JP6974409B2 - アンタゴニストの、抗イヌpd−1抗体 - Google Patents
アンタゴニストの、抗イヌpd−1抗体 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6974409B2 JP6974409B2 JP2019182256A JP2019182256A JP6974409B2 JP 6974409 B2 JP6974409 B2 JP 6974409B2 JP 2019182256 A JP2019182256 A JP 2019182256A JP 2019182256 A JP2019182256 A JP 2019182256A JP 6974409 B2 JP6974409 B2 JP 6974409B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- antibody
- canine
- amino acid
- antigen
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 title description 8
- 102100023990 60S ribosomal protein L17 Human genes 0.000 title 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 title 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 claims description 273
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 237
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 178
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 178
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 178
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 177
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 169
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 58
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 37
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 33
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 33
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 20
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 16
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 12
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 102000009058 Death Domain Receptors Human genes 0.000 claims description 4
- 230000034994 death Effects 0.000 claims description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 108
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 103
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 89
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 75
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 68
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 67
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 64
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 57
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 description 56
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 48
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 45
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 42
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 34
- 238000000034 method Methods 0.000 description 31
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 28
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 25
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 25
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 25
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 24
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 24
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 23
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 23
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 22
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 21
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 20
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 20
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 20
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 19
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 19
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 18
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 18
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 17
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 17
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 16
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 16
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 16
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 14
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 13
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 13
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 13
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 13
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 13
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 13
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 11
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 11
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 11
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 10
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 10
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 10
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 10
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 9
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 9
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 9
- 108700030875 Programmed Cell Death 1 Ligand 2 Proteins 0.000 description 9
- 102100024213 Programmed cell death 1 ligand 2 Human genes 0.000 description 9
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 9
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 9
- 230000006870 function Effects 0.000 description 9
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 8
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 8
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical group P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 8
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 8
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 8
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 8
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 8
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 8
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 8
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 8
- 102100039856 Histone H1.1 Human genes 0.000 description 7
- 101001035402 Homo sapiens Histone H1.1 Proteins 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 7
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 7
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 7
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 7
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 7
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 6
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 6
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 6
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 6
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 6
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 6
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 6
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 5
- 230000009827 complement-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 5
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 230000036541 health Effects 0.000 description 5
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 5
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 5
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 5
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 4
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 4
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 4
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 4
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 4
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 4
- 238000010382 chemical cross-linking Methods 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 4
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 4
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 108091008915 immune receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000027596 immune receptors Human genes 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 4
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 4
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 4
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 4
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 4
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101100463133 Caenorhabditis elegans pdl-1 gene Proteins 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 description 3
- 241000401950 Felinae Species 0.000 description 3
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 3
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 3
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 3
- 101100519207 Mus musculus Pdcd1 gene Proteins 0.000 description 3
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 3
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 210000005220 cytoplasmic tail Anatomy 0.000 description 3
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 3
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 238000000816 matrix-assisted laser desorption--ionisation Methods 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 3
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 2
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 2
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 2
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 2
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000611936 Homo sapiens Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 208000023178 Musculoskeletal disease Diseases 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 241000282373 Panthera pardus Species 0.000 description 2
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 2
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 108091007744 Programmed cell death receptors Proteins 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 2
- 230000009464 antigen specific memory response Effects 0.000 description 2
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 2
- 230000002917 arthritic effect Effects 0.000 description 2
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 2
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 2
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 2
- 102000048362 human PDCD1 Human genes 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 2
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 210000001503 joint Anatomy 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 238000002603 single-photon emission computed tomography Methods 0.000 description 2
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 231100001274 therapeutic index Toxicity 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VLEIUWBSEKKKFX-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid Chemical compound OCC(N)(CO)CO.OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O VLEIUWBSEKKKFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HQFLTUZKIRYQSP-UHFFFAOYSA-N 3-ethyl-2h-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC=C2N(CC)CSC2=C1 HQFLTUZKIRYQSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-n-(6-hydrazinyl-6-oxohexyl)pentanamide Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)NCCCCCC(=O)NN)SC[C@@H]21 IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 0.000 description 1
- 241001455214 Acinonyx jubatus Species 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 201000003076 Angiosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 108010083359 Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000006306 Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 241000701412 Baculoviridae Species 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101000599926 Canis lupus familiaris Interferon gamma Proteins 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 101000867232 Escherichia coli Heat-stable enterotoxin II Proteins 0.000 description 1
- 241000282323 Felidae Species 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000001398 Granzyme Human genes 0.000 description 1
- 108060005986 Granzyme Proteins 0.000 description 1
- 208000001258 Hemangiosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 102100029100 Hematopoietic prostaglandin D synthase Human genes 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101000998953 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-2 Proteins 0.000 description 1
- 101001047628 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 2-29 Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- GRRNUXAQVGOGFE-UHFFFAOYSA-N Hygromycin-B Natural products OC1C(NC)CC(N)C(O)C1OC1C2OC3(C(C(O)C(O)C(C(N)CO)O3)O)OC2C(O)C(CO)O1 GRRNUXAQVGOGFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 1
- 102100036887 Immunoglobulin heavy variable 1-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100022949 Immunoglobulin kappa variable 2-29 Human genes 0.000 description 1
- 102000012214 Immunoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010036650 Immunoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-AHCXROLUSA-N Iodine-123 Chemical compound [123I] ZCYVEMRRCGMTRW-AHCXROLUSA-N 0.000 description 1
- 238000012313 Kruskal-Wallis test Methods 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 241000712899 Lymphocytic choriomeningitis mammarenavirus Species 0.000 description 1
- 241000721701 Lynx Species 0.000 description 1
- 101710175625 Maltose/maltodextrin-binding periplasmic protein Proteins 0.000 description 1
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 1
- UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-N Metaphosphoric acid Chemical compound OP(=O)=O UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 101100370002 Mus musculus Tnfsf14 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 241001195348 Nusa Species 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 238000012879 PET imaging Methods 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 241000282320 Panthera leo Species 0.000 description 1
- 241000282372 Panthera onca Species 0.000 description 1
- 241000282376 Panthera tigris Species 0.000 description 1
- 241001147389 Panthera uncia Species 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N Perforine Natural products COC1=C2CCC(O)C(CCC(C)(C)O)(OC)C2=NC2=C1C=CO2 KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 241001313871 Puma Species 0.000 description 1
