CN112903664A - 一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液，含有0.1‑1.0g/L的1,2‑二氧环乙烷衍生物、0.1‑1g/L的荧光增强剂、0.1‑1g/L的荧光素、0.1‑10g/L的表面活性剂、1.0‑20.0g/L的缓冲剂、0.1‑1.0g/L的抗菌剂和0.01‑0.1g/L的消泡剂。本发明使得化学发光底物液的发光效率加快，使得达到发光平台期时间缩短，发光平台期持续时间加长，检测灵敏度高且稳定性好，从而提高检测速度及检测准确性，缩短检测时间；本发明所使用原材料易得，性能稳定，有很好的抗菌性能，成本较低，适于工业化生产，可以替代原装进口试剂，降低临床检验的成本。
Description
技术领域
本发明涉及化学发光免疫检测技术领域，具体为一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液。
背景技术
上世纪70年代中期，Arakawe首先报道化学发光免疫分析(chemiluminescenceimmunoassay,CLIA)，发展至今已经成为一种成熟的、先进的超微量活性物质检测技术，应用范围广泛，近10年发展迅猛，是目前发展和推广应用最快的免疫分析方法，也是目前最先进的标记免疫测定技术，灵敏度和精确度比酶免法、荧光法高几个数量级，可以完全替代放射免疫分析，彻底淘汰酶联免疫分析。化学发光免疫分析主要具有灵敏度高、特异性强、试剂稳定且有效期6-18个月、方法稳定快速、检测范围宽、操作简单、自动化程度高等优点，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术，是一项最新免疫测定技术。高灵敏度的化学发光检测技术已被广大研究人员所认可，并正逐渐替代传统的生物检测技术。
碱性磷酸酶和1，2-二氧环乙烷衍生物构成的发光体系是目前最重要、最灵敏的一类化学发光体系之一，具有准确度高，测定耗时短，测定项目全，试剂稳定等优点，是临床实验方法标准化、检测结果，目前市场销售的碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液都是进口产品，其试剂成本高，不便于广大基层临床医院使用。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液。
为了达到上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：
一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液，含有0.1-1.0g/L的1,2-二氧环乙烷衍生物、0.1-1g/L的荧光增强剂、0.1-1g/L的荧光素、0.1-10g/L的表面活性剂、1.0-20.0g/L的缓冲剂、0.1-1.0g/L的抗菌剂和0.01-0.1g/L的消泡剂。
作为优选，1,2-二氧环乙烷衍生物为AMPPD、CSPD、CDP-Star中的一种或几种。
作为优选，荧光增强剂为喹啉、吡咯类衍生物中的一种或几种。荧光增强剂能使底物液发光信号大幅度增强，从而提高检测的灵敏度。
作为优选，荧光素为异硫氰酸荧光素、羧基荧光素、氨基荧光素、D-荧光素、罗丹明B、罗丹明123、羧基四甲基罗丹明中的一种或几种。荧光素可以对检测物质进行特异性标记。
作为优选，表面活性剂为阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂中的一种或几种。表面活性剂更够改善反应体系的表面张力，增强溶液的分散性，增强底物液发光信号以及提高发光信号的稳定性，进一步提高检测灵敏度和精密度。
作为优选，缓冲剂为有机碱类缓冲剂中的一种。缓冲剂具有维持检测环境的pH值，增强检测的稳定性作用。
作为优选，有机碱类缓冲剂为三羟甲基氨基甲烷、乙醇胺、三乙醇胺、咪唑类和Good’s缓冲剂。
作为优选，抗菌剂为Proclin系列抗菌剂、卡松类抗菌剂中的一种或几种。抗菌剂使试剂的保存时间延长。
作为优选，消泡剂为有机硅消泡剂、聚醚类消泡剂中的一种或几种。消泡剂使反应体系快速消泡，去除反应混合过程产生的气泡干扰。
本发明的有益效果如下：本发明使得化学发光底物液的发光效率加快，使得达到发光平台期时间缩短，发光平台期持续时间加长，检测灵敏度高且稳定性好，从而提高检测速度及检测准确性，缩短检测时间；本发明所使用原材料易得，性能稳定，有很好的抗菌性能，成本较低，适于工业化生产，可以替代原装进口试剂，降低临床检验的成本。
具体实施方式
下面对本发明的技术方案作进一步说明：
实施例1：
一种碱性磷酸酶发光底物液，含有0.3g/L的3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷、10g/L的三乙醇胺、0.42g/L的异硫氰酸荧光素、0.3g/L的荧光增强剂、1.0g/L的吐温20、0.1g/L的Proclin 300、0.05g/L的聚醚消泡剂，其pH值为9.5，将上述组分混合搅拌溶解定容后，获得碱性磷酸酶发光底物液。
一、测定准确性验证：
