダーゼからなる群より選択される、請求項11記載のキット。
- 表面に結合した生体分子プローブが抗体であり、かつ分析物が該抗体の抗原であり、かつ表面に結合した生体分子プローブに分析物が結合すると分析物に結合することができる酵素標識抗体を含む、請求項11記載のキット。
- 酵素標識生体分子または酵素標識分析物を含み、かつ酵素標識がアルカリ性ホスファターゼである、請求項14記載のキット。
- 表面に結合した1つまたは複数の生体分子プローブが、分析物に結合することができるプローブ、または分析物があれば分析物に結合するプローブを含む、請求項9記載の物品;
化学発光基質であって、活性化された化学発光基質がエネルギー受容体色素を励起して、そこからの放射を引き起こす、化学発光基質;および
任意で、酵素標識生体分子または酵素標識分析物
を含む、試料中の分析物を検出するためのキット。 - 試料を請求項1記載の物品と接触させる段階であって、1つまたは複数の生体分子プローブが分析物に結合するプローブを含む、段階;
表面に結合したプローブに試料中の分析物を結合させる段階であって、(a)分析物が酵素であるか、(b)分析物が酵素で標識されているか、(c)支持体表面を、分析物に結合する酵素標識生体分子と接触させるか、または(d)分析物が非標識であり、かつ酵素標識分析物を試料に加えて、表面に結合したプローブへの結合について試料中の酵素標識分析物と非標識分析物を競合させる、段階;
支持体表面を酵素によって活性化される化学発光基質と接触させる段階であって、活性化された化学発光基質がエネルギー受容体色素を励起して、そこからの放射を引き起こす段階;および
エネルギー受容体色素からの放射を検出する段階
を含む、試料中の分析物を検出するための方法。 - エネルギー受容体色素がJ会合体色素である、請求項21記載の方法。
- 酵素または酵素標識が加水分解酵素である、請求項21記載の方法。
- 酵素または酵素標識が、アルカリ性ホスファターゼ、β-ガラクトシダーゼ、グルクロニダーゼ、およびノイラミニダーゼからなる群より選択される、請求項23記載の方法。
- 酵素または酵素標識が酸化酵素である、請求項21記載の方法。
- 表面に結合したプローブが抗体でありかつ分析物が該抗体の抗原であるか、または表面に結合したプローブが抗体の抗原でありかつ分析物が該抗原に対する抗体である、請求項21記載の方法。
- 試料中の分析物を支持体に結合したプローブに結合させた後に支持体表面を酵素標識生体分子に接触させ、かつ酵素標識生体分子が、分析物が支持体に結合したプローブに結合すると分析物に結合する抗体である、請求項26記載の方法。
- 化学発光基質が、ジオキセタン、アクリジニウムエステル、アクリジニウムスルホンイミド、アクリダン、アクリダンエノールホスフェート、ルシフェリン、またはルミノールである、請求項21記載の方法。
- 化学発光基質が1,2-ジオキセタンである、請求項28記載の方法。
- 酵素または酵素標識がアルカリ性ホスファターゼである、請求項30記載の方法。
- 試料を請求項9記載の物品と接触させる段階であって、1つまたは複数の生体分子プローブが、分析物に結合するプローブを含む、段階;
表面に結合したプローブに試料中の分析物を結合させる段階であって、(a)分析物が酵素であるか、(b)分析物が酵素で標識されているか、(c)支持体表面を、分析物に結合する酵素標識生体分子と接触させるか、または(d)分析物が非標識であり、かつ酵素標識分析物を試料に加えて、表面に結合したプローブへの結合について試料中の酵素標識分析物と非標識分析物を競合させる、段階;
支持体表面を酵素によって活性化される化学発光基質と接触させる段階であって、活性化された化学発光基質がエネルギー受容体色素を励起して、そこからの放射を引き起こす、段階;および
エネルギー受容体色素からの放射を検出する段階
を含む、試料中の分析物を検出するための方法。 - 酵素または酵素標識が加水分解酵素である、請求項32記載の方法。
- 酵素または酵素標識が、アルカリ性ホスファターゼ、β-ガラクトシダーゼ、グルクロニダーゼ、およびノイラミニダーゼからなる群より選択される、請求項33記載の方法。
- 表面に結合したプローブが抗体でありかつ分析物が該抗体の抗原であるか、または表面に結合したプローブが抗体の抗原でありかつ分析物が該抗原に対する抗体である、請求項32記載の方法。
