JP6763083B2

JP6763083B2 - ラクトバチルス属細菌由来小胞を含む精神疾患の予防または治療用組成物

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Publication number: JP6763083B2
Application number: JP2019508939A
Authority: JP
Inventors: キム、ユン−クン; イムハン、ピョン; チェ、チュ−イ
Original assignee: MD Healthcare Inc
Current assignee: MD Healthcare Inc
Priority date: 2016-08-16
Filing date: 2017-08-09
Publication date: 2020-09-30
Anticipated expiration: 2037-08-09
Also published as: US11583559B2; EP3501527B1; KR20180019482A; EP3501527A1; EP3501527A4; KR101963957B1; CN109789175A; EP3501527C0; CN109789175B; JP2019524835A; KR20180019474A; US20190209628A1

Description

本発明は、ラクトバチルス属細菌由来小胞を有効成分として含む精神疾患の予防、改善、または治療用組成物に関する。

うつ病は、感情を調節する脳の機能に変化が生じて否定的な感情が現れる疾患であって、全世界で３億人以上が病んでいるのが現況である。また、韓国の健康保険審査評価院による２００５年から２００９年までの５年間のうつ病に対する資料を分析した結果、うつ病の診療人員と総診療費がそれぞれ年平均４％、１０．４％増加したことが明らかになり、診療人員は、２００５年に４３５，０００人から２００９年に５００，３００人に増加し、年平均約１８，０００人ずつ患者数が増加していると調査された。特に７０代以上の老人の増加率が最も高く現れた。

うつ病の原因を明らかにするために多様な研究が試みられているが、まだ正確な神経学的発病機序は明らかにされていないが、多様な原因があると推定される。うつ病は、ドーパミン、セロトニン、ノルエピネフリン等の神経伝達物質の化学的不均衡と関連がある。この中でセロトニンは、脳脊髄液で発見される神経代謝物質であって、脳を循環し、神経伝達機能をする。セロトニンは、感情表現と密接な関連を有し、この物質が十分でない場合、感情が不安定になって、憂いや心配が多くなって、衝動的性向が現れる。したがって、現在うつ病の治療剤として使用されている医薬品のうちには、セロトニンが再吸収されるのを阻害して、脳の中に長く留まるように作用するものが多数存在する。

うつ病の病因には、生物学的、心理学的、社会学的、薬理学的、病理学的要因等が神経伝達物質の不均衡に影響を及ぼすが、特に幼い時に経験した事故、暴行、虐待等による精神的トラウマは、以後に成長しつつ、うつ病に発展する確率が非常に高いと知られている。これは、ストレス時に人間の脳でタンパク質の損傷が起こるためである。ストレスが多い環境、すなわち利己主義の拡大、急速な産業化、激しい競争と競争の落伍者に対する社会安全網の不足等が、環境因子がうつ病を誘発する原因であると知られている。

うつ病の治療に用いられる抗うつ剤としては、イミプラミン（Ｉｍｉｐｒａｍｉｎｅ）等の三環系抗うつ薬（ｔｒｉｃｙｃｌｉｃａｎｔｉｄｅｐｒｅｓｓａｎｔ）、選択的セロトニン再取り込み阻害薬（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｓｅｒｏｔｏｎｉｎｒｅｕｐｔａｋｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒ；ＳＳＲＩ）等が代表的な薬剤である。しかしながら、トラゾドン（Ｔｒａｚｏｄｏｎｅ）、ミルタザピン（Ｍｉｒｔａｚａｐｉｎｅ）のようなＳＳＲＩ系の薬物は、安全性に問題が提起されているが、特に高齢者が服用する場合に、脳卒中、骨折、および死亡リスクを高める可能性が提起されている。

最近には、うつ病、自閉症、精神分裂症等の精神疾患が腹痛と深い関連があることが明らかにされた。腹痛は、下痢と便秘を伴い、繰り返されれば、過敏性大腸症候群に達するが、これは、腸内細菌の不均衡（ｇｕｔｍｉｃｒｏｂｉａｌｄｙｓｂｉｏｓｉｓ）と関連があることが明らかにされた。良くない食べ物、抗生剤の使用等により腸内細菌の不均衡が生じると、腸内有害微生物が、健康であった大腸防御膜に亀裂を招いて腸漏出現象が起こり、以後に有害細菌由来毒素が全身に吸収されて、うつ病が発生あるいは悪化すると報告されている［Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ．２０１５Ｏｃｔ；３５（１０）：９１０−６］。

ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属細菌は、グラム陽性桿菌であって、嫌気性環境だけでなく、好気性環境でも良く成長し、キムチのような醗酵食品に多く入っている。キムチの場合、酸っぱいキムチになっても、他の乳酸菌は死ぬが、前記菌は生き残る生存力に優れた菌であって、ガラクトースやアラビノースのような多糖類を良く分解する。細菌は、細胞間タンパク質、脂質、遺伝子等の情報交換のために細胞外環境に二重膜構造のタンパク質脂質であって頻繁にナノ小胞あるいはナノ小胞体（ｎａｎｏｖｅｓｉｃｌｅｓ）とも呼ばれる細胞外小胞（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｖｅｓｉｃｌｅ；ＥＶ）を分泌する。ラクトバチルスプランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルスカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｃａｓｅｉ）のようなグラム陽性菌（ｇｒａｍ−ｐｏｓｉｔｉｖｅｂａｃｔｅｒｉａ）由来小胞は、細菌由来タンパク質と核酸の他にも、細菌の細胞壁構成成分であるペプチドグリカン（ｐｅｐｔｉｄｏｇｌｙｃａｎ）とリポタイコ酸（ｌｉｐｏｔｅｉｃｈｏｉｃａｃｉｄ）も有している。

