JP6887014B2

JP6887014B2 - 置換フェニルプロピオン酸化合物のエナンチオマー及びその製造方法、組成物並びに応用

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Publication number: JP6887014B2
Application number: JP2019517832A
Authority: JP
Inventors: ユイ，チンティー; パン，トースー; シャン，ソン; リー，チーピン; ルー，シエンピン
Original assignee: シンセンチップスクリーンバイオサイエンセズカンパニーリミテッド
Priority date: 2016-09-27
Filing date: 2017-09-27
Publication date: 2021-06-16
Anticipated expiration: 2037-09-27
Also published as: TW201813955A; CA3038382A1; RU2735524C2; CN107868032B; RU2019112450A; TWI729218B; MX2019003457A; CN107868032A; RU2019112450A3; CN112479977B; KR20190053263A; AU2017333055B2; AU2017333055A1; JP2019529503A; CN112479977A; WO2018059428A1; EP3521275A4; CA3038382C; EP3521275A1; BR112019005980A2

Description

相互参照

本願は、２０１６年０９月２７日に中国特許庁へ提出された、出願番号が２０１６１０８５６９１４．７、発明の名称が「（−）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸及びその製造方法、組成物並びに応用」である中国特許出願に基づき優先権を主張し、その全内容は、援用により本明細書に組み込まれる。

本発明は、医薬品の技術分野に関し、具体的には、２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸の（−）−エナンチオマー及びその薬用塩、製造方法に関し、前記化合物の組成物及びその応用を含む。

ＰＰＡＲγは、核内受容体スーパーファミリーの一員であり、主に脂肪組織において発現される。このファミリーの他のメンバーであるＰＰＡＲαは、主に肝臓組織で発現され、フィブラート（ｆｉｂｒａｔｅｓ）と呼ばれるリガンドによって活性化され、トリグリセリド及びコレステロール含有量を低下させる作用を奏することができる。ＰＰＡＲαは、ペルオキシダーゼの増殖を刺激し、脂肪酸の酸化を促進することにより、血中の脂肪酸含有量を低減させることができる（ＫｅｌｌｅｒａｎｄＷａｈｌｉ:ＴｒｅｎｄｓＥｎｄｏｃｒｉｎＭｅｔａｂ１９９３，４：２９１−２９６）。最近、ＰＰＡＲδは、脂質代謝調整剤として、広範囲の脂肪「燃焼」の作用があることが報告された。インビトロ実験で、脂肪細胞および骨格筋細胞におけるＰＰＡＲδの活性化は、脂肪酸の酸化及び利用に寄与する。ＰＰＡＲαの発現量が少ない動物脂肪組織におけるＰＰＡＲδの活性化は、脂肪酸酸化およびエネルギー消費に関連する遺伝子の発現を特異的に誘導し、脂質レベルの改善及びダイエットの効果を達することができる。重要なことには、これらのＰＰＡＲδが活性化された動物は、高脂肪食および遺伝的要因（Ｌｅｐｒ（ｄｂ/ｄｂ））誘発性肥満に対して完全に抵抗力がある。Ｌｅｐｒ（ｄｂ/ｄｂ）マウスは、ＰＰＡＲδ活性化剤により短期間で治療された後、蓄積されている脂肪を消費させることができ、一方、ＰＰＡＲδ欠損マウスについては、高脂肪食で試験されて肥満が引き起こされてしまう（ＷａｎｇＹＸｅｔａｌ．，Ｃｅｌｌ２００３Ａｐｒ１８；１１３（２）：１５９−７０）。

