JP7016983B1 - Gls1遺伝子阻害用化粧料組成物、gls1遺伝子阻害剤、老化細胞除去用化粧料組成物及び老化細胞除去剤 - Google Patents
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Abstract
Description
前記課題は、ユーグレナ由来物質を有効成分として含有し、皮膚におけるGLS1遺伝子の発現を阻害するために用いられ、前記ユーグレナ由来物質が、ユーグレナ水性溶媒抽出物又はユーグレナ属に属する藻類の細胞を蛋白質酵素分解して抽出される水溶性成分であり、経皮的に適用されることを特徴とするGLS1遺伝子阻害により解決される。
前記課題は、ユーグレナ由来物質を有効成分として含有し、皮膚の老化細胞を除去するために用いられ、前記ユーグレナ由来物質が、ユーグレナ水性溶媒抽出物又はユーグレナ属に属する藻類の細胞を蛋白質酵素分解して抽出される水溶性成分であり、経皮的に適用されることを特徴とする老化細胞除去用化粧料組成物により解決される。
前記課題は、ユーグレナ由来物質を有効成分として含有し、皮膚の老化細胞を除去するために用いられ、前記ユーグレナ由来物質が、ユーグレナ水性溶媒抽出物又はユーグレナ属に属する藻類の細胞を蛋白質酵素分解して抽出される水溶性成分であり、経皮的に適用されることを特徴とする老化細胞除去剤により解決される。
このとき、前記ユーグレナ由来物質が、ユーグレナ抽出物であるとよい。
このとき、前記ユーグレナ由来物質が、ユーグレナ水性溶媒抽出物又はユーグレナ属に属する藻類の細胞を蛋白質酵素分解して抽出される水溶性成分であるとよい。
ヒトの正常な体細胞には分裂可能回数に限界がある。本施形態において、「細胞老化」とは、この分裂限界に向かって進行する細胞の変化を意味する。また、「老化細胞」とは、細胞増殖または細胞周期が不可逆的に停止した細胞を意味する。細胞が老化細胞であるか否かは、細胞老化の特徴を基準として判断すればよい。具体的には、老化細胞では、正常な細胞と比べて老化マーカーの発現量の上昇を示す。老化マーカーとしては、老化関連酸性β-ガラクトシダーゼ、P53、P16INK4a、P21CIP1などが例示されるが特に限定されるものではない。
本実施形態に係るGLS1遺伝子阻害剤は、ユーグレナ由来物質を有効成分として含有し、GLS1遺伝子の発現を阻害するために用いられるものである。「GLS1遺伝子の発現を阻害する」とは、転写レベルでの発現(mRNAとしての発現)のみならず、翻訳レベルでの発現(タンパク質としての発現)も含まれる。
「GLS1遺伝子」は、グルタミン代謝に関する遺伝子であるが、老化細胞の生存に必要な遺伝子であることが知られている。GLS1(グルタミナーゼ1)は、アミドヒドラーゼ酵素の一種で、グルタミンからグルタミン酸、およびアンモニアを産生する。細胞内小器官の異常に起因して、老化細胞内は酸性に傾いており、GLS1が過剰に働いて中和することで、細胞を維持している。
本実施形態に係る老化細胞除去剤は、ユーグレナ由来物質を有効成分として含有し、生体内の老化細胞を除去するために用いられるものである。ここで、「老化細胞除去」とは、老化細胞を組織又は器官などから取り除くことを意味するか、又は老化細胞を死滅させることを意味し、例えば、in vivoまたはin vitroにおいて老化細胞に細胞死を誘導し、老化細胞を含む細胞集団から、老化細胞を選択的に除去することを意味する。
対象となる老化細胞は、特に限定されるものではないが、真核細胞が例示される。老化細胞の例としては、例えば、ケラチノサイト(角化細胞)、上皮細胞、線維芽細胞、毛乳頭細胞などの皮膚に関連する細胞が例示されるが、除去可能な老化細胞であれば、その他の細胞であってもよい。
本実施形態において、「ユーグレナ」とは、分類学上、ユーグレナ属(Euglena)に分類される微生物、その変種、その変異種及びユーグレナ科(Euglenaceae)の近縁種を含む。ここで、ユーグレナ属(Euglena)とは、真核生物のうち、エクスカバータ、ユーグレノゾア門、ユーグレナ藻綱、ユーグレナ目、ユーグレナ科に属する生物の一群である。
本実施形態では、ユーグレナとしてユーグレナ藻体を用いることが可能である。ユーグレナ藻体として、遠心分離,濾過又は沈降等によって分離したユーグレナ生細胞をそのまま用いることができる。ユーグレナ生細胞は、培養槽から収穫後そのままの状態で使用することもできるが、水若しくは生理食塩水で洗浄するのが好ましい。また、ユーグレナ藻体が水などの液体に分散した分散液の状態で用いてもよい。本実施形態において、ユーグレナ生細胞を凍結乾燥処理やスプレー乾燥処理して得たユーグレナの乾燥藻体(ユーグレナ粉末)をユーグレナ藻体として用いると好適である。
