JP7133822B2 - 赤血球除去装置、単核球回収器、細胞培養装置、細胞培養システム、細胞培養方法、及び単核球の回収方法 - Google Patents
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Description
図1に示すように、第1実施形態に係る赤血球除去装置100は、血液を収容する血液容器10と、血液容器10から血液を受け、血液から赤血球を少なくとも部分的に除去する赤血球除去器11と、を備える。
図3に示すように、第2実施形態に係る赤血球除去装置101は、血液を収容する血液容器50と、赤血球沈降剤又は赤血球除去剤を収容する赤血球処理剤容器53を備える。
図4に示すように、第3実施形態に係る赤血球除去装置101は、血液容器50から混合器57に少なくとも血液を送るための流路51に設けられた、内部を真空にすることができる真空容器70を備える。
図4に示した真空容器70、71を省略し、赤血球除去器11を予め真空にしてもよい。予め赤血球除去器11内を真空にした状態で、流路51に血液容器50を接続し、流路54に赤血球処理剤容器53を接続すると、血液容器50内の血液が流路51、56を介して混合器57内に移動し、赤血球処理剤容器53内の赤血球沈降剤又は赤血球除去剤が流路54、56を介して混合器57内に移動する。さらに、混合器57内で混合された血液と赤血球沈降剤又は赤血球除去剤が、流路58を介して赤血球除去器11内に移動する。
上記のように、本発明を実施形態によって記載したが、この開示の一部をなす記述及び図面はこの発明を限定するものであると理解するべきではない。この開示から当業者には様々な代替実施形態、実施形態及び運用技術が明らかになるはずである。例えば、図1に示す細胞培養器22に送られる細胞は、単核球に限定されない。細胞培養器22に送られる細胞は、幹細胞、線維芽細胞、あるいは他の体細胞であってもよい。細胞培養器22に送られる細胞は、任意である。
本実施例においては、完全に閉鎖された環境下において、培地交換及びガス交換をすることなく、細胞を培養可能である例を示す。増殖因子を培地(StemSpan H3000、登録商標、STEMCELL Technologies Inc.)に添加し、さらに培地に脱アシル化ゲランガムを添加して、ゲル培地を用意した。
血液を赤血球沈降剤で処理し、赤血球を少なくとも部分的に除去された処理血液を得た。処理血液を表面細胞マーカー抗体で処理し、蛍光活性化セルソーティング(FACS)で分析した結果を図7に示す。処理血液は、CD3陽性細胞、CD14陽性細胞、CD31陽性細胞、CD33陽性細胞、CD34陽性細胞、CD19陽性細胞、CD41陽性細胞、CD42陽性細胞、及びCD56陽性細胞を含んでいた。
血液培地に脱アシル化ゲランガムを添加して、ゲル培地を用意した。用意したゲル培地をラミニンコートした6ウェルディッシュに入れ、2×105個の血液細胞(単核球)を播種した。その後、6ウェルディッシュを37℃のCO2インキュベーター内に配置し、7日間、血液細胞を培養した。その後、血液増殖培地にOCT3/4、SOX2、KLF4、cMYCを搭載するセンダイウイルスベクター(CytoTune-iPS2.0、ThermoFisher SCIENTIFIC)を感染多重度(MOI)が5となるよう添加し、血液細胞をセンダイウイルスに感染させた。
血液培地に脱アシル化ゲランガムを添加して、ゲル培地を用意した。用意したゲル培地をラミニンコートしたフラスコに入れ、5×105個の血液細胞(単核球)を播種した。その後、37℃のCO2インキュベーター内に配置し、7日間、血液細胞を培養した。その後、血液増殖培地にOCT3/4、SOX2、KLF4、cMYCを搭載するセンダイウイルスベクター(CytoTune-iPS2.0、ThermoFisher SCIENTIFIC)を感染多重度(MOI)が5となるよう添加し、血液細胞をセンダイウイルスに感染させた。
