JP6941664B2 - 自己免疫疾患の処置のために調節性t細胞を選択的に活性化させる改変il−2変異体 - Google Patents
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Description
本願は、2014年8月11日に出願された米国仮特許出願第62/070,016号への優先権の利益を主張し、その内容は、本明細書中に参考として援用される。
免疫系は、自己と非自己とを区別することが可能でなければならない。自己/非自己の区別ができないと、免疫系は、体内の細胞および組織を破壊し、その結果として、自己免疫疾患を引き起こす。調節性T細胞は、免疫系の活性化を能動的に抑制し、病理学的な自己反応性の発生を妨げ、その帰結としての自己免疫疾患を防止する。自己免疫疾患を処置するために、調節性T細胞を選択的に活性化させる薬物および方法を開発することは、精力的な研究の対象であるが、本発明が開発されるまでは、大部分が不成功に終わっている。
PEG化された治療用タンパク質の産生および製造の成功に影響を与える、多数の因子が存在する。第1に、PEG化タンパク質は、PEG分子とタンパク質との化学的コンジュゲーションにより調製されるため、PEG化に関与するさらなる製造ステップのために、タンパク質は、効率的に製造しうることが重要である。第2に、PEG部分を、特定のアミノ酸残基を介して、タンパク質に効率的にコンジュゲートするべきであり、これは均質な生成物を高収率でもたらす。第3に、タンパク質上のPEG化部位は、タンパク質の治療活性に対する干渉が最小限となるように選ぶべきである。タンパク質の治療活性に対する干渉は、PEGの、タンパク質の活性部位へのコンジュゲーションに起因する場合もあり、PEGによる活性部位に対する立体障害に起因する場合もあろう。例として述べると、PEG分子を、IL−2の第一級アミンにコンジュゲートした結果として、IL−2分子1つ当たり1つ〜4つの間のPEGポリマーを含有するタンパク質分子種の異種混合物がもたらされた、PEG化されたIL−2の一形態がかつて報告された(Katre,N.V.ら、1987年、Proc Natl Acad Sci U S A.、84巻:1487〜91頁;Knauf,M.J.ら、1988年、J Biol Chem.、15巻;263号:15064〜701988頁)が、この形態は、IL−2と比べて、4〜6分の1の生物学的活性の低減を呈した(Chen,S.A.、2000年、J Pharmacol Exp Ther.、293巻:248〜59頁)。IL−2選択的アゴニストは、Treg細胞上の3つの受容体サブユニットの複合体に結合し、これらを活性化させなければならないため、IL−2上の適切なコンジュゲーション部位は、生物活性を最適にするために、注意深く選ばなければならない。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
(項目1)
配列番号1に対して少なくとも95%の配列同一性を有し、置換D109Cを含有し、かつT細胞を活性化させる能力を有するIL−2変異体タンパク質。
(項目2)
配列番号1に対して98%超の配列同一性を有する、項目1に記載のタンパク質。
(項目3)
109位におけるシステインに連結されたポリエチレングリコール部分を有し、該ポリエチレングリコール部分の分子量が、5〜40kDaの間である、項目1に記載のタンパク質。
(項目4)
IL−2タンパク質が、N88R、N88I、N88G、D20H、Q126L、およびQ126Fからなる群から選択される置換のうちの少なくとも1つを含有する、項目1に記載のIL−2変異体タンパク質。
(項目5)
置換C125Sをさらに含む、項目4に記載のIL−2変異体タンパク質。
(項目6)
前記IL−2タンパク質の配列が、置換N88Rおよび置換C125Sを含有する、項目3に記載のIL−2変異体タンパク質。
(項目7)
配列番号1に対して98%の配列同一性を有する、項目6に記載のIL−2変異体タンパク質。
(項目8)
項目4に記載のPEG化タンパク質と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
(項目9)
配列番号1に対して少なくとも95%の配列同一性、D109Cの置換を有し、T細胞を活性化させる能力を有するヒトIL−2変異体タンパク質の循環半減期を延長する方法であって、ポリエチレングリコール部分を、109位におけるシステイン残基に連結するステップを含み、該ポリエチレングリコール部分が、該タンパク質の循環半減期を、該ポリエチレングリコール部分を伴わない同じタンパク質と比較して延長するのに十分な長さである方法。