ラクトバチルスプランタルムが脳でうつ病を阻害する因子を分泌することが知られているが、ラクトバチルスプランタルム、またはラクトバチルスカゼイで分泌される小胞が、ストレス、不安障害、外傷後ストレス障害（Ｐｏｓｔ−ｔｒａｕｍａｔｉｃＳｔｒｅｓｓＤｉｓｏｒｄｅｒ；ＰＴＳＤ）、パニック障害（ｐａｎｉｃｄｉｓｏｒｄｅｒ）、うつ病（ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ）、自閉症スペクトラム障害（Ａｕｔｉｓｍｓｐｅｃｔｒｕｍｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）、注意欠陥多動性障害（ａｔｔｅｎｔｉｏｎｄｅｆｉｃｉｔ／ｈｙｐｅｒａｃｔｉｖｉｔｙｄｉｓｏｒｄｅｒ；ＡＤＨＤ）、および統合失調症（ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ）のような精神疾患の予防、または治療のために用いられた場合はないのが現況である。

本発明者らは、ラクトバチルス属細菌由来小胞と精神疾患間の相関関係を調べるべく鋭意研究した結果、ストレスおよびうつ病動物モデルでラクトバチルスプランタルムおよびラクトバチルスカゼイ由来小胞の投与が、抗うつ剤であるイミプラミンとほぼ同じレベルの抗ストレスおよび抗うつ効果を示すことを観察し、これに基づいて本発明を完成した。

これにより、本発明は、ラクトバチルス属細菌由来小胞を有効成分として含む、精神疾患の予防、改善、または治療用組成物を提供することを目的とする。

しかしながら、本発明が達成しようとする技術的課題は、以上で言及した課題に制限されず、言及されていない他の課題は、下記の記載から当業者に明確に理解され得る。

上記のような本発明の目的を達成するために、本発明は、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属細菌由来小胞を有効成分として含む、精神疾患の予防または治療用薬学的組成物を提供する。

また、本発明は、ラクトバチルス属細菌由来小胞を有効成分として含む、精神疾患の改善用健康機能性食品組成物を提供する。

また、本発明は、ラクトバチルス属細菌由来小胞を有効成分として含む、精神疾患の予防または治療用吸入剤組成物を提供する。

本発明の他の具現例において、前記精神疾患は、ストレス、不安障害、外傷後ストレス障害（Ｐｏｓｔ−ｔｒａｕｍａｔｉｃＳｔｒｅｓｓＤｉｓｏｒｄｅｒ；ＰＴＳＤ）、パニック障害（ｐａｎｉｃｄｉｓｏｒｄｅｒ）、うつ病（ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ）、自閉症スペクトラム障害（Ａｕｔｉｓｍｓｐｅｃｔｒｕｍｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）、注意欠陥多動性障害（ａｔｔｅｎｔｉｏｎｄｅｆｉｃｉｔ／ｈｙｐｅｒａｃｔｉｖｉｔｙｄｉｓｏｒｄｅｒ；ＡＤＨＤ）、および統合失調症（ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ）よりなる群から選ばれる一つ以上の疾患であってもよい。

本発明のさらに他の具現例において、前記小胞は、平均直径が１０〜１，０００ｎｍのものであってもよい。

本発明のさらに他の具現例において、前記小胞は、ラクトバチルス属細菌培養液から分離されるものであってもよい。

本発明のさらに他の具現例において、前記小胞は、ラクトバチルス属細菌から自然的にまたは人工的に分泌されるものであってもよい。

本発明のさらに他の具現例において、前記小胞は、ラクトバチルス属細菌を添加して製造した食品から分離した小胞を使用したものであってもよい。

本発明のさらに他の具現例において、前記小胞は、ラクトバチルスプランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌａｎｔａｒｕｍ）またはラクトバチルスカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｃａｓｅｉ）に由来するものであってもよい。

本発明のさらに他の具現例において、前記小胞は、ラクトバチルスプランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌａｎｔａｒｕｍ）およびラクトバチルスカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｃａｓｅｉ）以外のラクトバチルス属細菌に由来するものであってもよい。

また、本発明は、前記組成物を個体に投与する段階を含む、精神疾患の予防または治療方法を提供する。

また、本発明は、ラクトバチルス属細菌由来小胞の、精神疾患の予防または治療用途を提供する。

本発明者らは、ストレスおよびうつ病動物モデルにラクトバチルスプランタルムおよびラクトバチルスカゼイ由来小胞を投与したとき、ストレスに対する抵抗力が効率的に増加し、長期間慢性的に持続する憂鬱行動を治療する効果があることを確認したところ、本発明によるラクトバチルス属細菌由来小胞は、ストレス、不安障害、外傷後ストレス障害、パニック障害、うつ病、自閉症スペクトラム障害、注意欠陥多動性障害、および統合失調症等のような精神疾患を予防、症状改善、または治療するための医薬品または健康機能食品等の開発に有用に用いられる。

