JP2020022486A5 - - Google Patents
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Claims (23)
- 療法に使用するための間葉系間質細胞を培養する方法であって、以下のステップ：
（i）間葉系間質細胞サンプルを、ウシ血清及び熱非働化ウシ血清からなる群より選択される、第一の血清、第一の血清代替物及び／又は第一の血清フラクションを含む第一の細胞培養培地中、18時間〜72時間の間培養し、次いで、前記細胞が70〜90％コンフルエンスに達するまで継続的な培養のために前記培地を新鮮な第一の培養培地と交換すること；並びに
（ii）療法に使用するための細胞を採取する前に、前記第一の細胞培養培地を、第二の血清、第二の血清代替物及び／又は第二の血清フラクションを含む第二の細胞培養培地と交換し、ここで、前記血清又は血清フラクションが培養されている細胞と同じ種起源を有するか、又は、前記第二の血清代替物が前記同じ種起源を再現し、前記細胞を20時間〜36時間の間培養すること
を含む、方法。 - ステップ（ii）の前記細胞が、前記使用するための採取の前に、20時間、又は21時間、又は22時間、又は23時間、又は24時間、又は24時間〜36時間培養される、請求項１に記載の方法。
- ステップ（i）が、前記間葉系間質細胞のサンプルを前記第一の細胞培養培地中で18時間〜72時間の間培養し、次いで、前記細胞が70％〜90％コンフルエンスに達するまで継続的な培養のために培地を新鮮な第一の細胞培養培地と交換する前に、接着細胞をリン酸緩衝化生理食塩水（PBS）で洗浄することを含む、請求項１又は請求項２に記載の方法。
- ステップ（i）が、前記細胞が前記70％〜90％コンフルエンスに達するまで、３〜４日毎の新鮮な第一の培養培地での培地交換を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ（i）の前記間葉系間質細胞が、前記細胞が70％〜85％コンフルエンスに達するまで培養される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ（i）の前記細胞のサンプルが、培養容器１cm 2 あたり1.0×10 3 細胞〜培養容器１cm 2 あたり1.0×10 10 細胞の間の細胞を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
- ドナーから前もって単離された間葉系間質細胞のサンプルを提供することを更に含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ（ii）で培養された前記細胞を採取することを更に含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第一の培地及び／又は第二の培地が、DMEM（高又は低グルコース）、イーグル基礎培地（MEM）、ハムF10培地（F10）、ハムF-12培地（F12）、イスコフ改変ダルベッコ培地、M-199、間葉系幹細胞増殖培地（MSCGM）、ライボビッツL-15培地、MCDB、DMEM/F12、RPMI1640、advanced DMEM（Gibco）、DMEM/MCDB201（Sigma）、及びCELL-GRO FREE、又はそれらの組み合わせ、からなる群より選択される基礎培地を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ（i）の前記培地がDMEMであり、ステップ（ii）の前記培地がフェノールレッド不含DMEMである、請求項９に記載の方法。
- ステップ（i）の前記第一の血清、第一の血清代替物及び／又は第一の血清フラクションが、ウシ胎児血清（FCS）及び熱非働化ウシ胎児血清（HIFCS）からなる群より選択される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ（i）の前記第一の血清、第一の血清代替物及び／又は第一の血清フラクションが、熱非働化ウシ胎児血清（HIFCS）である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ（ii）の後、前記培養した細胞が、CD54、CD61、CD89、CD140A及びCD201からなる群より選択される１つ以上の細胞表面マーカーを発現する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞のサンプルが、ヒト間葉系間質細胞を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
- ステップ（ii）の前記第二の血清、第二の血清代替物及び／又は第二の血清フラクションが、ヒト血清又はヒト血清アルブミンである、請求項１４に記載の方法。
- 前記ヒト血清又はヒト血清アルブミンが約2％ v/vである、請求項１５に記載の方法。
- ステップ（ii）の前記第二の血清、第二の血清代替物及び／又は第二の血清フラクションがヒト血清アルブミンである、請求項１５又は請求項１６に記載の方法。
- 請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法によって製造された、間葉系間質細胞。
- 請求項１５〜１７のいずれか一項に記載の方法によって製造された細胞を含む、細胞療法に使用するための組成物。
- 前記細胞が、患者への治療的投与に適した培地中に懸濁される、及び／又は、前記組成物が、シリンジ又は折り畳み可能な容器内に含まれる、請求項１９に記載の細胞療法に使用するための組成物。
- 細胞療法に使用するためのキットであって、
（i）請求項１８に記載の間葉系間質細胞、又は、請求項１９又は請求項２０に記載の組成物；及び
（ii）使用のための説明書
を含む、キット。 - 細胞療法に有用な医薬の製造における間葉系間質細胞の使用であって、ここで、前記間葉系間質細胞が、
（i）前記間葉系間質細胞のサンプルを、熱非働化ウシ血清を加えたDMEMを含む第一の細胞培養培地中、18時間〜72時間の間培養し、次いで、前記細胞が約70〜85％コンフルエンスに達するまで継続的な培養のために前記培地を新鮮な第一の培養培地と交換すること；
（ii）療法に使用するための細胞を採取する前に、前記第一の細胞培養培地を除去し、フェノールレッド不含DMEM及び約2％血清アルブミンを含む第二の細胞培養培地と交換し、次いで、前記細胞を20時間〜36時間の間培養すること；及び
（iii）患者への治療的投与に適した、医薬上許容される培地、希釈剤又は担体中に前記間葉系間質細胞を採取すること
により製造される、使用。 - 請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法によって製造された細胞を含む、医療デバイス。
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