(項目10)
前記タンパク質が、配列番号1に対して98%超の配列同一性を有する、項目9に記載の方法。
(項目11)
前記タンパク質が、109位におけるシステインに連結された、分子量が5kDa〜40kDaの間であるポリエチレングリコール部分を有する、項目9に記載の方法。
(項目12)
前記タンパク質が、N88R、N88I、N88G、D20H、Q126L、およびQ126Fからなる群から選択される置換のうちの少なくとも1つを含有する、項目9に記載の方法。
(項目13)
前記タンパク質が、置換C125Sをさらに含む、項目12に記載の方法。
(項目14)
前記タンパク質が、置換N88Rおよび置換C125Sを含有する、項目12に記載の方法。
(項目15)
前記タンパク質が、配列番号1に対して98%の配列同一性を有する、項目12に記載の方法。
(項目16)
医薬組成物を、ヒト調節性T細胞濃度を刺激するのに十分な治療有効用量で投与する、項目9に記載の方法。
本明細書で記載される本発明は、調節性T細胞に対する選択的アゴニスト活性と、さらなるアミノ酸置換であって、循環半減期を、IL−2選択的アゴニスト単独と比較して延長する、ポリエチレングリコール(PEG)との化学的コンジュゲーションを可能とするアミノ酸置換とを伴う新規のIL−2タンパク質である。置換されるアミノ酸位置は、IL−2−IL2Rαβγ受容体複合体内の、それらの溶媒への露出と、ポリマーコンジュゲート変異体が、IL2Rαβγ受容体複合体に結合しこれを活性化させる能力を保持する能力の予測とに基づき選択した。システインアミノ酸残基を、選択されたアミノ酸位置へと導入した、一連の組換えIL−2変異体を構築し、これらの変異体タンパク質を、活性についてスクリーニングした。発現および精製に成功したIL−2変異体は、リフォールディングさせ、マレイミド−PEGポリマーにコンジュゲートし、次いで、調節性T細胞に対する選択的アゴニスト活性について調べた。好ましいIL−2選択的アゴニスト変異体であるIL2/N88R/C125S/D109Cは、こうして同定された。この新規のタンパク質およびそのPEGコンジュゲートは、患者における調節性T細胞のレベルおよび活性を、選択的かつ効率的に高め、自己免疫病態を抑制し、したがって、自己免疫疾患を処置するための、安全で有効な治療剤となる。
(導入)
本発明は、IL−2受容体に対する高親和性、高生物活性、およびIL−2自体と比較した循環半減期の伸長を維持しながら、PEGポリマーの、IL−2変異体タンパク質への、特異的で効率的な化学的コンジュゲーションを可能とするアミノ酸置換を含む、新規のIL−2変異体タンパク質である。この変異体タンパク質は、公表されているIL−2−IL2Rαβγ受容体複合体の結晶構造において溶媒へと露出される、IL−2配列内の候補アミノ酸の位置を同定し、選択された位置においてシステイン残基を置換した、変異体タンパク質を構築する工程を介して発見された。これらのIL−2変異体を発現させ、精製し、十分な高レベルで産生された変異体タンパク質を、PEG−マレイミドとコンジュゲートし、次いで、IL2/N88R/D109C−PEGを、Treg細胞に対する生物活性について調べ、活性であることを示した。本発明により規定される分子は、自己免疫病態および炎症性病態を抑制するT細胞の小亜集団の産生を刺激する新規の機構により、自己免疫疾患の安全で有効な処置を可能とする。このパラダイム変革的治療剤は、多数の異なる自己免疫疾患を処置することができる可能性がある。
野生型タンパク質に由来する変異体に言及する場合、「D109C」などのアミノ酸置換への言及は、数(109)による位置における元の残基であるアスパラギン酸(D)と、これに続く置換された残基であるシステイン(C)を指す。
以下の検討項目を、所望の要件を最もよく満たすIL−2部分をデザインするための指針とした。
(1)チオールが、マレイミド活性化PEG試薬およびヨードアセトアミド活性化PEG試薬との極めて特異的な反応性を有するので、遊離(不対合)システイン残基を、IL−2へと工学的導入した。
(2)全ての構築物は、IL−2内の唯一の不対合システイン残基を除去する置換C125Sと、IL2RBに対する親和性を低減するためIL2Rabgに対して選択的である置換N88Rとを伴う野生型ヒトIL−2のバックグラウンドで作製した。C125は、IL2RGとの主要な接触点であるQ126に直接隣接する。
(3)さらなる単一のシステイン置換を、IL−2上の表面への露出部位において作出して、水溶性PEGとの効率的なコンジュゲーションを可能とした。