図１は、ストレスを与えたマウスモデルでラクトバチルスプランタルム由来小胞（ＥＶ）の抗ストレス効果を評価するための実験プロトコルを図示したものである［ＣＯＮまたはＣＯＮ＋Ｖｅｈ：食塩水投与正常マウス群（対照群、食塩水投与対照群）、ＣＯＮ＋ＥＶ：小胞投与正常マウス群、ＲＳＴ＋Ｖｅｈ：食塩水投与ストレス処置群、ＲＳＴ＋ＥＶ：小胞投与ストレス処置群］。図２ａは、ラクトバチルスプランタルム由来小胞の抗ストレス効果を評価するための方法であって、各マウスグループに対して社会性を測定するＵ−ＢＯＸ試験のＵ−ＢＯＸ試験実験方法を図示したものである。図２ｂは、ラクトバチルスプランタルム由来小胞の抗ストレス効果を評価するために、各マウスグループに対してＵ−ＢＯＸ試験を実施した結果を示すものである。図３ａおよび図３ｂは、ラクトバチルスプランタルム由来小胞の抗ストレス効果を評価するために、各マウスグループに対して尾懸垂試験（ｔａｉｌｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｔｅｓｔ；ＴＳＴ）（図３ａ）および強制水泳試験（ｆｏｒｃｅｄｓｗｉｍｔｅｓｔ；ＦＳＴ）（図３ｂ）をそれぞれ実施した結果を示すものである。図４は、慢性ストレスの結果としてうつ病が誘発されたマウスモデルでラクトバチルスプランタルム由来小胞（ＥＶ）の抗うつ効果を評価するための実験プロトコルを絵で示したものである［ＣＯＮ＋Ｖｅｈ：食塩水投与正常マウス群、ＣＯＮ＋ＥＶ：小胞投与正常マウス群、ＲＳＴ＋Ｖｅｈ：食塩水投与慢性ストレス処置群、ＲＳＴ＋ＥＶ：小胞投与慢性ストレス処置群、ＲＳＴ＋ＩＭＩ：イミプラミン投与慢性ストレス処置群］。図５は、ラクトバチルスプランタルム由来小胞の抗うつ効果を評価するための１次行動検査として各マウスグループに対してＵ−ＢＯＸ試験を実施した結果を示すものである。図６ａおよび図６ｂは、ラクトバチルスプランタルム由来小胞の抗うつ効果を評価するための１次行動検査として各マウスグループに対して尾懸垂試験（ＴＳＴ）（図６ａ）および強制水泳試験（ＦＳＴ）（図６ｂ）を実施した結果を示すものである。図７は、ラクトバチルスプランタルム由来小胞の抗うつ効果を評価するための２次行動検査として各マウスグループに対してＵ−ＢＯＸ試験を実施した結果を示すものである。図８ａおよび図８ｂは、ラクトバチルスプランタルム由来小胞の抗うつ効果を評価するための２次行動検査として各マウスグループに対して尾懸垂試験（ＴＳＴ）（図８ａ）および強制水泳試験（ＦＳＴ）（図８ｂ）を実施した結果を示すものである。図９は、ストレスを与えたマウスモデルでラクトバチルスカゼイ由来小胞（Ｌ．ｃａｓｅｉＥＶ）の抗ストレスおよび抗うつ効果を評価するための実験プロトコルを絵で示したものである［ＣＯＮ＋ｖｅｈ：食塩水投与対照群、ＣＯＮ＋Ｌａｃ：小胞投与正常マウス群、ＲＳＴ＋ｖｅｈ：食塩水投与ストレス処置群、ＲＳＴ＋Ｌａｃ：小胞投与ストレス処置群］。図１０ａ、図１０ｂ、および図１０ｃは、ラクトバチルスカゼイ由来小胞の抗ストレス効果を評価するための１次行動検査として、各マウスグループに対してＵ−ＢＯＸ試験（図１０ａ）を実施して、標的を訪れる行動（図１０ｂ）および社会性指数（図１０ｃ）を評価した結果を示すものである。図１１ａおよび図１１ｂは、ラクトバチルスカゼイ由来小胞の抗ストレス効果を評価するための１次行動検査として、各マウスグループに対して尾懸垂試験（ｔａｉｌｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｔｅｓｔ；ＴＳＴ）（図１１ａ）および強制水泳試験（ｆｏｒｃｅｄｓｗｉｍｔｅｓｔ；ＦＳＴ）（図１１ｂ）をそれぞれ実施した結果を示すものである。図１２ａおよび図１２ｂは、ラクトバチルスカゼイ由来小胞の抗うつ病の予防効果を評価するための２次行動検査として、各マウスグループに対してＵ−ＢＯＸ試験を実施して、標的を訪れる行動（図１２ａ）および社会性指数（図１２ｂ）を評価した結果を示すものである。図１３は、ラクトバチルスカゼイ由来小胞の抗うつ病効果を評価するための２次行動検査として、各マウスグループに対して尾懸垂試験（ｔａｉｌｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｔｅｓｔ；ＴＳＴ）を実施した結果を示すものである。

本発明者らは、ラクトバチルス属細菌由来小胞と精神疾患間の相関関係を調べてみるために鋭意研究した結果、ストレスおよびうつ病動物モデルでラクトバチルス属細菌由来小胞の投与が、抗うつ剤であるイミプラミンとほぼ同じレベルの抗ストレスおよび抗うつ効果を示すことを観察し、これに基づいて本発明を完成した。

本発明の一実施例では、身体拘束ストレスを与えたマウスモデルにラクトバチルスプランタルム由来小胞を投与した後、それぞれ３種類の行動検査、すなわち社会性を測定するＵ−ＢＯＸ試験、尾懸垂試験および強制水泳試験を進めて、ストレスのみを与えたマウスに比べて前記ナノ小胞を投与したマウスにおいて抗ストレス効果を確認した（実施例１参照）。