ＰＰＡＲα、ＰＰＡＲγ及びＰＰＡＲδは、いずれもレチノイドＸ受容体とヘテロ二量体を形成する。従って、ＲＸＲ／ＰＰＡＲヘテロ二量体は、細胞糖、脂質のバランスおよび脂肪細胞分化の制御においても重要な役割を果たす。ＰＰＡＲγの活性化剤及びＰＰＡＲα／ＰＰＡＲγの二重活性化剤を含むいくつかの新たな化合物は、動物およびヒトにおいて代謝症候群の予防及び治療において良好な効果がある（国際公開第００／０８００２号、国際公開第０１／５７００１Ａ１号、米国特許第６０５４４５３号、欧州特許第０８８３１７Ｂ１号、国際公開第９７／２５０４２号、国際公開第０２／２６７２９Ａ２号、及び米国特許第６３５３０１８Ｂ１号）。従って、ＰＰＡＲα、ＰＰＡＲγ及びＰＰＡＲδ活性化作用を持つ、新たな化合物のスクリーニングは、代謝異常疾患の総合的治療にとって非常に重要な意味がある。これらの代謝異常疾患は、糖尿病、高血圧、肥満症、インシュリン抵抗症、高トリグリセリド血症、高血糖症、高コレステロール血症、アテローム性動脈硬化症、冠状動脈疾患、及び他の臓血管障害などの代謝症候群を含む。

本発明者は、中国特許ＣＮ１２５７８９３Ｃは血糖降下・脂質低下作用に優れたアラルキルアミノ酸類であるＰＰＡＲα、γ及びδ共活性化剤を開示し、その実施例１５は、具体的には、２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸及びその製造方法を開示し，その実施例２１〜２８は、当該化合物の薬理活性を開示している。２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸は、ラセミ体であるが、中国特許ＣＮ１２５７８９３はその右旋性（＋）又は左旋性（−）のエナンチオマーを開示せず、その右旋性（＋）又は左旋性（−）のエナンチオマーの製造方法及び薬理活性も開示されていない。

一般的に、化合物は、キラル部位の違いに基づいて互いに鏡像関係にある、複数対の鏡像異性体がある。互いに鏡像関係にある２つのエナンチオマーは、光学活性に加えて、通常に同じ物理的性質を持つ。具体的には、２つのエナンチオマーは、融点、沸点、溶解度、密度及び屈折率の上で通常完全に又はほぼ同一であるが、旋光性の上で完全に反対である。２つのエナンチオマーは、同程度で偏光面を回転させるが、反対方向であるため、それらが混合された際に、正味の旋光度は観察されない。言い換えれば、ラセミ体の旋光度は理論的にはゼロであり、実際にはゼロに近い。光学活性の違いにより、ラセミ体と各エナンチオマーとは、生理活性及び毒性に異なり得る。しかしながら、このような生理活性及び毒性の違いは予測できないことが多いために、旋光性の違いから事前に予測することができない。一般的に、２つの異性体の生理活性（薬力学的作用を含む）と光学活性以外の物理的化学的性質とは異ならず、完全に同じであることが多い。一定の薬力学的な差異があることは少ない。薬力学的な差異がある場合には、主に、次のような状況があり、１）エナンチオマーは薬理活性が類似しているが、活性の強度が異なる。例えば、オフロキサシンは、Ｓ異性体の抗菌活性がＲ異性体よりも８〜１３５倍強い（ＭｉｔｓｃｈｅｒＬ．Ａ．ｅｔａｌ．，ＪＭｅｄＣｈｅｍ，１９８７，３０（１２）：２２８３−６）；２）エナンチオマーは薬理活性が反対であり、互いに拮抗的に作用する。例えば、ピセナドール（Ｐｉｃｅｎａｄｏｌ）は、（＋）−異性体がオピオイド受容体作動薬、（−）−異性体がオピオイド受容体拮抗薬である（ＣａｒｔｅｒＲ．Ｂ．ｅｔａｌ．，ＪＰｈａｒｍａｃｏｌＥｘｐＴｈｅｒ，１９８５，２３４（２）：２９９−３０６）；３）エナンチオマーは薬理活性が相補的である。例えば、利尿薬であるインダクリノンは、Ｒ異性体が利尿作用を持つが、血液中の尿酸を増加させるという副作用が発現し、一方、Ｓ異性体が尿酸排泄促進作用があり、Ｒ異性体の副作用を効果的に減少させることができ、両方を併用するのは有益です。さらなる研究により、Ｒ異性体に対するＳ異性体の比が１：４又は１：８となる場合には治療效果が最も良いことが示された（ＴｏｂｅｒｔＪ．Ａ．ｅｔａｌ．，ＣｌｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌＴｈｅｒ，１９８１，２９（３）：３４４−５０）；４）異なるエナンチオマーは、異なる薬理活性がある。例えば、降圧薬であるラベタロール（ｌａｂｅｔａｌｏｌ）は、２つのキラル中心を有し、（Ｒ，Ｒ）−異性体が非選択性β受容体遮断薬であり、（Ｓ，Ｒ）−異性体がα１−受容体遮断薬であり、（Ｓ，Ｓ）−異性体が弱いα１−受容体遮断作用を持つが、（Ｒ，Ｓ）−異性体が活性を持たない（ＰｉｅｔｅｒＡ．ｅｔａｌ．，Ｄｒｕｇｓ，１９９３，４５（４）：５０９−５１７）；５）エナンチオマーの１つは強い毒性・副作用がある。例えば、サリドマイド（ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ）は、妊娠反応を治療するための鎮静剤として使用されていたが、但し妊婦が服用した後で数千の胎児に奇形を起こし、その原因は、Ｓ異性体が鎮静作用を持つだけでなく強い胎児毒性・催奇形性も持つためである（ＢｌａｓｃｈｋｅＧ．ｅｔａｌ．，Ａｒｚｎｅｉｍ−Ｆｏｒｓｃｈ，１９７９，２９（１０），１６４０−２）。従って、エナンチオマーとラセミ混合物との間の生理学的差異は予測不可能であるので、ラセミ混合物から純粋なエナンチオマーを単離してそれらの性質を研究することが必要である。

