JP6947430B2 - 細胞培養方法 - Google Patents
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Description
本発明は、細胞及び組織療法のための新規且つ改善された方法及び組成物に関する。本発明は、治療用細胞又は組織治療を必要とする哺乳動物に対する治療的適応に適した細胞及び組織組成物を製造するための方法に関する。
細胞療法は、複数のタイプの障害、損傷、悪性腫瘍及び疾患に対して、重要性を増す治療である。細胞療法は、細胞を患者に注入、適用又は移植することを伴い、それにより、注入、適用又は移植される細胞は、患者以外のドナー由来であるか(同種異系)、患者自身に由来するか(自己由来)のいずれかである。間葉系間質細胞(MSC)は、治療的用途に有望な1つの細胞タイプである。
本発明者らは、現在の製造方法が抱える問題を改善又は解決するような方法で細胞を製造でき、それにより、高められた臨床転帰がもたらされることを発見した。
(i)細胞サンプルを、第一の血清、第一の血清代替物及び/又は第一の血清フラクション(serum fraction)を含む第一の細胞培養培地中、細胞が所望の増大(expansion)レベルを達成できるのに十分な時間、培養すること;並びに
(ii)療法に使用するための細胞を採取する前に、前記第一の細胞培養培地を、第二の血清、第二の血清代替物及び/又は第二の血清フラクションを含む第二の細胞培養培地と交換し、細胞を更なる期間培養すること
を含む、方法を提供する。
(i)間葉系間質細胞を、熱非働化ウシ胎児血清(heat inactivated fetal calf serum:HIFCS)を加えたDMEMを含む第一の細胞培養培地中、前記細胞が約70〜85%コンフルエンスに達するまで培養すること;並びに
(ii)療法に使用するための細胞を採取する約24時間前に、前記第一の細胞培養培地を除去し、フェノールレッド不含DMEM(DMEM phenol red-free)及び約2%ヒト血清アルブミンを含む第二の細胞培養培地と交換し、次いで、細胞をさらに約24時間培養すること
を含む、方法を提供する。
(i)培養容器1cm2あたり1.0×103細胞〜培養容器1 cm2あたり1.0×1010細胞の間の間葉系間質細胞を、熱非働化ウシ胎児血清(HIFCS)を加えたDMEMを含む第一の細胞培養培地中、前記細胞が約70〜85%コンフルエンスに達するまで培養すること;並びに
(ii)療法に使用するための細胞を採取する約24時間前に、前記第一の細胞培養培地を除去し、フェノールレッド不含DMEM及び約2%ヒト血清アルブミンを含む第二の細胞培養培地と交換し、次いで、細胞を前記約24時間培養すること
を含む、方法を提供する。
(i)健常ドナー由来の細胞サンプルを提供すること;
(ii)前記細胞サンプルを、第一の血清、第一の血清代替物及び/又は第一の血清フラクションを含む第一の細胞培養培地中、細胞が所望の増大レベルを達成できるのに十分な時間、培養すること;並びに
(ii)療法に使用するための細胞を採取する前に、前記第一の細胞培養培地を、第二の血清、第二の血清代替物及び/又は第二の血清フラクションを含む第二の細胞培養培地と交換し、細胞を更なる期間培養すること;並びに
(iv)前記細胞を採取すること
を含む、方法を提供する。
(i)健常ドナー由来の細胞サンプルを提供すること;
(ii)前記細胞サンプルを、第一の血清、第一の血清代替物及び/又は第一の血清フラクションを含む第一の細胞培養培地中、細胞が所望の増大レベルを達成できるのに十分な時間、培養すること;並びに
(ii)療法に使用するための細胞を採取する前に、前記第一の細胞培養培地を、第二の血清、第二の血清代替物及び/又は第二の血清フラクションを含む第二の細胞培養培地と交換し、細胞を更なる期間培養すること;
(iv)前記細胞を採取すること;並びに
(v)前記細胞を、それを必要とする患者にインプラント又は投与すること
を含む、方法を提供する。
(i)前記間葉系間質細胞を、熱非働化ウシ胎児血清(HIFCS)を加えたDMEMを含む第一の細胞培養培地中、前記細胞が約70〜85%コンフルエンスに達するまで培養すること;
(ii)療法に使用するための細胞を採取する約24時間前に、前記第一の細胞培養培地を除去し、フェノールレッド不含DMEM及び約2%ヒト血清アルブミンを含む第二の細胞培養培地と交換し、次いで、細胞をさらに約24時間培養すること;
(iii)患者への治療的投与に適した、医薬上許容される培地(medium)、希釈剤又は担体中に前記間葉系間質細胞を採取すること
