JP7022081B2 - 抗凝固因子ｘｉ抗体 - Google Patents

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Description

関連出願に対する相互参照
本出願は２０１６年６月１４日付け出願の米国仮特許出願第６２／３４９，８８８号（その全体を参照により本明細書に組み入れることとする）の利益を主張するものである。
（１）発明の分野
本発明は、ヒト凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル（ａｐｐｌｅ）３ドメインに結合し、凝固因子ＸＩＩａによるＦＸＩの活性化および因子ＩＸ（ＦＩＸ）に対するＦＸＩａの活性を阻害する抗体に関する。
（２）関連技術の説明
静脈血栓症および動脈血栓症の両方を含む血栓塞栓性障害は、ビタミンＫアンタゴニスト（ＶＫＡ）、ヘパリンおよび直接トロンビンインヒビターのような多数のクラスの抗凝固剤が利用可能であるにもかかわらず、依然として西欧諸国における罹患および死亡の主要原因である（Ｗｅｉｔｚら，Ｃｈｅｓｔ ２００８，１３３：２３４Ｓ－２５６Ｓ；Ｈａｗｋｉｎｓ，Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ ２００４，２４：６２Ｓ－６５Ｓ）。これらの薬物は、血栓症のリスクを低減するのに有効ではあるが、それらは多数の制約を伴う。例えば、ＶＫＡ（例えば、ワルファリン）は経口抗凝固療法の主流であるが、その重大な出血リスク、遅い作用発現および作用相殺ならびに食事と薬物との多数の相互作用ゆえに、ＶＫＡ療法の管理は複雑である（Ｈａｗｋｉｎｓ，前掲；Ａｎｓｅｌｌ Ｊら，Ｃｈｅｓｔ ２００８，１３３：１６０Ｓ－１９８Ｓ）。非ビタミンＫアンタゴニスト経口抗凝固剤（リバロキサバン、アピキサバン、エドキサバンおよびダビガトランを含むＮＯＡＣ）は、ワルファリンと比較して少なくとも劣っていない有効性を示し、食物と薬物との相互作用が少なく、モニタリングの必要もない。しかし、ＮＯＡＣは、心房細動における脳卒中予防に関するその登録治験において主要または非主要臨床関連出血の年間発生率が１５％に近いことによって示されるように、出血のリスクを尚も増加させる（Ｃｏｎｎｏｌｌｙら，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２００９，３６１：１１３９－１１５１；Ｐａｔｅｌら，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１１，３６５：８８３－８９１；Ｇｒａｎｇｅｒら，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１１，３６５：９８１－９９２；Ｇｉｕｇｌｉａｎｏら，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１３，３６９：２０９３－２１０４）。これは、ＮＯＡＣが、正常な凝固（止血）に必須であるタンパク質（凝固因子Ｘａ（ＦＸａ）およびトロンビン）を標的とするという事実に主に起因する。したがって、血栓性疾患または障害の予防および治療におけるより良好な安全性プロファイルを有する新規療法が依然として必要とされている。
血液凝固カスケードの古典的なウォーターフォールモデル（図１Ａ）においては、凝固は外因性（組織因子（ＴＦ）活性化）経路または内因性（接触活性化）経路のいずれかによって始動され、両者は、トロンビン生成およびフィブリン形成を最終的にもたらす共通の経路に入る（Ｆｕｒｉｅ ＆ Ｆｕｒｉｅ，Ｃｅｌｌ １９８８，５３：５０５－５１８；Ｇａｉｌａｎｉ ＆ Ｒｅｎｎｅ，Ｊ Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ ２００７，５：１１０６－１１１２）。内皮下およびアテローム硬化性病変に存在するＴＦが流動血液にさらされ、凝固因子ＶＩＩａ（ＦＶＩＩａ）との複合体を形成すると、外因性カスケードが開始される。ついで、ＴＦ－ＦＶＩＩａ複合体（外因性テナーゼ複合体）は共通経路を始動させ、すなわち、ＦＸを活性化してＦＸａを形成し、今度はこれがプロトロンビンをトロンビンに変換する。また、ＴＦ－ＦＶＩＩａ複合体は凝固因子ＩＸ（ＦＩＸ）を活性化してＦＩＸａを形成しうる。凝固因子ＶＩＩＩ（ＦＶＩＩＩａ）と複合体（内因性テナーゼ複合体）を形成したＦＩＸａもＦＸ基質を切断しうる。内因性カスケードは、負荷電表面（例えば、コラーゲンおよびグリコサミノグリカン）からの接触活性化によりＦＸＩＩａが形成されると開始され、ＦＸＩ、ＦＩＸ、ＦＸおよびプロトロンビンの逐次的活性化によりトロンビン生成を伝播する。凝固カスケードにおける最終プロテアーゼであるトロンビンは更に、フィードバックメカニズムにおけるＦＸＩの直接活性化によるＦＸＩａ生成に寄与しうる。全血中のもう１つの重要な止血成分である血小板はトロンビンにより活性化されることが可能であり、ついでＦＸＩａ形成をも援助しうる。トロンビン生成のＦＸＩ依存的増幅は、トロンビン活性化線溶抑制因子（ＴＡＦＩ）の活性化により、フィブリン溶解（線溶）を間接的に調節しうる。したがって、ＦＸＩは止血系における幾つかの成分と相互作用し、血液凝固および血栓症において重要な役割を果たす（Ｇａｉｌａｎｉ ＆ Ｒｅｎｎｅ，前掲；Ｅｍｓｌｅｙら，Ｂｌｏｏｄ ２０１０，１１５：２５６９－２５７７）。
凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）は、８０ＫＤａの同一サブユニットから構成される二量体であり、Ｎ末端から始まる各サブユニットは４つのアップルドメイン（Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４）および触媒ドメインからなる（図１Ｂを参照されたい）。ＦＸＩは、高分子量キニノーゲン（ＨＫ）と複合体形成して循環するチモーゲンである。ＨＫはＦＸＩにおけるＡ２ドメインに結合し、ＦＸＩからＦＸＩａへのＦＸＩＩａ活性化のための生理学的補因子である。ＦＸＩにおける残りのアップルドメインも重要な生理的機能をもたらす。例えば、ＦＩＸ結合エキソサイトはＡ３に位置し、ＦＸＩＩａ結合部位はＡ４に位置する。ＦＸＩ二量体化に決定的に重要な残基もＡ４に位置する（Ｅｍｓｌｅｙら，前掲）。
ＦＸＩは、止血に対する寄与が比較的小さい一方で、血栓形成の病理学的過程においては重要な役割を果たしており、したがって、血栓症に対する有望な標的であることが、近年、多種多様な努力によって実証されている。この見解を裏付ける重要なデータが以下のものにおいて要約されている。（１）Ｉｏｎｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．のＦＸＩアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）のフェーズＩＩ治験（Ｂｕｌｌｅｒら，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１５，３７２：２３２－２４０）において、ＦＸＩ ＡＳＯは、膝関節全置換術を受けている患者において、エノキサパリンと比較して、より低い出血傾向を伴って、静脈血栓塞栓症（ＶＴＥ）の有意な軽減を示した。（２）ヒトの遺伝学および疫学的研究（Ｄｕｇａら，Ｓｅｍｉｎ Ｔｈｒｏｍｂ Ｈｅｍｏｓｔ ２０１３；Ｃｈｅｎら，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ ２０１４；Ｋｅｙ，Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ａｍ Ｓｏｃ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｅｄｕｃ Ｐｒｏｇｒａｍ ２０１４，２０１４：６６－７０）は、重度のＦＸＩ欠損（血友病Ｃ）は虚血性脳卒中および深部静脈血栓症のリスクの低減をもたらし、逆に、ＦＸＩのレベルの上昇は、ＶＴＥおよび虚血性脳卒中の、より高いリスクに関連していることを示した。（３）多種多様な前臨床試験は、ＦＸＩ（ａ）阻害または機能喪失が、止血を妨げることなく、顕著な血栓症予防（ｔｈｒｏｍｂｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ）をもたらすことを示した（Ｃｈｅｎら，前掲）。注目すべきことに、モノクローナル抗体１４Ｅ１１および１Ａ６はヒヒＡＶシャント血栓症モデルにおいて有意な血栓減少をもたらした（米国特許第８，３８８，９５９号；米国特許第８，２３６，３１６号；Ｔｕｃｋｅｒら，Ｂｌｏｏｄ ２００９，１１３：９３６－９４４；Ｃｈｅｎｇら，Ｂｌｏｏｄ ２０１０，１１６：３９８１－３９８９）。更に、１４Ｅ１１（マウスＦＸＩと交差反応するもの）は、マウスの急性虚血性脳卒中の実験モデルにおいて保護をもたらした（Ｌｅｕｎｇら，Ｔｒａｎｓｌ Ｓｔｒｏｋｅ Ｒｅｓ ２０１２，３：３８１－３８９）。最小の出血リスクを伴う抗血栓標的としてのＦＸＩを検証する前臨床モデルにおいて、追加的なＦＸＩ標的化ｍＡｂも報告されている（ｖａｎ Ｍｏｎｔｆｏｏｒｔら，Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ ２０１３，１１０；Ｔａｋａｈａｓｈｉら，Ｔｈｒｏｍｂ Ｒｅｓ ２０１０，１２５：４６４－４７０；ｖａｎ Ｍｏｎｔｆｏｏｒｔ，Ｐｈ．Ｄ．Ｔｈｅｓｉｓ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ，１４ Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１４）。したがって、ＦＸＩの阻害は、現在の標準治療の抗凝固剤と比較して改善された利益－リスクプロファイルを有する新規抗血栓療法のための有望な戦略である。
現在、重症腎疾患または末期腎疾患（ＥＳＲＤ）を有する患者に対する抗血栓療法に対する、満たされていない大きな医学的要求性が存在する。米国においては約６５万人の患者が重症腎疾患またはＥＳＲＤを有しており、これらの患者は極めて高い発生率の血栓性および血栓塞栓性合併症（ＭＩ、卒中／ＴＩＡ、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、血管アクセス不全）に罹患する。ＥＳＲＤ患者は、出血性イベントを示す可能性も、一般集団より高い。ＥＳＲＤ患者にはいかなる種類の抗凝固療法も一般には処方されないため（出血リスク、およびＥＳＲＤにおける非ビタミンＫアンタゴニスト経口抗凝固薬（ＮＯＡＣ）に関するデータの欠如による）、これらの患者における許容される利益－リスクプロファイルを有する抗血栓療法が必要とされている。
発明の簡潔な概要
本発明は、凝固因子ＸＩに選択的に結合することが可能であり（抗ＦＸＩ抗体）、好ましくは止血を妨げることなく、血液凝固および関連血栓症を抑制することが可能であるヒト抗体を提供する。組成物は、凝固因子ＸＩのアップル（ａｐｐｌｅ）３（Ａ３）ドメインの一定のエピトープに結合しうる抗凝固因子ＸＩ抗体を含む。これらの抗体は、ＦＸＩＩａの作用によるチモーゲン形態ＦＸＩからその活性型凝固因子ＦＸＩａへの変換を阻害することにより、およびＦＩＸのＦＸＩａ媒介性活性化を阻害することにより、中和活性を示す。該抗体はＦＸＩ阻害に有用であり、これは、低い出血合併症リスクを伴って、臨床的に重要な抗血栓作用をもたすことが可能であり、したがって、より下流の凝固因子、例えばＦＸａおよびトロンビンと比較して増大した治療指数をもたらしうる。したがって、これらの抗体は、血栓塞栓性合併症の予防、例えば、心房細動における脳卒中予防（ＳＰＡＦ）のための治療アプローチをもたらす。
ＦＸＩ阻害から利益を受けうる血管血栓症のリスクを有する未対処コホートの１つは重症腎疾患および末期腎疾患（ＥＳＲＤ）集団であり、該集団においては、出血に関する懸念ゆえに非ビタミンＫアンタゴニスト経口抗凝固薬（ＮＯＡＣ）が典型的には使用されず、このことが臨床試験の経験の欠如につながっている。本発明における抗体はＥＳＲＤ患者における血栓性合併症の予防のための新規抗凝固療法を提供する。本発明における抗体は、ＥＳＲＤ患者における許容可能な出血リスクを伴う臨床的に重要な抗血栓効果をもたらしうる。
ＥＳＲＤおよびＳＰＡＦに加えて、ＦＸＩ阻害は、高い血栓症リスクを有する追加的な患者集団にも適応しうる。これらには以下のものが含まれる：１）整形外科手術における静脈血栓塞栓症（ＶＴＥ）の予防および／またはＶＴＥの二次予防；２）ＰＡＤにおける主有害四肢イベント（ＭＡＬＥ）の低減および／または血管再生の低減；３）ＡＣＳにおける補助療法。
本発明は、αＦＸＩ－１８６２３ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリーまたはαＦＸＩ－１８６１１ファミリーの抗ＦＸＩ抗体の、６個の相補性決定領域（ＣＤＲ）を少なくとも含む、あるいは６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する、αＦＸＩ－１８６２３ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリーまたはαＦＸＩ－１８６１１ファミリーの抗ＦＸＩ抗体の、６個の相補性決定領域（ＣＤＲ）を少なくとも含む抗体または抗原結合性フラグメントを提供し、ここで、αＦＸＩ－１８６２３ファミリーの抗体は、配列番号２８または２９に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）可変領域と、配列番号３０に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ可変領域とを含み、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリーの抗体は、配列番号２１または２２に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ可変領域と、配列番号２５に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）可変領域とを含み、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーの抗体は、配列番号２３または２４に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ可変領域と、配列番号２５に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ可変領域とを含む。更なる実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する。
本発明の更なる態様または実施形態においては、前記の６個のＣＤＲはＦＸＩ－１８６２３ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリーまたはαＦＸＩ－１８６１１ファミリーの抗ＦＸＩ抗体のＨＣのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにＦＸＩ－１８６２３ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリーまたはαＦＸＩ－１８６１１ファミリーのＬＣのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、またはそれらからなり、ここで、αＦＸＩ－１８６２３ファミリーの抗体は、配列番号２８または２９に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ可変領域と、配列番号３０に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ可変領域とを含み、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリーの抗体は、配列番号２１または２２に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）可変領域と、配列番号２５に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）可変領域とを含み、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーの抗体は、配列番号２３または２４に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ可変領域と、配列番号２５に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ可変領域とを含む。更なる実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、配列番号２１、２２、２３および２４からなるアミノ酸配列の群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣ可変領域と、配列番号２５に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ可変領域とを含み、ここで、ＨＣ可変領域フレームワークは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むことが可能であり、ＬＣ可変領域フレームワークは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むことが可能である。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、配列番号２１、２２、２３および２４からなるアミノ酸配列の群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣ可変領域と、配列番号２５に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ可変領域とを含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、配列番号２８および２９からなるアミノ酸配列の群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣ可変領域と、配列番号３０に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ可変領域とを含み、ここで、ＨＣ可変領域フレームワークは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むことが可能であり、ＬＣ可変領域フレームワークは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むことが可能である。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、配列番号２８および２９からなるアミノ酸配列の群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣ可変領域と、配列番号３０に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ可変領域とを含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体はヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインを含む。更なる態様においては、該定常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含みうる。特定の態様においては、該定常ドメインはＣ末端リジンを含むことが可能であり、またはＣ末端リジンを欠くことが可能である。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体はヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインを含む。もう１つの態様においては、該重鎖定常ドメインはＩｇＧ４アイソタイプのものであり、更に、２２８位（ＥＵ番号付け）のセリン残基［これは、配列番号１６または１７の１０８位（１０８位のセリン）に対応する］の、プロリンによる置換を含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は配列番号１６、１７、１８または１９に示されているアミノ酸配列を含むＨＣ定常ドメインを含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体はヒトカッパまたはラムダ型の軽鎖定常ドメインを含む。
本発明の更なる態様または実施形態では、該抗体は、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含むＬＣ定常ドメインを含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、配列番号３３、３５、３７、３９、４５、４７、４９、５１、５７、５９、６１、６３、６９、７１、７３および７５からなるアミノ酸配列の群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣと、配列番号２６に示されているアミノ酸配列を有するＬＣとを含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、配列番号４１、４３、５３、５５、６５、６７、７７および７９からなるアミノ酸配列の群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣと、配列番号３１に示されているアミノ酸配列を有するＬＣとを含む。
本発明は更に、（ａ）配列番号２８に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）可変ドメインおよび配列番号３０に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン、（ｂ）配列番号２９に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）可変ドメインおよび配列番号３０に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン、（ｂ）配列番号２１に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）可変ドメインおよび配列番号２５に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン、（ｃ）配列番号２２に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）可変ドメインおよび配列番号２５に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン、（ｄ）配列番号２３に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）可変ドメインおよび配列番号２５に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン、または（ｅ）配列番号２４に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）可変ドメインおよび配列番号２５に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）可変ドメインを含む抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。
更なる実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する。
特定の実施形態においては、ＨＣおよびＬＣ可変領域は１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含みうる。
特定の実施形態においては、ＨＣおよびＬＣ定常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含みうる。特定の態様においては、該定常ドメインはＣ末端リジンを含むことが可能であり、またはＣ末端リジンを欠くことが可能である。
特定の実施形態においては、ＨＣおよびＬＣ可変領域は１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むことが可能であり、ＨＣおよびＬＣ定常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むことが可能である。特定の態様においては、該定常ドメインはＣ末端リジンを含むことが可能であり、またはＣ末端リジンを欠くことが可能である。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は更に、配列番号１６、１７、１８または１９に示されているアミノ酸配列を含むＨＣ定常ドメイン、あるいは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその変異体を含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は更に、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含むＬＣ定常ドメイン、あるいは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその変異体を含む。
本発明のもう１つの態様または実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、（ａ）配列番号２８に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）可変ドメインおよび配列番号３０に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン、（ｂ）配列番号２９に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）可変ドメインおよび配列番号３０に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン、（ｃ）配列番号２１に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）可変ドメインおよび配列番号２５に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン、（ｄ）配列番号２２に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）可変ドメインおよび配列番号２５に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン、（ｅ）配列番号２３に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）可変ドメインおよび配列番号２５に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン、（ｆ）配列番号２４に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）可変ドメインおよび配列番号２５に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン、（ｇ）ＨＣ可変領域フレームワークが１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）または（ｆ）の変異体、あるいは（ｈ）ＬＣ可変領域フレームワークが１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）または（ｇ）の変異体を含む。
本発明は更に、（ａ）配列番号１に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号２に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号３に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインと定常ドメインとを有する重鎖（ＨＣ）、（ｂ）配列番号１に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号２に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号４に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインと定常ドメインとを有する重鎖（ＨＣ）、または（ｃ）配列番号８に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号９に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号１０に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインと定常ドメインとを有する重鎖（ＨＣ）を含む抗体を提供する。更なる実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体はヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインを含む。更なる態様においては、該定常ドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプの天然重鎖定常ドメインのアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含みうる。特定の態様においては、該定常ドメインはＣ末端リジンを含むことが可能であり、またはＣ末端リジンを欠くことが可能である。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体はヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインを含む。もう１つの態様においては、該重鎖定常ドメインはＩｇＧ４アイソタイプのものであり、更に、２２８位（ＥＵ番号付け）のセリン残基［これは、配列番号１６または１７の１０８位（１０８位のセリン）に対応する］の、プロリンによる置換を含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号１６または１７に示されているアミノ酸配列を含むＩｇＧ４重鎖定常ドメインを含む。もう１つの態様においては、該定常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含みうる。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号１８または１９に示されているアミノ酸配列を含むＩｇＧ１重鎖定常ドメインを含む。更なる態様においては、該定常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含みうる。
本発明は更に、
（ａ）配列番号５に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、配列番号６に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号７に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインと定常ドメインとを有する軽鎖（ＬＣ）、または
（ｂ）配列番号１１に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、配列番号１２に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号１３に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインと定常ドメインとを有する軽鎖（ＬＣ）
を含む抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。更なる実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該軽鎖（ＬＣ）はヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖、あるいは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むそれらの変異体を含み、ここで、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する。本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖定常ドメインを含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号１６または１７に示されているアミノ酸配列を含むＩｇＧ４重鎖定常ドメイン、あるいは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその変異体を含み、ここで、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する。本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖定常ドメインを含む。
発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号１８または１９に示されているアミノ酸配列を含むＩｇＧ１重鎖定常ドメイン、あるいは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその変異体を含み、ここで、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する。
本発明は更に、
（ａ）配列番号１に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号２に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号３に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインと定常ドメインとを有する重鎖（ＨＣ）、ならびに
（ｂ）配列番号５に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、配列番号６に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および配列番７に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインと定常ドメインとを有する軽鎖（ＬＣ）
を含む抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。更なる実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該軽鎖はヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖、あるいは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むそれらの変異体を含み、ここで、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する。本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖定常ドメインを含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメイン、あるいは天然ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプのアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその変異体を含み、ここで、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する。更なる態様においては、該定常ドメインはＣ末端リジンを含むことが可能であり、またはＣ末端リジンを欠くことが可能である。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメイン、あるいは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその変異体を含み、ここで、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する。もう１つの態様においては、該重鎖定常ドメインはＩｇＧ４アイソタイプのものであり、更に、２２８位（ＥＵ番号付け）のセリン残基［これは、配列番号１６または１７の１０８位（１０８位のセリン）に対応する］の、プロリンによる置換を含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号１６または１７に示されているアミノ酸配列を含むＩｇＧ４重鎖定常ドメイン、あるいは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその変異体を含み、ここで、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号１８または１９に示されているアミノ酸配列を含むＩｇＧ１重鎖定常ドメイン、あるいは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその変異体を含み、ここで、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する。