(4)またPEGコンジュゲーション部位は、IL2−IL2Rαβγ受容体複合体内で溶媒へと露出され(Wang,X.ら、2005年、Science.、310巻:1159〜63頁)、したがって、IL−2Rαβγへの結合およびその活性化を損なう可能性が小さくなるように選んだ。
(5)変異体タンパク質は、発現が良好でなければならず、適正にフォールディングしなければならない。新規の遊離システインの存在は、不適正な分子内ジスルフィド形成およびミスフォールディングを結果としてもたらす場合もあり、他の分子との分子間ジスルフィド架橋を結果としてもたらすことから、凝集をもたらす場合もある。
一般に、本発明の変異体IL−2タンパク質の調製は、本明細書で開示される手順、および認知された組換えDNA技法であって、例えば、ポリメラーゼ連鎖増幅反応(PCR)、プラスミドDNAの調製、制限酵素によるDNAの切断、オリゴヌクレオチドの調製、DNAのライゲーション、mRNAの単離、適切な細胞へのDNAの導入、宿主の形質転換またはトランスフェクション、宿主の培養を包含する組換えDNA技法により遂行することができる。加えて、融合分子は、カオトロピック剤、ならびに周知の電気泳動方法、遠心分離方法、およびクロマトグラフィー方法を使用して、単離および精製することができる。これらの方法に関する開示については、一般に、Sambrookら、Molecular Cloning:A Laboratory Manual(2版(1989年);およびAusubelら、Current Protocols in Molecular Biology、John Wiley & Sons、New York(1989年)を参照されたい。
置換N88Rを伴うIL−2は、IL2Rαβγ受容体に対するIL2選択的アゴニストの例示的な実例である(Shanafelt,A.B.ら、2000年、Nat Biotechnol.、18巻:1197〜202頁)。IL2/N88Rは、IL2RB受容体サブユニットおよびIL2Rβγ受容体複合体への結合が欠損しているが、IL2Rαβγ受容体複合体に結合し、IL2Rαβγ発現PHA活性化T細胞の増殖を、wt IL−2と同程度に効果的に刺激することが可能であるが、一方で、IL2Rβγ発現NK細胞の増殖を刺激する能力の、3,000分の1への低減を示す。同様の活性プロファイルを伴う他のIL2Rαβγ選択的アゴニストは、置換N88I、N88G、およびD20Hを伴うIL−2を含み、また、置換Q126LおよびQ126F(IL2RGサブユニットとの接触残基)を伴う他のIL2変異体も、IL2Rαβγ選択的アゴニスト活性を有する(Cassell,D.J.ら、2002年、Curr Pharm Des.、8巻:2171〜83頁)。当業者ならば、Fc融合タンパク質が同様の活性を有することを予測して、これらのIL2選択的アゴニスト分子のうちのいずれかで、IL2/N88R部分を代用しうることを認識する。前述の突然変異の全ては、wt IL−2、または不対合システイン残基を消失させることにより、IL−2の安定性を促進する置換である、置換C125Sを伴うwt IL−2のバックグラウンドで作製することができる。本発明はまた、IL−2受容体活性化活性に著明な影響を及ぼさずに、産生または安定性を改善する、他の突然変異または切断型と共に使用することもできる。
1)アラニン(A)、グリシン(G);
2)セリン(S)、トレオニン(T);
3)アスパラギン酸(D)、グルタミン酸(E);
4)アスパラギン(N)、グルタミン(Q);
5)システイン(C)、メチオニン(M);
6)アルギニン(R)、リシン(K)、ヒスチジン(H);
7)イソロイシン(I)、ロイシン(L)、バリン(V);および
8)フェニルアラニン(F)、チロシン(Y)、トリプトファン(W)
は各々、互いに対して保存的置換であるアミノ酸を含有する。
候補タンパク質の生物学的活性を特徴付けるためには、頑健かつ定量的なバイオアッセイが必要である。これらのアッセイは、IL2受容体の活性化を測定し、Treg内の活性化の、下流における機能的帰結を測定し、活性化Tregの、治療上意味がある転帰および機能を測定するものとする。これらのアッセイは、IL2 PEGコンジュゲート分子の治療活性および効能を測定するのに使用することができ、また、動物またはヒトにおけるIL2 PEGコンジュゲートの薬力学的特性の測定のためにも使用することができる。1つのアッセイは、リン酸化タンパク質(pSTAT5)に特異的な抗体によるフローサイトメトリーによって測定される、シグナル伝達タンパク質STAT5のリン酸化を測定する。