将实施例1制备的碱性磷酸酶发光底物液置于贝克曼库尔特Access2化学发光免疫分析系统相应位置上进行验证试验，取30位患者血清进行试验，对比与市场销售的碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液的发光值的相关性。
| 实施例1 | 线性相关方程 | 线性相关系数r |
| T3 | y＝0.9982x-0.2514 | 0.9981 |
| T4 | y＝0.9978x+0.2101 | 0.9986 |
| CA199 | y＝0.9953x+0.1545 | 0.9989 |
| FSH | y＝0.9982x-0.1812 | 0.9972 |
| E2 | y＝0.9982x+0.0875 | 0.9991 |
结果显示，自配实施例1的碱性磷酸酶发光底物液与市场销售的碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液的性能一致性良好。
二、测定稳定性验证：
将实施例1配制的碱性磷酸酶发光底物液，置于2-8℃条件下密封保存13个月，再置于贝克曼库尔特Access2化学发光免疫分析系统相应位置上进行验证试验，取30位患者血清进行试验，对比与新配制的碱性磷酸酶发光底物液发光值的相关性。
| 实施例1 | 线性相关方程 | 线性相关系数r |
| T3 | y＝0.9978x+0.2832 | 0.9966 |
| T4 | y＝0.9972x+0.2701 | 0.9976 |
| CA199 | y＝0.9950x+0.1876 | 0.9977 |
| FSH | y＝0.9977x-0.2011 | 0.9959 |
| E2 | y＝0.9978x+0.1120 | 0.9983 |
结果显示，置于2-8℃密封保存13个月的实施例1碱性磷酸酶发光底物液与新配的实施例1的碱性磷酸酶发光底物液的性能有良好的一致性。
因此本发明所提供的一种碱性磷酸酶发光底物液开发的方法检测结果准确，能满足贝克曼库尔特Access2化学发光免疫分析系统的需求。
实施例2：
一种碱性磷酸酶发光底物液，含有0.25g/L的3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷、8g/L的三乙醇胺、0.4g/L的异硫氰酸荧光素、0.25g/L的荧光增强剂、0.7g/的吐温20、0.1g/L的Proclin 300、0.05g/L的聚醚消泡剂，其pH值9.6，将上述组分混合搅拌溶解定容后，获得碱性磷酸酶发光底物液。
一、测定准确性验证：
将实施例2制备的碱性磷酸酶发光底物液置于贝克曼库尔特Access2化学发光免疫分析系统相应位置上进行验证试验，取30位患者血清进行试验，对比与原装配套化学免疫分析用底物液检测结果的相关性。
| 实施例2 | 线性相关方程 | 线性相关系数r |
| T3 | y＝0.9982x-0.2514 | 0.9981 |
| T4 | y＝0.9978x+0.2101 | 0.9986 |
| CA199 | y＝0.9953x+0.1545 | 0.9989 |
| FSH | y＝0.9982x-0.1812 | 0.9972 |
| E2 | y＝0.9982x+0.0875 | 0.9991 |
结果显示，自配实施例2的碱性磷酸酶发光底物液与市场销售的碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液的性能一致性良好。
二、测定稳定性验证：
将实施例2配制的碱性磷酸酶发光底物液，置于2-8℃条件下密封保存13个月，再置于贝克曼库尔特Access2化学发光免疫分析系统相应位置上进行验证试验，取30位患者血清进行试验，对比与新配制的碱性磷酸酶发光底物液发光值的相关性。
| 实施例2 | 线性相关方程 | 线性相关系数r |
| T3 | y＝0.9967x+0.1221 | 0.9977 |
| T4 | y＝0.9974x+0.2312 | 0.9968 |
| CA199 | y＝0.9963x-0.1132 | 0.9949 |
| FSH | y＝0.9956x+0.1743 | 0.9969 |
| E2 | y＝0.9977x-0.1342 | 0.9975 |
结果显示，置于2-8℃密封保存13个月的实施例2碱性磷酸酶发光底物液与新配的实施例2的碱性磷酸酶发光底物液的性能有良好的一致性。
因此本发明所提供的一种碱性磷酸酶发光底物液开发的方法检测结果准确，能满足贝克曼库尔特Access2化学发光免疫分析系统的需求。
实施例3：
一种碱性磷酸酶发光底物液，含有0.35g/L的3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷、10g/L的三乙醇胺、0.45g/L的异硫氰酸荧光素、0.35g/L的荧光增强剂、1.3g/L的吐温20、0.5g/L的Proclin300、0.05g/L的聚醚消泡剂，其pH值9.8，将上述组分混合搅拌溶解定容后，获得碱性磷酸酶发光底物液。
一、测定准确性验证：
