CN112867785A - 通过抗体介导的特定肠道细菌的中和作用治疗免疫性疾病 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及抗体或其抗原结合片段，其中抗体或抗原结合片段与暂定种丝状段细菌的抗原结合，并且(i)抑制细菌与肠上皮细胞，优选人肠上皮细胞的黏附，和/或(ii)消耗细菌。本发明还提供了包含根据本发明的抗体或其抗原结合片段的药物、或包含由根据本发明的方法生产的抗体的药物。本发明还涉及包含根据本发明的抗体或其抗原结合片段的试剂盒，其用于减少Th17细胞增殖、减少Th17细胞分化或降低Th17细胞活性和/或抑制B细胞形成针对内源性抗原的抗体。根据本发明的试剂盒任选地包含抗生素。本发明还涉及用于生产根据本发明的抗体的方法，该方法包括以下步骤：a)用来自暂定种丝状段细菌抗原的免疫原性肽免疫鸡；和b)获得并纯化在鸡中或在所述鸡下的蛋中形成的抗体。本发明最后涉及用于生产根据本发明的药物的方法，该方法包括以下步骤：a)生产根据本发明的抗体或其抗原结合片段；和b)将抗体或其抗原结合片段制成药物。

Description

通过抗体介导的特定肠道细菌的中和作用治疗免疫性疾病
本发明涉及通过抗体介导的特定肠道细菌的中和作用治疗免疫性疾病和其他疾病。更具体地，本发明涉及抗体或其抗原结合片段，其中抗体或抗原结合片段与暂定种丝状段细菌(Candidatus Savagella)的抗原结合，并且(i)抑制细菌与肠上皮细胞，优选人肠上皮细胞的黏附，和/或(ii)消耗细菌。本发明还提供了包含根据本发明的抗体或其抗原结合片段的药物、或包含由根据本发明的方法生产的抗体的药物。本发明还涉及包含根据本发明的抗体或其抗原结合片段的试剂盒，其用于减少Th17细胞增殖、减少Th17细胞分化或降低Th17细胞活性和/或抑制B细胞形成的针对内源性抗原的抗体。根据本发明的试剂盒任选地包含抗生素。本发明还提供了用于生产根据本发明的抗体的方法，该方法包括：a)用来自暂定种丝状段细菌抗原的免疫原性肽免疫鸡；和b)回收和纯化在鸡中或在所述鸡下的蛋中形成的抗体。本发明最后涉及用于生产根据本发明药物的方法，其包括：a)生产根据本发明的抗体或其抗原结合片段；和b)将抗体或其抗原结合片段制成药物。
每个人体内都有超过100万亿个细菌，它们整体被称为微生物组。这些细菌大多寄生在在肠道中，对人类消化植物纤维、提供维生素和取代有害微生物很有用。这种共生关系代表着对人类免疫系统的日常考验：只有一层上皮细胞的单层屏障将人与人的微生物组隔开。肠壁的免疫细胞必须不断地在对有益细菌的耐受和对有害细菌的防御之间做出选择。因此，微生物组的组成对免疫系统，从而对人类健康有直接而重大的影响也就不足为奇了[1]。
在过去的几十年里，在所有工业化国家中，免疫介导的疾病都显著增加。这些疾病包括频繁诊断的溃疡性结肠炎、克罗恩病、类风湿性关节炎、1型糖尿病和多发性硬化症，但也有变应性疾病，如神经性皮炎和过敏性哮喘。这些疾病的增长速度如此之快，以至于基因变化不可能是原因。例如，1980年至1994年间，美国过敏性哮喘的发病率上升了75％，而同期发展中国家的发病率保持不变[6]。必须要问的问题是，什么样的环境影响可以解释免疫介导的疾病的快速上升。饮食习惯的改变，特别是盐、脂肪、糖、农药和抗生素污染食物摄入量的增加，以及没有免疫调节和寄生肠道蠕虫，可能会导致微生物组和免疫系统之间的动态平衡失调(生物失调)。生物失调的其他原因可能在于出生后肠道定植的改变，例如剖腹产后，以及生活环境卫生程度的提高。然而，人体微生物组对免疫反应的表现有相当大的影响[1]。某些非病理性的细菌本身仍然可以施加免疫调节或免疫刺激的影响。因此，以治疗性免疫调节为目的影响微生物组代表了选定免疫疾病的发病率[7]，这是许多社会经济相关疾病的有趣治疗方法。虽然以前的方法，例如益生菌[8]、益生元[9]和抗生素[10]疗法在某些情况下已经成功，但它们对于达到预期的免疫效果来说太不特异了。
一种名为暂定种丝状段细菌(分段丝状细菌，SFB)的丝状细菌与宿主表现出特别有趣的相互作用：在婴儿期，它大量参与免疫系统的发育和成熟；在生命的后期，它刺激获得性免疫系统的某些效应细胞，Th17细胞，而效应细胞反过来可以对抗有害的肠道细菌。然而，同样的免疫细胞也负责免疫介导性疾病的发展和进展，如自身免疫性疾病和特应性疾病。事实上，在类风湿性关节炎、多发性硬化症和过敏性哮喘的动物模型中，没有SFB定植的实验动物表现出明显较少的症状[2-4]。
暂定种丝状段细菌(SFB)在肠道黏膜中产生持续的生理性炎症反应，从而增强对病理性肠道细菌的免疫防御。这种进化上保守的概念过度(例如，在失调的情况下)可能会有害，并导致身体其他部位的免疫介导性疾病[1]。近年来，这种联系日益引起基础科学的兴趣，并成为高级出版物的主题[2；3；11-13]。
US2012/276149描述了SFB的施用，以增强对肠道感染的免疫能力。
WO2011/047153描述了对Th17免疫反应的调节，包括通过影响SFB的黏附和增殖。
然而，具体的治疗概念还没有被描述出来。
因此，本发明解决的技术问题可以被认为是提供这种治疗方法的技术问题。
该技术问题是通过权利要求中描述的和下面描述的实施方案来解决的。
