JP6755513B2 - 抗スクレロスチン抗体、その抗原結合フラグメントおよびその医薬用途 - Google Patents
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Description
重鎖可変領域HCDR配列:SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8またはSEQ ID NO:9;および、
軽鎖可変領域LCDR配列:SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11またはSEQ ID NO:12
SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8およびSEQ ID NO:9
SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11およびSEQ ID NO:12
(a)SEQ ID NO:14の重鎖可変領域配列およびSEQ ID NO:17の軽鎖可変領域配列、
(b)SEQ ID NO:15の重鎖可変領域配列およびSEQ ID NO:18の軽鎖可変領域配列、または、
(c)SEQ ID NO:16の重鎖可変領域配列およびSEQ ID NO:19の軽鎖可変領域配列。
Ab-10:SEQ ID NO:24として示される重鎖およびSEQ ID NO:27として示される軽鎖、
Ab-9:SEQ ID NO:25として示される重鎖およびSEQ ID NO:28として示される軽鎖、または、
Ab-5:SEQ ID NO:26として示される重鎖およびSEQ ID NO:29として示される軽鎖。
本発明は、上記のDNA配列を含む発現ベクターをさらに提供する。
本発明は、上記の発現ベクターにより形質転換された宿主細胞をさらに提供する。
本発明は、骨量、骨塩密度、骨塩量または骨強度の少なくとも1つを増強するための薬物の製造における、上記のSOST抗体またはその抗原結合フラグメント、またはこれらと同一のものを含む医薬組成物の使用をさらに提供する。
本明細書で用いられるアミノ酸の1文字記号および3文字記号は、J. Biol. Chem., 243, p3558(1968)で記述されているものである。
本発明における他の好ましい抗体は、SEQ ID NO:25のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチドおよびSEQ ID NO:28のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含む。
本発明における他の好ましい抗体は、SEQ ID NO:26のアミノ酸配列を有する重鎖ポリペプチドおよびSEQ ID NO: 29のアミノ酸配列を有する軽鎖ポリペプチドを含む。
これらのSEQ ID NOは、以下の表1に記載される。
本発明は、本発明の抗スクレロスチン抗体を発現する宿主細胞にも向けられる。本発明の抗体を産生する宿主細胞株の樹立と単離は、本技術分野で周知の標準技術を用いて達成することができる。
治療目的で使用される本発明の抗体は、好ましくは、哺乳類に由来するフレームワークおよび定常領域の配列(抗体中に存在する程度まで)を有し、該抗体は、哺乳類において、治療抗体に対する免疫反応を誘導する治療抗体の可能性を低減させるための治療薬として使用される。ヒト化抗体は、治療への応用や、マウス起源の抗体またはマウス起源の部分を含む抗体がヒト被験者に投与される場合に、高い頻度で観察されるヒト抗マウス抗体反応の可能性の低減において有益であるため、ヒト化抗体は特に重要である。好ましくは、注入されたヒト化抗体は、例えばマウス抗体と比較した場合、自然に存在するヒト抗体に近い半減期を有し、その結果、被験者への投与頻度または投与量を低減することができる。
本発明の抗スクレロスチンモノクローナル抗体を含む医薬組成物は、それを必要としている被験者に有効量が投与された場合、脊椎骨もしくは非脊椎骨またはその両方において、骨量、骨塩密度、骨塩量または骨強度の少なくとも1つを増加させるために使用することができる。本発明の抗スクレロスチンモノクローナル抗体を含む医薬組成物は、それを必要としている被験者に有効量が投与された場合、脊椎骨および/または非脊椎骨の骨折の発生を減少させるために使用することができる。骨折の発生の減少には、未治療の対照集団と比較した場合には、被験者に対する骨折の可能性または実際の発生率の減少が含まれる。