ゲル状ではない液体の血液増殖培地をラミニンコートした6ウェルディッシュに入れ、2×105個の血液細胞(単核球)を播種した。その後、6ウェルディッシュを37℃のCO2インキュベーター内に配置し、7日間、血液細胞を培養した。その後、血液増殖培地にOCT3/4、SOX2、KLF4、cMYCを搭載するセンダイウイルスベクター(CytoTune-iPS2.0、ThermoFisher SCIENTIFIC)を感染多重度(MOI)が5となるよう添加し、血液細胞をセンダイウイルスに感染させた。
ゲル状ではない液体の血液増殖培地をラミニンコートしたフラスコに入れ、5×105個の血液細胞(単核球)を播種した。その後、フラスコを37℃のCO2インキュベーター内に配置し、7日間、血液細胞を培養した。その後、血液増殖培地にOCT3/4、SOX2、KLF4、cMYCを搭載するセンダイウイルスベクター(CytoTune-iPS2.0、ThermoFisher SCIENTIFIC)を感染多重度(MOI)が5となるよう添加し、血液細胞をセンダイウイルスに感染させた。
Claims (33)
- 血液を収容する血液容器と、
前記血液容器から血液を受け、前記血液から赤血球を少なくとも部分的に除去する赤血球除去器と、
前記赤血球除去器から前記赤血球を少なくとも部分的に除去された処理血液を受け、前記処理血液から単核球を回収する単核球回収器と、
を備える赤血球除去装置であって、
前記単核球回収器が、前記単核球を含む溶液を収容する回収容器を備え、
前記回収容器の底部が漏斗状であり、
前記回収容器の前記漏斗状の底部の先端に蓄積した前記単核球を吸引するための流路を備える、
赤血球除去装置。 - 前記血液容器から前記赤血球除去器に前記血液を送るための流路をさらに備え、
前記血液容器から前記赤血球除去器に前記血液を送るための前記流路の内部が外気から閉鎖可能である、請求項1に記載の赤血球除去装置。 - 前記赤血球除去器から前記単核球回収器に少なくとも前記赤血球を少なくとも部分的に除去された処理血液を送るための流路をさらに備える、請求項1又は2に記載の赤血球除去装置。
- 前記血液容器の内部及び前記赤血球除去器の内部が、外気から閉鎖可能である、請求項1から3のいずれか1項に記載の赤血球除去装置。
- 前記単核球回収器の内部が、外気から閉鎖可能である、請求項1から4のいずれか1項に記載の赤血球除去装置。
- 前記血液容器の内部及び前記赤血球除去器の内部を含む閉鎖空間が、外部と気体の交換をしない、請求項1から5のいずれか1項に記載の赤血球除去装置。
- 前記赤血球除去器内で、前記血液と、赤血球沈降剤及び赤血球除去剤の少なくとも一方と、が混合される、請求項1から6のいずれか1項に記載の赤血球除去装置。
- 前記血液と、赤血球沈降剤及び赤血球除去剤の少なくとも一方と、を混合する混合器をさらに備え、
前記赤血球除去器が、前記混合器から、前記赤血球沈降剤及び赤血球除去剤の少なくとも一方と混合された処理血液を受ける、請求項1から6のいずれか1項に記載の赤血球除去装置。 - 前記赤血球沈降剤及び赤血球除去剤の少なくとも一方を収容する赤血球処理剤容器と、
前記赤血球処理剤容器から前記赤血球除去器に少なくとも前記赤血球沈降剤及び赤血球除去剤の少なくとも一方を送るための流路と、
をさらに備える、請求項7に記載の赤血球除去装置。 - 前記血液容器から前記赤血球除去器に少なくとも前記血液を送るための流体機械をさらに備える、請求項1から9のいずれか1項に記載の赤血球除去装置。
- 前記赤血球除去器内で、前記赤血球が沈降し、前記赤血球除去器内の上澄みが前記赤血球を少なくとも部分的に除去された処理血液として前記単核球回収器に送られる、請求項1から10のいずれか1項に記載の赤血球除去装置。
- 前記単核球回収器内で、前記赤血球を少なくとも部分的に除去された処理血液が希釈される、請求項1から11のいずれか1項に記載の赤血球除去装置。
- 前記単核球回収器内で、前記単核球が沈降する、請求項1から12のいずれか1項に記載の赤血球除去装置。
