JP2015509714A - 腫瘍壊死因子レセプター融合タンパク質及び前記タンパク質を使用する方法 - Google Patents
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Abstract
Description
TNFアンタゴニスト(例えば抗TNF抗体、可溶性TNFレセプタータンパク質及びTNFレセプター融合タンパク質)の使用は、TNFによって媒介される前炎症性作用(例えば前炎症性サイトカイン発現(IL-1、IL-8)及び組織破壊の誘発)が逆転可能であることを示した。さらにまた、組換えTNFR-Fc融合タンパク質(例えばENBREL(エタネルセプト(Etanercept)、Immunex)の使用は、TNFアンタゴニストを用いてTNF関連症状、特に慢性関節リウマチを治療できることを示した。
したがって、腫瘍壊死因子レセプター(TNFR)-免疫グロブリンFcドメイン融合タンパク質又は抗TNF中和モノクローナル抗体は、多様なヒト炎症性疾患(慢性関節リウマチ及び乾癬性関節炎を含む)の治療のための優れた治療アプローチであることが証明された。
イヌの炎症発生におけるTNFの役割は詳細に記されてきた。例えば、後膝関節の関節炎を示すイヌの滑液の細胞浸潤物にはTNFアルファの分泌増加があることが観察され、さらに広範囲の炎症性応答の部分として緑内障を示すイヌの中心部及び辺縁部網膜ではII型TNFレセプターが顕著に上昇することが示された。ヒトTNFR-Fc融合タンパク質エタネルセプト(huTNFR-Fc(Immunex)、TNFアンタゴニスト)によるイヌの治療は、人間の心臓疾患の閉鎖胸部モデルでバルーン閉鎖によって誘発される虚血再灌流後の心筋損傷を約25−40%減少させ、関連する炎症性マーカー(例えばICAM-1及びNF-kB)の同時低下を示した。同様に、2mg/kgのTNFR-Fcを用いたとき、虚血再灌流の開放イヌ胸部モデルでは梗塞サイズの60%減少もまた示された。しかしながら、イヌの疾患治療のための治療薬としてのhuTNFR-Fcの使用は、イヌに注射したときのヒトタンパク質の免疫原性のために人間の疾患のこのモデル以外には指定されない。さらにまた、エタネルセプトのIgG Fcドメインは補体動員性であり、したがって媒介される免疫応答のために炎症性疾患との関係では望ましくない。
したがって、イヌの広範囲の炎症媒介症状でTNFは中心的に関与するので、イヌのTNF関連疾患及び炎症症状を治療するために、TNFの長期阻害に用いることができるイヌTNF阻害剤が希求される。
典型的には、該キメラ融合ポリペプチドは特異的にイヌTNFと結合する。典型的には、該キメラ融合ポリペプチドはイヌTNFの生物学的活性を中和する。ある種の実施態様では、TNFはTNF-α及び/又はTNF-βを指す。該キメラ融合タンパク質は安定性及びin vivo半減期の改善を示す。さらにまた、該キメラ融合ポリペプチドは、これまでに知られている抗TNF化合物をイヌに投与することに付随する問題を、もっとも具体的には、イヌに投与した時の前記ポリペプチドに対する中和抗体(特に異種抗体)の生成の制限によって克服する。
典型的には、イヌTNFレセプターポリペプチドの細胞外ドメインは、イヌ腫瘍壊死因子レセプターの切端形を含むか前記切端形から成るか又は本質的に前記切端形から成り、前記切端形は膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインの両方を欠く。典型的には、細胞外ドメイン又はそのフラグメントは、イヌTNFレセプターポリペプチドのリガンド結合部分を含み、TNFと結合する。ある種の実施態様では、該キメラ融合ポリペプチドは、イヌTNFレセプターポリペプチドの細胞外ドメインとつながれたシグナル配列を含む。典型的には、該細胞外ドメイン又はそのフラグメントはイヌTNFの生物学的活性を相殺する。
典型的には、該イヌTNFレセプターポリペプチドの細胞外ドメインのフラグメントはイヌTNFと特異的に結合する。典型的には、該フラグメントはイヌTNFの生物学的活性を相殺する。
ある種の実施態様では、該キメラ融合ポリペプチドは、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13及び前述のもののいずれかと少なくとも90、95、96、97、98又は99%の配列相同性を有する配列(前記相同な配列はイヌTNFと結合する)から成る群から選択されるアミノ酸配列を含むか、前記配列から成るか、又は本質的に前記配列から成る。典型的には、前記相同な配列はイヌTNFの生物学的活性を相殺する。
ある種の実施態様では、該キメラ融合ポリペプチドは、配列番号:15、配列番号:16、配列番号:17、配列番号:18及び前述のもののいずれかと少なくとも90、95、96、97、98又は99%の配列相同性を有する配列(前記相同な配列はイヌTNFと結合する)から成る群から選択されるアミノ酸配列を含むか、前記配列から成るか、又は本質的に前記配列から成る。典型的には、前記相同な配列はイヌTNFの生物学的活性を相殺する。
ある種の実施態様では、該キメラ融合ポリペプチドは、配列番号:19、配列番号:20、配列番号:21、配列番号:22及び前述のもののいずれかと少なくとも90、95、96、97、98又は99%の配列相同性を有する配列(前記相同な配列はイヌTNFと結合する)から成る群から選択されるアミノ酸配列を含むか、前記配列から成るか、又は本質的に前記配列から成る。典型的には、前記相同な配列はイヌTNFの生物学的活性を相殺する。
ある種の実施態様では、本発明のキメラ融合ポリペプチドのFcドメインのアミノ酸残基のアミノ酸配列に対する改変を実施できる。前記改変は、1つ以上のアミノ酸残基の付加、置換又は欠失を含むことができる。前記アミノ酸の変更は、典型的には該抗体の機能的な特徴を改変するために実施される。例えば、アミノ酸改変を実施して、該キメラ融合ポリペプチドのFcドメイン成分によって媒介される下流のエフェクター機能を、例えばFcレセプターと結合し、補体を活性化し又はADCCを誘発するFcドメイン成分の能力を阻害することによって妨げることができる。さらにまた、改変をFcドメインのアミノ酸残基に実施して、該キメラ融合ポリペプチドの循環半減期を改変することができる。
多様なさらに別の特徴では、本発明は、本発明のキメラ融合ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに及ぶ。多様なさらに別の特徴では、本発明は、本発明のキメラ融合ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのイヌにおける発現に及ぶ。
したがって、本発明のさらに別の特徴は、イヌIgG免疫グロブリン重鎖のFc領域又はそのフラグメントを含むポリペプチドと結合された、イヌTNFレセプターポリペプチドの細胞外ドメイン又はそのフラグメントを含むキメラ融合ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。ある種の実施態様では、該ポリヌクレオチドは、配列番号:28、配列番号:29、配列番号:30、配列番号:31及び前述のもののいずれかと少なくとも90、95、96、97、98又は99%の配列相同性を有する配列(前記相同な配列は、イヌTNFと結合するポリペプチドをコードする)から成る群から選択される配列を含む。典型的には、前記ポリペプチドはイヌTNFの生物学的活性を相殺する。
ある種の実施態様では、該ポリヌクレオチドは、配列番号:15、配列番号:16、配列番号:17、配列番号:18、配列番号:19、配列番号:20、配列番号:21、配列番号:22及び前述のもののいずれかと少なくとも90、95、96、97、98又は99%の配列相同性を有する配列(前記相同な配列はTNFと結合する)から成る群から選択されるアミノ酸配列を含むキメラポリペプチドをコードする。典型的には、前記相同な配列はイヌTNFの生物学的活性を相殺する。
イヌTNFレセプターポリペプチドの細胞外ドメインをコードする単離ポリヌクレオチドがさらに提供される。ある種の実施態様では、該ポリヌクレオチドは、配列番号:1のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも90、95、96、97、98又は99%の配列相同性を有する配列(前記相同な配列はTNFと結合する)を含むイヌTNFレセプター(caTNFR)ポリペプチドをコードする。典型的には、前記相同な配列はイヌTNFの生物学的活性を相殺する。ある種の実施態様では、該ポリヌクレオチドは、配列番号:14のアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも90、95、96、97、98又は99%の配列相同性を有する配列(前記相同な配列はTNFと結合する)を含むイヌTNFレセプター(caTNFR)ポリペプチドをコードする。典型的には、前記相同な配列はイヌTNFの生物学的活性を相殺する。ある種の実施態様では、該ポリヌクレオチドは、配列番号:23又は前記配列と少なくとも90、95、96、97、98又は99%の配列相同性を有する配列(前記相同な配列は、TNFと結合するポリペプチドをコードする)を含む。典型的には、前記ポリペプチドはイヌTNFの生物学的活性を相殺する。配列番号:23は、配列番号:1のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。本発明はさらに、本明細書に記載するポリヌクレオチドの1つを含む組換えベクターに及ぶ。
したがって、本発明のさらにまた別の特徴は、望ましくない炎症応答をその必要があるイヌで予防、軽減又は緩和する方法を提供し、前記方法は以下の工程を含む:
−配列番号:6、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:15、配列番号:16、配列番号:17、配列番号:18、配列番号:19、配列番号:20、配列番号:21及び配列番号:22又は前記配列と少なくとも90、95、96、97、98又は99%の配列相同性を有するポリペプチド配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するキメラ融合ポリペプチド、又はこれらをコードするポリヌクレオチドを含むベクターを提供する工程、及び
−前記記載のものを当該イヌに、当該炎症を予防、軽減又は緩和するために十分である治療的に有効な量で投与する工程。
ある種の実施態様では、該相同な配列はTNFと結合する。典型的には、前記相同な配列はイヌTNFの生物学的活性を相殺する。
ある種の実施態様では、前記方法は、少なくとも1つのさらに別のTNFアンタゴニスト又は抗炎症化合物を該キメラ融合ポリペプチドと一緒に投与する工程をさらに含む。
−配列番号:6、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:15、配列番号:16、配列番号:17、配列番号:18、配列番号:19、配列番号:20、配列番号:21及び配列番号:22又は前記配列と少なくとも90、95、96、97、98又は99%の配列相同性を有するポリペプチド配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するキメラ融合ポリペプチド、又はこれらをコードするポリヌクレオチドを含むベクターを提供する工程、及び