STAT5のリン酸化は、IL−2シグナル伝達経路における不可欠のステップである。STAT5は、Tregの発生に不可欠であり、CD4+CD25+細胞内で発現したSTAT5の構成的な活性化形態は、IL−2の非存在下におけるTreg細胞の産生に十分である(Mahmud,S.A.ら、2013年、JAKSTAT、2巻:e23154頁)。したがって、Treg細胞内のリン酸化STAT5(pSTAT5)の測定は、当業者により、これらの細胞内のIL−2の活性化を反映するものとして認知され、適切な曝露時間および曝露条件を所与とした場合における、IL−2処置の、他の生物学的転帰を予測するものとなる。機能的活性化についての別のアッセイは、IL−2により刺激されるTreg細胞の増殖を測定する。当業者は、Tregの増殖を、精製Treg細胞へのトリチウム化チミジンの取り込みにより測定することもでき、フローサイトメトリーにより測定される、混合細胞集団内のTreg細胞数の増大、およびCD4+CD25+FOXP3+マーカー表現型またはCD4+CD25+CD127−マーカー表現型の周波数により測定することもでき、Ki−67など、増殖に関連する細胞周期タンパク質の、Treg細胞内の発現の増大により測定することもでき、Treg細胞内の、カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル(CFSE)などの生体蛍光色素の、細胞分裂に関連する希釈の、フローサイトメトリーでの測定により測定することもできることを認識する。IL−2による、Tregの機能的活性化についての別のアッセイは、Tregの安定性の増大である。pTreg細胞は、不安定であり、Th1エフェクターT細胞およびTh17エフェクターT細胞へと分化する潜在的可能性を有すると考える者もいる。IL−2によるTregの活性化は、Tregを安定化させることが可能であり、この分化を防止しうる(Chen,Q.ら、2011年、J Immunol.、186巻:6329〜37頁)。IL−2によるTregの刺激の別の転帰は、CTLA4、GITR、LAG3、TIGIT、IL−10、CD39、およびCD73など、Tregの機能的エフェクター分子であって、Tregの免疫抑制活性に寄与するエフェクター分子のレベルの刺激である。
本発明の融合タンパク質による医薬組成物は、従来の方法に従う、非経口(特に、静脈内または皮下)送達のために製剤化された組成物として規定される。一般に、医薬製剤は、本発明の融合タンパク質を、食塩水、緩衝食塩水、水中に5%デキストロースなど、薬学的に許容される媒体と組み合わせて含む。製剤はさらに、1または複数の賦形剤、保存剤、可溶化剤、緩衝剤、生体表面上におけるタンパク質の喪失を防止するアルブミンなども含みうる。当技術分野では、製剤化の方法が周知であり、例えば、Remington:The Science and Practice of Pharmacy、Gennaro編、Mack Publishing Co.、Easton、Pa.、増補19版、1995年において開示されている。
本発明のIL−2−PEGコンジュゲートは、非経口経路により投与することが好ましい。皮下経路は、好ましい経路であるが、また、静脈内投与、筋内投与、および真皮下投与も使用することができる。皮下経路または筋内経路のためには、デポ剤およびデポ製剤を使用することができる。ある特定の疾患には、特化された投与経路を使用することができる。例えば、炎症性眼疾患には、眼内注射を使用することができる。融合タンパク質は、総容量に対して約0.1〜10mcg/mlの濃度で使用しうるが、0.01mcg/ml〜100mcg/mlの範囲内の濃度も使用することができる。
本発明の治療から利益を得うる疾患の一部について言及してきた。しかし、自己免疫疾患におけるTreg細胞の役割は、極めて活発な研究領域であり、さらなる疾患が、本発明により処置可能な疾患として同定される可能性が高い。自己免疫疾患とは、免疫系が、ヒト自身のタンパク質、細胞、および組織を攻撃するヒト疾患として定義される。自己免疫疾患についての包括的な列挙および総説は、The Autoimmune Diseases(RoseおよびMackay、2014年、Academic Press)において見出すことができる。