本発明者は、２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸の（−）−エナンチオマー（左旋性異性体）を調製し、その薬理活性を研究している。

本願の発明者は、試みにより、２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸の各エナンチオマーを調製して取得し、その薬効を研究している。全く予想外なことに、２つの異性体は著しく異なる薬理作用を持ち、ここで、左旋性異性体（特定のキラル部位（式Ｉ中の「*」で表される位置）にある（−）−エナンチオマーを参照）は、ＲＸＲ／ＰＰＡＲ−、ＲＸＲ／ＰＰＡＲ−及びＲＸＲ／ＰＰＡＲ−のヘテロ二量体の発現の活性化、並びにｄｂ／ｄｂマウスモデルにおいて示される血糖降下作用の上で（＋）−エナンチオマー（即ち、右旋性異性体）よりも有意に優れたことが発見された。

この知見に基づいて、本発明は、第一の側面において、ＰＰＡＲ−α、ＰＰＡＲ−γ及びＰＰＡＲ−δを選択的に活性化する（−）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸又はその薬用塩を提供する。

本発明は、第二の側面において、（−）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸又はその薬用塩の製造方法を提供する。

本発明は、第三の側面において、（−）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸又はその薬用塩の、代謝異常症候群に関連する疾患、例えば、糖尿病を治療するための薬物の調製における応用を提供する。

本発明に係る化合物（−）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸の化学構造は、式（Ｉ）で表される。

*で表される位置は、キラル部位である。

エナンチオマー１：（−）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸

エナンチオマー２：（＋）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸

本発明に係る「薬用塩」とは、薬学的に許容される塩を意味する。塩の調製に使用する塩基としては、アルカリ金属（例えば、ナトリウム、カリウム）水酸化物、アルカリ土類金属（例えば、カルシウム、マグネシウム）水酸化物、アンモニア水、及び有機アミン（ＮＲ^１Ｒ^２Ｒ^３、ここで、Ｒ^１、Ｒ^２及びＲ^３は、同じでも異なっていてもよく、水素原子又はＣ_１〜Ｃ_４アルキル基であることが好ましい）を含むが、これらに限定されない。

本発明に係る「薬学的に許容される」は、合理的な医学的範囲内でヒトおよび動物の使用に適し、毒性、アレルギー反応、刺激および合併症、ならびに他の有害作用を含む過度の副作用がないと理解される。