- 241000282374 Puma concolor Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- GKLVYJBZJHMRIY-OUBTZVSYSA-N Technetium-99 Chemical compound [99Tc] GKLVYJBZJHMRIY-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- 102000002933 Thioredoxin Human genes 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 238000001793 Wilcoxon signed-rank test Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 210000005006 adaptive immune system Anatomy 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001668 ameliorated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 1
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 1
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000009172 cell transfer therapy Methods 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000000546 chi-square test Methods 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000000205 computational method Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N cysteamine Chemical compound NCCS UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000002716 delivery method Methods 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 229910052805 deuterium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 1
- 102000005396 glutamine synthetase Human genes 0.000 description 1
- 108020002326 glutamine synthetase Proteins 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 238000011577 humanized mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- GRRNUXAQVGOGFE-NZSRVPFOSA-N hygromycin B Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NC)C[C@@H](N)[C@H](O)[C@H]1O[C@H]1[C@H]2O[C@@]3([C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](C(N)CO)O3)O)O[C@H]2[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 GRRNUXAQVGOGFE-NZSRVPFOSA-N 0.000 description 1
- 229940097277 hygromycin b Drugs 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 230000003259 immunoinhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 229940055742 indium-111 Drugs 0.000 description 1
- APFVFJFRJDLVQX-AHCXROLUSA-N indium-111 Chemical compound [111In] APFVFJFRJDLVQX-AHCXROLUSA-N 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000008611 intercellular interaction Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007914 intraventricular administration Methods 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000000867 larynx Anatomy 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000006512 mast cell neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000006971 mastocytoma Diseases 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229960003151 mercaptamine Drugs 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 210000004925 microvascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 1
- 101150006061 neur gene Proteins 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000012633 nuclear imaging Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 229960005030 other vaccine in atc Drugs 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 231100000255 pathogenic effect Toxicity 0.000 description 1
- 229930192851 perforin Natural products 0.000 description 1
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- HTYIXCKSEQQCJO-UHFFFAOYSA-N phenaglycodol Chemical compound CC(C)(O)C(C)(O)C1=CC=C(Cl)C=C1 HTYIXCKSEQQCJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002600 positron emission tomography Methods 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 229940070376 protein Drugs 0.000 description 1
- 230000012846 protein folding Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004085 squamous epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000528 statistical test Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229940056501 technetium 99m Drugs 0.000 description 1
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 1
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 108060008226 thioredoxin Proteins 0.000 description 1
- 229940094937 thioredoxin Drugs 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 1
- 230000008427 tissue turnover Effects 0.000 description 1
- 238000003325 tomography Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 1
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical class [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Chemical class 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70521—CD28, CD152
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55516—Proteins; Peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
本出願は、2013年12月20日出願の米国特許仮出願第61/918,946号、
2013年12月20日出願の米国特許仮出願第61/918,847号および2014
年7月30日出願の米国特許仮出願第62/030,812号の優先権を主張するもので
あり、これらすべての内容が全体として参照により本明細書に組み込まれる。
D−1に対するマウス抗体に関する。本発明はまた、イヌの癌の処置における本発明の抗
体の使用に関する。
受容体1(PD−1)とも称されるプログラム細胞死受容体1は、CD28およびCTL
A−4に関連する免疫グロブリンスーパーファミリーの成員である。PD−1および同様
のファミリー成員は、そのリガンドに結合する細胞外Ig可変型(V型)ドメインおよび
シグナル伝達分子に結合する細胞質尾部を含有するI型膜貫通糖タンパク質である。PD
−1の細胞質尾部は2つのチロシンベースのシグナル伝達モチーフ、ITIM(免疫受容
体チロシンベース阻害モチーフ)およびITSM(免疫受容体チロシンベーススイッチモ
チーフ)を含有する。
ガンド1および/またはプログラム死リガンド2(PD−L2)とも称されるプログラム
細胞死リガンド2に結合した場合、T細胞応答を減弱させる。これらのリガンドのいずれ
かのPD−1への結合は抗原受容体シグナル伝達を負に調節する。PD−L1のPD−1
への結合をブロックすることは、免疫系による腫瘍細胞のクリアランスを助けつつ、腫瘍
特異的CD8+T細胞免疫を増強する。マウスPD−1の三次元構造ならびにヒトPD−
L1とマウスPD−1の共結晶構造が報告されている[Zhang et al.,Im
munity 20:337−347(2004);Lin et al.,Proc.
Natl.Acad.Sci.USA 105:3011−3016(2008)]。
域と共に細胞外領域内にIgV様ドメインおよびIgC様ドメインの両方を含むI型膜貫
通リガンドである。PD−L1およびPD−L2はどちらも、構成的に発現されるかまた
は非造血組織ならびに種々の腫瘍型を含む様々な細胞型において誘導され得る。PD−L
1はB細胞、T細胞、骨髄性細胞および樹状細胞(DC)上で発現されるだけでなく、末
梢細胞、例えば微小血管内皮細胞および非リンパ系器官、例えば心臓または肺でも発現さ
れる。これに対し、PD−L2はマクロファージおよびDC上でのみ認められる。PD−
1リガンドの発現パターンは、PD−1が末梢性免疫寛容を維持するうえで役割を果たし
、さらに末梢における自己反応性T細胞およびB細胞応答を調節するのに役立ち得ること
を示唆する。
定のヒト癌において非常に重要な役割を果たすことは今や極めて明らかである。したがっ
て、PD−L1は多くのマウスおよびヒト腫瘍で発現されることが示されており、PD−
L1陰性腫瘍細胞株の大部分ではIFNγによって誘導され得る[Iwai et al
., Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99:12293−122
97(2002);Strome et al.,Cancer Res.,63:65
01−6505(2003)]。さらに、リンパ球に浸潤する腫瘍でのPD−1の発現お
よび/または腫瘍細胞でのPD−L1の発現は、多数の原発性ヒト腫瘍生検において同定
されている。そのような腫瘍組織としては、肺、肝臓、卵巣、子宮頸、皮膚、結腸、神経
膠腫、膀胱、乳房、腎臓、食道、胃、口腔扁平上皮細胞、尿路上皮細胞および膵臓の癌な
らびに頭頸部の腫瘍が含まれる[Brown et al.,J.Immunol.17
0:1257−1266(2003);Dong et al.,Nat.Med.8:
793−800(2002);Wintterle et al.,Cancer Re
s.63:7462−7467(2003);Strome et al.,Cance
r Res.,63:6501−6505(2003);Thompson et al
.,Cancer Res.66:3381−5(2006);Thompson et
al.,Clin.Cancer Res.13:1757−1761(2007);
Nomi et al.,Clin.Cancer Res.13:2151−2157
.(2007)]。より顕著には、腫瘍細胞でのPDリガンドの発現は複数の腫瘍型にわ
たってヒト癌患者の予後不良と相関している[Okazaki and Honjo,I
nt.Immunol.19:813−824(2007)において総説されている]。
−2157.(2007)]は、PD−1またはPD−L1に対する抗体を投与すること
を介して、侵襲性膵癌のマウスモデルにおいてPD−L1のPD−1への結合をブロック
することの治療効果を明らかにした。これらの抗体は、腫瘍反応性CD8+T細胞の腫瘍
への浸潤を有効に促進し、IFNγ、グランザイムBおよびパーフォリンを含む抗腫瘍エ
フェクターの上方調節を生じさせた。同様に、PD−L1およびPD−1の結合をブロッ
クする抗体の使用は、マウス扁平上皮癌のモデルにおいて腫瘍増殖を有意に阻害した[T
sushima et al.,Oral Oncol.42:268−274(200
6)]。
瘍特異的CTLクローンと共培養した場合、腫瘍細胞の溶解の減少をもたらした。抗PD
−L1モノクローナル抗体を添加した場合、溶解が回復した[Iwai et al.,
Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99:12293−12297(
2002)]。インビボでは、PD−1/PD−L1相互作用をブロックすることは、マ
ウス腫瘍モデルにおいて養子T細胞移入療法の効果を増大させることが示された[Str
ome et al.,Cancer Res.63:6501−6505(2003)
]。癌処置におけるPD−1の役割についてのさらなる証拠は、PD−1ノックアウトマ
ウスで実施された実験によってもたらされ、この実験では、PD−L1を発現する骨髄腫
細胞は野生型動物においてのみ増殖し(腫瘍増殖および関連する動物死を生じさせる)、
PD−1欠損マウスでは増殖しなかった[Iwai Y.et al.,Proc.Na
tl.Acad.Sci.U.S.A.99:12293−12297(2002)]。
ごく最近、PD−1に対する抗体(ヒトPD−1に対するヒト化マウスモノクローナル抗
体を含む)が、ヒトでの癌療法において少なくとも初期の成功を示した[例えば米国特許
第8,354,509号、米国特許第8,008,449号および米国特許第7,595
,048号参照]。
染後に生成された記憶CD8+T細胞は高度に機能性であり、防御免疫の重要な成分を構
成する。これに対し、慢性感染はしばしばウイルス特異的T細胞応答の様々な程度の機能
障害(疲弊)を特徴とし、この欠陥が、宿主が残存する病原体を除去できないことの主た
る理由である。機能性エフェクターT細胞は感染の初期段階で最初に生成されるが、慢性
感染の過程でそれらは徐々に機能を喪失する。Barber et al.[Natur
e 439:682−687(2006)]は、LCMVの研究室株に感染させたマウス
が、血液および他の組織中で高レベルのウイルスを生じさせる慢性感染を発症することを
示した。これらのマウスは、最初は堅固なT細胞応答を発現したが、T細胞の疲弊後最終
的には感染に屈した。Barber et al.は、慢性感染マウスにおけるエフェク
ターT細胞の数および機能の低下を、PD−1とPD−L1との間の相互作用をブロック
する抗体を注射することによって逆転させ得ることを見出した。
として使用可能であることの承認と解釈されるべきではない。
L1への結合をブロックする能力を備える抗イヌPD−1抗体に関する。特定の実施形態
では、そのような抗イヌPD−1抗体はマウス抗イヌPD−1抗体である。特定の実施形
態では、抗イヌPD−1抗体はイヌPD−1に高い結合親和性を有し、ならびにイヌPD
−1のイヌPD−L2への結合もブロックする能力を備える。
ーム内に組み込んでイヌ化抗イヌPD−1抗体を形成するこれらのCDRの組合せ(例え
ばマウス抗イヌPD−1抗体から得られる)に関する。本発明はまた、癌などの疾患およ
び/または感染に起因する疾患の処置におけるそのような抗体の使用に関する。
のセットを提供する。7つの例示的なマウス抗イヌPD−1抗体の各々はCDRの独自の
セット、すなわち3つの軽鎖CDR:CDR軽鎖1(CDRL1)、CDR軽鎖2(CD
RL2)およびCDR軽鎖3(CDRL3)ならびに3つの重鎖CDR:CDR重鎖1(
CDRH1)、CDR重鎖2(CDRH2)およびCDR重鎖3(CDRH3)を有する
が、以下で詳述するように、CDRの各群、例えばCDRL1のセット内には実質的な配
列相同性が存在する。それゆえ、本発明は、7つの例示的なマウス抗イヌPD−1抗体か
らの6つのCDRのアミノ酸配列を提供するだけでなく、さらにそれらのCDRの保存的
に修飾された変異体ならびに同じ正準構造を有する(例えば共有する)および/またはイ
ヌPD−1のエピトープに含まれるイヌPD−1の1個またはそれ以上の(例えば1〜4
個またはさらには全部)アミノ酸残基に結合する変異体をさらに提供する。
ノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域1(VL CDR1)、および/または配列番号:1
6、配列番号:17、配列番号:18、配列番号:19、配列番号:20もしくは配列番
号:21のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域2(VL CDR2)、および/また
は配列番号:22、配列番号:23、配列番号:24、配列番号:25もしくは配列番号
:26のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域3(VL CDR3)、および/または
CDRH1が配列番号:27、配列番号:28、配列番号:29もしくは配列番号:30
のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域1(VH CDR1)、および/または配列番
号:31、配列番号:32、配列番号:33、配列番号:34もしくは配列番号:35の
アミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域2(VH CDR2)、および/または配列番号
:36、配列番号:37、配列番号:38もしくは配列番号:114のアミノ酸配列を含
む重鎖相補性決定領域3(VH CDR3)を含有する、イヌプログラム死受容体1(イ
ヌPD−1)に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。特定
の実施形態では、抗体は哺乳動物抗体である。より特定の実施形態では、抗体はイヌ化抗
体である。
、配列番号:28、配列番号:29または配列番号:30のアミノ酸配列を有する重鎖相
補性決定領域1(VH CDR1)の1つまたはそれ以上を含む。別の実施形態では、重
鎖相補性決定領域2(VH CDR2)は、配列番号:31、配列番号:32、配列番号
:33、配列番号:34または配列番号:35のアミノ酸配列を含む。さらに別の実施形
態では、重鎖相補性決定領域3(VH CDR3)は、配列番号:36、配列番号:37
、配列番号:38または配列番号:114のアミノ酸配列を含む。この種の特定の実施形
態では、イヌ化抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号:27、配列番号:28、
配列番号:29または配列番号:30のアミノ酸配列を含むVH CDR1および配列番
号:31、配列番号:32、配列番号:33、配列番号:34または配列番号:35のア
ミノ酸配列を含むVH CDR2の両方を含有する。別のそのような実施形態では、イヌ
化抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号:27、配列番号:28、配列番号:2
9または配列番号:30のアミノ酸配列を含むVH CDR1および配列番号:36、配
列番号:37、配列番号:38または配列番号:114のアミノ酸配列を含むVH CD
R3の両方を含有する。さらに別のそのような実施形態では、イヌ化抗体または抗原結合
フラグメントは、配列番号:31、配列番号:32、配列番号:33、配列番号:34ま
たは配列番号:35のアミノ酸配列を含むVH CDR2および配列番号:36、配列番
号:37、配列番号:38または配列番号:114のアミノ酸配列を含むVH CDR3
の両方を含有する。さらに別のそのような実施形態では、イヌ化抗体または抗原結合フラ
グメントは、配列番号:27、配列番号:28、配列番号:29または配列番号:30の
アミノ酸配列を含むVH CDR1、配列番号:31、配列番号:32、配列番号:33
、配列番号:34または配列番号:35のアミノ酸配列を含むVH CDR2および配列
番号:36、配列番号:37、配列番号:38または配列番号:114のアミノ酸配列を
含むVH CDR3を含有する。
列番号:14または配列番号:15のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域1(VL
CDR1)も含有する。関連実施形態では、軽鎖相補性決定領域2(VL CDR2)は
、配列番号:16、配列番号:17、配列番号:18、配列番号:19、配列番号:20
または配列番号:21のアミノ酸配列を含む。さらに別の実施形態では、軽鎖相補性決定
領域3(VL CDR3)は、配列番号:22、配列番号:23、配列番号:24、配列
番号:25または配列番号:26のアミノ酸配列を含む。この種の特定の実施形態では、
イヌ化抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号:13、配列番号:14または配列
番号:15のアミノ酸配列を含むVL CDR1および配列番号:16、配列番号:17
、配列番号:18、配列番号:19、配列番号:20または配列番号:21のアミノ酸配
列を含むVL CDR2の両方を含有する。
13、配列番号:14または配列番号:15のアミノ酸配列を含むVL CDR1および
配列番号:22、配列番号:23、配列番号:24、配列番号:25または配列番号:2
6のアミノ酸配列を含むVL CDR3の両方を含有する。さらに別のそのような実施形
態では、イヌ化抗体または抗原結合フラグメントは、配列番号:16、配列番号:17、
配列番号:18、配列番号:19、配列番号:20または配列番号:21のアミノ酸配列
を含むVL CDR2および配列番号:22、配列番号:23、配列番号:24、配列番
号:25または配列番号:26のアミノ酸配列を含むVL CDR3の両方を含有する。
さらに他のそのような実施形態では、イヌ化抗体または抗原結合フラグメントは、配列番
号:13、配列番号:14または配列番号:15のアミノ酸配列を含むVL CDR1、
配列番号:16、配列番号:17、配列番号:18、配列番号:19、配列番号:20ま
たは配列番号:21のアミノ酸配列を含むVL CDR2および配列番号:22、配列番
号:23、配列番号:24、配列番号:25または配列番号:26のアミノ酸配列を含む
VL CDR3を含有する。
鎖のCDR1、CDR2およびCDR3に関してそれぞれH1−1、H2−1およびH3
−6の正準構造を有する、すなわち重鎖のCDR1が正準構造クラス1を有し、重鎖のC
DR2が正準構造クラス1を有し、および重鎖のCDR3が正準構造クラス6を有するC
DRをさらに含有する。さらにより特定の実施形態では、対応する軽鎖についてのCDR
は、軽鎖のCDR1、CDR2およびCDR3に関してそれぞれL1−3、L2−1およ
びL3−1の正準構造を有する。他の実施形態では、イヌ化抗イヌPD−1抗体は、相補
性決定領域(CDR)が、重鎖のCDR1、CDR2およびCDR3に関してそれぞれH
1−1、H2−1およびH3−11の正準構造を有するCDRをさらに含有する。この種
のさらにより特定の実施形態では、対応する軽鎖についてのCDRは、軽鎖のCDR1、
CDR2およびCDR3に関してそれぞれL1−2A、L2−1およびL3−1の正準構
造を有する。さらに他の実施形態では、イヌ化抗イヌPD−1抗体は、相補性決定領域(
CDR)が、重鎖のCDR1、CDR2およびCDR3に関してそれぞれH1−1、H2
−2AおよびH3−11の正準構造を有するCDRをさらに含有する。この種のさらによ
り特定の実施形態では、対応する軽鎖についてのCDRは、軽鎖のCDR1、CDR2お
よびCDR3に関してそれぞれL1−2A、L2−1およびL3−1の正準構造を有する
。さらに他の実施形態では、イヌ化抗イヌPD−1抗体は、相補性決定領域(CDR)が
、重鎖のCDR1、CDR2およびCDR3に関してそれぞれH1−1、H2−2Aおよ
びH3−13の正準構造を有するCDRをさらに含有する。この種のさらにより特定の実
施形態では、対応する軽鎖についてのCDRは、軽鎖のCDR1、CDR2およびCDR
3に関してそれぞれL1−4、L2−1およびL3−1の正準構造を有する。
103のアミノ酸配列に結合する本発明のCDRの変異体を含有する、イヌPD−1に対
する抗体、例えばモノクローナル抗体を提供する。この種の特定の実施形態では、抗体−
イヌPD−1結合についての解離定数(Kd)は1×10−5Mから1×10−12Mで
ある。より特定の実施形態では、イヌPD−1に対する抗体は、本明細書で提供される対
応する正準構造を有し、および配列番号:104のアミノ酸配列に結合する本発明のCD
Rの変異体を含有する。
1(PD−1)に特異的に結合する単離されたイヌ化抗体またはその抗原結合フラグメン
トも提供する。この種の特定の実施形態では、3つの軽鎖相補性決定領域(CDR):C
DR軽鎖1(CDRL1)、CDR軽鎖2(CDRL2)およびCDR軽鎖3(CDRL
3)を含むイヌκまたはλ軽鎖;ならびに3つの重鎖CDR:CDR重鎖1(CDRH1
)、CDR重鎖2(CDRH2)およびCDR重鎖3(CDRH3)を含むイヌIgG重
鎖が、マウス抗イヌPD−1抗体から得られる。本発明のイヌ化抗体およびその抗原結合
フラグメントの特定の実施形態は、イヌPD−1に結合するおよび/またはイヌPD−1
のイヌプログラム死リガンド1(PD−L1)への結合をブロックする。
1(CDRL1)、CDR軽鎖2(CDRL2)およびCDR軽鎖3(CDRL3);な
らびに3つの重鎖CDR:CDR重鎖1(CDRH1)、CDR重鎖2(CDRH2)お
よびCDR重鎖3(CDRH3)を含有する、イヌプログラム死受容体1(イヌPD−1
)に特異的に結合する単離された哺乳動物抗体またはその抗原結合フラグメントを提供す
る。ある実施形態では、CDRL1は、配列番号:13、配列番号:13の変異体、配列
番号:13の保存的に修飾された変異体、3の正準構造クラスを構成する配列番号:13
の変異体、配列番号:15、配列番号:15の変異体、配列番号:15の保存的に修飾さ
れた変異体、または2Aの正準構造クラスを構成する配列番号:15の変異体のアミノ酸
配列を含有し、CDRL2は、配列番号:16、配列番号:16の変異体、配列番号:1
6の保存的に修飾された変異体、1の正準構造クラスを構成する配列番号:16の変異体
、配列番号:18、配列番号:18の変異体、配列番号:18の保存的に修飾された変異
体、1の正準構造クラスを構成する配列番号:18の変異体、配列番号:19、配列番号
:19の変異体、配列番号:19の保存的に修飾された変異体、1の正準構造クラスを構
成する配列番号:19の変異体、配列番号:20、配列番号:20の変異体、配列番号:
20の保存的に修飾された変異体、1の正準構造クラスを構成する配列番号:20の変異
体、配列番号:21、配列番号:21の変異体、配列番号:21の保存的に修飾された変
異体、または1の正準構造クラスを構成する配列番号:21の変異体のアミノ酸配列を含
有し、CDRL3は、配列番号:22、配列番号:22の変異体、配列番号:22の保存
的に修飾された変異体、1の正準構造クラスを構成する配列番号:22の変異体、配列番
号:24、配列番号:24の変異体、配列番号:24の保存的に修飾された変異体、1の
正準構造クラスを構成する配列番号:24の変異体、配列番号:25、配列番号:25の
変異体、配列番号:25の保存的に修飾された変異体、1の正準構造クラスを構成する配
列番号:25の変異体、配列番号:26、配列番号:26の変異体、配列番号:26の保
存的に修飾された変異体、または1の正準構造クラスを構成する配列番号:26の変異体
のアミノ酸配列を含有し、CDRH1は、配列番号:27、配列番号:27の変異体、配
列番号:27の保存的に修飾された変異体、1の正準構造クラスを構成する配列番号:2
7の変異体、配列番号:29、配列番号:29の変異体、配列番号:29の保存的に修飾
された変異体、1の正準構造クラスを構成する配列番号:29の変異体、配列番号:30
、配列番号:30の変異体、配列番号:30の保存的に修飾された変異体、または1の正
準構造クラスを構成する配列番号:30の変異体のアミノ酸配列を含有し、CDRH2は
、配列番号:31、配列番号:31の変異体、配列番号:31の保存的に修飾された変異
体、1の正準構造クラスを構成する配列番号:31の変異体、配列番号:33、配列番号
:33の変異体、配列番号:33の保存的に修飾された変異体、2Aの正準構造クラスを
構成する配列番号:33の変異体、配列番号:34、配列番号:34の変異体、配列番号
:34の保存的に修飾された変異体、1の正準構造クラスを構成する配列番号:34の変
異体、配列番号:35、配列番号:35の変異体、配列番号:35の保存的に修飾された
変異体、または1の正準構造クラスを構成する配列番号:35の変異体のアミノ酸配列を
含有し、CDRH3は、配列番号:36、配列番号:36の変異体、配列番号:36の保
存的に修飾された変異体、6の正準構造クラスを構成する配列番号:35の変異体、配列
番号:38、配列番号:38の変異体、配列番号:38の保存的に修飾された変異体、ま
たは11の正準構造クラスを構成する配列番号:38の変異体、配列番号:114、配列
番号:114の変異体、配列番号:114の保存的に修飾された変異体、または11の正
準構造クラスを構成する配列番号:114の変異体のアミノ酸配列を含有する。特定の実
施形態では、抗体およびその抗原結合フラグメントはイヌPD−1に結合し、およびイヌ