PEGをIL−2にコンジュゲートするための候補部位を選択するために、溶媒へと露出され、IL−2の、IL−2Rαβγへの結合に直接的または立体的に干渉しないと考えられるアミノ酸残基を同定した。戦略を、図2に概略的に示す。IL−2Rαβγ受容体の細胞外ドメインと複合したIL−2についての、公表された結晶構造(Wang,X.ら、2005年、Science、310巻:1159〜63頁;Stauber,D.J.ら、2006年、Proc Natl Acad Sci、103巻:2788〜93頁)を精査することにより、以下の残基:S6、K8、K48、K49、T51、E52、K54、K97、G98、F103、M104、E106、D109、およびT133(図3)を同定した。結晶構造中に見ることはできないが、近傍の残基についての情報に基づくと、基準を満たす可能性が高いさらなるアミノ酸残基は、A1、P2、T3、S4、S5、S99、E100、T101、およびT102である。この候補のリストに基づき、表示の位置においてシステイン置換を伴う12の変異体(T3C、S6C、K8C、K48C、K49C、T51C、K97C、G98C、F103C、M104C、E106C、およびD109C)を構築し、産生した(表I)。
ヒトIL−2(配列番号1)のバックグラウンドで施された、置換N88RおよびC126Sを含有する表1に列挙される置換の各々を伴うタンパク質をコードするcDNAを、制限部位NCOIおよびBAM HIをそれぞれ5’端および3’端に組み込むDNA合成(Genescript、Piscataway、NJ)により調製し、pUC57にクローニングした。次いで、Nco1部位およびBAM H1部位を使用して、cDNAインサートを、pET3dベクター(EMD Millipore、Billerica、Massachusetts)にクローニングした。構築物を、BL21(DE3)細胞へと形質転換し、アンピシリン耐性について選択した。形質転換された細胞は、50ug/mlのアンピシリンおよび1%のグルコースを含有するLB培地による0.5Lの培養物中、37℃で、0.6〜1.0の間のABS280まで増殖させた。次いで、IPTGを、0.5mMまで添加して、タンパク質の発現を誘導し、誘導の3時間後において、培養物を採取した。
精製されたIL2/N88R/C125S/D109Cを、20kDaのPEGとコンジュゲートして、コンジュゲートの生物活性について調べた。IL2/N88R/C125S/D109Cを、0.1MのMES(pH6.0)へと透析し、タンパク質濃度は、0.655の吸光係数を使用するOD280(0.1%のときのAbs 280nM)により決定し、50倍モル過剰のマレイミド−PEG(20,000g/M;NOF America、White Plains、NY)と、室温で30分間にわたり反応させた。L−システインを、マレイミド−PEGに対する2倍モル過剰まで添加することにより、反応を停止させた。SDS−PAGEによる、10ugの反応混合物についての解析は、検出可能な残留未反応IL−2タンパク質を示さなかった。
PEG化されたIL2/N88R/C125S/D109Cの、T細胞に対する活性は、CD4+ T細胞サブセット内のホスホSTAT5(pSTAT5)レベルの刺激を測定することにより決定した。IL−2の、IL2RBおよびIL2RGによるヘテロ二量体への結合を介する、IL−2受容体の活性化は、JAK1タンパク質およびJAK3タンパク質のそれぞれの、IL2RB細胞質ドメインおよびIL2RG細胞質ドメインとの相互作用を促進することから、STAT5タンパク質(pSTAT5)のリン酸化を刺激し、次いで、これにより、IL−2シグナルが、核へと伝達される。STAT5は、Treg細胞の発生に必要であり、IL−2の非存在下における、CD4+ T細胞内の、STAT5の人工的な活性化でも、Treg細胞の産生に十分である(Mahmud,S.A.ら、2013年、JAKSTAT、2巻:e23154頁)。pSTAT5のレベルは、透過化された細胞内の蛍光活性化細胞分取(FACS)によって、リン酸化STAT5ペプチドに対する抗体により測定した。Treg細胞は、CD25を構成的に発現し、CD25の発現レベルで上位1%の細胞は、Treg細胞について高度に濃縮されている(Jailwala,P.ら、2009年、PLoS One.、2009、4巻:e6527頁;Long,S.A.ら、2010年、Diabetes、59巻:407〜15頁)。したがって、FACSデータをゲーティングし、CD25high(CD25発現細胞のうちの上位1〜2%)群およびCD25low/−群とした。