本発明は、さらに、（−）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸又はその薬用塩、及び薬学的に許容される賦形剤及び／又は担体を含む医薬品添加物を含有する医薬組成物に関する。本発明に係る（−）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸又はその薬用塩は、ほかの１種又は複数種の医薬品有効成分と併用してもよく、それらは、薬学的に許容される任意の組み合わせであってもよい。

本明細書に係る用語「薬学的に許容される賦形剤及び／又は担体」とは、非毒性、不活性の固体、半固体又は液体の充填剤、希釈剤、カプセル化材料、又は任意の種類の製剤添加物を意味する。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓＥｄ．ｂｙＧｅｎｎａｒｏ，ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９９５は、医薬組成物を配合するための各種の担体、及びこれらの医薬組成物を製造するための従来技術を開示している。薬学的に許容される担体として使用される材料のいくつかの例は、ラクトース、グルコース、およびスクロースなどの糖類；コーンスターチおよび馬鈴薯デンプンなどのデンプン；カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロースなどのセルロースおよびその誘導体；トラガントガム粉末；モルト；ゼラチン；タルク；カカオバターおよび坐剤ワックスなどの賦形剤；ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油および大豆油などの油；プロピレングリコールなどのグリコール；オレイン酸エチルおよびエチルラウラートなどのエステル；寒天；ＴＷＥＥＮ^ＴＭ８０などの洗剤；水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；アルギン酸；パイロジェンフリー水；等張食塩水；リンゲル液；エタノール；並びに、ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムなどのリン酸塩緩衝溶液及び他の無毒で相溶性に優れた滑沢剤；並びに着色剤、コーティング剤、甘味剤、矯味剤、及び香料を含み；さらに、処方設計者の判断により、前記組成物には防腐剤及び抗酸化剤も存在してもよいが、これらに限定されない。ろ過又は他の最終滅菌方法を実行できなければ、製剤は無菌条件下で製造することができる。

本発明に係る（−）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸又はその薬用塩は、通常の医薬品添加物とともに、例えば、経口製剤（錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤、滴丸剤など）、注射製剤、局所製剤などの様々な剤形に調製することができるが、これらに限定されない。本発明に係る医薬組成物は、通常、重量で０．５〜７０％、好ましくは１〜２０％の有効成分を含有してもよい。

本発明は、ラセミ体のうち、２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸のエナンチオマーを単離するにより、ＲＸＲ／ＰＰＡＲ−、ＲＸＲ／ＰＰＡＲ−及びＲＸＲ／ＰＰＡＲ−のヘテロ二量体の発現を活性化し、並びにｄｂ／ｄｂマウスモデルにおいてより優れた血糖降下作用が示されている（−）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸を取得し、ＲＸＲ又はＰＰＡＲ核内受容体調節に関連するＩＩ型糖尿病、脂質障害、シンドロームＸ、心血管疾患、冠状動脈疾患、高コレステロール血症、又は肥満症に対する２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸類化合物の治療效果をさらに向上させている。

ｉｎｖｉｔｒｏレポーター遺伝子アッセイモデル実験において本発明に係るエナンチオマー１及び２がＰＰＡＲαを活化性させる活性を示す。

ｉｎｖｉｔｒｏレポーター遺伝子アッセイモデル実験において本発明に係るエナンチオマー１及び２がＰＰＡＲγを活化性させる活性を示す。

ｉｎｖｉｔｒｏレポーター遺伝子アッセイモデル実験において本発明に係るエナンチオマー１及び２がＰＰＡＲ−δを活性化させる活性を示す。

以下、実施例を参照しながら本発明の内容をさらに説明するが、本発明の保護範囲はこれらの実施例に限定されるものではない。本発明に記載のパーセントは、特記しない限り、全て重量パーセントである。本明細書に記載の数値範囲、例えば、計量単位又はパーセントは、いずれも明確な書面による参照を提供することを意図する。当業者は、本発明を実施する際に、本発明の教示及び原理に基づいて、この範囲外の、または単一の値とは異なる温度、濃度、数量などを使用しても、依然として所望の結果を得ることができる。