−前記キメラ融合ポリペプチド又はベクターを当該イヌに、腫瘍壊死因子レベルを低下させるために十分である治療的に有効な量で投与する工程。
ある種の実施態様では、該相同な配列はTNFと結合する。典型的には、前記相同な配列はイヌTNFの生物学的活性を相殺する。
ある種の実施態様では、前記方法は、少なくとも1つのさらに別のTNFアンタゴニスト又は抗炎症化合物を該キメラ融合ポリペプチドと一緒に投与する工程をさらに含む。
−配列番号:6、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:15、配列番号:16、配列番号:17、配列番号:18、配列番号:19、配列番号:20、配列番号:21及び配列番号:22又は前記配列と少なくとも90、95、96、97、98又は99%の配列相同性を有するポリペプチド配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するキメラ融合ポリペプチド、又はこれらをコードするポリヌクレオチドを含むベクターを提供する工程、及び
−前記キメラ融合ポリペプチド又はベクターを当該イヌに、該症状を治療又は緩和するために十分である治療的に有効な量で投与する工程。
ある種の実施態様では、該相同な配列はTNFと結合する。典型的には、前記相同な配列はイヌTNFの生物学的活性を相殺する。
ある種の実施態様では、前記方法は、少なくとも1つのさらに別のTNFアンタゴニスト又は抗炎症化合物を該キメラ融合ポリペプチドと一緒に投与する工程をさらに含む。
さらに別のある種の実施態様では、望ましくない炎症性応答又はTNF関連症状(TNF-α関連症状又はTNF-αが主要な炎症媒介因子である症状とも称され得る)には、ベーチェット病、水疱性皮膚炎、好中球性皮膚炎、中毒性表皮壊死、全身性血管炎、壊疽性膿皮症、膿疱性皮膚炎、脳性マラリア、溶血性尿毒症症候群、子癇前症、異系移植片拒絶、中耳炎、蛇咬傷、結節性紅班、脊椎形成異常症候群、移植片対宿主病、皮膚筋炎及び多発性筋炎が含まれ得るが、ただしこれらに限定されない。
−配列番号:6、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:15、配列番号:16、配列番号:17、配列番号:18、配列番号:19、配列番号:20、配列番号:21及び配列番号:22又は前記配列と少なくとも90、95、96、97、98又は99%の配列相同性を有するポリペプチド配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するキメラ融合ポリペプチド、又はこれらをコードするポリヌクレオチドを含むベクターを提供する工程、及び
−前記キメラ融合ポリペプチド又はベクターを当該イヌに、当該炎症を予防、軽減又は緩和するために十分である治療的に有効な量で投与する工程。
ある種の実施態様では、該相同な配列はTNFと結合する。典型的には、前記相同な配列はイヌTNFの生物学的活性を相殺する。
ある種の実施態様では、関節炎又は関節炎症状には、免疫媒介多発性関節炎、慢性関節リウマチ、変形性関節症、若年性特発性関節炎、強直性脊椎炎及び関連症状から成る群から選択される症状が含まれる。
典型的には、関節炎又は関節炎症状の治療は、関節炎症状に起因するか、付随するか又は関節炎症状に帰せられる免疫応答を緩和、阻害、軽減又は抑制することを含む。
−配列番号:6、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:15、配列番号:16、配列番号:17、配列番号:18、配列番号:19、配列番号:20、配列番号:21及び配列番号:22又は前記配列と少なくとも90、95、96、97、98又は99%の配列相同性を有するポリペプチド配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するキメラ融合ポリペプチド、又はこれらをコードするポリヌクレオチドを含むベクターを提供する工程、及び
−前記キメラ融合ポリペプチド又はベクターを当該イヌに、当該炎症を予防、軽減又は緩和するために十分である治療的に有効な量で投与する工程。
ある種の実施態様では、該相同な配列はTNFと結合する。典型的には、前記相同な配列はイヌTNFの生物学的活性を相殺する。
適切な鎮痛剤の例には、ブトルファノール、ブプレノルフィン、フェンタニル、フルニキシンメグルミン、メルジピン、モルヒネ、ナルブフィン及び前記の誘導体が含まれるが、ただしこれらに限定されない。適切なNSAIDには、アセトアミノフェン、アセチルサリチル酸、カルプロフェン、エトドラク、ケトプロフェン、メロキシカム、フィロコキシブ、ロベナコキシブ、デラコキシブなどが含まれるが、ただしこれらに限定されない。
本発明のさらに別の特徴は、医薬として使用される、特に上記に記載の症状のいずれかの治療又は予防で使用される、上記に記載のキメラ融合ポリペプチド又はポリヌクレオチドを提供する。本発明は、上記に記載の症状のいずれかの治療又は予防のための医薬の調製における、上記に記載のキメラ融合ポリペプチド又はポリヌクレオチドの使用に及ぶ。
多様なさらに別の特徴では、本発明は、イヌTNFと結合する、本発明の前述の特徴のいずれかに記載のキメラ融合ポリペプチドを含む組成物に及ぶ。本発明の組成物で用いられるキメラ融合ポリペプチドは、上記に記載のキメラ融合ポリペプチドのいずれかであり得る。ある種の実施態様では、該組成物はさらに少なくとも1つの医薬的に許容できる担体を含む。
さらにまた別の特徴では、本発明は、配列番号:6、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:15、配列番号:16、配列番号:17、配列番号:18、配列番号:19、配列番号:20、配列番号:21、配列番号:22及び前記配列と少なくとも90、95、96、97、98又は99%の配列相同性を有する配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するキメラ融合ポリペプチドを、少なくとも1つの担体、希釈剤又は賦形剤と一緒に含む医薬組成物を提供する。
ある種の実施態様では、該医薬組成物は、少なくとも1つのさらに別のTNFアンタゴニスト化合物及び/又は抗炎症化合物を含む。ある種の実施態様では、該TNFアンタゴニスト化合物はメトトレキセートである。
ある種の実施態様では、該医薬組成物はさらに少なくとも1つの鎮痛剤、NSAID、オピオイド、コルチコステロイド、ステロイド、又は神経成長因子のアンタゴニストを含む。
本発明のさらにまた別の特徴は、イヌIgG免疫グロブリンのFcドメインと機能的に連結されたTNFレセプターポリペプチドの細胞外ドメインを含むキメラ融合ポリペプチドの製造方法を提供し、前記方法は以下の工程を含む:
(i)本発明のキメラ融合ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを発現することができるベクターを含む組換え宿主細胞を提供する工程;
(ii)前記ポリペプチドの発現に適切な条件下で前記宿主細胞を培養する工程;及び
(iii)前記キメラ融合ポリペプチドを回収する工程。
ある種の実施態様では、該宿主細胞は真核細胞である。さらに別の実施態様では、該宿主細胞は原核細胞である。ある種の実施態様では、該ベクターは上記に記載の本発明のベクターである。ある種の実施態様では、該ポリヌクレオチドは上記に記載の本発明のポリヌクレオチドである。
本発明のさらにまた別の特徴は、イヌの関節炎、特に免疫媒介多発性関節炎、慢性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎又は強直性脊椎炎の治療で使用される、本発明の前述の特徴のいずれかのキメラ融合ポリペプチド、又は核酸、又はこの核酸を含む本発明の前述の特徴のいずれかのベクターが提供される。
本発明のさらにまた別の特徴は、イヌの慢性炎症性疾患の治療又は予防用医薬の調製における、本発明の前述の特徴のいずれかのキメラ融合ポリペプチド、又は本発明の前述の特徴の医薬組成物、又は核酸、又はその核酸を含む本発明の前述の特徴のいずれかのベクターの使用を提供する。
本発明のさらにまた別の特徴は、イヌの慢性関節リウマチ又は変形性関節症の治療、抑制、緩和又は予防のための医薬の調製における、本発明の前述の特徴のいずれかのキメラ融合ポリペプチド、又は本発明の前述の特徴の医薬組成物、又は核酸、又はその核酸を含む本発明の前述の特徴のいずれかのベクターの使用を提供する。
さらにまた別の特徴では、本発明のキメラ融合ポリペプチドを産生する細胞株、又はその派生物若しくは子孫細胞が提供される。
本発明のさらにまた別の特徴は、イヌの慢性炎症を治療する、又は痛みに付随する症状を治療する、又はイヌの変形性関節症若しくは慢性関節リウマチに付随する痛みを治療、緩和若しくは抑制するキットを提供し、前記キットは、本発明の前述の特徴のいずれかのキメラ融合ポリペプチド及びその使用のための指示を含む。
したがって、本発明のさらに別の特徴は、本発明のキメラ融合ポリペプチド、特にB型免疫グロブリン重鎖を有するキメラ融合ポリペプチドを精製する方法を提供し、前記方法は、プロテインAを用いてキメラ融合ポリペプチドを精製する工程を含む。ある種の実施態様では、溶出緩衝液はpH5を有する。
本発明のさらにまた別の特徴は、本発明のキメラ融合ポリペプチド、特にB型免疫グロブリン重鎖を有するキメラ融合ポリペプチドの好ましいダイマーの、最適pHでプロテインAカラムから溶出させることによる、CHO細胞発現によって形成される高分子量マルチマーからの選択的精製を提供する。
したがって、本発明のさらに別の特徴は、本発明のキメラ融合ポリペプチド、特にB型免疫グロブリン重鎖を有するキメラ融合ポリペプチドを精製する方法を提供し、前記方法は、4.7より高いpHでキメラ融合ポリペプチドを溶出させる工程を含む。典型的には、pHは4.7から5.3、より典型的には4.8から5.2、より典型的には4.9から5.1であり、もっとも典型的にはpHは5.0である。典型的には、キメラ融合ポリペプチドはCHO細胞発現によって形成される。典型的には、キメラ融合ポリペプチドはプロテインA、例えばプロテインAカラムから溶出され、溶出緩衝液はpH5を有する。
上記方法は、所望のTNFR-Fc融合タンパク質ダイマーを前記の凝集型から精製するために、プロテインAクロマトグラフィーによる標準的精製方法の改変として利用することができる。これによってより高い比活性及び純度をもつ生成物が得られ、さらにまた凝集物の除去は免疫原性の潜在能力を低下させる。免疫グロブリンのプロテインAによる精製の標準的手順は、中性pHでの結合及びpH3での溶出である。
ある種の実施態様では、本方法は、pH4.5−4.7で高分子量マルチマーを溶出させる工程を含む。
本発明の別の特徴は、本発明の上記記載の方法を用いて精製したキメラ融合ポリペプチド及び医薬としての前記の使用(例えば上記に記載の本発明の治療方法における前記の使用)を提供する。