本発明の抗体は、被験者への投与に適した医薬組成物に組み入れることができる。本発明の抗体は、単独で、または薬学的に許容される担体および/または希釈剤と組み合わせて、単回投与または反復投与により投与してもよい。かかる医薬組成物は、選択された投与方法に適するように設計され、また、分散剤、緩衝液、界面活性剤、防腐剤、可溶化剤、等張剤、安定化剤などの薬学的に許容される希釈剤、担体および/または賦形剤が適切に用いられる。前記組成物は、例えば、専門家に一般に知られる製剤技術の概要を提供する、Remington, The Science and Practice of Pharmacy、第19版、編集者Gennaro、Mack Publishing Co., Easton, PA 1995に開示される従来技術に従って設計することができる。医薬組成物に対して適切な担体には、本発明のモノクローナル抗体と組み合わせた場合に、その分子活性を保持し、被験者の免疫系と非反応である任意の材料が含まれる。
Hisタグを持つヒト・スクレロスチン(His-h-SOST)のコード配列、Flagタグを持つヒト・スクレロスチン(h-SOST-Flag)のコード配列、Flagタグを持つマウス・スクレロスチン(m-SOST-Flag)のコード配列、およびFlagタグを持つカニクイザル・スクレロスチン(cyno-SOST-Flag)のコード配列は、CROであるShanghai Xuguan Biotechnology Development Co., Ltdにより合成され(上記のスクレロスチン組み換えタンパク質のテンプレート配列は、本発明により設計された。)、pTT5ベクター(Biovector、カタログ番号102762)にそれぞれクローン化された。組み換えSOSTタンパク質は293細胞に発現させ、実施例で精製された。精製されたタンパク質は、以下の実施例の実験で使用することができる。
h-SOST-FlagのDNA配列:
m-SOST-FlagのDNA配列:
cyno-SOST-FlagのDNA配列:
(1)Hisタグを持つSOST組み換えタンパク質の精製ステップ
細胞発現上清を高速遠心分離して不純物を除去し、緩衝液をPBSに交換し、イミダゾールを終濃度5 mMで添加した。ニッケルカラムを5 mMイミダゾールを含むPBS溶液で平衡化し、2〜5カラム量で洗浄した。続いて、上清をカラム上に充填した。カラムを、5 mMイミダゾールを含むPBS溶液で、A280測定値がベースラインまで減少するまで洗浄した。次に、クロマトグラフィーカラムをPBS+10 mMイミダゾールで洗浄して、非特異的に結合したタンパク質を除去し、溶出液を回収した。目的タンパク質は、300 mMイミダゾールを含むPBS溶液で溶出し、溶出ピークを集めた。
サンプルは高速遠心分離して不純物を除去し、適当な量に濃縮した。Flagアフィニティーカラムを0.5×PBSで平衡化し、2〜5カラム量で洗浄した。次に、細胞発現上清サンプルを、不純物を除去した後、カラム上に充填した。カラムは、0.5×PBSで、A280測定値がベースラインまで減少するまで洗浄した。次に、カラムを0.3 M NaClを含むPBSで洗浄し、不純物タンパク質を洗い流して集めた。目的タンパク質は、0.1 M酢酸(pH 3.5〜4.0)で溶出して回収し、pHを中性に調整した。回収したサンプルは、電気泳動、ペプチドマッピングおよびLC-MSにより同定し、誤りのないサンプルを、使用のために等分した。
抗ヒトSOSTモノクローナル抗体は、免疫マウスにより産生された。実験用SJL白色マウス、雌性、6週齢(Beijing Weitong Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd., 動物生産許可番号:SCXK (Beijing) 2012-0001)。
飼育環境:SPFレベル。マウスを購入した後、マウスは、実験室で、12/12時間の明暗サイクル、20〜25℃の温度、40〜60%の湿度で1週間飼育した。環境に馴化したマウスは、各群10匹のマウスの2群(A/B)に分けた。
インビトロで優れた生物活性を示すモノクローナルハイブリドーマ細胞株Ab-1を選択した。このハイブリドーマを配列決定し、さらにヒト化、組み換え発現および活性評価を行った。
ハイブリドーマ細胞から得られた軽鎖可変領域:
(1)マウス抗スクレロスチン抗体のCDR領域
VH/VL CDRのアミノ酸残基を同定し、Kabat番号付け体系によりアノテートした。
本発明において、マウスAb-1のCDR配列は表3に示される。