本発明の他の実施例では、慢性ストレスを投与して憂鬱行動が誘発されたマウスモデルにラクトバチルスプランタルム由来小胞を投与した後、前記と同じ３種類の行動検査を実施して分析することによって、前記小胞が抗うつ効果を示すことを確認した（実施例２参照）。

本発明の他の実施例では、身体拘束ストレスを与えたマウスモデルにラクトバチルスカゼイ由来小胞を投与した後、前記と同じ３種類の行動検査をストレス投与２週後およびストレス投与４週後に実施して分析することによって、前記小胞が抗ストレスおよび抗うつ効果を示すことを確認した（実施例３参照）。

これにより、本発明は、ラクトバチルス属細菌由来小胞を有効成分として含む精神疾患の予防または治療用薬学的組成物を提供する。

本発明で使用される用語「精神疾患」とは、ヒトの思考、感情、行動のようなものに影響を及ぼす病的な精神状態を意味するものであり、精神機能に障害が生じた状態を総称する。本発明において、前記精神疾患は、ストレス、不安障害、外傷後ストレス障害（Ｐｏｓｔ−ｔｒａｕｍａｔｉｃＳｔｒｅｓｓＤｉｓｏｒｄｅｒ；ＰＴＳＤ）、パニック障害（ｐａｎｉｃｄｉｓｏｒｄｅｒ）、うつ病（ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ）、自閉症スペクトラム障害（Ａｕｔｉｓｍｓｐｅｃｔｒｕｍｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）、注意欠陥多動性障害（ａｔｔｅｎｔｉｏｎｄｅｆｉｃｉｔ／ｈｙｐｅｒａｃｔｉｖｉｔｙｄｉｓｏｒｄｅｒ；ＡＤＨＤ）、および統合失調症（ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ）等を含む。

本発明で使用される用語「ストレス（Ｓｔｒｅｓｓ）」は、生体に加えられる様々な傷害および刺激に対して体内で起こる非特異的な生物反応であり、カナダの内分泌学者Ｈ．セリエが初めて命名した。ストレス反応は、刺激ホルモンであるアドレナリンや他のホルモンが血中内に分泌されて身体を保護しようとする反応であり、危険に対処して戦ったりその状況を避けることができる力とエネルギーを提供する。ストレスに対する一般的な症状は多様であるが、疲労、頭痛、不眠症、胃痛、腹痛、嘔吐等のような症状が現れる身体的症状、集中力や記憶力の減少、優柔不断、空虚感等の精神的症状、不安、神経過敏、うつ病、怒り、挫折感等の感情的症状、およびソワソワする、神経質習慣、喫煙等の行動的症状の４種類のカテゴリーに分けられる。

本発明で使用される用語「うつ病（ｄｅｐｒｅｓｓｉｖｅｄｉｓｏｒｄｅｒ）」は、意欲低下と憂鬱感を主な症状として多様な認知および精神身体的症状を起こして日常機能の低下をもたらす疾患を意味する。うつ病は、神経伝達物質またはホルモンの不均衡による生化学的要因、遺伝的要因、および強いストレスのような環境的要因により発生することが知られている。ストレス調節、危機の時間に交友関係、社会的支持等の助けにより予防することができると知られている。

本発明で使用される用語「予防」とは、本発明による薬学的組成物の投与により精神疾患を阻害させたり発病を遅延させるすべての行為を意味する。

本発明で使用される用語「治療」とは、本発明による薬学的組成物の投与により精神疾患による症状が好転したり有利に変更されるすべての行為を意味する。

本発明の前記小胞は、ラクトバチルス属細菌の培養液またはラクトバチルス属細菌を添加して製造した食品から分離することができ、ラクトバチルス属細菌から自然的にまたは人工的に分泌されるものであってもよいが、これに制限されるものではない。

本発明の前記ラクトバチルス属細菌の培養液または醗酵食品から小胞を分離する方法は、小胞を含む限りにおいて、特に制限されない。例えば遠心分離、超高速遠心分離、フィルターによる濾過、ゲル濾過クロマトグラフィー、フリーフロー電気泳動、またはキャピラリー電気泳動等の方法、およびこれらの組合せを利用して小胞を分離することができ、また、不純物の除去のための洗浄、収得された小胞の濃縮等の過程をさらに含むことができる。

本発明で前記方法により分離した小胞は、平均直径が１０〜１，０００ｎｍであってもよいが、これに制限されるものではない。

本発明による薬学的組成物は、ラクトバチルス属細菌由来小胞を有効成分として含み、薬学的に許容可能な担体を含むことができる。前記薬学的に許容可能な担体は、製剤の際に通常用いられれるものであって、食塩水、滅菌水、リンガー液、緩衝食塩水、シクロデキストリン、デキストロース溶液、マルトデキストリン溶液、グリセロール、エタノール、リポソーム等を含むが、これらに限定されず、必要に応じて抗酸化剤、緩衝液等の他の通常の添加剤をさらに含むことができる。また、希釈剤、分散剤、界面活性剤、結合剤、潤滑剤等を付加的に添加して、水溶液、懸濁液、乳濁液等のような注射用の剤形、丸薬、カプセル、顆粒、または錠剤に製剤化することができる。適切な薬学的に許容される担体および製剤化については、レミントンの文献に開示されている方法を利用して各成分に応じて好ましく製剤化することができる。本発明の薬学的組成物は、剤形に特別な制限はないが、注射剤、吸入剤、皮膚外用剤、または経口摂取剤等に製剤化することができる。

本発明の薬学的組成物は、目的とする方法によって経口投与したり、非経口投与（例えば、静脈内、皮下、皮膚、鼻腔、気道に適用）することができ、投与量は、患者の状態および体重、疾病の程度、薬物の形態、投与の経路および時間によって異なるが、当業者により適宜選択することができる。