実施例１：２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸のエナンチオマー１及び２の調製

エナンチオマー混合物２０ｇをメタノール２０７０ｍｌに溶解させ、超臨界流体クロマトグラフーのＣｈｉｒａｌｐａｋカラム（ＡＹ２０*２５０ｍｍ）にサンプルをロードし、まず、メタノール／二酸化炭素混合物（体積比４：１）で溶出し、流速が８０ｍｌ／分間であり、時間が１２０分間であり、その後、メタノール／二酸化炭素／アンモニア水混合物（体積比６：４：０．００５）で溶出し、流速が８０ｍｌ／分間であり、時間が３０分間である。約６分間後、目的化合物であるエナンチオマー１の溶出ピークが得られ、約１１分間後、エナンチオマー２のピークが得られた。溶媒を蒸発させた後、それぞれエナンチオマー１（１５ｇ）及びエナンチオマー２（２ｇ）を得た。
（−）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸（エナンチオマー１）：
含有量＝１００％
ｅｅ％＝１００％
[α]^２４ _Ｄ＝−１１１．５（ｃ＝０．０１，ＤＭＳＯ）
赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ錠剤、ｃｍ^−１）：３３２３、３０４７、２９８３、２９３８、２８７０、２７３０、２４９２、１９２２、１８９３、１６２２、１５９８、１５０８、１４５６、１３８７、１２４９、９２７、８５０、７５１；
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ２．８８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．８，６．１Ｈｚ，ＣＨ_２の１つ），３．０６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．８，５Ｈｚ，ＣＨ_２の１つ），４．０１−４．０４（ｍ，１Ｈ，ＣＨ），４．２５（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ_２），４．７２（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ_２），６．４４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ），６．６０（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ），６．７０（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．００（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．１９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ），７．２４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１，１．５Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ），７．２６−７．３２（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．４３（ｔｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．７，１Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ），７．５５−７．５８（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ），８．１３（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨ）；
ＨＲＭＳ（Ｃ_３６Ｈ_２９ＦＮ_２Ｏ_４）計算値（％）：５７２．２１１１；測定値（％）：５７２．２１０８。
（＋）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸（エナンチオマー２）：
含有量＝１００％
ｅｅ％＝９９．５％
[α]^２４ _Ｄ＝９８．５（ｃ＝０．０１，ＤＭＳＯ）
赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ錠剤、ｃｍ^−１）：３３１８、３０４８、２９２７、２８６９、２４９５、１９２１、１８９２、１６２１、１５９８、１５０９、１４５７、１２５０、１１５４、９２７、８４９、７５１；
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ２．９１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．８，６．２Ｈｚ，ＣＨ_２の１つ），３．０６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．８，５Ｈｚ，ＣＨ_２の１つ），４．１４−４．１７（ｍ，１Ｈ，ＣＨ），４．２４（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ_２），４．７２（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ_２），６．４７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ），６．６１（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ），６．７３（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．１８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ），７．２６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０，１．４Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ），７．２９−７．３２（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．４２（ｔｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．７，０．９Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ），７．５６−７．５９（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ），８．１２（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ），８．６３（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨ）；
ＨＲＭＳ（Ｃ_３６Ｈ_２９ＦＮ_２Ｏ_４）計算値（％）：５７２．２１１１；測定値（％）：５７２．２１０９。

実施例２：（−）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸ナトリウム（エナンチオマー１のナトリウム塩）の調製