本実施形態では、ユーグレナとしてユーグレナ抽出物(ユーグレナエキス)を用いることも可能であり、特にユーグレナ水性溶媒抽出物を用いると好適である。本実施形態において、「ユーグレナ水性溶媒抽出物」とは、水性溶媒を用いてユーグレナから抽出される抽出物を意味し、特に、水性溶媒として水やアルコール類、グリコール類を用い、5℃~600℃で、数秒~数十時間抽出したユーグレナの水抽出物、熱水抽出物、アルコール抽出物、グリコール抽出物を用いることが好ましい。抽出に使用する水は、必ずしも蒸留水や、純水、又は超純水である必要はなく、例えば、水道水や不純物を含むものであってもよいが、活性成分の抽出を妨げる成分を含まない水が好ましい。
ユーグレナ抽出物として、ユーグレナ属に属する藻類の細胞を蛋白質酵素分解して抽出される水溶性成分、具体的には、ユーグレナ粉末(ユーグレナ藻体)を酵素で加水分解抽出した加水分解ユーグレナエキスを用いても良い。加水分解ユーグレナエキスは、特開2010-90065号記載の方法に従い、調製することが可能である。
ゼAP-10なども採用できる。酵素の添加濃度、反応液のpHや反応温度、その他の条件等は、各酵素剤にとって最適な条件を選択すればよい。
「パラミロン(paramylon)」とは、約700個のグルコースがβ-1,3-結合により重合した高分子体(β-1,3-グルカン)で多孔質であり、ユーグレナ属が含有する貯蔵多糖である。パラミロン粒子は、扁平な回転楕円体粒子であり、β-1,3-グルカン鎖がらせん状に絡まりあって形成されている。
パラミロンの加工品としては、公知の種々の方法によりパラミロンを化学的又は物理的に処理して得た水溶性パラミロン、硫酸化パラミロン等や、パラミロン誘導体も含まれる。
本実施形態に係るGLS1遺伝子阻害剤及び老化細胞除去剤は、化粧料組成物、健康食品等の食品組成物、医薬組成物として構成され、老化細胞を除去するために、予防的に使用・摂取・投与される。ユーグレナ、ユーグレナ抽出物、パラミロンといったユーグレナ由来物質は、食品としても摂取可能で副作用がないため、継続的に使用・摂取・投与可能である。
本実施形態に係るGLS1遺伝子阻害剤及び老化細胞除去剤は、GLS1遺伝子阻害作用及び老化細胞除去作用を利用して、化粧料組成物に好適に用いることができる。該化粧料組成物は、あらゆる形態の化粧料に適用することができる。例えば、クレンジング剤、洗顔材、化粧水、ローション、乳液、クリーム、美容液、パック、スクラブ剤などのスキンケア化粧料、ファンデーション、コンシーラー、化粧下地、口紅、頬紅、アイシャドウ、アイライナーなどのメイクアップ化粧料、日焼け止め化粧料などに適用することができる。
本実施形態のGLS1遺伝子阻害剤及び老化細胞除去剤は、食品の分野では、GLS1遺伝子阻害作用及び老化細胞除去作用を有効に発揮できる有効な量のユーグレナ由来物質を食品素材として、各種食品に配合することにより、当該作用を有する食品組成物を提供することができる。すなわち、本発明は、食品の分野において、老化細胞除去用等と表示された食品の食品組成物を提供することができる。当該食品組成物としては、一般の食品のほか、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品、病院患者用食品、サプリメント等が挙げられる。また、食品添加物として用いることもできる。
本実施形態のGLS1遺伝子阻害剤及び老化細胞除去剤は、医薬の分野では、GLS1遺伝子阻害作用及び老化細胞除去作用を有効に発揮できる量のユーグレナ由来物質と共に、薬学的に許容される担体や添加剤を配合することにより、当該作用を有する医薬組成物が提供される。当該医薬組成物は、医薬品であっても医薬部外品であってもよい。
ユーグレナ由来物質として、ユーグレナ・グラシリスの細胞を蛋白質酵素分解して抽出される水溶性成分である加水分解ユーグレナエキスを用いた。加水分解ユーグレナエキスは、ユーグレナ・グラシリス粉末(ユーグレナ藻体、(株)ユーグレナ製)1gにその100倍量の精製水を加え、圧力0.1MPa、温度12℃に加熱して10分間の加熱加圧処理をした。その後、エンド型プロテアーゼのタンパク質分解酵素(例えば、ヤクルト薬品工業社製:パンチダーゼMP)を全量の5%添加し、35℃、16時間、攪拌反応させた。反応後、濾紙を用いて濾過することで水溶性成分を分取した。得られた水溶性成分を0.45μmフィルター滅菌したサンプルを、加水分解ユーグレナエキス原液100%とした。