本発明による組成物は、薬学的に有効な量で投与する。本発明において、薬学的に有効な量は、医学的治療に適用可能な合理的な恩恵／リスクの割合で疾患を治療するのに十分な量を意味し、有効用量のレベルは、患者の疾患の種類、重症度、薬物の活性、薬物に対する敏感度、投与時間、投与経路および排出の比率、治療期間、同時に用いられる薬物を含む要素およびその他医学分野によく知られた要素に応じて決定することができる。本発明による組成物は、個々の治療剤として投与したり、他の治療剤と併用して投与することができ、従来の治療剤とは順次にまたは同時に投与することができ、単一または多重投与することができる。上記の要素をすべて考慮して副作用なしに最小限の量で最大効果を得ることができる量を投与することが重要であり、これは、当業者により容易に決定することができる。

具体的に、本発明による組成物の有効量は、患者の年齢、性別、体重によって異なることができ、一般的には、体重１ｋｇ当たり０．００１〜１５０ｍｇ、好ましくは０．０１〜１００ｍｇを毎日または隔日投与したり、１日に１〜３回に分けて投与することができる。しかしながら、投与経路、肥満の重症度、性別、体重、年齢等によって増減することができるので、前記投与量がどのような方法でも本発明の範囲を限定するものではない。

本発明で使用される用語「改善」とは、治療される状態と関連したパラメーター、例えば症状の程度を少なくとも減少させるすべての行為を意味する。

本発明の健康機能性食品組成物において有効成分を食品にそのまま添加したり、他の食品または食品成分と共に使用することができ、通常の方法によって適切に使用することができる。有効成分の混合量は、その使用目的（改善用）に応じて適切に決定することができる。一般的に、食品または飲み物の製造時に本発明の組成物は、原料に対して１５重量％以下、好ましくは１０重量％以下の量で添加される。しかしながら、健康および衛生を目的としたり、または健康調節を目的とする長期間の摂取の場合には、前記量は、前記範囲以下であってもよい。

本発明の健康機能性食品組成物は、指示された割合で必須成分として前記有効成分を含有すること以外に、他の成分には特別な制限がなく、通常の飲料のように様々な香味剤または天然炭水化物等を更なる成分として含有することができる。上述した天然炭水化物の例は、モノサッカライド、例えば、ブドウ糖、果糖等；ジサッカライド、例えばマルトース、スクロース等；およびポリサッカライド、例えばデキストリン、シクロデキストリン等のような通常の糖、およびキシリトール、ソルビトール、エリトリトール等の糖アルコールである。上述したもの以外の香味剤として、天然香味剤（ソーマチン、ステビア抽出物（例えばレバウジオシドＡ、グリシルリジン等）および合成香味剤（サッカリン、アスパルタム等）を有利に使用することができる。前記天然炭水化物の比率は、当業者の選択によって適切に決定することができる。

前記の他に本発明の健康機能食品組成物は、様々な栄養剤、ビタミン、鉱物（電解質）、合成風味剤および天然風味剤等の風味剤、着色剤および増進剤（チーズ、チョコレート等）、ペクチン酸およびその塩、アルギン酸およびその塩、有機酸、保護性のコロイド増粘剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に使用される炭酸化剤等を含有することができる。このような成分は、独立的に、または組み合わせて使用することができる。このような添加剤の比率も、当業者により適切に選択することができる。

本発明の吸入剤組成物において有効成分を吸入剤にそのまま添加したり、他の成分と共に使用することができ、通常の方法により適切に使用することができる。有効成分の混合量は、その使用目的（予防または治療用）に応じて適切に決定することができる。

本発明の他の様態として、本発明は、ラクトバチルス属細菌由来小胞を有効成分として含む組成物を個体に投与する段階を含む精神疾患の予防または治療方法を提供する。

本発明で「個体」とは、疾病の治療を必要とする対象を意味し、より具体的には、ヒトまたは非ヒトである霊長類、マウス、ラット、犬、猫、馬、および牛等の哺乳類を意味する。

以下、本発明の理解を助けるために好ましい実施例を提示する。しかしながら、下記の実施例は、本発明をより容易に理解するために提供されるものに過ぎず、下記実施例により本発明の内容が限定されるものではない。

［実施例１．ラクトバチルスプランタルム由来小胞による抗ストレス効果の確認］
マウスを利用した実験を通じてラクトバチルスプランタルム由来ナノ小胞を併用投与する場合、ストレスによる憂鬱行動の誘発が遮断されるかを調べようと考えた。このために、図１に示した実験過程によって、７週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスを購入して、無作為に４個のグループ、すなわち１４日間食塩水（０．９％Ｓａｌｉｎｅ、１００μｌ）を投与した正常マウス群（ＣＯＮまたはＣＯＮ＋Ｖｅｈ）、ナノ小胞（２ｕｇ／ｍｏｕｓｅ／１００μｌ）を投与した正常マウス群（ＣＯＮ＋ＥＶ）、毎日２時間ずつ１４日間身体拘束ストレス（ＲＳＴ）を与えたマウスに食塩水（０．９％Ｓａｌｉｎｅ、１００μｌ）を投与した群（ＲＳＴ＋Ｖｅｈ）、および毎日２時間ずつ１４日間身体拘束ストレスを与えたマウスにナノ小胞（ＥＶ、２ｕｇ／ｍｏｕｓｅ／１００μｌ）を投与した群（ＲＳＴ＋ＥＶ）に分けて実験を行った後、社会性（Ｓｏｃｉａｂｉｌｉｔｙ）を測定するＵ−ＢＯＸ試験、尾懸垂試験（ｔａｉｌｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｔｅｓｔ；ＴＳＴ）および強制水泳試験（ｆｏｒｃｅｄｓｗｉｍｔｅｓｔ；ＦＳＴ）を順に進めて、ナノ小胞の投与による抗ストレス効果を評価した。