IL2/N88R/C125S/D109C−PEGの選択性を、より広範な生物学的コンテキストにおいて決定するために、STAT5活性化を、画分化されていない粗ヒトPBMC中の、全ての鍵となる免疫細胞型にわたり測定するアッセイを開発した。ヒトPBMCを、Ficoll−Hypaque遠心分離により、正常ボランティアから単離した。PBMC 106個を、グルコース(Lonza)および10%のFBS(Omega)を含むX−VIVO15培地中に懸濁させ、10−8Mの被験タンパク質と共に37℃で20分間にわたり処置した。次いで、細胞を、製造元の指示書に従い、Foxp3/Transcription Factor Staining Buffer Set(EBIO)で処置した。次いで、細胞を、Cytofix bufferで固定し、実施例3で記載した通り、Perm Buffer IIIで透過処理した。次いで、固定および透過処理された細胞を、1%のFBS/PBSで洗浄し、暗所内、室温で60分間にわたり、抗体混合物で染色した。次いで、染色された細胞を、1%のFBS/PBS中で洗浄し、PBS中に再懸濁させ、Fortessa flow cytometer(BD Biosciences)で解析した。抗体ミックスは、抗CD4−PerCP−Cy5.5(BD、#560650)、抗pSTAT5−AF−488(BD、#612598)、抗CD25−PE(BD、#560989)、抗CD56−PE−CF594(BD、#562328)、抗FOXP3−AF647(BD、#560889)、抗CD3−V450(BD、560366)、および抗CD8−BV650(Biolegend、#301041)からなった。この染色手順は、7つの鍵となる免疫細胞型内の、pSTAT5レベルのモニタリングを可能とした。
Claims (17)
- 置換D109Cを含み、IL−2Rαβγ受容体を選択的に活性化させる能力を有するヒトIL−2変異体タンパク質。
- 配列番号1のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の配列同一性を有する、請求項1に記載のヒトIL−2変異体タンパク質。
- 配列番号1のアミノ酸配列に対して少なくとも98%の配列同一性を有する、請求項1に記載のヒトIL−2変異体タンパク質。
- 109位におけるシステインに連結されたポリエチレングリコール部分を有し、該ポリエチレングリコール部分の分子量が、5〜40kDaの間である、請求項1に記載のヒトIL−2変異体タンパク質。
- 前記ヒトIL−2変異体タンパク質が、N88R、N88I、N88G、D20H、Q126L、およびQ126Fからなる群から選択される少なくとも1つの置換を含む、請求項1に記載のヒトIL−2変異体タンパク質。
- 置換C125Sをさらに含む、請求項5に記載のヒトIL−2変異体タンパク質。
- 前記ヒトIL−2変異体タンパク質が、置換N88Rおよび置換C125Sを含む、請求項4に記載のヒトIL−2変異体タンパク質。
- 請求項4に記載のヒトIL−2変異体タンパク質と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
- 置換D109Cを含み、IL−2Rαβγ受容体を選択的に活性化させる能力を有するヒトIL−2変異体タンパク質の循環半減期を延長する方法であって、該方法が、ポリエチレングリコール部分を、109位におけるシステイン残基に連結するステップを含み、該ポリエチレングリコール部分が、該タンパク質の循環半減期を、該ポリエチレングリコール部分を伴わない同じタンパク質と比較して延長するのに十分な長さである、方法。
- 前記ヒトIL−2変異体タンパク質が、配列番号1のアミノ酸配列に対して少なくとも95%の配列同一性を有する、請求項9に記載の方法。
- 前記ポリエチレングリコール部分の分子量が、5〜40kDaの間である、請求項9に記載の方法。
- 前記ヒトIL−2変異体タンパク質が、N88R、N88I、N88G、D20H、Q126L、およびQ126Fからなる群から選択される少なくとも1つの置換を含む、請求項9に記載の方法。
- 前記ヒトIL−2変異体タンパク質が、置換C125Sをさらに含む、請求項12に記載の方法。
- 前記ヒトIL−2変異体タンパク質が、置換N88Rおよび置換C125Sを含む、請求項12に記載の方法。
- 前記ヒトIL−2変異体タンパク質が、配列番号1のアミノ酸配列に対して少なくとも98%の配列同一性を有する、請求項12に記載の方法。
- 対象における自己免疫疾患を処置するための医薬組成物であって、該組成物が、置換D109Cを含み、IL−2Rαβγ受容体を選択的に活性化させる能力を有するヒトIL−2変異体タンパク質を含む、医薬組成物。
- 前記自己免疫疾患が、1型糖尿病、全身性エリテマトーデス、移植片対宿主病、および自己免疫性血管炎からなる群から選択される、請求項17に記載の医薬組成物。
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