JP6982297B2 - 肥満防止剤 - Google Patents
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Description
従来、例えば、特許文献1には、UCPの中で代表的なUCP1の遺伝子の発現を調整する技術として、ピセアタンノール(Piceatannol)を含むUCP1遺伝子発現増強剤が開示されている。
本発明はかかる事情に鑑みてなされたものであり、エネルギー代謝を活性化させ得る肥満防止剤を提供することを課題とする。
本実施形態において、化合物は、下記の式(III)又は(IV)で表されるものが好ましい。
本実施形態の肥満防止剤は、食品、医薬部外品、医薬品に含有されてもよい。
本実施形態の肥満防止剤を含有する化粧品及び医薬部外品の剤形は限定されるものではないが、例えば、カプセル剤、錠剤、散剤、顆粒剤、液剤、等が挙げられる。
ノルアドレナリンは、褐色脂肪細胞のβ3受容体に結合し、そのシグナル伝達系を活性化することによってUCP1遺伝子を活性化し、熱産生を増加させることが知られている物質である(例えば、WO2005/042508号公報)。ノルアドレナリンは、以下の被験物質を用いた場合のUCP1遺伝子発現量の参照対象である。被験物質としては、イソビテキシン、及びイソサポナリンを用いた。
維持用培地には、ノルアドレナリン、イソビテキシン、及びイソサポナリンをそれぞれ添加した。これらの培地中の終濃度は、ノルアドレナリンについては1μmol/L、イソビテキシンについては、1mmol/L、100μmol/L、10μmol/L、イソサポナリンについては、1mmol/L、100μmol/L、10μmol/Lとした。
試験に供した褐色脂肪細胞は、ラット由来の初代褐色脂肪細胞キット(コスモ・バイオ株式会社製、コード番号BAT02)に付属する細胞である。上記の増殖用培地を用いて、24ウェルプレートの各ウェルに、3×104cells/ウェルとなるように、褐色脂肪細胞を播種した。二酸化炭素インキュベータ内(5%CO2、37℃、パナソニック ヘルスケア株式会社製、マルチガスインキュベーター、商品番号MCO-19MUVH)で、3日間培養した。次に、各ウェル内の培地を、分化誘導用培地に交換し、二酸化炭素インキュベータ内(5%CO2、37℃)で、2日間培養した。次に、各ウェル内の培地を、上記の維持用培地に交換し、二酸化炭素インキュベータ内(5%CO2、37℃)で、2日間培養した。次に、各ウェル内の培地を、同じく上記の維持用培地に交換し、二酸化炭素インキュベータ内(5%CO2、37℃)で、1日間培養した。その後、以下の遺伝子発現解析及びオイルレッドO染色による評価を行った。
1ウェル当たり0.2mLのTRI Reagent(Molecular Research製造、カタログ番号TR118)を用いて、取扱説明書にしたがって、褐色脂肪細胞からRNAを回収した。各検体RNA500ngを使用して、cDNA合成キット(Super Script<登録商標>VILO<商標>、製品名cDNA Synthesis Kit、Thermo Fisher Scientific製造、カタログ番号11754050)を用いて、cDNA合成を行った。リアルタイムPCRキット(製品名Light Cycler<登録商標> Taqman<登録商標> Master、Roche Applied Science製造、カタログ名4735536)を用いて、取扱説明書にしたがって、リアルタイムPCR(製品名LigthCycler<登録商標> 480 System II、ロシュ・ダイアグノスティックス)を行った。GAPDHを内部標準として、UCP1の遺伝子発現解析を行った。
UCP1のプライマー
フォワードプライマー:gcctgcctagcagacatcat(配列番号1、合成先Sigma-Aldorich)
リバースプライマー:tggccttcaccttggatct(配列番号2、合成先Sigma-Aldorich)
プローブ:Universal Probe Liberty probe #130(ロシュ・ライフサイエンス製)
GAPDHのプライマー
フォワードプライマー:aatgtatccgttgtggatctga(配列番号3、合成先Sigma-Aldorich)
リバースプライマー:gcttcaccaccttcttgatgt(配列番号4、合成先Sigma-Aldorich)
プローブ:Universal Probe Liberty probe #80(ロシュ・ライフサイエンス製)
実験数は3回とした。
(2)において培養後の細胞中の脂肪滴を、リピットアッセイキット(コスモ・バイオ株式会社製、コード番号AK09F)を用いて、説明書に従って以下の手順で定量した。
37%ホルムアルデヒド液(ホルマリン原液) 100 mL
精製水 900 ml
りん酸2 水素ナトリウム・1 水和物(NaH2PO4・H2O) 4g
りん酸水素2ナトリウム・無水(Na2HPO4) 6.5g
手順2−2.ウェルプレートから培養液を除去した後、1 ウェルあたり500μL のPBS で1回洗浄した。
手順2−4.固定後、1ウェルあたり精製水500μLを用いて各ウェルを洗浄した。
手順2−7.静置後オイルレッドO 液をウェルから除去し、ウェルを、1 ウェルあたり精製水で3 回以上洗浄した。洗浄した精製水が透明になるまでよく洗浄した。
吸光度の相対値は、コントロールの場合の溶出溶液中の脂肪滴の量を100とした場合の、各被験物質を用いた場合の溶出溶液中の脂肪滴の相対量に相当する。
Claims (9)
- イソサポナリンからなる肥満防止剤であって、
前記イソサポナリンの濃度が10μM−1mMとなるように対象に投与するための肥満防止剤。 - 前記イソサポナリンの1日当たりの投与量が10μg−100mgとなるように対象に投与するための、請求項1に記載の肥満防止剤。
- イソサポナリンからなり、
UCP1遺伝子(ミトコンドリア脱共役蛋白質1遺伝子)の発現を促進させるために用いられ、前記イソサポナリンの濃度が10μM−1mMとなるように対象に投与するためのUCP1遺伝子発現促進剤。 - 前記イソサポナリンの濃度が100μMとなるように対象に投与するための、請求項3に記載のUCP1遺伝子発現促進剤。
- 前記イソサポナリンの1日当たりの投与量が10μg−100mgとなるように対象に投与するための、請求項3又は4に記載のUCP1遺伝子発現促進剤。
- イソサポナリンからなる代謝活性化剤であって、
前記イソサポナリンの濃度が10μM−1mMとなるように対象に投与するための代謝活性化剤。 - 前記イソサポナリンの濃度が100μMとなるように対象に投与するための、請求項6に記載の代謝活性化剤。
- 前記イソサポナリンの1日当たりの投与量が10μg−100mgとなるように対象に投与するための、請求項6又は7に記載の代謝活性化剤。
- イソビテキシンからなり、
前記イソビテキシンの濃度が10μM−1mMとなるように対象に投与することで前記対象においてUCP1遺伝子発現を促進させるために用いられる、UCP1遺伝子発現促進剤。
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