まず、前記のような実験を行った４グループのマウスに対してＵ−ＢＯＸ試験を実施した。図２ａの絵で示されたように、前記試験は、Ｕ字形のフィールドの一側に標的マウスを金網内に配置し、反対側には、標的マウスなしに金網のみを配置して、標的マウスとどれぐらい多い時間を接触するかを確認するための実験方法である。実験の結果、図２ｂに示されたように、フィールド適応期間（Ｈａｂｉｔｕａｔｉｏｎ、非標的条件、５分）には、両側を共に類似した確率に留まったが、実際行動検査である１０分間行われた標的条件でグループ別に異なる結果が現れた。すなわち、対照群（ＣＯＮ＋Ｖｅｈ）および対照群にナノ小胞を投与した群（ＣＯＮ＋ＥＶ）では、標的空間（Ｔａｒｇｅｔ）に留まった時間が、非標的空間（Ｎｏｎ−ｔａｒｇｅｔ）に留まった時間に比べて増加しているが、身体拘束ストレスを受けた群（ＲＳＴ＋Ｖｅｈ）の場合、標的空間にさらに少なく留まったことが明らかになり、これに対し、ナノ小胞（ＥＶ）を共に投与した群（ＲＳＴ＋ＥＶ）では、対照群と類似したレベルで標的空間に留まった時間が増加していることを確認した。

次に、それぞれ尾懸垂試験（図３ａ）および強制水泳試験（図３ｂ）を実施した結果、対照群（ＣＯＮ＋Ｖｅｈ）と比較して身体拘束ストレスを受けた群（ＲＳＴ＋Ｖｅｈ）では、不動性（ｉｍｍｏｂｉｌｉｔｙ）が増加したのに対し、ナノ小胞を共に投与した群（ＲＳＴ＋ＥＶ）の場合、不動性が減少したことを確認した。

前記結果を通じて、ストレスを与えたマウスモデルにおいてラクトバチルスプランタルム由来小胞を投与したとき、抗ストレス効果に優れていることが分かった。

［実施例２．ラクトバチルスプランタルム由来小胞による抗うつ効果の確認］
前記実施例１の結果に加えて、ラクトバチルスプランタルム由来ナノ小胞を投与する場合、慢性ストレスの結果として誘導された憂鬱行動が回復することができるかを評価した。このために、図４の絵で示されたように、７週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスを購入して、無作為に５個のグループ、すなわち１４日間食塩水（０．９％Ｓａｌｉｎｅ、１００μｌ）を投与した正常マウス群（ＣＯＮ＋Ｖｅｈ）、ナノ小胞（ＥＶ、２、４、６ｕｇ／ｍｏｕｓｅ／１００μｌ）を投与した正常マウス群（ＣＯＮ＋ＥＶ）、慢性ストレスを与えたマウスに１４日間食塩水（０．９％Ｓａｌｉｎｅ、１００μｌ）を投与した群（ＲＳＴ＋Ｖｅｈ）、慢性ストレスを与えたマウスに１４日間ナノ小胞（ＥＶ、２，４，６ｕｇ／ｍｏｕｓｅ／１００μｌ）を投与した群（ＲＳＴ＋ＥＶ）、および慢性ストレスを与えたマウスに１４日間イミプラミン（ＩＭＩ、２０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）を投与した群（ＲＳＴ＋ＩＭＩ）に分類して実験を行った後、前記実施例１と同様に、それぞれ３種類の憂鬱行動検査を順に実施した。これに加えて、前記１次行動検査（Ｂｅｈａｖｉｏｒｔｅｓｔ−１）後に、２週が経過した後、同じ順に２次行動検査（Ｂｅｈａｖｉｏｒｔｅｓｔ−２）を実施した。また、ナノ小胞投入時に、ナノ小胞は、ストレス処置の終了後から毎日投与するものの、１日（ｐ１）〜４日（ｐ４）までは、２ｕｇ／ｍｏｕｓｅ／１００μｌ、５日（ｐ５）〜６日（ｐ６）までは、４ｕｇ／ｍｏｕｓｅ／１００μｌ、７日（ｐ７）〜１４日（ｐ１４）までは、６ｕｇ／ｍｏｕｓｅ／１００μｌに徐々に増加させて投与した。

まず、Ｕ−ＢＯＸ試験の結果、図５に示されたように、フィールド適応期間（Ｈａｂｉｔｕａｔｉｏｎ）には、各マウスグループ間の両側の空間に留まった時間の差が現れなかったが、標的条件では、対照群（ＣＯＮ＋Ｖｅｈ）に比べてストレスを与えた対照群（ＲＳＴ＋Ｖｅｈ）の場合、標的空間（Ｔａｒｇｅｔ）に留まった時間が減少した。これに対し、ストレスを与え、ナノ小胞を投与した群（ＲＳＴ＋ＥＶ）およびイミプラミンを投与した群（ＲＳＴ＋ＩＭＩ）では、それぞれ標的空間に留まった時間が対照群のレベルに回復したことを確認した。