本発明は更に、
（ａ）配列番号１に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号２に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号４に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインと定常ドメインとを有する重鎖（ＨＣ）、ならびに
（ｂ）配列番号５に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、配列番号６に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および配列番７に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインと定常ドメインとを有する軽鎖（ＬＣ）
を含む抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。更なる実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該軽鎖はヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖、あるいは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むそれらの変異体を含み、ここで、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する。本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖定常ドメインを含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメイン、あるいは天然ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプのアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその変異体を含み、ここで、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する。更なる態様においては、該定常ドメインはＣ末端リジンを含むことが可能であり、またはＣ末端リジンを欠くことが可能である。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメイン、あるいは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその変異体を含み、ここで、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する。もう１つの態様においては、該重鎖定常ドメインはＩｇＧ４アイソタイプのものであり、更に、２２８位（ＥＵ番号付け）のセリン残基［これは、配列番号１６または１７の１０８位（１０８位のセリン）に対応する］の、プロリンによる置換を含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号１６または１７に示されているアミノ酸配列を含むＩｇＧ４重鎖定常ドメイン、あるいは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその変異体を含み、ここで、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号１８または１９に示されているアミノ酸配列を含むＩｇＧ１重鎖定常ドメイン、あるいは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその変異体を含み、ここで、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する。
本発明は更に、
（ａ）配列番号８に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号９に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号１０に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインと定常ドメインとを有する重鎖（ＨＣ）、ならびに
（ｂ）配列番号１１に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、配列番号１２に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および配列番１３に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインと定常ドメインとを有する軽鎖（ＬＣ）
を含む抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。更なる実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該軽鎖はヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖、あるいは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むそれらの変異体を含み、ここで、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する。本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖定常ドメインを含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメイン、あるいは天然ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプのアミノ酸配列と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその変異体を含み、ここで、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する。更なる態様においては、該定常ドメインはＣ末端リジンを含むことが可能であり、またはＣ末端リジンを欠くことが可能である。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメイン、あるいは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその変異体を含み、ここで、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する。もう１つの態様においては、該重鎖定常ドメインはＩｇＧ４アイソタイプのものであり、更に、２２８位（ＥＵ番号付け）のセリン残基［これは、配列番号１６または１７の１０８位（１０８位のセリン）に対応する］の、プロリンによる置換を含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号１６または１７に示されているアミノ酸配列を含むＩｇＧ４重鎖定常ドメイン、あるいは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその変異体を含み、ここで、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号１８または１９に示されているアミノ酸配列を含むＩｇＧ１重鎖定常ドメイン、あるいは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその変異体を含み、ここで、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する。
本発明の更なる態様または実施形態においては、本発明は、（ａ）（ｉ）ＨＣフレームワークおよび配列番号８に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号９に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号１０に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３；（ｉｉ）ＨＣフレームワークおよび配列番号１に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号２に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号３に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３；（ｉｉｉ）ＨＣフレームワークおよび配列番号１に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号２に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号４に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３；（ｉｖ）ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２またはＣＤＲ３の少なくとも１つが１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む、（ｉ）、（ｉｉ）または（ｉｉｉ）の変異体；あるいは（ｖ）ＨＣフレームワークが１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む、（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）または（ｉｖ）の変異体を含む可変ドメインと定常ドメインとを有する重鎖（ＨＣ）；（ｂ）（ｉ）ＬＣフレームワークおよび配列番号１１に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、配列番号１２に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号１３に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３；（ｉｉ）ＬＣフレームワークおよび配列番号５に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、配列番号６に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号７に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３；（ｉｉｉ）ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２またはＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つが１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む、（ｉ）または（ｉｉ）の変異体；あるいは（ｉｖ）ＬＣフレームワークが１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む、（ｉ）、（ｉｉ）または（ｉｉｉ）の変異体を含む可変ドメインと定常ドメインとを有する軽鎖（ＬＣ）；あるいは（ｃ）（ａ）からのＨＣおよび（ｂ）からのＬＣを含む抗体を提供し、ここで、該抗体は凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する。
本発明の更なる態様または実施形態においては、ＨＣ定常ドメインが、配列番号１６、１７、１８または１９に示されているアミノ酸配列を含む、請求項１８記載の抗体。
本発明の更なる態様または実施形態においては、ＬＣ定常ドメインが、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む、請求項１８または１９記載の抗体。
本発明は更に、配列番号３３に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２６に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号３５に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２６に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号４５に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２６に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号４７に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２６に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号４９に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２６に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号５１に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２６に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号５９に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２６に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号６１に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２６に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号６３に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２６に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号６９に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２６に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号３３に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２６に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号７１に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２６に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号７３に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２６に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号７５に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２６に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号３９に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３１に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号４１に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３１に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号４３に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３１に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号５３に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３１に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号５５に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３１に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号５７に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３１に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号６５に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３１に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号６７に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３１に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号６９に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３１に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号７７に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３１に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号７９に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号３１に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号３３、３５、３７、４５、４７、４９、５１、５９、６１、６３、６９、７１、７３もしくは７５に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号２６に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体または配列番号３９、４１、４３、５３、５５、５７、６５、６７、６９、７７もしくは７９に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号３１に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を交差遮断し又は該抗体の結合と競合する抗体または抗原結合性フラグメントを提供し、ここで、該抗体または抗原結合性フラグメントはマウスまたはラットアミノ酸配列を含まない。
もう１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは非ヒトアミノ酸配列を含まない。
もう１つの実施形態においては、該抗体は、（ｉ）ヒトＩｇＧ１定常ドメインまたはその変異体もしくは修飾誘導体、あるいは（ｉｉ）ヒトＩｇＧ４定常ドメインまたはその変異体もしくは修飾変異体を含む。
もう１つの実施形態においては、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む変異体である。
もう１つの実施形態においては、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む変異体である。
もう１つの実施形態においては、ＩｇＧ４定常ドメインは、少なくとも、２２８位（ＥＵ番号付け）または１０８位（本明細書に示されているもの）のセリン残基の、プロリンによる置換を含む変異体である。
もう１つの実施形態においては、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、少なくとも、Ｃ末端のリジンを欠く変異体である。
もう１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、ヒト抗体に特徴的なフレームワークを含む可変ドメイン配列を含む。
本発明は更に、配列番号３３、３５、３７、４５、４７、４９、５１、５９、６１、６３、６９、７１、７３もしくは７５に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号２６に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体または配列番号３９、４１、４３、５３、５５、５７、６５、６７、６９、７７もしくは７９に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号３１に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を交差遮断し又は該抗体の結合と競合するヒト抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。
もう１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは非ヒトアミノ酸配列を含まない。
もう１つの実施形態においては、該抗体は、（ｉ）ヒトＩｇＧ１定常ドメインまたはその変異体もしくは修飾誘導体、あるいは（ｉｉ）ヒトＩｇＧ４定常ドメインまたはその変異体もしくは修飾変異体を含む。
もう１つの実施形態においては、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む変異体である。
もう１つの実施形態においては、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む変異体である。
もう１つの実施形態においては、ＩｇＧ４定常ドメインは、少なくとも、２２８位（ＥＵ番号付け）または１０８位（本明細書に示されているもの）のセリン残基の、プロリンによる置換を含む変異体である。
もう１つの実施形態においては、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、少なくとも、Ｃ末端のリジンを欠く変異体である。
もう１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、ヒト抗体に特徴的なフレームワークを含む可変ドメイン配列を含む。
本発明は更に、アミノ酸配列ＹＡＴＲＱＦＰＳＬＥＨＲＮＩＣＬ（配列番号８２）およびアミノ酸配列ＨＴＱＴＧＴＰＴＲＩＴＫＬ（配列番号８３）を含む凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）上のエピトープに結合する抗体または抗原結合性フラグメントを提供し、ここで、該抗体または抗原結合性フラグメントはマウスまたはラットアミノ酸配列を含まない。特定の実施形態においては、該エピトープへの結合は水素重水素交換質量分析により決定される。
もう１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは非ヒトアミノ酸配列を含まない。
もう１つの実施形態においては、該抗体は、（ｉ）ヒトＩｇＧ１定常ドメインまたはその変異体もしくは修飾誘導体、あるいは（ｉｉ）ヒトＩｇＧ４定常ドメインまたはその変異体もしくは修飾変異体を含む。
もう１つの実施形態においては、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む変異体である。
もう１つの実施形態においては、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、少なくとも１、２、３または４個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む変異体である。
もう１つの実施形態においては、ＩｇＧ４定常ドメインは、少なくとも、２２８位（ＥＵ番号付け）または１０８位（本明細書に示されているもの）のセリン残基の、プロリンによる置換を含む変異体である。
もう１つの実施形態においては、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、少なくとも、Ｃ末端のリジンを欠く変異体である。
もう１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、ヒト抗体に特徴的なフレームワークを含む可変ドメイン配列を含む。
本発明は更に、アミノ酸配列ＹＡＴＲＱＦＰＳＬＥＨＲＮＩＣＬ（配列番号８２）およびアミノ酸配列ＨＴＱＴＧＴＰＴＲＩＴＫＬ（配列番号８３）を含む凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）上のエピトープに結合するヒト抗体または抗原結合性フラグメントを提供し、ここで、該抗体は、（ｉ）ヒトＩｇＧ１定常ドメインまたはその変異体もしくは修飾誘導体、あるいは（ｉｉ）ヒトＩｇＧ４定常ドメインまたはその変異体もしくは修飾変異体を含む。特定の実施形態においては、該エピトープへの結合は水素重水素交換質量分析により決定される。
もう１つの実施形態においては、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む変異体である。
もう１つの実施形態においては、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む変異体である。
もう１つの実施形態においては、ＩｇＧ４定常ドメインは、少なくとも、２２８位（ＥＵ番号付け）または１０８位（本明細書に示されているもの）のセリン残基の、プロリンによる置換を含む変異体である。
もう１つの実施形態においては、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、少なくとも、Ｃ末端のリジンを欠く変異体である。
もう１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、ヒト抗体に特徴的なフレームワークを含む可変ドメイン配列を含む。
本発明は更に、前記抗体または抗原結合性フラグメントのいずれかの軽鎖可変ドメインまたは重鎖可変ドメインをコードする単離された核酸分子を提供する。
本発明は更に、アミノ酸配列ＹＡＴＲＱＦＰＳＬＥＨＲＮＩＣＬ（配列番号８２）およびアミノ酸配列ＨＴＱＴＧＴＰＴＲＩＴＫＬ（配列番号８３）を含む凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）上のエピトープに結合するヒト化抗体または抗原結合性フラグメントを提供し、ここで、該抗体は、（ｉ）ヒトＩｇＧ１定常ドメインまたはその変異体もしくは修飾誘導体、あるいは（ｉｉ）ヒトＩｇＧ４定常ドメインまたはその変異体もしくは修飾変異体を含む。特定の実施形態においては、該エピトープへの結合は水素重水素交換質量分析により決定される。
もう１つの実施形態においては、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む変異体である。
もう１つの実施形態においては、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む変異体である。
もう１つの実施形態においては、ＩｇＧ４定常ドメインは、少なくとも、２２８位（ＥＵ番号付け）または１０８位（本明細書に示されているもの）のセリン残基の、プロリンによる置換を含む変異体である。
もう１つの実施形態においては、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、少なくとも、Ｃ末端のリジンを欠く変異体である。
もう１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、ヒト抗体に特徴的なフレームワークを含む可変ドメイン配列を含む。
本発明は更に、前記抗体または抗原結合性フラグメントのいずれかの軽鎖可変ドメインまたは重鎖可変ドメインをコードする単離された核酸分子を提供する。
本発明は更に、前記抗体または抗原結合性フラグメントのいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントと医薬上許容される担体または希釈剤とを含む組成物を提供する。
本発明は更に、前記抗体または抗原結合性フラグメントのいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントの有効量を対象に投与することを含む、対象における血栓塞栓性障害または疾患の治療方法を提供する。
本発明は更に、前記抗体または抗原結合性フラグメントのいずれかの抗体または抗原結合性フラグメントの有効量を、血栓塞栓性障害または疾患の治療を要する対象に投与することを含む、対象における血栓塞栓性障害または疾患の治療方法を提供する。
本発明は更に、血栓塞栓性障害または疾患を治療するための医薬の製造のための、前記抗体または抗原結合性フラグメントのいずれかの抗体の使用を提供する。
本発明は更に、血栓塞栓性障害または疾患の治療のための、前記抗体または抗原結合性フラグメントのいずれかの抗体を提供する。
本発明は更に、（ｉ）配列番号１に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号２に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号３または４に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む重鎖を構成する可変ドメインと定常ドメインとを有する重鎖、ならびに（ｉｉ）配列番号５に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、配列番号６に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号７に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインと定常ドメインとを有する軽鎖を含む抗体または抗原結合性フラグメントの製造方法を提供し、該製造方法は、該重鎖をコードする核酸分子と該軽鎖をコードする核酸分子とを含む宿主細胞を準備し、該抗体または抗原結合性フラグメントを産生させるのに十分な条件下、それを産生させるのに十分な時間にわたって該宿主細胞を培養することを含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインを含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体はＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインを含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号１６、１７、１８または１９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖定常ドメインを含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、軽鎖はヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖を含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖定常ドメインを含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、宿主細胞はチャイニーズハムスター卵巣細胞またはヒト胎児腎２９３細胞である。
本発明の更なる態様または実施形態においては、宿主細胞は酵母または糸状真菌細胞である。
本発明は更に、（ｉ）配列番号１に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号２に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号３または４に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む重鎖を構成する可変ドメインと定常ドメインとを有する重鎖、ならびに（ｉｉ）配列番号５に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、配列番号６に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号７に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインと定常ドメインとを有する軽鎖を含む抗体または抗原結合性フラグメントの製造方法を提供し、該製造方法は、該重鎖をコードする核酸分子と該軽鎖をコードする核酸分子とを含む宿主細胞を準備し、該抗体または抗原結合性フラグメントを産生させるのに十分な条件下、それを産生させるのに十分な時間にわたって該宿主細胞を培養することを含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインを含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体はＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインを含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号１６、１７、１８または１９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖定常ドメインを含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、軽鎖はヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖を含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖定常ドメインを含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、宿主細胞はチャイニーズハムスター卵巣細胞またはヒト胎児腎２９３細胞である。
本発明の更なる態様または実施形態においては、宿主細胞は酵母または糸状真菌細胞である。
（ｉ）配列番号１に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号２に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号３もしくは４に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３、または配列番号８に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号９に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号１０に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメインと、（ｉｉ）配列番号５に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、配列番号６に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号７に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３、または配列番号１１に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１２に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号１３に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインとを含む抗体または抗原結合性フラグメントの製造方法を提供し、該製造方法は、該重鎖をコードする核酸分子と該軽鎖をコードする核酸分子とを含む宿主細胞を準備し、該抗体または抗原結合性フラグメントを産生させるのに十分な条件下、それを産生させるのに十分な時間にわたって該宿主細胞を培養することを含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインを含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体はＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインを含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号１６、１７、１８または１９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖定常ドメインを含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、軽鎖はヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖を含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖定常ドメインを含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、宿主細胞はチャイニーズハムスター卵巣細胞またはヒト胎児腎２９３細胞である。