マウス抗体のVH/VL CDRの代表的構造に基づいて、重鎖および軽鎖の可変領域配列を抗体Germlineデータベースと比較し、高い相同性を有するヒト生殖細胞系列テンプレートを選択した。ここで、ヒト生殖細胞系列軽鎖のフレームワーク領域は、ヒトκ軽鎖遺伝子に由来し、好ましくは、ヒト生殖細胞系列軽鎖テンプレートのIGKV1-39*01またはIGKV4-1*01が本発明において選択された。ヒト生殖細胞系列重鎖のフレームワーク領域は、ヒト重鎖に由来し、好ましくは、ヒト生殖細胞系列重鎖テンプレートのIGHV1-18*01が本発明において選択された。マウス抗体Ab-1のCDR領域は、ヒト化可変領域を置き換えた後、IgG定常領域と再結合して、選択されたヒト化テンプレートに移植された。マウス抗体の三次元構造に基づき、包埋残基、CDR領域と直接相互作用する残基、およびVLおよびVHの高次構造に重要な作用を持つ残基について、逆突然変異を行った。また、CDR領域の化学的不安定性を示す残基(重鎖CDR2は最適化され、新たな重鎖CDR2配列DIDPNDGDILYNQKFRD、SEQ ID NO:13が得られた。)は最適化され、最終的なヒト化分子が得られた。最終的なヒト化分子の重鎖可変領域配列は、SEQ ID NO:14〜16として示され、これらの配列は、SEQ ID NO:20〜22として示される重鎖定常領域のいずれかと結合させることができる。最終的なヒト化分子の軽鎖可変領域配列は、SEQ ID NO:17〜19として示され、これらの配列は、SEQ ID NO:23として示される軽鎖定常領域配列と、それぞれ結合させることができる。
Ab-5の重鎖可変領域:
Ab-9の重鎖可変領域:
Ab-10の重鎖可変領域:
ヒトIgG4(Kアミノ酸残基は欠失)の重鎖定常領域:
ヒトIgG4の重鎖定常領域:
ヒトIgG2の重鎖定常領域:
Ab-5の軽鎖可変領域:
Ab-9の軽鎖可変領域:
Ab-10の軽鎖可変領域:
ヒト化抗体Ab-10:
重鎖:
軽鎖:
ヒト化抗体Ab-9:
重鎖:
軽鎖:
ヒト化抗体Ab-5:
重鎖:
軽鎖:
本発明のヒト化抗ヒトSOST抗体とヒト・スクレロスチン(h-SOST-Flag)との結合活性のデータは、表4に示される。
スクレロスチン抗体は、スクレロスチンと、細胞膜上のスクレロスチン受容体との結合を阻害し、それによって、スクレロスチンの下流シグナル伝達経路を阻害する。ELISA実験を、スクレロスチン抗体の結合特性の検出に用いた。Flagタグを持つスクレロスチン(h-SOST-FLAG、SEQID NO:2によりコードされる)を、ビオチン標識キット(同人化学、LK03)によりビオチン化し、96ウェルEIA/RIAプレート上に、プレート上にコートしたストレプトアビジンへの結合を用いて固定化した。抗体を添加した後、シグナル強度を用いて、抗体とヒト・スクレロスチンとの結合活性を測定した。
スクレロスチンは、細胞膜上のwnt/β-カテニンシグナル伝達経路の共受容体LRP5/LRP-6と結合し、wnt/β-カテニンシグナル伝達経路の活性を阻害して、骨形成を阻止する。この実験において、選別された抗ヒトSOST抗体の、ヒトSOST/サルSOSTとヒトLRP-6との結合を阻止する活性が、インビトロ阻害アッセイを用いて検出された。陽性対照はロモソズマブ(Romosozumab);製造方法は参考文献WHO Drug Information, Vol. 25, No. 4, 2011, 413-465, P434に記載の通りである。)であった。
ヒト化抗SOST抗体の、ヒト、サルおよびマウスSOSTとの親和性を測定するため、ビアコア(GE)を使用した。
一定量の被験抗体の親和性捕獲のための抗ヒト捕獲抗体を、ヒト抗体捕獲キット(GE、カタログ番号BR-1008-39)の使用説明書に記載の方法に従って、ビアコア装置(GE、ビアコアX100)のCM5バイオセンサーチップ(GE、カタログ番号BR-1000-12)に共有結合的に結合させた。次に、濃度勾配をつけたSOST抗原(ヒトSOST、R&D SYSTEM、カタログ番号1406-ST-025/CF, R&D;サルSOST、cyno-SOST-Flag、精製により取得した。実施例1のSEQ ID NO:4によりコードされる。;マウスSOST、m-SOST-Flag、精製により取得した。実施例1のSEQ ID NO:3によりコードされる。)を、バイオチップの表面に流した。反応シグナルは、ビアコア装置(GE、BiacoreX100)を用いてリアルタイムに検出し、会合解離曲線を得た。実験における解離の各サイクルが終了した後、バイオチップを洗浄し、ヒト抗体捕獲キットの再生溶液で再生させた。実験で使用したアミノ基結合キット(GE、カタログ番号BR-1000-50)はGEより購入し、緩衝液はHBS-EP+10×緩衝液(GE、カタログ番号BR-1006-69)であり、この緩衝液は、脱イオン水で1×(pH 7.4)に希釈した。
得られたデータは、(1:1)ラングミュア(Langmuir)モデルを用いるBIAevaluationバージョン4.1ソフトウェア、GEによりフィットさせ、親和性値を出力した。この結果を表6に示した。
この試験では、細胞に対する本発明のSOST抗体のインビトロ活性を、細胞のアルカリホスファターゼ(ALP)活性を測定することによるEC50値に従って評価した。