本発明者らは、イヌのTNF媒介症状の治療及び予防で使用される組成物並びの方法を提供する。特に、本発明の組成物及び方法は、TNFレベルを全身的に又は特定の解剖学的局部で低下させるために役立つ。
特に、イヌ免疫グロブリン重鎖定常ドメインの補体動員性変種とイヌTNFレセプター細胞外ドメインとの融合にもかかわらず、得られた本発明のキメラ融合ポリペプチドはイヌTNFと高い特異性で結合し、しかも補体C1qを動員しないということが本明細書で示される。さらにまた、結合は、イヌTNFと細胞膜発現TNFレセプターとの結合を阻害することによって、イヌTNFの生物学的活性を停止させる。前記事象は、イヌの炎症媒介疾患(例えば関節炎)のTNF媒介性誘発、発症又は進行の発生を妨げ又は減少させ、しかも補体カスケードの誘発を介して同時発生する損傷をもたらさないであろう。
本発明のレセプター融合タンパク質は組換えDNAの方法を用いて生成され、イヌTNFに対する結合特異性を示すが、一方、前記レセプター融合タンパク質はまたイヌ宿主に投与されたとき、それらの免疫原性を低下させるイヌ定常ドメイン配列を有する。結果として、異種抗体誘発リスクは最少化される。
本発明の融合タンパク質組成物は、典型的には外因的に、例えば静脈内又は皮下投与によって投与される。しかしながら、ある種の実施態様では、ベクターを用いて、本発明のキメラ融合ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをデリバーできる。したがって、本発明は、TNF媒介炎症性疾患並びに他のTNF関連症状及び疾患の効率的で持続的な治療のための組成物及び方法を提供する。
生成された非免疫原性レセプター融合タンパク質は、イヌTNFに対して高親和性結合を提示することが示される。このレセプター融合タンパク質はイヌTNFの生物学的機能を中和し、極めて具体的に言えばTNFと細胞膜結合レセプターTNFR1との結合を阻害することによってTNFの生物学的機能を中和する。さらにまた、該融合タンパク質はまた、当該定常領域がイヌIgG分子に存在する残基のみを取り込み、その結果、イヌに投与したとき前記融合タンパク質に対する異種抗体が産生されそうもないように設計された。したがって、本発明のイヌ化レセプター融合タンパク質はイヌの慢性炎症性疾患の長期投与に適切である。
さらにまた、該融合タンパク質のFcドメイン成分は、イヌ由来抗体から得られるIgG免疫グロブリン重鎖定常領域を含む(イヌは、本発明の融合タンパク質が投与されるべき標的種である)。該免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、それらが下流のエフェクター機能を媒介しないように選択又は改変される。さらにまた、該レセプター細胞外ドメインと免疫グロブリン重鎖定常ドメインとの融合は、前記融合がレセプタードメインの三次元コンフォーメーションに影響を及ぼさないような態様で実施されるので、所望の標的との結合特異性に変動は存在しないであろう。
ある種のさらに別の実施態様では、本発明の抗イヌTNFレセプター融合タンパク質は、該レセプター融合タンパク質をポリエチレングリコール(PEG)誘導体と反応させることによってPEG化することができる。ある種の実施態様では、該レセプター融合タンパク質は脱フコシル化され、したがってフコース残基を欠く。
本発明はさらにまた、キメラ融合ポリペプチド又はその成分をコードするポリヌクレオチドを適切な発現系で発現させることによって、本発明のレセプター融合タンパク質又は結合メンバーを製造することに及ぶ。
本発明のレセプター融合タンパク質をコードする核酸配列は、当業者に周知の技術を用いて当業者によって容易に調製され得る。そのような技術は、例えば以下に記載されている:Sambrook et al. “Molecular Cloning”, A laboratory manual, cold Spring Harbor Laboratory Press, Volumes 1-3, 2001 (ISBN-0879695773);及びAusubel et al. Short Protocols in Molecular Biology. John Wiley and Sons, 4th Edition, 1999 (ISBN- 0471250929)。
多様な種々の宿主細胞でポリペプチドをクローニング及び発現する系は周知である。適切な宿主細胞には、細菌、哺乳動物細胞、酵母、昆虫及びバキュロウイルス系が含まれる。異種ポリペプチドの発現のために当業界で利用できる哺乳動物細胞には、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞、HeLa細胞、ベビーハムスター腎臓細胞及びNSOマウスミエローマ細胞が含まれる。一般的な好ましい細菌宿主は大腸菌(E. coli)である。原核細胞(例えば大腸菌)でのレセプター融合タンパク質及びレセプター融合タンパク質フラグメントの発現は当業界では十分に確立されている。真核細胞培養での発現もまたポリペプチド製造のための1つの選択肢として当業者には利用可能である。
本発明のレセプター融合タンパク質は、組換え手段によって直接的に製造されるだけでなく異種ポリペプチドを含む融合ポリペプチドとしてもまた製造され得る(前記異種ポリペプチドは、好ましくはシグナル配列又は成熟タンパク質又はポリペプチドのN-末端に固有の切断部位を有する他の配列である)。好ましく選択される異種シグナル配列は、宿主細胞によって認識及び処理される(すなわちシグナルペプチダーゼによって切断される)ものである。本来のレセプターシグナル配列を認識及び処理しない原核宿主細胞のために、当該シグナル配列は、例えばアルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、IPP、及び熱安定性エンテロトキシンIIリーダーのグループから選択される原核細胞シグナル配列によって置換される。
レセプター融合タンパク質及び核酸は、希釈剤又はアジュバントと一緒に処方することができ、さらに実際的な目的のために、単離形で提供できるように考慮される。例えば、免疫アッセイで使用するためにマイクロタイタープレートを被覆するために用いる場合は、レセプター融合タンパク質はゼラチン又は他の担体と混合できる。前記タンパク質及び核酸はまた、診断又は治療で用いられるときは医薬的に許容できる担体又は希釈剤と混合されるであろう。レセプター融合タンパク質は、天然に又は異種真核細胞系(例えばCHO又はNSO細胞)によってグリコシル化され得る。前記レセプター融合タンパク質ははまたグリコシル化されなくてもよい(例えば原核細胞での発現によって製造される場合)。
典型的には、本発明の医薬組成物は、液体処方物、凍結乾燥処方物、液体として再構成される凍結乾燥処方物、又はエーロゾル処方物として処方される。ある種の実施態様では、処方物中のレセプター融合タンパク質は、約0.5mg/mLから約250mg/mL、約0.5mg/mLから約45mg/mL、約0.5mg/mLから約100mg/mL、約100mg/mLから約200mg/mL、又は約50mg/mLから約250mg/mLの濃度である。
ある種の実施態様では、該処方物はさらに緩衝液を含む。典型的には、該処方物のpHは約5.5から約6.5である。ある種の実施態様では、該緩衝液は、約4mMから約60mMのヒスチジン緩衝液、約5mMから約25mMのコハク酸緩衝液、又は約5mMから25mMの酢酸緩衝液を含むことができる。ある種の実施態様では、該緩衝液は、約10mMから300mMの濃度、典型的にはおよそ125mMの濃度の塩化ナトリウム、及び約5mMから50mM、典型的には25mMの濃度のクエン酸ナトリウムを含む。ある種の実施態様では、該処方物は、0%をわずかに超え約0.2%までの濃度で界面活性剤を含む。ある種の実施態様では、該界面活性剤は、ポリソルベート-20、ポリソルベート-40、ポリソルベート-60、ポリソルベート-65、ポリソルベート-80、ポリソルベート-85、及び前記の組合せから成る群から選択される(ただしこれら限定されない)。好ましい実施態様では、界面活性剤はポリソルベート-20であり、さらに別に塩化ナトリウムを約125mMの濃度で、さらにクエン酸ナトリウムを約25mMの濃度で含むことができる。
該組成物が注射可能な組成物として、例えば静脈内、皮内又は皮下適用でデリバーされる実施態様では、活性成分は、非経口的に許容できる水溶液(発熱物質を含まず適切なpH、等張性及び安定性を有する)の形態で存在し得る。例えば、等張なビヒクル、例えば塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、又は乳酸リンゲル注射液を用いて、当業者は適切な溶液を容易に調製できる。必要に応じて、保存料、安定化剤、緩衝剤、抗酸化剤及び/又は他の添加剤を加えることができる。該組成物はまた、微小球、リポソーム、他の微粒子デリバリー系又はある種の組織(血液を含む)に配置される持続放出処方物により投与することができる。
本発明のレセプター融合タンパク質及び組成物は、典型的には対象動物に、“治療的に有効な量”で投与され、“治療的に有効な量”とは、該組成物が投与される対象動物に利益を示すために十分な量である。実際の投与用量並びに投与速度及びタイムコースは、治療される症状の性質及び重篤度とともに治療される対象動物の年齢、性別及び体重のような要件並びに投与ルートに左右され、さらにそれらを参考にして決定できよう。更なる配慮が、組成物の特性、例えばその結合活性及びin vivo血中寿命、レセプター融合タンパク質又は結合メンバーの処方物中の濃度とともにデリバリーのルート、部位及び速度に対して払われるべきであろう。
対象動物に与えることができる投薬スケジュールの例は以下を含む群から選択できる(ただしこれらに限定されない):1μg/kg/日から20mg/kg/日、1μg/kg/日から10mg/kg/日、及び10μg/kg/日から1mg/kg/日。ある種の実施態様では、投薬量は、約1μg/mLから100μg/mLの血中抗体濃度が得られるようなものであろう。しかしながら実際の組成物投与用量並びに投与速度及びタイムコースは治療される症状の性質及び重篤度に左右されるであろう。治療の指示(例えば投薬量の決定など)は、最終的には獣医業従事者及び他の獣医の責任範囲内でありその自由裁量に任され、典型的には治療される疾患、個々の患畜の状態、デリバリー部位、投与方法及び獣医にとって公知の他の要件が考慮される。
特段の規定がなければ、本明細書で用いられる全ての技術用語及び学術用語は、本発明の分野の業者が一般的に理解する意味を有する。用語の意味及び範囲は明瞭であるべきであるが、何らかのあいまいさが存在する場合には、本明細書で提供する定義が一切の辞書の定義又は外部の定義を超えて優先される。
本明細書を通して、文脈が特段に要求しないかぎり、“comprise”若しくは“include”又はそれらの変型、例えば“comprises”若しくは“comprising”、“includes”若しくは“including”は、記載の整数又は整数群を含むが、任意の他の整数又は整数群も排除しないことを示唆すると理解されよう。