PD−1のイヌプログラム死リガンド1(PD−L1)への結合をブロックする。関連実
施形態では、抗体はまた、イヌPD−1のイヌプログラム死リガンド2(PD−L2)へ
の結合もブロックする。特定の実施形態では、単離された哺乳動物抗体はイヌ化抗体であ
る。より特定の実施形態では、イヌPD−1に結合する場合、抗体またはその抗原結合フ
ラグメントは、配列番号:83、配列番号:84、配列番号:99、配列番号:100、
配列番号:101、配列番号:102、配列番号:103および/または配列番号:10
4の1またはそれ以上のアミノ酸配列内の少なくとも1個のアミノ酸残基に結合する。
号:13の保存的に修飾された変異体、または3の正準構造クラスを構成する配列番号:
13の変異体のアミノ酸配列を含有し、CDRL2は、配列番号:16、配列番号:16
の変異体、配列番号:16の保存的に修飾された変異体、または1の正準構造クラスを構
成する配列番号:16の変異体のアミノ酸配列を含有し、CDRL3は、配列番号:22
、配列番号:22の変異体、配列番号:22の保存的に修飾された変異体、または1の正
準構造クラスを構成する配列番号:22の変異体のアミノ酸配列を含有し、CDRH1は
、配列番号:27、配列番号:27の変異体、配列番号:27の保存的に修飾された変異
体、または1の正準構造クラスを構成する配列番号:27の変異体のアミノ酸配列を含有
し、CDRH2は、配列番号:31、配列番号:31の変異体、配列番号:31の保存的
に修飾された変異体、および1の正準構造クラスを構成する配列番号:31の変異体のア
ミノ酸配列を含有し、CDRH3は、配列番号:36、配列番号:36の変異体、配列番
号:36の保存的に修飾された変異体、または6の正準構造クラスを構成する配列番号:
36の変異体のアミノ酸配列を含有する。特定の実施形態では、イヌPD−1に結合する
場合、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号:83、配列番号:84、配列
番号:99、配列番号:100、配列番号:101、配列番号:102、配列番号:10
3および/または配列番号:104の1またはそれ以上のアミノ酸配列内の少なくとも1
個のアミノ酸残基に結合する。より特定の実施形態では、イヌPD−1に結合する場合、
抗体またはその抗原結合フラグメントは配列番号:102内の少なくとも1個のアミノ酸
残基に結合する。
配列番号:13の保存的に修飾された変異体、または3の正準構造クラスを構成する配列
番号:13の変異体のアミノ酸配列を含有し、CDRL2は、配列番号:19、配列番号
:19の変異体、配列番号:19の保存的に修飾された変異体、または1の正準構造クラ
スを構成する配列番号:19の変異体のアミノ酸配列を含有し、CDRL3は、配列番号
:25、配列番号:25の変異体、配列番号:25の保存的に修飾された変異体、または
1の正準構造クラスを構成する配列番号:25の変異体のアミノ酸配列を含有し、CDR
H1は、配列番号:27、配列番号:27の変異体、配列番号:27の保存的に修飾され
た変異体、または1の正準構造クラスを構成する配列番号:27の変異体のアミノ酸配列
を含有し、CDRH2は、配列番号:31、配列番号:31の変異体、配列番号:31の
保存的に修飾された変異体、および1の正準構造クラスを構成する配列番号:31の変異
体のアミノ酸配列を含有し、CDRH3は、配列番号:36、配列番号:36の変異体、
配列番号:36の保存的に修飾された変異体、または6の正準構造クラスを構成する配列
番号:36の変異体のアミノ酸配列を含有する。特定の実施形態では、イヌPD−1に結
合する場合、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号:83、配列番号:84
、配列番号:99、配列番号:100、配列番号:101、配列番号:102、配列番号
:103および/または配列番号:104の1またはそれ以上のアミノ酸配列内の少なく
とも1個のアミノ酸残基に結合する。より具体的な実施形態では、イヌPD−1に結合す
る場合、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号:2のアミノ酸残基R75お
よびR90の一方または両方に結合する。
配列番号:13の保存的に修飾された変異体、または3の正準構造クラスを構成する配列
番号:13の変異体のアミノ酸配列を含有し、CDRL2は、配列番号:20、配列番号
:20の変異体、配列番号:20の保存的に修飾された変異体、または1の正準構造クラ
スを構成する配列番号:20の変異体のアミノ酸配列を含有し、CDRL3は、配列番号
:25、配列番号:25の変異体、配列番号:25の保存的に修飾された変異体、または
1の正準構造クラスを構成する配列番号:25の変異体のアミノ酸配列を含有し、CDR
H1は、配列番号:27、配列番号:27の変異体、配列番号:27の保存的に修飾され
た変異体、または1の正準構造クラスを構成する配列番号:27の変異体のアミノ酸配列
を含有し、CDRH2は、配列番号:34、配列番号:34の変異体、配列番号:34の
保存的に修飾された変異体、および1の正準構造クラスを構成する配列番号:34の変異
体のアミノ酸配列を含有し、CDRH3は、配列番号:36、配列番号:36の変異体、
配列番号:36の保存的に修飾された変異体、または6の正準構造クラスを構成する配列
番号:36の変異体のアミノ酸配列を含有する。特定の実施形態では、イヌPD−1に結
合する場合、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号:83、配列番号:84
、配列番号:99、配列番号:100、配列番号:101、配列番号:102、配列番号
:103および/または配列番号:104の1またはそれ以上のアミノ酸配列内の少なく
とも1個のアミノ酸残基に結合する。
配列番号:13の保存的に修飾された変異体、または3の正準構造クラスを構成する配列
番号:13の変異体のアミノ酸配列を含有し、CDRL2は、配列番号:16、配列番号
:16の変異体、配列番号:16の保存的に修飾された変異体、または1の正準構造クラ
スを構成する配列番号:16の変異体のアミノ酸配列を含有し、CDRL3は、配列番号
:22、配列番号:22の変異体、配列番号:22の保存的に修飾された変異体、または
1の正準構造クラスを構成する配列番号:22の変異体のアミノ酸配列を含有し、CDR
H1は、配列番号:30、配列番号:30の変異体、配列番号:30の保存的に修飾され
た変異体、または1の正準構造クラスを構成する配列番号:30の変異体のアミノ酸配列
を含有し、CDRH2は、配列番号:31、配列番号:31の変異体、配列番号:31の
保存的に修飾された変異体、および1の正準構造クラスを構成する配列番号:31の変異
体のアミノ酸配列を含有し、CDRH3は、配列番号:36、配列番号:36の変異体、
配列番号:36の保存的に修飾された変異体、または6の正準構造クラスを構成する配列
番号:36の変異体のアミノ酸配列を含有する。特定の実施形態では、イヌPD−1に結
合する場合、抗体は、配列番号:83、配列番号:84、配列番号:99、配列番号:1
00、配列番号:101、配列番号:102、配列番号:103および/または配列番号
:104の1またはそれ以上のアミノ酸配列内の少なくとも1個のアミノ酸残基に結合す
る。
配列番号:15の保存的に修飾された変異体、または2Aの正準構造クラスを構成する配
列番号:15の変異体のアミノ酸配列を含有し、CDRL2は、配列番号:18、配列番
号:18の変異体、配列番号:18の保存的に修飾された変異体、または1の正準構造ク
ラスを構成する配列番号:18の変異体のアミノ酸配列を含有し、CDRL3は、配列番
号:24、配列番号:24の変異体、配列番号:24の保存的に修飾された変異体、また
は1の正準構造クラスを構成する配列番号:24の変異体のアミノ酸配列を含有し、CD
RH1は、配列番号:29、配列番号:29の変異体、配列番号:29の保存的に修飾さ
れた変異体、または1の正準構造クラスを構成する配列番号:29の変異体のアミノ酸配
列を含有し、CDRH2は、配列番号:33、配列番号:33の変異体、配列番号:33
の保存的に修飾された変異体、および1の正準構造クラスを構成する配列番号:33の変
異体のアミノ酸配列を含有し、CDRH3は、配列番号:38、配列番号:38の変異体
、配列番号:38の保存的に修飾された変異体、または11の正準構造クラスを構成する
配列番号:38の変異体のアミノ酸配列を含有する。特定の実施形態では、イヌPD−1
に結合する場合、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号:83、配列番号:
84、配列番号:99、配列番号:100、配列番号:101、配列番号:102、配列
番号:103および/または配列番号:104の1またはそれ以上のアミノ酸配列内の少
なくとも1個のアミノ酸残基に結合する。より特定の実施形態では、イヌPD−1に結合
する場合、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号:84内の少なくとも1個
のアミノ酸残基に結合する。
配列番号:15の保存的に修飾された変異体、または2Aの正準構造クラスを構成する配
列番号:15の変異体のアミノ酸配列を含有し、CDRL2は、配列番号:21、配列番
号:21の変異体、配列番号:21の保存的に修飾された変異体、または1の正準構造ク
ラスを構成する配列番号:21の変異体のアミノ酸配列を含有し、CDRL3は、配列番
号:26、配列番号:26の変異体、配列番号:26の保存的に修飾された変異体、また
は1の正準構造クラスを構成する配列番号:26の変異体のアミノ酸配列を含有し、CD
RH1は、配列番号:29、配列番号:29の変異体、配列番号:29の保存的に修飾さ
れた変異体、または1の正準構造クラスを構成する配列番号:29の変異体のアミノ酸配
列を含有し、CDRH2は、配列番号:35、配列番号:35の変異体、配列番号:35
の保存的に修飾された変異体、および1の正準構造クラスを構成する配列番号:35の変
異体のアミノ酸配列を含有し、CDRH3は、配列番号:114、配列番号:114の変
異体、配列番号:114の保存的に修飾された変異体、または11の正準構造クラスを構
成する配列番号:114の変異体のアミノ酸配列を含有する。特定の実施形態では、イヌ
PD−1に結合する場合、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号:83、配
列番号:84、配列番号:99、配列番号:100、配列番号:101、配列番号:10
2、配列番号:103および/または配列番号:104の1またはそれ以上のアミノ酸配
列内の少なくとも1個のアミノ酸残基に結合する。
配列番号:14の保存的に修飾された変異体、または4の正準構造クラスを構成する配列
番号:14の変異体のアミノ酸配列を含有し、CDRL2は、配列番号:17、配列番号
:17の変異体、配列番号:17の保存的に修飾された変異体、または1の正準構造クラ
スを構成する配列番号:17の変異体のアミノ酸配列を含有し、CDRL3は、配列番号
:23、配列番号:23の変異体、配列番号:23の保存的に修飾された変異体、または
1の正準構造クラスを構成する配列番号:23の変異体のアミノ酸配列を含有し、CDR
H1は、配列番号:28、配列番号:28の変異体、配列番号:28の保存的に修飾され
た変異体、または1の正準構造クラスを構成する配列番号:28の変異体のアミノ酸配列
を含有し、CDRH2は、配列番号:32、配列番号:32の変異体、配列番号:32の
保存的に修飾された変異体、および2Aの正準構造クラスを構成する配列番号:32の変
異体のアミノ酸配列を含有し、CDRH3は、配列番号:37、配列番号:37の変異体
、配列番号:37の保存的に修飾された変異体、または13の正準構造クラスを構成する
配列番号:37の変異体のアミノ酸配列を含有する。特定の実施形態では、イヌPD−1
に結合する場合、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号:83、配列番号:
84、配列番号:99、配列番号:100、配列番号:101、配列番号:102、配列
番号:103および/または配列番号:104の1またはそれ以上のアミノ酸配列内の少
なくとも1個のアミノ酸残基に結合する。より特定の実施形態では、イヌPD−1に結合
する場合、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号:83、配列番号:84お
よび/または配列番号:100内の少なくとも1個のアミノ酸残基に結合する。より具体
的な実施形態では、イヌPD−1に結合する場合、抗体またはその抗原結合フラグメント
は、次のアルギニン残基:配列番号:2のR62、R69、R72およびR75の1また
はそれ以上のアミノ酸残基に結合する。
その抗原結合フラグメントであって、それらがイヌPD−1に結合する場合、抗体が配列
番号:103内の少なくとも1個のアミノ酸残基に結合する、抗体およびその抗原結合フ
ラグメントを包含する。この種の特定の実施形態では、抗体およびその抗原結合フラグメ
ントは、イヌPD−1に結合し、およびイヌPD−1のイヌプログラム死リガンド1(P
D−L1)への結合をブロックする。より特定の実施形態では、抗体およびその抗原結合
フラグメントは、イヌPD−1に結合し、およびまたイヌPD−1のイヌプログラム死リ
ガンド2(PD−L2)への結合もブロックする。
以上の変異体CDR、例えば保存的に修飾された変異体および/または定義された正準構
造クラスを構成する変異体を包含する変異体)は、配列番号:83、配列番号:84、配
列番号:99、配列番号:100、配列番号:101、配列番号:102および/または
配列番号:104の1またはそれ以上のアミノ酸配列内の少なくとも1個のアミノ酸残基
に結合する。さらにより特定の実施形態では、イヌPD−1に結合する場合、抗体または
その抗原結合フラグメントは、次のアルギニン残基:配列番号:2のR62、R69、R
72、R75およびR90の1またはそれ以上のアミノ酸残基に結合する。具体的な実施
形態では、イヌPD−1に結合する場合、抗体またはその抗原結合フラグメントは配列番
号:104内の少なくとも1個のアミノ酸残基に結合する。より具体的な実施形態では、
イヌPD−1に結合する場合、抗体またはその抗原結合フラグメントは、次のアルギニン
残基:配列番号:2のR62、R69、R72およびR75の1またはそれ以上のアミノ
酸残基に結合する。さらにより具体的な実施形態では、イヌPD−1に結合する場合、抗
体またはその抗原結合フラグメントは配列番号:2のR75に結合する。
定数(Kd)でイヌPD−1に結合する哺乳動物抗体またはその抗原結合フラグメントを
さらに提供する。特定の実施形態では、哺乳動物抗体またはその抗原結合フラグメントは
、1×10−5Mから1×10−12Mの解離定数でイヌPD−1に結合する。より特定
の実施形態では、哺乳動物抗体またはその抗原結合フラグメントは、1×10−7Mから
1×10−11Mの解離定数でイヌPD−1に結合する。さらにより特定の実施形態では
、哺乳動物抗体またはその抗原結合フラグメントは、1×10−8Mから1×10−11
Mの解離定数でイヌPD−1に結合する。さらにより特定の実施形態では、哺乳動物抗体
またはその抗原結合フラグメントは、1×10−8Mから1×10−10Mの解離定数で
イヌPD−1に結合する。
結合する哺乳動物抗体またはその抗原結合フラグメントも提供する。特定の実施形態では
、哺乳動物抗体またはその抗原結合フラグメントは、1×102M−1秒−1から1×1
07M−1秒−1のオン速度でイヌPD−1に結合する。より特定の実施形態では、哺乳
動物抗体またはその抗原結合フラグメントは、1×103M−1秒−1から1×106M
−1秒−1のオン速度でイヌPD−1に結合する。さらにより特定の実施形態では、哺乳
動物抗体またはその抗原結合フラグメントは、1×103M−1秒−1から1×105M
−1秒−1のオン速度でイヌPD−1に結合する。さらにより特定の実施形態では、哺乳
動物抗体またはその抗原結合フラグメントは、1×104M−1秒−1から1×105M
−1秒−1のオン速度でイヌPD−1に結合する。
1に結合する哺乳動物抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。特定の実施形態
では、哺乳動物抗体またはその抗原結合フラグメントは、1×10−3秒−1から1×1
0−8秒−1のオフ速度でイヌPD−1に結合する。より特定の実施形態では、哺乳動物
抗体またはその抗原結合フラグメントは、1×10−4秒−1から1×10−7秒−1の
オフ速度でイヌPD−1に結合する。さらにより特定の実施形態では、哺乳動物抗体また
はその抗原結合フラグメントは、1×10−5秒−1から1×10−7秒−1のオフ速度
でイヌPD−1に結合する。
体に対する抗原特異的記憶応答を刺激する。特定の実施形態では、哺乳動物抗体またはそ
の抗原結合フラグメントはインビボで抗体応答を刺激する。他の特定の実施形態では、哺
乳動物抗体またはその抗原結合フラグメントは、動物被験体における免疫応答を刺激する
。より具体的な実施形態では、動物被験体はイヌである。関連実施形態では、動物被験体
はネコである。
性、すなわちイヌPD−1との前記解離定数、イヌPD−1との結合に関する前記オン速
度、抗体−イヌPD−1結合複合体から解離するための前記オフ速度、腫瘍または病原体
に対する抗原特異的記憶応答の刺激、インビボでの抗体応答の刺激、および/または動物
被験体における免疫応答の刺激を示すことができる。
体(およびその抗原結合フラグメント)は、モノクローナル抗体(およびその抗原結合フ
ラグメント)、哺乳動物抗体(およびその抗原結合フラグメント)、例えばマウス抗体(
およびその抗原結合フラグメント)、イヌ化マウス抗体(およびその抗原結合フラグメン
ト)を含むイヌ化抗体(およびその抗原結合フラグメント)であり得、ある実施形態では
、抗体(およびその抗原結合フラグメント)は単離されている。
れた核酸を含む)を提供する。同様に、本発明は、本発明のイヌ化抗体の重鎖のいずれか
1つをコードする単離された核酸を提供する。具体的なヌクレオチド配列の例を本明細書
で提供する。
る発現ベクターを提供する。本発明はさらに、本発明の1またはそれ以上の発現ベクター
を含有する宿主細胞を提供する。
連実施形態では、可変重鎖ドメインおよび可変軽鎖ドメインは、柔軟なリンカーによって
連結されて一本鎖抗体を形成する。
他の実施形態では、抗体または抗原結合フラグメントはFab’フラグメントである。他
の実施形態では、抗体または抗原結合フラグメントは(Fab’)2フラグメントである
。さらに他の実施形態では、抗体または抗原結合フラグメントはダイアボディである。特
定の実施形態では、抗体または抗原結合フラグメントはドメイン抗体である。特定の実施
形態では、抗体または抗原結合フラグメントはラクダ化単一ドメイン抗体である。
、処置されるイヌ被験体の免疫応答を増大させる。
れた核酸を提供する。関連実施形態では、そのような抗体または抗原結合フラグメントは
、イヌ被験体における癌を処置する薬剤の調製のために使用することができる。あるいは
または合わせて、本発明は、診断用途のための本発明の抗体または抗体フラグメントのい
ずれかの使用を提供する。さらに付加的な実施形態では、本明細書で開示されるイヌ化抗
体または抗原結合フラグメントのいずれかを含有するキットが提供される。
合フラグメントのいずれかをコードする単離された核酸を含有する発現ベクターが提供さ
れる。本発明はまた、本明細書で述べる発現ベクターのいずれかを含有する宿主細胞に関
する。特定の実施形態では、本発明のこれらの核酸、発現ベクターまたはポリペプチドは
、抗体を作製する方法において有用である。
番号:84および/または配列番号:99および/または配列番号:100および/また
は配列番号:101および/または配列番号:102および/または配列番号:104の
アミノ酸配列を含有する80個またはそれ未満のアミノ酸残基から成る抗原ペプチド(単
離された抗原ペプチドを含む)を提供する。関連実施形態では、抗原ペプチド(単離され
たペプチドを含む)は、配列番号:103および/または配列番号:83および/または
配列番号:84および/または配列番号:99および/または配列番号:100および/
または配列番号:101および/または配列番号:102および/または配列番号:10
4のアミノ酸配列を含有する60個またはそれ未満のアミノ酸残基から成る。他の実施形
態では、抗原ペプチドは、配列番号:103のアミノ酸配列からの10〜44個のアミノ
酸残基から成る。さらに他の実施形態では、抗原ペプチドは、配列番号:103のアミノ
酸配列からの15〜45個のアミノ酸残基から成る。
番号:84および/または配列番号:99および/または配列番号:100および/また
は配列番号:101および/または配列番号:102および/または配列番号:104と
80%、85%、90%、95%または100%同一であるアミノ酸配列を含有する80
個またはそれ未満のアミノ酸残基から成り、ならびに本発明の単離された哺乳動物抗体ま
たはその抗原結合フラグメントに結合する抗原ペプチド(単離されたペプチドを含む)を
提供する。関連実施形態では、抗原ペプチド(単離された抗原ペプチドを含む)は、配列
番号:103および/または配列番号:83および/または配列番号:84および/また
は配列番号:9および/または配列番号:100および/または配列番号:101および
/または配列番号:102および/または配列番号:104と80%、85%、90%、
95%または100%同一であるアミノ酸配列を含有する60個またはそれ未満のアミノ
酸残基から成り、単離された哺乳動物抗体またはその抗原結合フラグメントに結合する。
他の実施形態では、ペプチドは、配列番号:103および/または配列番号:83および
/または配列番号:84および/または配列番号:99および/または配列番号:100
および/または配列番号:101および/または配列番号:102および/または配列番
号:104と80%、85%、90%、95%または100%同一であるアミノ酸配列か
らの10〜44個のアミノ酸残基から成り、単離された哺乳動物抗体またはその抗原結合
フラグメントに結合する。特定の実施形態では、抗体はIB5である。他の実施形態では
、抗体は3B6である。他の特定の実施形態では、抗体は2H9である。さらに他の実施
形態では、抗体は2G9である。さらに他の実施形態では、抗体は1A1である。さらに
他の実施形態では、抗体は1E4である。
特定の実施形態では、融合タンパク質は、そのような抗原ペプチドおよび非イヌ哺乳動物
IgG抗体のFc領域を含有する。より特定の実施形態では、融合タンパク質は非イヌ哺
乳動物IgG抗体のFc領域を含有する。ある実施形態では、非イヌ哺乳動物IgG抗体
はマウスIgGである。選択的な実施形態では、非イヌ哺乳動物IgG抗体はヒトIgG
である。他の実施形態では、非イヌ哺乳動物IgG抗体はウマIgGである。さらに他の
実施形態では、非イヌ哺乳動物IgG抗体はブタIgGである。さらに他の実施形態では
、非イヌ哺乳動物IgG抗体はウシIgGである。
、非イヌ哺乳動物IgG抗体はIgG2aである。さらに他の実施形態では、非イヌ哺乳
動物IgG抗体はIgG3である。さらに他の実施形態では、非イヌ哺乳動物IgG抗体
はIgG4である。
結合タンパク質を含有する。さらに他の実施形態では、融合タンパク質は、前記抗原ペプ
チドのいずれかおよびβ−ガラクトシダーゼを含有する。さらに他の実施形態では、融合
タンパク質は、前記抗原ペプチドのいずれかおよびグルタチオン−S−トランスフェラー
ゼを含有する。さらに他の実施形態では、融合タンパク質は、前記抗原ペプチドのいずれ
かおよびチオレドキシンを含有する。さらに他の実施形態では、融合タンパク質は、前記
抗原ペプチドのいずれかおよびGro ELを含有する。さらに他の実施形態では、融合
タンパク質は、前記抗原ペプチドのいずれかおよびNusAを含有する。
酸(単離された核酸を含む)を提供する。本発明はまた、これらの核酸を含有する発現ベ
クターも提供する。
ヌPD−1からの抗原ペプチド(単離された抗原ペプチドを含む)、本発明のイヌPD−
1からの抗原ペプチドを含有する融合タンパク質、本発明の抗原性フラグメントおよび/
または融合タンパク質をコードする核酸(単離された核酸を含む)、そのような核酸を含
有する発現ベクター、またはそれらの任意の組合せ、および医薬的に許容される担体また
は希釈剤を含有する医薬組成物を包含する。
体にそのような医薬組成物の治療有効量を投与することを含む方法を提供する。ある実施
形態では、この方法は癌の処置のために使用される。他の実施形態では、この方法は感染
または感染性疾患の処置において使用される。さらに他の実施形態では、本発明のイヌ化
抗体またはその抗原結合フラグメントはワクチンアジュバントとして使用される。
めの形態」を参照することによってより良く理解される。
本発明の「発明を実施するための形態」および「実施例」全体を通して以下の略語を使
用する:
ADCC 抗体依存性細胞傷害
CDC 補体依存性細胞傷害
CDR Kabatナンバリングシステムを用いて定義された、免疫グロブリ
ン可変領域内の相補性決定領域
CHO チャイニーズハムスター卵巣
EC50 50%の効果または結合を生じさせる濃度
ELISA 酵素結合免疫吸着法
FR 抗体フレームワーク領域:CDR領域を除く免疫グロブリン可変領域
HRP ホースラディッシュペルオキシダーゼ
IFN インターフェロン
IC50 50%の阻害を生じさせる濃度
IgG 免疫グロブリンG
Kabat Elvin A.Kabat[Sequences of Prot
eins of Immunological Interest,5th Ed.Pu
blic Health Service,National Institutes
of Health,Bethesda,Md.(1991)]によって開発された免疫
グロブリンアラインメントおよびナンバリングシステム
mAb モノクローナル抗体(MabまたはMAbとも略す)
MES 2−(N−モルホリノ)エタンスルホン酸
MOA 作用機序
NHS 正常ヒト血清
PCR ポリメラーゼ連鎖反応
PK 薬物動態
SEB ブドウ球菌エンテロトキシンB
TT 破傷風トキソイド
V領域 異なる抗体の間で配列が可変であるIgG鎖のセグメント。軽鎖内の
Kabat残基109および重鎖内のKabat残基113までに及ぶ。
VK 免疫グロブリンκ軽鎖可変領域
定義
本発明をより容易に理解し得るように、特定の技術および学術用語を以下で明確に定義
する。本書類の別の箇所で明確に定義されない限り、本明細書で使用される他のすべての
技術および学術用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解される意
味を有する。
よび「the(その)」などの語の単数形は、文脈上そうでないとする明らかな指示がな
い限り、それらの対応する複数の言及を包含する。
り、リガンドによる細胞または受容体の活性化または処置を指す。「リガンド」は、天然
および合成リガンド、例えばサイトカイン、サイトカイン変異体、類似体、ムテインおよ
び抗体由来の結合化合物を包含する。「リガンド」はまた、低分子、例えばサイトカイン
のペプチドミメティックおよび抗体のペプチドミメティックも包含する。「活性化」は、
内部機構によってならびに外部または環境因子によって調節される細胞活性化を指すこと
ができる。
は細胞のシグナル伝達、分化もしくは成熟を刺激する能力、抗原活性、他の分子の活性の
調節等を表し得るもしくは指し得る。分子の「活性」はまた、細胞間相互作用、例えば接
着を調節するもしくは維持するうえでの活性、または細胞の構造、例えば細胞膜もしくは
細胞骨格を維持するうえでの活性も指し得る。「活性」はまた、比活性、例えば[触媒活
性]/[mgタンパク質]または[免疫学的活性]/[mgタンパク質]、生物学的区画
内の濃度等も意味することができる。「活性」は、先天性または適応免疫系の成分の調節
も指し得る。
体液に適用される場合、動物、例えばイヌ被験体、細胞、組織、器官または生体液への外
因性医薬、治療薬、診断薬または組成物の接触を指す。細胞の処置は、細胞への試薬の接
触ならびに液体が細胞と接触している場合はその液体への試薬の接触を包含する。「投与
」および「処置」はまた、試薬、診断薬、結合化合物による、または別の細胞による、例
えば細胞の、インビトロおよびエクスビボ処置も意味する。「被験体」という用語は、任
意の生物、好ましくは動物、より好ましくは哺乳動物(例えばイヌ、ネコまたはヒト)、
最も好ましくはイヌを包含する。
アミノ酸残基の置換」は、別のアミノ酸残基で「アミノ酸残基を置き換えること」に等し
く、アミノ酸配列内の特定の位置の特定のアミノ酸残基が異なるアミノ酸残基によって置
き換えられている(または置換されている)ことを意味する。そのような置換は、個別に
設計することができ、すなわち意図的に、例えば組換えDNA技術によって、アミノ酸配
列内の特定の位置でアラニンをセリンで置き換えることができる。あるいは、抗体の特定
のアミノ酸残基または一連のアミノ酸残基を、より自然な選択過程を通して、例えば細胞
によって産生された抗体がその抗原、例えばエピトープもしくはその部分を含有するもの
の所与の領域に結合する結合する能力に基づいて、および/または抗体が、置換している
CDRと同じ正準構造を保持する特定のCDRを含有するように、1またはそれ以上のア
ミノ酸残基によって置き換えることができる。そのような置換/置き換えは、「変異体」
CDRおよび/または変異体抗体をもたらすことができる。
フラグメントのいずれかを含有する組成物を、1またはそれ以上の疾患症状を有する、ま
たは治療薬が治療活性を有する疾患を保有することが疑われるイヌ被験体または患者に、
内部にまたは外部から投与することを意味する。
度にそのような(1または複数の)症状の後退を誘導するまたは(1または複数の)症状
の進行を阻止することによって、1またはそれ以上の疾患症状を軽減するおよび/または
改善するのに有効な量で投与される。何らかの特定の疾患症状を軽減するのに有効な治療
薬の量(「治療有効量」とも称される)は、疾患の状態、患者(例えばイヌ)の年齢およ
び体重、ならびに被験体において所望の応答を引き出す医薬組成物の能力などの因子によ
って異なり得る。疾患症状が軽減または改善されたかどうかは、その症状の重症度または
進行状態を評価するために獣医(veteranarian)または他の熟達した医療提
供者によって典型的に使用される任意の臨床測定によって評価することができる。本発明
(例えば処置方法または製造の項)の実施形態は、すべての被験体において(1または複
数の)標的疾患症状を軽減するのに有効であるとは限らないかもしれないが、当分野で公
知の任意の統計的検定、例えばスチューデントt検定、カイ二乗検定、マン−ホイットニ
ーのU検定、クラスカル−ウォリス検定(H検定)、ヨンキー−タプストラ検定およびウ
ィルコクソン検定などによって決定される、統計的に有意の数の被験体において(1また
は複数の)標的疾患症状を軽減するはずである。
的処置ならびに研究および診断適用を指す。ヒト、獣医学(例えばイヌ)もしくは研究用
被験体または細胞、組織もしくは器官に適用される「処置」は、イヌまたは他の動物被験
体、細胞、組織、生理学的区画または生理学的流体への本発明の抗体または抗原結合フラ
グメントの接触を包含する。
家庭イヌ、イエイヌ(Canis lupus familiaris)またはイヌ科イ
ヌ属(Canis familiaris)を包含する。
の成員を指す。この科の成員としては、野生、動物園および家畜成員、例えばネコ亜科(