因此，本发明涉及抗体或其抗原结合片段，其中抗体或抗原结合片段与暂定种丝状段细菌的抗原结合，并且(i)抑制细菌与肠上皮细胞，优选人肠上皮细胞的黏附，和/或(ii)消耗细菌。优选地，抗体或抗原结合片段与暂定种丝状段细菌的抗原结合，并且抑制细菌与肠上皮细胞，优选人肠上皮细胞的黏附，和/或消耗细菌。
根据本发明的抗体或其抗原结合片段特异性地结合到暂定种丝状段细菌(分段丝状细菌，SFB)的抗原，优选地结合到细菌壁蛋白。
在此，选择抗原，使得根据本发明的抗体或其抗原结合片段的结合抑制细菌与肠上皮细胞的黏附或消耗细菌。根据本发明的抗体或其抗原结合片段与抗原的结合也可以抑制细菌的增殖。这些机制的组合也包含在本发明的上下文中。例如，可以选择抗原，使得根据本发明的抗体与暂定种丝状段细菌的抗原结合，并抑制细菌与肠上皮细胞的黏附并消耗细菌。替代地，可以选择抗原，使得根据本发明的抗体与暂定种丝状段细菌的抗原结合，并抑制细菌与肠上皮细胞的黏附并抑制细菌的增殖。还包括所有三种机制的组合，因此抗原被定义为使得根据本发明的抗体或抗原结合片段与暂定种丝状段细菌的抗原结合，并且抑制细菌与肠上皮细胞的黏附，抑制细菌的增殖以及消耗细菌。
在Fraunhofer IZI和ITEM进行的研究中，有可能表明口服抗体治疗可以降低SFB的定植密度，这种对微生物组的特异性校正导致免疫介导疾病的免疫耐受。SFB特异性抗体是从SFB蛋白免疫的鸡的鸡蛋中回收的；这种方法可以快速、高度成本有效地产生强结合抗体，这些抗体也表现出特殊的酸稳定性，因此非常适合口服治疗[5]。
形成本发明基础的概念如图1所示：丝状暂定种丝状段细菌(分段丝状细菌，SFB)定植于肠壁，并通过树突状细胞激活Th17细胞，这有助于自身免疫和特应性。首先，鉴定、合成适合该细菌的菌壁蛋白，并将其注射到鸡体内。这些鸡形成高度特异性的中和的抗SFB抗体，这些抗体可以从鸡蛋中分离出来，并可用于口服抗体治疗。肠道中SFB微生物数量的减少会导致Th17效应细胞活性的降低，从而导致免疫耐受。
用口服施用的抗体特异性中和SFB的主要优点是，实际上不会将抗体转移到循环中，因此可以避免抗体治疗的常见不良反应，或者例如在地塞米松治疗过敏性呼吸道疾病的情况下观察到的不良反应。已经描述了口服施用抗体成功用于减少肠道病原病毒[14]、真菌[15]和细菌[16；17]的实例。然而，到目前为止，以免疫调节为目的的口服抗体疗法只针对免疫系统的直接靶点进行。其中一个成功的实例是使用针对T细胞表面蛋白CD3的抗体([18]；US 7883703B2)。
本发明的一个主要优点是使用来自经免疫的鸡的鸡蛋的治疗性IgY抗体。这种方法有很多优点：除了高成本效益的生产过程外，可以快速和大量地制备抗体。IgY比IgG更耐酸，因此特别适合口服施用。一只鸡每年可以产生高达30克的纯抗体，而且这种抗体具有很高的结合强度。最后，IgY具有不同于哺乳动物IgG的Fc区域，因此，不会因为受体补体系统的激活而产生不良影响[5]。
在一项“概念验证”实验中，已经有可能证明口服施用抗SFB IgY抗体的结果是显著减少SFB的分泌——这与肠道SFB定植有关。在过敏性呼吸道疾病的动物模型(Fraunhofer ITEM)中，最终观察到了这种微生物组变化的治疗相关性的迹象：肠道SFB定植的减少导致肺部炎症细胞浸润的减弱，程度与标准治疗剂地塞米松相当。
IgY抗体介导的对暂定种丝状段细菌(SFB)的抑制作用可以直接影响免疫介导的疾病。在这里，免疫疾病例如多发性硬化症、类风湿性关节炎和过敏性哮喘在很大程度上是由Th17免疫细胞的活性决定的。此外，由Th17活性决定的其他免疫性疾病或肿瘤性疾病也可以通过消耗SFB进行预防性或治疗性治疗。
这些IgY抗体可作为药物用于预防或治疗免疫介导的疾病，特别是Th17依赖性疾病。这里所指的是用于微生物组校正的治疗剂。它还可以用作功能性食品或营养食品，因此有可能大大简化批准程序，例如作为新型食品。
优选地，根据本发明的抗体用于人类的口服施用。
例如，Schnupf等人(Curr Opin Microbiol.2017 Feb；35：100-109.doi：10.1016/j.mib.2017.03.004.Epub 2017 Apr 25；Semin Immunol.2013 Nov 30；25(5)：342-51.doi：10.1016/i.smim.2013.09.001.Epub 2013 Oct 31)已经描述了细菌“暂定种丝状段细菌”，并且在US 2012/276149和WO 2011/047153中也对其进行了描述。
由根据本发明的抗体或抗体的抗原结合片段特异性结合的暂定种丝状段细菌的“抗原”参与细菌与肠上皮细胞的黏附，优选与人类肠上皮细胞的黏附、细菌的增殖和/或介导细菌的消耗，即杀伤细菌。从功能决定和分段丝状细菌(SFB)特异性蛋白中筛选出适合于暂定种丝状段细菌的抗原。例如，这样的蛋白质的特征在于它位于细菌壁上(细菌壁蛋白)，并且对暂定种丝状段细菌或分段丝状细菌(SFB)与肠上皮的黏附和/或生存具有重要甚至独特的作用。
来自所述细菌的合适抗原例如是下面详细描述的肌球蛋白交叉反应抗原(MCRA)蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。肌球蛋白交叉反应抗原(MCRA)蛋白的特异性表位包括例如氨基酸序列SVLDEFYWLDKKDPYSL(SEQ ID No.2)、PDFKAVRFTRRNQYESMI(SEQ IDNo.3)和QATSIKILRDGKEEEIKL(SEQ ID No.4)。
