JP4412029B2 - 密度勾配遠心分離による微生物抽出方法 - Google Patents
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図1に示すように、密度勾配用遠心容器1の下方に密度勾配溶液注入管2と密度勾配溶液排出管3を備え、密度勾配用遠心容器1の側面に試料注入管4と試料排出管5を備え、試料注入管4と試料排出管5と側面の位置より下方に分画採取管6を備え、密度勾配用遠心容器1の上方にポンプ7と密度勾配用遠心容器1とポンプ7を連結する連結管8を備えている。密度勾配溶液注入管2と密度勾配溶液排出管3と試料注入管4と試料排出管5および分画採取管6には、密度勾配溶液や試料液の量を調整する溶液バルブ9を備えている。
図2は、密度勾配用遠心容器1の下方に密度勾配溶液注入管2と密度勾配溶液排出管3を備え、密度勾配用遠心容器1の側面に試料注入管4と試料排出管5を備え、試料注入管4と試料排出管5と側面の位置より下方に分画採取管6を備え、密度勾配用遠心容器1の上方にピストン軸10を備えている。密度勾配溶液注入管2と密度勾配溶液排出管3と試料注入管4と試料排出管5および分画採取管6には、密度勾配溶液や試料液の量を調整する溶液バルブ9を備えている。
図4は、密度勾配用遠心容器1の下方に密度勾配溶液注入管2と密度勾配溶液排出管3を備え、密度勾配用遠心容器1の側面に試料注入管4と試料排出管5を備え、試料注入管4と試料排出管5と側面の位置より下方に分画採取管6を備え、密度勾配用遠心容器1の上方にピストン軸10を備えている。密度勾配溶液注入管2と密度勾配溶液排出管3と試料注入管4と試料排出管5および分画採取管6には、密度勾配溶液や試料液の量を調整する溶液バルブ9を備えている。
図5は、密度勾配用遠心容器1及び、密度勾配用遠心容器1の内部に配置されたピストン表面を、フッ素化物などによる撥水処理、または下記に述べる材料によるブロッキング処理を行ったものである。これにより、微生物の、遠心容器内壁への吸着を抑えることができ、回収率の向上が期待される。
2 密度勾配溶液注入管
3 密度勾配溶液排出管
4 試料注入管
5 試料排出管
6 分画採取管
7 ポンプ
8 連結管
9 溶液バルブ
10 ピストン軸
11 ピストン駆動部
12 撥水処理加工
13 多段密度勾配用遠心容器
14 密度勾配溶液充填容器
15 密度勾配溶液吸引管
16 空気バルブ
17 密度勾配溶液切替弁
18 透過率検出ユニット
19 透過率算出器
20 分画バルブ
21 分画容器ユニット
22 表示部
23 操作部
24 スイングアーム
25 回転軸
26 回転支持部
27 モーター
28 圧力センサー
29 廃液容器
Claims (20)
- 密度勾配遠心分離により、液体試料より微生物細胞を分離するための遠心容器で、本体底部に密度勾配溶液を注入、及び排出するための密度勾配溶液注入管および密度勾配溶液排出管を1〜複数本持ち、本体中間部には、遠心分離処理後に目的の画分を、効率的に分取するための分画採取管を1〜複数本持ち、更に本体上部には密度勾配溶液よりも上層に液体試料を連続的に注入する試料注入管、及びその余剰液を排出するための試料排出管をそれぞれ1〜複数本持ち、遠心容器内部を加圧と負圧のできる手段を備え、遠心容器内部に負圧を発生させることによって、密度勾配溶液と液体試料を本体内部に吸引し、遠心処理後に、遠心容器内部に加圧を発生させることによって目的の微生物が存在する層を分画採取管に排出し、回収することを行うことを特徴とする微生物抽出方法。
- 遠心容器本体の上部に配管を通じてポンプを接続し、遠心容器内部に正圧及び負圧を発生させ、密度勾配溶液と液体試料を密度勾配溶液注入管と試料注入管より吸引、または密度勾配溶液排出管と試料排出管より排出することを特徴とする請求項1記載の微生物抽出方法。
- 遠心容器本体に接続されたピストンによって、遠心容器内部に正圧及び負圧を発生させ、密度勾配溶液と液体試料を密度勾配溶液注入管と試料注入管より吸引、または密度勾配溶液排出管と試料排出管より排出することを特徴とする請求項1記載の微生物抽出方法。
- 遠心容器本体の内部に上下に可動なピストンを持ち、密度勾配溶液と液体試料を吸引によって密度勾配溶液注入管と試料注入管から本体内部に充填し、加圧によって密度勾配溶液と液体試料を密度勾配溶液排出管と試料排出管より排出することを特徴とする請求項1記載の微生物抽出方法。
- 遠心容器のピストンに、1軸方向に稼動させる駆動部を持つことを特徴とする請求項3ま