- 表面に結合したプローブに試料中の分析物を結合させた後に支持体表面を酵素標識生体分子に接触させ、かつ酵素標識生体分子が、分析物が支持体に結合したプローブに結合すると分析物に結合する抗体である、請求項35記載の方法。
- 化学発光基質が、ジオキセタン、アクリジニウムエステル、アクリジニウムスルホンイミド、アクリダン、アクリダンエノールホスフェート、ルシフェリン、またはルミノールである、請求項32記載の方法。
- 化学発光基質が1,2-ジオキセタンである、請求項37記載の方法。
- 酵素または酵素標識がアルカリ性ホスファターゼである、請求項35記載の方法。
- 表面を有する支持体、支持体表面上のエネルギー受容体色素、および支持体表面上の1つまたは複数の生体分子プローブを含む製造物品であって、該1つまたは複数の生体分子プローブが、分析物に結合することができるかまたは分析物があれば分析物に結合する、製造物品;
化学発光基質;および
任意で、酵素標識生体分子または酵素標識分析物
を含む、試料中の分析物を検出するためのキット。 - エネルギー受容体色素がJ会合体色素である、請求項41記載のキット。
- 支持体表面上の化学発光増強物質をさらに含む、請求項41記載のキット。
- 化学発光基質が、ジオキセタン、アクリジニウムエステル、アクリジニウムスルホンイミド、アクリダン、アクリダンエノールホスフェート、ルシフェリン、またはルミノールである、請求項41記載のキット。
- 化学発光基質が1,2-ジオキセタン基質である、請求項44記載のキット。
- 酵素標識生体分子または酵素標識分析物を含む、請求項41記載のキット。
- 酵素標識が加水分解酵素である、請求項47記載のキット。
- 酵素標識が、アルカリ性ホスファターゼ、β-ガラクトシダーゼ、グルクロニダーゼ、およびノイラミニダーゼからなる群より選択される、請求項48記載のキット。
- 表面に結合したプローブが抗体でありかつ分析物が該抗体の抗原であるか、または表面に結合したプローブが抗体の抗原でありかつ分析物が該抗原に対する抗体である、請求項47記載のキット。
- 分析物が支持体表面上のプローブに結合すると分析物に結合する酵素標識生体分子、または支持体に結合したプローブへの結合について試料中の非標識分析物と競合する酵素標識分析物を含み、酵素標識がアルカリ性ホスファターゼ標識である、請求項46記載のキット。
- 表面を有する支持体、支持体表面上の第一の化学発光増強物質、支持体表面上の第一のエネルギー受容体色素、および支持体表面上の第一の生体分子プローブを含む第一の製造物品を試料と接触させる段階であって、第一の生体分子プローブが第一の分析物に結合することができる、段階;
表面を有する支持体、支持体表面上の第二の化学発光増強物質、支持体表面上の第二のエネルギー受容体色素、および支持体表面上の第二の生体分子プローブを含む第二の製造物品を試料と接触させる段階であって、第二の生体分子プローブが第二の分析物に結合することができる、段階;
試料中の第一の分析物を第一のプローブに結合させる段階であって、(a)第一の分析物が第一の酵素であるか、(b)第一の分析物が第一の酵素で標識されているか、(c)第一の製造物品の支持体表面を、第一の酵素で標識されかつ支持体表面上の第一の分析物に結合する生体分子と接触させるか、または(d)第一の分析物が非標識であり、かつ第一の酵素で標識された第一の分析物を試料に加えて、第一の製造物品の第一の生体分子プローブへの結合について試料中の酵素標識された第一の分析物と非標識の第一の分析物を競合させる、段階;
試料中の第二の分析物を第二のプローブに結合させる段階であって、(a)第二の分析物が第二の酵素であるか、(b)第二の分析物が第二の酵素で標識されているか、(c)第二の製造物品の第二の支持体表面を、第二の酵素で標識されかつ支持体表面上の第二の分析物に結合する生体分子と接触させるか、または(d)第二の分析物が非標識であり、かつ第二の酵素で標識された第二の分析物を試料に加えて、第二の製造物品の第二の生体分子プローブへの結合について試料中の酵素標識された第二の分析物と非標識の第二の分析物を競合させる、段階;