Felinae)の任意の成員、例えばネコ、ライオン、トラ、ピューマ、ジャガー、ヒ
ョウ、ユキヒョウ、クロヒョウ、北米山岳ライオン、チータ、オオヤマネコ、ボブキャッ
ト、カラカルまたはそれらの任意の交雑種が含まれる。ネコにはまた、家庭ネコ、純血種
および/または雑種コンパニオンネコ、ショーキャット、実験用ネコ、クローンネコなら
びに野生または野良ネコも含まれる。
して定義される超可変領域残基以外のイヌ抗体の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列を指す。
イヌ化抗体に関して、大部分の実施形態では、天然イヌCDRのアミノ酸配列は、両方の
鎖において対応する異種CDR(例えばマウス抗体由来のもの)で置き換えられている。
イヌ抗体の重鎖および/または軽鎖は、例えば、以下で例示するように、イヌ抗体内の異
種CDRの立体配座を保存するためおよび/またはFc機能を改変するために、いくつか
の異種非CDR残基を含有していてもよい。
的な実施形態では、イヌPD−1は、配列番号:1のヌクレオチド配列を含有する核酸に
よってコードされる。イヌPD−1配列は、例えば非保存領域内に保存された変異を有す
ることによって異なり得るが、このイヌPD−1は、実質的に配列番号:2のアミノ酸配
列を含有するイヌPD−1と同じ生物学的機能を有する。例えば、PD−1の生物学的機
能は、PD−L1および/またはPD−L2に結合した場合にT細胞応答を減弱させるこ
とである。すなわち、PD−1は負の調節因子と見なし得る。特に、PD−1の細胞質尾
部は、2つのチロシンベースのシグナル伝達モチーフ、ITIM(免疫受容体チロシンベ
ース阻害モチーフ)およびITSM(免疫受容体チロシンベーススイッチモチーフ)を含
有する。加えて、イヌPD−1の生物学的機能は、例えば本開示の抗体によって特異的に
結合される細胞外ドメイン内にエピトープを有することであり得る。
体的な実施形態では、イヌPD−L1は、配列番号:7を含有するヌクレオチド配列によ
ってコードされる。イヌPD−L1配列は、例えば非保存領域内に保存された変異を有す
ることによって異なり得るが、このイヌPD−L1は、実質的に配列番号:8のアミノ酸
配列を含有するイヌPD−L1と同じ生物学的機能を有する。例えば、PD−L1の1つ
の生物学的機能は、PD−1に結合した場合にT細胞応答を減弱させることである。
のアミノ酸配列を含有するイヌPD−1または配列番号:8のアミノ酸配列を含有するイ
ヌPD−L1とそれぞれ少なくとも90%同一である。ある場合には、イヌPD−1また
はPD−L1はそれぞれ、配列番号:2のアミノ酸配列を含有するイヌPD−1または配
列番号:8のアミノ酸配列を含有するイヌPD−L1とそれぞれ少なくとも95%、また
はさらには少なくとも96%、97%、98%または99%同一であり得る。ある実施形
態では、イヌPD−1またはPD−L1アミノ酸配列はそれぞれ、配列番号:2のアミノ
酸配列を含有するイヌPD−1または配列番号:8のアミノ酸配列を含有するイヌPD−
L1と、それぞれせいぜい10個のアミノ酸相違しか示さない。ある実施形態では、イヌ
PD−1またはPD−L1アミノ酸配列はそれぞれ、配列番号:2のアミノ酸配列を含有
するイヌPD−1または配列番号:8のアミノ酸配列を含有するイヌPD−L1と、それ
ぞれせいぜい5個、またはさらには4、3、2もしくは1個のアミノ酸相違だけを示し得
る。同一性パーセントは、本明細書中以下で述べるように決定することができる。
は侵入病原体の哺乳動物身体(例えばイヌ身体)への選択的損傷、その破壊または哺乳動
物身体(例えばイヌ身体)からの除去をもたらす、リンパ球、抗原提示細胞、食細胞、顆
粒球および前記細胞または肝臓によって産生される可溶性高分子の作用を指す。
本発明は、イヌPD−1に結合する単離された抗体(特にマウス抗イヌPD−1抗体お
よびそのイヌ化抗体)またはその抗原結合フラグメントならびにそのような抗体またはそ
のフラグメントの使用を提供する。具体的な実施形態では、イヌPD−1に結合すること
およびイヌPD−1のそのリガンドであるイヌPD−L1への結合をブロックすることの
両方が示されている、マウス抗イヌPD−1抗体由来のマウス抗イヌPD−1 CDRが
提供される。これらのCDRをイヌ抗体の修飾されたイヌフレームに挿入して、イヌ化マ
ウス抗イヌPD−1抗体を作製することができる。
ばマウスまたはウサギなどの哺乳動物において)惹起された抗体であって、イヌPD−1
に特異的に結合する抗体を指す。「イヌPD−1に特異的に結合する」抗体、および特に
イヌPD−1、または「イヌPD−1のアミノ酸配列を含有するポリペプチドに特異的に
結合する」抗体は、他の抗原と比較してイヌPD−1への選択的結合を示す抗体であるが
、この特異性は絶対的な結合特異性を必要としない。抗イヌPD−1抗体は、その結合が
試料中のイヌPD−1の存在を決定する場合、またはイヌ試料中の他の分子の活性を過度
に妨げることなく、例えば診断状況における偽陽性もしくは治療状況での副作用などの望
ましくない結果を生じさせることなくイヌPD−1の活性を変化させることができる場合
、イヌPD−1に「特異的」と見なされる。抗イヌPD−1抗体に必要な特異性の程度は
抗体の意図される用途に依存してよく、いずれにせよ意図される目的のための使用への適
切性によって定義される。企図される方法の抗体または抗体の抗原結合部位に由来する結
合化合物は、他のいずれの抗原との親和性よりも少なくとも2倍高い、好ましくは少なく
とも10倍高い、より好ましくは少なくとも20倍高い、最も好ましくは少なくとも10
0倍高い親和性でその抗原またはその変異体もしくはムテインに結合する。
ポリペプチドに結合するが、イヌPD−1の配列のその部分を欠く他のイヌタンパク質に
は結合しない場合、所与の抗原配列(この場合はイヌPD−1のアミノ酸配列の一部分)
を含有するポリペプチドに特異的に結合すると言われる。例えば、イヌPD−1を含有す
るポリペプチドに特異的に結合する抗体は、FLAG(登録商標)タグ形態のイヌPD−
1に結合し得るが、他のFLAG(登録商標)タグイヌタンパク質には結合しない。抗体
または抗体の抗原結合部位に由来する結合化合物は、試験される他のいずれのイヌ抗原に
対する親和性よりも少なくとも10倍高い、より好ましくは少なくとも20倍高い、さら
により好ましくは少なくとも100倍高い、そのイヌ抗原またはその変異体もしくはムテ
インに対する親和性を有する場合、そのイヌ抗原またはその変異体もしくはムテインに「
特異的に」結合する。
形態の抗体を指す。したがって、これは最も広義に使用され、具体的にはモノクローナル
抗体(完全長モノクローナル抗体を含む)、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体(例え
ば二重特異性抗体)、イヌ化抗体、完全イヌ抗体、キメラ抗体およびラクダ化単一ドメイ
ン抗体をカバーするが、これらに限定されない。「親抗体」は、意図される用途のための
抗体の修飾、例えばイヌの治療用抗体としての使用のための抗体のイヌ化に先立つ、抗原
への免疫系の暴露によって得られる抗体である。
原結合フラグメント」は、抗体の抗原結合フラグメント、すなわち完全長抗体によって結
合される抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体フラグメント、例えば1またはそれ
以上のCDR領域を保持するフラグメントを指す。抗原結合フラグメントの例としては、
Fab、Fab’、F(ab’)2およびFvフラグメント、ダイアボディ、線状抗体、
一本鎖抗体分子、例えばsc−Fv、ナノボディおよび抗体フラグメントから形成される
多重特異性抗体が含まれるが、これらに限定されない。
から成る。Fab分子の重鎖は、別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成することができ
ない。「Fabフラグメント」は抗体のパパイン切断の産物であり得る。
む2つの重鎖フラグメントを含有する。これら2つの重鎖フラグメントは、2またはそれ
以上のジスルフィド結合によっておよびCH3ドメインの疎水性相互作用によって結び付
けられている。
びまた、2つのFab’フラグメントの2本の重鎖間に鎖間ジスルフィド結合が形成され
てF(ab’)2分子を形成することができるように、CH1ドメインとCH2ドメイン
との間の領域も含む1本の重鎖の一部分またはフラグメントを含有する。
ィド結合が形成されるように、CH1ドメインとCH 2ドメインとの間の定常領域の一部
分を含む2本の重鎖を含有する。F(ab’)2フラグメントは、したがって、2本の重
鎖間のジスルフィド結合によって結び付けられている2つのFab’フラグメントから成
る。「F(ab’)2フラグメント」は抗体のペプシン切断の産物であり得る。
欠く。
を含有する抗体フラグメントを指し、これらのドメインは1本のポリペプチド鎖内に存在
する。一般にFvポリペプチドは、scFvが抗原結合のための所望の構造を形成するこ
とを可能にするVHドメインとVLドメインとの間のポリペプチドリンカーをさらに含有
する[Pluckthun,The Pharmacology of Monoclo
nal Antibodies,vol.113 Rosenburg and Moo
re eds.,Springer−Verlag,New York,pp.269−
315(1994);国際公開第88/01649号;ならびに米国特許第4,946,
778号および米国特許第5,260,203号参照]。
変領域の各々が、それらが存在するフレームワーク内で取ることができる局所立体配座を
指す。各々の超可変領域に関して、対応する超可変領域のアミノ酸配列(特に対応する抗
イヌPD−1可変ドメインに関して以下で提供するような、そのフレームワークのアミノ
酸配列の状況内の)から高い精度で予測され得る、少数の正準構造(一般に1または2、
等のような簡単な整数で表される)が存在する。これらの正準構造は、所与のCDRのア
ミノ酸配列の修飾がその抗原結合パートナーに結合する能力の保持をもたらすかまたは喪
失をもたらすかに関して決定的であり得る[Chothia and Lesk,Can
onical Structures for the hypervariable
regions of immunoglobulins,J.Mol.Biol.19
6:901−917(1987);Chothia et al.,Conformat
ion of immunoglobulin hypervaribale regi
ons,Nature,34:877−883(1989);およびAl−Lazika
ni et al.,Standard Conformations for the
canonical structures of immunoglobulins
,J.Mol.Biol.273:927−948(1997)参照]。
機能性の免疫グロブリンフラグメントである。一部の場合には、2またはそれ以上のVH
領域がペプチドリンカーで共有結合的に連結されて、二価ドメイン抗体を創出する。二価
ドメイン抗体の2つのVH領域は、同じまたは異なる抗原を標的とし得る。
じ抗原特異性を有する。しかし、二価抗体は二重特異性であり得る(下記参照)。
含する。[例えばMuyldermans et al.,Trends Bioche
m.Sci.26:230(2001);Reichmann et al.,J.Im
munol.Methods 231:25(1999);国際公開第94/04678
号;国際公開第94/25591号;米国特許第6,005,079号参照]。1つの実
施形態では、本発明は、単一ドメイン抗体が形成されるように修飾を有する2つのVHド
メインを含有する単一ドメイン抗体を提供する。
する小さな抗体フラグメントを指し、前記フラグメントは、同じポリペプチド鎖内に、軽
鎖可変ドメイン(VL)に連結された重鎖可変ドメイン(VH)を含有する(VH−VL
またはVL−VH)。同じ鎖上の2つのドメインの間で対合を可能とするには短すぎるリ
ンカーを使用することにより、ドメインは別の鎖の相補的ドメインと対合することを余儀
なくされ、2つの抗原結合部位を創出する。[欧州特許第0404097号;国際公開第
93/11161号;およびHolliger et al.,Proc.Natl.A
cad.Sci.USA 90:6444−6448(1993)参照]。改変された抗
体変異体の総説については、[一般にHolliger and Hudson Nat
.Biotechnol.23:1126−1136(2005)参照]。
がモルベースで表される場合、その活性の少なくとも10%(親抗体と比較した場合)を
保持する。好ましくは、本発明の抗体または抗原結合フラグメントは、親抗体としてのイ
ヌPD−1結合親和性の少なくとも20%、50%、70%、80%、90%、95%ま
たは100%またはそれ以上を保持する。また、本発明の抗体または抗原結合フラグメン
トは、その生物学的活性を実質的に変化させない保存的または非保存的アミノ酸置換(抗
体の「保存的変異体」または「機能保存的変異体」とも称される)を含有することができ
ることも意図されている。
えば核酸、タンパク質、脂質、炭水化物または他の物質、例えば細胞デブリおよび増殖培
地などを実質的に含まないことを意味する。一般に、「単離された」という用語は、その
ような物質または水、緩衝剤もしくは塩が本明細書で述べる結合化合物の実験的または治
療的使用を実質的に妨げる量で存在しない限り、そのような物質が完全に存在しないこと
または水、緩衝剤もしくは塩が存在しないことを指すことを意図しない。
二抗体由来の定常ドメインを有する抗体であって、第一抗体と第二抗体が異なる種に由来
する抗体である。[米国特許第4,816,567号;およびMorrison et
al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81:6851−6855(
1984)]。典型的には、可変ドメインは、げっ歯動物などの実験動物由来の抗体(「
親抗体」)から得られ、定常ドメイン配列は、動物被験体抗体、例えばヒトまたはイヌか
ら得られ、生じるキメラ抗体がそれぞれイヌまたはヒト被験体において親(例えばげっ歯
動物)抗体よりも有害な免疫応答を引き起こす可能性がより低くなるように、前記動物被
験体抗体から得られる。
マウス)抗体の両方に由来する配列を含有する抗体の形態を指す。一般に、イヌ化抗体は
、超可変ループの全部または実質的に全部が非イヌ免疫グロブリンのものに対応する(例
えば以下で例示するように6つのマウス抗イヌPD−1 CDRを含有する)、少なくと
も1つまたはそれ以上、典型的には2つの可変ドメインの実質的に全部を含有し、ならび
にフレームワーク(FR)領域の全部または実質的に全部(および典型的には残りのフレ
ームの全部または実質的に全部)はイヌ免疫グロブリン配列のものである。本明細書で例
示するように、イヌ化抗体は、マウス抗イヌPD−1抗体由来の3つの重鎖CDRおよび
3つの軽鎖CDRの両方をイヌフレームまたは修飾されたイヌフレームと共に含有する。
修飾されたイヌフレームは、イヌ化抗体の有効性をさらに最適化する、例えばイヌPD−
1へのその結合を増大させるおよび/またはイヌPD−1のイヌPD−L1への結合をブ
ロックするその能力を増大させる、本明細書で例示するような1またはそれ以上のアミノ
酸変化を含有する。
体を指す。完全イヌ抗体は、マウスにおいて、マウス細胞においてまたはマウス細胞由来
のハイブリドーマにおいて作製された場合、マウス糖鎖を含有し得る。同様に、「マウス
抗体」は、マウス免疫グロブリン配列だけを含有する抗体を指す。あるいは、完全イヌ抗
体は、ラットにおいて、ラット細胞においてまたはラット細胞由来のハイブリドーマにお
いて作製された場合、ラット糖鎖を含有し得る。同様に、「ラット抗体」は、ラット免疫
グロブリン配列だけを含有する抗体を指す。
G−B、IgG−CおよびIgG−Dと称される。2つの公知の軽鎖サブタイプはλおよ
びκと称される。
抗体は2つの結合部位を有する。二機能性または二重特異性抗体における場合を除き、2
つの結合部位は、一般に、同じである。
ク領域(FR)内に位置する、相補性決定領域(CDR)とも呼ばれる3つの超可変領域
を含有する。CDRは通常フレームワーク領域によって整列され、特定のエピトープへの
結合を可能にする。一般に、N末端からC末端に向かって、軽鎖および重鎖の可変ドメイ
ンはどちらも、FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3およびFR4を
含有する。各ドメインへのアミノ酸の割当ては、一般に、Sequences of P
roteins of Immunological Interest,Kabat,
et al.;National Institutes of Health,Bet
hesda,Md.;5th ed.;NIH Publ.No.91−3242(19
91);Kabat,Adv.Prot.Chem.32:1−75(1978);Ka
bat,et al.,J.Biol.Chem.252:6609−6616(197
7);Chothia,et al.,J.Mol.Biol.196:901−917
(1987)またはChothia,et al.,Nature 342:878−8
83(1989)]の定義に従う。
アミノ酸残基を指す。超可変領域は、「相補性決定領域」または「CDR」(すなわち軽
鎖可変ドメイン内のCDRL1、CDRL2およびCDRL3ならびに重鎖可変ドメイン
内のCDRH1、CDRH2およびCDRH3)由来のアミノ酸残基を含有する。[配列
によって抗体のCDR領域を定義する、Kabat et al.Sequences
of Proteins of Immunological Interest,5t
h Ed.Public Health Service,National Inst
itutes of Health,Bethesda,Md.(1991)参照;また
、構造によって抗体のCDR領域を定義する、Chothia and Lesk,J.
Mol.Biol.196:901−917(1987)も参照のこと]。本明細書で使
用される場合、「フレームワーク」または「FR」残基という用語は、CDR残基として
本明細書で定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン残基を指す。
は、最適には2つの属性を有する:
1.抗体依存性細胞傷害(ADCC)および補体依存性細胞傷害(CDC)などのエフ
ェクター機能の欠如、ならびに
2.プロテインAクロマトグラフィに基づくもののような業界標準技術を用いて大規模
で容易に精製される。
、IgG−BはプロテインAを使用して精製することができるが、高レベルのADCC活
性を有する。他方で、IgG−AはプロテインAに弱く結合するが、望ましくないADC
C活性を示す。さらに、IgG−DはADCC活性を示さないが、IgG−CまたはIg
G−DのいずれもがプロテインAカラムでは精製することができない。(IgG−Cはか
なりのADCC活性を有する)。本発明は、PD−1に特異的な突然変異体イヌIgG−
B抗体を提供することによってこの困難を克服する;そのような抗体はADCCなどのエ
フェクター機能を欠き、業界標準のプロテインAクロマトグラフィを用いて容易に精製す
ることができる。
ペプチド配列間の配列類似性を指す。2つの比較配列の両方におけるある位置が同じ塩基
またはアミノ酸モノマーサブユニットによって占有されている場合、例えば2つのDNA
分子の各々におけるある位置がアデニンによって占有されている場合、これらの分子はそ
の位置において相同である。相同性のパーセントは、2つの配列によって共有される相同
な位置の数を、比較した位置の総数で除して、100を乗じたものである。例えば、2つ
の配列を最適に整列した場合に2つの配列中の10の位置のうち6の位置が一致するかま
たは相同である場合、2つの配列は60%相同である。一般に、比較は、最大の相同性パ
ーセントを与えるように2つの配列を整列した場合に行われる。
クレオチドの全部または一部分と結合していない、または自然界では連結されていないポ
リヌクレオチドに連結されている、ゲノム、mRNA、cDNAもしくは合成起源のDN
AまたはRNAまたはそれらの何らかの組合せを意味する。本開示のために、特定のヌク
レオチド配列「を含有する核酸分子」は無傷の染色体を包含しないことが理解されるべき
である。指定された核酸配列「を含有する」単離された核酸分子は、指定配列に加えて、
10個までまたはさらには20個までまたはそれ以上の他のタンパク質またはその部分も
しくはフラグメントについてのコード配列を含有してよく、または列挙される核酸配列の
コード領域の発現を制御する作動可能に連結された調節配列を含有してよく、および/ま
たはベクター配列を含有してもよい。
の発現のために必要なDNA配列を指す。原核生物に適切な制御配列としては、例えばプ
ロモーターが含まれ、オペレーター配列が含まれてもよく、およびリボソーム結合部位が
含まれる。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナルおよびエンハンサーを使
用することが公知である。
る。例えば、プレ配列または分泌リーダーに関するDNAは、それがポリペプチドの分泌
に関与するプレタンパク質として発現される場合、ポリペプチドについてのDNAに作動
可能に連結されている;プロモーターまたはエンハンサーは、それがコード配列の転写に
影響を及ぼす場合、コード配列に作動可能に連結されている;またはリボソーム結合部位
は、それが翻訳を促進するように位置付けられている場合、コード配列に作動可能に連結
されている。一般に、「作動可能に連結された」は、連結されているDNA配列が隣接し
ていること、および分泌リーダーの場合は、隣接しておりかつ読み取り相内にあることを
意味する。しかし、エンハンサーは隣接している必要はない。連結は、好都合な制限部位
でのライゲーションによって達成される。そのような部位が存在しない場合は、従来の慣
例に従って合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーを使用する。
交換可能に使用され、すべてのそのような指定語は子孫を包含する。したがって、「形質
転換体」および「形質転換細胞」という語は、一次被験体細胞および継代の数を考慮せず
にそれに由来する培養物を包含する。また、意図的なまたは不慮の突然変異に起因して、
必ずしもすべての子孫が正確に同じDNA含量を有さないことも理解される。最初に形質
転換された細胞においてスクリーニングされたのと同じ機能または生物学的活性を有する
突然変異体子孫は包含される。異なる指定語が意図される場合は、文脈から明らかになる
。
ンDNA配列の配列を指す。再構成されていない免疫グロブリン配列の任意の適切な供給
源を使用し得る。ヒト生殖細胞系配列は、例えばアメリカ国立衛生研究所の関節炎および
筋骨格系/皮膚疾患国立研究機構(National Institute of Ar
thritis and Musculoskeletal and Skin Dis
eases of the United States National Inst
itutes of Health)のウエブサイト上のJOINSOLVER(登録商
標)生殖細胞系データベースから入手し得る。マウス生殖細胞系配列は、例えばGiud
icelli et al.[Nucleic Acids Res 33:D256−
D261(2005)]に記載されているように入手し得る。
本発明は、単離されたマウス抗イヌPD−1抗体およびそのイヌ化抗体、疾患の処置、
例えばイヌの癌の処置における前記抗体またはその抗原結合フラグメントの使用の方法を
提供する。イヌにおいては、A、B、CおよびDと称される4つのIgG重鎖が存在する
。これらの重鎖は、IgGA、IgGB、IgGCおよびIgGDと称される、イヌIg
Gの4つの異なるサブクラスを示す。これら4つの重鎖のDNAおよびアミノ酸配列は、
Tang et al.[Vet.Immunol.Immunopathol.80:
259−270(2001)]によって初めて同定された。これらの重鎖についてのアミ
ノ酸およびDNA配列はGenBankデータベースからも入手可能である。例えば、I
gGA重鎖のアミノ酸配列はアクセッション番号AAL35301.1を有し、IgGB
はアクセッション番号AAL35302.1を有し、IgGCはアクセッション番号AA
L35303.1を有し、およびIgGDはアクセッション番号(AAL35304.1
)を有する。イヌ抗体はまた、2種類の軽鎖、κおよびλも含有する。これらの軽鎖のD
NAおよびアミノ酸配列はGenBankデータベースから入手できる。例えばκ軽鎖の
アミノ酸配列はアクセッション番号ABY 57289.1を有し、λ軽鎖はアクセッシ
ョン番号ABY 55569.1を有する。本発明では、4つのイヌIgG Fcフラグ
メントの各々についてのアミノ酸配列は、Tang et al.前出によって決定され
たCH1およびCH2ドメインの同定された境界に基づく。イヌPD−1に結合するイヌ
化マウス抗イヌPD−1抗体としては、イヌIgG−A、IgG−BおよびIgG−D重
鎖ならびに/またはイヌκ軽鎖をマウス抗イヌPD−1 CDRと共に含有する抗体が含
まれるが、これらに限定されない。したがって、本発明は、イヌPD−1に結合し、およ
びイヌPD−1のイヌPD−L1への結合をブロックする単離されたマウス抗イヌPD−
1抗体および/またはイヌ化マウス抗イヌPD−1抗体またはその抗原結合フラグメント
を提供する。
イヌ重鎖を提供する。したがって、本発明はさらに、イヌ化マウス抗イヌ抗原抗体(単離
されたイヌ化マウス抗イヌPD−1抗体を含む)および疾患の処置、例えばイヌの癌の処
置における前記抗体またはその抗原結合フラグメントの使用の方法を提供する。
で述べるマウス抗イヌ抗体の相補性決定領域(CDR)の1、2、3、4、5または6個
を含有することができる。1、2、3、4、5または6個のCDRは、以下で提供される
CDR配列から独立して選択され得る。さらなる実施形態では、イヌPD−1に結合する
単離された抗体またはその抗原結合フラグメントは、マウス軽鎖CDR−1、CDR−2
および/またはCDR−3を含むイヌ抗体κ軽鎖ならびにマウス重鎖CDR−1、CDR
−2および/またはCDR−3を含むイヌ抗体重鎖IgGを含有する。
−1に特異的に結合し、ならびに配列番号:13、14、15、16、17、18、19
、20、21、22、23、24、25および/または26のアミノ酸配列と少なくとも
80%、85%、90%、95%、98%または99%の配列同一性を含む1から6個の
異なるCDRを含有するイヌ抗体κ軽鎖ならびに配列番号:27、28、29、30、3
1、32、33、34、35、36、37、38および/または114のアミノ酸配列と
少なくとも80%、85%、90%、95%、98%または99%の配列同一性を含む1
から6個の異なるCDRを含有するイヌ抗体重鎖IgGを有する、抗体またはその抗原結
合フラグメントを提供する。別の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合フラグメン
トは、まだ所望の結合特性および機能特性を示す一方で、0、1、2、3、4または5個
の保存的または非保存的アミノ酸置換を有する前述したCDRアミノ酸配列の1またはそ
れ以上を有するκ軽鎖とIgG重鎖配列の組合せから成るイヌフレームを含有する。
しい位置において同じである程度を指す。本明細書で使用される場合、あるアミノ酸配列
は、2番目のアミノ酸配列に対して、両方の配列のアミノ酸残基が同一である場合100
%「同一」である。したがって、2つのアミノ酸配列のアミノ酸残基の50%が同一であ
る場合、あるアミノ酸配列は2番目のアミノ酸配列に50%「同一」である。配列比較は
、所与のタンパク質、例えば比較されるタンパク質またはポリペプチドの一部分に含まれ
るアミノ酸残基の連続するブロックにわたって実施される。特定の実施形態では、さもな
ければ2つのアミノ酸配列の間の対応性を変化させ得る選択された欠失または挿入を考慮
に入れる。
似の特性を共有し、交換可能であり得る生化学的に関連するアミノ酸が考察される。
類似の性質(例えば電荷、側鎖サイズ、疎水性/親水性、骨格立体配座および剛性等)を
有する他のアミノ酸による置換であって、変化がしばしばタンパク質の生物学的活性を変
化させずに行われ得る置換を指す。当業者は、一般に、ポリペプチドの非必須領域内の1
個のアミノ酸置換は生物学的活性を実質的に改変しないことを認識する。[例えばWat
son et al.,Molecular Biology of the Gene
,The Benjamin/Cummings Pub.Co.,p.224(4th
Ed.;1987)参照]。加えて、構造的または機能的に類似のアミノ酸の置換は生
物学的活性を破壊する可能性がより低い。例示的な保存的置換をすぐ下の表3に示す。
は、本明細書で使用される場合、1またはそれ以上のアミノ酸残基が所望の特性、例えば
(such an)抗原親和性および/または特異性を改変することなく変化している抗
体またはフラグメントを指す。そのような変異体としては、上記表3の保存的アミノ酸置
換のような、あるアミノ酸の、類似特性を有するアミノ酸による置換が含まれるが、これ
に限定されない。
本発明はさらに、本明細書で開示されるマウス抗イヌPD−1抗体および/またはイヌ
化マウス抗イヌPD−1抗体およびその抗原結合フラグメントの免疫グロブリン鎖をコー
ドする核酸を包含する(以下の「実施例」参照)。
DRおよび抗体のアミノ酸配列と少なくとも約70%同一、好ましくは少なくとも約80
%同一、より好ましくは少なくとも約90%同一、最も好ましくは少なくとも約95%同
一(例えば95%、96%、97%、98%、99%、100%)であるアミノ酸配列を
含有する免疫グロブリンポリペプチドをコードする核酸も本発明に包含され、ここで前記
アルゴリズムのパラメータは、それぞれの参照配列の全長にわたってそれぞれの配列間で
最大のマッチを与えるように選択される。本発明はさらに、BLASTアルゴリズムで比
較を実施した場合、参照アミノ酸配列のいずれかと少なくとも約70%類似、好ましくは
少なくとも約80%類似、より好ましくは少なくとも約90%類似、最も好ましくは少な
くとも約95%類似(例えば95%、96%、97%、98%、99%、100%)する
アミノ酸配列を含有する免疫グロブリンポリペプチドをコードする核酸を提供し、ここで
前記アルゴリズムのパラメータは、それぞれの参照配列の全長にわたってそれぞれの配列
間で最大のマッチを与えるように選択される。
アラインメントのデフォルトパラメータおよび同一性についてのデフォルトパラメータで
C,MacVector(MacVector,Inc.Cary,NC 27519)
、Vector NTI(Informax,Inc.MD)、Oxford Mole
cular Group PLC(1996)およびClustal Wアルゴリズムを
使用して決定することができる。これらの市販のプログラムはまた、同じまたは類似のデ
フォルトパラメータを使用して配列類似性を決定するためにも使用できる。あるいは、例
えばデフォルトパラメータを用いたGCG(Genetics Computer Gr
oup,Program Manual for the GCG Package,V
ersion 7,Madison,Wisconsin)パイルアッププログラムを使
用して、デフォルトフィルター条件下でのAdvanced Blast検索を用いるこ
とができる。
する:BLAST ALGORITHMS:Altschul,S.F.,et al.