により製造される、使用を提供する。
本発明の特定の側面では、例えば以下の項目が提供される:
(項目1)
療法に使用するための細胞を培養する方法であって、以下のステップ:
(i)細胞サンプルを、第一の血清、第一の血清代替物及び/又は第一の血清フラクシ
ョンを含む第一の細胞培養培地中、細胞が所望の増大レベルを達成できるのに十分な時間、培養すること;並びに
(ii)療法に使用するための細胞を採取する前に、前記第一の細胞培養培地を、第二の血清、第二の血清代替物及び/又は第二の血清フラクションを含む第二の細胞培養培地と交換し、細胞を更なる期間培養すること
を含む、方法。
(項目2)
第一の培地が、培養細胞の最適な増大を可能にする、第一の血清、第一の血清代替物又は第一の血清フラクションを含む、項目1に記載の方法。
(項目3)
第一の血清が、ウシ胎児血清(FCS)又は熱非働化ウシ胎児血清(HIFCS)である、項目2に記載の方法。
(項目4)
第一の血清代替物が血小板溶解物である、項目2に記載の方法。
(項目5)
第一の血清フラクションが血清アルブミンである、項目2に記載の方法。
(項目6)
第二の培地が、培養されている細胞と同じ種起源を有する第二の血清若しくは第二の血清フラクション、又は同じ種起源を再現する第二の血清代替物を含む、項目1〜5のいずれか一項に記載の方法。
(項目7)
細胞サンプルが、肝細胞、造血細胞、線維芽細胞、脂肪細胞、間葉系間質細胞、心臓細胞、内皮細胞、上皮細胞、神経細胞、グリア細胞、内分泌細胞、又はそれらの前駆細胞からなる群から選択される細胞を含む、項目1〜6のいずれか一項に記載の方法。
(項目8)
細胞が間葉系間質細胞(MSC)である、項目7に記載の方法。
(項目9)
間葉系間質細胞が、間葉系前駆細胞(MPC)である、項目7に記載の方法。
(項目10)
細胞サンプルが、ヒト、ラクダ科動物、ウマ科動物、イヌ科動物及びネコ科動物から単離される、項目1〜5のいずれか一項に記載の方法。
(項目11)
ステップ(i)における第一の培地が、DMEM(高又は低グルコース)、イーグル基礎培地(MEM)、ハムF10培地(F10)、ハムF-12培地(F12)、イスコフ改変ダルベッコ培地、M-199、間葉系幹細胞増殖培地(MSCGM)、ライボビッツL-15培地、MCDB、DMEM/F12、RPMI 1640、advanced DMEM(Gibco)、DMEM/MCDB201(Sigma)、及びCELL-GRO FREE、又はそれらの組み合わせ、からなる群から選択される基礎培地を含む、項目1〜10のいずれか一項に記載の方法。
(項目12)
基礎培地がDMEMである、項目11に記載の方法。
(項目13)
基礎培地に熱非働化ウシ胎児血清(HIFCS)が加えられる、項目11又は12に記載の方法。
(項目14)
ステップ(i)における細胞サンプルが、培養容器1 cm 2 あたり1.0×10 3 細胞〜培養容器1 cm 2 あたり1.0×10 10 細胞の間の細胞を含む、項目1〜13のいずれか一項に記載の方法。
(項目15)
ステップ(i)における細胞サンプルが、培養容器1 cm 2 あたり1.0×10 3 細胞〜培養容器1 cm 2 あたり1.0×10 7 細胞の間の細胞を含む、項目14に記載の方法。
(項目16)
ステップ(i)における細胞サンプルが、およそ70〜85%コンフルエントである所望の細胞増大レベルに達するまで培養される、項目1〜15のいずれか一項に記載の方法。
(項目17)
ステップ(ii)が、細胞を細胞療法に使用するために採取する少なくとも12時間前に実施される、項目1〜15のいずれか一項に記載の方法。
(項目18)
ステップ(ii)が、細胞を細胞療法に使用するために採取する少なくとも18時間前に実施される、項目17に記載の方法。
(項目19)
ステップ(ii)が、細胞を細胞療法に使用するために採取する少なくとも24時間前に実施される、項目17に記載の方法。
(項目20)
ステップ(ii)が、細胞を細胞療法に使用するために採取する約24時間前〜約36時間前の間に実施される、項目17に記載の方法。
(項目21)
ステップ(ii)における第二の培地が、DMEM(高又は低グルコース)、イーグル基礎培地(MEM)、ハムF10培地(F10)、ハムF-12培地(F12)、イスコフ改変ダルベッコ培地、M-199、間葉系幹細胞増殖培地(MSCGM)、ライボビッツL-15培地、MCDB、DMEM/F12、RPMI 1640、advanced DMEM(Gibco)、DMEM/MCDB201(Sigma)、及びCELL-GRO FREE、又はそれらの組み合わせ、からなる群から選択される基礎培地を含む、項目1〜20のいずれか一項に記載の方法。