本発明の更なる態様または実施形態においては、宿主細胞は酵母または糸状真菌細胞である。
本発明は更に、前記抗体のいずれかと医薬上許容される担体とを含む組成物を提供する。特定の実施形態においては、該組成物は、Ｃ末端リジンを有する重鎖を含む抗体と、Ｃ末端リジンを欠く重鎖を含む抗体との混合物を含む。特定の実施形態においては、該組成物は、主要抗体形態が、Ｃ末端リジンを有する重鎖を含む、本明細書に開示されている抗体を含む。特定の実施形態においては、該組成物は、主要抗体形態が、Ｃ末端リジンを欠く重鎖を含む、本明細書に開示されている抗体を含む。特定の実施形態においては、該組成物は、該組成物中の抗体の約１００％が、Ｃ末端リジンを欠く重鎖を含む、本明細書に開示されている抗体を含む。
定義
本明細書中で用いる「抗体」は、組換え製造形態を含む完全免疫グロブリンを意味し、所望の生物活性を示す任意の形態の抗体を含む。したがって、それは最も広い意味で用いられ、特に、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、バイパラトピック（ｂｉｐａｒａｔｏｐｉｃ；二重パラトープ）抗体およびキメラ抗体を含むが、これらに限定されるものではない。「親抗体」は、意図される使用のための抗体の修飾（例えば、ヒト治療用抗体としての使用のための抗体のヒト化）の前の、抗体への免疫系の暴露により得られる抗体である。
「抗体」は、１つの実施形態においては、ジスルフィド結合により相互連結された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質またはその抗原結合性部分を意味する。各重鎖は重鎖可変領域（本明細書においてはＶＨと略される）および重鎖定常領域から構成される。ある天然に存在するＩｇＧ、ＩｇＤおよびＩｇＡ抗体においては、重鎖定常領域は、３つのドメイン、すなわち、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３から構成される。ある天然に存在する抗体においては、各軽鎖は軽鎖可変領域（本明細書においてはＶＬと略される）および軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は１つのドメイン、すなわち、ＣＬから構成される。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される、より保存された領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域に更に細分されうる。各ＶＨおよびＶＬは３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成され、それらはアミノ末端からカルボキシ末端の方向に以下の順序で位置している：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合をもたらしうる。
一般に、基本的な抗体構造単位は四量体を含む。各四量体は、ポリペプチド鎖の、２つの同一ペアを含み、各ペアは１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０～７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識をもたらす約１００～１１０個またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。重鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能を主にもたらす定常領域を定めうる。典型的には、ヒト軽鎖はカッパおよびラムダ軽鎖として分類される。更に、ヒト重鎖は、典型的には、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファまたはイプシロンとして分類され、それぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥとしての、抗体のアイソタイプを定める。軽鎖および重鎖においては、可変領域および定常領域は約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域により連結されており、重鎖は約１０個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域をも含む。全般的には、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．編，２ｎｄ ｅｄ．Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい。
抗体の重鎖は、末端リジン（Ｋ）、または末端グリシンおよびリジン（ＧＫ）を含む又は含まないことが可能である。したがって、末端リジンを欠くがグリシン残基で終結する本明細書に示されている重鎖定常領域アミノ酸配列を含む本発明における抗体の特定の実施形態は、末端グリシン残基も存在しない実施形態を更に含む。これは、末端リジン、そして時にはグリシンおよびリジンが、抗体の発現中に、一緒に切断されるからである。
本明細書中で用いる「抗原結合性フラグメント」は、抗体のフラグメント、すなわち、完全長抗体により結合される抗原に特異的に結合する能力を保有する抗体フラグメント、例えば、１以上のＣＤＲ領域を保有するフラグメントを意味する。抗体結合性フラグメントの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖフラグメント；ジアボディ；一本鎖抗体分子、例えばｓｃ－Ｆｖ；ならびに抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体およびナノボディが含まれるが、これらに限定されるものではない。
本明細書中で用いる「Ｆａｂフラグメント」は１個の軽鎖ならびに１個の重鎖の可変領域およびＣＨ１から構成される。Ｆａｂ分子の重鎖は別の重鎖分子とはジスルフィド結合を形成し得ない。「Ｆａｂフラグメント」は抗体のパパイン切断の産物でありうる。
本明細書中で用いる「Ｆａｂ’フラグメント」は１個の軽鎖、ならびにＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインを含有する１個の重鎖の部分または断片、そしてまた、ＣＨ１およびＣＨ２ドメイン間の領域を含有し、その結果、２個のＦａｂ’フラグメントの、２個の重鎖間で鎖間ジスルフィド結合が形成されてＦ（ａｂ’）２分子を形成しうる。
本明細書中で用いる「Ｆ（ａｂ’）２フラグメント」は、２個の軽鎖、ならびにＣＨ１およびＣＨ２ドメイン間の定常領域の部分およびＶＨドメインを含有する２個の重鎖を含有し、その結果、それらの２個の重鎖の間で鎖間ジスルフィド結合が形成される。したがって、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、それらの２個の重鎖の間のジスルフィド結合により連結された２個のＦａｂ’フラグメントから構成される。「Ｆ（ａｂ’）２フラグメント」は抗体のペプシン切断の産物でありうる。
本明細書中で用いる「Ｆｖ領域」は重鎖および軽鎖の両方からの可変領域を含むが、定常領域を欠いている。
これらの及び他の潜在的構築物はＣｈａｎ ＆ Ｃａｒｔｅｒ（２０１０）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：３０１に記載されている。これらの抗体フラグメントは、当業者に公知の通常の技術を用いて得られ、該フラグメントは、無傷抗体の場合と同様にして有用性に関して選別（スクリーニング）される。抗原結合性部分は、組換えＤＮＡ技術により、または無傷免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的切断により製造されうる。
本明細書中で用いる「Ｆｃ」領域は、抗体のＣＨ１およびＣＨ２ドメインを含む２個の重鎖フラグメントを含有する。それらの２個の重鎖フラグメントは２以上のジスルフィド結合により、およびＣＨ３ドメインの疎水性相互作用により結合している。
本明細書中で用いる「ジアボディ」は、２個の抗原結合部位を有する小さな抗体フラグメントを意味し、該フラグメントは、同一ポリペプチド鎖内で軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）（ＶＨ－ＶＬまたはＶＬ－ＶＨ）を含む。同一鎖上で２個のドメイン間のペア形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用することにより、それらのドメインは別の鎖の相補的ドメインとペア形成することを強要され、２個の抗原結合部位を生成する。ジアボディは、例えばＥＰ ４０４，０９７；ＷＯ ９３／１１１６１；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８に、より詳細に記載されている。操作された抗体変異体の総説としては、全般的には、ＨｏｌｌｉｇｅｒおよびＨｕｄｓｏｎ（２００５）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１１２６－１１３６を参照されたい。
本明細書中で用いる「二重特異性抗体」は、２つの異なる重鎖／軽鎖ペア、したがって２つの異なる結合部位を有する人工ハイブリッド抗体である。例えば、二重特異性抗体は、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐもしくはαＦＸＩ－１３７１６の６個のＣＤＲを少なくとも含む第１抗体または変異体実施形態（ここで、前記の６個のＣＤＲの１以上は１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する）の１つの重鎖と１つの軽鎖とを含む第１重鎖／軽鎖ペアを、ＦＸＩ以外の関心抗原に対する特異性を有する第２抗体の１つの重鎖と１つの軽鎖とを含む第２重鎖／軽鎖ペアと共に含みうる。二重特異性抗体は、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’フラグメントの連結を含む種々の方法により製造されうる。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉら（１９９０）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５－３２１；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８，１５４７－１５５３を参照されたい。また、二重特異性抗体は「ジアボディ」（Ｈｏｌｌｉｇｅｒら（１９９３）ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８）または「ジャヌシン（Ｊａｎｕｓｉｎ）」（Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら（１９９１）ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５－３６５９およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら（１９９２）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｓｕｐｐｌ．７：５１－５２）として形成されうる。
本明細書中で用いる「単離（された）」抗体またはその抗原結合性フラグメントは、それらが産生された細胞または細胞培養からの他の生物学的分子を少なくとも部分的に含有しない。そのような生物学的分子には、核酸、タンパク質、脂質、炭水化物、または細胞残渣および増殖培地のような他の物質が含まれる。単離された抗体または抗原結合性フラグメントは更に、宿主細胞からの又はその増殖培地の生物学的分子のような発現系成分を少なくとも部分的に含有しないことが可能である。一般に、「単離（された）」なる語は、そのような生物学的分子の完全な非存在、または水、バッファーもしくは塩の非存在、または該抗体もしくはフラグメントを含む医薬製剤の成分を指すものではない。
本明細書中で用いる「モノクローナル抗体」は実質的に均一な抗体の集団を意味し、すなわち、該集団を構成する抗体分子は、僅かな量で存在しうる考えられうる自然突然変異以外は、アミノ酸配列において同一である。これとは対照的に、通常の（ポリクローナル）抗体調製物は、典型的には、異なるエピトープに対して特異的であることが多い可変ドメインに異なるアミノ酸配列を有する多数の異なる抗体を含む。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体集団から得られるという該抗体の特性を示しており、いずれかの特定の方法による該抗体の製造を要するとは解釈されるべきではない。例えば、本発明に従い使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６，４９５により最初に記載されたハイブリドーマ法により製造可能であり、あるいは組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）により製造可能である。また、「モノクローナル抗体」は、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８およびＭａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ ２２２：５８１－５９７に記載されている技術を用いて、ファージ抗体ライブラリーから単離されうる。Ｐｒｅｓｔａ（２００５）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１も参照されたい。
本明細書中で用いる「キメラ抗体」は、第１抗体からの可変ドメインと第２抗体からの定常ドメインとを有する抗体であり、ここで、（ｉ）第１抗体および第２抗体は異なる種からのものであり（米国特許第４，８１６，５６７号およびＭｏｒｒｉｓｏｎら，（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６８５１－６８５５）、または（ｉｉ）第１抗体および第２抗体は異なるアイソタイプからのものである（例えば、ＩｇＧ１抗体からの可変ドメインおよびＩｇＧ４抗体からの定常ドメイン、例えば、αＦＸＩ－１３４６５ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ））。１つの実施形態においては、可変ドメインはヒト抗体（「親抗体」）から得られ、定常ドメイン配列は非ヒト抗体（例えば、マウス、ラット、イヌ、サル、ゴリラ、ウマ）から得られる。もう１つの態様においては、可変ドメインは非ヒト抗体（「親抗体」）（例えば、マウス、ラット、イヌ、サル、ゴリラ、ウマ）から得られ、定常ドメイン配列はヒト抗体から得られる。もう１つの態様においては、可変ドメインはヒトＩｇＧ１抗体（「親抗体」）から得られ、定常ドメイン配列はヒトＩｇＧ４抗体から得られる。
本明細書中で用いる「ヒト化抗体」は、ヒト抗体および非ヒト（例えば、マウスまたはラット）抗体の両方からの配列を含有する抗体の形態を意味する。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの全部を含み、ここで、超可変ループは非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、フレームワーク（ＦＲ）領域の全部または実質的に全部はヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、所望により、ヒト免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部を含みうる。
本明細書中で用いる「完全ヒト抗体」は、ヒト免疫グロブリンアミノ酸配列またはその変異体配列（突然変異を欠く抗体と比較して修飾された機能または効力を有する完全ヒト抗体を得るために組換え的に導入された該突然変異を含むもの）を含む抗体を意味する。完全ヒト抗体は非ヒト免疫グロブリンアミノ酸配列を含まず、例えば、定常ドメインおよび可変ドメイン（ＣＤＲを含む）は、前記の突然変異から生じたもの以外のヒト配列を含む。完全ヒト抗体は、インシリコでライブラリーにおける多様性が生成される完全ヒト抗体ライブラリー（例えば、米国特許第８，８７７，６８８号または第８，６９１，７３０号を参照されたい）から得られる抗体または免疫グロブリンのアミノ酸配列を含みうる。完全ヒト抗体は、非ヒト生物において産生されたそのような抗体を含み、例えば、完全ヒト抗体は、マウスにおいて、マウス細胞において、あるいはマウス細胞に由来するハイブリドーマにおいて産生された場合には、マウス炭水化物鎖を含有しうる。同様に、「マウスまたはネズミ抗体」は、マウスまたはネズミ免疫グロブリン配列のみを含む抗体を意味する。あるいは、完全ヒト抗体は、ラットにおいて、ラット細胞において、あるいはラット細胞に由来するハイブリドーマにおいて産生された場合には、ラット炭水化物鎖を含有しうる。同様に、「ラット抗体」は、ラット免疫グロブリン配列のみを含む抗体を意味する。
本明細書中で用いる、抗体または免疫グロブリンに関する「非ヒトアミノ酸配列」は、非ヒト哺乳動物のアミノ酸配列に特徴的なアミノ酸配列を意味する。この語は、インシリコでライブラリーにおける多様性が生成される完全ヒト抗体ライブラリー（例えば、米国特許第８，８７７，６８８号または第８，６９１，７３０号を参照されたい）から得られる抗体または免疫グロブリンのアミノ酸配列を含まない。
本明細書中で用いる「エフェクター機能」は、抗体イソタイプによって様々である、抗体のＦｃ領域に起因する生物活性を意味する。抗体エフェクター機能の例には、Ｃｌｑ結合および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）のダウンレギュレーション；ならびにＢ細胞活性化が含まれる。
各軽／重鎖ペアの可変領域は抗体結合部位を形成する。したがって、一般に、無傷抗体は２つの結合部位を有する。二官能性または二重特異性抗体の場合を除き、それらの２つの結合部位は一般に同じである。
典型的には、重鎖および軽鎖の両方の可変ドメインは、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）内に位置する、相補性決定領域（ＣＤＲ）とも称される３つの超可変領域を含む。ＣＤＲは、通常、特定のエピトープへの結合が可能になるように、フレームワーク領域により整列されている。一般に、Ｎ末端からＣ末端方向に、軽鎖および重鎖可変ドメインの両方はＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の帰属は、一般に、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｋａｂａｔら；Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．；５ｔｈ ｅｄ．；ＮＩＨ Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１－３２４２（１９９１）；Ｋａｂａｔ（１９７８）Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．３２：１－７５；Ｋａｂａｔら（１９７７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９－６６１６；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８７）Ｊ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７またはＣｈｏｔｈｉａら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８－８８３の定義に基づいている。
本明細書中で用いる「超可変領域」は、抗原結合をもたらす、抗体のアミノ酸残基を意味する。超可変領域は「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」（すなわち、軽鎖可変ドメイン内のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３ならびに重鎖可変ドメイン内のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３）からのアミノ酸残基を含む。Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（配列により抗体のＣＤＲ領域を定めている）を参照されたい。また、ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（構造により抗体のＣＤＲ領域を定めている）も参照されたい。
本明細書中で用いる「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、ＣＤＲ残基として本明細書中で定義されている超可変領域残基以外の可変ドメイン残基を意味する。
本明細書中で用いる「保存的に修飾された変異体」または「保存的置換」は、アミノ酸が、類似特性（例えば、電荷、側鎖サイズ、疎水性／親水性、バックボーンコンホメーションおよび剛性など）を有する他のアミノ酸で置換されることを意味し、ここで、該変化は、しばしば、タンパク質の生物活性を改変することなく施されうる。一般に、ポリペプチドの非必須領域における単一アミノ酸置換は生物活性を実質的に変化させない、と当業者は認識している（例えば、Ｗａｔｓｏｎら（１９８７）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅ，Ｔｈｅ Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，ｐ．２２４（４ｔｈ Ｅｄ．）を参照されたい）。また、構造的または機能的に類似したアミノ酸の置換は、生物活性を損なう可能性が低い。典型的な保存的置換を以下の表に示す。
Figure 0007022081000001
本明細書中で用いる「エピトープ」または「抗原決定基」なる語は、免疫グロブリンまたは抗体が特異的に結合する抗原（例えば、ＦＸＩ）上の部位を意味する。タンパク質抗原内のエピトープは、連続的（隣接）アミノ酸（通常は直線状エピトープ）、またはタンパク質の三次フォールディングよって並置された不連続的アミノ酸（通常はコンホメーションエピトープ）の両方から形成されうる。連続的アミノ酸から形成されるエピトープは、常にというわけではないが典型的には、変性溶媒にさらされても保持され、一方、三次フォールディングにより形成されるエピトープは、典型的には、変性溶媒で処理されると消失する。エピトープは、典型的には、特有の空間的コンホメーションで、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５個のアミノ酸を含む。与えられた抗体がどのエピトープに結合するのかを決定するための方法（すなわち、エピトープマッピング）は当技術分野においてよく知られており、例えば、イムノブロッティングおよび免疫沈降アッセイを包含し、それらにおいては、重複または連続的ペプチド（例えば、ＦＸＩからのもの）を、与えられた抗体（例えば、抗ＦＸＩ抗体）との反応性に関して試験する。エピトープの空間的コンホメーションを決定する方法には、当技術分野における技術および本明細書に記載されている技術、例えば、Ｘ線結晶学、２次元核磁気共鳴およびＨＤＸ－ＭＳが含まれる（例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ編，（１９９６）を参照されたい）。
「エピトープマッピング」なる語は、抗体－抗原認識に関与する抗原上の分子決定基を特定する方法を意味する。
２つ以上の抗体に関する「同一エピトープに結合する」なる語は、与えられた方法により判定された場合の、抗体がアミノ酸残基の同一セグメントに結合することを意味する。抗体が、本明細書に記載されている抗体との「ＦＸＩ上の同一エピトープ」に結合するかどうかを決定するための技術には、例えば、エピトープマッピング法、例えば、エピトープの原子分解能をもたらす、抗原：抗体複合体の結晶のＸ線解析、および水素／重水素交換質量分析（ＨＤＸ－ＭＳ）が含まれる。抗原断片（例えば、タンパク質分解断片）への抗体の結合および抗原の突然変異体への抗体の結合をモニターする他の方法もあり、この場合、抗原配列内のアミノ酸残基の修飾による結合の喪失は、しばしば、エピトープ成分の指標とみなされる（例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発－Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ＆ Ｗｅｌｌｓ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１）。また、エピトープマッピングのためのコンピューター利用コンビナトリアル法も用いられうる。これらの方法は、特定の短いペプチドをコンビナトリアル・ファージ・ディスプレイ・ペプチドライブラリーから関心抗体がアフィニティ分離する能力に基づいている。
「ＦＸＩのような標的への結合に関して他の抗体と競合する」抗体は、該標的への前記の他の抗体の結合を（部分的または完全に）阻害する抗体を意味する。２つの抗体が標的への結合に関して互いに競合するかどうか、すなわち、一方の抗体が標的への他方の抗体の結合を阻害するかどうか及びその阻害の度合は、公知の競合実験を用いて決定されうる。ある実施形態においては、抗体は、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％、標的への別の抗体の結合と競合し、該結合を阻害する。阻害または競合のレベルは、どの抗体が「遮断抗体」（すなわち、標的と共に最初にインキュベートされるコールド（ｃｏｌｄ）抗体）であるかによって異なりうる。競合アッセイは、例えば、Ｅｄ ＨａｒｌｏｗおよびＤａｖｉｄ Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ Ｐｒｏｔｏｃ；２００６；ｄｏｉ：１０．１１０１／ｐｄｂ．ｐｒｏｔ４２７７または“Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”（Ｅｄ ＨａｒｌｏｗおよびＤａｖｉｄ Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，ＵＳＡ １９９９）の第１１章に記載されているとおりに行われうる。競合抗体は同一エピトープ、重複エピトープまたは隣接エピトープ（例えば、立体障害により実証されるもの）に結合する。
他の競合結合アッセイには以下のものが含まれる：固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉら，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９：２４２（１９８３）を参照されたい）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４（１９８６）を参照されたい）；固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ（１９８８）を参照されたい）；１－１２５標識を用いる固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌら，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５（１）：７（１９８８）を参照されたい）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇら，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６（１９９０））；および直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒら，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７（１９９０））。
本明細書中で用いる、ＦＸＩのような抗原に対して「特異的に結合する」は、抗体または他のリガンドが、全体的または部分的に、ＦＸＩとは優先的に会合し、他の分子、特に、ヒト血液または血清中で見出される分子とは会合しないことを意味する。抗体は、典型的には、１０－７～１０－１１Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）により表される高いアフィニティで、その同種（ｃｏｇｎａｔｅ）抗原に特異的に結合する。約１０－６Ｍを超えるいずれのＫＤも非特異的結合を示すとみなされる。本明細書中で用いる、抗原に「特異的に結合する」抗体は、１０－７Ｍ以下のＫＤ、特定の実施形態においては１０－８Ｍ以下もしくは５×１０－９Ｍ以下、または１０－８Ｍ～１０－１１Ｍ以下のＫＤを有することを意味する高いアフィニティで、該抗原および実質的に同じ抗原に結合するが、無関係な抗原には高いアフィニティでは結合しない抗体を意味する。結合の動力学は、本明細書における実施例１に記載されている表面プラズモン共鳴により測定されうる。
抗原が、与えられた抗原と「実質的に同一」であると言えるのは、それが、その与えられた抗原に対して高度のアミノ酸配列同一性を示す場合、例えば、それが、その与えられた抗原のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％または少なくとも９９％またはそれ以上のアミノ酸配列同一性を示す場合である。例えば、ヒトＦＸＩに特異的に結合する抗体はまた、ある非ヒト霊長類種（例えば、カニクイザル）からのＦＸＩとは交差反応しうるが、他の種からのＦＸＩまたはＦＸＩ以外の抗原とは交差反応しないであろう。
本明細書中で用いる「単離された核酸分子」は、該単離ポリヌクレオチドが天然で見出される場合のポリヌクレオチドの全部または一部を伴っておらず、あるいはそれが天然で連結していないポリヌクレオチドに連結している、ゲノム、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡまたは合成由来のＤＮＡまたはＲＮＡあるいはそれらの何らかの組合せを意味する。本開示の目的においては、特定のヌクレオチド配列を「含む核酸分子」は無傷染色体を含まない、と理解されるべきである。特定されている核酸配列を「含む」単離された核酸分子は、特定されている配列に加えて、１０個まで又は更には２０個まで又はそれ以上の他のタンパク質またはその一部もしくは断片のコード配列を含むことが可能であり、あるいは、挙げられている核酸配列のコード領域の発現を制御する機能的に連結された調節配列を含むことが可能であり、および／あるいは、ベクター配列を含むことが可能である。
本明細書中で用いる「治療する」または「治療」は、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントのいずれかを含有する組成物のような治療剤を、該治療剤が治療活性または予防活性を示す疾患の症状の１以上を有する又は該疾患を有する疑いのある対象または患者に内的または外的に投与することを意味する。典型的には、該治療剤は、いずれかの臨床的に測定可能な度合によるそのような症状の退縮の誘導またはそのような症状の進行の抑制により、治療対象または集団における１以上の疾患症状を軽減するのに有効な量で投与される。いずれかの特定の疾患症状を軽減するのに有効な治療剤の量は患者の病態、年齢および体重、ならびに対象において所望の応答を惹起する薬物の能力のような要因によって変動しうる。疾患症状が軽減したかどうかは、その症状の重症度または進行状態を評価するために医師または他の熟練した医療提供者によって典型的に用いられるいずれかの臨床的尺度により評価されうる。この語は更に、障害に関連した症状の発生の遅延および／またはそのような障害の症状の重症度の軽減を含む。この語は更に、既存の無制御の又は望ましくない症状の改善、追加的な症状の予防、およびそのような症状の根本原因の改善または予防を含む。したがって、この語は、障害、疾患もしくは症状を有するヒトまたは動物対象、またはそのような障害、疾患もしくは症状を発生する可能性を有するヒトまたは動物対象に、有益な結果がもたらされていることを示す。
本明細書中で用いる「治療」は、それがヒトまたは獣医対象に適用される場合には、治療的処置および診断的適用を意味する。「治療」は、それがヒトまたは獣医対象に適用される場合には、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントの、ヒトまたは動物対象との接触を含む。
本明細書中で用いる「治療的有効量」は、治療されている対象において所望の効果を達成するのに十分な特定の物質の量を意味する。例えば、これは、ａＰＴＴアッセイにおける判定で少なくとも１９２～２８８時間にわたって凝固を抑制するのに必要な量、またはＦＸＩの活性化を抑制するのに必要な量でありうる。対象に投与される場合、所望のインビトロ効果を達成することが示されている目標組織濃度を達成する投与量が一般に用いられる。
本明細書で用いる「血栓症」は、循環系を通る血液の流れを妨げる、血管内の血餅（「血栓」とも称される）の形成または存在を意味する。血栓症は、通常、血液組成、血管壁の質および／または血流の性質の異常により引き起こされる。血餅の形成は、しばしば、血管壁の損傷（外傷または感染などによるもの）および損傷点を過ぎた位置における血流の減速または停滞により引き起こされる。幾つかの場合には、凝固異常が血栓症を引き起こす。
本明細書中で用いる「止血を妨げることなく」は、本明細書に開示されている抗体または抗体フラグメントを対象または患者に投与した後、検出可能な出血が対象または患者においてほとんど又は全く認められないことを意味する。因子ＸＩを標的化する場合、因子ＸＩから因子ＸＩａへの変換または因子Ｘｉａによる因子ＩＸの活性化を阻害することは、出血を伴うことなく凝固および関連血栓症を抑制する。これとは対照的に、因子ＸＩの変換または活性を阻害することは凝固を抑制するが、出血をも誘発し、または出血のリスクを増加させる。
発明の詳細な説明
本発明は、凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合する抗凝固因子ＸＩ抗体を提供する。これらの抗ＦＸＩ抗体および抗原結合性フラグメントは因子ＸＩＩａによるＦＸＩ活性化のインヒビターであり、止血を妨げることなく血液凝固および関連血栓症（すなわち、抗血栓性適応症）を抑制するのに有用である。例えば、該抗ＦＸＩ抗体は静脈血栓塞栓症（ＶＴＥ）の治療および予防、心房細動における脳卒中予防（ＳＰＡＦ）、または或る医療装置関連血栓塞栓性障害（例えば、ステント、血管内ステントグラフト、カテーテル（心臓または静脈）、連続流心室補助装置（ＣＦ－ＬＶＡＤＳ）、血液透析、心肺バイパスおよび体外膜酸素供給（ＥＣＭＯ）、心室補助装置（ＶＡＤＳ））の治療および予防に用いられうる。したがって、本明細書に開示されている抗ＦＸＩ抗体は、血栓塞栓性障害または疾患を治療するための療法を、そのような療法を要する患者または対象において行うのに有用である。
ＦＸＩは、図１Ｂに示されているドメイン構造および凝固カスケードの内因性経路の必須成分を有するホモ二量体セリンプロテアーゼである。ＦＸＩチモーゲンは因子ＸＩＩａにより、その活性化形態であるＦＸＩａへと切断されうる。ついでＦＸＩａは因子ＩＸを活性化し、最終的にトロンビン生成および血餅形成を誘発する。本明細書に開示されている抗ＦＸＩ抗体はＦＸＩからＦＸＩａへの変換を阻害する（図１Ａを参照されたい）。
操作された酵母株の表面に提示された完全ヒト合成ＩｇＧ１／カッパライブラリーから、抗ＦＸＩ抗体分子を得た。ヒトＦＸＩおよび非ヒト霊長類（ＮＨＰ）ＦＸＩにはサブナノモルのアフィニティで結合しうるが、ヒトおよびＮＨＰ血漿カリクレイン（ＦＸＩに対して５６％のアミノ酸同一性を示すタンパク質）または他のヒト凝固カスケードタンパク質（ＦＩＩ／／ＩＩａ、ＦＶＩＩ／ＶＩＩａ、ＦＩＸ／ＩＸａ、ＦＸ／ＸａおよびＦＸＩＩ／ＸＩＩａ）に対しては結合を示さない抗体を特定するために、該ライブラリーをＦＸＩまたはＦＸＩａでスクリーニングした。これらの特性を有する２つの抗体、すなわち、αＦＸＩ－１８６１１ｐおよびαＦＸＩ－１８６２３ｐが特定された。これらの抗体は、ヒトカッパ（κ）軽鎖とヒトＩｇＧ１（γ１）アイソタイプ重鎖とを含む完全ヒト抗体である。該抗体は、ＦＸＩのアップル３ドメイン内に位置する配列番号８２および８３を含むＦＸＩチモーゲンのエピトープに結合する。また、これらの抗体は、ＦＸＩチモーゲンと同等のアフィニティで、ＦＸＩａに結合する。
αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリーの抗体は、それぞれ配列番号１、配列番号２および配列番号３に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３と、それぞれ配列番号５、配列番号６および配列番号７に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、２および３とを含む。αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリーは、配列番号２１または２２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）可変ドメインと、配列番号２５におけるアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）可変ドメインとを含む抗体を含む。