第一の製造物品を第一の酵素によって活性化される第一の化学発光基質と接触させ、かつ第二の製造物品を第二の酵素によって活性化される第二の化学発光基質と接触させる段階であって、活性化された第一の化学発光基質が、第一のエネルギー受容体色素を励起して、そこからの放射を引き起こし、活性化された第二の化学発光基質が、第二のエネルギー受容体色素を励起して、そこからの放射を引き起こす、段階;および
第一のエネルギー受容体色素からの放射を検出し、かつ第二のエネルギー受容体色素からの放射を検出する段階であって、第一のエネルギー受容体色素からの放射が第二のエネルギー受容体色素からの放射と識別可能である、段階
を含む、試料中の複数の分析物を検出するための方法。 - 第一および第二の化学発光基質が同じでも異なっていてもよい、請求項52記載の方法。
- 第一および第二の化学発光増強物質が同じでも異なっていてもよい、請求項52記載の方法。
- 第一および第二の製造物品を試料と同時または逐次に接触させる、請求項52記載の方法。
- 第一および第二の製造物品を第一および第二の化学発光基質と同時または逐次に接触させる、請求項52記載の方法。
- 第一のエネルギー受容体色素からの放射および第二のエネルギー受容体色素からの放射を同時または逐次に検出する、請求項52記載の方法。
- 表面を有する第一の支持体、支持体表面上の第一の化学発光増強物質、支持体表面上の第一のエネルギー受容体色素、および支持体表面上の第一の生体分子プローブを含む第一の製造物品であって、第一の生体分子プローブが、第一の分析物に結合することができるかまたは第一の分析物があれば第一の分析物に結合する第一のプローブを含む、第一の製造物品;
表面を有する支持体、支持体表面上の第二の化学発光増強物質、支持体表面上の第二のエネルギー受容体色素、および支持体表面上の第二の生体分子プローブを含む第二の製造物品であって、第二の生体分子プローブが、第二の分析物に結合することができるかまたは第二の分析物があれば第二の分析物に結合する第一のプローブを含む、第二の製造物品;
第一の化学発光基質であって、活性化された第一の化学発光基質が第一のエネルギー受容体色素を励起して、そこからの放射を引き起こす、第一の化学発光基質;
第二の化学発光基質であって、活性化された第二の化学発光基質が第二のエネルギー受容体色素を励起して、そこからの放射を引き起こし、第一のエネルギー受容体色素からの放射が第二のエネルギー受容体色素からの放射と識別可能である、第二の化学発光基質;
任意で、第一の酵素標識生体分子、または第一の酵素で標識された第一の分析物;
任意で、第二の酵素標識生体分子、または第二の酵素で標識された第二の分析物
を含む、試料中の複数の分析物を検出するためのキット。 - 第一および第二の化学発光基質が同じでも異なっていてもよい、請求項58記載のキット。
- 第一および第二の化学発光増強物質が同じでも異なっていてもよい、請求項58記載のキット。
- エネルギー受容体色素が蛍光色素である、請求項1記載の物品。
- エネルギー受容体色素が、ナフタレン、アントラセン、ピレン、ビフェニル、アクリジン、クマリン、キサンテン、フタロシアニン、スチルベン、フラン、オキサゾール、オキサジアゾール、およびベンゾチアゾールからなる群より選択される芳香族化合物である、請求項1記載の物品。
- エネルギー受容体色素からの発光放射の検出に干渉する光放射を遮蔽または消光する、支持体表面上の分子フィルターをさらに含む、請求項1記載の物品。
- 分子フィルターがヘモグロビンまたは消光色素である、請求項63記載の物品。
- エネルギー受容体色素からの発光放射の検出に干渉する光放射を遮蔽または消光する分子フィルターをさらに含む、請求項11記載のキット。
- 化学発光基質が活性化されるとエネルギー受容体色素を励起して、そこからの発光放射を引き起こし、かつ分子フィルターがエネルギー受容体色素からの発光放射の検出に干渉する発光放射を遮蔽または消光する、請求項65記載のキット。
- エネルギー受容体色素からの放射の検出中に、分子フィルターが支持体表面上にあり、該分子フィルターがエネルギー受容体色素からの発光放射の検出に干渉する光放射を遮蔽または消光する、請求項21記載の方法。
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