根据本发明的抗体或其片段与来自暂定种丝状段细菌的抗原的“特异性结合”描述了抗体的结合特性，例如结合亲和力、结合特异性和结合亲合力；参见例如DavidJ.King，Applications and Engineering of Monoclonal Antibodies，第240页(1998)。例如，通过表面等离子体共振(SPR)可以对抗原-抗体相互作用进行详细分析。抗体及其抗原的结合特性的动力学表征是能够评估它们在各种方法中的适用性的基本要求。除了结合强度(亲和力，Kd值)外，还测定了缔合速率常数(Kass)和解离速率常数(Kdiss)。这也使得建立复合物形成和复合物解体的速率成为可能。该信息有助于评估根据本发明的抗体在诊断应用、生物技术应用或治疗应用中的效率，并优化其应用过程。所提及的与特异性结合有关的术语和缩写以其标准含义使用。
术语“抗体”包括多克隆抗体和单克隆抗体(mAb)，其可以如下所述进行修饰。该抗体与暂定种丝状段细菌的抗原特异性结合，并且优选为中和抗体。
“中和抗体”在这里指的是通过抗体抑制暂定种丝状段细菌与肠上皮细胞(优选人肠上皮细胞)的黏附或结合，抑制所述细菌的增殖和/或消耗或杀伤所述细菌。
暂定种丝状段细菌的“中和”指的是至少50％、60％、70％或75％，优选80％或85％，特别优选90％或95％抑制所述细菌与肠上皮细胞的黏附或结合，或抑制细菌的增殖，或至少50％、60％、70％或75％，优选80％或85％，特别优选90％或95％的细菌总数或种群被消耗，如体外检测测量的。
“经修饰的抗体”是指由经修饰的免疫球蛋白编码区编码的蛋白，该蛋白可以通过在选定的宿主细胞中表达而获得。这样的经修饰的抗体包括基因工程抗体(例如嵌合抗体、重塑抗体、人源化抗体或载体化抗体)或抗体片段，其缺少免疫球蛋白的全部或部分恒定区域例如Fv、Fab或F(ab)2等。
“经修饰的免疫球蛋白编码区”是指编码经修饰的抗体的核酸序列。如果经修饰的抗体是CDR接枝抗体或人源化抗体，则将编码来自非人类免疫球蛋白例如鸡抗体的互补决定区(CDR)的序列插入到包括人类可变框架序列的第一免疫球蛋白伴体(partner)中。任选地，第一免疫球蛋白伴体可操作地连接到第二免疫球蛋白伴体，例如以制备双特异性抗体。
“第一免疫球蛋白伴体”是指编码人免疫球蛋白的人框架区域或可变区的核酸序列，其中天然的(或自然发生的)CDR编码区已被供体抗体例如鸡抗体的CDR编码区所取代。人类可变区可以是免疫球蛋白的重链、轻链(或两者)、其类似片段或功能片段。这种位于抗体(免疫球蛋白)可变区内的CDR区域可以通过本领域已知的方法来确定。例如，Kabat等人(Sequences of Proteins of Immunological Interest，4th ed.，U.S.Department ofHealth and Human Services，National Institutes of Health(1987))公开了定位CDR的规则。此外，已知用于识别CDR区域/结构的计算机程序。
“第二免疫球蛋白伴体”是指不同的核苷酸序列，其编码已经融合了第一免疫球蛋白伴体的蛋白质或肽，已经融合了第一免疫球蛋白伴体即第一免疫球蛋白伴体已在框内或通过任选的常规接头序列有效连接。优选免疫球蛋白基因。第二免疫球蛋白伴体可以包括编码相同(即，同源的——第一和第二经修饰的抗体来自同一来源)或其他的(即，异源的)目的抗体的整个恒定区的核酸序列。其可以是免疫球蛋白的重链或轻链(或作为单个多肽的一部分的两条链)。第二个免疫球蛋白伴体不限于特定的免疫球蛋白类别或同种型。此外，第二免疫球蛋白伴体可以包括免疫球蛋白恒定区的一部分，如在Fab或F(ab)2中发现的，即人类恒定区或框架区的离散部分。这种第二免疫球蛋白伴体还可以包括编码暴露在宿主细胞外表面的完整膜蛋白的序列，例如作为噬菌体展示文库的一部分，或者编码用于分析或诊断检测的蛋白质的序列，例如辣根过氧化物酶、β-半乳糖苷酶等。
术语Fv、Fc、Fd、Fab或F(ab)2以其标准含义使用(例如，参见Harlow等人，Antibodies A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory(1988))。
如这里所使用的，“基因工程抗体”描述了一类经修饰的抗体，即全长合成抗体(例如，与抗体片段相对的嵌合的抗体、未成形的抗体或人源化的抗体)，其中所选受体抗体的轻链和/或重链的可变结构域的一部分已被来自一个或多于一个供体抗体(例如，鸡抗体)的类似部分所取代，所述供体抗体对所选表位具有特异性。例如，这样的分子可以包括以人源化重链为特征的抗体，该重链与未修饰的轻链(或嵌合轻链)相关联，反之亦然。基因工程抗体的特征还可以是对编码受体抗体的轻可变结构域和/或重可变结构域的框架区域的核酸序列进行修饰，以保持供体抗体例如鸡抗体的结合特异性。所述抗体可以包括来自CDR的受体抗体的一个(例如CDR-H3)或多于一个CDR(优选所有CDR，即CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3)与这里描述的来自供体抗体即鸡抗体的CDR的交换。
“嵌合抗体”是指一类基因工程抗体，它包含自然产生的可变区(轻链和重链)，该可变区来源于供体抗体(例如鸡抗体)，并与来自受体抗体的轻链和重链的恒定区相关联。
人源化抗体是指一类基因工程抗体，其CDR来自非人类供体免疫球蛋白，例如鸡抗体，其余的免疫球蛋白来源的分子的部分来源于一个(或多于一个)人免疫球蛋白。此外，可以对框架残基进行修饰以保持结合亲和力(参见例如Queen等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，86：10029-10032(1989)，Hodgson等人，Bio/Technology，9：421(1991))。
例如，试剂可以与抗体结合，以改善进入肠道的转运。例如，结合在抗体上的试剂可以主动或被动地影响肠道中的转运蛋白。附着物可以是化学的，替代地，也可以通过基因技术将该实体结合到抗体中。
术语“供体抗体”是指一种如下抗体(单克隆或重组)，其将其可变区、CDR或其他功能片段或其类似物的核酸序列提供给第一免疫球蛋白伴体，以便提供经修饰的免疫球蛋白编码区和由此表达的具有供体抗体例如鸡抗体的抗原特异性和中和活性的经修饰的抗体。
术语“受体抗体”是指一种如下抗体(单克隆或重组)，其与供体抗体是异源的，并且为第一免疫球蛋白伴体提供编码其重链和/或轻链的框架区域和/或重链和/或轻链的恒定区的全部(或部分，但优选全部)核酸序列。优选地，受体抗体是人抗体。
CDR被定义为抗体互补决定区的氨基酸序列，即免疫球蛋白重链和轻链的高变区。例如参见Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，4th ed.，U.S.Department of Health and Human Services，National Institutes of Health(1987)。免疫球蛋白的可变区有三个重链CDR(CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3)和三个轻链CDR(CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3)(或CDR区)。这里使用的“CDR”是指所有三个重链CDR或所有三个轻链CDR(或者在适当的情况下，指所有重链CDR和所有轻链CDR)。抗体的结构和蛋白质折叠可能意味着其他残基被视为抗原结合区的一部分，本领域技术人员将以这种方式理解它们。例如，见Chothia等人，Conformations of immunoglobulin hypervariable regions；Nature 342，第877-883页。
CDR提供了抗体与抗原或表位结合的大部分接触残基。本发明中目的CDR来源于供体抗体的可变重链和轻链的序列，供体抗体例如鸡抗体，并且包括自然产生的CDR的类似物，这些类似物与从中衍生这些类似物的供体抗体共享或保持相同的抗原结合特异性和/或中和能力。
“功能片段”是重链或轻链的部分可变序列(例如，免疫球蛋白可变区的氨基或羧基末端的微小缺失)，其保留了与衍生该片段的抗体相同的抗原结合特异性和/或中和能力。
“类似物”是用至少一个氨基酸修饰的氨基酸序列，其中修饰可以是化学的或少数氨基酸的取代或重排(即，优选不超过10个、9个、8个、7个、6个、5个、4个、3个、2个或1个氨基酸残基)，氨基酸序列的修饰使其能够保持未修饰序列的生物学特性，例如抗原特异性和高亲和力。例如，当在CDR编码区内或其周围建立特定的核酸内切酶限制位点时，可以通过替换来构建(沉默的)突变。本发明考虑使用本发明的抗体的类似物。众所周知，例如，对氨基酸或核酸序列的微小修改可以产生原始蛋白质的等位基因形式，该等位基因形式保持基本相似的性质。因此，本发明的抗体的类似物包括其中重链和轻链的高变区中的CDR与上面定义的CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3具有至少80％同源性，优选至少85％同源性，至少90％同源性，尤其优选地，至少95％、96％、97％、98％或99％同源性，并保持与暂定种丝状段细菌的抗原的特异性结合和中和活性。当氨基酸序列进行最佳比对时，如果它们在相似的位置上有80％的相同氨基酸残基，那么它们至少有80％的同源性，最佳比对中空位或插入被算作不相同的残基。用于确定序列同一性的算法和用于序列比较的程序在现有技术中是公知的。
类比也可以表现为等位变异。“等位基因变异或修饰”是指核酸序列的改变。这种变异或修饰可能是由遗传密码的简并性引起的，或者可以是由有意的基因工程或重组生产的，以便提供所需的特性。所述变异和修饰可能会或可能不会导致编码氨基酸序列的改变。
术语“效应剂”是指非蛋白载体分子，其中经修饰的抗体和/或供体抗体例如鸡抗体的天然或合成轻链或重链或供体抗体的其他片段可以通过常规方式结合到所述非蛋白载体分子上。这种非蛋白载体可以包括用于诊断领域的常规载体例如聚苯乙烯或其他塑料珠子、多糖例如用于Biacore System[Pharmacia]、或在医学领域有用且对人类和动物安全的其他非蛋白物质。其他效应剂可以包括用于络合重金属原子或放射性同位素的大环。这种效应剂也可用于延长经修饰的抗体的半衰期，例如聚乙二醇(PEG)。
到目前为止，还没有在现有技术中描述针对暂定种丝状段细菌的特异性中和抗体，并且本发明首次提供了该中和抗体。
在另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含根据本发明的抗体以及药学上可接受的稀释剂或载体。
如本领域技术人员所熟悉的，可以通过免疫非人物种(例如，牛、羊、猿猴、鸡、啮齿动物(例如，小鼠、仓鼠和大鼠)等)来构建抗体、经修饰的抗体和片段，以在用来自暂定种丝状段细菌的天然或重组抗原呈递时产生期望的免疫球蛋白，所述天然或重组抗原来自可产生与来自暂定种丝状段细菌的天然或重组抗原交叉反应的抗体的任何物种，例如人或鸡。使用常规杂交瘤技术来提供一种杂交瘤细胞系，该杂交瘤细胞系分泌针对来自暂定种丝状段细菌的天然抗原的非人单克隆抗体，例如鸡抗体。然后用来自已应用于384或96孔板的暂定种丝状段细菌的天然或重组抗原筛选这种杂交瘤的结合，其中来自暂定种丝状段细菌的生物素化天然或重组抗原已结合到链霉亲和素包被的板上，或在使用来自暂定种丝状段细菌的生物素化天然或重组抗原的均质铕-APC偶联免疫测定法中。
例如，可以在诸如“异种小鼠”(Abgenix)的人类抗体小鼠中产生天然的人类抗体，其中去除了小鼠免疫球蛋白基因，并将编码人类免疫球蛋白的基因插入到小鼠染色体中。这些小鼠被正常免疫，并产生源于人类基因的抗体反应。因此，小鼠产生人抗体，同时在选择阳性杂交瘤后绕过了人源化的需要(参见L.L.Green，J.Immunol.Methods，10Dec.1999；231(1-2)：11-23)。
Fab片段包含整个轻链和重链的氨基末端部分；并且F(ab)2片段是由两个Fab片段通过二硫键结合形成的片段。Fab片段和F(ab′)2片段可通过常规方法获得，例如用合适的蛋白水解酶、木瓜蛋白酶和/或胃蛋白酶切割单克隆抗体(mAb)，或通过重组方法获得。Fab和F(ab′)2片段本身可用作治疗剂或预防剂，也可用作包含可变区的序列和CDR序列的供体，这些序列可用于形成本文所述的重组或人源化抗体。
Fab和F(ab′)2片段也可以通过组合噬菌体文库(参见例如Winter等人，Ann.Rev.Immunol.，12：433-455(1994))或通过免疫球蛋白链交换(链改组)(例如参见Marks等人，Bio Technology，10：779-783(1992))构建。
因此，利用人类抗体片段噬菌体展示文库，可以分离出对暂定种丝状段细菌天然抗原或重组抗原具有特异性的人类抗体片段(Fv、ScFv、Fab)。针对来自暂定种丝状段细菌的天然或重组抗原测试代表人类抗体片段蛋白的噬菌体颗粒文库。这些噬菌体代表的抗体片段与来自暂定种丝状段细菌的天然或重组抗原结合，这些噬菌体从文库中保留下来，并通过克隆进行扩增。然后，将人抗体基因从特定噬菌体中切割出来，并插入到包含人IgG恒定区的人IgG表达构建体中，以形成完整的人IgG分子，该完整的人IgG分子具有来自对暂定种丝状段细菌天然或重组抗原特异的经分离的噬菌体的可变区。
供体抗体可以贡献序列，例如可变重链和/或轻链的肽序列、框架序列、CDR序列、功能片段及其类似物、以及编码它们的核酸序列，所述序列在构建和获得以供体抗体例如鸡抗体的抗原结合特异性为特征的各种经修饰的抗体时是有用的。
考虑到遗传密码的简并性，可以构建编码可变重链和轻链和CDR序列的氨基酸序列以及具有供体抗体例如鸡抗体抗原特异性的功能片段及其类似物的各种编码序列。编码可变链或CDR的肽序列的经分离的核酸序列或其片段可用于产生经修饰的抗体，例如嵌合抗体或人源化抗体，或其他基因工程抗体，如果它们与第二免疫球蛋白伴体可操作地结合的话。
经修饰的免疫球蛋白分子可以编码经修饰的抗体，包括经基因修饰的抗体例如嵌合抗体和人源化抗体。所需的经修饰的免疫球蛋白编码区包含CDR编码区，其编码具有抗暂定种丝状段细菌抗原抗体，优选高亲和力抗体的抗原特异性的肽，插入到第一免疫球蛋白伴体(人框架区域或人免疫球蛋白的可变区)中。
优选地，第一免疫球蛋白伴体可操作地连接到第二免疫球蛋白伴体。第二免疫球蛋白伴体如上定义，并且可以包括编码感兴趣的第二抗体区域的序列，例如Fc区域。第二免疫球蛋白伴体还可以包括编码另一种免疫球蛋白的序列，轻链或重链的恒定区已在框架内或通过接头序列与之融合。可以构建针对来自暂定种丝状段细菌的天然或重组抗原的功能片段或类似物的基因工程抗体，以增加结合。
第二免疫球蛋白伴体还可以与如上所述的效应剂相关联，包括可以通过常规方式可操作地与第二免疫球蛋白伴体结合的非蛋白载体分子。
第二免疫球蛋白伴体例如抗体序列与效应剂之间的融合或结合可以通过任何合适的手段来实现，例如通过常规的共价或离子键、蛋白质融合或异双功能交联剂，例如碳二亚胺、戊二醛等。这种技术在本领域中是公知的，并且一般在常规化学和生物化学文本中描述。
此外，还可以将简单地在第二免疫球蛋白伴体和效应剂之间提供所需量的间隔的常规接头序列构建到经修饰的免疫球蛋白编码区中。这样的接头的结构是本领域技术人员公知的。
在又一实施方案中，抗体可以具有与之连接的附加的试剂。例如，可以使用重组DNA技术的方法来制备基因工程抗体，其中完整抗体分子的Fc片段或CH2-CH3结构域已被酶或其他可检测分子(即多肽效应物或报告分子)所取代。
第二免疫球蛋白伴体还可以可操作地连接到非免疫球蛋白肽、蛋白质或其片段，所述非免疫球蛋白肽、蛋白质或其片段相对于具有抗暂定种丝状段细菌抗原抗体的抗原特异性的含CDR序列是异源的。表达的蛋白既具有抗暂定种丝状段细菌的抗原特异性，又具有非免疫球蛋白的特性。例如，如果融合伴体本身是治疗性蛋白，则融合伴体的属性可以是诸如另一结合或受体结构域的功能性属性或治疗性属性，或者是其他的抗原属性。
本发明的另一期望蛋白可以是具有重链和轻链的完整全长抗体分子或其任何离散片段，例如Fab或F(ab)2片段，重链二聚体或其任何最小重组片段，例如Fv或单链抗体(SCA)，或与所选供体抗体例如鸡抗体具有相同特异性的任何其他分子。这样的蛋白质可以以经修饰的抗体的形式使用，也可以以其未融合的形式使用。
只要第二免疫球蛋白伴体来自与供体抗体不同的抗体，例如鸡抗体，结果就是基因工程抗体或重组生产的抗体。基因工程或重组生产的抗体可以包括来自来源例如受体抗体的免疫球蛋白(Ig)恒定区和可变框架区，以及来自供体抗体例如鸡抗体的一个或多于一个(优选全部)CDR。此外，为了保持供体抗体例如鸡抗体的抗原结合特异性，可以在核酸或氨基酸水平上对受体单克隆抗体(mAb)的轻可变区和/或重可变区的框架区域或对供体CDR区域进行修饰，例如缺失、取代或添加。
构建这种基因工程或重组生产的抗体是为了使用抗暂定种丝状段细菌抗原抗体的可变重链和/或轻链中的一个(或两个)或重链或轻链中的一个或多于一个CDR。基因工程或重组生产的抗体可以是如上定义的中和抗体。
这种基因工程或重组生产的抗体可以包括人源化抗体，该人源化抗体包含选定的人免疫球蛋白或亚型的框架区域，或者包括融合到抗暂定种丝状段细菌抗原抗体的功能片段的嵌合抗体，所述嵌合抗体包含人的重链和轻链的恒定区。通过与供体抗体例如鸡抗体的核苷酸和氨基酸序列同源性，合适的人(或其他动物)受体抗体可以是选自常规数据库，例如
Figure BPA0000302753060000121
数据库、Los Alamos数据库和Swiss Protein数据库的抗体。与供体抗体的框架区域具有同源性(以氨基酸为基础)的人抗体可以适合于提供重链恒定区和/或重链可变框架区域以用于插入供体CDR。可以以类似的方式选择能够提供轻链恒定区或可变框架区域的合适的受体抗体。应该注意的是，受体抗体的重链和轻链不必来自相同的受体抗体。
理想的是，异源框架区域和恒定区选自人免疫球蛋白类别和同种型，例如IgG(亚型1至4)、IgM、IgA和IgE。然而，受体抗体不需要只包含人免疫球蛋白序列。例如，可以构建其中编码人类免疫球蛋白链的一部分的DNA序列与编码诸如多肽效应物或报告分子的非免疫球蛋白氨基酸序列的DNA序列融合的基因。
在人源化抗体中，人类重链和轻链中的可变结构域优选通过一个或多于一个CDR交换进行基因工程。可以使用全部六个CDR或少于六个CDR的各种组合。优选地，交换所有六个CDR。CDR只能在人类重链中交换，使用的轻链是来自人类受体抗体的未经修饰的轻链。替代地，可以通过使用常规抗体数据库来选择来自另一人类抗体的相容轻链。基因工程抗体的其余部分可以来自任何合适的人类受体免疫球蛋白。
因此，基因工程或重组生产的人源化抗体具有天然人抗体或其片段的结构，并具有有效治疗用途使用所必需的特性组合。
本领域技术人员将理解，基因工程抗体可以通过改变可变区的氨基酸来进一步修饰，而不一定影响供体抗体例如鸡抗体(即类似物)的特异性和高亲和力。可以设想，重链和轻链的氨基酸可以被可变区或CDR框架中的其他氨基酸取代，或者两者兼而有之。
此外，可以对恒定区进行修饰，以增加或降低本发明分子的选择性性质，例如二聚化、与Fc受体结合或结合和激活补体的能力(例如参见Angal等人，Mol.Immunol.30：105-108(1993)，Xu等人，J.Biol.Chem.239：3469-3474(1994)，Winter等人，EP 307，434-B)。
作为嵌合抗体的经修饰的抗体与上述人源化抗体的不同之处在于提供了非人类供体抗体例如鸡抗体的重链和轻链的包括框架区域的整个可变区，其与人免疫球蛋白的两条链的恒定区相关联。
例如通过Sambrook等人(分子克隆(实验室手册)，第2版，冷泉港实验室(1989；2001))描述的技术，在现有技术中很好地描述了特异性结合于抗原的抗体的制备。下面简要介绍人源化单克隆抗体的制备方法。通过使用多核苷酸引物和逆转录酶获得至少包含CDR编码区的重和轻可变区以及受体mAb的轻可变区和/或重可变区的框架区域的那些部分，所述部分对于保持供体mAb的结合特异性是必需的，供体mAb例如鸡单克隆抗体，以及来源于人免疫球蛋白的抗体链的其余免疫球蛋白来源部分。CDR编码区是通过使用已知数据库并与其他抗体进行比较来鉴定的。
然后可以生产鸡/人嵌合抗体，并测试其结合能力。这种嵌合抗体包含非人鸡供体抗体的全部VH区和VL区，以及两条链的人Ig恒定区。
通过使用计算机数据库例如
Figure BPA0000302753060000141
可以鉴定来自人抗体的重链可变区的同源框架区域，并且将选择与鸡供体抗体同源的人抗体作为受体抗体。可以以类似的方式建立轻链的合适的可变框架区域。
人源化抗体可以来源于嵌合抗体，或者优选地通过在所选择的重链和轻链框架内以适当方式插入来自重链和轻链的鸡供体mAb的CDR编码区来合成。替代地，可以使用标准的诱变技术制备人源化抗体。因此，得到的人源化抗体包含鸡供体mAb的人框架区域和CDR编码区。随后可以操纵框架残基。人源化抗体可以在重组宿主细胞例如COS、CHO或骨髓瘤细胞中表达。
通过将抗体的这些编码序列与可控制宿主细胞中的增殖和表达和/或宿主细胞分泌的常规调控序列结合在一起，制备常规表达载体或重组质粒。调节序列包括启动子序列例如CMV启动子，以及可以来自其他已知抗体的信号序列。类似地，可以使用编码抗体的互补轻链或重链的DNA序列来制备第二表达载体。优选地，除了涉及编码序列和可选择标记之外，所述第二表达载体与第一表达载体相同，以便尽可能确保每个多肽链都得到功能性表达。替代地，经修饰的抗体的重链和轻链的编码序列可以是基于单个载体的。
通过常规技术将选定的宿主细胞与第一载体和第二载体共转染(或简单地与单个载体共转染)，以产生包含重组或合成轻链和重链的经转染的宿主细胞。然后用常规技术培养经转染的细胞，以产生本发明的基因工程抗体或重组生产的抗体。通过合适的分析，例如ELISA或RIA，从培养物中筛选包含重组重链和/或轻链结合的人源化抗体。可以使用类似的常规技术来构建其他经修饰的抗体分子。
本领域技术人员可以选择用于在本文提供的组合物的方法和构建中使用的克隆和亚克隆步骤的合适载体。例如，可以使用常规的pUC系列克隆载体。一种载体pUC 19可从Amersham(英国白金汉郡)或Pharmacia(瑞典乌普萨拉)等供应商处获得。此外，任何易于复制、具有多种克隆位点和可选择基因(例如抗生素耐药性)、易于操纵的载体都可以用于克隆。
类似地，本领域技术人员可以从任何常规载体中选择用于表达抗体的载体。这些载体还含有选定的调控序列(如CMV启动子)，以实现异源DNA序列在选定宿主细胞中的增殖和表达。所述载体包含编码抗体或经修饰的免疫球蛋白编码区的上述DNA序列。此外，载体可以接受所选择的免疫球蛋白序列，这些免疫球蛋白序列已经通过插入所需的限制位点而被修饰以便于操作。
这些表达载体还可以具有适合于扩大异源DNA序列表达的基因，例如哺乳动物二氢叶酸还原酶基因(DHFR)。其他优选载体序列包括聚A信号序列，例如来自牛生长激素(BGH)的信号序列；以及β-珠蛋白启动子序列(Betaglopro)。这里所用的表达载体可以通过本领域技术人员公知的技术来合成。
这种载体的组成部分，例如复制子、选择基因、增强子、启动子、信号序列等，可以从商业或自然来源获得，或通过已知方法获得，以用于在选定宿主中实现重组DNA产物的表达和/或分泌。也可以为此目的选择其他合适的表达载体，其中许多类型的载体在该领域中已知用于哺乳动物、细菌、昆虫、酵母和真菌的表达。
载体可用于产生已转染含有抗体或其经修饰的免疫球蛋白分子编码序列的重组质粒的细胞系。对这些克隆载体的克隆和其他操作有用的宿主细胞同样是常规的。例如，细菌细胞，例如来自不同菌株的大肠杆菌、酵母细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞的细胞，可用于克隆载体的增殖以及用于构建本发明的经修饰的抗体的其他步骤。
用于表达本发明抗体的合适宿主细胞或细胞系优选为哺乳动物细胞，例如NS0、Sp2/0、CHO、COS、成纤维细胞例如，3T3和髓样细胞，特别优选CHO或髓样细胞。可以使用人类细胞，从而使用人类糖基化模式修饰分子成为可能。替代地，也可以使用其他真核细胞系。选择合适的哺乳动物宿主细胞以及用于转化、培养、扩增、筛选、和产物生产和纯化的方法是本领域公知的；例如参见上文引用的Sambrook等人。
细菌细胞可能被证明是适合表达本发明的重组Fab的宿主细胞(例如参见A.Plückthun，Immunol.Rev.，130：151-188(1992))。然而，由于细菌细胞中表达的蛋白质倾向于以未折叠或不适当折叠的形式或以非糖基化形式表达，在细菌细胞中产生的任何重组Fab都必须进行抗原结合能力的筛选。如果细菌细胞表达的分子以适当的折叠形式产生，细菌细胞将是理想的宿主。例如，在生物技术领域，用于表达的各种大肠杆菌菌株通常被称为宿主细胞。
枯草杆菌、链霉菌、其他芽孢杆菌等的各种菌株也可用于该方法。
根据需要，本领域技术人员已知的酵母细胞菌株也可用作宿主细胞，昆虫细胞，例如果蝇和鳞翅目昆虫，以及病毒表达系统也可用。例如，参见Miller等人，GeneticEngineering，8：277-298，Plenum Press(1986)及其引用的参考文献。
构建载体的一般方法、产生宿主细胞所需的转染方法以及从这样的宿主细胞产生本发明的经修饰的抗体所需的培养方法都是常规技术。类似地，产生了本发明的抗体后，就可以根据该领域的标准方法，包括硫酸铵沉淀、亲和层析、柱层析、凝胶电泳等，从细胞培养物中纯化它们。这些技术在本领域技术人员的能力范围内。
用所需的方法表达了抗体后，就可以通过适当的测试(化验)来检测抗体的体外活性。目前，常规的ELISA检测形式被用于评估抗体与MAG的定性和定量结合。此外，在随后的人类临床研究之前，可以使用其他体外检测方法来验证与抗原的特异性结合和中和效果，这是为了评估抗体在体内的持久性，尽管通常的清除机制是这样进行的。