,J.Mol.Biol.215:403−410(1990);Gish,W.,et
al.,Nature Genet.3:266−272(1993);Madden
,T.L.,et al.,Meth.Enzymol.266:131−141(19
96);Altschul,S.F.,et al.,Nucleic Acids R
es.25:3389−3402(1997);Zhang,J.,et al.,Ge
nome Res.7:649−656(1997);Wootton,J.C.,et
al.,Comput.Chem.17:149−163(1993);Hancoc
k,J.M.et al.,Comput.Appl.Biosci.10:67−70
(1994);ALIGNMENT SCORING SYSTEMS:Dayhoff
,M.O.,et al.,「A model of evolutionary ch
ange in proteins.」in Atlas of Protein Se
quence and Structure,vol.5,suppl.3.M.O.D
ayhoff(ed.),pp.345−352,(1978);Natl.Biome
d.Res.Found.,Washington,DC;Schwartz,R.M.
,et al.,「Matrices for detecting distant
relationships.」in Atlas of Protein Seque
nce and Structure,vol.5,suppl.3.」(1978),
M.O.Dayhoff(ed.),pp.353−358(1978),Natl.B
iomed.Res.Found.,Washington,DC;Altschul,
S.F.,J.Mol.Biol.219:555−565(1991);States
,D.J.,et al.,Methods 3:66−70(1991);Henik
off,S.,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:
10915−10919(1992);Altschul,S.F.,et al.,J
.Mol.Evol.36:290−300(1993);ALIGNMENT STA
TISTICS:Karlin,S.,et al.,Proc.Natl.Acad.
Sci.USA 87:2264−2268(1990);Karlin,S.,et
al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:5873−5877(
1993);Dembo,A.,et al.,Ann.Prob.22:2022−2
039(1994);およびAltschul,S.F.「Evaluating th
e statistical significance of multiple d
istinct local alignments.」in Theoretical
and Computational Methods in Genome Res
earch(S.Suhai,ed.),pp.1−14,Plenum,New Yo
rk(1997)。
核酸は、宿主細胞をベクターでトランスフェクトした場合に宿主細胞によって認識される
制御配列に作動可能に連結されている。また、本発明の発現ベクターを含有する宿主細胞
ならびに本明細書で開示される抗体またはその抗原結合フラグメントを作製する方法であ
って、抗体または抗原結合フラグメントをコードする発現ベクターを保有する宿主細胞を
培地で培養することおよび抗原またはその抗原結合フラグメントを宿主細胞または培地か
ら単離することを含む方法も提供される。
本発明はさらに、本明細書で開示されるマウス抗イヌPD−1抗体と同じイヌPD−1
のエピトープのアミノ酸残基に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する
。特定の実施形態では、マウス抗イヌPD−1抗体またはその抗原結合フラグメントはま
た、イヌPD−1のイヌPD−L1への結合を阻害する/ブロックすることもできる。
ることができる。本明細書で開示される抗体またはフラグメントの発現のための宿主とし
て使用可能な哺乳動物細胞株は当分野で周知であり、アメリカ培養細胞系統保存機関(A
merican Type Culture Collection)(ATCC)から
入手可能な多くの不死化細胞株が含まれる。これらには、中でも特に、チャイニーズハム
スター卵巣(CHO)細胞、NSO、SP2細胞、HeLa細胞、ベビーハムスター腎(
BHK)細胞、サル腎細胞(COS)、ヒト肝細胞癌細胞(例えばHep G2)、A5
49細胞、3T3細胞、HEK−293細胞および多くの他の細胞株が含まれる。哺乳動
物宿主細胞としては、ヒト、マウス、ラット、イヌ、サル、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマおよ
びハムスター細胞が含まれる。特に好ましい細胞株は、いずれの細胞株が高発現レベルを
有するかを測定することを通して選択される。使用し得る他の細胞株は、昆虫細胞、例え
ばSf9細胞、両生類細胞、細菌細胞、植物細胞および真菌細胞である。重鎖またはその
抗原結合部分もしくはフラグメント、軽鎖および/またはその抗原結合フラグメントをコ
ードする組換え発現ベクターを哺乳動物宿主細胞に導入する場合、宿主細胞における抗体
の発現または、より好ましくは宿主細胞が増殖する培地中への抗体の分泌を可能にするの
に十分な期間宿主細胞を培養することによって抗体が産生される。
、産生細胞株からの本発明の抗体(またはそれに由来する他の成分)の発現は、多くの公
知の技術を用いて増強することができる。例えばグルタミンシンテターゼ遺伝子発現系(
GS系)は、特定の条件下で発現を増強するための一般的なアプローチである。GS系は
、欧州特許第0216846号、同第0256055号および同第0323997号なら
びに欧州特許出願第89303964.4号に関連して全体的にまたは部分的に考察され
る。
は、その細胞株またはトランスジェニック動物で産生される糖タンパク質に特徴的なグリ
コシル化パターンを有する。それゆえ、抗体の特定のグリコシル化パターンは、抗体を作
製するのに使用される特定の細胞株またはトランスジェニック動物に依存する。しかし、
本明細書で提供される核酸分子によってコードされるまたは本明細書で提供されるアミノ
酸配列を含有するすべての抗体は、抗体が有し得るグリコシル化パターンに関わりなく、
本発明を構成する。同様に、特定の実施形態では、非フコシル化N−グリカンだけを含む
グリコシル化パターンを有する抗体は、これらの抗体が、典型的にはインビトロおよびイ
ンビボの両方でそれらのフコシル化対応物よりも強力な効果を発揮することが示されてい
るため、好都合であり得る[例えばShinkawa et al.,J.Biol.C
hem.278:3466−3473(2003);米国特許第6,946,292号お
よび同第7,214,775号参照]。
を包含する。抗体フラグメントには、例えばペプシンによるIgGの酵素切断によって生
成し得るF(ab)2フラグメントが含まれる。Fabフラグメントは、例えばジチオト
レイトールまたはメルカプトエチルアミンでのF(ab)2の還元によって生成し得る。
Fabフラグメントは、ジスルフィド架橋によってVH−CH1鎖に付加されたVL−C
L鎖である。F(ab)2フラグメントは、今度は2つのジスルフィド架橋によって付加
された2つのFabフラグメントである。F(ab)2分子のFab部分は、その間にジ
スルフィド架橋が位置するFc領域の一部分を含む。FVフラグメントはVLまたはVH
領域である。
定常領域、例えばIgG−A、IgG−B、IgG−CおよびIgG−Dイヌ重鎖定常領
域またはその変異体を含有する。別の実施形態では、抗体または抗原結合フラグメントは
、軽鎖定常領域、例えばイヌ軽鎖定常領域、例えばλまたはκイヌ軽鎖領域またはその変
異体を含有する。限定ではなく例として、イヌ重鎖定常領域はIgG−Bに由来すること
ができ、イヌ軽鎖定常領域はκに由来し得る。
本発明のイヌ化マウス抗イヌPD−1抗体は、例えば抗体の特性を改善するために、親
(すなわちイヌ)モノクローナル抗体の可変ドメイン内のイヌフレームワークおよび/ま
たはイヌフレーム残基への修飾を含有するように操作することができる。
本発明のマウス抗イヌPD−1抗体および/もしくはイヌ化マウス抗イヌPD−1抗体
またはその抗原結合フラグメントはまた、イヌPD−1タンパク質の診断アッセイ、例え
ば特定の腫瘍細胞、組織または血清中でのその発現を検出する診断アッセイにおいても有
用であり得る。そのような診断方法は、様々な疾患診断、特にイヌにおける特定の癌の診
断において有用であり得る。
(a)マウス抗イヌPD−1抗体またはその抗原結合フラグメントで基質(例えばマイ
クロタイタープレートのウェル、例えばプラスチックプレートの表面)を被覆する段階;
(b)イヌPD−1の存在に関して試験する試料を基質に適用する段階;
(c)試料中の非結合物質を除去するためにプレートを洗浄する段階;
(d)同じくPD−1抗原に特異的な検出可能に標識した抗体(例えば酵素結合抗体)
を適用する段階;
(e)非結合標識抗体を除去するために基質を洗浄する段階;
(f)標識抗体が酵素結合している場合、その酵素によって蛍光シグナルに変換される
化学物質を適用する段階;および
(g)標識抗体の存在を検出する段階。
例えば2,2’−アジノ−ビス(3−エチルベンズチアゾリン−6−スルホン酸)]また
は3,3’,5,5’−テトラメチルベンジジンと反応するペルオキシダーゼで標識する
。あるいは、標識抗体を、シンチラントの存在下でシンチレーションカウンターによって
検出できる検出可能な放射性同位体(例えば3H)で標識する。本発明のマウス抗イヌP
D−1抗体は、ウェスタンブロットまたは免疫タンパク質ブロット手順において使用し得
る。
(i)結合イヌPD−1またはそのフラグメントの存在に関して試験する膜または固体
基質を本発明のマウス抗イヌPD−1抗体またはその抗原結合フラグメントと接触させる
こと。そのような膜は、非変性PAGE(ポリアクリルアミドゲル電気泳動)ゲルまたは
SDS−PAGE(ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動)ゲル中の
イヌPD−1の存在に関して試験するタンパク質が転写された(例えばゲル中での電気泳
動分離後)ニトロセルロースまたはビニルベースの[例えばポリビニリデンフルオライド
(PDVF)]膜の形態を取り得る。マウス抗イヌPD−1抗体またはその抗原結合フラ
グメントと膜の接触前に、膜上の非特異的タンパク質結合部位に結合させるために、例え
ば脱脂粉乳等で膜をブロックしてもよい。
非結合物質を除去するために膜を1回またはそれ以上の回数洗浄すること;ならびに
(iii)結合マウス抗イヌPD−1抗体またはその抗原結合フラグメントを検出する
こと。
出可能に標識した二次抗体(抗免疫グロブリン抗体)と結合させ、その後二次抗体の存在
を検出することによるものであってもよい。
た、免疫組織化学のためにも使用し得る。そのような方法は本発明の一部を形成し、例え
ば(1)イヌPD−1の存在に関して試験する細胞を本発明のマウス抗イヌPD−1抗体
またはその抗原結合フラグメントと接触させること;および(2)細胞上または細胞中の
抗体またはフラグメントを検出することを含む。抗体または抗原結合フラグメント自体が
検出可能に標識されている場合は、それを直接検出することができる。あるいは、抗体ま
たは抗原結合フラグメントを、検出される検出可能標識二次抗体によって結合させてもよ
い。
トはまた、インビボ腫瘍イメージングにも使用し得る。そのような方法は、放射性標識マ
ウス抗イヌPD−1抗体またはその抗原結合フラグメントを、イヌPD−1発現に関連す
る腫瘍の存在に関して試験するイヌの体内に注射し、次いで、例えば腫瘍に結合した高濃
度の抗体または抗原結合フラグメントを含有する位置で、標識抗体または抗原結合フラグ
メントの存在を検出するために患者の身体の核イメージングを実施することを含み得る。
Tイメージング(陽電子放射断層撮影法)が含まれる。標識としては、例えばSPECT
イメージングと組み合わせて、例えばヨウ素123(123I)およびテクネチウム99
m(99mTc)、または例えばPETイメージングもしくはインジウム111と組み合
わせて、11C、13N、15Oもしくは18Fが含まれる[例えばGordon et
al.,International Rev.Neurobiol.67:385−
440(2005)参照]。
さらに、本発明の抗イヌPD−1抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で
論じる抗体およびフラグメントが結合するイヌPD−1中の同じエピトープに結合する任
意の抗体またはその抗原結合フラグメント、ならびにイヌPD−1結合に関して本明細書
で論じる抗体およびフラグメントを交差ブロックする(部分的もしくは完全に)または本
明細書で論じる抗体およびフラグメントによって交差ブロックされる(部分的もしくは完
全に)任意の抗体または抗原結合フラグメント、ならびにその任意の変異体を包含する。
アッセイ(例えば以下で例示するようなBIACore(登録商標)、ELISA、また
はフローサイトメトリ)においてIB5、3B6、4D12、7C9、2H9、5G5お
よび/または2G9のいずれかと交差競合するそれらの能力に基づいて同定することがで
きる。例えば標準的なELISAアッセイが使用でき、このアッセイでは、組換えイヌP
D−1タンパク質をプレート上に固定化し、抗体の1つを蛍光標識して、標識抗体の結合
を競合除去する非標識抗体の能力を評価する。加えてまたは選択的に、BIACore(
登録商標)分析を使用して交差競合する抗体の能力を評価することができる。例えばIB
5、3B6、4D12、7C9、2H9、5G5および/または2G9のイヌPD−1へ
の結合を阻害する試験抗体の能力は、試験抗体がイヌPD−1への結合に関してIB5、
3B6、4D12、7C9、2H9、5G5および/または2G9と競合することができ
、したがって、一部の場合には、IB5、3B6、4D12、7C9、2H9、5G5お
よび/または2G9と同じイヌPD−1上のエピトープに結合し得ることを明らかにする
。前述したように、本発明の抗イヌPD−1抗体またはフラグメントのいずれかと同じエ
ピトープに結合する抗体およびフラグメントも、本発明の一部を形成する。
イヌ化マウス抗イヌPD−1抗体またはその抗原結合フラグメントの医薬または滅菌組
成物を調製するために、イヌ化マウス抗イヌPD−1抗体またはその抗原結合フラグメン
トを医薬的に許容される担体または賦形剤と混合することができる。[例えばRemin
gton’s Pharmaceutical SciencesおよびU.S.Pha
rmacopeia:National Formulary,Mack Publis
hing Company,Easton,PA(1984)参照]。
形態で許容される担体、賦形剤または安定剤と混合することによって調製し得る[例えば
Hardman,et al.(2001)Goodman and Gilman’s
The Pharmacological Basis of Therapeuti
cs,McGraw−Hill,New York,NY;Gennaro(2000)
Remington:The Science and Practice of Ph
armacy,Lippincott,Williams,and Wilkins,N
ew York,NY;Avis,et al.(eds.)(1993)Pharma
ceutical Dosage Forms:Parenteral Medicat
ions,Marcel Dekker,NY;Lieberman,et al.(e
ds.)(1990)Pharmaceutical Dosage Forms:Ta
blets,Marcel Dekker,NY;Lieberman,et al.(
eds.)(1990)Pharmaceutical Dosage Forms:D
isperse Systems,Marcel Dekker,NY;Weiner
and Kotkoskie(2000)Excipient Toxicity an
d Safety,Marcel Dekker,Inc.,New York,NY参
照]。1つの実施形態では、本発明の抗PD−1抗体を酢酸ナトリウム溶液pH5〜6中
で適切な濃度に希釈し、張度のためにNaClまたはスクロースを添加する。安定性を高
めるためにポリソルベート20またはポリソルベート80などの付加的な作用物質を添加
してもよい。
、例えばLD50(母集団の50%に致死的な用量)およびED50(母集団の50%に
おいて治療的に有効な用量)を決定するために、細胞培養物または実験動物において標準
的な薬学手順によって決定することができる。毒性作用と治療効果の用量比が治療指数(
LD50/ED50)である。特定の態様では、高い治療指数を示す抗体が望ましい。こ
れらの細胞培養アッセイおよび動物試験から得られるデータは、イヌにおける使用のため
の投与量範囲を設定するのに使用できる。そのような化合物の投与量は、好ましくはほと
んどまたは全く毒性を伴わないED50を含む循環濃度の範囲内にある。投与量は、使用
される剤形および投与経路に依存してこの範囲内で変化させ得る。
;筋肉内、皮下、皮内、髄内、髄腔内、直接脳室内、静脈内、腹腔内、鼻内、眼内、吸入
、通気、局所、皮膚、経皮または動脈内経路が含まれる。
注射などの侵襲的経路によって投与することができる。本発明のさらなる実施形態では、
マウス抗イヌPD−1抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物は、
静脈内、皮下、筋肉内、動脈内、腫瘍内経路で、または吸入、エアロゾル送達によって投
与される。非侵襲的経路(例えば経口的に;例えば丸剤、カプセルまたは錠剤中で)によ
る投与も本発明の範囲内である。
物は、例えば薬剤充填済み注射器または自己注射器を含む、皮下注射針での注射によって
投与できる。本明細書で開示される医薬組成物はまた、無針皮下注射装置、例えば米国特
許第6,620,135号;同第6,096,002号;同第5,399,163号;同
第5,383,851号;同第5,312,335号;同第5,064,413号;同第
4,941,880号;同第4,790,824号または同第4,596,556号に開
示されている装置でも投与し得る。
ための周知のインプラントおよびモジュールの例としては:薬剤を制御された速度で投与
するための移植可能なマイクロ注入ポンプを開示する米国特許第4,487,603号、
薬剤を正確な注入速度で送達するための薬剤注入ポンプを開示する米国特許第4,447
,233号、持続的な薬剤送達のための可変流量の移植可能な注入装置を開示する米国特
許第4,447,224号、多チャンバー区画を有する浸透圧薬物送達システムを開示す
る米国特許第4,439,196号が含まれる。多くの他のそのようなインプラント、送
達システムおよびモジュールは当業者に周知である。
疫病理学によって特徴付けられる病原体誘発性病変内に抗体を直接注入することによって
、マウス抗イヌまたはイヌ化マウス抗イヌPD−1抗体を全身的にではなく局所的に投与
し得る。さらに、例えば関節炎の関節または免疫病理学によって特徴付けられる病原体誘
発性病変を標的とする、標的化薬物送達システム、例えば組織特異的抗体で被覆されたリ
ポソーム中で抗体を投与し得る。リポソームは罹患組織を標的とし、罹患組織によって選
択的に取り込まれる。
体の免疫原性、および生物学的マトリックス中の標的細胞の接近可能性を含む、いくつか
の因子に依存する。好ましくは、投与レジメンは、同時に望ましくない副作用を最小限に
抑えつつ、標的疾患部位において改善を生じさせるのに十分な治療用抗体を送達する。し
たがって、送達される生物学的製剤の量は、一部には特定の治療用抗体および処置される
状態の重症度に依存する。治療用抗体の適切な用量を選択するうえでの指針が入手可能で
ある[例えばWawrzynczak Antibody Therapy,Bios
Scientific Pub.Ltd,Oxfordshire,UK(1996);
Kresina(ed.)Monoclonal Antibodies,Cytoki
nes and Arthritis,Marcel Dekker,New York
,NY(1991);Bach(ed.)Monoclonal Antibodies
and Peptide Therapy in Autoimmune Disea
ses,Marcel Dekker,New York,NY(1993);Baer
t,et al.New Engl.J.Med.348:601−608(2003)
;Milgrom et al.New Engl.J.Med.341:1966−1
973(1999);Slamon et al.New Engl.J.Med.34
4:783−792(2001);Beniaminovitz et al.New
Engl.J.Med.342:613−619(2000);Ghosh et al
.New Engl.J.Med.348:24−32(2003);Lipsky e
t al.New Engl.J.Med.343:1594−1602(2000)参
照]。
を及ぼすと推測されるパラメータまたは因子を使用して、獣医(veteranaria
n)によって行われる。一般に、用量は、最適用量よりいくぶん低い量から開始して、そ
の後負の副作用と比較して所望のまたは最適の効果が達成されるまで少しずつ増量する。
重要な診断尺度には、例えば炎症の症状の尺度または産生される炎症性サイトカインのレ
ベルが含まれる。
たは例えば1日1回、週に1〜7回、週1回、隔週に1回、月1回、隔月に1回、3か月
に1回、半年に1回、年1回等で投与される用量によって提供され得る。用量は、例えば
静脈内、皮下、局所、経口、経鼻、直腸、筋肉内、大脳内、髄腔内投与または吸入によっ
て提供され得る。1週間の総用量は、一般に少なくとも0.05μg/kg体重、より一
般的には少なくとも0.2μg/kg、0.5μg/kg、1μg/kg、10μg/k
g、100μg/kg、0.25mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg、5
.0mg/ml、10mg/kg、25mg/kg、50mg/kgまたはそれ以上であ
る[例えばYang,et al.New Engl.J.Med.349:427−4
34(2003);Herold,et al.New Engl.J.Med.346
:1692−1698(2002);Liu,et al.J.Neurol.Neur
osurg.Psych.67:451−456(1999);Portielji,e
t al.Cancer Immunol.Immunother.52:133−14
4(2003)参照]。用量はまた、被験体の血清中でイヌ化マウス抗イヌPD−1抗体
のあらかじめ定められた標的濃度、例えば0.1、0.3、1、3、10、30、100
、300μg/mlまたはそれ以上を達成するように提供され得る。他の実施形態では、
本発明のイヌ化マウス抗イヌPD−1抗体は週1回、隔週に1回、「4週間に1回」、月
1回、隔月に1回または3か月に1回ベースで、10、20、50、80、100、20
0、500、1000または2500mg/被験体で皮下または静脈内経路によって投与
される。
1のPDL−1への結合をブロックし、ならびにT細胞の活性化および免疫応答の増強を
もたらす抗体を惹起するワクチンとして使用し得る。そのようなワクチンは、癌などの疾
患のための治療用ワクチンとしてまたは他のワクチンに対する免疫応答の促進剤として働
くために有用であり得る。これらの抗原ペプチドをワクチンとして使用するために、これ
らのペプチドの1つまたはそれ以上を、これらのペプチドの免疫原性を増強し、ペプチド
特異的抗体を惹起するように化学的にまたは組換えDNA技術を介して別の担体タンパク
質に連結し得る。ペプチドを担体タンパク質に連結するための技術は当業者に公知である
。ペプチドワクチンは、筋肉内、皮下、経口、噴霧または卵内経路によって動物をワクチ
ン接種するのに使用し得る。ペプチドワクチンは、細菌、ウイルス、酵母またはバキュロ
ウイルス系(baculovirus virus system)から発現されるサブ
ユニットタンパク質として使用し得る。あるいはそのようなペプチドワクチンは、当業者
に公知の方法によって実施され得るように、そのようなペプチドワクチンを発現する様々
なウイルスまたは細菌ベクターの投与後に送達され得る。ペプチドワクチンは1〜100
0μgの用量で投与でき、アジュバントおよび許容される医薬担体を含有してもよい。
に関連する症状の発現の先送りおよび/またはそのような障害の症状の重症度の軽減を包
含する。これらの用語は、既存の制御されないまたは望ましくない症状を改善すること、
付加的な症状を予防すること、およびそのような症状の基礎となる原因を改善または予防
することをさらに包含する。したがって、これらの用語は、障害、疾患もしくは症状を有
する、またはそのような障害、疾患もしくは症状を発現する潜在的可能性を有する脊椎動
物被験体に有益な結果が与えられていることを意味する。
う用語は、単独でまたは付加的な治療薬と併用して細胞、組織または被験体に投与された
場合、疾患もしくは状態の1もしくはそれ以上の症状またはそのような疾患もしくは状態
の進行の測定可能な改善を生じさせるのに有効な、本発明のイヌ化マウス抗イヌPD−1
抗体またはその抗原結合フラグメントの量を指す。治療有効用量はさらに、症状の少なく
とも部分的な改善、例えば関連する医学的状態の処置、治癒、予防もしくは改善、または