本明細書で用いられるように、例えば“a”、“an”及び“the”という用語は、文脈がそうでないことを明瞭に要求しないかぎり単数及び複数の該当語を含む。したがって、例えば、“an active agent(活性な薬剤)”又は“a pharmacologically active agent(医薬的に活性な薬剤)”と言えば、ただ1つの活性な薬剤と同様に2つ以上の組み合わされた異なる活性な薬剤を含み、一方、“a carrier(担体)”と言えば、ただ1つの担体と同様に2つ以上の担体の混合物も含まれる。さらにまた、文脈がそうでないことを要求しないかぎり、単数用語は複数形を含み、複数用語は単数形を含むであろう。
本明細書で用いられるように、“生物学的活性”という用語は、(in vivoで見出されるように天然に存在するか、組換え手段により提供又は与えられるかに関係なく)ある分子の1つ以上の任意の固有の生物学的特性を指す。生物学的特性には、レセプター結合及び/又は活性化、細胞シグナリング又は細胞増殖の誘発、細胞増殖の阻害、サイトカイン産生の誘発、アポトーシスの誘発及び酵素活性が含まれるが、ただしこれらに限定されない。
本明細書で用いられる“免疫原性”という用語は、レシピエントに投与されたときに、免疫応答(液性又は細胞性)を誘引するタンパク質又は治療部分の能力の強さを指す。好ましくは、本発明のキメラ融合ポリペプチドは免疫原性をもたず、すなわち、イヌに投与されたときそれらに対して異種抗体が生じないということである。
本明細書で用いられる“同一性”若しくは“配列同一性”又“相同性”はという用語は、アラインメントを実施した配列の任意の個々のアミノ酸残基位置で、アミノ酸残基が該アラインメント実施配列間で同一であることを意味する。本明細書で用いられる“類似性”又は“配列類似性”という用語は、アラインメントを実施した配列の任意の個々の位置で、アミノ酸残基が該配列間で類似のタイプであることを示す。例えば、イソロイシン又はバリンはロイシンに置換され得る。この置換は保存的置換と称することができる。好ましくは、本発明のアミノ酸配列をその中に含まれるアミノ酸残基のいずれかの保存的置換の態様によって改変するとき、これらの改変は、生じたレセプター融合タンパク質の結合特異性又は機能的活性に対して未改変レセプター融合タンパク質と比較したとき全く影響を示さない。
本明細書で用いられる、“キメラポリペプチド”、“融合ポリペプチド”、“融合タンパク質”又は“ダイマーポリペプチド”という用語は、異なるタンパク質に由来する少なくとも2つのドメインを含むポリペプチドである。これらのドメインは、キメラタンパク質、ダイマータンパク質又は融合タンパク質として一緒にして、典型的には、イヌIgG免疫グロブリン重鎖定常領域に由来するFcドメインの全部又は部分と結合したp60イヌTNFレセプター(p60TNFR)又はp80イヌTNFレセプター(p80TNFR)の細胞外ドメイン又はそのフラグメントによる新規なタンパク質を形成する。
“ポリペプチド”、“ペプチド”又は“タンパク質”は本明細書では互換的に用いられ、隣接残基のアルファ-アミノ基とカルボキシ基との間のペプチド結合によって互いに連結された線状の一連のアミノ酸残基を指す。アミノ酸残基は通常は天然の“L”異性体型である。しかしながら、該ポリペプチドが所望の機能的特性を維持するかぎり、“D”異性体型の残基で任意のL-アミノ酸残基を置換することができる。
本明細書に定義するように、“イヌ科の動物”はまたイヌと称することができる。イヌ科の動物は、三命名法のカニス・ルプス・ファミリアリス(Canis lupus familiaris)(Canis familiaris domesticus)又はカニス・ルプス・ディンゴ(Canis lupus dingo)をもつ亜種に属するように分類できる。イヌ科の動物にはイヌの任意の種が含まれ、さらに野生変種及びペット品種が含まれ、後者はまたコンパニオン動物と称される。
“特異的に結合する”という語句は、抗体又はタンパク質と特定のタンパク質又は標的(不均質タンパク質集団中に存在する)との結合を指す。したがって、特異的な免疫アッセイ条件下では、該タンパク質は特定のタンパク質(この場合にはイヌTNF)と結合し、当該サンプル中の他のタンパク質と有意な量では結合しない。
本明細書で定義するように、“異種抗体”という用語は、宿主にとって異質であるエピトープに対し該宿主が生じる抗体を指す。
本発明を以下の実施例を参照しながらこれから説明する。これらの実施例は例証の目的で提供され、本発明を限定するものと解されることを意図しない。本発明の方法及び技術は、特段の指示がなければ、概ね当業界で周知であり、さらに多様な一般的参考文献及びより具体的な参考文献(本明細書中で引用及び考察される)に記載されている通常的な方法にしたがって実施される。
抗イヌIgGポリクローナル抗体-HRP複合物を用いてELISAを実施し、イヌTNFR-Fc融合タンパク質発現上清のイヌTNF結合を決定した。結果は図23に示されている。
配列番号:6(HCA(caTNFRp50:ca IgGHCA Fc))、配列番号:7(HCB(caTNFRp50:ca IgGHCB Fc))、配列番号:8(HCC(caTNFRp50:ca IgGHCC Fc))及び配列番号:9(HCD(caTNFRp50:ca IgGHCD Fc))をコードする発現プラスミドのCHO細胞へのトランスフェクションは多様な被検上清をもたらし、これらを等価のヒトTNFR-Fcと比較した。前記TNFR-Fcは、配列番号:7との融合と類似する態様で、イヌHCBヒンジ-CH2-CH3とN-末端融合させたヒトTNFR細胞外ドメインを含んでいる。
図24は、プロテインA及びプロテインGの縦列セファロースカラムでのアフィニティー捕捉後の精製イヌTNFR-Fc融合タンパク質による結合のELISAの結果を示す。この図から分かるように、イヌTNFレセプター融合タンパク質のHCB及びHCC型はプロテインA及びプロテインGによって効率的に捕捉されたが、一方、該融合タンパク質のHCA及びHCD型はあまり捕捉されなかった。更なる分析(データは示されていない)は、イヌTNFR-HCBはプロテインAに効率的に捕捉されるが、一方、イヌTNFR-HCC型はプロテインGによって捕捉され得ることを示した。
図25は、プロテインA及びプロテインGの縦列アフィニティークロマトグラフィー生成物の非還元SDS-PAGEの結果を示し、この結果では、イヌTNFR融合タンパク質のHCA(配列番号:6)及びHCD(配列番号:9)アイソフォームの貧弱な回収が確認される。
本実験では、本発明の融合ポリペプチドがTNFの生物学的活性のアンタゴニストとして作用するか否かが判定された。図26及び27はイヌTNF-アルファ生物活性(R&D systems, 1ng/mL)の阻害の結果を示し、NF-kB-EGFPレセプター構築物pTRH1(Vince et al., Cell 131, 682, 2007)をトランスフェクトした293-HEK細胞を用いた(これらの細胞はイヌTNFに蛍光によって応答する)。イヌTNFR融合タンパク質のイヌTNFR-HCB(配列番号:7)(図26)及びイヌTNFR-HCC(配列番号:8)(図27)アイソフォームの両方が、ヒトTNFR-イヌHCBコントロール融合タンパク質(図27で定量)と同様にTNF誘発蛍光を同等に阻害した。このアッセイのIC50は約1ng/mLであった。
図28は補体C1q結合ELISAの結果を示す。イヌTNFR-HCB、イヌTNFR-HCC及びヒトTNFR-イヌHCB融合タンパク質をイヌTNF前被覆プレートでインキュベートした(4μg/mL)。比較のために、神経成長因子(NGF)に特異性を有するイヌ化モノクローナル抗体(MAb;イヌアイソタイプHCB)をNGF被覆プレートでインキュベートした。前記プレートを洗浄し、補体供給源として正常又は加熱殺滅ヒト血清とともにインキュベートした。補体C1qの結合は、C1q反応性ポリクローナル抗体-HRP複合物を用いて検出した。結果から分かるように、イヌHCBモノクローナル抗体は補体を動員できたが、驚くべきことに完全イヌ又はヒトTNFR-イヌHCB融合タンパク質もイヌTNFR-HCC融合タンパク質も補体を動員できなかった(他の実験では、抗NGF MAbのHCCアイソタイプはC1qと結合する(データは示されていない))。
総合すれば、これらの結果は、本発明のイヌTNFレセプター融合タンパク質とヒトTNFR-イヌFcキメラ構築物はイヌTNFと結合し、さらにELISA及び阻害アッセイの両方によって等しく潜在能力を有することを示し、本融合プロセスは完全に活性なイヌ型TNFレセプター融合タンパク質を生じることを明らかにした。
さらにまた、これらの結果は、プロテインA及びプロテインGによる精製は、イヌIgG重鎖定常ドメインのいずれかとイヌTNFR細胞外ドメインとの単純な融合では達成できないことを示している。なぜならば、予想に反してイヌIgG HCA又はHCD定常ドメインのいずれもこれらの有用な精製材料と結合する能力を付与しなかったからである。したがって、HCB及びHCC IgG定常ドメインがTNFR-Fc融合タンパク質作製のための望ましい融合パートナーであり、前記融合タンパク質は、イヌ疾患治療の獣医学領域における臨床使用規模で実用的に精製できる。
図28は、イヌTNF レセプター融合タンパク質のHCB及びHCCアイソフォームの設計は、予想外に補体動員能力の欠如をもたらすことを示す。したがって、このイヌTNFレセプター融合タンパク質は、ヒトレセプターTNFのそれと等価のイヌTNFとの強力な結合とTNF炎症活性部位への補体損傷補充の望ましい欠如の予想外の組合せを示す。したがって、本発明のイヌTNFレセプター融合タンパク質は、驚くべきことにイヌTNFによって媒介されるイヌ疾患の治療に有用である。
図30は、新規なイヌTNFR p80細胞外ドメインアミノ酸配列の派生物を示す。ヒトp80細胞外ドメイン配列(P20333、シグナル配列には下線が付されている)と比較すれば、イヌTNFR p80の2つの注解付き変種の派生配列であるクローンXP_544562.2及びDN368636は、TNFR p80の不完全型として同定され、そのどちらも哺乳動物細胞で発現され得る完全なイヌTNFR p80細胞外ドメイン配列をコードしない:クローンXP_544562.2(図30に膜貫通ドメインとして可能なかぎりの翻訳が示さる)ではシグナル配列の欠如及びN-末端配列VPGが失われているため、及びクローンDN368636では膜基部細胞外ドメイン配列の欠如及び不正確なC-末端配列(TRRH)のため。これら2つの配列の組合せによって、配列番号:14に示されるイヌTNFR p80 ECDの新規な配列が得られる。
本明細書に引用した全ての文書類は参照により本明細書に含まれる。本発明に記載した実施態様の多様な改変及び変型が、本発明の範囲を逸脱することなく当業者には明白であろう。本発明を具体的な好ましい実施態様との関連で説明してきたが、特許請求の範囲に記載した本発明はそのような個々の実施態様に限定されるべきではないことは理解されよう。実際のところ、本発明の実施に関して記載した態様の当業者に明白な多様な改変が本発明によってカバーされよう。