次に、図６に示されたように、それぞれ尾懸垂試験（図６ａ）および強制水泳試験（図６ｂ）を実施した結果、ストレスを与えた群（ＲＳＴ＋Ｖｅｈ）では、対照群（ＣＯＮ＋Ｖｅｈ）に比べて不動性が有意に増加したのに対し、ストレスを与え、ナノ小胞を投与した群（ＲＳＴ＋ＥＶ）およびイミプラミンを投与した群（ＲＳＴ＋ＩＭＩ）では、不動時間が対照群のレベルに減少したことを確認した。

しかも、図５および図６の１次行動検査以降２週後に再び同じ行動検査をそれぞれ実施した結果、図７に示されたように、１次Ｕ−ＢＯＸ試験の結果と同様に、２次試験の結果でも、ストレスを与え、ナノ小胞を投与した群（ＲＳＴ＋ＥＶ）およびイミプラミンを投与した群（ＲＳＴ＋ＩＭＩ）において標的空間に留まった時間が対照群と類似したレベルに依然として回復していることが分かった。また、図８に示されたように、２次尾懸垂試験（図８ａ）および強制水泳試験（図８ｂ）の結果もやはり、１次の試験の結果と同一に、ストレスを与え、ナノ小胞を投与した群（ＲＳＴ＋ＥＶ）およびイミプラミンを投与した群（ＲＳＴ＋ＩＭＩ）において不動時間が対照群のレベルに減少したことを確認した。

前記結果を通じて、慢性ストレスを与えてうつ病が誘発されたマウスモデルにおいてナノ小胞の投与が抗うつ病治療効果を示すことが分かった。

［実施例３．ラクトバチルスカゼイ由来小胞による抗ストレスおよび抗うつ効果の確認］
マウスを利用した実験を通じて、ラクトバチルスカゼイ由来ナノ小胞を併用投与する場合、ストレスによる憂鬱行動の誘発が遮断されるかを調べようと考えた。このために、図９に示した実験過程によって、８週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスを購入して、無作為に４個のグループ、すなわち１４日間食塩水（０．９％Ｓａｌｉｎｅ、１００μｌ）を投与した正常マウス群（ＣＯＮ＋ｖｅｈ）、ナノ小胞（１１ｕｇ／ｍｏｕｓｅ／１００μｌ）を投与した正常マウス群（ＣＯＮ＋Ｌａｃ）、毎日２時間ずつ１４日間身体拘束ストレス（ＲＳＴ）を与えたマウスに食塩水（０．９％Ｓａｌｉｎｅ、１００μｌ）を投与した群（ＲＳＴ＋ｖｅｈ）、および毎日２時間ずつ１４日間身体拘束ストレスを与えたマウスにナノ小胞（ＥＶ、１１ｕｇ／ｍｏｕｓｅ／１００μｌ）を投与した群（ＲＳＴ＋Ｌａｃ）に分けて実験を行った後、社会性（Ｓｏｃｉａｂｉｌｉｔｙ）を測定するＵ−ＢＯＸ試験、尾懸垂試験（ｔａｉｌｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｔｅｓｔ；ＴＳＴ）および強制水泳試験（ｆｏｒｃｅｄｓｗｉｍｔｅｓｔ；ＦＳＴ）をストレス投与２週後およびステレス投与４週後に順に進めて、ナノ小胞の投与による抗ストレス効果および抗うつ病予防効果を評価した。

まず、前記のような実験を行った４グループのマウスに対して、ストレス投与２週後にＵ−ＢＯＸ試験（社会性試験）を実施した。図１０ａの絵で示されたように、前記試験は、Ｕ字形のフィールドの一側に標的マウスを金網内に配置し、反対側には、標的マウスなしに金網のみを配置し、標的マウスとどれぐらい多い時間を接触するかを確認するための実験方法である。

実験の結果、図１０ｂに示されたように、対照群（ＣＯＮ＋ｖｅｈ）および対照群にナノ小胞を投与した群（ＣＯＮ＋Ｌａｃ）では、標的空間（Ｔａｒｇｅｔ）に留まった時間が非標的空間（Ｎｏｎ−ｔａｒｇｅｔ）に留まった時間に比べて増加しているが、身体拘束ストレスを受けた群（ＲＳＴ＋ｖｅｈ）の場合、対照群に比べて標的空間にさらに少なく留まったことが明らかになった。これに対し、ナノ小胞を共に投与した群（ＲＳＴ＋Ｌａｃ）では、対照群と類似したレベルに標的空間に留まった時間が増加していることを確認した。

また、図１０ｃに示されたように、Ｕ−ＢＯＸ試験を通じて計算した社会性指数（ｓｏｃｉａｌｉｎｄｅｘ）においても身体拘束ストレスを受けた群（ＲＳＴ＋ｖｅｈ）の場合、社会性指数が対照群に比べて有意に減少したが、身体拘束ストレスと共に、ナノ小胞を投与した群（ＲＳＴ＋ｖｅｈ）の場合には、社会性指数が対照群のレベルに回復した。

次に、それぞれ尾懸垂試験（図１１ａ）および強制水泳試験（図１１ｂ）を実施した結果、対照群（ＣＯＮ＋ｖｅｈ）と比較して身体拘束ストレスを受けた群（ＲＳＴ＋Ｌａｃ）では、不動性（ｉｍｍｏｂｉｌｉｔｙ）が増加したのに対し、ナノ小胞を共に投与した群（ＲＳＴ＋Ｌａｃ）の場合、不動性が有意に減少したことを確認した。つまり、ストレスを与えたマウスモデルにおいてラクトバチルスカゼイ由来小胞を投与したとき、抗ストレス効果に優れていることが分かった。