αＦＸＩ－１８６１１ファミリーの抗体は、それぞれ配列番号１、配列番号２および配列番号４に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３と、それぞれ配列番号５、配列番号６および配列番号７に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、２および３とを含む。αＦＸＩ－１８６１１ファミリーは、配列番号２３または２４に示されているアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）可変ドメインと、配列番号２５におけるアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）可変ドメインとを含む抗体を含む。
αＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗体は、それぞれ配列番号８、配列番号９および配列番号１０に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、２および３と、それぞれ配列番号１１、配列番号１２および配列番号１３に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ１、２および３とを含む。αＦＸＩ－１３７１６ｐファミリーは、配列番号２８または２９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）可変ドメインと、配列番号３０におけるアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）可変ドメインとを含む抗体を含む。このファミリーの抗体は、前のファミリーとは異なる生殖系列から得られた。
本発明は更に、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体の、６個のＣＤＲを少なくとも含む抗ＦＸＩ抗体、または前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態、および抗血栓性適応症、例えばＳＰＡＦを治療するための、該抗体の使用方法を提供する。
特定の態様においては、抗ＦＸＩ抗体は、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体のＨＣ可変ドメイン、あるいは、該ＨＣ可変ドメインが１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその変異体を少なくとも含む。
特定の態様においては、抗ＦＸＩ抗体は、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体のＬＣ可変ドメイン、あるいは、該ＬＣ可変ドメインが１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその変異体を少なくとも含む。
特定の態様においては、抗ＦＸＩ抗体は、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体のＨＣ可変ドメイン、あるいは、該ＨＣ可変ドメインが１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその変異体と、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体のＬＣ可変ドメイン、あるいは、該ＬＣ可変ドメインが１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその変異体とを少なくとも含む。
特定の実施形態においては、本発明における抗体は、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体の、６個のＣＤＲ、あるいは前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含み、更に、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプのものである重鎖（ＨＣ）、およびカッパ型またはラムダ型のものでありうる軽鎖（ＬＣ）を含む。他の実施形態においては、該抗体は、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含み、更に、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡまたはＩｇＥクラスのものでありうる。特定の実施形態においては、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含みうる。
特定の実施形態においては、該抗体は、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含むことが可能であり、更に、ＩｇＧ４アイソタイプのものであるＨＣ定常ドメインを含むことが可能である。ＩｇＧ４フレームワークは、エフェクター機能をほとんど又は全く有さない抗体をもたらす。本発明のもう１つの態様においては、該抗体は、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含むことが可能であり、更に、ＩｇＧ１アイソタイプのものであるＨＣ可変ドメインに融合したＩｇＧ４アイソタイプのものであるＨＣ定常ドメインを含むことが可能である。本発明のもう１つの態様においては、該抗体は、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体のＨＣ可変ドメインおよびＬＣ可変ドメイン、あるいは、該ＨＣおよびＬＣ可変ドメインが、独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその変異体を含むことが可能であり、更に、ＩｇＧ４アイソタイプのものであるＨＣ定常ドメインを含むことが可能である。本発明のもう１つの態様においては、該抗体は、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体のＨＣ可変ドメインおよびＬＣ、あるいは、該ＨＣおよびＬＣが、独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその変異体を含むことが可能であり、更に、ＩｇＧ４アイソタイプのものであるＨＣ定常ドメインを含むことが可能である。
本発明の抗体は更に、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、バイパラトピック（ｂｉｐａｒａｔｏｐｉｃ；二重パラトープ）抗体、完全ヒト抗体およびキメラ抗体を含むが、これらに限定されるものではない。
一般に、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４のような抗体の重鎖のアミノ酸配列は重鎖定常ドメインのＣ末端にリジンを有する。幾つかの場合には、抗体産物の均一性を改善するために、Ｃ末端リジンを欠いた抗体を産生させることが可能である。本発明の抗ＦＸＩ抗体は、Ｃ末端リジンが存在する実施形態、およびＣ末端リジンが存在しない実施形態を含む。例えば、ＩｇＧ１ ＨＣ定常ドメインは、配列番号１８または１９に示されているアミノ酸配列を有することが可能であり、ＩｇＧ４ ＨＣ定常ドメインは、配列番号１６または１７に示されているアミノ酸配列を有することが可能である。
特定の実施形態においては、ＨＣのＮ末端アミノ酸はグルタミン残基でありうる。特定の実施形態においては、ＨＣのＮ末端アミノ酸はグルタミン酸残基でありうる。特定の態様においては、Ｎ末端アミノ酸は、グルタミン酸残基となるように修飾される。
本発明は更に、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含む抗ＦＸＩ抗原結合性フラグメントを提供する。
本発明は更に、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含む抗ＦＸＩ Ｆａｂフラグメントを提供する。
本発明は更に、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含む抗ＦＸＩ抗体、およびＦｃ領域を含むその抗原結合性フラグメント、ならびにそれらの使用方法を提供する。
本発明は更に、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含む抗ＦＸＩ Ｆａｂ’フラグメントを提供する。
本発明は更に、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含む抗ＦＸＩ Ｆ（ａｂ’）２を提供する。
本発明は更に、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含む抗ＦＸＩ Ｆｖフラグメントを提供する。
本発明は更に、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含む抗ＦＸＩ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。
本発明は更に、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体の、３個のＨＣ ＣＤＲまたは３個のＬＣ ＣＤＲ、あるいは、該ＨＣまたはＬＣ ＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含む抗ＦＸＩドメイン抗体を提供する。本発明の１つの実施形態においては、該ドメイン抗体は単一ドメイン抗体またはナノボディである。本発明の１つの実施形態においては、ドメイン抗体は、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーのＣＤＲ、あるいは、該ＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含むナノボディである。
本発明は更に、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含む抗ＦＸＩ二価抗体を提供する。
本発明は更に、ＦＸＩおよび別の関心抗原に対する結合特異性を有する二重特異性抗体および抗原結合性フラグメント、ならびにそれらの使用方法を提供する。
バイパラトピック（ｂｉｐａｒａｔｏｐｉｃ；二重パラトープ）抗体は、同一抗原上の異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。本発明は更に、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体の、６個のＣＤＲ、あるいは、該ＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含む第１抗体の第１重／軽鎖ペアと、第１重／軽鎖ペアにより認識されるエピトープとは異なるＦＸＩエピトープに対する特異性を有する第２抗体の第２重／軽鎖ペアとを有するバイパラトピック抗体を提供する。
本発明は更に、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリーまたはαＦＸＩ－１８６１１ファミリーの抗ＦＸＩ抗体の６個のＣＤＲ、あるいは該ＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含む抗体の第１重／軽鎖ペアと、αＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの６個のＣＤＲ、あるいは該ＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含む抗体の第２重／軽鎖ペアとを有する抗ＦＸＩ抗体およびその抗原結合性フラグメントを提供する。
本発明は更に、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含む抗ＦＸＩジアボディを提供する。
αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体の、６個のＣＤＲ、あるいは、該ＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含む抗体は何らかの方法で修飾されることが可能であり、この場合、それは、活性がモル基準で表された場合、（親抗体、すなわち、それぞれのαＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗体と比較した場合に）そのＦＸＩ結合活性の少なくとも１０％を保有する。好ましくは、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントは親抗体としてのＦＸＩ結合アフィニティの少なくとも２０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％または１００％またはそれ以上を保有する。また、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントは、その生物活性を実質的に改変しない保存的または非保存的アミノ酸置換（抗体の「保存的変異体」または「機能保存変異体」と称される）を含みうると意図される。
本発明は更に、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含む単離された抗ＦＸＩ抗体、およびその抗原結合性フラグメント、ならびにそれらの使用方法を提供し、また、その単離されたポリペプチド免疫グロブリン鎖、ならびにそのようなポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチド、ならびにそのようなポリヌクレオチドを含む単離されたベクターを提供する。
本発明は更に、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含むモノクローナル抗ＦＸＩ抗体、およびその抗原結合性フラグメント、ならびに複数の単離されたモノクローナル抗体を含むモノクローナル組成物を提供する。
本発明は更に、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含む抗ＦＸＩキメラ抗体、およびその使用方法を提供する。
本発明は更に、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含む抗ＦＸＩ完全ヒト抗体、およびその抗原結合性フラグメント、ならびにそれらの使用方法を含む。本発明の１つの実施形態においては、完全ヒト抗ＦＸＩ抗体またはその抗原結合性フラグメントは、完全ヒト免疫グロブリン遺伝子を有するように遺伝的に修飾されたトランスジェニック動物、例えばマウス（例えば、ＨＵＭＡＢマウス、例えば、米国特許第５，５４５，８０６号、第５，５６９，８２５号、第５，６２５，１２６号、第５，６３３，４２５号、第５，６６１，０１６号、第５，７７０，４２９号、第５，７８９，６５０号、第５，８１４，３１８号、第５，８７４，２９９号および第５，８７７，３９７号、ならびにＨａｒｄｉｎｇら，（１９９５）Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７６４：５３６ ５４６を参照されたい；またはＸＥＮＯＭＯＵＳＥ、例えば、Ｇｒｅｅｎら，１９９９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３１：１１－２３を参照されたい）からの単離産物、または抗ＦＸＩ完全ヒト抗体もしくはその抗原結合性フラグメントの免疫グロブリン鎖を発現するファージもしくはウイルスからの単離産物である。
幾つかの実施形態においては、種々の定常ドメインが、本発明で提供されるＣＤＲに由来するＶＬおよびＶＨ領域に連結されうる。例えば、本発明の抗体（またはフラグメント）の個々の意図される使用がエフェクター機能の改変を求めるものである場合には、ヒトＩｇＧ１以外の重鎖定常ドメインが使用可能であり、あるいはハイブリッドＩｇＧ１／ＩｇＧ４が使用可能である。
ヒトＩｇＧ１抗体は長い半減期およびエフェクター機能、例えば補体活性化および抗体依存性細胞傷害性をもたらすが、そのような活性は該抗体の全ての用途に望ましいとは限らない可能性がある。そのような場合、例えばヒトＩｇＧ４定常ドメインが使用されうる。本発明は、ＩｇＧ４定常ドメインを含む抗ＦＸＩ抗体およびその抗原結合性フラグメント、例えば、アンタゴニストヒト抗ＦＸＩ抗体およびフラグメント、ならびにそれらの使用方法を含む。１つの実施形態においては、該ＩｇＧ４定常ドメインはＥＵ系における２２８位およびＫＡＢＡＴ系における２４１位に対応する位置において天然ヒトＩｇＧ４定常ドメイン（Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ０１８６１．１）とは異なることが可能であり、この場合、適切な鎖内ジスルフィド結合形成を妨げうる１０６位のシステイン（Ｃｙｓ１０６）および１０９位のシステイン（Ｃｙｓ１０９）（ＥＵ系におけるＣｙｓ２２６およびＣｙｓ２２９位ならびにＫＡＢＡＴ系におけるＣｙｓ２３９およびＣｙｓ２４２位に対応する）間の潜在的鎖間ジスルフィド結合を妨げるために、ＨＣ定常ドメインの１０８位の天然セリン（Ｓｅｒ１０８）がプロリン（Ｐｒｏ）で置換される。Ａｎｇａｌら，Ｍｏｌ．Ｉｍｕｎｏｌ．３０：１０５（１９９３）を参照されたい。Ｓｃｈｕｕｒｍａｎら，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３８：１－８，（２００１）；配列番号１４および４１も参照されたい。他の場合においては、エフェクター機能を低減するために修飾された修飾ＩｇＧ１定常ドメインが使用されうる。例えば、ＡＤＣＣおよびＣＤＣを著しく低減するために、ＩｇＧ１アイソタイプは２３３～２３６位のＩｇＧ２残基ならびに３２７、３３０および３３１位のＩｇＧ４残基の置換を含みうる（Ａｒｍｏｕｒら，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（８）：２６１３－２４（１９９９）；Ｓｈｉｅｌｄｓら，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７６（９）：６５９１－６０４（２００１））。もう１つの実施形態においては、ＩｇＧ ＨＣは、２９７位付近のアスパラギン（Ａｓｎ）残基のＮ－グリコシル化を欠くように遺伝的に修飾される。Ｎ－グリコシル化のコンセンサス配列はＡｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒ（ここで、ＸａａはＰｒｏ以外の任意のアミノ酸である）であり、ＩｇＧ１においては、Ｎ－グリコシル化コンセンサス配列はＡｓｎ－Ｓｅｒ－Ｔｈｒである。該修飾は、ＨＣをコードする核酸分子における２９７位のＡｓｎのコドンを別のアミノ酸、例えばＧｌｎのコドンで置換することにより達成されうる。あるいは、ＳｅｒのコドンをＰｒｏのコドンで置換することが可能であり、ＴｈｒのコドンをＳｅｒのコドン以外の任意のコドンで置換することが可能である。そのような修飾ＩｇＧ１分子は、検出可能なエフェクター機能をほとんど又は全く有さない。あるいは、３つ全てのコドンが修飾される。
本発明の１つの実施形態においては、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体の６個のＣＤＲ、あるいは前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有するその実施形態を少なくとも含む抗ＦＸＩ抗体は、２個の軽鎖および２個の重鎖（定常領域を含む）を有する完全四量体構造を含む。各軽／重鎖ペアの可変領域が抗体結合部位を形成する。したがって、一般に、無傷抗体は２つの結合部位を有する。二重特異性抗体の場合を除き、それらの２つの結合部位は一般に同じである。
特定の実施形態においては、本発明は、表１に示されている抗ＦＸＩ抗体を提供する。
Figure 0007022081000002
実施例３に記載されている水素－重水素交換質量分析（ＨＤＸ－ＭＳ）によるエピトープマッピングは、前記ＨＣおよびＬＣ ＣＤＲを含む抗ＦＸＩ抗体が、配列番号８２および配列番号８３を含むアップル３ドメイン上の特定のエピトープに結合することを示した。
したがって、本明細書に開示されている抗体はＦＸＩのアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩＩａによるＦＸＩ活性化を阻害し、そしてまた、ＦＸＩａによるＦＩＸ活性化のアロステリック競合インヒビターとして挙動する。エピトープマッピングの結果は、アップル３上のαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの「フットプリント」がＦＸＩａにおけるＦＩＸ結合性エクソサイトと重複していることを示唆している。
医薬組成物および投与
抗ＦＸＩ抗体またはその抗原結合性フラグメントの医薬組成物または無菌組成物を製造するためには、該抗体またはその抗原結合性フラグメントを医薬上許容される担体または賦形剤と混合する。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ＳｃｉｅｎｃｅｓおよびＵ．Ｓ． Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９８４）、およびＵ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ（ＵＳＰ）１２６０１ Ｔｗｉｎｂｒｏｏｋ Ｐａｒｋｗａｙ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ ２０８５２－１７９０，ＵＳＡによるインターネット上の継続的更新を参照されたい。
治療用および診断用物質の製剤は、例えば凍結乾燥粉末、スラリー、水性溶液または懸濁液の形態で、許容される担体、賦形剤または安定剤と混合することにより製造されうる（例えば、Ｈａｒｄｍａｎら（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，ＷｉｌｌｉａｍｓおよびＷｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ａｖｉｓら（編）（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；ＷｅｉｎｅｒおよびＫｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照されたい）。
もう１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントを含む組成物を、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ２０１７（Ｔｈｏｍｓｏｎ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；７５ｓｔ ｅｄｉｔｉｏｎ（２００２年１１月１日））に従い、対象に投与する。
投与方法は様々でありうる。適切な投与経路は、好ましくは、非経口または皮下である。他の投与経路には、経口、経粘膜、皮内、直接心室内、静脈内、鼻腔内、吸入、吹送または動脈内が含まれうる。
特定の実施形態においては、該抗ＦＸＩ抗体またはその抗原結合性フラグメントは、侵襲的経路、例えば注射により投与されうる。本発明の更なる実施形態においては、抗ＦＸＩ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたはその医薬組成物は静脈内、皮下、動脈内、または吸入、エアゾール運搬により投与されうる。非侵襲性経路（例えば、経口的、例えば、丸剤、カプセル剤または錠剤）による投与も本発明の範囲内である。
組成物は、当技術分野で公知の医療装置で投与されうる。例えば、本発明の医薬組成物は、例えば予め充填されたシリンジまたは自動注入装置を含む、皮下針を使用する注射により投与されうる。
本明細書に開示されている医薬組成物は、例えば米国特許第６，６２０，１３５号、第６，０９６，００２号、第５，３９９，１６３号、第５，３８３，８５１号、第５，３１２，３３５号、第５，０６４，４１３号、第４，９４１，８８０号、第４，７９０，８２４号または第４，５９６，５５６号に開示されている装置のような無針（ｎｅｅｄｌｅｌｅｓｓ）皮下注射装置によっても投与されうる。
本明細書に開示されている医薬組成物は注入によっても投与されうる。医薬組成物を投与するための良く知られたインプラントおよびモジュールの例には、米国特許第４，４８７，６０３号（これは、制御された速度で医薬を分注するための移植可能な微量注入ポンプを開示している）、米国特許第４，４４７，２３３号（これは、正確な注入速度で医薬を運搬するための医薬注入ポンプを開示している）、米国特許第４，４４７，２２４号（これは、連続的薬物運搬のための可変流量移植可能注入装置を開示している）、米国特許第４，４３９，１９６号（これは、マルチチャンバ・コンパートメントを有する浸透性薬物運搬系を開示している）に開示されているものが含まれる。多数の他のそのようなインプラント、運搬系およびモジュールは当業者によく知られている。
投与レジメンは、該治療用抗体の血清または組織代謝回転速度、症状の程度、治療用抗体の免疫原性、および生物学的マトリックスにおける標的細胞の接近可能性を含む幾つかの要因に左右される。好ましくは、投与レジメンは、望ましくない副作用を最小にすると同時に標的罹患状態の改善をもたらす十分な治療用抗体を運搬する。したがって、運搬される生物学的物質の量は、部分的には、個々の治療用抗体および治療される状態の重症度に左右される。治療量抗体の適当な用量を選択する際の指針が利用可能である（例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ（１９９６）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ；Ｋｒｅｓｉｎａ（編）（１９９１）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｃｈ（編）（１９９３）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｅｒｔら，２００３，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１－６０８；Ｍｉｌｇｒｏｍら，１９９９，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６－１９７３；Ｓｌａｍｏｎら，２００１，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３－７９２；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚら，２０００，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３－６１９；Ｇｈｏｓｈら，２００３，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４－３２；Ｌｉｐｓｋｙら，２０００，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４－１６０２を参照されたい）。
投与レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療応答）が得られるように調節される。例えば、単回ボーラスを投与することが可能であり、幾つかの分割量を経時的に投与することが可能であり、あるいは、治療状況の緊急性により示されるとおりに用量を比例的に減少または増加させることが可能である。投与の容易さおよび投与量の均一性のために、非経口組成物を投与単位形態で処方することが特に有利である。本明細書中で用いる投与単位形態は、治療される対象のための単位投与量として適した物理的に分離した単位を意味する。各単位は、所望の治療効果が得られるように計算された所定量の活性化合物を、必要とされる医薬担体と共に含む。本明細書に記載されている投与単位形態の詳細は、（ａ）抗体または抗体結合性フラグメントの特有の特徴および達成されるべき個々の治療効果、ならびに（ｂ）個体における感受性の治療のためにそのような活性分子を配合する分野に固有の制約によって決まり、それらに直接左右される（例えば、Ｙａｎｇら（２００３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４９：４２７－４３４；Ｈｅｒｏｌｄら（２００２）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４６：１６９２－１６９８；Ｌｉｕら（１９９９）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｐｓｙｃｈ．６７：４５１－４５６；Ｐｏｒｔｉｅｌｊｉら（２００３）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２：１３３－１４４を参照されたい）。
キット
更に、本明細書に記載されているもう１つの治療剤（これらに限定されるものではない）を含む１以上の追加的成分と共に、本明細書に記載されている抗ＦＸＩ抗体または抗原結合性フラグメント（これらに限定されるものではない）を含む１以上の成分を含むキットを提供する。該抗体もしくはフラグメントおよび／または該治療剤は、純粋な組成物として、または医薬組成物において医薬上許容される担体と組合せて製剤化されうる。
１つの実施形態においては、該キットは、抗ＦＸＩ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたはその医薬組成物を１つの容器（例えば、無菌ガラスまたはプラスチックバイアル）内に、そしてもう１つの治療剤をもう１つの容器（例えば、無菌ガラスまたはプラスチックバイアル）内に含む。
もう１つの実施形態においては、該キットは、単一の共通の容器内に、所望により医薬組成物において、一緒に製剤化される１以上の治療剤と組合された、本発明の抗ＦＸＩ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたはその医薬組成物を含む、本発明の組合せを含む。
該キットが対象への非経口投与のための医薬組成物を含む場合、該キットは、そのような投与を行うための装置を含みうる。例えば、該キットは前記の１以上の皮下針または他の注射装置を含みうる。したがって、本発明は、注射装置と該抗ＦＸＩ抗体またはその抗原結合性フラグメントとを含むキットを含み、例えば、ここで、該注射装置は該抗体またはフラグメントを含み、あるいは該抗体またはフラグメントは別個の容器内に存在する。
該キットは、該キットにおける医薬組成物および剤形に関する情報を含む添付文書を含みうる。一般に、そのような情報は、封入されている医薬組成物および剤形を有効かつ安全に使用することにおいて患者および医師を補助する。例えば、本発明の組合せに関する以下の情報が添付文書（インサート）において供給されうる：薬物動態、薬力学、臨床試験、有効性パラメータ、適応症および用法、禁忌、警告、予防策、有害反応、過剰投薬、適切な投与量および投与、供給方法、適切な保存条件、参考資料、製造業者／流通業者情報ならびに特許情報。
抗体およびその抗原結合性フラグメントの製造方法
本明細書に開示されている抗ＦＸＩ抗体およびそのフラグメントは組換え法によっても製造されうる。この実施形態においては、該抗体分子をコードする核酸をベクター（プラスミドまたはウイルス）内に挿入し、宿主細胞内にトランスフェクトまたは形質転換し、該宿主細胞においてそれを発現させ、該宿主細胞から分泌させることが可能である。当技術分野で公知である組換え抗体を製造するための幾つかの方法が存在する。
本明細書に開示されている抗体またはフラグメントの発現のための宿主として利用可能な哺乳類細胞系は当技術分野でよく知られており、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能な多数の不死化細胞系を包含する。これらは、とりわけ、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳＯ、ＳＰ２細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎（ＢＨＫ）細胞、サル腎細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２）、Ａ５４９細胞、３Ｔ３細胞、ヒト胎児腎２９３（ＨＥＫ－２９３）細胞および多数の他の細胞系を包含する。特に好ましい細胞系は、どの細胞系が高い発現レベルを有するのかを決定することにより選択される。使用されうる他の細胞系としては、昆虫細胞系、例えばＳｆ９細胞、両生類細胞、細菌細胞、植物細胞、糸状真菌細胞［例えば、トリコデルマ・レーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）］および酵母細胞［例えば、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）またはピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）］が挙げられる。特定の態様においては、宿主細胞は原核宿主細胞、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）でありうる。
重鎖またはその抗原結合性部分もしくはフラグメント、軽鎖および／またはその抗原結合性フラグメントをコードする核酸分子を含む組換え発現ベクターを宿主細胞内に導入する場合、該宿主細胞における該抗体の発現、またはより好ましくは、該宿主細胞が培養される培地内への該抗体の分泌を可能にするのに十分な条件下および時間にわたって、該宿主細胞を培養することにより、該抗体を製造する。該抗体を培地から回収し、更に精製または加工して、本発明の抗体を得ることが可能である。
特定の態様においては、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体のＨＣおよびＬＣ ＣＤＲを少なくとも含むＨＣおよびＬＣをコードする核酸分子、あるいは、６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有し、および／または、ＨＣおよび／またはＬＣ可変領域フレームワークが０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその実施形態を少なくとも含むＨＣおよびＬＣをコードする核酸分子を含む発現ベクターで、宿主細胞をトランスフェクトする。
特定の態様においては、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体のＨＣ ＣＤＲを少なくとも含むＨＣをコードする核酸分子、あるいは、６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有し、および／または、ＨＣおよび／またはＬＣ可変領域フレームワークが０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその実施形態を少なくとも含むＨＣをコードする核酸分子を含む第１発現ベクターと、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体のＬＣ ＣＤＲを少なくとも含むＬＣをコードする核酸分子、あるいは、６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有し、および／または、ＨＣおよび／またはＬＣ可変領域フレームワークが０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその実施形態を少なくとも含むＬＣをコードする核酸分子を含む第２発現ベクターとで、宿主細胞をトランスフェクトする。
特定の実施形態においては、ＨＣおよびＬＣは融合タンパク質として発現され、該融合タンパク質においては、ＨＣおよびＬＣのＮ末端は、分泌経路を介した抗体の輸送を容易にするリーダー配列に融合している。使用されうるリーダー配列の例には、ＭＳＶＰＴＱＶＬＧＬＬＬＬＷＬＴＤＡＲＣ（配列番号１４）またはＭＥＷＳＷＶＦＬＦＦＬＳＶＴＴＧＶＨＳ（配列番号１５）が含まれる。
本発明における典型的な抗体のＨＣは、配列番号３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８または８０に示されているヌクレオチド配列を有する核酸分子によりコードされうる。
本発明における典型的な抗体のＬＣは、配列番号２７または３２に示されているヌクレオチド配列を有する核酸分子によりコードされうる。
本発明は更に、配列番号３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８または８０のアミノ酸配列を有する核酸分子を含むプラスミドまたはウイルスベクターを提供する。本発明は更に、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体のＨＣをコードする核酸分子、あるいは、６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有し、および／または、ＨＣおよび／またはＬＣ可変領域フレームワークが０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその実施形態のＨＣをコードする核酸分子と、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体のＬＣをコードする核酸分子、あるいは、６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有し、および／または、ＨＣおよび／またはＬＣ可変領域フレームワークが０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその実施形態のＬＣをコードする核酸分子とを含むプラスミドまたはウイルスベクターを提供する。
本発明は更に、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体のＨＣをコードする核酸分子を含むプラスミドまたはウイルスベクター、およびαＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体のＬＣをコードする核酸分子を含むプラスミドまたはウイルスベクターを提供する。
本発明は更に、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体のＨＣをコードする核酸分子、あるいは、６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有し、および／または、ＨＣおよび／またはＬＣ可変領域フレームワークが０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその実施形態のＨＣをコードする核酸分子と、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ファミリーまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体のＬＣをコードする核酸分子、あるいは、６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有し、および／または、ＨＣおよび／またはＬＣ可変領域フレームワークが０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその実施形態のＬＣをコードする核酸分子とを含む１以上のプラスミドまたはウイルスベクターを含む宿主細胞を提供する。特定の実施形態においては、該宿主細胞はＣＨＯまたはＨＥＫ－２９３宿主細胞である。
抗体は、標準的なタンパク質精製方法を用いて培地から回収されうる。更に、生産細胞系からの本発明の抗体（またはそれからの他の部分）の発現は、幾つかの公知技術を用いて増強されうる。例えば、グルタミンシンテターゼ遺伝子発現系（ＧＳ系）は、一定条件下で発現を増強するための一般的アプローチである。
一般に、個々の細胞系またはトランスジェニック動物において産生される糖タンパク質は、該細胞系またはトランスジェニック動物において産生される糖タンパク質に特徴的なグリコシル化パターンを有する（例えば、Ｃｒｏｓｅｔら，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６１：３３６－３４８（２０１２）を参照されたい）。したがって、抗体の個々のグリコシル化パターンは、該抗体を製造するために使用される個々の細胞系またはトランスジェニック動物に左右される。しかし、本発明で提供される核酸分子によりコードされる、または本発明で提供されるアミノ酸配列を含む全ての抗体は、該抗体が有しうるグリコシル化パターンには無関係に、本発明を構成する。
以下の実施例は本発明の更なる理解を促すことを意図したものである。
一般的方法
分子生物学における標準的な方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ＦｒｉｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ（１９８２ ＆ １９８９ ２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１ ３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，３ｒｄｅｄ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ｗｕ（１９９３）Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ，Ｖｏｌ．２１７，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ．に記載されている。標準的な方法は、Ａｕｓｂｅｌら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ＶｏＩｓ．１－４，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹにも記載されており、これは、細菌細胞におけるクローニングおよびＤＮＡ突然変異誘発（Ｖｏｌ．１）、哺乳類細胞および酵母におけるクローニング（Ｖｏｌ．２）、複合糖質およびタンパク質発現（Ｖｏｌ．３）、ならびにバイオインフォマティクス（Ｖｏｌ．４）を記載している。
免疫沈降、クロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離および結晶化を含むタンパク質精製のための方法が記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎら（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。化学分析、化学修飾、翻訳後修飾、融合タンパク質の製造、タンパク質のグリコシル化が記載されている（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ａｕｓｕｂｅｌら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．３，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ，ｐｐ．１６．０．５－１６．２２．１７；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃｏ．（２００１）Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｏｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ；ｐｐ．４５－８９；Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ（２００１）ＢｉｏＤｉｒｅｃｔｏｒｙ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．，ｐｐ．３８４－３９１を参照されたい）。ポリクローナルおよびモノクローナル抗体の製造、精製およびフラグメント化が記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９９９）Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，前掲）。リガンド／受容体相互作用を特徴づけるための標準的な技術が利用可能である（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．４，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい）。
モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体およびヒト化抗体は製造可能である（例えば、ＳｈｅｐｅｒｄおよびＤｅａｎ（編）（２０００）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎおよびＤｕｂｅｌ（編）（２００１）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ｐｐ．１３９－２４３；Ｃａｒｐｅｎｔｅｒら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：６２０５；Ｈｅら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：１０２９；Ｔａｎｇら（１９９９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：２７３７１－２７３７８；Ｂａｃａら（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－１０６８４；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７－８８３；ＦｏｏｔｅおよびＷｉｎｔｅｒ（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７－４９９；米国特許第６，３２９，５１１号を参照されたい）。
ヒト化に代わる手段は、ファージ上で提示されるヒト抗体ライブラリー、またはトランスジェニックマウスにおけるヒト抗体ライブラリーを使用することである（Ｖａｕｇｈａｎら（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：３０９－３１４；Ｂａｒｂａｓ（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １：８３７－８３９；Ｍｅｎｄｅｚら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６－１５６；ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＣｈａｍｅｓ（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ２１：３７１－３７７；Ｂａｒｂａｓら（２００１）Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｋａｙら（１９９６）Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；ｄｅ Ｂｒｕｉｎら（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：３９７－３９９）。
抗体は例えば小薬物分子、酵素、リポソーム、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）にコンジュゲート化されうる。抗体は治療、診断、キットまたは他の目的に有用であり、例えば色素、放射性同位体、酵素または金属、例えばコロイド金に結合した抗体を包含する（例えば、Ｌｅ Ｄｏｕｓｓａｌら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：１６９－１７５；Ｇｉｂｅｌｌｉｎｉら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：３８９１－３８９８；ＨｓｉｎｇおよびＢｉｓｈｏｐ（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：２８０４－２８１１；Ｅｖｅｒｔｓら（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８：８８３－８８９を参照されたい）。
蛍光標識細胞分取検出系（ＦＡＣＳ）を含むフローサイトメトリーのための方法が利用可能である（例えば、Ｏｗｅｎｓら（１９９４）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｇｉｖａｎ（２００１）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，２ｎｄ ｅｄ．；Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｓｈａｐｉｒｏ（２００３）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪを参照されたい）。例えば診断試薬としての使用のための、核酸プライマーおよびプローブを含む核酸、ポリペプチドおよび抗体を修飾するのに適した蛍光試薬が利用可能である（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）。
免疫系の標準的な組織学的方法が記載されている（例えば、Ｍｕｌｌｅｒ－Ｈａｒｍｅｌｉｎｋ（編）（１９８６）Ｈｕｍａｎ Ｔｈｙｍｕｓ：Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｈｉａｔｔら（２０００）Ｃｏｌｏｒ Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ，ＰＡ；Ｌｏｕｉｓら（２００２）Ｂａｓｉｃ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ：Ｔｅｘｔ ａｎｄ Ａｔｌａｓ，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照されたい）。
例えば抗原フラグメント、リーダー配列、タンパク質フォールディング、機能的ドメイン、グリコシル化部位および配列アライメントを決定するためのソフトウェアパッケージおよびデータベースが利用可能である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ，Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩ（登録商標）Ｓｕｉｔｅ（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｉｎｃ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）；ＧＣＧ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）；ＤｅＣｙｐｈｅｒ（登録商標）（ＴｉｍｅＬｏｇｉｃ Ｃｏｒｐ．，Ｃｒｙｓｔａｌ Ｂａｙ，Ｎｅｖａｄａ）；Ｍｅｎｎｅら（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ １６：７４１－７４２；Ｍｅｎｎｅら（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｎｏｔｅ １６：７４１－７４２；Ｗｒｅｎら（２００２）Ｃｏｍｐｕｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｐｒｏｇｒａｍｓ Ｂｉｏｍｅｄ．６８：１７７－１８１；ｖｏｎ Ｈｅｉｊｎｅ（１９８３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３３：１７－２１；ｖｏｎ Ｈｅｉｊｎｅ（１９８６）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１４：４６８３－４６９０を参照されたい）。
ヒトＦＸＩおよびＦＩＸチモーゲンはＨａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｓｓｅｘ Ｊｕｎｃｔｉｏｎ，ＶＴから入手可能であり、高分子量（ＨＭＷ）キニノーゲンはＥｎｚｙｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｓｏｕｔｈ Ｂｅｎｄ，ＩＮから入手可能であり、エラグ酸はＰａｃｉｆｉｃ Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡから入手可能である。
図１Ａおよび図１Ｂは凝固カスケード、ＦＸＩ、ＦＸＩ ｍＡｂおよび４つ新経口抗凝固剤（ＮＯＡＣ）を示す。図１Ａは、凝固カスケード（内因性経路および外因性経路から構成されるもの）におけるＦＸＩを示す図である。ＦＸＩ標的化ｍＡｂは、ＸＩＩａおよび／もしくはトロンビンによるＦＸＩ活性化、またはＦＩＸに対するＦＸＩａ活性を遮断することにより、機能的中和をもたらしうる。本発明における抗体は、ＦＩＸのＦＸＩａ媒介性活性化と、少なくともＦＸＩＩａにより媒介されるＦＸＩからＦＸＩａへの変換とに対する二重遮断をもたらしうる。ＦＸａまたはトロンビンのいずれかを標的とする４つのＮＯＡＣ（リバロキサバン、アピキサバン、エドキサバン、ダビガトラン）が示されている。 図１Ａおよび図１Ｂは凝固カスケード、ＦＸＩ、ＦＸＩ ｍＡｂおよび４つ新経口抗凝固剤（ＮＯＡＣ）を示す。図１ＢはＦＸＩのドメイン構造を示す。ＦＸＩは、同一の８０ｋＤａサブユニットから構成される二量体であり、Ｎ末端から始まる各サブユニットは４つのアップルドメイン（１、２、３および４）および触媒ドメイン（ＣＡＴ）からなる。本明細書に開示されている抗体はアップル３ドメインに結合する。 図２は因子ＸＩおよびアップル３ドメインの構造を示し、αＦＸＩ－１８６１１およびαＦＸＩ－１８６２３ｐファミリー抗ＦＸＩ抗体により重水素化から保護されたペプチドが特定されている。ＦＩＸ結合エクソサイト（ｅｘｏｃｉｔｅ）における決定的に重要な残基であるアルギニン１８４残基が示されている。重水素化の差異を示さないアップル３ドメインにおけるペプチドは薄灰色で示されている。データが入手できなかったペプチドは濃灰色で着色されている。触媒ドメインは示されていない。 図３Ａおよび３Ｂは、それぞれ、抗ＦＸＩ抗体αＦＸＩ－１８６１１ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）（Ｌ１０５）／ＬＣカッパおよびαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｑ１）／ＬＣカッパにより結合されたＦＸＩアミノ酸残基の重水素標識差ヒートマップを示す。 図３Ａおよび３Ｂは、それぞれ、抗ＦＸＩ抗体αＦＸＩ－１８６１１ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）（Ｌ１０５）／ＬＣカッパおよびαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｑ１）／ＬＣカッパにより結合されたＦＸＩアミノ酸残基の重水素標識差ヒートマップを示す。 図４Ａ、４Ｂおよび４ＣはαＦＸＩ １８６１１ｐおよびαＦＸＩ １８６１１ファミリー抗体のＨＣおよびＬＣドメインのアミノ酸配列を示す。重鎖および軽鎖ＣＤＲが、それぞれ、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ－２、ＨＣ－ＣＤＲ３、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３として特定されている。 図４Ａ、４Ｂおよび４ＣはαＦＸＩ １８６１１ｐおよびαＦＸＩ １８６１１ファミリー抗体のＨＣおよびＬＣドメインのアミノ酸配列を示す。重鎖および軽鎖ＣＤＲが、それぞれ、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ－２、ＨＣ－ＣＤＲ３、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３として特定されている。 図４Ａ、４Ｂおよび４ＣはαＦＸＩ １８６１１ｐおよびαＦＸＩ １８６１１ファミリー抗体のＨＣおよびＬＣドメインのアミノ酸配列を示す。重鎖および軽鎖ＣＤＲが、それぞれ、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ－２、ＨＣ－ＣＤＲ３、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３として特定されている。 図５Ａおよび５ＢはαＦＸＩ １８６２３ｐファミリー抗体のＨＣおよびＬＣドメインのアミノ酸配列を示す。重鎖および軽鎖ＣＤＲが、それぞれ、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ－２、ＨＣ－ＣＤＲ３、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３として特定されている。 図５Ａおよび５ＢはαＦＸＩ １８６２３ｐファミリー抗体のＨＣおよびＬＣドメインのアミノ酸配列を示す。重鎖および軽鎖ＣＤＲが、それぞれ、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ－２、ＨＣ－ＣＤＲ３、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３として特定されている。 図６は、ヒト血漿におけるαＦＸＩ－１８６１１ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）（Ｌ１０５）／ＬＣカッパ（Ａ）およびαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｑ１）／ＬＣカッパ（Ｂ）の活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）アッセイの結果を示し、これはベースラインに対する増加率（％）として表されている。 図７は、カニクイザル血漿におけるαＦＸＩ－１８６１１ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）（Ｌ１０５）／ＬＣカッパ（Ａ）およびαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｑ１）／ＬＣカッパ（Ｂ）の活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）アッセイの結果を示し、これはベースラインに対する増加率（％）として表されている。 図８は、アカゲザル血漿におけるαＦＸＩ－１８６１１ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）（Ｌ１０５）／ＬＣカッパ（Ａ）およびαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｑ１）／ＬＣカッパ（Ｂ）の活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）アッセイの結果を示し、これはベースラインに対する増加率（％）として表されている。 図９は、ヒト血漿、カニクイザルおよびアカゲザル血漿におけるαＦＸＩ－１８６１１ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）（Ｌ１０５）／ＬＣカッパに関するａＰＴＴ結果の比較を示し、これらはベースラインに対する増加率（％）として表されている。 図１０は、ヒト血漿、カニクイザルおよびアカゲザル血漿におけるαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｑ１）／ＬＣカッパに関するａＰＴＴ結果の比較を示し、これらはベースラインに対する増加率（％）として表されている。 図１１は、ヒト、カニクイザルおよびアカゲザルＦＸＩならびに他のヒトおよびＮＨＰ凝固カスケードタンパク質へのαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパの結合の動力学を示すＢＩＡｃｏｒｅセンサグラムを示す。 図１２は、ヒト、カニクイザルおよびアカゲザルＦＸＩならびに他のヒトおよびＮＨＰ凝固カスケードタンパク質へのαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｑ１）／ＬＣカッパの結合の動力学を示すＢＩＡｃｏｒｅセンサグラムを示す。 図１３はカニクイザルＡＶシャント試験法の概要図を示す。大腿動脈および静脈のカテーテルが予め取り付けられた麻酔されたサルにビヒクルまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパ（抗体）（０．０１～１．０ｍｇ／ｋｇ）を静脈内ボーラスにより投与した（試験物質投与）。本明細書に記載されているとおりにＡＶシャントを挿入した（ＡＶシャントの挿入）。ＡＶシャントを経由して血液を４０分間流した。チューブの内側に吊るされた絹糸と血液との接触は血餅を形成させた。本明細書に記載されているとおりに血餅を秤量した。抗体の循環レベル、ａＰＴＴおよびＰＴを測定するために、血液サンプルを得た（星印）。 図１４Ａ～ＤはカニクイザルＡＶシャントモデルにおけるＡＶシャント血餅形成、ａＰＴＴおよびＰＴに対するαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパ（抗体）の効果を示す。図１４Ａは、同じ動物において２回の連続的ＡＶシャントの後で測定された血餅重量を示す。第１シャント（シャント＃１）中に動物にビヒクルを投与し、ついで、第２シャント（シャント＃２）中に、示されているとおりに、抗体（０．０１～１．０ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）を投与した。抗体の用量の増加はより小さな血餅の形成をもたらした。 図１４Ａ～ＤはカニクイザルＡＶシャントモデルにおけるＡＶシャント血餅形成、ａＰＴＴおよびＰＴに対するαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパ（抗体）の効果を示す。血餅重量の抑制率（図１４Ｂ）およびａＰＴＴの変化率（図１４Ｃ）は抗体の血漿濃度の増加と共に増加した。これとは対照的に、ＰＴ（図１４Ｄ）は抗体の全濃度において比較的不変のままであった。 図１４Ａ～ＤはカニクイザルＡＶシャントモデルにおけるＡＶシャント血餅形成、ａＰＴＴおよびＰＴに対するαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパ（抗体）の効果を示す。血餅重量の抑制率（図１４Ｂ）およびａＰＴＴの変化率（図１４Ｃ）は抗体の血漿濃度の増加と共に増加した。これとは対照的に、ＰＴ（図１４Ｄ）は抗体の全濃度において比較的不変のままであった。 図１４Ａ～ＤはカニクイザルＡＶシャントモデルにおけるＡＶシャント血餅形成、ａＰＴＴおよびＰＴに対するαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパ（抗体）の効果を示す。血餅重量の抑制率（図１４Ｂ）およびａＰＴＴの変化率（図１４Ｃ）は抗体の血漿濃度の増加と共に増加した。これとは対照的に、ＰＴ（図１４Ｄ）は抗体の全濃度において比較的不変のままであった。 図１５はカニクイザルのテンプレート出血時間法の概略図を示す。頬粘膜（内唇）、指肉趾および遠位尾部におけるテンプレート出血時間を、麻酔したカニクイザルにおいて、ベースライン時（処置前）ならびに処理＃１（ビヒクル）および処理＃２（ビヒクルまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパ、１０ｍｇ／ｋｇ ＩＶ）の投与の後で測定した。αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパの循環レベル、ａＰＴＴおよびＰＴを測定するための血液サンプルを、示されているとおりに採取した。 図１６Ａ～Ｆは、カニクイザルにおいて測定されたテンプレート出血時間に対するαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパの効果を示す。テンプレート出血時間は、頬粘膜（図１６Ａ、図１６Ｄ）、指肉趾（図１６Ｂ、図１６Ｅ）および遠位尾部（図１６Ｃ、図１６Ｆ）において測定した。片側対応スチューデントｔ検定を用いて、研究セッション１における処理１および処理２としてのビヒクル－ビヒクル、ならびに研究セッション２における処理１および２としてのビヒクル－αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパに関して、絶対出血時間（左パネル）および出血時間の変化率（％）（右パネル）を比較することにより、出血時間に対する処理効果（αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパ対ビヒクル）を評価した。 図１６Ａ～Ｆは、カニクイザルにおいて測定されたテンプレート出血時間に対するαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパの効果を示す。テンプレート出血時間は、頬粘膜（図１６Ａ、図１６Ｄ）、指肉趾（図１６Ｂ、図１６Ｅ）および遠位尾部（図１６Ｃ、図１６Ｆ）において測定した。片側対応スチューデントｔ検定を用いて、研究セッション１における処理１および処理２としてのビヒクル－ビヒクル、ならびに研究セッション２における処理１および２としてのビヒクル－αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパに関して、絶対出血時間（左パネル）および出血時間の変化率（％）（右パネル）を比較することにより、出血時間に対する処理効果（αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパ対ビヒクル）を評価した。 図１６Ａ～Ｆは、カニクイザルにおいて測定されたテンプレート出血時間に対するαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパの効果を示す。テンプレート出血時間は、頬粘膜（図１６Ａ、図１６Ｄ）、指肉趾（図１６Ｂ、図１６Ｅ）および遠位尾部（図１６Ｃ、図１６Ｆ）において測定した。片側対応スチューデントｔ検定を用いて、研究セッション１における処理１および処理２としてのビヒクル－ビヒクル、ならびに研究セッション２における処理１および２としてのビヒクル－αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパに関して、絶対出血時間（左パネル）および出血時間の変化率（％）（右パネル）を比較することにより、出血時間に対する処理効果（αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパ対ビヒクル）を評価した。 図１６Ａ～Ｆは、カニクイザルにおいて測定されたテンプレート出血時間に対するαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパの効果を示す。テンプレート出血時間は、頬粘膜（図１６Ａ、図１６Ｄ）、指肉趾（図１６Ｂ、図１６Ｅ）および遠位尾部（図１６Ｃ、図１６Ｆ）において測定した。片側対応スチューデントｔ検定を用いて、研究セッション１における処理１および処理２としてのビヒクル－ビヒクル、ならびに研究セッション２における処理１および２としてのビヒクル－αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパに関して、絶対出血時間（左パネル）および出血時間の変化率（％）（右パネル）を比較することにより、出血時間に対する処理効果（αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパ対ビヒクル）を評価した。 図１６Ａ～Ｆは、カニクイザルにおいて測定されたテンプレート出血時間に対するαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパの効果を示す。テンプレート出血時間は、頬粘膜（図１６Ａ、図１６Ｄ）、指肉趾（図１６Ｂ、図１６Ｅ）および遠位尾部（図１６Ｃ、図１６Ｆ）において測定した。片側対応スチューデントｔ検定を用いて、研究セッション１における処理１および処理２としてのビヒクル－ビヒクル、ならびに研究セッション２における処理１および２としてのビヒクル－αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパに関して、絶対出血時間（左パネル）および出血時間の変化率（％）（右パネル）を比較することにより、出血時間に対する処理効果（αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパ対ビヒクル）を評価した。 図１６Ａ～Ｆは、カニクイザルにおいて測定されたテンプレート出血時間に対するαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパの効果を示す。テンプレート出血時間は、頬粘膜（図１６Ａ、図１６Ｄ）、指肉趾（図１６Ｂ、図１６Ｅ）および遠位尾部（図１６Ｃ、図１６Ｆ）において測定した。片側対応スチューデントｔ検定を用いて、研究セッション１における処理１および処理２としてのビヒクル－ビヒクル、ならびに研究セッション２における処理１および２としてのビヒクル－αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパに関して、絶対出血時間（左パネル）および出血時間の変化率（％）（右パネル）を比較することにより、出血時間に対する処理効果（αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパ対ビヒクル）を評価した。 図１７ＡはアカゲザルにおけるαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパＩＶ投与の後の濃度－時間プロファイルを示す。アカゲザルにおけるαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパの血漿濃度－時間プロファイルが示されている。各用量群には４頭の動物がいた。各線は個々の群に関する平均を表す。 図１７ＢはアカゲザルにおけるａＰＴＴ－時間プロファイルを示す。αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパに関するａＰＴＴ－時間プロファイルが各用量群に関して示されている。各用量群には４頭の動物がいた。各記号は各時点における個々の動物のａＰＴＴ時間プロファイルを表す。各線は個々の群に関する平均を表す。
実施例１
本実施例においては、抗ＦＸＩ抗体αＦＸＩ－１８６１１ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）（Ｌ１０５）／ＬＣカッパおよびαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｑ１）／ＬＣカッパならびにヒトＦＸＩチモーゲンまたは非ヒト霊長類（ＮＨＰ）ＦＸＩチモーゲンのいずれかの結合動力学を、以下のアッセイを用いて測定した。
ヒトＦＸＩおよびＦＸＩａ結合動力学アッセイプロトコール
抗ＦＸＩ抗体およびヒトＦＸＩチモーゲンまたはＦＸＩａの間のタンパク質－タンパク質相互作用の結合動力学およびアフィニティを、実質的に以下のとおりに、ＳＰＲ（表面プラズモン共鳴）に基づく光学バイオセンサーであるＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用して測定した。
ＧＬＣ低密度センサーチップを、０．５％ ドデシル硫酸ナトリウム、５０ｍＭ 水酸化ナトリウムおよび１００ｍＭ 塩酸で、３０μＬ／秒の流速で６０秒間、全ての垂直および水平流路にわたって洗浄した。ついで６つ全ての垂直流路（Ｌ１～Ｌ６）のアルギナートチップ表面を１×ＥＤＣ／ｓＮＨＳで３０μＬ／秒の流速で１５０秒間活性化した。ついで、１０ｍＭ 酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）中で１．２５μｇ／ｍＬに希釈されたマウスＦｃ指向性抗ヒトＩｇＧポリクローナル抗体（捕捉抗体）を６つ全ての垂直流路にわたって２５μＬ／秒の流速で３００秒間注入して、内因性リジンへのアミンカップリングにより、流路当たり約３００応答単位（ＲＵ）の捕捉抗体を該活性化チップ表面に結合させた。ついで１Ｍ エタノールアミンＨＣｌを６つ全ての垂直流路にわたって注入して、残りの反応性表面アミンを中和した。ついで約８０ＲＵの飽和捕捉レベルを達成するために、１０ｍＭ 酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）中の５μｇ／ｍＬの濃度で、捕捉抗体（Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、Ｌ５またはＬ６）でコーティングされた別個の垂直流路内に、抗ＦＸＩ抗体をそれぞれ、２５μＬ／分で６０秒間注入した。垂直流路Ｌ１には１０ｍＭ 酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）（バッファーのみ）を基準対照として注入した。
抗ＦＸＩ抗体の捕捉の後、ランニングバッファー（１×ＨＢＳ－Ｎ、５ｍＭ ＣａＣｌ２、０．００５％ Ｐ２０、ｐＨ７．４）を全ての水平流路（Ａ１～Ａ６）に５分間注入し、２５μＬ／分で２０分間解離させて、チップ表面から非特異的結合抗ＦＸＩ抗体を除去した。ついで、捕捉抗ＦＸＩ抗体に対するヒトＦＸＩまたはＦＸａのオン・レート（ｏｎ－ｒａｔｅ）（ｋａ）を測定するために、６点滴定のヒトＦＸＩまたはＦＸＩａ（ランニングバッファー中で希釈された０、０．２５、０．５、１．０、２．０、４．０ｎＭ）を６つ全ての垂直流路にわたって水平に８分間注入した。ついで結合チモーゲンをランニングバッファー中で２５μＬ／分で６０分間解離させて、オフ・レート（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）（ｋｄ）を測定した。結合動力学およびアフィニティ（ＫＤ）を、装置に特有のソフトウェア（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用して決定した。それらを表２に示す。
非ヒト霊長類ＦＸＩチモーゲン／ＦＸＩａ結合動力学アッセイプロトコール
抗ＦＸＩ抗体および非ヒト霊長類（ＮＨＰ；カニクイザルおよびアカゲザル）ＦＸＩチモーゲンまたはＦＸＩａの間のタンパク質－タンパク質相互作用の結合動力学およびアフィニティを、ＳＰＲ（表面プラズモン共鳴）に基づく光学バイオセンサーであるＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用して測定した。
ＧＬＣ低密度センサーチップを、０．５％ ドデシル硫酸ナトリウム、５０ｍＭ 水酸化ナトリウムおよび１００ｍＭ 塩酸で、３０μＬ／秒の流速で６０秒間、全ての垂直および水平流路にわたって洗浄した。ついで６つ全ての垂直流路（Ｌ１～Ｌ６）のアルギナートチップ表面を１×ＥＤＣ／ｓＮＨＳで３０μＬ／秒の流速で１５０秒間活性化した。ついで、１０ｍＭ 酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）中で３０μｇ／ｍＬに希釈されたマウスＦｃ指向性抗ヒトＩｇＧポリクローナル抗体（捕捉抗体）を６つ全ての垂直流路にわたって２５μＬ／秒の流速で１５０秒間注入して、内因性リジンへのアミンカップリングにより、流路当たり、該活性化チップ表面への約４５００応答単位（ＲＵ）の捕捉抗体の飽和結合を達成した。ついで１Ｍ エタノールアミンＨＣｌを６つ全ての垂直流路にわたって注入して、残りの反応性表面アミンを中和した。ついで約４０ＲＵの飽和捕捉レベルを達成するために、ランニングバッファー（１×ＨＢＳ－Ｎ、５ｍＭ ＣａＣｌ２、０．００５％ Ｐ２０、ｐＨ７．４）中の０．４１５μｇ／ｍＬの濃度で、捕捉抗体（Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、Ｌ５またはＬ６）でコーティングされた別個の垂直流路内に、抗ＦＸＩ抗体をそれぞれ、２５μＬ／分で６０秒間注入した。垂直流路Ｌ１にはランニングバッファーのみを基準対照として注入した。抗ＦＸＩ抗体の捕捉の後、ランニングバッファーを全ての水平流路（Ａ１～Ａ６）に５分間注入し、２５μＬ／分で２０分間解離させて、チップ表面から非特異的結合抗ＦＸＩ抗体を除去した。ついで、捕捉抗ＦＸＩ抗体に対するＮＨＰ ＦＸＩのオン・レート（ｏｎ－ｒａｔｅ）（ｋａ）を測定するために、６点滴定のＮＨＰ ＦＸＩまたはＦＸＩａ（ランニングバッファー中で希釈された０、０．２５、０．５、１．０、２．０、４．０ｎＭ）を６つ全ての垂直流路にわたって水平に８分間注入した。ついで結合ＦＸＩチモーゲンまたはＦＸＩａをランニングバッファー中で２５μＬ／分で６０分間解離させて、オフ・レート（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）（ｋｄ）を測定した。結合動力学およびアフィニティ（ＫＤ）を、装置に特有のソフトウェア（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用して決定した。それらを表２に示す。
Figure 0007022081000003
実施例２
高分子量（ＨＭＷ）キニノーゲンおよびエラグ酸の存在下のＦＸＩＩａによるＦＸＩからＦＸＩａへの活性化に対する抗ＦＸＩ抗体の効果
ＦＸＩチモーゲン活性化に対する抗ＦＸＩ抗体αＦＸＩ－１８６１１ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）（Ｌ１０５）／ＬＣカッパおよびαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｑ１）／ＬＣカッパの効果を測定するために、トリペプチド発蛍光団（ＧＰＲ－ＡＦＣ）のＦＸＩａ媒介性タンパク質分解を測定する共役酵素アッセイを用いて、該抗体がＦＸＩ活性化自体を阻害するかどうかを決定することが可能である。これらの実験のために、抗ＦＸＩ抗体をＦＸＩチモーゲンと共に１時間プレインキュベートする。ＦＸＩａへのＦＸＩの活性化は、ＨＭＷキニノーゲンおよびエラグ酸の存在下、ＦＸＩＩａの添加により誘導される。ついでトリペプチド発蛍光団基質に対するＦＸＩａ触媒活性をチモーゲン活性化の読取結果として測定する。該共役アッセイは、対照として、ＨＭＷキニノーゲンの非存在下においても行われる。３倍希釈系列で１μＭの濃度から開始する１１点用量滴定の抗ＦＸＩ抗体を、Ｃｏｒｎｉｎｇ ３５７５非結合表面マイクロプレート内で、５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＣａＣｌ２、０．１％ ＰＥＧ－８０００（ｐＨ７．４）中、ヒトＦＸＩ（Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｔ ＃ ＨＣＸＩ－０１５０，最終濃度３０ｎＭ）およびＨＭＷキニノーゲン（Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｃａｔ ＃ ＨＫ，最終濃度２８０ｎＭ）と共に２５℃で２時間プレインキュベートした。ついで、エラグ酸含有Ｐａｃｉｆｉｃ Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ ＡＰＴＴ－ＸＬ試薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ ＃ １００４０３，１００μＭ ストック濃度，最終濃度２μＭ）および新たに希釈された凝固因子ＸＩＩａ（Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｃａｔ ＃ ＨＦＸＩＩａ，最終濃度５０ｐＭ）の添加により、活性化反応を開始させた。該反応を２５℃で１時間進行させ、このとき、１μＭ コーントリプシンインヒビター（Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｔ ＃ ＣＴＩ－０１）の添加により、それをクエンチした。Ｔｅｃａｎ Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ２００プレートリーダーを使用して４００／５０５ｎｍの蛍光を１０分間連続的にモニターすることにより、Ｚ－ＧＰＲ－ＡＦＣ基質（Ｓｉｇｍａ，Ｃａｔ＃Ｃ０９８０－１０ＭＧ，最終濃度１５０μＭ）の切断の速度を測定することにより、新たに活性化されたＦＸＩａ酵素活性を検出した。各データ点に関する阻害率（％）をＲＦＵ／分データから再計算し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアで、ｌｏｇ（インヒビター）対応答の４パラメーター式を使用して分析した。結果を表３に示す。
ＨＭＷキニノーゲンおよびエラグ酸の非存在下のＦＸＩＩａによるＦＸＩからＦＸＩａへの活性化に対する抗ＦＸＩ抗体の効果
３倍希釈系列で１μＭの濃度から開始する１１点用量滴定の本発明の抗ＦＸＩ抗体を、Ｃｏｒｎｉｎｇ ３５７５非結合表面マイクロプレート内で、５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＣａＣｌ２、０．１％ ＰＥＧ－８０００（ｐＨ７．４）中、ヒトＦＸＩ（Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｔ ＃ ＨＣＸＩ－０１５０，最終濃度３０ｎＭ）と共に２５℃で２時間プレインキュベートした。ついで、新たに希釈された凝固因子ＸＩＩａ（Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｃａｔ ＃ ＨＦＸＩＩａ，最終濃度１５ｎＭ）の添加により、活性化反応を開始させた。該反応を２５℃で１時間進行させ、このとき、１μＭ コーントリプシンインヒビター（Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｔ ＃ ＣＴＩ－０１）の添加により、それをクエンチした。Ｔｅｃａｎ Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ２００プレートリーダーを使用して４００／５０５ｎｍの蛍光を１０分間連続的にモニターすることにより、Ｚ－ＧＰＲ－ＡＦＣ基質（Ｓｉｇｍａ，Ｃａｔ＃Ｃ０９８０－１０ＭＧ，最終濃度１５０μＭ）の切断の速度を測定することにより、新たに活性化されたＦＸＩａ酵素活性を検出した。各データ点に関する阻害率（％）をＲＦＵ／分データから再計算し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアで、ｌｏｇ（インヒビター）対応答の４パラメーター式を使用して分析した。結果を表３に示す。
Figure 0007022081000004
総合すると、これらのメカニズム研究は、これらの抗ＦＸＩ抗体が、ＦＸＩＩａによるＦＸＩ活性化を妨げることにより、および天然基質に対するＦＸＩａ触媒活性を阻害することにより、ＦＸＩを機能的に中和することを示している。
実施例３
水素重水素交換質量分析による抗ＦＸＩ抗体のエピトープマッピング
ヒトＦＸＩに対するαＦＸＩ－１８６１１ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）（Ｌ１０５）／ＬＣカッパおよびαＦＸＩ－１８６２３ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｑ１）／ＬＣカッパの接触領域を、水素重水素交換質量分析（ＨＤＸ－ＭＳ）を用いて決定した。ＨＤＸ－ＭＳはタンパク質のアミド骨格内への重水素の取り込みを測定し、この取り込みの変化は水素の溶媒暴露の影響を受ける。抗原のみのサンプルおよび抗体結合サンプルにおける重水素交換レベルの比較を行って、抗体と接触しうる抗原領域を特定した。ヒト因子ＸＩは、配列番号８１に示されているアミノ酸配列を有する。二量体因子ＸＩを該抗体と共にプレインキュベートした後、重水素バッファー中のインキュベーションを行った。因子ＸＩ内への重水素の取り込みを質量分析により測定した。
抗体により重水素化から保護されたヒト因子ＸＩ領域はエピトープ－Ａ ＤＩＦＰＮＴＶＦ（因子ＸＩの残基１８５～１９２；配列番号８２）およびエピトープ－Ｂ ＰＳＴＲＩＫＫＳＫＡＬＳＧ（因子ＸＩの残基２４７～２５９；配列番号８３）である。図３Ａおよび３Ｂは、それぞれ、抗体αＦＸＩ－１８６１１ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）（Ｌ１０５）／ＬＣカッパおよびαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｑ１）／ＬＣカッパにより結合された因子ＸＩアミノ酸残基の重水素標識差ヒートマップを示す。これらのアミノ酸配列は因子ＸＩのアップル３ドメイン上に位置する（図３）。アップル１、２、４または触媒ドメインにおいては有意な重水素化変化は観察されなかった。このことは、それらがαＦＸＩ－１８６２３結合に関与していないことを示している。したがって、αＦＸＩ－１８６２３ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）／カッパにより認識されるエピトープはエピトープＡおよびエピトープＢを含む。
実施例４
ＦＩＸは、ＦＸＩチモーゲンの活性プロテアーゼであるＦＸＩａの内因性タンパク質基質である。ＦＸＩａはＦＩＸをＦＩＸａへと活性化し、凝固カスケードを永続させる。ＦＩＸのＦＸＩａ媒介性活性化の阻害はＦＸＩ ｍＡｂに関する１つの可能な作用メカニズム（ＭＯＡ）である。このＭＯＡを調べるために、全長ＦＩＸチモーゲンを使用するＦＸＩａ酵素アッセイを開発した。
小さなトリペプチド基質に対するＦＸＩａプロテアーゼ活性
抗ＦＸＩ抗体を、Ｃｏｒｎｉｎｇ ３５７５非結合表面マイクロプレート内で、５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＣａＣｌ２、０．１％ ＰＥＧ－８０００（ｐＨ７．４）中、ヒトＦＸＩａ（Ｓｅｋｉｓｕｉ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｅｘｔｏｎ，ＰＡ，Ｃａｔ ＃ ４０１１Ａ，最終濃度１００ｐＭ）と共に２５℃で２時間プレインキュベートした。Ｔｅｃａｎ Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ２００プレートリーダーを使用して４００／５０５ｎｍの蛍光を１０分間連続的にモニターすることにより、Ｚ－ＧＰＲ－ＡＦＣ基質（Ｓｉｇｍａ，Ｃａｔ＃Ｃ０９８０－１０ＭＧ，最終濃度１００μＭ）の切断の速度を測定することにより、新たに活性化されたＦＸＩａ酵素活性を決定した。３倍希釈系列で１μＭから開始する１１点用量滴定の該抗体の最終濃度。各データ点に関する阻害率（％）をＲＦＵ／分データから再計算し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアで、ｌｏｇ（インヒビター）対応答の４パラメーター式を使用して分析した。結果を表４に示す。
ＦＸＩａによるＦＩＸからＦＩＸａへの活性化
ＦＩＸは、ＦＸＩチモーゲンの活性プロテアーゼであるＦＸＩａの内因性タンパク質基質である。ＦＸＩａはＦＩＸをＦＩＸａへと活性化し、凝固カスケードを永続させる。ＦＩＸのＦＸＩａ媒介性活性化の阻害はＦＸＩ ｍＡｂに関する１つの可能な作用メカニズム（ＭＯＡ）である。このＭＯＡを調べるために、全長ＦＩＸを使用するＦＸＩａ酵素アッセイを開発した。
３倍希釈系列で１μＭの濃度から開始する１１点用量滴定の抗ＦＸＩ抗体を、Ｃｏｒｎｉｎｇ ３５７５非結合表面マイクロプレート内で、５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＣａＣｌ２、０．１％ ＰＥＧ－８０００（ｐＨ７．４）中、ヒトＦＸＩａ（Ｓｅｋｉｓｕｉ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｃａｔ ＃ ４０１１Ａ，最終濃度１００ｐＭ）と共に２５℃で２時間プレインキュベートした。ついでＦＩＸ（Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｔ ＃ ＨＣＩＸ－００４０－Ｃ，最終濃度３００ｎＭ）の添加により、活性化反応を開始させ、２５℃で１時間進行させ、このとき、ＦＸＩの軽鎖の触媒部位に対する抗ＦＸＩ抗体（ＷＯ２０１３１６７６６９に開示されている抗ＦＸＩ抗体０７６Ｄ－Ｍ００７－Ｈ０４）１００ｎＭの添加により、それをクエンチした。Ｔｅｃａｎ Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ２００プレートリーダーを使用して４００／５０５ｎｍの蛍光を１０分間連続的にモニターすることにより、シクロヘキシル－ＧＧＲ－ＡＦＣ基質（ＣＰＣ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ ＃ ８３９４９３，最終濃度３００μＭ）の切断の速度を測定することにより、新たに活性化されたＦＩＸａ酵素活性を検出した。各データ点に関する阻害率（％）をＲＦＵ／分データから再計算し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアで、ｌｏｇ（インヒビター）対応答の４パラメーター式を使用して分析した。結果を表４に示す。
Figure 0007022081000005
表４に示されているとおり、合成トリペプチドフルオロフォア基質を使用する酵素アッセイにおいては、該抗体はＦＸＩａ触媒活性を阻害しなかったが、両方の抗体は、天然全長基質を使用するアッセイの強力なインヒビターであった。このデータは、ＦＸＩａによるＦＩＸ活性化のアロステリック競合インヒビターとして挙動する抗体と合致しており、アップル３上の抗体の「フットプリント」がＦＸＩａにおけるＦＩＸ結合エキソサイトと重複することを示唆する実施例３のエピトープマッピングの結果と合致している。
実施例５
デキストラン硫酸上のＦＸＩからＦＸＩａへの自己活性化
３倍希釈系列で１μＭの濃度から開始する１１点用量滴定の本発明の抗ＦＸＩ抗体を、Ｃｏｒｎｉｎｇ ３５７５非結合表面マイクロプレート内で、５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＣａＣｌ２、０．１％ ＰＥＧ－８０００（ｐＨ７．４）中、ヒトＦＸＩ（Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｔ ＃ ＨＣＸＩ－０１５０，最終濃度３０ｎＭ）と共に２５℃で２時間プレインキュベートした。ついで、デキストラン硫酸（ＡＣＲＯＳ，Ｃａｔ＃４３３２４０２５０，分子量約８００ｋＤａ，最終濃度１ｎＭ）の添加により、該自己活性化反応を開始させた。該反応を２５℃で１時間進行させ、このとき、Ｔｅｃａｎ Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ２００プレートリーダーを使用して４００／５０５ｎｍの蛍光を１０分間連続的にモニターすることにより、新たに活性化されたＦＸＩａ酵素活性を、Ｚ－ＧＰＲ－ＡＦＣ基質（Ｓｉｇｍａ，Ｃａｔ＃Ｃ０９８０－１０ＭＧ，最終濃度１５０μＭ）の切断の速度により検出した。各データ点に関する阻害率（％）をＲＦＵ／分データから再計算し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアで、ｌｏｇ（インヒビター）対応答の４パラメーター式を使用して分析した。結果を表５に示す。
Figure 0007022081000006
実施例６
抗ＦＸＩ抗体がインビトロ凝固を遮断する能力を、活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）アッセイを用いて評価した。活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）は、内因性および共通の凝固経路の活性を測定する凝固試験である。
活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）アッセイ
該試験はクエン酸ナトリウム血漿中で行う。ヒト血漿を、両性の健常ドナーからの血液をクエン酸Ｎａチューブ（Ｓａｒｓｔｅｄｔ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ９ＮＣ／１０ｍＬ）内に採取することにより得る。血液を１５００×ｇで遠心分離し、血漿を収集する。ａＰＴＴを各ドナーに関して調べ、正常範囲（２８～４０秒）内のものをプールし、分注し、－８０℃で保存する。他の種からの血漿は商業的に入手される（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｎｏｖｉ，ＭＩ）。インヒビターまたはビヒクルを血漿中に添加（スパイク）することにより試験サンプルを調製する。これらの添加サンプルをインキュベート（６０分間、室温（ＲＴ））し、ついで凝固分析装置（ＳＴＡ－Ｒ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ，Ｓｔａｇｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）にかける。一般に、該分析装置は以下の工程を行う。エラグ酸（Ｐａｃｉｆｉｃ Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）の添加によりＦＸＩＩを活性化し、ついで、サンプルのカルシウム再添加の後、凝固までの時間を測定する。ＦＸＩの阻害はａＰＴＴ凝固時間を延長させる。結果を表６に示す。データはビヒクル対照の凝固時間に対する増加率（％）として表されており、１００％（２×）または５０％（１．５×）の凝固時間増加率をもたらす濃度が示されている。ａＰＴＴの結果を図６、７、８、９および１０に示す。
Figure 0007022081000007
実施例７
ヒトおよびＮＨＰ凝固カスケードタンパク質への抗ＦＸＩモノクローナル抗体のオフターゲット結合の評価のための表面プラズモン共鳴アッセイ
抗因子ＦＸＩ ｍＡｂ αＦＸＩ－１８６１１ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）（Ｌ１０５）／ＬＣカッパおよびαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｑ１）／ＬＣカッパの、他のヒトおよびＮＨＰ凝固カスケードタンパク質（表７）への潜在的な非特異的相互作用を決定するために、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）に基づくアッセイ（Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００）を用いた。血漿由来タンパク質における同時精製Ｉｇからの潜在的バックグラウンドを最小にするために、約５００ＲＵで抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）捕捉キット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて固定化されたＣＭ５センサーチップ上に抗ＦＸＩ ｍＡｂを捕捉した。陰性対照抗体である抗呼吸器合抱体ウイルス（ＲＳＶ）モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を、基準体として、そして血漿由来タンパク質のバックグラウンド結合の低減を補助するために使用した。５ｎＭのＦＸＩのアナライト濃度を用いて、結合動力学を測定した。全ての他の凝固カスケードタンパク質は５００ｎＭのアナライト濃度で使用した。単一濃度注入（ｎ＝２）を３０μＬ／分、２５℃、ＨＢＳ－ＥＰ＋、ｐＨ７．４で行った。
Figure 0007022081000008
Figure 0007022081000009
ヒト、カニクイザルおよびアカゲザルＦＸＩならびに他のヒトおよびＮＨＰ凝固カスケードタンパク質への抗因子ＦＸＩ ｍＡｂ ｍＡｂ αＦＸＩ－１８６１１ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）（Ｌ１０５）／ＬＣカッパおよびαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｑ１）／ＬＣカッパの結合の動力学を前記のとおりに測定した。それを図１１および図１２に示す。Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェアを使用して、１：１結合モデルにデータをフィットさせて、会合速度定数ｋａ（Ｍ－１ｓ－１；ここで、「Ｍ」はモル濃度であり、「ｓ」は秒である）および解離速度定数ｋｄ（ｓ－１）を決定した。これらの速度定数を使用して平衡解離定数ＫＤ（Ｍ）を計算した。
チップ上に捕捉されたαＦＸＩ－１８６１１ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）（Ｌ１０５）／ＬＣカッパおよびαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｑ１）／ＬＣカッパは非ＦＸＩ凝固カスケードタンパク質に対して交差反応性を示さなかった（図１１および図１２）。これらのモノクローナル抗体は、予想されたレベルの、ヒトおよびカニクイザル（およびアカゲザル）ＦＸＩタンパク質への強力な結合を示した。
実施例８
カニクイザル大腿動静脈（ＡＶ）シャント血栓症モデル
αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパ抗体の抗血栓効力を、Ｍｅｒｃｋ，Ｓｈａｒｐ ＆ Ｄｏｈｍｅ Ｃｏｒｐ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｋｅｎｉｌｗｏｒｈ，ＮＪ ＵＳＡおよびＰａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ ＵＳＡにおいて開発されたカニクイザル大腿動静脈（ＡＶ）シャントモデルにおいてインビボで特徴づけした。
研究設計：これらの研究は反復法を用い、この場合、各動物は２回の連続的試験期間にわたって２つのシャントを受けた（図１３の研究概要図を参照されたい）。それぞれ第１試験期間および第２試験期間中に、非抗体含有ビヒクル（２０ｍＭ 酢酸ナトリウム、９％ スクロース、ｐＨ５．５）またはαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパ抗体（用量範囲０．０１～１．０ｍｇ／ｋｇ）を該サルに投与した。第１（ビヒクル）試験セッションおよび第２（抗体）試験セッション中に測定された血餅重量の差が抗血栓症効力を決定した。すなわち、ビヒクル暴露中と比較した場合のαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパ抗体暴露中の、血餅重量の、より大きな減少は、より大きな抗血栓症効果を示すであろう。前記の反復ペア法の使用は抗血栓症効力の動物内の処理前対処理後の評価を可能にする。
ＡＶシャント配置操作の詳細：このモデルを実施するために、麻酔したカニクイザルに大腿動脈および静脈カテーテルを取り付けた。これらのカテーテルはＡＶシャントの挿入および除去を可能にした。ＡＶシャントはタイゴン（ＴＹＧＯＮ）管から構成され、該管は、該管の開口部を貫通し該開口部にわたって吊るされた１本の絹縫合糸を有していた。ＡＶシャントを配置するために、動脈カテーテルおよび静脈カテーテルの両方を閉じて血流を止めた。ついで、それらの２つのカテーテルの間にＡＶシャントを配置した。カテーテルの配置および除去の時機を図１３に示す。シャントを所定位置に配置したら、カテーテルを開け、血液を、絹縫合糸と接触するシャント回路を通して流動させた。縫合糸と接触する血液の作用は血餅形成を促進した。ＡＶシャントを４０分間、定位置に留めた。ＡＶシャントを取り出すために、動脈カテーテルおよび静脈カテーテルの両方を閉じて、ＡＶシャントを通る血流を止めた。ついでシャントを取り出し、切り開いて、絹縫合糸および血餅を得た。血餅を秤量した。データは正味血餅重量として示されており、これは、全血餅重量から絹縫合糸重量を差し引いたものとして定義される。
凝固バイオマーカーである活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）およびプロトロンビン時間（ＰＴ）、ならびにαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパ抗体の循環血漿レベルを、図１３に示されている実験を通して収集した血液サンプルから測定した。Ｓｔａ Ｃｏｍｐａｃｔ Ｍａｘ凝固分析装置（Ｓｔａｇｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ，Ｉｎｃ）を使用してカニクイザルから採取した解凍（－８０℃）クエン酸塩添加血漿からａＰＴＴおよびＰＴを測定した。Ｓｔａｇｏ分析装置は、電磁機械的血餅検出システムを使用して血餅形成の時間を測定する。ａＰＴＴアッセイのために、５０マイクロリットルの血漿を５０μＬのエラグ酸混合物（ＡＰＴＴ－ＸＬ，Ｐａｃｉｆｉｃ Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ；Ｆｉｓｈｅｒ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ｃａｔ＃１０－０４０２）と３７℃で３分間混合した。５０μｌの０．０２５Ｍ 塩化カルシウム（Ｓｔａ－ＣａＣｌ２ ０．０２５Ｍ、Ｓｔａｇｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ，Ｉｎｃ．，ｃａｔ＃００３６７）を該混合物に加え、血餅形成までの時間を測定した。ＰＴアッセイのために、５０マイクロリットルの血漿を３７℃で４分間インキュベートした。１００μＬのトロンボプラスチン試薬（Ｎｅｏｐｌａｓｔｉｎｅ Ｃｌ Ｐｌｕｓ １０，Ｓｔａｇｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ，Ｉｎｃ．，ｃａｔ＃００６６７）を加えることにより、血餅形成に関する計時（タイミング）を開始した。血漿は以下のとおりに測定した。電気化学発光に基づく一般的なｈＩｇＧ４イムノアッセイを用いて、カニクイザル血漿中の抗体を定量した。捕捉試薬としてのＢｅｔｈｙｌ（ｃａｔ＃Ａ８０－３１９Ｂ）からのビオチン化ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）、および検出試薬用のＳｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ（ｃａｔ＃９１９０－０１）からのスルホＴＡＧ標識マウス抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）を使用して、該アッセイを確立した。このアッセイは認定され、該アッセイの定量下限は１００の最小必要希釈度で４０ｎｇ／ｍＬであると決定された。
図１４Ａ～Ｄは、血栓形成（図１４Ａ、図１４Ｂ）、ａＰＴＴ（図１４Ｃ）およびＰＴ（図１４Ｄ）に対するαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパ抗体の投与の効果を要約している。表８はカニクイザルＡＶシャントモデルにおける血餅重量に対するαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパ抗体の効果を要約している。表９はカニクイザルＡＶシャントモデルにおけるａＰＴＴおよびＰＴに対するαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパ抗体の効果を要約している。
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図１４Ａ、１４Ｂおよび表８に示されているとおり、αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパ抗体は血餅重量における用量依存的および血漿濃度依存的減少を示し、完全な効力（９０～１００％の血餅減少）は、１μｇ／ｍＬ（約１０ｎＭ）を超える血漿［抗体］において観察された。図１４Ｃおよび表９に示されているとおり、該抗体はａＰＴＴにおける用量依存的および血漿濃度依存的増加を示した。２．４μｇ／ｍＬ（～１７ｎＭ）の血漿濃度のαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパ抗体はａＰＴＴにおける９３％の増加をもたらし、一方、２９μｇ／ｍＬ（～２００ｎＭ）（試験した最高用量）のαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパ抗体はａＰＴＴにおける１４３％の増加をもたらした。図１４Ｄおよび表９に示されているとおり、ａＰＴＴとは異なり、ＰＴは、評価された該抗体の濃度にわたって１０％未満で変化し、これは内因性凝固経路に対するＦＸＩ阻害の選択的効果に合致していた。
実施例９
カニクイザルテンプレート出血時間モデル
Ｍｅｒｃｋ，Ｓｈａｒｐ ＆ Ｄｏｈｍｅ Ｃｏｒｐ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｋｅｎｉｌｗｏｒｈ，ＮＪ ＵＳＡおよびＰａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ ＵＳＡにおいて開発されたカニクイザルテンプレート出血時間モデルにおいて、抗ＦＸＩ ｍＡｂ αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパの出血傾向をインビボで特徴づけした。このモデルは、三重（ｔｒｉｐｌｅ）抗血小板療法における複数の解剖学的部位のテンプレート出血時間の有意な増加を示すために既に使用されている（Ｃａｉら，Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ７５８：１０７－１１４（２０１５））。
このモデルを実施するために、種々の時点で頬粘膜（内唇）、指肉趾および遠位尾部においてバネ式ランセットを使用して出血を誘発させて、テンプレート出血時間を決定した。
出血時間試験：麻酔したカニクイザルにおいて出血時間試験を以下のとおりに行った。
・出血誘発のための適切な切開部位を特定するために、各試験領域（頬粘膜、指肉趾または遠位尾部）を調べた。
・出血を誘発するために、バネ式ランセットを、選択された試験部位にしっかりと配置し、作動させて、均一な直線切開を生じさせた。ランセットの仕様が切開寸法を決定した。
・切開部位からの血液を自由流動させ、出血が連続的に３０秒間停止するまでモニターした。これは出血時間（ＢＴ）を定めた。各ＢＴ部位に関してＢＴを記録した。ＢＴ測定中、遠位尾部切開部位を温かい滅菌乳酸リンゲル液で灌流し、指肉趾部位を温かい滅菌乳酸リンゲル液に浸漬した。乳酸リンゲル液の適用は、これらの部位の血流を観察する能力を改善した。
研究設計：各研究は、３つの試験領域における３回の３０分間のテンプレート出血時間試験（ＢＴ）から構成されるものであった（図１５の研究概要図を参照されたい）。１回目のＢＴはベースライン出血を決定した。２回目のＢＴは、化合物非含有ビヒクル（２０ｍＭ 酢酸ナトリウム、９％ スクロース、ｐＨ５．５）の３分間のＩＶ注射（４．１７ｍｌ／ｋｇ）（処理１）の７０分後に行った。３回目のＢＴは、化合物非含有ビヒクルまたはαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパ（１０ｍｇ／ｋｇ）の３分間のＩＶ注入（４．１７ｍｌ／ｋｇ）（処理２）の７０分後に行った。前記のとおりに出血をモニターし、出血時間を記録した。出血が停止した時間を各部位に関して記録した。定期的に血液サンプルを採取して、αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパの循環血漿レベル、ａＰＴＴおよびＰＴを決定した。
各試験動物を２つの研究セッションに付した。研究セッション１においては、ビヒクルおよびそれに続くビヒクルが、それぞれ、処理１および処理２を構成した。研究セッション２においては、ビヒクルおよびそれに続く１０ｍｇ／ｋｇ ＩＶ αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパが、それぞれ、処理１および処理２を構成した。
試験物質注入の終了と出血時間の評価の開始との間の７０分間は血栓質量測定のためのＡＶシャントモデルにおけるタイミングを表していた（処理の３０分後のシャント配置＋シャントを通る４０分間の血流）。既に記載されているＰＫ／ＰＤ霊長類モデリング研究に基づけば、αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパの１０ｍｇ／ｋｇ ＩＶの試験用量は、αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパの予想されるヒトＣｍａｘの１０倍を達成すると推定された。
凝固バイオマーカーである活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）およびプロトロンビン時間（ＰＴ）、ならびにαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパの循環血漿レベルを、図１５に示されている実験を通して収集した血液サンプルから測定した。Ｓｔａ－Ｒ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ凝固分析装置（Ｓｔａｇｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ，Ｉｎｃ）を使用して動物から採取した解凍（－８０℃）クエン酸塩添加血漿からａＰＴＴおよびＰＴを測定した。該凝固分析装置は、電磁機械的血餅検出システムを使用して血餅形成まで時間を測定する。ａＰＴＴアッセイのために、該分析装置は５０μＬの血漿を５０μＬのエラグ酸（ＡＰＴＴ－ＸＬ，Ｐａｃｉｆｉｃ Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ；Ｆｉｓｈｅｒ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ｃａｔ＃１０－０４０２）とキュベット内で混合し、ついでこれを３７℃で３分間インキュベートする。ついで５０μＬの０．０２５Ｍ 塩化カルシウム（Ｓｔａ－ＣａＣｌ２ ０．０２５Ｍ，Ｓｔａｇｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ，Ｉｎｃ．，ｃａｔ＃００３６７）を該混合物に加えて、凝固を開始させ、血餅形成までの時間を測定する。ＰＴアッセイのために、５０μＬの血漿をキュベット内で３７℃で４分間インキュベートした。１００μＬの可溶化トロンボプラスチン試薬（Ｔｒｉｎｉｃｌｏｔ ＰＴ Ｅｘｃｅｌ，ＴＣｏａｇ，Ｉｎｃ．，ｃａｔ＃ Ｔ１１０６）を加えることにより、血餅形成を開始させた。
電気化学発光に基づく一般的なｈＩｇＧ４イムノアッセイを用いて、アカゲザル血漿中のαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパを定量した。捕捉試薬としてのＢｅｔｈｙｌ（ｃａｔ＃Ａ８０－３１９Ｂ）からのビオチン化ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）、および検出試薬用のＳｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ（ｃａｔ＃９１９０－０１）からのスルホＴＡＧ標識マウス抗ｈｕＩｇＧ（Ｆｃ特異的）を使用して、該アッセイを確立した。このアッセイは認定され、該アッセイの定量下限は１００の最小必要希釈度で４１ｎｇ／ｍＬであると決定された。
図１６Ａ～１６Ｆは、頬粘膜（図１６Ａ、図１６Ｄ）、指肉趾（図１６Ｂ、図１６Ｅ）および遠位尾部（図１６Ｃ、図１６Ｆ）テンプレート出血時間に対する６頭のカニクイザルにおけるビヒクルおよび１０ｍｇ／ｋｇ ＩＶ αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパの投与の効果を要約している。研究セッション１における処理１および処理２としてのビヒクル－ビヒクル、ならびに研究セッション２における処理１および２としてのビヒクル－ αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパに関して、絶対出血時間（左パネル）および出血時間における変化率（％）（右パネル）を比較することにより、出血時間に対する効果を評価した。ビヒクル対αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパの絶対出血時間およびビヒクル－ビヒクル対ビヒクル－ αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパの出血時間における変化率の両方の比較は、この試験用量でのαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパの投与では、試験部位のいずれにおいても出血時間における統計的に有意な変化を検出しなかった。
カニクイザル出血時間試験において１０ｍｇ／ｋｇ ＩＶ試験用量で得られたαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパの血漿濃度は２９０．７±１７．２（平均±ＳＥＭ）μｇ／ｍＬ（～１９３８．２ｎＭ）であった。血漿ａＰＴＴ値はベースラインにおいては３１．０±０．５秒であり、一方、１０ｍｇ／ｋｇ ＩＶのαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパの投与後には７１．３±１．６秒（２．３倍の増加）であった。血漿ＰＴ値はベースラインにおいては１２．７±０．１秒であり、一方、１０ｍｇ／ｋｇ ＩＶのαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパの投与後には１２．８±０．２４秒（明らかな増加は認められなかった）であった。
実施例１０
アカゲザルにおける複数回の静脈内投与の後のαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパの薬物動態（ＰＫ）および薬力学（ＰＤ）評価
αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパのＰＫＰＤ特性をアカゲザルにおいてインビボで特徴づけした。その目的は、ＰＫ特性を評価すること、および合計２回の毎週の投与の後のＰＫ／ＰＤ関係を確立することであった。
研究設計：非化合物ビヒクル（１０ｍＭ 酢酸ナトリウム（ｐＨ５．５）、７％ スクロース、０．０２％ ＰＳ－８０）またはαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパを０．１、０．３、１、３および６ｍｇ／ｋｇの５つの用量レベルでアカゲザル（用量群当たり４頭の動物）に投与（ＩＶ）した。この研究の期間は２２日であり、薬物レベルおよび活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）の決定のために１．５ｍＬの血液を採取した。
表１０に示されているとおり、該実験を通して収集した血液サンプルから凝固バイオマーカー（ａＰＴＴ）およびαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパの循環血漿レベルを測定した。
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Ｓｔａ－Ｒ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ凝固分析装置（Ｓｔａｇｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ，Ｉｎｃ）を使用して動物から採取した解凍（－８０℃）クエン酸塩添加血漿からａＰＴＴを測定した。該凝固分析装置は、電磁機械的血餅検出システムを使用して血餅形成まで時間を測定する。ａＰＴＴアッセイのために、該分析装置は５０μＬの血漿を５０μＬのエラグ酸（ＡＰＴＴ－ＸＬ，Ｐａｃｉｆｉｃ Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ；Ｆｉｓｈｅｒ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ｃａｔ＃１０－０４０２）とキュベット内で混合し、ついでこれを３７℃で３分間インキュベートする。ついで５０μＬの０．０２５Ｍ 塩化カルシウム（Ｓｔａ－ＣａＣｌ２ ０．０２５Ｍ，Ｓｔａｇｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ，Ｉｎｃ．，ｃａｔ＃００３６７）を該混合物に加えて、凝固を開始させ、血餅形成までの時間を測定する。
電気化学発光に基づく一般的なｈＩｇＧ４イムノアッセイを用いて、アカゲザル血漿中のαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパを定量した。捕捉試薬としてのＢｅｔｈｙｌ（ｃａｔ＃Ａ８０－３１９Ｂ）からのビオチン化ヤギ抗ｈｕＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）、および検出試薬用のＳｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ（ｃａｔ＃９１９０－０１）からのスルホＴＡＧ標識マウス抗ｈｕＩｇＧ（Ｆｃ特異的）を使用して、該アッセイを確立した。このアッセイは認定され、該アッセイの定量下限は１００の最小必要希釈度で４１ｎｇ／ｍＬであると決定された。
非コンパートメント（ＮＣＡ）法（ＧａｂｒｉｅｌｓｓｏｎおよびＷｅｉｎｅｒ，２０００）を用いて、αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパに関する個々の動物血漿濃度－時間データを分析した。Ｐｈｏｅｎｉｘ ３２ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ ６．３（バージョン６．３．０．３９５，Ｃｅｒｔａｒａ Ｌ．Ｐ．Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，２０１２）を使用して、全てのＰＫパラメータを推定し、または計算した。非コンパートメント分析はＭｏｄｅｌ ２０１（ＩＶ）を使用した。全ての濃度データおよびＰＫパラメータを３桁の有効数字に丸めた。定量下限未満（＜ＬＬＯＱ）の濃度値を有するサンプルをＰＫ分析および平均データ計算から除外した。グラフ化の目的には、ＬＬＯＱ未満の値を、個々の動物の濃度－時間プロットに関して、最小報告可能濃度の１／２に設定した。
ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍバージョン７．００（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ）を使用して、暴露とａＰＴＴとの関係を特徴づけるために、Ｓ字状Ｅｍａｘ応答（ＰＫ／ＰＤ）モデルを使用した。このモデルにおいては、Ｅｍａｘ値は、ベースラインから得られたａＰＴＴの最大増加に対応し、ＥＣ５０値は半数効果濃度に相当する。変動性は、該ソフトウェアにより得られたＥＣ５０値に関する９５％信頼区間（ＣＩ）として示された。
結果：αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパに関する個々の濃度－時間プロファイルを図１７Ａに示す。全てのＰＫパラメーターに関して非線形性が認められた。平均クリアランス値は、試験した最低用量（０．１ｍｇ／ｋｇ）に関する約８ｍＬ／ｋｇ・日から、試験した最高用量（６ｍｇ／ｋｇ）に関する約４ｍＬ／ｋｇ・日へと減少した。ａＰＴＴの濃度－時間プロファイルを図１７Ｂに示す。ａＰＴＴの用量依存的増加が認められた。Ｓ字状Ｅｍａｘモデルによって最も良く示されるαＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパの血漿濃度とａＰＴＴとの関係はこの関係を適切に示した。αＦＸＩ－１８６２３ｐ ＩｇＧ４ ＨＣ（Ｓ２２８Ｐ）（Ｅ１）／ＬＣカッパに関する推定ＥＣ５０値は約３．６μｇ／ｍＬであった。
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本発明は例示実施形態に関して本明細書に記載されているが、本発明はそれらに限定されないと理解されるべきである。当業者および本教示を利用する者は本発明の範囲内の追加的な修飾および実施形態を認識するであろう。したがって、本発明は本明細書における特許請求の範囲のみによって限定される。
本発明は一態様において以下を提供する。
［項目１］
（ｉ）αＦＸＩ－１８６２３ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリーまたはαＦＸＩ－１８６１１ファミリーの抗ＦＸＩ抗体の、６個の相補性決定領域（ＣＤＲ）を少なくとも含む、あるいは（ｉｉ）６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する、αＦＸＩ－１８６２３ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリーまたはαＦＸＩ－１８６１１ファミリーの抗ＦＸＩ抗体の、６個の相補性決定領域（ＣＤＲ）を少なくとも含む抗体または抗原結合性フラグメントであって、ここで、
αＦＸＩ－１８６２３ファミリーの抗体は、配列番号２８または２９に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）可変領域と、配列番号３０に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ可変領域とを含み、
αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリーの抗体は、配列番号２１または２２に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ可変領域と、配列番号２５に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）可変領域とを含み、
αＦＸＩ－１８６１１ファミリーの抗体は、配列番号２３または２４に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ可変領域と、配列番号２５に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ可変領域とを含む、抗体または抗原結合性フラグメント。
［項目２］
６個のＣＤＲがＦＸＩ－１８６２３ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリーまたはαＦＸＩ－１８６１１ファミリーの抗ＦＸＩ抗体のＨＣのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と、ＦＸＩ－１８６２３ｐファミリー、αＦＸＩ－１８６１１ｐファミリーまたはαＦＸＩ－１８６１１ファミリーの抗ＦＸＩ抗体のＬＣのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、項目１記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
［項目３］
抗体または抗原結合性フラグメントが、配列番号２８または２９に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３０に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３；あるいは配列番号２１、２２、２３または２４に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号２５に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、項目２記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
［項目４］
抗体が、配列番号１６、１７、１８または１９に示されているアミノ酸配列を含むＨＣ定常ドメインを含む、項目１～３のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
［項目５］
抗体が、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含むＬＣ定常ドメインを含む、項目１～４のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
［項目６］
抗体または抗原結合性フラグメントが、
（ａ）配列番号２８に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）可変ドメインおよび配列番号３０に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン、
（ｂ）配列番号２９に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）可変ドメインおよび配列番号３０に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン、
（ｃ）配列番号２１に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）可変ドメインおよび配列番号２５に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン、
（ｄ）配列番号２２に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）可変ドメインおよび配列番号２５に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン、
（ｅ）配列番号２３に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）可変ドメインおよび配列番号２５に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン、
（ｆ）配列番号２４に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）可変ドメインおよび配列番号２５に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン、
（ｇ）ＨＣ可変領域フレームワークが１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）または（ｆ）の変異体、あるいは
（ｈ）ＬＣ可変領域フレームワークが１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）または（ｇ）の変異体
を含む、項目１または３記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
［項目７］
抗体が更に、配列番号１６、１７、１８、１９に示されているアミノ酸配列を含むＨＣ定常ドメインを含む、項目６記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
［項目８］
抗体が更に、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含むＬＣ定常ドメインを含む、項目６記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
［項目９］
抗体または抗原結合性フラグメントが凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する、項目１、２、３、４、５、６、７または８記載の抗体または抗原結合性フラグメント。［項目１０］
抗体が、
（ａ）配列番号１に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号２に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号３または４に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインと定常ドメインとを有するＨＣ、ならびに
（ｂ）配列番号５に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、配列番号６に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号７に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインと定常ドメインとを有するＬＣ
を含む、項目１または３記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
［項目１１］
抗体が更に、配列番号１６、１７、１８または１９に示されているアミノ酸配列を含むＨＣ定常ドメインを含む、項目１０記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
［項目１２］
抗体が更に、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含むＬＣ定常ドメインを含む、項目１０記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
［項目１３］
抗体が、
（ａ）配列番号８に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号９に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号１０に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む重鎖を構成する可変ドメインと定常ドメインとを有するＨＣ、ならびに
（ｂ）配列番号１１に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、配列番号１２に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号１３に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインと定常ドメインとを有するＬＣ
を含む、項目１または３記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
［項目１４］
抗体が、配列番号１６、１７、１８または１９に示されているアミノ酸配列を含むＨＣ定常ドメインを含む、項目１３記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
［項目１５］
抗体が、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含むＬＣ定常ドメインを含む、項目１３記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
［項目１６］
抗体が、
配列番号３３、３５、３７、３９、４５、４７、４９、５１、５７、５９、６１、６３、６９、７１、７３または７５に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ、および１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその変異体、ならびに
配列番号２６に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ、および１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその変異体
を含み、ここで、抗体または抗原結合性フラグメントが凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する、項目１または３記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
［項目１７］
抗体が、
配列番号４１、４３、５３、５５、６５、６７、７７または７９に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ、および１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその変異体、ならびに
配列番号３１に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ、および１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むその変異体
を含み、ここで、抗体または抗原結合性フラグメントが凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する、項目１または３記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
［項目１８］
（ａ）（ｉ）重鎖（ＨＣ）フレームワークおよび配列番号８に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号９に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号１０に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３；
（ｉｉ）ＨＣフレームワークおよび配列番号１に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号２に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号３に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３；
（ｉｉｉ）ＨＣフレームワークおよび配列番号１に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号２に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号４に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３；
（ｉｖ）ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２またはＣＤＲ３の少なくとも１つが１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む、（ｉ）、（ｉｉ）または（ｉｉｉ）の変異体；あるいは
（ｖ）ＨＣフレームワークが１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む、（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）または（ｉｖ）の変異体
を含む可変ドメインと定常ドメインとを有する重鎖（ＨＣ）；
（ｂ）（ｉ）軽鎖（ＬＣ）フレームワークおよび配列番号１１に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、配列番号１２に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号１３に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３；
（ｉｉ）ＬＣフレームワークおよび配列番号５に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、配列番号６に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号７に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３；
（ｉｉｉ）ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２またはＬＣ－ＣＤＲ３の少なくとも１つが１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む、（ｉ）または（ｉｉ）の変異体；あるいは
（ｉｖ）ＬＣフレームワークが１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む、（ｉ）、（ｉｉ）または（ｉｉｉ）の変異体
を含む可変ドメインと定常ドメインとを有する軽鎖（ＬＣ）；あるいは
（ｃ）（ａ）からのＨＣおよび（ｂ）からのＬＣ
を含む抗体であって、ここで、抗体が凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する、抗体。
［項目１９］
ＨＣ定常ドメインが、配列番号１６、１７、１８または１９に示されているアミノ酸配列を含む、項目１８記載の抗体。
［項目２０］
ＬＣ定常ドメインが、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む、項目１８または１９記載の抗体。
［項目２１］
項目１～２０のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメントのいずれかの軽鎖可変ドメインまたは重鎖可変ドメインをコードする単離された核酸分子。
［項目２２］
項目１～２０のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメントと医薬上許容される担体または希釈剤とを含む組成物。
［項目２３］
項目１～２０のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメントの有効量を対象に投与することを含む、対象における血栓塞栓性障害または疾患の治療方法。
［項目２４］
血栓塞栓性障害または疾患を治療するための医薬の製造のための、項目１～２０のいずれか１項記載の抗体の使用。
［項目２５］
血栓塞栓性障害または疾患の治療のための、項目１～２０のいずれか１項記載の抗体。
［項目２６］
凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）上のエピトープに結合するヒト抗体または抗原結合性フラグメントであって、該エピトープが、水素重水素交換質量分析（ＨＤＸ－ＭＳ）の使用により決定されたアミノ酸配列ＤＩＦＰＮＴＶＦ（配列番号８２）およびアミノ酸配列ＰＳＴＲＩＫＫＳＫＡＬＳＧ（配列番号８３）を含む、ヒト抗体または抗原結合性フラグメント。［項目２７］
抗体が、（ｉ）ヒトＩｇＧ１定常ドメインまたはその変異体もしくは修飾誘導体、あるいは（ｉｉ）ヒトＩｇＧ４定常ドメインまたはその変異体もしくは修飾変異体を含む、項目２６記載のヒト抗体。
［項目２８］
抗体が、２２８位（ＥＵ番号付け）または１０８位（本明細書に示されているもの）のセリン残基の、プロリン残基による置換を含むＩｇＧ４定常ドメインを含む、項目２６記載のヒト抗体。
［項目２９］
配列番号３３、３５、３７、３９、４５、４７、４９、５１、５７、５９、６１、６３、６９、７１、７３もしくは７５に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号２６に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体または配列番号４１、４３、５３、５５、６５、６７、７７もしくは７９に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号３１に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を交差遮断し又は該抗体の結合と競合する抗体または抗原結合性フラグメント。
［項目３０］
抗体が、（ｉ）ヒトＩｇＧ１定常ドメインまたはその変異体もしくは修飾誘導体、あるいは（ｉｉ）ヒトＩｇＧ４定常ドメインまたはその変異体もしくは修飾変異体を含む、項目２９記載のヒト抗体。
［項目３１］
抗体が、２２８位（ＥＵ番号付け）または１０８位（本明細書に示されているもの）のセリン残基の、プロリン残基による置換を含むＩｇＧ４定常ドメインを含む、項目３０記載のヒト抗体。
［項目３２］
（ｉ）配列番号１に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号２に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号３もしくは４に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３、または配列番号８に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号９に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号１０に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン、ならびに
（ｉｉ）配列番号５に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、配列番号６に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号７に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３、または配列番号１１に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１２に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号１３に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン
を含む抗体または抗原結合性フラグメントの製造方法であって、該重鎖をコードする核酸分子と該軽鎖をコードする核酸分子とを含む宿主細胞を準備し、該抗体または抗原結合性フラグメントを産生させるのに十分な条件下、それを産生させるのに十分な時間にわたって該宿主細胞を培養することを含む、製造方法。
［項目３３］
重鎖可変領域が配列番号２１、２２、２３または２４のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号２５のアミノ酸配列を含む、項目３２記載の製造方法。
［項目３４］
抗体がＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインを含む、項目３２記載の製造方法。
［項目３５］
抗体がＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインを含む、項目３２記載の製造方法。［項目３６］
抗体が、配列番号１６、１７、１８または１９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖定常ドメインを含む、項目３２記載の製造方法。
［項目３７］
軽鎖がヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖を含む、項目３２記載の製造方法。
［項目３８］
抗体が、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖定常ドメインを含む、項目３２記載の製造方法。
［項目３９］
宿主細胞がチャイニーズハムスター卵巣細胞またはヒト胎児腎２９３細胞である、項目３２記載の製造方法。
［項目４０］
宿主細胞が酵母または糸状真菌細胞である、項目３２記載の製造方法。
［項目４１］
抗体または抗原結合性フラグメントが、該重鎖をコードする核酸分子と該軽鎖をコードする核酸分子とを含む宿主から得られる、項目１～２０のいずれか１項記載の組成物。［項目４２］
抗体がＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインを含む、項目４１記載の組成物。
［項目４３］
抗体がＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインを含む、項目４１記載の組成物。
［項目４４］
抗体が、配列番号１６、１７、１８または１９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖定常ドメインを含む、項目４１記載の組成物。
［項目４５］
軽鎖がヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖を含む、項目４１記載の組成物。
［項目４６］
抗体が、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖定常ドメインを含む、項目４１記載の組成物。
［項目４７］
宿主細胞がチャイニーズハムスター卵巣細胞またはヒト胎児腎２９３細胞である、項目４１記載の組成物。
［項目４８］
宿主細胞が酵母または糸状真菌細胞である、項目４１記載の組成物。

Claims (41)

  1. （ｉ）αＦＸＩ－１８６２３ｐファミリーの抗ＦＸＩ抗体の、６個の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、該６個のＣＤＲは
    （ａ）配列番号４３に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに
    （ｂ）配列番号３１に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体またはその抗原結合性フラグメント。
  2. （ａ）配列番号８に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号９に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号１０に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３；ならびに（ｂ）配列番号１１に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、配列番号１２に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号１３に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む、抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体またはその抗原結合性フラグメント。
  3. 抗体または抗原結合性フラグメントが、配列番号２８または２９に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに配列番号３０に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、請求項２記載の抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体またはその抗原結合性フラグメント。
  4. 抗体が、配列番号１６、１７、１８または１９に示されているアミノ酸配列を含むＨＣ定常ドメインを含む、請求項１～３のいずれか１項記載の抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体またはその抗原結合性フラグメント。
  5. 抗体が、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含むＬＣ定常ドメインを含む、請求項１～４のいずれか１項記載の抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体またはその抗原結合性フラグメント。
  6. 抗体または抗原結合性フラグメントが、
    （ａ）配列番号２８に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）可変ドメインおよび配列番号３０に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン、または
    （ｂ）配列番号２９に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）可変ドメインおよび配列番号３０に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）可変ドメイン
    を含む、請求項１または２記載の抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体またはその抗原結合性フラグメント。
  7. 抗体が更に、配列番号１６、１７、１８または１９に示されているアミノ酸配列を含むＨＣ定常ドメインを含む、請求項６記載の抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体またはその抗原結合性フラグメント。
  8. 抗体が更に、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含むＬＣ定常ドメインを含む、請求項６記載の抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体またはその抗原結合性フラグメント。
  9. 抗体または抗原結合性フラグメントが凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する、請求項１、２、３、４、５、６、７または８記載の抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体またはその抗原結合性フラグメント。
  10. 抗体が、
    （ａ）配列番号８に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号９に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号１０に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む重鎖を構成する可変ドメインと定常ドメインとを有するＨＣ、ならびに