配列番号:1(イヌTNFR p60シグナル配列及びECD)
MGLPTVPGLLLPLVLLALLLEIYPISVTALVPHPRNRVKRAILCPQGKYIHPQDDSICCTKCHKGTYLYNDCPGPGLDTDCRECENGTFTASENHLRQCLSCSKCRKEMNQVEISPCTVYRDTVCGCRKNQYRFYWSETLFQCNNCSLCLNGTVQISCQEKQNTICTCHAGFFLREHECVSCVNCKKNTECGKLCLPPVETVKVPQDPGST
配列番号:2(イヌIgG HCA重鎖-ヒンジCH2, CH3)
FNECRCTDTPPCPVPEPLGGPSVLIFPPKPKDILRITRTPEVTCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQSREQQFNGTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIDLPSPIERTISKARGRAHKPSVYVLPPSPKELSSSDTVSITCLIKDFYPPDIDVEWQSNGQQEPERKHRMTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDPFTCAVMHETLQNHYTDLSLSHSPGK
配列番号:3(イヌIgG HCB重鎖-ヒンジCH2, CH3)
PKRENGRVPRPPDCPKCPAPEMLGGPSVFIFPPKPKDTLLIARTPEVTCVVVDLDPEDPEVQISWFVDGKQMQTAKTQPREEQFNGTYRVVSVLPIGHQDWLKGKQFTCKVNNKALPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSREELSKNTVSLTCLIKDFYPPDIDVEWQSNGQQEPESKYRTTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVMHEALHNHYTQESLSHSPGK
配列番号:4(イヌIgG HCC重鎖-ヒンジCH2, CH3)
AKECECKCNCNNCPCPGCGLLGGPSVFIFPPKPKDILVTARTPTVTCVVVDLDPENPEVQISWFVDSKQVQTANTQPREEQSNGTYRVVSVLPIGHQDWLSGKQFKCKVNNKALPSPIEEIISKTPGQAHQPNVYVLPPSRDEMSKNTVTLTCLVKDFFPPEIDVEWQSNGQQEPESKYRMTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVMHEALHNHYTQISLSHSPGK
配列番号:5(イヌIgG HCD重鎖-ヒンジCH2, CH3)
PKESTCKCISPCPVPESLGGPSVFIFPPKPKDILRITRTPEITCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQPREQQFNSTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIGLPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSPKELSSSDTVTLTCLIKDFYPPEIDVEWQSNGQPEPESKYHTTAPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDTFTCAVMHEALQNHYTDLSLSHSPGK
配列番号:6(caTNFrecp60-HCA)
MGLPTVPGLLLPLVLLALLLEIYPISVTALVPHPRNRVKRAILCPQGKYIHPQDDSICCTKCHKGTYLYNDCPGPGLDTDCRECENGTFTASENHLRQCLSCSKCRKEMNQVEISPCTVYRDTVCGCRKNQYRFYWSETLFQCNNCSLCLNGTVQISCQEKQNTICTCHAGFFLREHECVSCVNCKKNTECGKLCLPPVETVKVPQDPGSTFNECRCTDTPPCPVPEPLGGPSVLIFPPKPKDILRITRTPEVTCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQSREQQFNGTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIDLPSPIERTISKARGRAHKPSVYVLPPSPKELSSSDTVSITCLIKDFYPPDIDVEWQSNGQQEPERKHRMTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDPFTCAVMHETLQNHYTDLSLSHSPGK**
配列番号:7(caTNFrecp60-HCB)
MGLPTVPGLLLPLVLLALLLEIYPISVTALVPHPRNRVKRAILCPQGKYIHPQDDSICCTKCHKGTYLYNDCPGPGLDTDCRECENGTFTASENHLRQCLSCSKCRKEMNQVEISPCTVYRDTVCGCRKNQYRFYWSETLFQCNNCSLCLNGTVQISCQEKQNTICTCHAGFFLREHECVSCVNCKKNTECGKLCLPPVETVKVPQDPGSTPKRENGRVPRPPDCPKCPAPEMLGGPSVFIFPPKPKDTLLIARTPEVTCVVVDLDPEDPEVQISWFVDGKQMQTAKTQPREEQFNGTYRVVSVLPIGHQDWLKGKQFTCKVNNKALPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSREELSKNTVSLTCLIKDFYPPDIDVEWQSNGQQEPESKYRTTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVMHEALHNHYTQESLSHSPGK**
配列番号:8(caTNFrecp60-HCC)
MGLPTVPGLLLPLVLLALLLEIYPISVTALVPHPRNRVKRAILCPQGKYIHPQDDSICCTKCHKGTYLYNDCPGPGLDTDCRECENGTFTASENHLRQCLSCSKCRKEMNQVEISPCTVYRDTVCGCRKNQYRFYWSETLFQCNNCSLCLNGTVQISCQEKQNTICTCHAGFFLREHECVSCVNCKKNTECGKLCLPPVETVKVPQDPGSTAKECECKCNCNNCPCPGCGLLGGPSVFIFPPKPKDILVTARTPTVTCVVVDLDPENPEVQISWFVDSKQVQTANTQPREEQSNGTYRVVSVLPIGHQDWLSGKQFKCKVNNKALPSPIEEIISKTPGQAHQPNVYVLPPSRDEMSKNTVTLTCLVKDFFPPEIDVEWQSNGQQEPESKYRMTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVMHEALHNHYTQISLSHSPGK**
配列番号:9(caTNFrecp60-HCD)
MGLPTVPGLLLPLVLLALLLEIYPISVTALVPHPRNRVKRAILCPQGKYIHPQDDSICCTKCHKGTYLYNDCPGPGLDTDCRECENGTFTASENHLRQCLSCSKCRKEMNQVEISPCTVYRDTVCGCRKNQYRFYWSETLFQCNNCSLCLNGTVQISCQEKQNTICTCHAGFFLREHECVSCVNCKKNTECGKLCLPPVETVKVPQDPGSTPKESTCKCISPCPVPESLGGPSVFIFPPKPKDILRITRTPEITCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQPREQQFNSTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIGLPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSPKELSSSDTVTLTCLIKDFYPPEIDVEWQSNGQPEPESKYHTTAPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDTFTCAVMHEALQNHYTDLSLSHSPGK**
配列番号:10(caTNFrecp60-非グリコシルHCA)
MGLPTVPGLLLPLVLLALLLEIYPISVTALVPHPRNRVKRAILCPQGKYIHPQDDSICCTKCHKGTYLYNDCPGPGLDTDCRECENGTFTASENHLRQCLSCSKCRKEMNQVEISPCTVYRDTVCGCRKNQYRFYWSETLFQCNNCSLCLNGTVQISCQEKQNTICTCHAGFFLREHECVSCVNCKKNTECGKLCLPPVETVKVPQDPGSTFNECRCTDTPPCPVPEPLGGPSVLIFPPKPKDILRITRTPEVTCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQSREQQFAGTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIDLPSPIERTISKARGRAHKPSVYVLPPSPKELSSSDTVSITCLIKDFYPPDIDVEWQSNGQQEPERKHRMTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDPFTCAVMHETLQNHYTDLSLSHSPGK**
配列番号:11(caTNFrecp60-非グリコシルHCB)
MGLPTVPGLLLPLVLLALLLEIYPISVTALVPHPRNRVKRAILCPQGKYIHPQDDSICCTKCHKGTYLYNDCPGPGLDTDCRECENGTFTASENHLRQCLSCSKCRKEMNQVEISPCTVYRDTVCGCRKNQYRFYWSETLFQCNNCSLCLNGTVQISCQEKQNTICTCHAGFFLREHECVSCVNCKKNTECGKLCLPPVETVKVPQDPGSTPKRENGRVPRPPDCPKCPAPEMLGGPSVFIFPPKPKDTLLIARTPEVTCVVVDLDPEDPEVQISWFVDGKQMQTAKTQPREEQFAGTYRVVSVLPIGHQDWLKGKQFTCKVNNKALPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSREELSKNTVSLTCLIKDFYPPDIDVEWQSNGQQEPESKYRTTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVMHEALHNHYTQESLSHSPGK**
配列番号:12(caTNFrecp60-非グリコシルHCC)