C2C12細胞(中国科学院細胞バンク、カタログ番号GNM26)を、10%FBSを含むDMEM培養液中で培養し、1週間に2〜3回、1:5または1:10の比率で継代した。継代時、培養液を捨て、5 mLの0.25%トリプシンを用いて細胞層を洗った後、トリプシンを除いた。細胞は、インキュベーター中で3〜5分間消化し、新鮮培養液に再懸濁した。100μLの細胞懸濁液を、5×104細胞/mLの密度で96ウェル培養プレートに加えた。培養液は10%FBSを含むDMEMであり、10%FBSを含むDMEM培養液を100μLだけ、96ウェルプレートの外側に添加した。次に、培養プレートを、24時間(37℃、5%CO2)インキュベーター中で培養した。細胞の接着が観察されたら、培養液を捨て、10%FBSを含むDMEM培養液70μLを各ウェルに添加した。10μLのwnt3a(R&D、カタログ番号5036-WN-010)を、終濃度100 ng/mLで、またSOST(R&D、カタログ番号1406-ST-025)を、終濃度5μg/mLで、それぞれ各ウェルに添加した。試験サンプルは、PBSで異なる濃度勾配に希釈し、異なる濃度の試験サンプル10μLを、培養プレートに添加した。次に、培養プレートを、3日間(37℃、5%CO2)インキュベーター中で培養した。培養液を捨て、150μLのALP基質を各ウェルに添加し、培養プレートを2時間インキュベーター中で培養した。波長450 nmでのOD値をマイクロプレートリーダー(PerkinElmer、カタログ番号VICTOR3)で測定し、EC50値を算出した。この結果を表7に示した。
〔カニクイザルにおけるヒト化抗SOST抗体のT1/2の評価〕
実験で使用した3匹のカニクイザルは、雌性、4〜5年齢、4 kg未満であり、Guangxi Guidong Primate Breeding Development Co., Ltdから購入した。飼育環境:通常の飼育室。カニクイザルを購入した後、各サルは独立したケージで維持し、自由に飲水と食餌をさせた。実験室環境への馴化期間は、温度23〜29℃、相対湿度40〜70%で少なくとも14日間であり、12/12時間周期の明暗サイクル調節を行った。実験開始1日前に3匹のカニクイザルに番号を付けた。実験当日、各カニクイザルに、被験薬物および陽性分子(30 mg/kg)を、8 mL/サル/投与で皮下注射した。
サルは、サル用椅子に固定し、血液を、肘静脈または伏在静脈から採取(毎回約1.5 mLの血液を採取)し、血清を得た後−20℃で保存した。血液採取時間ポイントは、投与前12時間、第1日は投与後1 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h(第2日)、第3日、第5日、第7日、第14日、第21日および第28日とした。血液サンプルを採取した後、血清中の薬物濃度をELISAで測定し、PK分析を行った。この結果を表8に示した。
〔カニクイザルにおけるヒト化抗SOST抗体のインビボ有効性の評価〕
実験で使用した3匹のカニクイザルは、雌性、4〜5年齢、4 kg未満であり、Guangxi Guidong Primate Breeding Development Co., Ltdから購入した。飼育環境:通常の飼育室。カニクイザルを購入した後、各サルは独立したケージで維持し、自由に飲水と食餌をさせた。実験室環境への馴化期間は、温度23〜29℃、相対湿度40〜70%で少なくとも14日間であり、12/12時間周期の明暗サイクル調節を行った。実験開始1日前に3匹のカニクイザルに番号を付け、次に、麻酔後採血し、血清および血漿を得た。さらに、腰椎および橈骨遠位端の骨塩密度および骨塩量を測定し、得られた値を基準値とした。各カニクイザルに、被験薬物(10、30、60 mg/kgの異なる用量)および陽性分子(30 mg/kg)を、8 mL/サル/投与で皮下注射した。薬物は、月に1回、全部で2回投与した。実験中、投与後第4週および8週において、動物の腰椎および橈骨遠位端の、それぞれ骨塩密度および骨塩量を測定した。実験2か月後、すべての動物は麻酔し、安楽死させた(過剰量のペントバルビタールナトリウムによる)。この後、第2〜第5腰椎および橈骨遠位端の骨塩密度および骨塩量を測定した。
結果を、表9、図1および図2に示した。
〔ヒト化抗SOST抗体の溶解性〕
ヒト化抗SOST抗体の溶解性を測定するため、順次濃度を上げる抗体Ab-5および陽性抗体ロモソズマブについて、可溶性抗体単量体の量、沈殿、高分子の量を測定した。試験において、抗体の出発濃度は10 mg/mLとし、これはpH 7.4のPBS緩衝液に溶解した。サンプルは、限外ろ過濃縮器(Millipore、Amicon Ultra-15 50K)で、4℃、4000 rpmで遠心した。遠心中、5〜10分間隔でサンプルを採取し、抗体濃度が30 mg/mLおよび90 mg/mLに到達するまで、抗体濃度を測定した。異なる濃度条件下のサンプルを採取し、それぞれSEC-HPLC分析にかけた。この結果を表10に示した。
〔ヒト化抗SOST抗体の安定性〕
本発明のヒト化抗SOST抗体の安定性を測定するため、抗体Ab-5および陽性抗体ロモソズマブを、pH 7.4のPBS緩衝液中に4℃で7日間放置した。安定性を測定するため、2つの方法を用いた。1つの方法は、肉眼で見ることのできる不溶性沈殿の生成量を評価するもので、放置前後での不溶性沈殿濃度の変化を算出するもの;他の方法は、サンプル中の可溶性抗体単量体含量の変化を、SEC-HPLCにより測定するものである。初期の抗体濃度は30 mg/mLであり、この濃度は、陽性抗体が到達し得る最高の可溶濃度であった。この結果を表11に示した。
Claims (24)
- ヒト・スクレロスチンに対して特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、該重鎖可変領域が、SEQ ID NO:7で示されるHCDR1、SEQ ID NO:8または13で示されるHCDR2およびSEQ ID NO:9で示されるHCDR3を含み、該軽鎖可変領域が、SEQ ID NO:10で示されるLCDR1、SEQ ID NO:11で示されるLCDR2およびSEQ ID NO:12で示されるLCDR3を含む、抗体またはその抗原結合フラグメント。
- 抗体またはその抗原結合フラグメントが、マウス抗体またはそのフラグメントである、請求項1に記載のヒト・スクレロスチンに対して特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
- マウス抗体の重鎖可変領域配列が、SEQ ID NO:5またはSEQ ID NO:5に対して少なくとも95%の同一性を有する配列として示される、請求項2に記載のヒト・スクレロスチンに対して特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
- マウス抗体の軽鎖可変領域配列が、SEQ ID NO:6またはSEQ ID NO:6に対して少なくとも95%の同一性を有する配列として示される、請求項2に記載のヒト・スクレロスチンに対して特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
- マウス抗体の重鎖可変領域配列が、SEQ ID NO:5として示され、マウス抗体の軽鎖可変領域配列が、SEQ ID NO:6として示される、請求項2〜4のいずれか1項に記載のヒト・スクレロスチンに対して特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
- 抗体またはその抗原結合フラグメントが、キメラ化抗体もしくはヒト化抗体またはそれらのフラグメントである、請求項1に記載のヒト・スクレロスチンに対して特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
- ヒト化抗体が、ヒト生殖細胞系列重鎖IGHV1-18*01のFR1、FR2、FR3およびFR4領域のフレームワーク配列、またはそれらの変異体を含み、好ましくは、変異配列が0〜10個のアミノ酸の逆突然変異を含む、請求項6に記載のヒト・スクレロスチンに対して特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
- ヒト化抗体が、SEQ ID NO:14〜16もしくはそれらの変異体、またはSEQ ID NO:14〜16に対して少なくとも95%の同一性を有する配列から選ばれる重鎖可変領域配列を含む、請求項7に記載のヒト・スクレロスチンに対して特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
- ヒト化抗体が、ヒト生殖細胞系列軽鎖IGKV1-39*01またはIGKV4-1*01のFR1、FR2、FR3およびFR4領域のフレームワーク配列、またはそれらの変異体を含み、好ましくは、変異配列が0〜10個のアミノ酸の逆突然変異を含む、請求項6に記載のヒト・スクレロスチンに対して特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
- ヒト化抗体が、SEQ ID NO:17〜19もしくはこれらの変異体、またはSEQ ID NO:17〜19に対して少なくとも95%の同一性を有する配列から選ばれる軽鎖可変領域配列を含む、請求項9に記載のヒト・スクレロスチンに対して特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
- ヒト化抗体が、SEQ ID NO:14〜16から選ばれる重鎖可変領域配列およびSEQ ID NO:17〜19から選ばれる軽鎖可変領域配列を含む、請求項6〜10のいずれか1項に記載のヒト・スクレロスチンに対して特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
- (a)〜(c)のいずれかから選ばれる重鎖可変領域配列と軽鎖可変領域配列との組み合わせを含む、請求項11に記載のヒト・スクレロスチンに対して特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
(a)SEQ ID NO:14の重鎖可変領域配列およびSEQ ID NO:17の軽鎖可変領域配列、
(b)SEQ ID NO:15の重鎖可変領域配列およびSEQ ID NO:18の軽鎖可変領域配列、または、
(c)SEQ ID NO:16の重鎖可変領域配列およびSEQ ID NO:19の軽鎖可変領域配列 - 請求項6に記載のヒト・スクレロスチンに対して特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであって、ヒト化抗体の重鎖定常領域が、ヒトIgG1もしくはその変異体、ヒトIgG2もしくはその変異体、ヒトIgG3もしくはその変異体、またはヒトIgG4もしくはその変異体に由来する定常領域、好ましくは、ヒトIgG1もしくはその変異体またはヒトIgG4もしくはその変異体に由来する定常領域、最も好ましくは、ヒトIgG4またはその変異体に由来する定常領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメント。
- SEQ ID NO:24〜26またはSEQ ID NO:24〜26に対して少なくとも90%の同一性を有する配列から選ばれる全長の重鎖配列を含む、請求項13に記載のヒト・スクレロスチンに対して特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
- ヒト化抗体の軽鎖定常領域が、ヒトκもしくはλまたはそれらの変異体から選ばれる定常領域を含む、請求項6に記載のヒト・スクレロスチンに対して特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
- SEQ ID NO:27〜29またはSEQ ID NO:27〜29に対して少なくとも90%の同一性を有する配列から選ばれる全長の軽鎖配列を含む、請求項15に記載のヒト・スクレロスチンに対して特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
- SEQ ID NO:24〜26から選ばれる全長の重鎖配列およびSEQ ID NO:27〜29から選ばれる全長の軽鎖配列を含む、請求項6〜16のいずれか1項に記載のヒト・スクレロスチンに対して特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
- ヒト化抗体が、以下の全長の軽鎖配列と全長の重鎖配列との組み合わせのいずれかから選ばれる、請求項17に記載のヒト・スクレロスチンに対して特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメント。
Ab-10:SEQ ID NO:24の重鎖配列およびSEQ ID NO:27の軽鎖配列、
Ab-9:SEQ ID NO:25の重鎖配列およびSEQ ID NO:28の軽鎖配列、または、
Ab-5:SEQ ID NO:26の重鎖配列およびSEQ ID NO:29の軽鎖配列 - 請求項1〜18のいずれか1項に記載のヒト・スクレロスチンに対して特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするDNA分子。
- 請求項19に記載のDNA分子を含む発現ベクター。
- 宿主細胞が、好ましくは哺乳類細胞から選ばれ、より好ましくはCHO細胞である、請求項20に記載の発現ベクターにより形質転換された宿主細胞。
- 請求項1〜18のいずれか1項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント、および1種以上の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体を含む医薬組成物。
- 骨量、骨塩密度、骨塩量または骨強度の少なくとも1つを増強するための薬物の製造における、請求項1〜18のいずれか1項に記載のヒト・スクレロスチンに対して特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは請求項22に記載の医薬組成物の使用。
- 疾患または障害が、骨粗鬆症、骨減少症もしくは変形性関節症、関節リウマチ、歯周病、または多発性骨髄腫から選ばれ、好ましくは骨粗鬆症である、SOST介在性の骨疾患または骨障害を治療するための薬物の製造における、請求項1〜18のいずれか1項に記載のヒト・スクレロスチンに対して特異的に結合する抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは請求項22に記載の医薬組成物の使用。
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