ユーグレナ由来物質として、ユーグレナ抽出物を用いた。ユーグレナ抽出物は、原料としてユーグレナ・グラシリス粉末(ユーグレナ藻体、(株)ユーグレナ製)を用い、溶媒として1,3-ブチレングリコール(BG)を用いて調製した。
試験1では、加水分解ユーグレナエキス(実施例1)による皮膚表皮細胞の遺伝子に与える影響を評価した。
正常ヒト表皮細胞(3.0×104 cells/well)をHuMedia-KG2培地を用いて12ウェルプレートに播種した。次に、加水分解ユーグレナエキスをHuMedia-KB2培地(非増殖培地)に溶解させ、培地を交換した。培地を交換した後、24時間培養して、培養上清を除去して細胞をRNAiso Plusを用いてtotal RNAを単離したあと、NucleoSpin(登録商標)RNAを用いて精製した。RNAライブラリーの構築およびシークエンスは、TruSeq Stranded mRNA Library Prep KitおよびNovaSeq 6000 (Illumina Inc, USA)を用いて行った。本試験では(n=1)、FPKM値を算出して、|logFC|>0.5の遺伝子を変動遺伝子とした。
加水分解ユーグレナエキスによるヒト表皮角化細胞の遺伝子変化を、次世代シーケンサーを用いて網羅的に解析した結果、全57,643遺伝子のうち、14,586遺伝子で十分なリード数が確保できた。加水分解ユーグレナエキスを5%添加したとき、1,145遺伝子(46.8%)が減少し、1,308遺伝子(53.2%)が増加した。GLS1遺伝子について、その発現量は、コントロールでは198.515であり、加水分解ユーグレナエキスを添加した場合127.003であった。
試験2では、加水分解ユーグレナエキス(実施例1)及びユーグレナ抽出物(実施例2)が長寿関連遺伝子(GLS1)に与える影響を評価した。
正常ヒト表皮細胞(3.0×104 cells/well)をHuMedia-KG2培地を用いて12ウェルプレートに播種した。次に、加水分解ユーグレナエキス(実施例1)、またはユーグレナ抽出物(実施例2)をHuMedia-KB2培地(非増殖培地)に溶解させ、培地を交換した。培地を交換した後、24時間培養して、培養上清を除去して細胞をRNAiso Plusを用いてtotal RNAを単離した。RNAを逆転写してcDNAを合成し、リアルタイムPCRにより遺伝子発現量を評価した。
図1に、ヒト表皮角化細胞において、ユーグレナ由来物質によるGSL1遺伝子に対する影響を検討した結果を示す。加水分解ユーグレナエキス(実施例1)を添加したとき、GLS1遺伝子の発現量が低値であった。ユーグレナ抽出物(実施例2)を添加したとき、GLS1遺伝子の発現量が有意に低下した。
Claims (4)
- ユーグレナ由来物質を有効成分として含有し、皮膚におけるGLS1遺伝子の発現を阻害するために用いられ、
前記ユーグレナ由来物質が、ユーグレナ水性溶媒抽出物又はユーグレナ属に属する藻類の細胞を蛋白質酵素分解して抽出される水溶性成分であり、
経皮的に適用されることを特徴とするGLS1遺伝子阻害用化粧料組成物。 - ユーグレナ由来物質を有効成分として含有し、皮膚におけるGLS1遺伝子の発現を阻害するために用いられ、
前記ユーグレナ由来物質が、ユーグレナ水性溶媒抽出物又はユーグレナ属に属する藻類の細胞を蛋白質酵素分解して抽出される水溶性成分であり、
経皮的に適用されることを特徴とするGLS1遺伝子阻害剤。 - ユーグレナ由来物質を有効成分として含有し、皮膚の老化細胞を除去するために用いられ、
前記ユーグレナ由来物質が、ユーグレナ水性溶媒抽出物又はユーグレナ属に属する藻類の細胞を蛋白質酵素分解して抽出される水溶性成分であり、
経皮的に適用されることを特徴とする老化細胞除去用化粧料組成物。 - ユーグレナ由来物質を有効成分として含有し、皮膚の老化細胞を除去するために用いられ、
前記ユーグレナ由来物質が、ユーグレナ水性溶媒抽出物又はユーグレナ属に属する藻類の細胞を蛋白質酵素分解して抽出される水溶性成分であり、
経皮的に適用されることを特徴とする老化細胞除去剤。
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