そのような状態の処置、治癒、予防もしくは改善の速度の増大をもたらすのに十分な結合
化合物の量を指す。単独で投与される個々の有効成分に適用される場合、治療有効用量は
その成分単独を指す。組合せに適用される場合、治療有効用量は、併用して、連続的にま
たは同時に投与されるかどうかにかかわらず、治療効果をもたらす有効成分の総計量を指
す。治療薬の有効量は、診断尺度またはパラメータの少なくとも10%、通常は少なくと
も20%、好ましくは少なくとも約30%、より好ましくは少なくとも40%、最も好ま
しくは少なくとも50%の改善をもたらす。有効量はまた、疾患の重症度を評価するのに
主観的尺度を用いる場合は、主観的尺度の改善ももたらすことができる。
先に述べたように、本発明のイヌ化マウス抗イヌPD−1抗体もしくはその抗原結合フ
ラグメントおよび/または抗原ペプチドは、1またはそれ以上の他の治療薬(例えば化学
療法剤)と同時投与し得る。抗体を他の治療薬に連結してもよく(免疫複合体として)ま
たは他の治療薬とは別に投与することができる。後者(別々の投与)の場合は、抗体を他
の治療薬の前、後もしくは治療薬と同時に投与することができるかまたは他の公知の療法
と同時投与することができる。
さらに、PD−1に特異的に結合する、本明細書で論じる抗体または抗原結合フラグメ
ント(例えばイヌ化マウス抗イヌPD−1抗体またはその抗原結合フラグメント)を含む
がこれらに限定されない1またはそれ以上の成分を、本明細書で論じる、医薬的に許容さ
れる担体および/または化学療法剤を含むがこれらに限定されない1またはそれ以上の付
加的な成分と共に含有するキットが提供される。結合組成物および/または化学療法剤は
、純粋な組成物としてまたは医薬的に許容される担体と組み合わせて医薬組成物に製剤す
ることができる。
滅菌ガラスまたはプラスチックバイアル中)にイヌ化マウス抗イヌPD−1抗体またはそ
の医薬組成物ならびに別の容器中(例えば滅菌ガラスまたはプラスチックバイアル中)に
その医薬組成物および/または化学療法剤を含有する。
を実施するための装置も含有することができる。例えばキットは、上記で論じた1または
それ以上の皮下針または他の注射装置を含有し得る。キットはまた、キット中の医薬組成
物および剤形に関する情報を含む添付文書も含有することができる。一般に、そのような
情報は、ペットの飼い主および獣医(veteranarian)が同封されている医薬
組成物および剤形を有効かつ安全に使用するのに役立つ。例えば本発明の組合せに関する
以下の情報が添付文書中で提供され得る:薬物動態、薬力学、臨床試験、効果パラメータ
、適応症および用法、禁忌、警告、使用上の注意、有害反応、過量、適切な用量および投
与、供給方法、適切な保存条件、参考文献、製造者/配給者情報ならびに特許情報。
断または検出アッセイを実施するための指示書と共に所定量の試薬の包装された組合せで
提供され得る。抗体が酵素で標識されている場合、キットは、基質および酵素が必要とす
る補因子(例えば検出可能な発色団または発蛍光団を提供する基質前駆体)を含有する。
加えて、他の添加物、例えば安定剤、緩衝液(例えばブロック緩衝液または溶解緩衝液)
等が含まれてもよい。様々な試薬の相対的な量は、アッセイの感受性を実質的に最適化す
る試薬の溶液中の濃度を提供するように広く異なり得る。特に、試薬は、溶解後に適切な
濃度を有する試薬溶液を提供する賦形剤を含有する、通常は凍結乾燥された、乾燥粉末と
して提供され得る。
[実施例1]
イヌPD−1およびPD−L1
イヌPD−1の同定とクローニング:
完全長イヌPD−1(cPD−1)をコードする核酸を、NCBI遺伝子バンクデータ
ベース(アクセッション番号XM_543338.4、配列番号:1)の検索を通して同
定した。翻訳されたアミノ酸配列、配列番号:2(アクセッション番号XP−54333
8.3)は、遺伝子バンク(NCBI)タンパク質データベースを検索し、同定されたア
ミノ酸配列をマウス、ネコおよびヒトPD−1アミノ酸配列と整列することを通してさら
に同定した、推定上のイヌPD−1タンパク質に対応する。CHO細胞についてコドン最
適化した、完全長イヌPD−1遺伝子に対応するDNA配列を合成し、p96793と称
するプラスミドにクローニングした。予測されるイヌPD−1のDNAおよびタンパク質
配列と公知のPD−1 DNAおよびタンパク質配列との比較は、イヌPD−1の細胞外
ドメイン(ECD)をコードするDNA配列(配列番号:3)およびイヌPD−1のEC
Dのアミノ酸配列(配列番号:4)の同定をもたらした。
DNA配列を合成し、LPD2726と称するプラスミドにクローニングした。イヌPD
−1 ECDプラスGTリンカーおよびヒトIgG1 Fc遺伝子のFc部分に対応する
核酸配列(配列番号:5)を化学的に合成し、LPD2727と称するプラスミドにクロ
ーニングした。イヌPD−1 ECDおよびヒトIgG1 FcのFc部分は、配列番号
:6のアミノ酸配列を含有する。
完全長イヌPD−L1をコードする核酸を、NCBI遺伝子バンクデータベース(アク
セッション番号XM_541302.4;配列番号:7)の検索を通して同定した。推定
上のイヌPD−1タンパク質に対応する翻訳されたアミノ酸配列(アクセッション番号X
P−541302.4;配列番号:8)は、遺伝子バンク(NCBI)タンパク質データ
ベースを検索し、同定された配列と公知のPD−L1マウスおよびヒト配列とのアライン
メントによって同定した。
1のECDドメインに対応するDNA配列(配列番号:9;CHO細胞についてコドン最
適化した)を同定した。イヌPD−L1のECDの予測されるアミノ酸配列は配列番号:
10である。PD−L1 ECDプラスGTリンカーおよび8個のヒスチジン残基をコー
ドするDNAを合成し、LPD2695と称するプラスミドにクローニングした。
ミノ酸配列をコードするDNA配列(配列番号:11)を化学的に合成し、LPD269
7と称するプラスミドにクローニングした。イヌPD−L1 ECDプラスGTリンカー
およびヒトIgG1のFc部分は、配列番号:12のアミノ酸配列を含有する。表4は上
記の発現プラスミドの説明を含む。
PD−1 ECD−HIS、PD−1 ECD−Fc、PDL−1 ECD−HISお
よびPD−L1 ECD−Fcタンパク質をコードする発現プラスミドをHEK 293
細胞にトランスフェクトし、Fc融合タンパク質についてはプロテインAまたはHISタ
グタンパク質についてはニッケル(Ni2+)カラムクロマトグラフィを使用してトラン
スフェクト細胞の上清からタンパク質を精製した。精製したタンパク質を以下で詳述する
ようにELISAまたは結合アッセイに使用した。発現したタンパク質をSDS−PAG
Eゲルによって分析した。
線を付し、太字で示す:
配列番号:6はシグナル配列を含まない;配列番号:113はシグナル配列を含む。
抗イヌPD−1抗体
抗イヌPD−1モノクローナル抗体の作製:
合計3匹のBalb/cマウスを17日間にわたって複数回免疫した(毎回10μgで
)。免疫する抗原はイヌPD−1 ECD−Fc融合タンパク質であった。免疫後、各々
のマウスから血清を採取し、イヌPD−1 ECD−HISタグタンパク質との反応性に
関して試験した。最も高い血清抗PD−1 ECD−HIS力価を有するマウスの脾細胞
を骨髄腫P3X63Ag8.653細胞株に融合した。融合の約2週間後に、推定上のハ
イブリドーマ細胞からの上清を、PD−1 ECD−HISタグタンパク質に対するそれ
らの反応性に関してELISAによって試験した。ELISAにおいて強い陽性シグナル
を生じるハイブリドーマを限界希釈によってサブクローニングし、イヌPD−1 ECD
−HISタグタンパク質に対する反応性に関して再び試験した。
ハイブリドーマによって分泌される抗体の、イヌPD−1のECDに対する反応性をE
LISAによって確認した。ハイブリドーマ細胞を、CELLineバイオリアクター(
Integra−biosciences)を使用して10〜30日間培養した。細胞を
最初に、4mM L−グルタミンおよびGibcoからの10%Ultra Low I
gGウシ胎仔血清(FBS)を添加したDMEM中で維持した。ハイブリドーマ細胞を、
FBS濃度を20%に増加した同じ培地15mL中約2×106細胞/mLの細胞密度で
CELLineバイオリアクターの細胞チャンバーに接種した。外側チャンバーに栄養培
地(4mM L−グルタミンおよび2%標準FBSを添加したDMEM)1Lを満たした
。細胞チャンバー中のハイブリドーマ細胞を3〜7日間かけて約2.5×107細胞/m
Lに増殖させた。次に、細胞懸濁液10mLを細胞チャンバーから採取し、新鮮培地と交
換して、細胞を再増殖させ、その後採取した。この手順を必要に応じて反復し、各ハイブ
リドーマクローンから適切な量のmAbを得た。採取した細胞懸濁液を遠心分離し、上清
を0.2ミクロンフィルター膜でろ過した。抗体精製のために、各クローンの上清を、P
rotein G Sepharose 4 Fast flow 5mLカラム(GE
Healthcare)を使用して重力流によって精製した。Tris−EDTA(T
E)緩衝液pH8.0で洗浄した後、0.1Mグリシン緩衝液、pH2.7を使用して結
合抗体を溶出し、次いで1M Tris、pH8.0を使用してpHを中和した。抗体を
濃縮し、Centriprep YM−10、10kDa NMWL遠心分離フィルター
ユニット(Millipore)を使用して緩衝液をリン酸緩衝生理食塩水(PBS)に
交換した。分光測光法を用いて抗体濃度を定量した。
に関してELISAによって次のように試験した:HISタグイヌPD−1 ECDタン
パク質を被覆緩衝液(炭酸塩/重炭酸塩、pH9.0)中で10μg/mLに希釈し、1
00μl/ウェルで96ウェル平底ELISAプレート(NUNC)に分注する。プレー
トを4℃で一晩インキュベートする。その後プレートを、0.05%Tween−20を
含有するリン酸緩衝生理食塩水(PBST)で3回洗浄する。次に、ブロッキング緩衝液
(PBST中5%脱脂乳)200μlを各ウェルに添加し、プレートを37℃で60分間
インキュベートする。その後プレートをPBSTで3回洗浄する。次に、ブロッキング緩
衝液に希釈した試験mAb 100μlを適切なカラムの最初のウェルに添加する。その
後試験mAbを適切なプレート位置に2倍希釈する。プレートを37℃で60分間インキ
ュベートした後、PBSTでプレートを3回洗浄する。次に、ホースラディッシュペルオ
キシダーゼ結合ヤギ抗マウスIgG(KPL)の1:2,000希釈物100μl/ウェ
ルをプレートに添加し、その後プレートを37℃で60分間インキュベートする。次にプ
レートをPBSTで3回洗浄し、3,3’,5,5’テトラメチルベンジジン(TMB)
基質(KPLより)100μl/ウェルをプレートに添加する。37℃で5〜20分間、
発色反応を発現させた後、650nmで吸光度を測定する。
完全長イヌPD−1遺伝子をプラスミドp96793にクローニングした。このプラス
ミドにおいてPD−1タンパク質の発現はhCMVプロモーターによって駆動される。C
HO DXB11細胞(dhfr−)を、10%ウシ胎仔血清を添加したMEM−α(G
ibco)中で維持した。プラスミドp96793によるCHO細胞のトランスフェクシ
ョンを、約6×106細胞を含む75cm2フラスコ中でリポフェクタミン(Invit
rogen)を使用したリポソーム媒介性遺伝子送達によって実施した。48時間後、1
0%FBSおよび400μg/mLハイグロマイシンBを添加した、ヌクレオシドを含有
しないMEM−α培地(選択培地)に細胞を継代した。dhfr+のハイグロマイシン耐
性細胞のプールに関して限界希釈クローニングを実施した。クローンを免疫蛍光アッセイ
によってイヌPD−1の発現に関して評価した。簡単に述べると、細胞単層を80%アセ
トンで96ウェルプレートに固定した。次に、固定して乾燥した細胞単層をポリクローナ
ルヤギ抗ヒトPD−1抗体(R&D Systems)と共に1時間インキュベートした
。プレートをPBSで洗浄し、次にフルオレセイン標識ウサギ抗ヤギIgG抗体(KPL
)と共に1時間インキュベートした。プレートをPBSで洗浄した。蛍光を示すクローン
を増殖させ、細胞株を樹立した。
CHO細胞上のイヌPD−1とマウス抗イヌPD−1 mAbの反応性を、PD−1を
発現するCHO細胞を使用した細胞ベースのアッセイによって測定した。簡単に述べると
、イヌPD−1を発現するCHO細胞を培地(DMEM/HAM F12、10%FBS
)50μl中で80〜100%の集密度まで培養した。次に、様々な濃度の精製mAbを
含有する培地50μlを37℃で1時間添加した。PBS−Tweenで3回洗浄した後
、培地中で1:1000希釈したヤギ抗マウスホースラディッシュペルオキシダーゼ(H
RP)100μlを37℃で1時間添加した。PBS−Tweenでさらに3回洗浄した
後、結合mAbをペルオキシダーゼ(perioxidase)基質(TMB)で視覚化
した。450nmでのペルオキシダーゼ(perioxidase)活性による吸光度の
増加をマイクロプレートリーダーで測定した。
Abの結合試験:
イヌPD−1抗原の約70共鳴単位(RU)をアミンカップリングによって直接固定化
した。親和性測定を、結合時間300秒、解離時間1200秒ならびに50、100、2
00(×2)、400および800ナノモル(nM)の濃度で無標識表面プラズモン共鳴
ベースの技術(例えばBiacore(登録商標)T200)によって実施した。1:1
結合の適合モデルを使用した。抗原(イヌPD−1)を、アミンカップリングを介してセ
ンサーチップ上に固定化し、以下の表5に示す4つの抗体を、抗原表面を流れる分析物と
して使用した。結果は、イヌPD−1抗原についての本発明の抗イヌPD−1抗体の結合
親和性が強力であり、ナノモルおよびさらにはサブナノモルの解離定数(Kd)を有する
ことを明らかにした。さらに、マウス抗イヌPD−1モノクローナル抗体および同じクロ
ーン由来の対応するイヌ化マウス抗イヌPD−1モノクローナル抗体は、極めて類似のK
d値を生じた(以下の表5参照)。
イヌPD−1を発現するCHO細胞株に基づく細胞ベースのELISA(CELISA
)アッセイを、イヌPD−1(cPD−1)と反応するマウスmAbに使用した。ビオチ
ン化cPD−L1/Fcタンパク質と共にこのアッセイを使用してリガンド遮断を確認し
た。簡単に述べると、種cPD−1 CHO細胞を4×104細胞/ウェルで96ウェル
プレートに入れ、細胞が95〜100%集密になるまで37℃で18〜24時間細胞をイ
ンキュベートした。細胞培養培地を吸引除去し、プレートをPBS+0.05%Twee
n20で3回およびCHO培地で1回洗浄した。30μg/mLから出発して、CHO培
地中で抗cPD−1 mAbの3倍段階希釈物を作製し、各抗体希釈物50μL/ウェル
をプレートに添加した。37℃、5%CO2で振とうしながら30分間インキュベーショ
ンを実施した。cPD−L1−Fc−ビオチン(CHO培地ストック中2μg/ml)5
0μL/ウェルを添加し、37℃、5%CO2で振とうしながら45分間インキュベーシ
ョンを続けた。プレートをPBS+0.05%Tween20で6回洗浄した。CHO培
地中のストレプトアビジン−HRP(1:2000)100ul/ウェルを添加し、次い
で37℃/5%CO2で30〜60分間インキュベートした。プレートをPBS+0.0
5%Tween20で5回洗浄し、次にTMB発色基質100μl/ウェルを添加した。
1Mリン酸50μl/ウェルを添加することによって発色を停止させた。ELISAプレ
ートリーダーを使用してA450〜A620での光学密度(O.D.)を測定した。
の反応性:
PBMCを、Ficoll分離を使用して健常イヌおよび癌を有するイヌから得たED
TA血液試料より調製した。PBMCを、2.5×105細胞/ウェルの濃度で添加した
FACS緩衝液(PBS、1%FBSおよび0.1%アジ化ナトリウム)に再懸濁し、様
々な濃度の試験モノクローナル抗体(mAb)と共にインキュベートした。細胞を室温で
30分間インキュベートし、その後2回洗浄した。次に細胞を再懸濁し、Alexa−4
88結合ロバ抗マウスIgG(H+L鎖)と共に室温で30分間インキュベートして、そ
の後2回洗浄した。次に細胞をイヌCD4およびCD8に対するPBおよびPE結合抗体
と共に30分間インキュベートし、その後洗浄した。次に細胞をFACS緩衝液に再懸濁
し、PD−1 mAbの結合に関して陽性のCD4またはCD8 T細胞のパーセンテー
ジを決定するためにフローサイトメトリによって分析した。対照には、二次抗体だけまた
は無関係なアイソタイプがマッチするmAbと共にインキュベートした細胞が含まれた。
PBMCを、Ficoll分離を使用して健常イヌおよび癌を有するイヌから得たED
TA血液試料より調製した。細胞を3回洗浄し、96ウェルプレート中の三つ組みのウェ
ルにおいて2.5×105細胞/ウェルの濃度で完全組織培養培地に再懸濁した。細胞を
コンカナバリンA 1μg/mlで活性化した。試験抗体を様々な濃度で添加し、培養物
を96時間インキュベートした。対照には、抗体なしでconAと共に、またはconA
および無関係なアイソタイプがマッチする抗体と共にインキュベートした細胞が含まれた
。96時間の培養後、上清を採取し、市販のイヌIFN−γ ELISAキット(R&D
Systems)を使用してIFN−γ放出に関して検定した。
マウスVHおよびVL鎖のDNA配列ならびにそれらのCDRをコードするDNA配列
を、標準的な分子生物学方法を用いて各ハイブリドーマからのmRNAの単離後に同定す
る。これらのハイブリドーマからのCDRの予測されるアミノ酸配列の配列番号を以下に
列挙する:
注目すべきは、例示する7つのマウス抗イヌPD−1抗体の各々についてCDRのアミ
ノ酸配列の間に実質的な相同性が存在する。
mAb:4D12、3B6、7C9および1B5: CDR:H1−1;CDR2:
H2−1;CDR3:H3−6
mAb:5G5: CDR:H1−1;CDR2:H2−1;CDR3:H3−11
mAb:2H9 CDR:H1−1;CDR2:H2−2A;CDR3:H3−11
mAb:2G9 CDR:H1−1;CDR2:H2−2A;CDR3:H3−13
VL鎖CDRについての正準構造(クラス)
mAb:4D12、3B6、7C9、1B5: CDRL:L1−3;CDR2:L
2−1;CDR3:L3−1
mAb:5G5: CDR:L1−2A;CDR2:L2−1;CDR3:L3−1
mAb:2H9 CDR:L1−2A;CDR2:L2−1;CDR3:L3−1
mAb:2G9 CDR:L1−4;CDR2:L2−1;CDR3:L3−1
[実施例3]
PD−1に特異的な突然変異体イヌIgG−B抗体
イヌIgGの4つの公知のIgG重鎖サブタイプが存在し、それらはIgG−A、Ig
G−B、IgG−CおよびIgG−Dと称される。2つの公知の軽鎖サブタイプはλおよ
びκと称される。しかし、イヌ免疫細胞の結合および活性化に加えて、PD−1に対する
イヌまたはイヌ化抗体は2つの属性を有する:
1.抗体依存性細胞傷害(ADCC)および補体依存性細胞傷害(CDC)などのエフ
ェクター機能の欠如、ならびに
2.プロテインAクロマトグラフィに基づくもののような業界標準技術を用いて大規模
で容易に精製される。
、IgG−BはプロテインAを使用して精製できるが、高レベルのADCC活性を有する
。IgG−CもかなりのADCC活性を有する。他方で、IgG−AはプロテインAに弱
く結合するが、望ましくないADCC活性を示す。さらに、IgG−DはADCC活性を
示さないが、IgG−CまたはIgG−DのいずれもがプロテインAカラムでは精製する
ことができない。本発明は、PD−1に特異的な突然変異体イヌIgG−B抗体を提供す
ることによってこの困難を克服する;そのような抗体はADCCなどのエフェクター機能
を欠き、業界標準のプロテインAクロマトグラフィを用いて容易に精製することができる
。正確な修飾を図8に示す。
よびアスパラギン(N 325)残基がそれぞれアラニン残基に変異している最初のIg
G−B変異体[cIgGB(−)ADCC]、IgG−Bのヒンジ領域がIgG−Dのヒ
ンジ領域によって置換されている2番目の変異体[cIgGB(+)D−ヒンジ]、およ
びIgG−Bのヒンジ領域がIgG−Aのヒンジ領域で置換されている3番目の変異体[
cIgGB(+)A−ヒンジ]を包含する。加えて、2番目および3番目の変異体はまた
、最初の変異体の同じリシンおよびアスパラギン残基のアラニン残基による置換も含有す
る。本発明における変異したリシンおよびアスパラギン残基のナンバリングは、Tang
et al.[Vet Immunol and Immunopathol,80:
259−270(2001)]においてイヌIgG重鎖に関して述べられているナンバリ
ングスキームに基づく。
抗体配列情報(上記実施例2より)
リーダー配列は下線を付している;CDR配列は太字である;およびフレームワーク配
列は下線または太字のいずれでもない。
抗イヌPD−1抗体のエピトープマッピング
緒言
抗体とそれらの同種タンパク質抗原との相互作用は、標的抗原の特定アミノ酸(エピト
ープ)と抗体の特定アミノ酸(パラトープ)との結合を通して媒介される。エピトープは
、免疫グロブリンによる特異的反応を生じさせる抗原決定基である。エピトープは抗原の
表面の一群のアミノ酸から成る。関心対象のタンパク質は、異なる抗体によって認識され
るいくつかのエピトープを含有し得る。
線状エピトープは、タンパク質中のアミノ酸の一続きの連続配列によって形成され、一方
配座エピトープは一次アミノ酸配列中の不連続な(例えば遠く離れた)アミノ酸から成る
が、三次元タンパク質フォールディング後に一緒になる。
すなわちエピトープ)を同定する工程を指す。標的抗原上でモノクローナル抗体(mAb
)によって認識されるエピトープの同定は重要な適用を有する。例えば、新しい治療薬、
診断薬およびワクチンの開発に役立ち得る。エピトープマッピングはまた、最適化された
治療用mAbの選択にも役立ち、それらの作用機構を解明するのを助けることができる。
エピトープ情報はまた、ユニークな癌エピトープを解明し、ワクチンの防御または病原性
作用を定義することができる。
ることができ、エピトープの推測される性質(すなわち線状対配座)に依存してエピトー
プ同定のためにいくつかの方法が用いられる。線状エピトープをマッピングすることはよ
り直接的であり、比較的実施しやすい。この目的で、線状エピトープマッピングのための
商業サービスはしばしばペプチドスキャニングを用いる。この場合、標的タンパク質の短
いペプチド配列のオーバーラップするセットを化学的に合成し、関心対象の抗体に結合す
るそれらの能力に関して試験する。戦略は迅速で高スループットであり、比較的安価に実
施される。他方で、不連続エピトープのマッピングは技術的により難易度が高く、より専
門的な技術、例えばモノクローナル抗体とその標的タンパク質とのx線共結晶構造解析、
水素−重水素(H/D)交換、および/または酵素消化と組み合わせた質量分析法などを
必要とする。
のマッピング:
抗PD−1 mAbについてのエピトープを形成するアミノ酸を同定するために、15
アミノ酸長であり、10個のアミノ酸がオーバーラップしている合計28個のペプチドを
化学的に合成した。オーバーラップするペプチドのこのライブラリは、完全長イヌPD−
1タンパク質をカバーするように設計された。これらのペプチドの配列を以下の表6に列
挙する。ペプチド−抗体結合の測定を、抗体試料をProArray Ultra(登録
商標)ペプチドマイクロアレイに取り付け、次いで蛍光標識二次抗体と共にインキュベー
トすることによって実施した。すべてのペプチドを別々に合成し、その後ProImmu
ne(登録商標)マウスIgG対照と共にProArray Ultra(登録商標)ス
ライド表面に結合する。この最適化工程は、ペプチドが、対応するタンパク質領域の特性
を密接に模倣し、遊離ペプチド自体の固有の物理化学的変動を回避して、適合するペプチ
ドとタンパク質の組合せアレイプラットフォームを生成するように、ペプチドをアレイ上
に提示することを確実にする。試験分析物(ペプチド)を別々のスポットでProArr
ay Ultra(登録商標)スライドに分注し、適切なgalファイルは、生じたアレ
イ特徴を沈殿した分析物に正確に整列することを可能にする。mAbの非特異的結合を低
減するために有効なブロッキング緩衝液を使用してProArray Ultra(登録
商標)スライドをブロックした。次にそれらをmAb試料と共にインキュベートし、次い
で特異的蛍光標識二次抗体と共にインキュベートした。数回の洗浄段階後、ProArr
ay Ultra(登録商標)アレイを乾燥し、高分解能蛍光マイクロアレイスキャニン
グシステムを用いて走査した。蛍光標識ProArray Ultra(登録商標)スラ
イドを走査した後、スキャナーが画像を記録し、これを、走査したマイクロアレイスライ
ド上の各蛍光スポットに関連する蛍光強度のレベルの解釈および定量化を可能にする、画
像解析ソフトウエアを用いて評価した。この実験の結果は、イヌPD−1ペプチドの一部
が評価したmAbの一部によって認識されることを示した。mAbの同一性およびこれら
のmAbによって認識されるアミノ酸配列を表7に列挙する。この試験は、mAb 2H
9が、配列番号:84によって表されるアミノ酸配列から成るイヌPD−1の細胞外ドメ
インに位置するエピトープを認識することおよびmAb 1A1が、配列番号:84によ
って表されるアミノ酸配列および配列番号:83によって表されるアミノ酸配列によって
表されるオーバーラップするアミノ酸配列を含有するエピトープを認識することを指し示
す。
抗イヌPD−1によって認識される潜在的に不連続なエピトープを同定するために、化
学的架橋および質量分析検出に基づく方法を使用した(CovalX(登録商標)Ins
trument Incorporated)。イヌPD−1のエピトープマッピングへ