将实施例3制备的碱性磷酸酶发光底物液置于贝克曼库尔特Access2化学发光免疫分析系统相应位置上进行验证试验，取30位患者血清进行试验，对比与原装配套化学免疫分析用底物液检测结果的相关性。
| 实施例3 | 线性相关方程 | 线性相关系数r |
| T3 | y＝0.9982x-0.2514 | 0.9981 |
| T4 | y＝0.9978x+0.2101 | 0.9986 |
| CA199 | y＝0.9953x+0.1545 | 0.9989 |
| FSH | y＝0.9982x-0.1812 | 0.9972 |
| E2 | y＝0.9982x+0.0875 | 0.9991 |
结果显示，自配实施例3的碱性磷酸酶发光底物液与市场销售的碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液的性能一致性良好。
二、测定稳定性验证：
将实施例3配制的碱性磷酸酶发光底物液，置于2-8℃条件下密封保存13个月，再置于贝克曼库尔特Access2化学发光免疫分析系统相应位置上进行验证试验，取30位患者血清进行试验，对比与新配制的碱性磷酸酶发光底物液发光值的相关性。
| 实施例3 | 线性相关方程 | 线性相关系数r |
| T3 | y＝0.9973x+0.1512 | 0.9975 |
| T4 | y＝0.9979x+0.2356 | 0.9970 |
| CA199 | y＝0.9961x+0.1217 | 0.9956 |
| FSH | y＝0.9946x+0.1248 | 0.9965 |
| E2 | y＝0.9982x-0.1311 | 0.9976 |
结果显示，置于2-8℃密封保存13个月的实施例3碱性磷酸酶发光底物液与新配的实施例3的碱性磷酸酶发光底物液的性能有良好的一致性。
因此本发明所提供的一种碱性磷酸酶发光底物液开发的方法检测结果准确，能满足贝克曼库尔特Access2化学发光免疫分析系统的需求。
本发明使得化学发光底物液的发光效率加快，使得达到发光平台期时间缩短，发光平台期持续时间加长，检测灵敏度高且稳定性好，从而提高检测速度及检测准确性，缩短检测时间；本发明所使用原材料易得，性能稳定，有很好的抗菌性能，成本较低，适于工业化生产，可以替代原装进口试剂，降低临床检验的成本。
需要注意的是，以上列举的仅是本发明的一种具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形，总之，本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液，其特征在于，含有0.1-1.0g/L的1,2-二氧环乙烷衍生物、0.1-1g/L的荧光增强剂、0.1-1g/L的荧光素、0.1-10g/L的表面活性剂、1.0-20.0g/L的缓冲剂、0.1-1.0g/L的抗菌剂和0.01-0.1g/L的消泡剂。
2.根据权利要求1所述一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液，其特征在于，所述1,2-二氧环乙烷衍生物为AMPPD、CSPD、CDP-Star中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液，其特征在于，所述荧光增强剂为喹啉、吡咯类衍生物中的一种或几种。
4.根据权利要求1所述一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液，其特征在于，所述荧光素为异硫氰酸荧光素、羧基荧光素、氨基荧光素、D-荧光素、罗丹明B、罗丹明123、羧基四甲基罗丹明中的一种或几种。
5.根据权利要求1所述一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液，其特征在于，所述表面活性剂为阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂中的一种或几种。
6.根据权利要求1所述一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液，其特征在于，所述缓冲剂为有机碱类缓冲剂中的一种。
7.根据权利要求6所述一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液，其特征在于，所述有机碱类缓冲剂为三羟甲基氨基甲烷、乙醇胺、三乙醇胺、咪唑类和Good’s缓冲剂。
8.根据权利要求1所述一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液，其特征在于，所述抗菌剂为Proclin系列抗菌剂、卡松类抗菌剂中的一种或几种。
9.根据权利要求1所述一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物液，其特征在于，所述消泡剂为有机硅消泡剂、聚醚类消泡剂中的一种或几种。
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