５０ｍｌの丸底フラスコにテトラヒドロフラン３０ｍｌを加え、撹拌しながら（−）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸（１０００ｍｇ，１．７５ｍｍｏｌ）を加え、溶解させるまで撹拌した。水酸化ナトリウム（７１ｍｇ，１．７７ｍｍｏｌ）をメタノール２ｍｌに溶解させた。撹拌しながら水酸化ナトリウムのメタノール溶液を（−）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸のテトラヒドロフラン溶液に滴下し、３０分間撹拌しながら反応させ、減圧蒸留し、ジクロロメタン２ｍｌで蒸留残渣を溶解させた。５０ｍｌの丸底フラスコにジイソプロピルエーテル３０ｍｌを加え、撹拌しながら上記ジクロロメタン溶液を滴下し、滴下終了後２分間撹拌した。吸引ろ過し、ジイソプロピルエーテル５ｍｌでケーキをシャワー洗浄した。ケーキを室温で４時間真空乾燥し、乾燥減量が０．５％未満になるまで６０℃で真空乾燥し、（−）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸ナトリウムを黄色固体として得た（１ｇ，１．６８ｍｍｏｌ、９６．３％収率）。
含有量＝９８．７％
ｅｅ％＝９６．１％
[α]^２４ _Ｄ＝−１１９．５（ｃ＝０．０１，ＤＭＳＯ）
赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ、ｃｍ^−１）：３３５２、３０５１、２９６９、２９３０、２８７１、１９２１、１８９１、１６１７、１５９８、１５０９、１４５７、１４００、１２４２、９２８、８５０、７５０；
粉末Ｘ線回折：アモルファス
核磁気共鳴（ＢｒｕｋｅｒＡＶＡＮＣＥＩＩＩＨＤ５００、ＤＭＳＯ−ｄ_６）による^１ＨＮＭＲスペクトル、^１３ＣＮＭＲスペクトル、ＣＯＳＹスペクトル、ＨＭＱＣスペクトル、及びＨＭＢＣスペクトルの測定データ及び解析結果は、表１に示した。

ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：５９５（Ｍ+１）。
実施例３：（＋）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸ナトリウム（エナンチオマー２のナトリウム塩）の製造方法

５０ｍｌの丸底フラスコにテトラヒドロフラン３０ｍｌを加え、撹拌しながら（＋）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸（１０００ｍｇ，１．７５ｍｍｏｌ）を加え、溶解させるまで撹拌した。水酸化ナトリウム（７１ｍｇ，１．７７ｍｍｏｌ）をメタノール２ｍｌに溶解させた。撹拌しながら水酸化ナトリウムのメタノール溶液を（＋）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸のテトラヒドロフラン溶液に滴下し、３０分間撹拌しながら反応させ、減圧蒸留し、ジクロロメタン２ｍｌで蒸留残渣を溶解させた。５０ｍｌの丸底フラスコにジイソプロピルエーテル３０ｍｌを加え、撹拌しながら上記ジクロロメタン溶液を滴下し、滴下終了後２分間撹拌した。吸引ろ過し、ジイソプロピルエーテル５ｍｌでケーキをシャワー洗浄した。ケーキを室温で４時間真空乾燥し、乾燥減量が０．５％未満になるまで６０℃で真空乾燥し、（＋）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸ナトリウムを黄色固体として得た（９８０ｍｇ，１．６５ｍｍｏｌ、９４．１％收率）。
含有量＝９７．３％
ｅｅ％＝９８．４％
[α]^２４ _Ｄ＝１２８．８（ｃ＝０．０１，ＤＭＳＯ）
赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ、ｃｍ^−１）：３３５４、３０５１、２９６９、２９２９、２８７１、１９２２、１８９１、１６１７、１５９８、１５０９、１４０１、１２４３、９２８、８５０、７５０；
粉末Ｘ線回折：アモルファス；
核磁気共鳴（ＢｒｕｋｅｒＡＶＡＮＣＥＩＩＩＨＤ５００、ＤＭＳＯ−ｄ_６）による^１ＨＮＭＲスペクトル、^１３ＣＮＭＲスペクトル、ＣＯＳＹスペクトル、ＨＭＱＣスペクトル、及びＨＭＢＣスペクトルの測定データ及び解析結果は、表２に示した。

ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：５９５（Ｍ+１）。
実施例４

（−）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸（エナンチオマー１）は、ｉｎｖｉｔｒｏレポーター遺伝子アッセイモデル実験においてＰＰＡＲα活性化剤の活性を示した。