(項目22)
基礎培地が、フェノールレッド不含DMEMである、項目21に記載の方法。
(項目23)
基礎培地にヒト血清又はヒト血清アルブミンが加えられる、項目22に記載の方法。
(項目24)
ヒト血清又はヒト血清アルブミンが約2%である、項目23に記載の方法。
(項目25)
細胞療法に使用するためのヒト間葉系間質細胞を培養する方法であって、以下のステップ:
(i)間葉系間質細胞を、熱非働化ウシ胎児血清(HIFCS)を加えたDMEMを含む第一の細胞培養培地中、前記細胞が約70〜85%コンフルエンスに達するまで培養すること;並びに
(ii)療法に使用するための細胞を採取する約24時間前に、前記第一の細胞培養培地を除去し、フェノールレッド不含DMEM及び約2%ヒト血清アルブミンを含む第二の細胞培養培地と交換し、次いで、細胞をさらに約24時間培養すること
を含む、方法。
(項目26)
細胞療法に使用するためのヒト間葉系間質細胞を培養する方法であって、以下のステップ:
(i)培養容器1 cm 2 あたり1.0×10 3 細胞〜培養容器1 cm 2 あたり1.0×10 10 細胞の間の間葉系間質細胞を、熱非働化ウシ胎児血清(HIFCS)を加えたDMEMを含む第一の細胞培養培地中、前記細胞が約70〜85%コンフルエンスに達するまで培養すること;並びに
(ii)療法に使用するための細胞を採取する約24時間前に、前記第一の細胞培養培地を除去し、フェノールレッド不含DMEM及び約2%ヒト血清アルブミンを含む第二の細胞培養培地と交換し、次いで、細胞を前記約24時間培養すること
を含む、方法。
(項目27)
患者における同種異系細胞療法のための細胞を調製するための方法であって、以下のステップ:
(i)健常ドナー由来の細胞サンプルを提供すること;
(ii)前記細胞サンプルを、第一の血清、第一の血清代替物及び/又は第一の血清フラクションを含む第一の細胞培養培地中、細胞が所望の増大レベルを達成できるのに十分な時間、培養すること;並びに
(ii)療法に使用するための細胞を採取する前に、前記第一の細胞培養培地を、第二の血清、第二の血清代替物及び/又は第二の血清フラクションを含む第二の細胞培養培地と交換し、細胞を更なる期間培養すること;並びに
(iv)前記細胞を採取すること
を含む、方法。
(項目28)
健常ドナーが、患者に対して50%以下の組織適合性を有する、項目27に記載の方法。
(項目29)
第一の培地が、培養細胞の最適な増大を可能にする、第一の血清、第一の血清代替物又は第一の血清フラクションを含む、項目27又は28に記載の方法。
(項目30)
第一の血清が、ウシ胎児血清(FCS)又は熱非働化ウシ胎児血清(HIFCS)である、項目29に記載の方法。
(項目31)
細胞サンプルが、肝細胞、造血細胞、線維芽細胞、間葉系間質細胞、心臓細胞、内皮細胞、上皮細胞、神経細胞、グリア細胞、内分泌細胞、又はそれらの前駆細胞からなる群から選択される細胞を含む、項目27〜30のいずれか一項に記載の方法。
(項目32)
細胞サンプルが、ヒト、ラクダ科動物、ウマ科動物、イヌ科動物及びネコ科動物から単離される、項目27〜31のいずれか一項に記載の方法。
(項目33)
ステップ(ii)における第一の培地が、DMEM(高又は低グルコース)、イーグル基礎培地(MEM)、ハムF10培地(F10)、ハムF-12培地(F12)、イスコフ改変ダルベッコ培地、M-199、間葉系幹細胞増殖培地(MSCGM)、ライボビッツL-15培地、MCDB、DMEM/F12、RPMI 1640、advanced DMEM(Gibco)、DMEM/MCDB201(Sigma)、及びCELL-GRO FREE、又はそれらの組み合わせ、からなる群から選択される基礎培地を含む、項目27〜32のいずれか一項に記載の方法。
(項目34)
基礎培地がDMEMである、項目33に記載の方法。
(項目35)
ステップ(iii)が、細胞を細胞療法に使用するために採取する約24時間前〜約36時間前の間に実施される、項目27〜34のいずれか一項に記載の方法。
(項目36)
ステップ(iii)における第二の培地が、フェノールレッド不含DMEM基礎培地を含み、ヒト血清又はヒト血清アルブミンが加えられる、項目27〜35のいずれか一項に記載の方法。
(項目37)
ヒト血清又はヒト血清アルブミンが約2%である、項目36に記載の方法。