のこの技術の適用は、表8に列挙されている指示mAbによって認識されるエピトープの
少なくとも部分の同定をもたらした。表8からわかるように、mAb 3B6は、配列番
号:99によって表されるアミノ酸配列内のイヌPD−1の細胞外ドメインに位置するエ
ピトープの少なくとも一部分を認識し、およびmAb 2G9は、配列番号:100によ
って表されるアミノ酸配列内のエピトープの少なくとも一部分を認識する。他方で、mA
b 1E4およびmAb 1B5は、それぞれ配列番号:101によって表されるアミノ
酸配列および配列番号:102によって表されるアミノ酸配列内のエピトープの少なくと
も一部分を認識する。
C−Orbitrap質量分析法によって実施した測定は、イヌ化抗体2G9によって認
識されるイヌPD−1上のエピトープが配列番号:2のR62、R69、R72およびR
75を含有することを示す。イヌ化抗体3B6によって認識されるイヌPD−1上のエピ
トープに関する類似の測定は、配列番号:2のR75およびR90を含有する。したがっ
て、R75は、イヌPD−1の1またはそれ以上のエピトープにおける特に重要なアミノ
酸残基であると思われる。興味深いことに、これらの分析を実施した後、1A1のCDR
についてのアミノ酸配列は2G9のものと同一であることが認められた。これら2つの非
常に異なる方法によって得られた、2G9が結合するPD−1上の領域と1A1に関して
認められたものとの一致は、この領域が、抗イヌPD−1抗体によって認識されるPD−
1エピトープに含まれるアミノ酸残基を含有することを指し示す(以下の表7および8参
照)。
列の領域は、イヌPD−1の細胞外ドメイン内にある。認識された領域は以下のペプチド
に含有される(以下の表7および8参照)。
ProImmune(登録商標)MicroArrayで認識された(表7参照)。
いペプチド(配列番号:103)とより短いペプチド(配列番号:104)の両方に含有
され、配列番号:2のR90はより長いペプチド中に存在する。これら5個のアルギニン
残基は、イヌPD−1の1またはそれ以上のエピトープにおける重要なアミノ酸残基であ
ると思われる。表6〜8に示すように、星印を付したメチオニン残基(*)はトレオニン
残基であるとも報告されている。
(例えばGenbank配列またはGeneIDエントリ)、特許出願または特許が、参
照により本明細書に組み込まれることが具体的におよび個別に指示されているかのごとく
同じように参照により本明細書に組み込まれる。参照による組込みのこの声明は、37
C.F.R.§1.57(b)(1)に従って、そのような引用が、該当する参照による
組込みの声明に直接近接していない場合でも、各々が37 C.F.R.§1.57(b
)(2)に従って明確に特定される、ありとあらゆる個々の公表文献、データベースエン
トリ(例えばGenbank配列またはGeneIDエントリ)、特許出願または特許に
関連することが出願人によって意図される。参照による組込みの該当する声明が、存在す
る場合、本明細書内に包含されることは、いかなる意味においても参照による組込みのこ
の一般的な声明を弱めるものではない。本明細書での参考文献の引用は、その参考文献が
関連する先行技術であることの承認とは見なされず、またこれらの公表文献または資料の
内容または日付に関するいかなる承認も構成しない。
実際に、本明細書で述べるものに加えて本発明の様々な変更が前記説明および添付の図面
から当業者に明らかになる。そのような変更は付属の特許請求の範囲内に含まれることが
意図されている。
ると考えられる。本明細書で示し、説明したものに加えて本発明の様々な変更が前記説明
から当業者に明らかになり、それらは付属の特許請求の範囲内に含まれる。
Claims (6)
- イヌプログラム死受容体1(イヌPD−1)に特異的に結合する単離された哺乳動物抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体が、3つの軽鎖相補性決定領域(CDR):CDR軽鎖1(CDRL1)、CDR軽鎖2(CDRL2)およびCDR軽鎖3(CDRL3);ならびに3つの重鎖CDR:CDR重鎖1(CDRH1)、CDR重鎖2(CDRH2)およびCDR重鎖3(CDRH3)を含有し、
(a)CDRL1が、配列番号:15であるアミノ酸配列を含有し;
(b)CDRL2が、配列番号:21であるアミノ酸配列を含有し;
(c)CDRL3が、配列番号:26であるアミノ酸配列を含有し;
(d)CDRH1が、配列番号:29であるアミノ酸配列を含有し;
(e)CDRH2が、配列番号:35であるアミノ酸配列を含有し;
(f)CDRH3が、配列番号:114であるアミノ酸配列を含有し、
そして、前記抗体またはその抗原結合フラグメントがイヌPD−1に結合し、およびイヌPD−1のイヌプログラム死リガンド1(PD−L1)への結合をブロックする、単離された哺乳動物抗体またはその抗原結合フラグメント。 - 前記哺乳動物抗体がマウス抗体である、請求項1に記載の単離された哺乳動物抗体またはその抗原結合フラグメント。
- 前記哺乳動物抗体がイヌ化抗体である、請求項1に記載の単離された哺乳動物抗体またはその抗原結合フラグメント。
- 請求項1〜3のいずれかに記載の哺乳動物抗体またはその抗原結合フラグメントの、重鎖もしくはその抗原結合フラグメントおよび軽鎖もしくはその抗原結合フラグメントの1対、をコードする単離された核酸。
- 請求項4に記載の核酸を含有する発現ベクター。
- 請求項3に記載のイヌ化抗体または抗原結合フラグメント、および医薬的に許容される担体または希釈剤を含有する医薬組成物。
Applications Claiming Priority (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201361918946P | 2013-12-20 | 2013-12-20 | |
US201361918847P | 2013-12-20 | 2013-12-20 | |
US61/918,847 | 2013-12-20 | ||
US61/918,946 | 2013-12-20 | ||
US201462030812P | 2014-07-30 | 2014-07-30 | |
US62/030,812 | 2014-07-30 | ||
JP2016540607A JP6622703B2 (ja) | 2013-12-20 | 2014-12-19 | アンタゴニストの、抗イヌpd−1抗体 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016540607A Division JP6622703B2 (ja) | 2013-12-20 | 2014-12-19 | アンタゴニストの、抗イヌpd−1抗体 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020014476A JP2020014476A (ja) | 2020-01-30 |
JP6974409B2 true JP6974409B2 (ja) | 2021-12-01 |
Family
ID=52273133
Family Applications (8)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016540607A Active JP6622703B2 (ja) | 2013-12-20 | 2014-12-19 | アンタゴニストの、抗イヌpd−1抗体 |
JP2016540605A Active JP6681832B2 (ja) | 2013-12-20 | 2014-12-19 | イヌ化抗体 |
JP2016540606A Active JP6701079B2 (ja) | 2013-12-20 | 2014-12-19 | ヒトpd−1に対するイヌ化マウス抗体 |
JP2019182256A Active JP6974409B2 (ja) | 2013-12-20 | 2019-10-02 | アンタゴニストの、抗イヌpd−1抗体 |
JP2019194872A Active JP7142618B2 (ja) | 2013-12-20 | 2019-10-28 | イヌ化抗体 |
JP2020005740A Pending JP2020072727A (ja) | 2013-12-20 | 2020-01-17 | ヒトpd−1に対するイヌ化マウス抗体 |
JP2022145331A Active JP7504952B2 (ja) | 2013-12-20 | 2022-09-13 | イヌ化抗体 |
JP2024048914A Pending JP2024075741A (ja) | 2013-12-20 | 2024-03-26 | イヌ化抗体 |
Family Applications Before (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016540607A Active JP6622703B2 (ja) | 2013-12-20 | 2014-12-19 | アンタゴニストの、抗イヌpd−1抗体 |
JP2016540605A Active JP6681832B2 (ja) | 2013-12-20 | 2014-12-19 | イヌ化抗体 |
JP2016540606A Active JP6701079B2 (ja) | 2013-12-20 | 2014-12-19 | ヒトpd−1に対するイヌ化マウス抗体 |
Family Applications After (4)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019194872A Active JP7142618B2 (ja) | 2013-12-20 | 2019-10-28 | イヌ化抗体 |
JP2020005740A Pending JP2020072727A (ja) | 2013-12-20 | 2020-01-17 | ヒトpd−1に対するイヌ化マウス抗体 |
JP2022145331A Active JP7504952B2 (ja) | 2013-12-20 | 2022-09-13 | イヌ化抗体 |
JP2024048914A Pending JP2024075741A (ja) | 2013-12-20 | 2024-03-26 | イヌ化抗体 |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (9) | US10106607B2 (ja) |
EP (4) | EP3083685A2 (ja) |
JP (8) | JP6622703B2 (ja) |
CN (7) | CN106029697B (ja) |
AU (6) | AU2014368453B2 (ja) |
BR (2) | BR112016014293B1 (ja) |
CA (5) | CA2932515C (ja) |
DK (1) | DK3083694T3 (ja) |
ES (1) | ES2969350T3 (ja) |
FI (1) | FI3083694T3 (ja) |
PT (1) | PT3083694T (ja) |
RU (4) | RU2732604C2 (ja) |
WO (3) | WO2015091910A2 (ja) |
Families Citing this family (40)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2932515C (en) | 2013-12-20 | 2023-08-01 | Intervet International B.V. | Caninized antibodies |
RU2722562C2 (ru) | 2014-09-30 | 2020-06-01 | Интервет Интернэшнл Б.В. | Антитела к pd-l1, связывающие pd-l1 собаки |
CN113861294B (zh) | 2015-04-02 | 2024-03-08 | 英特维特国际股份有限公司 | 针对犬白介素-4受体α的抗体 |
US10513558B2 (en) | 2015-07-13 | 2019-12-24 | Cytomx Therapeutics, Inc. | Anti-PD1 antibodies, activatable anti-PD1 antibodies, and methods of use thereof |
KR20180036974A (ko) | 2015-07-16 | 2018-04-10 | 바이오엑셀 테라퓨틱스 인코포레이티드 | 면역조절을 이용하는 암의 치료를 위한 신규한 접근법 |
CA2995849A1 (en) * | 2015-08-31 | 2017-03-09 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Chimeric aav-anti-vegf for treating cancer in canines |
US10323091B2 (en) | 2015-09-01 | 2019-06-18 | Agenus Inc. | Anti-PD-1 antibodies and methods of use thereof |
MA43186B1 (fr) | 2015-11-03 | 2022-03-31 | Janssen Biotech Inc | Anticorps se liant spécifiquement à pd-1 et leurs utilisations |
US11091556B2 (en) | 2015-12-18 | 2021-08-17 | Intervet Inc. | Caninized human antibodies to human IL-4R alpha |
WO2017102920A1 (en) * | 2015-12-18 | 2017-06-22 | Intervet International B.V. | Caninized human antibodies to human and canine il-4r alpha |
EP3471754A1 (en) | 2016-06-20 | 2019-04-24 | Kymab Limited | Anti-pd-l1 antibodies |
JP6960634B2 (ja) * | 2016-08-15 | 2021-11-05 | 国立大学法人北海道大学 | 抗pd−l1抗体 |
BR112019002850A2 (pt) * | 2016-08-15 | 2019-06-25 | Fuso Pharmaceutical Ind | anticorpo anti-pd-1 |
CN110114369A (zh) * | 2016-10-17 | 2019-08-09 | 威隆股份公司 | 修饰的抗体恒定区 |
AU2017373945A1 (en) | 2016-12-07 | 2019-06-20 | Agenus Inc. | Antibodies and methods of use thereof |
KR20190141658A (ko) * | 2017-03-29 | 2019-12-24 | 셀진 코포레이션 | Pd-1 결합 단백질을 포함하는 제제 및 이의 제조 방법 |
GB2578867A (en) * | 2018-10-09 | 2020-06-03 | Genome Res Ltd | Animal models and therapeutic molecules |
JP7453219B2 (ja) | 2018-10-11 | 2024-03-19 | インヒブリックス, インコーポレイテッド | Pd-1単一ドメイン抗体およびその治療用組成物 |
KR20210110563A (ko) * | 2018-10-18 | 2021-09-08 | 킨드레드 바이오사이언시스, 인코포레이티드 | 수의학적 용도를 위한 신생아 fc 수용체(fcrn)에 변경된 결합을 갖는 fc 변이체 |
CN109452229B (zh) * | 2018-11-19 | 2021-10-22 | 百奥赛图(北京)医药科技股份有限公司 | 狗源化pd-1基因改造动物模型的制备方法及应用 |
SG11202105153RA (en) * | 2018-11-19 | 2021-06-29 | Biocytogen Pharmaceuticals Beijing Co Ltd | Anti-pd-1 antibodies and uses thereof |
US20220048981A1 (en) * | 2018-12-05 | 2022-02-17 | Bica Therapeutics Inc. | Modified product of fc domain of antibody |
JP2022516027A (ja) * | 2018-12-27 | 2022-02-24 | キンドレッド バイオサイエンシズ インコーポレイテッド | 動物用IgGFcバリアント |
CN113087797B (zh) * | 2019-06-03 | 2021-12-31 | 北京希诺谷生物科技有限公司 | 抗犬pd-1抗体及其应用 |
CN114174337A (zh) | 2019-07-15 | 2022-03-11 | 英特维特国际股份有限公司 | 针对犬ctla-4的犬源化抗体 |
US20220251209A1 (en) | 2019-07-15 | 2022-08-11 | Intervet Inc. | Caninized antibodies to human ctla-4 |
US11629190B2 (en) | 2019-08-15 | 2023-04-18 | Oregon State University | Canine antibody therapeutic for treating cancer |
CN110590959B (zh) * | 2019-09-19 | 2021-01-05 | 北京伟杰信生物科技有限公司 | 重组犬pd-1融合蛋白及其制备方法与应用 |
CA3162031A1 (en) | 2019-12-20 | 2021-06-24 | Mohamad Morsey | Canine interleukin-4 receptor alpha antibodies |
EP4077380A1 (en) | 2019-12-20 | 2022-10-26 | Intervet International B.V. | Bispecific caninized antibodies and bispecific binding partners for treating atopic dermatitis |
WO2021165417A1 (en) | 2020-02-19 | 2021-08-26 | Adivo Gmbh | Modified fc regions |
KR20220155336A (ko) * | 2020-03-18 | 2022-11-22 | 킨드레드 바이오사이언시스, 인코포레이티드 | 수의학적 용도를 위한 항-il4 수용체 항체 |
WO2022079139A1 (en) | 2020-10-15 | 2022-04-21 | Intervet International B.V. | Caninized antibodies to canine interleukin-31 receptor alpha |
GB202107994D0 (en) | 2021-06-04 | 2021-07-21 | Kymab Ltd | Treatment of cancer |
CA3227725A1 (en) | 2021-08-20 | 2023-02-23 | Mohamad Morsey | Homodimer fusion proteins for treating atopic dermatitis |
EP4388004A1 (en) | 2021-08-20 | 2024-06-26 | Intervet International B.V. | Antibodies and igg fusion proteins with an extended half-life |
CA3240188A1 (en) * | 2021-12-10 | 2023-06-15 | Donald L. Siegel | Fully canine anti-canine pd-1 antibodies and uses thereof |
WO2023111128A1 (en) | 2021-12-16 | 2023-06-22 | Intervet International B.V. | Caninized antibodies to canine interleukin-31 receptor alpha ii |
WO2023111157A1 (en) | 2021-12-16 | 2023-06-22 | Intervet International B.V. | Caninized and felinized antibodies to human ngf |
CN117343185B (zh) * | 2023-12-06 | 2024-03-01 | 北京伟杰信生物科技有限公司 | 一种抗犬pd-1抗体及其用途 |
Family Cites Families (71)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4447233A (en) | 1981-04-10 | 1984-05-08 | Parker-Hannifin Corporation | Medication infusion pump |
US4439196A (en) | 1982-03-18 | 1984-03-27 | Merck & Co., Inc. | Osmotic drug delivery system |
US4447224A (en) | 1982-09-20 | 1984-05-08 | Infusaid Corporation | Variable flow implantable infusion apparatus |
US4487603A (en) | 1982-11-26 | 1984-12-11 | Cordis Corporation | Implantable microinfusion pump system |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US4596556A (en) | 1985-03-25 | 1986-06-24 | Bioject, Inc. | Hypodermic injection apparatus |
JP2532858B2 (ja) | 1985-04-01 | 1996-09-11 | セルテツク リミテツド | 形質転換したミエロ―マ細胞系 |
GB8601597D0 (en) | 1986-01-23 | 1986-02-26 | Wilson R H | Nucleotide sequences |
US5260203A (en) | 1986-09-02 | 1993-11-09 | Enzon, Inc. | Single polypeptide chain binding molecules |
DE3785186T2 (de) | 1986-09-02 | 1993-07-15 | Enzon Lab Inc | Bindungsmolekuele mit einzelpolypeptidkette. |
US4946778A (en) | 1987-09-21 | 1990-08-07 | Genex Corporation | Single polypeptide chain binding molecules |
US4941880A (en) | 1987-06-19 | 1990-07-17 | Bioject, Inc. | Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly |
US4790824A (en) | 1987-06-19 | 1988-12-13 | Bioject, Inc. | Non-invasive hypodermic injection device |
GB8717430D0 (en) | 1987-07-23 | 1987-08-26 | Celltech Ltd | Recombinant dna product |
DE3920358A1 (de) | 1989-06-22 | 1991-01-17 | Behringwerke Ag | Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung |
US5312335A (en) | 1989-11-09 | 1994-05-17 | Bioject Inc. | Needleless hypodermic injection device |
US5064413A (en) | 1989-11-09 | 1991-11-12 | Bioject, Inc. | Needleless hypodermic injection device |
DK1136556T3 (da) | 1991-11-25 | 2005-10-03 | Enzon Inc | Fremgangsmåde til fremstilling af multivalente antigen-bindende proteiner |
US5383851A (en) | 1992-07-24 | 1995-01-24 | Bioject Inc. | Needleless hypodermic injection device |