MGLPTVPGLLLPLVLLALLLEIYPISVTALVPHPRNRVKRAILCPQGKYIHPQDDSICCTKCHKGTYLYNDCPGPGLDTDCRECENGTFTASENHLRQCLSCSKCRKEMNQVEISPCTVYRDTVCGCRKNQYRFYWSETLFQCNNCSLCLNGTVQISCQEKQNTICTCHAGFFLREHECVSCVNCKKNTECGKLCLPPVETVKVPQDPGSTAKECECKCNCNNCPCPGCGLLGGPSVFIFPPKPKDILVTARTPTVTCVVVDLDPENPEVQISWFVDSKQVQTANTQPREEQSAGTYRVVSVLPIGHQDWLSGKQFKCKVNNKALPSPIEEIISKTPGQAHQPNVYVLPPSRDEMSKNTVTLTCLVKDFFPPEIDVEWQSNGQQEPESKYRMTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVMHEALHNHYTQISLSHSPGK**
配列番号:13(caTNFrecp60-非グリコシルHCD)
MGLPTVPGLLLPLVLLALLLEIYPISVTALVPHPRNRVKRAILCPQGKYIHPQDDSICCTKCHKGTYLYNDCPGPGLDTDCRECENGTFTASENHLRQCLSCSKCRKEMNQVEISPCTVYRDTVCGCRKNQYRFYWSETLFQCNNCSLCLNGTVQISCQEKQNTICTCHAGFFLREHECVSCVNCKKNTECGKLCLPPVETVKVPQDPGSTPKESTCKCISPCPVPESLGGPSVFIFPPKPKDILRITRTPEITCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQPREQQFASTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIGLPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSPKELSSSDTVTLTCLIKDFYPPEIDVEWQSNGQPEPESKYHTTAPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDTFTCAVMHEALQNHYTDLSLSHSPGK**
配列番号:14(イヌTNFR p80シグナル配列及びECD)
MAPAALWALLAAGLQLWGAGRAVPGQATQLPYVPDPELGSSCQQSEYFDQRTQMCCSMCPPGSHARLFCTKTSNTVCARCENSTYTQLWNWVPECLSCGSRCGADQVETQACTREQNRICSCKSGWYCTLRRQGGCRLCAPLRRCRPGFGVAKPGTATSDVVCAPCAPGTFSNTTSSTDTCRPHRICSSVAVPGNASVDAVCSPAPPTVRTAPRPASTRQPGSTQPRPAEPTPGPSTPPRTSVLFPAVPSPPAEGLSTGD
配列番号:15(caTNFrecp80-HCA)
MAPAALWALLAAGLQLWGAGRAVPGQATQLPYVPDPELGSSCQQSEYFDQRTQMCCSMCPPGSHARLFCTKTSNTVCARCENSTYTQLWNWVPECLSCGSRCGADQVETQACTREQNRICSCKSGWYCTLRRQGGCRLCAPLRRCRPGFGVAKPGTATSDVVCAPCAPGTFSNTTSSTDTCRPHRICSSVAVPGNASVDAVCSPAPPTVRTAPRPASTRQPGSTQPRPAEPTPGPSTPPRTSVLFPAVPSPPAEGLSTGDFNECRCTDTPPCPVPEPLGGPSVLIFPPKPKDILRITRTPEVTCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQSREQQFNGTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIDLPSPIERTISKARGRAHKPSVYVLPPSPKELSSSDTVSITCLIKDFYPPDIDVEWQSNGQQEPERKHRMTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDPFTCAVMHETLQNHYTDLSLSHSPGK**
配列番号:16(caTNFrecp80-HCB)
MAPAALWALLAAGLQLWGAGRAVPGQATQLPYVPDPELGSSCQQSEYFDQRTQMCCSMCPPGSHARLFCTKTSNTVCARCENSTYTQLWNWVPECLSCGSRCGADQVETQACTREQNRICSCKSGWYCTLRRQGGCRLCAPLRRCRPGFGVAKPGTATSDVVCAPCAPGTFSNTTSSTDTCRPHRICSSVAVPGNASVDAVCSPAPPTVRTAPRPASTRQPGSTQPRPAEPTPGPSTPPRTSVLFPAVPSPPAEGLSTGDPKRENGRVPRPPDCPKCPAPEMLGGPSVFIFPPKPKDTLLIARTPEVTCVVVDLDPEDPEVQISWFVDGKQMQTAKTQPREEQFNGTYRVVSVLPIGHQDWLKGKQFTCKVNNKALPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSREELSKNTVSLTCLIKDFYPPDIDVEWQSNGQQEPESKYRTTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVMHEALHNHYTQESLSHSPGK**
配列番号:17(caTNFrecp80-HCC)
MAPAALWALLAAGLQLWGAGRAVPGQATQLPYVPDPELGSSCQQSEYFDQRTQMCCSMCPPGSHARLFCTKTSNTVCARCENSTYTQLWNWVPECLSCGSRCGADQVETQACTREQNRICSCKSGWYCTLRRQGGCRLCAPLRRCRPGFGVAKPGTATSDVVCAPCAPGTFSNTTSSTDTCRPHRICSSVAVPGNASVDAVCSPAPPTVRTAPRPASTRQPGSTQPRPAEPTPGPSTPPRTSVLFPAVPSPPAEGLSTGDAKECECKCNCNNCPCPGCGLLGGPSVFIFPPKPKDILVTARTPTVTCVVVDLDPENPEVQISWFVDSKQVQTANTQPREEQSNGTYRVVSVLPIGHQDWLSGKQFKCKVNNKALPSPIEEIISKTPGQAHQPNVYVLPPSRDEMSKNTVTLTCLVKDFFPPEIDVEWQSNGQQEPESKYRMTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVMHEALHNHYTQISLSHSPGK**
配列番号:18(caTNFrecp80-HCD)
MAPAALWALLAAGLQLWGAGRAVPGQATQLPYVPDPELGSSCQQSEYFDQRTQMCCSMCPPGSHARLFCTKTSNTVCARCENSTYTQLWNWVPECLSCGSRCGADQVETQACTREQNRICSCKSGWYCTLRRQGGCRLCAPLRRCRPGFGVAKPGTATSDVVCAPCAPGTFSNTTSSTDTCRPHRICSSVAVPGNASVDAVCSPAPPTVRTAPRPASTRQPGSTQPRPAEPTPGPSTPPRTSVLFPAVPSPPAEGLSTGDPKESTCKCISPCPVPESLGGPSVFIFPPKPKDILRITRTPEITCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQPREQQFNSTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIGLPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSPKELSSSDTVTLTCLIKDFYPPEIDVEWQSNGQPEPESKYHTTAPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDTFTCAVMHEALQNHYTDLSLSHSPGK**
配列番号:19(caTNFrecp80-非グリコシルHCA)
MAPAALWALLAAGLQLWGAGRAVPGQATQLPYVPDPELGSSCQQSEYFDQRTQMCCSMCPPGSHARLFCTKTSNTVCARCENSTYTQLWNWVPECLSCGSRCGADQVETQACTREQNRICSCKSGWYCTLRRQGGCRLCAPLRRCRPGFGVAKPGTATSDVVCAPCAPGTFSNTTSSTDTCRPHRICSSVAVPGNASVDAVCSPAPPTVRTAPRPASTRQPGSTQPRPAEPTPGPSTPPRTSVLFPAVPSPPAEGLSTGDFNECRCTDTPPCPVPEPLGGPSVLIFPPKPKDILRITRTPEVTCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQSREQQFAGTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIDLPSPIERTISKARGRAHKPSVYVLPPSPKELSSSDTVSITCLIKDFYPPDIDVEWQSNGQQEPERKHRMTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDPFTCAVMHETLQNHYTDLSLSHSPGK**
配列番号:20(caTNFrecp80-非グリコシルHCB)
MAPAALWALLAAGLQLWGAGRAVPGQATQLPYVPDPELGSSCQQSEYFDQRTQMCCSMCPPGSHARLFCTKTSNTVCARCENSTYTQLWNWVPECLSCGSRCGADQVETQACTREQNRICSCKSGWYCTLRRQGGCRLCAPLRRCRPGFGVAKPGTATSDVVCAPCAPGTFSNTTSSTDTCRPHRICSSVAVPGNASVDAVCSPAPPTVRTAPRPASTRQPGSTQPRPAEPTPGPSTPPRTSVLFPAVPSPPAEGLSTGDPKRENGRVPRPPDCPKCPAPEMLGGPSVFIFPPKPKDTLLIARTPEVTCVVVDLDPEDPEVQISWFVDGKQMQTAKTQPREEQFAGTYRVVSVLPIGHQDWLKGKQFTCKVNNKALPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSREELSKNTVSLTCLIKDFYPPDIDVEWQSNGQQEPESKYRTTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVMHEALHNHYTQESLSHSPGK**
配列番号:21(caTNFrecp80-非グリコシルHCC)