ＰＰＡＲαレポーター遺伝子検出システムは、ｐＣＤＮＡ３．１ルシフェラーゼ発現プラスミド（プロモーターの上流にＰＰＲＥエンハンサーが挿入される）、緑色蛍光タンパク質ＧＦＰ発現プラスミド、及びヒトＰＰＡＲα発現プラスミドを含む。

上記プラスミドをヒト肝癌細胞株Ｌ−０２にコートランスフェクション（Ｆｕｇｅｎｅ６．０トランスフェクション試薬）し、トランスフェクションから４８時間後、異なる濃度の被験化合物を加え、投与２４時間後、ルシフェラーゼアッセイキット（プロメガＥ１９１０）により処理し、蛍光検出器（ＦｌｕｏｒｏｓｋａｎＡｓｃｅｎｔＦＬ）を使用してＧＦＰの蛍光強度（波長４８５〜５２７ｎｍ）及びルシフェラーゼ基質の蛍光強度（波長５６２ｎｍ）をそれぞれ検出し、ＧＦＰシグナルを内部標準として検出されたルシフェラーゼ基質シグナルを補正し、ブランク対照（化合物処理なし）と比較して相対的なレポーター遺伝子の活性化強度を取得し、異なる濃度勾配データから被験化合物の半数効果濃度（ＥＣ５０）を算出した。

エナンチオマー２と比較して、エナンチオマー１は、有意なＰＰＡＲαを活性化する活性を有し、ＥＣ_５０は、それぞれ１．１３５μＭ及び５．３８５μＭである（図１を参照）。
実施例５

（−）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸（エナンチオマー１）は、ｉｎｖｉｔｒｏレポーター遺伝子アッセイモデル実験においてＲＸＲ／ＰＰＡＲγヘテロ二量体活性化剤の活性を示した。

ＰＰＡＲγレポーター遺伝子検出システムは、ｐＡＣＯＸルシフェラーゼレポーター遺伝子プラスミド（プロモーターはＰＰＲＥ配列を含む）、ＰＰＡＲγ発現プラスミド、ＲＸＲ発現プラスミド、及び緑色蛍光タンパク質ＧＦＰ発現プラスミドを含む。

上記プラスミドをヒト肝癌細胞株Ｌ−０２にコートランスフェクションし（Ｆｕｇｅｎｅ６．０トランスフェクション試薬）、トランスフェクションから４８時間後、異なる濃度の被験化合物を加え、投与２４時間後、プロメガ社製のルシフェラーゼアッセイキット（Ｅ１９１０）で処理し、蛍光検出器（ＦｌｕｏｒｏｓｋａｎＡｓｃｅｎｔＦＬ）を使用してＧＦＰの蛍光強度（波長４８５〜５２７ｎｍ）及びルシフェラーゼ基質の蛍光強度（波長５６２ｎｍ）をそれぞれ検出し、ＧＦＰシグナルを内部標準として検出されたルシフェラーゼ基質シグナルを補正し、ブランク対照（化合物処理なし）と比較して相対的なレポーター遺伝子の活性化強度を取得し、異なる濃度勾配データから被験化合物の半数効果濃度（ＥＣ_５０）を算出した。

エナンチオマー２と比較して、エナンチオマー１は、有意なＰＰＡＲγを活性化する活性を有し、ＥＣ_５０は、それぞれ０．０７６μＭ及び２．７０９μＭである（図２を参照）。

（−）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸（エナンチオマー１）は、ｉｎｖｉｔｒｏ実験においてＲＸＲ／ＰＰＡＲ−δヘテロ二量体活性化剤の活性を示した。

ＰＰＡＲδレポーター遺伝子検出システムは、ｐＧＬ３−ＰＰＲＥルシフェラーゼレポーター遺伝子プラスミド（プロモーターの上流にＰＰＲＥエンハンサーが挿入されている）、ＰＰＡＲδ発現プラスミド、ＲＸＲ発現プラスミド、及び緑色蛍光タンパク質ＧＦＰ発現プラスミドを含む。