- 前記赤血球を少なくとも部分的に除去された処理血液を希釈するための希釈用液を収容する希釈用液容器をさらに備える、請求項1から13のいずれか1項に記載の赤血球除去装置。
- 前記単核球回収器内で前記単核球が沈降した後、前記単核球回収器内の上澄みが除去される、請求項1から14のいずれか1項に記載の赤血球除去装置。
- 前記単核球回収器の前記漏斗状の底部の先端に第1開口が設けられており、
前記単核球回収器の前記漏斗状の底部の側面に第2開口が設けられており、
前記単核球を吸引するための流路が前記第1開口に接続されており、
前記第2開口に流路が接続されている、
請求項1から15のいずれか1項に記載の赤血球除去装置。 - 前記第1開口から前記単核球を吸引する単核球吸引装置をさらに備える、請求項16に記載の赤血球除去装置。
- 前記血液容器から前記赤血球除去器に少なくとも前記血液を送るための流体機械、及び前記赤血球除去器内の流体を前記血液容器に送るための流体機械の少なくも一方をさらに備える、請求項1から17のいずれか1項に記載の赤血球除去装置。
- 前記単核球回収器内の流体を前記赤血球除去器に送るための流路をさらに備える、請求項1から18のいずれか1項に記載の赤血球除去装置。
- 前記赤血球除去器から前記単核球回収器に少なくとも前記赤血球を少なくとも部分的に除去された処理血液を送るための流体機械、及び前記単核球回収器内の流体を前記赤血球除去器に送るための流体機械の少なくも一方をさらに備える、請求項1から19のいずれか1項に記載の赤血球除去装置。
- 単核球を含む溶液を収容する回収容器を備える単核球回収器であって、
前記回収容器の底部が漏斗状であり、
前記漏斗状の底部の先端に第1開口が設けられており、
前記漏斗状の底部の側面に第2開口が設けられており、
前記第1開口に接続された流路であって、前記回収容器の前記漏斗状の底部の先端に蓄積した前記単核球を吸引するための流路と、
前記第2開口に接続された流路と、
を備える、単核球回収器。 - 前記回収容器に前記溶液が導入されると、前記漏斗状の底部の先端に前記単核球が蓄積し、前記第2開口から前記溶液が排出される、請求項21に記載の単核球回収器。
- 前記第2開口から排出される前記溶液が血小板を含む、請求項21又は22に記載の単核球回収器。
- 請求項21から23のいずれか1項に記載の単核球回収器と、
前記単核球回収器から前記単核球を受ける細胞培養器と、
を備える、
細胞培養システム。 - 前記単核球回収器が赤血球を少なくとも部分的に除去された処理血液を受け、前記処理血液から単核球を回収する、請求項24に記載の細胞培養システム。
- 前記単核球回収器に前記赤血球を少なくとも部分的に除去された処理血液を供給するための赤血球除去器をさらに備える、請求項25に記載の細胞培養システム。
- 前記赤血球除去器に前記赤血球を少なくとも部分的に除去される前の血液を供給するための血液容器をさらに備える、請求項26に記載の細胞培養システム。
- 前記細胞培養器に接続された容積可変容器を備え、
前記細胞培養器内の流体が前記容積可変容器に移動すると、前記容積可変容器の容積が膨張する、請求項24から27のいずれか1項に記載の細胞培養システム。 - 前記単核球回収器の内部及び前記細胞培養器の内部が、外気から閉鎖可能である、請求項24から28のいずれか1項に記載の細胞培養システム。
- 前記赤血球除去器の内部が、外気から閉鎖可能である、請求項26に記載の細胞培養システム。
- 前記血液容器の内部が、外気から閉鎖可能である、請求項27に記載の細胞培養システム。
- 前記容積可変容器の内部が、外気から閉鎖可能である、請求項28に記載の細胞培養システム。
- 前記容積可変容器の内部が、外部と気体の交換をしない、請求項28又は32に記載の細胞培養システム。
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