MAPAALWALLAAGLQLWGAGRAVPGQATQLPYVPDPELGSSCQQSEYFDQRTQMCCSMCPPGSHARLFCTKTSNTVCARCENSTYTQLWNWVPECLSCGSRCGADQVETQACTREQNRICSCKSGWYCTLRRQGGCRLCAPLRRCRPGFGVAKPGTATSDVVCAPCAPGTFSNTTSSTDTCRPHRICSSVAVPGNASVDAVCSPAPPTVRTAPRPASTRQPGSTQPRPAEPTPGPSTPPRTSVLFPAVPSPPAEGLSTGDAKECECKCNCNNCPCPGCGLLGGPSVFIFPPKPKDILVTARTPTVTCVVVDLDPENPEVQISWFVDSKQVQTANTQPREEQSAGTYRVVSVLPIGHQDWLSGKQFKCKVNNKALPSPIEEIISKTPGQAHQPNVYVLPPSRDEMSKNTVTLTCLVKDFFPPEIDVEWQSNGQQEPESKYRMTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVMHEALHNHYTQISLSHSPGK**
配列番号:22(caTNFrecp80-非グリコシルHCD)
MAPAALWALLAAGLQLWGAGRAVPGQATQLPYVPDPELGSSCQQSEYFDQRTQMCCSMCPPGSHARLFCTKTSNTVCARCENSTYTQLWNWVPECLSCGSRCGADQVETQACTREQNRICSCKSGWYCTLRRQGGCRLCAPLRRCRPGFGVAKPGTATSDVVCAPCAPGTFSNTTSSTDTCRPHRICSSVAVPGNASVDAVCSPAPPTVRTAPRPASTRQPGSTQPRPAEPTPGPSTPPRTSVLFPAVPSPPAEGLSTGDPKESTCKCISPCPVPESLGGPSVFIFPPKPKDILRITRTPEITCVVLDLGREDPEVQISWFVDGKEVHTAKTQPREQQFASTYRVVSVLPIEHQDWLTGKEFKCRVNHIGLPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSPKELSSSDTVTLTCLIKDFYPPEIDVEWQSNGQPEPESKYHTTAPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQQGDTFTCAVMHEALQNHYTDLSLSHSPGK**
Claims (56)
- イヌIgG免疫グロブリン重鎖のFc領域又はそのフラグメントを含むポリペプチドと結合された、イヌTNFレセプターポリペプチドの細胞外ドメイン又は該細胞外ドメインのTNF結合フラグメント、を含むキメラ融合ポリペプチドであって、該Fc領域のフラグメントが少なくともCH2及びCH3定常ドメインを含む、前記キメラ融合ポリペプチド。
- イヌTNFレセプターポリペプチドが、イヌTNFレセプターポリペプチドp80又はそのTNF結合フラグメントを含む、請求項1に記載のキメラ融合ポリペプチド。
- イヌTNFレセプターポリペプチドが、配列番号:14又は前記配列と少なくとも95%の配列同一性を有する配列を含む、請求項2に記載のキメラ融合ポリペプチド。
- イヌTNFレセプターポリペプチドが、イヌTNFレセプターポリペプチドp60又はそのTNF結合フラグメントを含む、請求項1に記載のキメラ融合ポリペプチド。
- イヌTNFレセプターポリペプチドが、配列番号:1又は前記配列と少なくとも95%の配列同一性を有する配列を含む、請求項4に記載のキメラ融合ポリペプチド。
- Fc領域が、ヒンジ領域、CH2定常ドメイン及びCH3定常ドメインを含む、請求項1から5のいずれか1項に記載のキメラ融合ポリペプチド。
- Fc領域が、サブタイプA、サブタイプB、サブタイプC及びサブタイプDから成る群から選択されるIgGサブタイプを含む、請求項1から6のいずれか1項に記載のキメラ融合ポリペプチド。
- Fc領域が、配列番号:2、配列番号:3、配列番号:4及び配列番号:5から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項7に記載のキメラ融合ポリペプチド。
- キメラ融合ポリペプチドが、イヌTNFレセプターポリペプチドとFc領域を含む該ポリペプチドとの間に機能的に差し挟まれたリンカーペプチドを含む、請求項1から8のいずれかに記載のキメラ融合ポリペプチド。
- キメラ融合ポリペプチドが、配列番号:6、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9及び前述のもののいずれかと少なくとも90%の配列相同性を有する配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項5に記載のキメラ融合ポリペプチド。
- キメラ融合ポリペプチドが、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13及び前述のもののいずれかと少なくとも90%の配列相同性を有する配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項5に記載のキメラ融合ポリペプチド。
- 該キメラ融合ポリペプチドが、配列番号:15、配列番号:16、配列番号:17、配列番号:18及び前述のもののいずれかと少なくとも90%の配列相同性を有する配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項3に記載のキメラ融合ポリペプチド。
- キメラ融合ポリペプチドが、配列番号:19、配列番号:20、配列番号:21、配列番号:22及び前述のもののいずれかと少なくとも90%の配列相同性を有する配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項3に記載のキメラ融合ポリペプチド。
- キメラ融合ポリペプチドが、1x10-8以下の平衡解離定数(KD)を有する結合親和性でイヌTNF-アルファと結合する、請求項1から13のいずれかに記載のキメラ融合ポリペプチド。
- 配列番号:14又は前記配列と少なくとも95%の配列相同性を有する配列を含む、単離ポリペプチド。
- 請求項15に記載のポリペプチドをコードする、単離ポリヌクレオチド。
- 配列番号:6、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:15、配列番号:16、配列番号:17、配列番号:18、配列番号:19、配列番号:20、配列番号:21、配列番号:22及び前述のもののいずれかと少なくとも90%の配列相同性を有する配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を含むキメラ融合ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
- 請求項17に記載のポリヌクレオチドを含む組換えベクター。
- 発現プロモーターに隣接しかつ前記の制御下に配置されているか、又は発現プロモーターに機能できるように連結されている、請求項18に記載の組換えベクター。
- 請求項1から14のいずれか1項に記載のキメラ融合ポリペプチド又は請求項17に記載のポリヌクレオチド及び医薬的に許容できる担体又は賦形剤を含む医薬組成物。
- 配列番号:6、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:15、配列番号:16、配列番号:17、配列番号:18、配列番号:19、配列番号:20、配列番号:21、配列番号:22及び前述のもののいずれかと少なくとも90%の配列相同性を有する配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するキメラ融合ポリペプチド及び医薬的に許容できる担体又は賦形剤を含む医薬組成物。
- 少なくとも1つのさらに別のTNFアンタゴニスト化合物及び/又は抗炎症化合物をさらに含む、請求項20又は21に記載の医薬組成物。
- TNFアンタゴニスト化合物がメトトレキセートである、請求項22に記載の医薬組成物。
- 医薬として使用される、請求項1から14のいずれかに記載のキメラ融合ポリペプチド、請求項17に記載のポリヌクレオチド、又は請求項18若しくは19に記載のベクター、又は、請求項20から23のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- TNF発現によって媒介されるイヌの症状の治療又は予防で使用される、請求項1から14のいずれかに記載のキメラ融合ポリペプチド、請求項17に記載のポリヌクレオチド、請求項18又は19に記載のベクター、又は請求項20から23のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 請求項25に記載したように使用される請求項25に記載のキメラ融合ポリペプチドであって、TNF発現により媒介される症状が、炎症媒介症状、慢性炎症性疾患、関節炎、例えば免疫媒介多発性関節炎、慢性関節リウマチ、変形性関節症、多発性関節炎疹、若年性特発性関節炎及び乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、乾癬、全身性血管炎、アトピー性皮膚炎、うっ血性心不全、難治性ブドウ膜炎、気管支ぜんそく、アレルギー性症状、敗血症、ショック、真性糖尿病、並びに神経変性症状、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、卒中及び筋委縮性側索硬化症から成る群から選択される、前記キメラ融合ポリペプチド。
- TNF発現によって媒介されるイヌの症状の治療又は予防のための医薬の調製における、請求項1から14のいずれかに記載のキメラ融合ポリペプチド、請求項17に記載のポリヌクレオチド、請求項18又は19に記載のベクター、又は請求項20から23のいずれか1項に記載の医薬組成物の使用。
- TNF発現により媒介される症状が、炎症媒介症状、慢性炎症性疾患、関節炎、例えば免疫媒介多発性関節炎、慢性関節リウマチ、変形性関節症、多発性関節炎疹、若年性特発性関節炎及び乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、乾癬、全身性血管炎、アトピー性皮膚炎、うっ血性心不全、難治性ブドウ膜炎、気管支ぜんそく、アレルギー性症状、敗血症、ショック、真性糖尿病、並びに神経変性症状、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、卒中及び筋委縮性側索硬化症から成る群から選択される、請求項27に記載の使用。
- TNF発現により媒介される症状をその必要があるイヌで治療又は予防する方法であって、請求項1から14のいずれかに記載のキメラ融合ポリペプチド、請求項17に記載のポリヌクレオチド、請求項18又は19に記載のベクター、又は請求項20から23のいずれか1項に記載の医薬組成物を該イヌに投与する工程を含む、前記方法。