上記プラスミドをヒト肝癌細胞株Ｌ−０２にコートランスフェクションし（Ｆｕｇｅｎｅ６．０トランスフェクション試薬）、トランスフェクションから４８時間後、異なる濃度の被験化合物を加え、投与２４時間後、プロメガ社製のルシフェラーゼアッセイキット（Ｅ１９１０）で処理し、蛍光検出器（ＦｌｕｏｒｏｓｋａｎＡｓｃｅｎｔＦＬ）を使用してＧＦＰの蛍光強度（波長４８５〜５２７ｎｍ）及びルシフェラーゼ基質の蛍光強度（波長５６２ｎｍ）をそれぞれ検出し、ＧＦＰシグナルを内部標準として検出されたルシフェラーゼ基質シグナルを補正し、ブランク対照（化合物処理なし）と比較して相対的なレポーター遺伝子の活性化強度を取得し、異なる濃度勾配データから被験化合物の半数効果濃度（ＥＣ５０）を算出した。

エナンチオマー２と比較して、エナンチオマー１は、有意なＰＰＡＲδを活性化する活性があり、ＥＣ_５０は、それぞれ１．９３μＭ及び＞１０μＭである（最高濃度では有意な活性は測定されなかった）（図３を参照）。
実施例７

（−）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸（エナンチオマー１）は、ｄｂ／ｄｂマウスの血糖値を効果的に下げることができる。実験は、モデル群、投与群（エナンチオマーＩ及びＩＩを投与）、及び陽性対照群（ロシグリタゾン）という４群に分け、各群のマウス数は１０匹であった。投与経路は、経口であった。投与量は、投与群で２０ｍｇ／ｋｇ、対照群で５ｍｇ／ｋｇであった。投与頻度は、１日１回であった。投与期間は、１４日であった。１〜４群の動物は、それぞれ溶媒、エナンチオマー１、エナンチオマー２及び陽性対照薬物のロシグリタゾン（Ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ）を経口投与した。それぞれ０、３、６、９、１２及び１４日目に、投与後６時間絶食させ、尾静脈切断による血液を血糖計で検出し、空腹時血糖値を記録し、結果は、表３に示された。

実施例８

（−）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸（エナンチオマー１）は、経口ブドウ糖負荷試験（ＯＴＧＧ）において耐糖能を向上させることができる。投与１４日後、動物を一晩（＜１０時間）絶食させ、翌日、空腹時にブドウ糖を２ｇ／ｋｇ投与し、経口投与後の０（ブドウ糖経口投与の初期／空腹時血糖値）、１５、３０、６０及び１２０分目に尾静脈切断による血液を血糖計で検出し、空腹時血糖値を記録し、結果は、表４に示された。

複数の実施形態により本発明を説明したが、本発明がこれらの実施形態に限定されることを意図するものではない。当業者は、本発明が様々な代替形態、修正形態、及び等価物も包含し得ることを理解すべきである。これらの代替形態、修正形態、及び等価物は、本明細書に記載された、並びに添付の特許請求の範囲で要求保護される本発明の範囲内に含まれるとみなされる。

Claims

（−）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸又はその薬用塩。
前記塩は、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩又は第四級アンモニウム塩である、請求項１に記載の（−）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸又は
その薬用塩。
前記アルカリ金属塩は、ナトリウム塩又はカリウム塩であり、及び／又は、前記アルカリ土類金属塩は、カルシウム塩又はマグネシウム塩である、請求項２に記載の（−）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸又はその薬用塩。
２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸を溶媒に溶解し、キラルカラムにサンプルをロードし、順に有機溶媒／二酸化炭素、及び有機溶媒／二酸化炭素／アンモニア水の混合溶媒で溶出し、単離し、（−）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸を得る、ことを含む、請求項１に記載の（−）−２−[（２−（４−フルオロベンゾイル）フェニル）アミノ]−３−[（４−（２−カルバゾリルエトキシ）フェニル）]プロパン酸を製造するための超臨界流体クロマトグラフィー方法。