(項目38)
項目1〜25のいずれか一項に記載の方法により製造される細胞を含む、細胞療法に使用するための組成物。
(項目39)
前記細胞が、>90% CD73、>90% CD90、>90% CD105発現、及び<5% CD34、<5% CD45、<5% CD14発現を含む表現型を有する、項目38に記載の組成物。
(項目40)
前記細胞が、CD54、CD61、CD89、CD140A及びCD201からなる群から選択される1つ以上の細胞表面マーカーを発現する、項目38又は39に記載の組成物。
(項目41)
細胞がシリンジ中に懸濁される、項目38〜40のいずれか一項に記載の組成物。
(項目42)
細胞が、折り畳み可能な容器中に懸濁される、項目38〜40のいずれか一項に記載の組成物。
(項目43)
細胞が健常ドナーに由来し、前記細胞が、患者への治療的投与に適した培地中に懸濁される、項目38〜42のいずれか一項に記載の組成物。
(項目44)
(i)シリンジ又は折り畳み可能な容器内に含まれる、項目38〜40のいずれか一項に記載の組成物;及び
(ii)使用のための説明書
を含む、キット。
(項目45)
細胞療法の方法であって、
(i)健常ドナー由来の細胞サンプルを提供すること;
(ii)前記細胞サンプルを、第一の血清、第一の血清代替物及び/又は第一の血清フラクションを含む第一の細胞培養培地中、細胞が所望の増大レベルを達成できるのに十分な時間、培養すること;並びに
(ii)療法に使用するための細胞を採取する前に、前記第一の細胞培養培地を、第二の血清、第二の血清代替物及び/又は第二の血清フラクションを含む第二の細胞培養培地と交換し、細胞を更なる期間培養すること;
(iv)前記細胞を採取すること;並びに
(v)前記細胞を、それを必要とする患者にインプラント又は投与すること
を含む、方法。
(項目46)
細胞療法に有用な医薬の製造におけるヒト間葉系間質細胞の使用であって、ここで、前記ヒト間葉系間質細胞が、
(i)前記間葉系間質細胞を、熱非働化ウシ胎児血清(HIFCS)を加えたDMEMを含む第一の細胞培養培地中、前記細胞が約70〜85%コンフルエンスに達するまで培養すること;
(ii)療法に使用するための細胞を採取する約24時間前に、前記第一の細胞培養培地を除去し、フェノールレッド不含DMEM及び約2%ヒト血清アルブミンを含む第二の細胞培養培地と交換し、次いで、細胞をさらに約24時間培養すること;
(iii)患者への治療的投与に適した、医薬上許容される培地、希釈剤又は担体中に前記間葉系間質細胞を採取すること
により製造される、使用。
(項目47)
ヒト療法に使用するためのヒト間葉系間質細胞をin vitro培養するための細胞培養培地であって、間質細胞表面上において、CD54、CD61、CD89、CD140A及びCD201からなる群から選択される1つ以上の細胞表面マーカーを発現させるのに十分な量でヒト血清又はヒト血清アルブミンを含む、細胞培養培地。
(項目48)
細胞培養培地がDMEM培地を含む、項目47に記載の細胞培養培地。
(項目49)
細胞培養培地が、約2%のヒト血清又はヒト血清アルブミンを含む、項目47又は48に記載の細胞培養培地。
(項目50)
前記間葉系間質細胞と接触する項目47〜49のいずれか一項に記載の細胞培養培地を含む、組成物。
(項目51)
項目38に記載の組成物を含む、インプラント可能な医療デバイス。
本発明を詳細に説明する前に、本発明は特に例示された製造方法には限定されず、当然ながら異なる可能性があることが理解される必要がある。また、本明細書で使用される用語は、本発明の特定の実施態様を説明することのみを目的としており、限定する意図はなく、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることも理解される必要がある。
骨髄単核細胞を、密度勾配遠心分離により分離し、洗浄した細胞を、10%ウシ胎児血清(fetal bovine serum:FBS)(SABC Biosciences, Australia)を加えたダルベッコ改変イーグル培地(Dulbecco’s modified Eagle’s media)(Invitrogen, Australia)(本明細書に記載するような本発明の「第一の細胞培養培地」の代表例)に再懸濁し、1 cm2あたり160,000細胞の密度でプレーティングした。