DK0656946T4 (da) | 1992-08-21 | 2010-07-26 | Univ Bruxelles | Immunoglobuliner uden lette kæder |
US6005079A (en) | 1992-08-21 | 1999-12-21 | Vrije Universiteit Brussels | Immunoglobulins devoid of light chains |
AU6796094A (en) | 1993-04-29 | 1994-11-21 | Raymond Hamers | Production of antibodies or (functionalized) fragments thereof derived from heavy chain immunoglobulins of (camelidae) |
EP1068241B1 (en) | 1998-04-02 | 2007-10-10 | Genentech, Inc. | Antibody variants and fragments thereof |
GB9818110D0 (en) | 1998-08-19 | 1998-10-14 | Weston Medical Ltd | Needleless injectors and other devices |
US6096002A (en) | 1998-11-18 | 2000-08-01 | Bioject, Inc. | NGAS powered self-resetting needle-less hypodermic jet injection apparatus and method |
ES2571230T3 (es) | 1999-04-09 | 2016-05-24 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | Procedimiento para controlar la actividad de una molécula inmunofuncional |
MXPA02001877A (es) | 1999-08-23 | 2002-08-20 | Dana Farber Cancer Inst Inc | Pd-1, un receptor para b7-4, y usos del mismo. |
EP1210424B1 (en) | 1999-08-23 | 2007-02-07 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Novel b7-4 molecules and uses therefor |
WO2001077332A2 (en) * | 2000-04-07 | 2001-10-18 | Heska Corporation | Compositions and methods related to canine igg and canine il-13 receptors |
AU2001273096B8 (en) | 2000-06-28 | 2005-10-13 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | PD-L2 molecules: novel PD-1 ligands and uses therefor |
US6946292B2 (en) | 2000-10-06 | 2005-09-20 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity |
MXPA03008959A (es) | 2001-04-02 | 2004-10-15 | Wyeth Corp | Pd-1, un receptor para b7-4 y sus usos. |
WO2003042402A2 (en) | 2001-11-13 | 2003-05-22 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Agents that modulate immune cell activation and methods of use thereof |
EP1485126A4 (en) | 2001-12-21 | 2007-03-21 | Idexx Lab Inc | DOG IMMUNOGLOBULIN VARIABLE DOMAINS, DOG ANTIBODIES, AND METHOD FOR THEIR PRODUCTION AND USE |
US8093357B2 (en) * | 2002-03-01 | 2012-01-10 | Xencor, Inc. | Optimized Fc variants and methods for their generation |
FI2206517T3 (fi) | 2002-07-03 | 2023-10-19 | Ono Pharmaceutical Co | Immuunopotentioivia koostumuksia käsittäen anti-PD-L1 -vasta-aineita |
AU2004290070A1 (en) | 2003-11-12 | 2005-05-26 | Biogen Idec Ma Inc. | Neonatal Fc receptor (FcRn)-binding polypeptide variants, dimeric Fc binding proteins and methods related thereto |
EP1735348B1 (en) * | 2004-03-19 | 2012-06-20 | Imclone LLC | Human anti-epidermal growth factor receptor antibody |
TW200902555A (en) | 2005-01-03 | 2009-01-16 | Hoffmann La Roche | Antibodies against IL-13 receptor alpha 1 and uses thereof |
EP3530736A3 (en) | 2005-05-09 | 2019-11-06 | ONO Pharmaceutical Co., Ltd. | Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics |
UA95329C2 (ru) | 2006-12-14 | 2011-07-25 | Шеринг-Плау Лтд. | Собачий тимусный стромальный лимфопоэтин и его применение |
RU2478400C2 (ru) * | 2006-12-27 | 2013-04-10 | Эмори Юниверсити | Композиции и способы лечения инфекций и опухолей |
AU2008266951B2 (en) | 2007-06-18 | 2013-12-12 | Merck Sharp & Dohme B.V. | Antibodies to human programmed death receptor PD-1 |
EP2331579B1 (en) * | 2008-09-04 | 2017-07-05 | Vet Therapeutics, Inc. | Monoclonal antibodies |
KR101050829B1 (ko) * | 2008-10-02 | 2011-07-20 | 서울대학교산학협력단 | 항 pd-1 항체 또는 항 pd-l1 항체를 포함하는 항암제 |
CN108997498A (zh) | 2008-12-09 | 2018-12-14 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 抗-pd-l1抗体及它们用于增强t细胞功能的用途 |
JP5844159B2 (ja) | 2009-02-09 | 2016-01-13 | ユニヴェルシテ デクス−マルセイユUniversite D’Aix−Marseille | Pd−1抗体およびpd−l1抗体ならびにその使用 |
EP2411050A4 (en) | 2009-03-25 | 2013-07-17 | Vet Therapeutics Inc | ANTIBODY REGIONS WITH A CONSTANT DOMAIN AND THEIR USE |
US20120093814A1 (en) * | 2009-03-30 | 2012-04-19 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Fusion Proteins Comprising Canine FC Portions |
WO2010117448A2 (en) | 2009-04-05 | 2010-10-14 | Provenance Biopharmaceuticals Corp. | Chimeric immunocytokines and methods of use thereof |
US9616120B2 (en) | 2010-03-04 | 2017-04-11 | Vet Therapeutics, Inc. | Monoclonal antibodies directed to CD20 |
JP2013520999A (ja) | 2010-03-04 | 2013-06-10 | ベット・セラピューティクス・インコーポレイテッド | Cd52に対するモノクローナル抗体 |
US8907053B2 (en) | 2010-06-25 | 2014-12-09 | Aurigene Discovery Technologies Limited | Immunosuppression modulating compounds |
LT2691112T (lt) | 2011-03-31 | 2018-07-25 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Stabilios antikūnų kompozicijos prieš žmogaus programuojamos mirties receptorių pd-1 ir susiję gydymo būdai |
CA2835094C (en) | 2011-05-06 | 2020-12-22 | David Gearing | Anti-nerve growth factor antibodies and methods of preparing and using the same |
GB2528401A (en) | 2011-05-06 | 2016-01-20 | Nvip Pty Ltd | Anti-nerve growth factor antibodies and methods of preparing and using the same |
SG194793A1 (en) | 2011-05-06 | 2013-12-30 | Nvip Pty Ltd | Anti-nerve growth factor antibodies and methods of preparing and using the same |
BR112013028652A8 (pt) | 2011-05-06 | 2017-12-26 | Nvip Pty Ltd | Anticorpos anti-fator de crescimento neuronal e métodos para preparação e utilização dos mesmos |
GB201114858D0 (en) | 2011-08-29 | 2011-10-12 | Nvip Pty Ltd | Anti-nerve growth factor antibodies and methods of using the same |
TR201104773A1 (tr) * | 2011-05-16 | 2013-01-21 | Yeşi̇l İsmet | Belaltı giysisi. |
US8790651B2 (en) * | 2011-07-21 | 2014-07-29 | Zoetis Llc | Interleukin-31 monoclonal antibody |
CN103958545A (zh) | 2011-08-30 | 2014-07-30 | Nvip私人有限公司 | 犬源化肿瘤坏死因子抗体及其使用方法 |
EP2766391A1 (en) * | 2011-10-13 | 2014-08-20 | NVIP Pty Ltd | Canine/feline cd20 binding epitope and compositions for binding thereto |
WO2013063186A2 (en) | 2011-10-26 | 2013-05-02 | Novartis Animal Health Us, Inc. | Monoclonal antibodies and methods of use |
JP2015509714A (ja) * | 2012-02-22 | 2015-04-02 | エヌヴィーアイピー プロプライエタリー リミテッド | 腫瘍壊死因子レセプター融合タンパク質及び前記タンパク質を使用する方法 |
JP6062748B2 (ja) | 2013-01-22 | 2017-01-18 | 株式会社パイロットコーポレーション | 水性ボールペン |
SG11201601844TA (en) * | 2013-09-13 | 2016-04-28 | Beigene Ltd | Anti-pd1 antibodies and their use as therapeutics and diagnostics |
CA2932515C (en) * | 2013-12-20 | 2023-08-01 | Intervet International B.V. | Caninized antibodies |
ES2783026T3 (es) * | 2014-02-04 | 2020-09-16 | Pfizer | Combinación de un antagonista de PD-1 y un agonista de 4-1BB para el tratamiento de cáncer |
US10280223B2 (en) | 2014-07-09 | 2019-05-07 | Nippon Zenyaku Kogyo Co., Ltd. | Anti-canine PD-1 antibody or anti-canine PD-L1 antibody |
RU2722562C2 (ru) * | 2014-09-30 | 2020-06-01 | Интервет Интернэшнл Б.В. | Антитела к pd-l1, связывающие pd-l1 собаки |
-
2014
- 2014-12-19 CA CA2932515A patent/CA2932515C/en active Active
- 2014-12-19 WO PCT/EP2014/078653 patent/WO2015091910A2/en active Application Filing
- 2014-12-19 RU RU2016129113A patent/RU2732604C2/ru active
- 2014-12-19 US US15/105,211 patent/US10106607B2/en active Active
- 2014-12-19 AU AU2014368453A patent/AU2014368453B2/en active Active
- 2014-12-19 US US15/104,844 patent/US9944704B2/en active Active
- 2014-12-19 BR BR112016014293-4A patent/BR112016014293B1/pt active IP Right Grant
- 2014-12-19 CA CA3185195A patent/CA3185195A1/en active Pending
- 2014-12-19 CN CN201480075969.3A patent/CN106029697B/zh active Active
- 2014-12-19 CN CN202110533946.4A patent/CN113402609B/zh active Active
- 2014-12-19 CN CN201480069679.8A patent/CN105829344B/zh active Active
- 2014-12-19 CN CN201480075559.9A patent/CN106029695B/zh active Active
- 2014-12-19 ES ES14833345T patent/ES2969350T3/es active Active
- 2014-12-19 CN CN202110533910.6A patent/CN113173993B/zh active Active
- 2014-12-19 WO PCT/EP2014/078655 patent/WO2015091911A2/en active Application Filing
- 2014-12-19 AU AU2014368449A patent/AU2014368449C1/en active Active
- 2014-12-19 EP EP14821162.6A patent/EP3083685A2/en active Pending
- 2014-12-19 EP EP14833345.3A patent/EP3083694B1/en active Active
- 2014-12-19 AU AU2014368450A patent/AU2014368450B2/en active Active
- 2014-12-19 JP JP2016540607A patent/JP6622703B2/ja active Active
- 2014-12-19 CA CA2932567A patent/CA2932567C/en active Active
- 2014-12-19 WO PCT/EP2014/078665 patent/WO2015091914A2/en active Application Filing
- 2014-12-19 JP JP2016540605A patent/JP6681832B2/ja active Active
- 2014-12-19 US US15/104,838 patent/US10023636B2/en active Active
- 2014-12-19 FI FIEP14833345.3T patent/FI3083694T3/fi active
- 2014-12-19 RU RU2016129274A patent/RU2676158C1/ru active
- 2014-12-19 CN CN202410327917.6A patent/CN117986366A/zh active Pending
- 2014-12-19 PT PT148333453T patent/PT3083694T/pt unknown
- 2014-12-19 EP EP22156561.7A patent/EP4124624A3/en active Pending
- 2014-12-19 RU RU2020129387A patent/RU2761663C2/ru active
- 2014-12-19 CA CA2932519A patent/CA2932519C/en active Active
- 2014-12-19 CN CN202311519683.7A patent/CN117603354A/zh active Pending
- 2014-12-19 JP JP2016540606A patent/JP6701079B2/ja active Active
- 2014-12-19 EP EP14833344.6A patent/EP3083693B1/en active Active
- 2014-12-19 DK DK14833345.3T patent/DK3083694T3/da active
- 2014-12-19 RU RU2016129280A patent/RU2687209C1/ru active
- 2014-12-19 BR BR112016014284A patent/BR112016014284A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2014-12-19 CA CA3154540A patent/CA3154540A1/en active Pending
-
2018
- 2018-02-12 US US15/894,493 patent/US10711061B2/en active Active
- 2018-06-13 US US16/007,077 patent/US10927172B2/en active Active
- 2018-09-13 US US16/130,578 patent/US11248047B2/en active Active
-
2019
- 2019-10-02 JP JP2019182256A patent/JP6974409B2/ja active Active
- 2019-10-28 JP JP2019194872A patent/JP7142618B2/ja active Active
-
2020
- 2020-01-17 JP JP2020005740A patent/JP2020072727A/ja active Pending
- 2020-06-05 US US16/893,529 patent/US11680097B2/en active Active
- 2020-07-27 AU AU2020210142A patent/AU2020210142B2/en active Active
-
2021
- 2021-02-12 AU AU2021200946A patent/AU2021200946A1/en active Pending
-
2022
- 2022-01-12 US US17/573,870 patent/US20220204615A1/en active Pending
- 2022-09-13 JP JP2022145331A patent/JP7504952B2/ja active Active
-
2023
- 2023-05-08 US US18/313,759 patent/US20240084004A1/en active Pending
- 2023-12-21 AU AU2023285870A patent/AU2023285870A1/en active Pending
-
2024
- 2024-03-26 JP JP2024048914A patent/JP2024075741A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6974409B2 (ja) | アンタゴニストの、抗イヌpd−1抗体 | |
JP6797111B2 (ja) | イヌpd−l1と結合するpd−l1抗体 | |
BR112016014277B1 (pt) | Anticorpo de mamífero isolado ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, e, composição farmacêutica |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20191002 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20201027 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210120 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20210511 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210906 |
|
C60 | Trial request (containing other claim documents, opposition documents) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C60 Effective date: 20210906 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20210914 |
|
C21 | Notice of transfer of a case for reconsideration by examiners before appeal proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C21 Effective date: 20210921 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20211012 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20211104 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6974409 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |