JP6920462B2

JP6920462B2 - オキシレスベラトロールのアルトカルプス・ヒルスタスからの新規な抽出方法

Info

Publication number: JP6920462B2
Application number: JP2019555560A
Authority: JP
Inventors: ムハンメドマジード; カリアナムナガブシャナム; マハデバナヤク; ナガラジャンアナンタナラヤナン
Original assignee: ムハンメドマジード; カリアナムナガブシャナム; マハデバナヤク; ナガラジャンアナンタナラヤナン
Priority date: 2016-12-22
Filing date: 2016-12-22
Publication date: 2021-08-18
Anticipated expiration: 2036-12-22
Also published as: EP3558283A4; WO2018118059A1; EP3558283A1; CA3047702A1; EP3558283B1; US20200039907A1; CA3047702C; JP2020503387A

Description

本発明は、オキシレスベラトロール（Ｏｘｙｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ）のアルトカルプス・ヒルスタス（Ａｒｔｏｃａｒｐｕｓｈｉｒｓｕｔｕｓ；Ａ．ｈｉｒｓｕｔｕｓ）からの抽出方法に関連する。

オキシレスベラトロールは、クワ科（Ｍｏｒａｃｅａｅ）、ユリ科（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ）、グネツム科（Ｇｎｅｔａｃｅａｅ）などを包含する多くの広く分布する植物の根、葉、茎及び果実に見られる水素置換スチルベンである。この化合物の生物活性は、以下の科学論文に十分に記述されている；
１．ＬｉＸｕ，ＣｈａｏＬｉｕ，ＷｅｉＸｉａｎｇ，ＨｕＣｈｅｎ，ＸｉａｏｌｉＱｉｎａｎｄＸｈａｎｚｈｉＨｕａｎｇ，ＡｄｖａｎｃｅｓｉｎｔｈｅＳｔｕｄｙｏｆＯｘｙｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ，ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２０１４，１０，４４−５４
２．Ｌｉｋｈｉｔｗｉｔａｙａｗｕｉｄ，Ｋ，Ｓｏｒｎｓｕｔｅ，Ａ．，Ｓｒｉｔｕｌａｒａｋ，Ｂ．，Ｐｌｏｙｐｒａｄｉｔｈ，Ｐ．，Ｃｈｅｍｉｃａｌｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｏｆｏｘｙｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ（ｔｒａｎｓ−２，４，３’，５’−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｘｙｓｔｉｌｂｅｎｅ）ｉｎｔｏａｐｏｔｅｎｔｔｙｒｏｓｉｎａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒａｎｄａｓｔｒｏｎｇｃｙｔｏｔｏｘｉｃａｇｅｎｔ．（Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆ＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙＬｅｔｔｅｒｓ，２００６，１６，５６５０−５６５３）

これは、ＨＩＶの適度な（ｍｏｄｅｓｔ）抑制についても報告されている（ＬｉｋｈｉｔｗｉｔａｙａｗｕｉｄＫ，ＳｒｉｔｕｌａｒａｋＢ，ＢｅｎｃｈａｎａｋＫ，ＬｉｐｉｐｕｎＶ，ＭａｔｈｅｗＪ，ＳｃｈｉｎａｚｉＲＦ，ＰｈｅｎｏｌｉｃｓｗｉｔｈａｎｔｉｖｉｒａｌａｃｔｉｖｉｔｙｆｒｏｍＭｉｌｌｅｔｔｉａｅｒｙｔｈｒｏｃａｌｙｘａｎｄＡｒｔｏｃａｒｐｕｓｌａｋｏｏｃｈａ，ＮａｔＰｒｏｄＲｅｓ．２００５Ｆｅｂ；１９（２）：１７７−８２）。

オキシレスベラトロールはいくつかのアルトカルプス種（Ａ．ｌａｋｏｏｃｈａＲｏｘｂ．；Ａ．ｃｈａｍｐｌａｓｈａＲｏｘｂ．；Ａ．ｃｈａｍｐｌａｓｈａＲｏｘｂ．；Ａ．ｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌｕｓ；Ａ．ｇｏｍｅｚｉａｎｕｓＷａｌｌ．）から、ＨＰＬＣ，カラムクロマトグラフィーなどのようなクロマトグラフ技術を用いて単離されている（ＮａｓａｐｏｎＰｏｖｉｃｈｉｔ，ＡｍｐａｉＰｈｒｕｔｉｖｏｒａｐｏｎｇｋｕｌ，ＭａｉｔｒｅｅＳｕｔｔａｊｉｔａｎｄＰｉｍｐｏｒｎＬｅｅｌａｐｏｒｎｐｉｓｉｄ，ＡｎｔｉｇｌｙｃａｔｉｏｎａｎｄａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆＯｘｙｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｈｅａｒｔｗｏｏｄｏｆＡｒｔｏｃａｒｐｕｓｌａｋｏｏｃｈａＲｏｘｂ．，ＭａｅｊｏＩｎｔ．Ｊ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．２０１０，４（０３），４５４−４６１）。これらの技術は高価かつ時間のかかるものであるが、簡便で費用のかからず、かつ信頼できる単離方法が、オキシレスベラトロールの大規模工業生産方法のために技術的に望まれている。本発明は、そのような技術的問題を、高い回収率を有する、アルトカルプス・ヒルスタスからのオキシレスベラトロールの簡便な溶媒−溶媒精製方法を開示することにより解決する。

簡便で、商業的に実現可能なアルトカルプス・ヒルスタスからのオキシレスベラトロールの抽出方法を開示することは、本発明の主目的である。
本発明は前記目的を果たし、かつさらなる関連する利点を提供する。

アルトカルプス・ヒルスタスからのオキシレスベラトロールの抽出方法を開示する。より具体的には、本発明は、簡便な溶媒−溶媒精製方法を用いたアルトカルプス・ヒルスタスからのオキシレスベラトロールの新規な抽出方法を開示する。

図１は、¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆、３００ＭＨｚ）：δ９．７２（１Ｈ、ｓ、５−ＯＨ）、９．５４（１Ｈ、ｓＯＨ）、９．３２（２Ｈ、ｓ、ＯＨ）、７．３３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、Ｈ−６）、７．１４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１６．５Ｈｚ、Ｈ−α）、６．７６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１６．５Ｈｚ、Ｈ−β）、６．３４（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、Ｈ−２’及びＨ−６’）、６．３０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、Ｈ−３）、６．２４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．４及び２．１Ｈｚ、Ｈ−５）、６．０６（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、Ｈ−４’）を示す。図２は、オキシレスベラトロールの¹³ＣＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆、７５ＭＨｚ）：δ１５８．７５（Ｃ−３’及び５’）、１５８．３７（Ｃ−４）、１５６．３０（Ｃ−２）、１４０．３６（Ｃ−１’）、１２７．６０（Ｃ−６）、１２４．９７（Ｃ−β）、１２３．５７（Ｃ−α）、１１５．６１（Ｃ−１）、１０７．６０（Ｃ−５）、１０４．３４（Ｃ−２’及び６’）、１０２．８７（Ｃ−４’）、１０１．７０（Ｃ−３）を示す。図３ａは、アルトカルプス・ヒルスタスから得られた化合物オキシレスベラトロールの液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣＭＳ）を示す。図３ｂは、アルトカルプス・ヒルスタスから得られた化合物オキシレスベラトロールの液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣＭＳ）を示す。図４は、アルトカルプス・ヒルスタスから得られた化合物オキシレスベラトロールの高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を示す。

最も好ましい実施形態においては、本発明はアルトカルプス・ヒルスタスからのオキシレスベラトロールの新規な抽出方法を開示し、前記方法は、
ａ）アルトカルプス・ヒルスタスの木を、切断し、乾燥し、及びすり潰して粗粉末にする工程、
ｂ）工程ａの粉末状の材料を、熱エタノール（９倍量）を用いて完全に抽出する工程、
ｃ）工程ｂの前記エタノール抽出物を、濾過して分離する工程、
ｄ）工程ｃの前記抽出物を、５０−５５℃の真空下で濃縮して厚いペーストにする工程、
ｅ）工程ｄの前記抽出物を、６５−７０℃の真空棚段乾燥器中で完全に乾燥し、粉末を得る工程、
ｆ）工程ｅの前記粉末を、エタノール（２倍量）中に溶解する工程、
ｇ）工程ｆの前記エタノール抽出物を、連続的な攪拌下で１０倍量の水にゆっくりと加える工程、
ｈ）工程ｇから得られた前記不溶物を、濾過により分離して透明層を得る工程、
ｉ）工程ｈの前記透明層を、クロロホルム（１倍量）を用いて洗浄し、及びクロロホルム層を廃棄する工程、
ｊ）工程ｉの前記透明層を、酢酸エチル（１倍量）を用いて抽出する工程、
ｋ）工程ｊの前記酢酸エチル層を、５０−５５℃の真空下で濃縮して厚いペーストにする工程、
ｌ）工程ｋの前記濃縮抽出物を、６５−７０℃の真空棚段乾燥器中で乾燥して粉末を得る工程、
ｍ）工程ｌの前記粉末を、水（４倍量）に溶解し、及び攪拌下で８０−９０℃になるまで８時間加熱する工程、
ｎ）工程ｍの前記水層を、１０−１５℃になるまで８時間冷却し、及び結晶化する工程、
ｏ）工程ｎから得られた前記結晶を、濾過する工程、
ｐ）工程ｏの前記結晶を、７０−７５℃の真空中で乾燥する工程、
ｑ）工程ｐの前記結晶を、その¹Ｈ及び¹³ＣＮＭＲスペクトル並びにそのＬＣＭＳスペクトルから、ＳＴＲ＃１で表されるオキシレスベラトロールとして特徴づける工程、

STR#1

を含む。

本発明の他の特徴及び利点は、本発明の原理を例として説明する添付の図面と併せて、以下の詳細な記述により明らかになろう。

実施例
抽出物の準備
アルトカルプス・ヒルスタスの木を、収集及び切断して小片にし、日陰で乾燥させた。乾燥させた材料をすり潰して粗粉末にし、かつ気密容器に保管した。粉末にした材料を、浸漬する量の熱エタノール（３倍量×３回）で完全に抽出した。エタノール抽出物を、濾過により分離し、かつクリーンコンテナに収集した。まとめた抽出物を、５０−５５℃の真空下で濃縮して厚いペーストにし、かつ真空棚段乾燥器中で乾燥し、粉末を得た。粉末にした抽出物を、室温で、気密容器内で収集及び保管した。

活性化合物の単離及び特徴づけ
アルトカルプス・ヒルスタスの木からの粉末状エタノール抽出物を、少量（２倍量）のエタノールに再溶解し、かつ１０倍量の水に注いだ。材料を濾過して、水溶性分画及び不溶性分画に分離した。次いで水溶性分画を酢酸エチル（１倍量）で抽出し、酢酸エチル層を完全に乾燥させて粉末を得た。次いで酢酸エチル分画から得られた粉末を水（４倍量）に注ぎ、８０−９０℃で８時間攪拌した。室温に冷却した後、溶液を濾過し、かつ結晶化固体材料を真空下で、６５−７５℃で乾燥させた。この濾過した結晶化材料を、その¹Ｈ及び¹³ＣＮＭＲスペクトル及びそのＬＣＭＳスペクトルからオキシレスベラトロールとして特徴づけ、かつ結晶化材料は、報告された値と比較可能であった。単離されたオキシレスベラトロールは、以下の値を示した：Ｃ₁₄Ｈ₁₂Ｏ₄．融点：１９１−１９４℃。色：ペールブラウン微細粉末、ＡＰＣＩ−ＭＳｍ／ｚ２４５．００（Ｍ＋Ｈ⁺）及び２４５．０５（Ｍ−Ｈ^-）（Ｃ₁₄Ｈ₁₂Ｏ₄は２４４．２４２６を要する）。化合物の純度を、ＨＰＬＣによりさらに確かめた。

本発明を、好ましい実施形態を参照して説明したが、本発明がそれに限定されないことは、当技術分野の当業者により明確に理解されるであろう。むしろ、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲と併せてのみ理解されるべきである。
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔１〕アルトカルプス・ヒルスタスからのオキシレスベラトロールの新規な抽出方法であって、前記方法が、
ａ）アルトカルプス・ヒルスタスの木を、切断し、乾燥し、及びすり潰して粗粉末にする工程、
ｂ）工程ａの粉末状の材料を、熱エタノール（９倍量）を用いて完全に抽出する工程、
ｃ）工程ｂの前記エタノール抽出物を、濾過して分離する工程、
ｄ）工程ｃの前記抽出物を、５０−５５℃の真空下で濃縮して厚いペーストにする工程、
ｅ）工程ｄの前記抽出物を、６５−７０℃の真空棚段乾燥器中で完全に乾燥し、粉末を得る工程、
ｆ）工程ｅの前記粉末を、エタノール（２倍量）中に溶解する工程、
ｇ）工程ｆの前記エタノール抽出物を、連続的な攪拌下で１０倍量の水にゆっくりと加える工程、
ｈ）工程ｇから得られた前記不溶物を、濾過により分離して透明層を得る工程、
ｉ）工程ｈの前記透明層を、クロロホルム（１倍量）を用いて洗浄し、及びクロロホルム層を廃棄する工程、
ｊ）工程ｉの前記透明層を、酢酸エチル（１倍量）を用いて抽出する工程、
ｋ）工程ｊの前記酢酸エチル層を、５０−５５℃の真空下で濃縮して厚いペーストにする工程、
ｌ）工程ｋの前記濃縮抽出物を、６５−７０℃の真空棚段乾燥器中で乾燥して粉末を得る工程、
ｍ）工程ｌの前記粉末を、水（４倍量）に溶解し、及び攪拌下で８０−９０℃になるまで８時間加熱する工程、
ｎ）工程ｍの前記水層を、１０−１５℃になるまで８時間冷却し、及び結晶化する工程、
ｏ）工程ｎから得られた前記結晶を、濾過する工程、
ｐ）工程ｏの前記結晶を、７０−７５℃の真空中で乾燥する工程、
ｑ）工程ｐの前記結晶を、その ¹ Ｈ及び ¹³ ＣＮＭＲスペクトル並びにそのＬＣＭＳスペクトルから、ＳＴＲ＃１で表されるオキシレスベラトロールとして特徴づける工程、

STR#1

を含む、方法。

Claims

アルトカルプス・ヒルスタスからのオキシレスベラトロールの新規な抽出方法であって、前記方法が、
ａ）アルトカルプス・ヒルスタスの木を、切断し、乾燥し、及びすり潰して粗粉末にする工程、
ｂ）工程ａの粉末状の材料を、熱エタノール（９倍容積）を用いて抽出する工程、
ｃ）工程ｂの前記エタノール抽出物を、濾過して分離する工程、
ｄ）工程ｃの前記抽出物を、５０−５５℃の真空下で濃縮して厚いペーストにする工程、
ｅ）工程ｄの前記抽出物を、６５−７０℃の真空棚段乾燥器中で乾燥し、粉末を得る工程、
ｆ）工程ｅの前記粉末を、エタノール（２倍容積）中に溶解する工程、
ｇ）工程ｆの前記エタノール抽出物を、連続的な攪拌下で１０倍容積の水にゆっくりと加える工程、
ｈ）工程ｇから得られた前記不溶物を、濾過により分離して透明層を得る工程、
ｉ）工程ｈの前記透明層を、クロロホルム（１倍容積）を用いて洗浄し、及びクロロホルム層を廃棄する工程、
ｊ）工程ｉの前記透明層を、酢酸エチル（１倍容積）を用いて抽出する工程、
ｋ）工程ｊの前記酢酸エチル層を、５０−５５℃の真空下で濃縮して厚いペーストにする工程、
ｌ）工程ｋの前記濃縮抽出物を、６５−７０℃の真空棚段乾燥器中で乾燥して粉末を得る工程、
ｍ）工程ｌの前記粉末を、水（４倍容積）に溶解し、及び攪拌下で８０−９０℃になるまで８時間加熱する工程、
ｎ）工程ｍの前記水層を、１０−１５℃になるまで８時間冷却し、及び結晶化する工程、
ｏ）工程ｎから得られた前記結晶を、濾過する工程、
ｐ）工程ｏの前記結晶を、７０−７５℃の真空中で乾燥する工程、
ｑ）工程ｐの前記結晶を、その¹Ｈ及び¹³ＣＮＭＲスペクトル並びにそのＬＣＭＳスペクトルから、ＳＴＲ＃１で表されるオキシレスベラトロールとして特徴づける工程、

STR#1

を含む、方法。