細胞表面フェノタイピングを、Becton DickinsonのBD LyoplateTMスクリーニングパネルを用いて実施したが、これは、数百のマウス及びヒト細胞表面マーカーをフローサイトメトリー又はバイオイメージングにより効率的にプロファイリングするために利用可能な最初の包括的なシステムである。製造者の説明書に従ってパネルを使用した。実施例1に記載の方法論を用いて本発明の細胞を製造し、コンパレーターとして、他のMSCサンプルを実施例1と同じ期間培養したが、ヒト血清アルブミン存在下での最後の培養ステップは行わなかった。次いで、242のマーカーの発現を、ハイスループットフローサイトメトリーを介してスクリーニングし、多くの細胞表面マーカーが差次的に発現することを発見した。例えば、CD54、CD61、CD89、CD140A及びCD201は、ウシ胎児血清含有培地と比較して、ヒト血清アルブミン含有培地で培養(grown)した細胞において発現が増加していた。これらのマーカーは主に接着マーカーである。
間葉系間質細胞の使用
過去20年間にわたり、生物学についての理解並びに移植片対宿主病(graft versus host disease:GVHD)の予防及び治療は著しく進歩しており、抗腫瘍壊死因子(TNF)及び抗CD25生物製剤などの第二選択薬の導入がもたらされている。しかしながら、ステロイド抵抗性(steroid-refractory)急性GVHDの予後は不良のままであり、長期生存率は約20%である(Deeg,(2007), Blood, 109(10):4119-26)。急性GVHDのグレードII〜IVの発生率は、同種造血幹細胞移植(HSCT)後、およそ50%である。標準治療は、高用量コルチコステロイドを用いたものであり、通常、メチルプレドニゾロン2 mg/kg IV又は経口等価量(oral equivalent)であり、これにより患者のおよそ30〜40%において、長期完全反応(durable complete response)が誘導される(MacMillan et al.,(2002), Biol Blood Marrow Transplant;8(7):387-94)。ステロイド抵抗性慢性GVHD(CGVHD)では、長期生存率が低下し、身体に障害を引き起こす病的状態(disabling morbidity)が一般的である。
クローン病(CD)のための生物学的療法が出現しているにもかかわらず、患者の約4分の1は、依然として、診断から5年以内に腹部大手術を必要とする。手術を回避するために、同種異系又は自己由来のいずれかの骨髄又は末梢血幹細胞移植による細胞療法が、少数の患者で首尾よく使用されているが、事前の骨髄破壊的療法又は造血幹細胞動員が必要とされる(Hommes et al.(2011), J Crohns Colitis;5:543-549)。
Claims (22)
- 療法に使用するための間葉系間質細胞を培養する方法であって、以下のステップ:
(i)間葉系間質細胞サンプルを、ウシ胎児血清(FCS)及び熱非働化ウシ胎児血清(HIFCS)からなる群より選択される、第一の血清、第一の血清代替物及び/又は第一の血清フラクションを含む第一の細胞培養培地中、18時間〜72時間の間培養し、次いで、前記細胞が70〜90%コンフルエンスに達するまで継続的な培養のために前記培地を新鮮な第一の培養培地と交換すること;並びに
(ii)療法に使用するための細胞を採取する前に、前記第一の細胞培養培地を、第二の血清、第二の血清代替物及び/又は第二の血清フラクションを含む第二の細胞培養培地と交換し、ここで、前記血清又は血清フラクションが培養されている細胞と同じ種起源を有するか、又は、前記第二の血清代替物が前記同じ種起源を再現し、前記細胞を20時間〜36時間の間培養すること
を含む、方法。 - ステップ(ii)の前記細胞が、前記使用するための採取の前に、20時間、又は21時間、又は22時間、又は23時間、又は24時間、又は24時間〜36時間培養される、請求項1に記載の方法。
- ステップ(i)が、前記間葉系間質細胞のサンプルを前記第一の細胞培養培地中で18時間〜72時間の間培養し、次いで、前記細胞が70%〜90%コンフルエンスに達するまで継続的な培養のために培地を新鮮な第一の細胞培養培地と交換する前に、接着細胞をリン酸緩衝化生理食塩水(PBS)で洗浄することを含む、請求項1又は請求項2に記載の方法。