- TNF発現により媒介される症状が、炎症媒介症状、慢性炎症性疾患、関節炎、例えば免疫媒介多発性関節炎、慢性関節リウマチ、変形性関節症、多発性関節炎疹、若年性特発性関節炎及び乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、乾癬、全身性血管炎、アトピー性皮膚炎、うっ血性心不全、難治性ブドウ膜炎、気管支ぜんそく、アレルギー性症状、敗血症、ショック、真性糖尿病、並びに神経変性症状、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、卒中及び筋委縮性側索硬化症から成る群から選択される、請求項29に記載の方法。
- 少なくとも1つの追加の医薬組成物を投与する工程をさらに含む、請求項29又は請求項30に記載の方法。
- 追加の医薬組成物が、TNFアンタゴニスト、抗炎症性化合物、メトトレキセート、イヌTNFに対するキメラ又はイヌ化抗体、抗イヌTNF抗体フラグメント、少なくとも1つの鎮痛剤、サイトカイン抑制性抗炎症薬である化合物、NSAID、オピオイド、コルチコステロイド、ステロイド、及び神経成長因子のアンタゴニストから成る群から選択される医薬を含む、請求項31に記載の方法。
- 医薬として使用される、配列番号:6、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:15、配列番号:16、配列番号:17、配列番号:18、配列番号:19、配列番号:20、配列番号:21、配列番号:22及び前述のもののいずれかと少なくとも90%の配列相同性を有する配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するキメラ融合ポリペプチド、又は前記アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド。
- TNF発現によって媒介されるイヌの症状の治療又は予防で使用される、配列番号:6、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:15、配列番号:16、配列番号:17、配列番号:18、配列番号:19、配列番号:20、配列番号:21、配列番号:22及び前述のもののいずれかと少なくとも90%の配列相同性を有する配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するキメラ融合ポリペプチド、又は前記アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド。
- TNF発現により媒介される症状が、炎症媒介症状、慢性炎症性疾患、関節炎、例えば免疫媒介多発性関節炎、慢性関節リウマチ、変形性関節症、多発性関節炎疹、若年性特発性関節炎及び乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、乾癬、全身性血管炎、アトピー性皮膚炎、うっ血性心不全、難治性ブドウ膜炎、気管支ぜんそく、アレルギー性症状、敗血症、ショック、真性糖尿病、並びに神経変性症状、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、卒中及び筋委縮性側索硬化症から成る群から選択される、請求項34に記載したように使用される請求項34に記載のキメラ融合ポリペプチド。
- TNF発現によって媒介されるイヌの症状の治療及び/又は予防のための医薬の調製における、配列番号:6、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:15、配列番号:16、配列番号:17、配列番号:18、配列番号:19、配列番号:20、配列番号:21、配列番号:22及び前述のもののいずれかと少なくとも90%の配列相同性を有する配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するキメラ融合ポリペプチド、又は前記アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドの使用。
- TNF発現により媒介される症状が、炎症媒介症状、慢性炎症性疾患、関節炎、例えば免疫媒介多発性関節炎、慢性関節リウマチ、変形性関節症、多発性関節炎疹、若年性特発性関節炎及び乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、乾癬、全身性血管炎、アトピー性皮膚炎、うっ血性心不全、難治性ブドウ膜炎、気管支ぜんそく、アレルギー性症状、敗血症、ショック、真性糖尿病、並びに神経変性症状、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、卒中及び筋委縮性側索硬化症から成る群から選択される、請求項36に記載のキメラ融合ポリペプチドの使用。
- TNF発現により媒介される症状をその必要があるイヌで治療又は予防する方法であって、前記方法が、配列番号:6、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:15、配列番号:16、配列番号:17、配列番号:18、配列番号:19、配列番号:20、配列番号:21、配列番号:22及び前述のもののいずれかと少なくとも90%の配列相同性を有する配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するキメラ融合ポリペプチド、又は前記アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを、治療的に有効な量で該イヌに投与する工程を含む、前記方法。
- TNF発現により媒介される症状が、炎症媒介症状、慢性炎症性疾患、関節炎、例えば免疫媒介多発性関節炎、慢性関節リウマチ、変形性関節症、多発性関節炎疹、若年性特発性関節炎及び乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、乾癬、全身性血管炎、アトピー性皮膚炎、うっ血性心不全、難治性ブドウ膜炎、気管支ぜんそく、アレルギー性症状、敗血症、ショック、真性糖尿病、並びに神経変性症状、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、卒中及び筋委縮性側索硬化症から成る群から選択される、請求項38に記載の方法。
- 少なくとも1つの追加の医薬組成物を投与する工程をさらに含む、請求項38又は請求項39に記載の方法。
- 追加の医薬組成物が、TNFアンタゴニスト、抗炎症性化合物、メトトレキセート、イヌTNFに対するキメラ又はイヌ化抗体、抗イヌTNF抗体フラグメント、少なくとも1つの鎮痛剤、サイトカイン抑制性抗炎症薬である化合物、NSAID、オピオイド、コルチコステロイド、ステロイド、及び神経成長因子のアンタゴニストから成る群から選択される医薬を含む、請求項40に記載の方法。
- 腫瘍壊死因子レベルをその必要があるイヌで低下させる方法であって、配列番号:6、配列番号:7、配列番号:8、配列番号:9、配列番号:10、配列番号:11、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:15、配列番号:16、配列番号:17、配列番号:18、配列番号:19、配列番号:20、配列番号:21、配列番号:22及び前述のもののいずれかと少なくとも90%の配列相同性を有する配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を有するキメラ融合ポリペプチド、又は前記アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを、治療的に有効な量でイヌに投与する工程を含む、前記方法。
- 少なくとも1つの追加の医薬組成物を投与する工程をさらに含む、請求項42に記載の方法。
- 追加の医薬組成物が、TNFアンタゴニスト、抗炎症性化合物、メトトレキセート、イヌTNFに対するキメラ又はイヌ化抗体、抗イヌTNF抗体フラグメント、少なくとも1つの鎮痛剤、サイトカイン抑制性抗炎症薬である化合物、NSAID、オピオイド、コルチコステロイド、ステロイド、及び神経成長因子のアンタゴニストから成る群から選択される医薬を含む、請求項43に記載の方法。
- 請求項1から14のいずれか1項に記載のキメラ融合ポリペプチドを製造する方法であって、
(i)請求項1から14のいずれか1項に記載のキメラ融合ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを発現することができるベクターを含む組換え宿主細胞を提供する工程;
(ii)該キメラ融合ポリペプチドの発現に適切な条件下で該組換え宿主細胞を培養する工程;及び
(iii)該キメラ融合ポリペプチドを回収する工程を含む、前記方法。 - イヌIgG免疫グロブリンB型重鎖のFc領域又は少なくともCH2及びCH3定常ドメインを含む前記のフラグメントを含むポリペプチドと結合された、イヌTNFレセプターポリペプチドの細胞外ドメイン又は該細胞外ドメインのTNF結合フラグメントを含むキメラ融合ポリペプチドのダイマー型を精製する方法であって、該キメラ融合ポリペプチドのダイマー型をpH4.7から5.3でプロテインAから溶出させる工程を含む、前記方法。
- キメラ融合ポリペプチドのダイマー型がpH4.8から5.2でプロテインAから溶出される、請求項46に記載の方法。
- キメラ融合ポリペプチドのダイマー型がpH4.9から5.1でプロテインAから溶出される、請求項47に記載の方法。
- キメラ融合ポリペプチドのダイマー型がpH5.0でプロテインAから溶出される、請求項48に記載の方法。
- イヌTNFレセプターポリペプチドが、イヌTNFレセプターポリペプチドp80又はそのTNF結合フラグメントを含む、請求項46から49のいずれか1項に記載の方法。
- イヌTNFレセプターポリペプチドが、配列番号:14又は前記配列と少なくとも95%の配列同一性を有する配列を含む、請求項50に記載の方法。
- イヌTNFレセプターポリペプチドが、イヌTNFレセプターポリペプチドp60又はそのTNF結合フラグメントを含む、請求項46から49のいずれか1項に記載のキメラ融合ポリペプチド。
- イヌTNFレセプターポリペプチドが、配列番号:1又は前記配列と少なくとも95%の配列同一性を有する配列を含む、請求項52に記載のキメラ融合ポリペプチド。
- Fc領域が配列番号:3を含む、請求項46から53のいずれか1項に記載のキメラ融合ポリペプチド。
- キメラ融合ポリペプチドが、配列番号:7、配列番号:11、配列番号:16、配列番号:20及び前記配列のいずれかと少なくとも90%の配列相同性を有するポリペプチド配列から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項46から54のいずれか1項に記載のキメラ融合ポリペプチド。
- キメラ融合ポリペプチドが、配列番号:7又は前記配列と少なくとも90%の配列相同性を有するポリペプチド配列を含む、請求項55に記載のキメラ融合ポリペプチド。
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