次に、前記のような実験を行った４グループのマウスに対して、ストレス投与４週後にＵ−ＢＯＸ試験（社会性試験）を実施した。図１２ａに示されたように、対照群（ＣＯＮ＋ｖｅｈ）および対照群にナノ小胞を投与した群（ＣＯＮ＋Ｌａｃ）では、標的空間（Ｔａｒｇｅｔ）に留まった時間が非標的空間（Ｎｏｎ−ｔａｒｇｅｔ）に留まった時間に比べて増加しているが、身体拘束ストレスを受けた群（ＲＳＴ＋ｖｅｈ）の場合、対照群に比べて標的空間にさらに少なく留まったことが明らかになった。これに対し、ナノ小胞を共に投与した群（ＲＳＴ＋Ｌａｃ）では、対照群と類似したレベルに標的空間に留まった時間が増加していることを確認した。

また、図１２ｂに示されたように、社会性指数（ｓｏｃｉａｌｉｎｄｅｘ）においても身体拘束ストレスを受けた群（ＲＳＴ＋ｖｅｈ）の場合、社会性指数が対照群に比べて有意に減少したが、身体拘束ストレスと共に、ナノ小胞を投与した群（ＲＳＴ＋ｖｅｈ）の場合には、社会性指数が対照群のレベルに回復した。

次に、図１３に示されたように、、尾懸垂試験を実施した結果、対照群（ＣＯＮ＋ｖｅｈ）と比較して身体拘束ストレスを受けた群（ＲＳＴ＋Ｌａｃ）では、不動性（ｉｍｍｏｂｉｌｉｔｙ）が増加したのに対し、ナノ小胞を共に投与した群（ＲＳＴ＋Ｌａｃ）の場合、不動性が有意に減少したことを確認した。つまり、ストレスを与えたマウスモデルにおいてラクトバチルスカゼイ由来小胞を投与したとき、抗うつ効果に優れていることが分かった。

前記述べた本発明の説明は、例示のためのものであり、本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者は、本発明の技術的思想や必須的な特徴を変更することなく、他の具体的な形態な容易に変形が可能であることを理解することができる。したがって、以上で記述した実施例は、すべての面において例示的なものであり、限定的ではないものと理解しなければならない。

本発明は、ラクトバチルス属細菌由来小胞を有効成分として含む精神疾患の予防、改善、または治療用組成物に関し、本発明によれば、ラクトバチルス属細菌由来小胞を有効成分として含む、精神疾患の予防、改善、または治療用組成物を提供することによって、今後精神疾患を予防、症状改善、または治療するための医薬品または健康機能食品等の開発に有用に使用することができるものと期待される。

Claims

精神疾患の予防又は治療用である薬学的組成物であって、
ラクトバチルスプランタルム由来小胞を有効量含み、
前記精神疾患が、ストレス、不安障害、外傷後ストレス障害（Ｐｏｓｔ−ｔｒａｕｍａｔｉｃＳｔｒｅｓｓＤｉｓｏｒｄｅｒ；ＰＴＳＤ）、パニック障害（ｐａｎｉｃｄｉｓｏｒｄｅｒ）、及びうつ病（ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ）からなる群より選ばれる、薬学的組成物。
前記小胞は、平均直径が１０ｎｍ〜１，０００ｎｍであることを特徴とする、請求項１に記載の薬学的組成物。
前記小胞は、ラクトバチルスプランタルム培養液から分離することを特徴とする、請求項１又は２に記載の薬学的組成物。
前記小胞は、ラクトバチルスプランタルムを添加して製造した食品から分離することを特徴とする、請求項１又は２に記載の薬学的組成物。
前記小胞は、ラクトバチルスプランタルムから自然的または人工的に分泌されることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
精神疾患の改善用健康機能性食品組成物であって、
ラクトバチルスプランタルム由来小胞を有効量含み、
前記精神疾患が、ストレス、不安障害、外傷後ストレス障害（Ｐｏｓｔ−ｔｒａｕｍａｔｉｃＳｔｒｅｓｓＤｉｓｏｒｄｅｒ；ＰＴＳＤ）、パニック障害（ｐａｎｉｃｄｉｓｏｒｄｅｒ）、及びうつ病（ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ）からなる群より選ばれる、健康機能性食品組成物。
前記小胞は、平均直径が１０ｎｍ〜１，０００ｎｍであることを特徴とする、請求項６に記載の健康機能性食品組成物。
前記小胞は、ラクトバチルスプランタルム培養液から分離することを特徴とする請求項６又は７に記載の健康機能性食品組成物。
前記小胞は、ラクトバチルスプランタルムを添加して製造した食品から分離することを特徴とする請求項６又は７に記載の健康機能性食品組成物。
前記小胞は、ラクトバチルスプランタルムから自然的または人工的に分泌されることを特徴とする請求項６〜９のいずれか一項に記載の健康機能性食品組成物。
ラクトバチルスプランタルム由来小胞の、精神疾患の予防用または治療用の薬学的組成物又は健康機能性食品組成物の製造のための使用であって、
前記精神疾患が、ストレス、不安障害、外傷後ストレス障害（Ｐｏｓｔ−ｔｒａｕｍａｔｉｃＳｔｒｅｓｓＤｉｓｏｒｄｅｒ；ＰＴＳＤ）、パニック障害（ｐａｎｉｃｄｉｓｏｒｄｅｒ）、及びうつ病（ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ）からなる群より選ばれ、前記ラクトバチルスプランタルム由来小胞が、前記薬学的組成物又は健康機能性食品組成物に有効量含まれる、使用。