- ステップ(i)が、前記細胞が前記70%〜90%コンフルエンスに達するまで、3〜4日毎の新鮮な第一の培養培地での培地交換を含む、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(i)の前記間葉系間質細胞が、前記細胞が70%〜85%コンフルエンスに達するまで培養される、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(i)の前記細胞のサンプルが、培養容器1cm2あたり1.0×103細胞〜培養容器1cm2あたり1.0×1010細胞の間の細胞を含む、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- ドナーから前もって単離された間葉系間質細胞のサンプルを提供することを更に含む、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(ii)で培養された前記細胞を採取することを更に含む、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第一の培地及び/又は第二の培地が、DMEM(高又は低グルコース)、イーグル基礎培地(MEM)、ハムF10培地(F10)、ハムF-12培地(F12)、イスコフ改変ダルベッコ培地、M-199、間葉系幹細胞増殖培地(MSCGM)、ライボビッツL-15培地、MCDB、DMEM/F12、RPMI1640、advanced DMEM(Gibco)、DMEM/MCDB201(Sigma)、及びCELL-GRO FREE、並びにそれらの組み合わせ、からなる群より選択される基礎培地を含む、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(i)の前記培地がDMEMであり、ステップ(ii)の前記培地がフェノールレッド不含DMEMである、請求項9に記載の方法。
- ステップ(i)の前記第一の血清、第一の血清代替物及び/又は第一の血清フラクションが、熱非働化ウシ胎児血清(HIFCS)である、請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(ii)の後、前記培養した細胞が、CD54、CD61、CD89、CD140A及びCD201からなる群より選択される1つ以上の細胞表面マーカーを発現する、請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞のサンプルが、ヒト間葉系間質細胞を含む、請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ(ii)の前記第二の血清、第二の血清代替物及び/又は第二の血清フラクションが、ヒト血清又はヒト血清アルブミンである、請求項13に記載の方法。
- 前記ヒト血清又はヒト血清アルブミンが約2% v/vである、請求項14に記載の方法。
- ステップ(ii)の前記第二の血清、第二の血清代替物及び/又は第二の血清フラクションがヒト血清アルブミンである、請求項14又は請求項15に記載の方法。
- 請求項1〜16のいずれか一項に記載の方法によって製造された、間葉系間質細胞。
- 請求項14〜16のいずれか一項に記載の方法によって製造された細胞を含む、細胞療法に使用するための組成物。
- 前記細胞が、患者への治療的投与に適した培地中に懸濁される、及び/又は、前記組成物が、シリンジ又は折り畳み可能な容器内に含まれる、請求項18に記載の細胞療法に使用するための組成物。
- 細胞療法に使用するためのキットであって、
(i)請求項17に記載の間葉系間質細胞、又は、請求項18又は請求項19に記載の組成物;及び
(ii)使用のための説明書
を含む、キット。 - 細胞療法に有用な医薬の製造における間葉系間質細胞の使用であって、ここで、前記間葉系間質細胞が、
(i)前記間葉系間質細胞のサンプルを、熱非働化ウシ胎児血清(HIFCS)を加えたDMEMを含む第一の細胞培養培地中、18時間〜72時間の間培養し、次いで、前記細胞が約70〜85%コンフルエンスに達するまで継続的な培養のために前記培地を新鮮な第一の培養培地と交換すること;
(ii)療法に使用するための細胞を採取する前に、前記第一の細胞培養培地を除去し、フェノールレッド不含DMEM及び約2%血清アルブミンを含む第二の細胞培養培地と交換し、次いで、前記細胞を20時間〜36時間の間培養すること;及び
(iii)患者への治療的投与に適した、医薬上許容される培地、希釈剤又は担体中に前記間葉系間質細胞を採取すること
により製造される、使用。 - 請求項1〜16のいずれか一項に記載の方法によって製造された細胞を含む、医療デバイス。
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