たは4記載の微生物抽出方法。 - 遠心容器の本体内部表面を撥水処理することを特徴とする請求項1、2、3、4または5記載の微生物抽出方法。
- 遠心容器の本体内部をブロッキング処理していることを特徴とする請求項1、2,3、4または5記載の微生物抽出方法。
- 遠心容器の本体が複数段の構造をもち、上部より中間部、中間部より底部の断面積がより小さくなる形状をもつことを特徴とする請求項1、2,3、4、5、6または7記載の微生物抽出方法。
- 遠心容器に注入する密度勾配溶液の送液手段において、単一、又は複数の段階的又は連続的な密度変化を形成し密度勾配溶液を個々に密閉された容器内に充填され、密閉容器内部に配管された溶液排出部より送液管を通り、個々の送液管が送液管切り替え部を介して一本の送液管に接続され、送液されることを特徴とする請求項1、2、3、4、5、6、7または8記載の微生物抽出方法。
- 遠心容器に注入する密度勾配溶液の送液手段において、前記密閉容器の上部に設置された空気バルブの開閉、及び、送液方向の負圧により制御されることを特徴とする請求項1、2、3、4、5、6、7、8または9記載の微生物抽出方法。
- 遠心容器内部への密度勾配溶液の充填が、前記遠心容器本体の側面上部に設置された空気穴をピストン下面が通過することによって停止することを特徴とする請求項4、5、6、7、8、9または10記載の微生物抽出方法。
- 前記遠心容器内に発生させた負圧による密度勾配溶液の注入時において、本体側面上部にある配管に設置された空気バルブにより負圧を開放することで溶液の充填を停止させ、一定量の空気を吸引した後、空気バルブを閉じ、再び発生した負圧によって、一定量、もしくは連続的に液体試料が本体内部に注入されることを特徴とする請求項1、2,3、4、5、6、7、8、9、10または11記載の微生物抽出方法。
- 前記遠心容器内部に密度勾配溶液、液体試料を充填し、遠心容器を遠心処理後、目的の微生物が存在する溶液層の位置に配置された送液管より、目的の微生物が存在する溶液を排出して分取することを特徴とする、請求項1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11または12記載の微生物抽出方法。
- 前記遠心容器に充填する密度勾配溶液のうち、目的の微生物が存在する層の高さが、排出用の配管の位置になるよう液量が調節できることを特徴とする請求項1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12または13記載の微生物抽出方法。
- 前記遠心容器内部に充填する単一、もしくは複数の密度勾配溶液のうち、目的の層の溶液のみをあらかじめイオン性色素によって着色し、遠心処理後にこの層を排出したのち、任意の可視光の透過率によって目的の溶液層であるかを検査する工程を含む、請求項1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13または14記載の微生物抽出方法。
- 前記遠心容器にて遠心処理後、目的の溶液層を遠心容器より排出し、送液管を通って透過率測定部に接続され、連続的に検査を行いながら、目的の溶液層を分取することを特徴とする請求項15記載の微生物抽出方法。
- 前記遠心容器を複数基同時に遠心処理し、処理後の溶液を排出する複数の送液管が送液管切り替え部を介して、1本の送液管に接続される構成をもつことを特徴とする、請求項1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15または16記載の微生物抽出方法。
- 前記遠心容器を複数基設置し、繰り返し使用できることを特徴とする請求項1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13,14、15、16または17記載の微生物抽出方法。
- 前記遠心容器を用いて遠心処理を行う際、サンプル数が非対称であった場合に、遠心容器の外側底部に左右対称の重さとなるような重りを接続し、遠心処理を行うことを特徴とする請求項18記載の微生物抽出方法。
- 前記遠心容器を用いた遠心処理において、溶液、液体試料の充填量、重りの接続が非対称であった場合、回転部中心軸受けの外側に設置された圧力センサによって偏心を検出し、回転を停止すると同時に、表示部にエラー表示を行うことを特徴とする請求項18または19記載の微生物抽出方法。
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