    （ｂ）配列番号１１に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、配列番号１２に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号１３に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインと定常ドメインとを有するＬＣ
    を含む、請求項１に記載の抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体またはその抗原結合性フラグメント。
  11. 抗体が、配列番号１６、１７、１８または１９に示されているアミノ酸配列を含むＨＣ定常ドメインを含む、請求項１０記載の抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体またはその抗原結合性フラグメント。
  12. 抗体が、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含むＬＣ定常ドメインを含む、請求項１０記載の抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体またはその抗原結合性フラグメント。
  13. 抗体が、
    配列番号４１、４３、５３、５５、６５、６７、７７または７９に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ、ならびに
    配列番号３１に示されているアミノ酸配列を有するＬＣを含み、ここで、抗体または抗原結合性フラグメントが凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化および／または因子ＩＸの因子ＸＩａ媒介性活性化を阻害する、請求項１または２記載の抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体またはその抗原結合性フラグメント。
  14. 請求項１～１３のいずれか１項記載の抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体またはその抗原結合性フラグメントのいずれかの軽鎖可変ドメインまたは重鎖可変ドメインをコードする単離された核酸分子。
  15. 請求項１～１３のいずれか１項記載の抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体またはその抗原結合性フラグメントと医薬上許容される担体または希釈剤とを含む組成物。
  16. 血栓塞栓性障害または疾患の治療のための、請求項１～１３のいずれか１項記載の抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体。
  17. （ｉ）配列番号８に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号９に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号１０に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン、ならびに
    （ｉｉ）配列番号１１に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１２に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号１３に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン
    を含む抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体またはその抗原結合性フラグメントの製造方法であって、該重鎖可変ドメインを含む重鎖をコードする核酸分子と該軽鎖可変ドメインを含む軽鎖をコードする核酸分子とを含む宿主細胞を準備し、該抗体または抗原結合性フラグメントを産生させるのに十分な条件下、それを産生させるのに十分な時間にわたって該宿主細胞を培養することを含む、製造方法。
  18. 重鎖可変領域が配列番号２８または２９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号３０のアミノ酸配列を含む、請求項１７記載の製造方法。
  19. 前記抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体がＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインを含む、請求項１７記載の製造方法。
  20. 前記抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体がＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインを含む、請求項１７記載の製造方法。
  21. 前記抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体が、配列番号１６、１７、１８または１９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖定常ドメインを含む、請求項１７記載の製造方法。
  22. 軽鎖がヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖を含む、請求項１７記載の製造方法。
  23. 前記抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体が、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖定常ドメインを含む、請求項１７記載の製造方法。
  24. 宿主細胞がチャイニーズハムスター卵巣細胞またはヒト胎児腎２９３細胞である、請求項１７記載の製造方法。
  25. 宿主細胞が酵母または糸状真菌細胞である、請求項１７記載の製造方法。
  26. 前記抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体が、重鎖をコードする核酸分子と軽鎖をコードする核酸分子とを含む宿主から得られる、請求項１～１３のいずれか１項記載の抗体を含む組成物。
  27. 前記抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体がＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインを含む、請求項２６記載の組成物。
  28. 前記抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体がＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインを含む、請求項２６記載の組成物。
  29. 前記抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体が、配列番号１６、１７、１８または１９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖定常ドメインを含む、請求項２６記載の組成物。
  30. 軽鎖がヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖を含む、請求項２６記載の組成物。
  31. 前記抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体が、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖定常ドメインを含む、請求項２６記載の組成物。
  32. 宿主細胞がチャイニーズハムスター卵巣細胞またはヒト胎児腎２９３細胞である、請求項２６記載の組成物。
  33. 宿主細胞が酵母または糸状真菌細胞である、請求項２６記載の組成物。
  34. 配列番号２９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および配列番号３０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合する抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体またはその抗原結合性フラグメント。
  35. 前記抗体がさらに、配列番号１６または１７に示されているアミノ酸配列を有する重鎖定常ドメインおよび配列番号２０に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖定常ドメインを含む、請求項３４に記載の抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体またはその抗原結合性フラグメント。
  36. 前記抗体がさらに、２９７位のアスパラギン残基のＮ－グリコシル化を欠くＩｇＧ１アイソタイプの重鎖定常ドメインを含む、請求項３４に記載の抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体またはその抗原結合性フラグメント。
  37. 請求項３４に記載の抗凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）抗体またはその抗原結合性フラグメントと医薬上許容される担体または希釈剤とを含む組成物。
  38. 配列番号４３に示されているアミノ酸配列を有する重鎖および配列番号３１に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合する抗体。
  39. 配列番号４３に示されているアミノ酸配列を有する重鎖および配列番号３１に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合する抗体と、医薬上許容される担体または希釈剤とを含む組成物。
  40. 配列番号６７に示されているアミノ酸配列を有する重鎖および配列番号３１に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合する抗体。
  41. 配列番号６７に示されているアミノ酸配列を有する重鎖および配列番号３１に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル３ドメインに結合する抗体と、医薬上許容される担体または希釈剤とを含む組成物。
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WO (1) WO2017218371A1 (ja)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JOP20200312A1 (ar) 2015-06-26 2017-06-16 Novartis Ag الأجسام المضادة للعامل xi وطرق الاستخدام
TW201802121A (zh) 2016-05-25 2018-01-16 諾華公司 抗因子XI/XIa抗體之逆轉結合劑及其用途
CA3025869A1 (en) * 2016-06-14 2017-12-21 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-coagulation factor xi antibodies
IL308980A (en) 2016-12-23 2024-01-01 Novartis Ag Antibodies against factor XI and methods of their use
CN110423278B (zh) * 2019-08-08 2020-07-17 上海博槿生物科技有限公司 一种抗凝血因子XI活化形式因子XIa的抗体及其制备方法和应用
CA3184718A1 (en) * 2020-07-02 2022-01-06 Lei Wang Anti-fxi/fxia antibody, antigen-binding fragment thereof, and pharmaceutical use thereof
AU2021302199A1 (en) * 2020-07-03 2023-02-23 Suzhou Alphamab Co., Ltd. Coagulation factor XI (FXI) binding protein
EP4291579A1 (en) * 2021-02-09 2023-12-20 Arxx Therapeutics AS Anti-s100a4 humanized antibodies, uses and methods
WO2023098637A1 (zh) * 2021-11-30 2023-06-08 苏州康宁杰瑞生物科技有限公司 预防和/或治疗血栓栓塞性疾病的方法
WO2024141099A1 (zh) * 2022-12-30 2024-07-04 甘李药业股份有限公司 抗凝血因子XI和/或其活化形式因子XIa的抗体及其用途

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010054007A1 (en) 2008-11-07 2010-05-14 Fabrus Llc Combinatorial antibody libraries and uses thereof
WO2010072740A2 (en) 2008-12-23 2010-07-01 Astrazeneca Ab TARGETED BINDING AGENTS DIRECTED TO α5β1 AND USES THEREOF
US20100330103A1 (en) 2006-08-03 2010-12-30 Astrazeneca Ab Antibodies Directed to Alpha V Beta 6 And Uses Thereof
JP2011504371A (ja) 2007-11-21 2011-02-10 オレゴン ヘルス アンド サイエンス ユニバーシティー 抗第ｘｉ因子モノクローナル抗体およびその使用方法
WO2011056997A1 (en) 2009-11-04 2011-05-12 Fabrus Llc Methods for affinity maturation-based antibody optimization
WO2012018404A2 (en) 2010-08-06 2012-02-09 U3 Pharma Gmbh Use of her3 binding agents in prostate treatment
US20150093395A1 (en) 2008-12-18 2015-04-02 Vanderbilt University Anti-fxi antibodies and methods of use
WO2015049280A1 (en) 2013-10-01 2015-04-09 Medimmune Limited Methods of treating and diagnosing alpha-v-beta-6 overexpressing cancer

Family Cites Families (83)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4447233A (en) 1981-04-10 1984-05-08 Parker-Hannifin Corporation Medication infusion pump
US4439196A (en) 1982-03-18 1984-03-27 Merck & Co., Inc. Osmotic drug delivery system
US4447224A (en) 1982-09-20 1984-05-08 Infusaid Corporation Variable flow implantable infusion apparatus
US4487603A (en) 1982-11-26 1984-12-11 Cordis Corporation Implantable microinfusion pump system
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4596556A (en) 1985-03-25 1986-06-24 Bioject, Inc. Hypodermic injection apparatus
US4941880A (en) 1987-06-19 1990-07-17 Bioject, Inc. Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly
US4790824A (en) 1987-06-19 1988-12-13 Bioject, Inc. Non-invasive hypodermic injection device
DE68919361T2 (de) 1988-06-21 1995-05-24 Genentech Inc Therapeutische zusammensetzungen für die behandlung von myocard-infarkten.
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5064413A (en) 1989-11-09 1991-11-12 Bioject, Inc. Needleless hypodermic injection device
US5312335A (en) 1989-11-09 1994-05-17 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5874299A (en) 1990-08-29 1999-02-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
ATE158021T1 (de) 1990-08-29 1997-09-15 Genpharm Int Produktion und nützung nicht-menschliche transgentiere zur produktion heterologe antikörper
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5877397A (en) 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
EP0617706B1 (en) 1991-11-25 2001-10-17 Enzon, Inc. Multivalent antigen-binding proteins
US5383851A (en) 1992-07-24 1995-01-24 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
JPH0656382A (ja) 1992-08-04 1994-03-01 Kawasaki Steel Corp コークス乾式消火装置のバケット巻上機の吊ビーム装置
MA24512A1 (fr) 1996-01-17 1998-12-31 Univ Vermont And State Agrienl Procede pour la preparation d'agents anticoagulants utiles dans le traitement de la thrombose
GB9818110D0 (en) 1998-08-19 1998-10-14 Weston Medical Ltd Needleless injectors and other devices
US6096002A (en) 1998-11-18 2000-08-01 Bioject, Inc. NGAS powered self-resetting needle-less hypodermic jet injection apparatus and method
AU764211C (en) 1998-12-01 2006-03-30 Abbvie Biotherapeutics Inc. Humanized antibodies to gamma-interferon
JP5198704B2 (ja) 2000-03-03 2013-05-15 メディミューン リミティド エオタキシンに対するヒト抗体及びそれらの使用
KR100708398B1 (ko) 2002-03-22 2007-04-18 (주) 에이프로젠 인간화 항체 및 이의 제조방법
GEP20196963B (en) 2003-07-15 2019-04-10 Inc Amgen Human anti-ngf neutralizing antibodies as selective ngf pathway inhibitors
SG158150A1 (en) 2004-12-21 2010-01-29 Centocor Inc Anti-il-12 antibodies, epitopes, compositions, methods and uses
US8318906B2 (en) 2005-04-15 2012-11-27 The Regents Of The University Of California EMP2 antibodies and their therapeutic uses
NZ563193A (en) 2005-05-09 2010-05-28 Ono Pharmaceutical Co Human monoclonal antibodies to programmed death 1(PD-1) and methods for treating cancer using anti-PD-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
DK1907424T3 (en) 2005-07-01 2015-11-09 Squibb & Sons Llc HUMAN MONOCLONAL ANTIBODIES TO PROGRAMMED death ligand 1 (PD-L1)
ES2390476T3 (es) 2005-12-08 2012-11-13 Medarex, Inc. Anticuerpos monoclonales frente a fucosil-GM1 y procedimientos de uso de anti-fucosil-GM1
KR101373464B1 (ko) 2005-12-08 2014-03-14 메다렉스, 엘.엘.시. 단백질 티로신 키나제 7(ｐｔｋ7)에 대한 인간 단일클론항체 및 그의 용도
JP5586952B2 (ja) 2006-06-06 2014-09-10 クルセル ホランド ベー ヴェー 腸球菌に対する殺活性を有するヒトの結合分子及びその使用方法
CL2007002567A1 (es) 2006-09-08 2008-02-01 Amgen Inc Proteinas aisladas de enlace a activina a humana.
US7833527B2 (en) 2006-10-02 2010-11-16 Amgen Inc. Methods of treating psoriasis using IL-17 Receptor A antibodies
US8598321B2 (en) 2007-03-22 2013-12-03 The Regents Of The University Of California Therapeutic monoclonal antibodies that neutralize botulinum neurotoxins
GB0708585D0 (en) 2007-05-03 2007-06-13 Queen Mary & Westfield College Novel antibody and use in diagnosis and therapy of arthropathies
US7982016B2 (en) 2007-09-10 2011-07-19 Amgen Inc. Antigen binding proteins capable of binding thymic stromal lymphopoietin
US8877688B2 (en) 2007-09-14 2014-11-04 Adimab, Llc Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
BRPI0816785A2 (pt) 2007-09-14 2017-05-02 Adimab Inc bibliotecas de anticorpos sintéticos racionalmente desenhadas, e, usos para as mesmas
SG187477A1 (en) 2007-09-26 2013-02-28 U3 Pharma Gmbh Heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor antigen binding proteins
US8188235B2 (en) 2008-06-18 2012-05-29 Pfizer Inc. Antibodies to IL-6 and their uses
WO2009154461A1 (en) 2008-06-19 2009-12-23 Prothix Bv Use of anti-factors xi antibodies for prevention of thrombus formation
CA2732003A1 (en) 2008-07-31 2010-02-04 James D. Marks Antibodies that neutralize botulinum neurotoxins
KR101683033B1 (ko) 2008-10-31 2016-12-06 얀센 바이오테크 인코포레이티드 톨-유사 수용체 3 길항제
US9452227B2 (en) 2008-11-25 2016-09-27 Alderbio Holdings Llc Methods of treating or diagnosing conditions associated with elevated IL-6 using anti-IL-6 antibodies or fragments
US9212223B2 (en) 2008-11-25 2015-12-15 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat thrombosis
MX2011009798A (es) 2009-03-20 2011-12-08 Amgen Inc Inmunoglobulinas portadoras y usos de las mismas.
RU2595379C2 (ru) 2009-04-16 2016-08-27 АббВай Биотерапеутикс Инк. АНТИТЕЛА ПРОТИВ TNF-α И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
PL2426148T3 (pl) 2009-04-27 2016-01-29 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Przeciwciało anty-IL-3RA do stosowania w leczeniu nowotworu krwi
BR112012008665A2 (pt) 2009-10-12 2016-11-22 Pfizer tratamento de câncer
WO2011079004A1 (en) 2009-12-23 2011-06-30 Schering Corporation Cell line 3m
US20110244826A1 (en) * 2010-02-03 2011-10-06 Subramaniyan Krishnan Mobile communication plan offerings
KR102024922B1 (ko) 2010-07-16 2019-09-25 아디맵 엘엘씨 항체 라이브러리
PE20140633A1 (es) 2010-11-19 2014-05-30 Eisai Randd Man Co Ltd Anticuerpos neutralizadores anti-ccl20
KR102320178B1 (ko) 2011-01-06 2021-11-02 다케다 파머수티컬 컴패니 리미티드 혈장 칼리크레인 결합 단백질
MY160662A (en) 2011-04-01 2017-03-15 Memorial Sloan Kettering Cancer Center T cell receptor-like antibodies specific for a wt1 peptide presented by hla-a2
ES2693647T3 (es) 2011-06-06 2018-12-13 Novo Nordisk A/S Anticuerpos terapéuticos
US8765385B2 (en) 2011-10-27 2014-07-01 Ravindra Kumar Method of detection of neutralizing anti-actriib antibodies
EP2650310B1 (en) 2012-04-13 2016-06-08 Rottapharm Biotech S.r.l. Anti-ADAMTS-5 antibody, derivatives and uses thereof
CN104684932B (zh) 2012-05-10 2019-03-12 拜耳药业股份公司 能够结合凝血因子XI和/或其活化形式因子XIa的抗体及其用途
US9944707B2 (en) 2012-05-17 2018-04-17 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibodies that bind epidermal growth factor receptor (EGFR)
WO2014004549A2 (en) 2012-06-27 2014-01-03 Amgen Inc. Anti-mesothelin binding proteins
US9498532B2 (en) 2013-03-13 2016-11-22 Novartis Ag Antibody drug conjugates
BR112016021576A2 (pt) 2014-03-20 2017-10-10 Japan As Represented By Director General Of Nat Institute Of Infectious Diseases ?anticorpo da proteína e2 de vírus anti-hepatite c ou fragmento do anticorpo que se liga ao antígeno da mesma, ácido nucleico, e, medicamento?
NZ726911A (en) 2014-06-03 2023-01-27 Xbiotech Inc Compositions and methods for treating and preventing staphylococcus aureus infections
CN107106679B (zh) 2014-08-08 2022-07-26 艾利妥 抗trem2抗体及其使用方法
US9139653B1 (en) 2015-04-30 2015-09-22 Kymab Limited Anti-human OX40L antibodies and methods of treatment
WO2016164637A1 (en) 2015-04-07 2016-10-13 Alector Llc Anti-sortilin antibodies and methods of use thereof
JP7497953B2 (ja) 2015-06-12 2024-06-11 アレクトル エルエルシー 抗ｃｄ３３抗体及びその使用方法
JOP20200312A1 (ar) 2015-06-26 2017-06-16 Novartis Ag الأجسام المضادة للعامل xi وطرق الاستخدام
US11066481B2 (en) 2015-07-23 2021-07-20 The Regents Of The University Of California Antibodies to coagulation factor XIa and uses thereof
EP3356415B1 (en) 2015-09-29 2024-05-01 Amgen Inc. Asgr inhibitors for reduzing cholesterol levels
WO2017127468A1 (en) 2016-01-22 2017-07-27 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-coagulation factor xi antibodies
CA3025869A1 (en) * 2016-06-14 2017-12-21 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-coagulation factor xi antibodies
PE20191319A1 (es) 2016-09-20 2019-09-24 Bayer Pharma AG Anticuerpos novedosos contra el factor xi y sus usos

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100330103A1 (en) 2006-08-03 2010-12-30 Astrazeneca Ab Antibodies Directed to Alpha V Beta 6 And Uses Thereof
US20130202621A1 (en) 2006-08-03 2013-08-08 Medimmune Limited Antibodies Directed To Alpha V Beta 6 And Uses Thereof
JP2011504371A (ja) 2007-11-21 2011-02-10 オレゴン ヘルス アンド サイエンス ユニバーシティー 抗第ｘｉ因子モノクローナル抗体およびその使用方法
WO2010054007A1 (en) 2008-11-07 2010-05-14 Fabrus Llc Combinatorial antibody libraries and uses thereof
US20150093395A1 (en) 2008-12-18 2015-04-02 Vanderbilt University Anti-fxi antibodies and methods of use
WO2010072740A2 (en) 2008-12-23 2010-07-01 Astrazeneca Ab TARGETED BINDING AGENTS DIRECTED TO α5β1 AND USES THEREOF
WO2011056997A1 (en) 2009-11-04 2011-05-12 Fabrus Llc Methods for affinity maturation-based antibody optimization
JP2013510164A (ja) 2009-11-04 2013-03-21 ファブラス エルエルシー 親和性成熟に基づく抗体最適化方法
WO2012018404A2 (en) 2010-08-06 2012-02-09 U3 Pharma Gmbh Use of her3 binding agents in prostate treatment
WO2015049280A1 (en) 2013-10-01 2015-04-09 Medimmune Limited Methods of treating and diagnosing alpha-v-beta-6 overexpressing cancer

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SUN, Y. et al.，Identification of a Factor IX Binding Site on the Third Apple Domain of Activated Factor XI，THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY，1996年11月15日，Vol.271, No.46，pp.29023-29028

Also Published As

Publication number Publication date
CO2018013434A2 (es) 2018-12-28
JOP20180121A1 (ar) 2018-12-12
US20200255542A1 (en) 2020-08-13
TW202214702A (zh) 2022-04-16
JP7277500B2 (ja) 2023-05-19
CN109476758B (zh) 2023-05-23
IL315266A (en) 2024-10-01
AU2017286432A1 (en) 2018-12-06
PE20190416A1 (es) 2019-03-19
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