在优选实施方案中，抗体或抗原结合片段选自：免疫球蛋白分子、多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、CDR嫁接产生的抗体、人源化抗体、Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv、二硫键连接的Fv、scFv、单结构域抗体、双抗体、多特异性抗体、双特异性抗体和双特异抗体。
优选地，抗体是鸡免疫球蛋白分子或抗体。优选地，所述抗体是针对暂定种丝状段细菌的抗原或合适的肽而制备的，并且优选地是多克隆或单克隆鸡抗体。同时，鸡的抗体可以人源化或经修饰的，正如其他地方所定义的那样。
特别优选地，鸡免疫球蛋白分子是IgY免疫球蛋白分子或多克隆IgY抗体。
免疫球蛋白Y，简称IgY，是一类存在于鸡血清中的免疫球蛋白分子，以高浓度存在，特别是存在于鸡蛋的蛋黄中。与其他免疫球蛋白一样，IgY也是免疫系统对某些外来结构做出反应并特异性识别它们的蛋白质。
免疫球蛋白Y在功能上相当于鸡的IgG，并且与IgG一样，由两条轻链和两条重链组成。在结构上，这两类免疫球蛋白特别是在重链上不同，在IgY的情况下，重链的分子质量约为65.1千道尔顿，因此比在IgG的情况下要大。与IgG相比，IgY的轻链略小，摩尔质量约为18.7千道尔顿。因此，IgY的摩尔质量约为167千道尔顿。IgY分子的空间柔性小于IgG分子的空间柔性。
在功能上，IgY在一定程度上可与IgE和IgG相媲美。然而，与IgG相反，IgY既不与蛋白A或蛋白G结合，也不与细胞Fc受体结合。此外，IgY不激活补体系统。免疫球蛋白Y这个名字是由G.A.Leslie和L.W.Clem在1969年在他们能够显示鸡蛋中发现的免疫球蛋白和免疫球蛋白G之间的差异之后提出的。
由于抗体的特异性回收及其在生物分析中的应用，IgY比使用哺乳动物抗体有许多优点。由于抗体是从所产出的卵的蛋黄中回收的，因此需要一种非侵入性的抗体生产方法。因此，不需要从鸡身上提取血液就可以获得血清。同一只鸡的重复产卵大大增加了特定抗体的可获得量。与哺乳动物蛋白质的交叉反应也明显低于IgG。此外，鸡对特定抗原的免疫反应比兔子或其他哺乳动物更明显。由于在免疫反应过程中形成的免疫球蛋白中只有IgY存在于鸡蛋中，因此相应的制剂不含IgA或IgM污染。从一枚鸡蛋中提取的IgY产量较高，可与兔血清中的IgG相媲美。由于IgY不与蛋白A/G结合，不激活补体因子，也不与抗体的Fc部分结合，其结果是在许多应用中减少了背景。
此外，IgY还被用作食品成分，特别是在日本等亚洲国家。例如，含有特定IgY的酸奶产品在那里销售。它可以防止幽门螺杆菌细菌在胃里的黏附。用于此目的的IgY是从经免疫的鸡的蛋中回收的。因此，还可以产生针对沙门氏菌和其他细菌的抗体，也可以针对病毒产生抗体，并将其用作食物成分，以保护其免受这些病原体的侵袭。因此，根据本发明的IgY可以例如以新型食品或营养食品的形式使用。
目前有许多商业供应商用于从蛋黄中生产多克隆抗体或从鸡中生产单克隆抗体(例如，基因圈生物技术公司、大卫生物技术公司)。
在另一优选实施方案中，抗体或抗原结合片段(间接)导致Th17细胞增殖减少、Th17细胞分化减少或Th17细胞活性降低。替代地或另外地，抗体或抗原结合片段抑制B细胞形成的针对内源性抗原的抗体。
Th17细胞由所谓的原始辅助性T细胞在抗原接触激活后发育而来，原始辅助性T细胞即尚未与其特异性抗原接触的辅助性T细胞。Th17细胞的分化需要IL-6和TGF-β。Th17细胞是以它们产生的白细胞介素IL-17命名的，在中性粒细胞的激活中起着重要作用，但也与慢性炎症和自身免疫性疾病的发展有关。Th17细胞的其他分泌产物是TNF-α和IL-6。IL-17受体位于免疫系统的各种细胞类型上，例如髓系细胞，包括中性粒细胞，和淋巴细胞。Th17细胞释放的信使物质引起炎症过程，中性粒细胞在其中起主导作用。在上述靶细胞中，IL-17导致G-CSF、IL-6和IL-8等物质的释放，从而引起中性粒细胞的迁移和激活。此外，IL-1、IL-6、PGE-2、环氧合酶2和基质金属蛋白酶等促炎蛋白表达增强。
由于上述机制，即减少Th17细胞增殖、减少Th17细胞分化或降低Th17细胞活性和/或抑制B细胞形成针对内源性抗原的抗体，本发明的抗体有助于提高免疫耐受性。免疫疾病例如多发性硬化症、类风湿性关节炎和过敏性哮喘在很大程度上是由Th17免疫细胞的活性决定的。肠道细菌暂定种丝状段细菌(分段丝状细菌)精确地诱导这些Th17型免疫细胞(例如，见US2012/276149；WO2011/047153)。本发明包括用口服鸡蛋白抗体中和所述细菌，以治疗Th17免疫细胞介导的疾病。减少Th17细胞增殖、减少Th17细胞分化、降低Th17细胞活性或抑制B细胞形成的针对内源性抗原的抗体的测试是本领域技术人员公知的，并且在现有技术中进行了描述；例如参见US2012/276149或WO2011/047153。
在优选的实施方案中，暂定种丝状段细菌的抗原是菌壁蛋白，特别优选肌球蛋白交叉反应抗原(SEQ ID No.1)。
本发明上下文中的抗原的一个实例是暂定种丝状段细菌的细胞壁蛋白，例如肌球蛋白交叉反应抗原，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
在优选的实施方案中，抗体或抗原结合片段与肌球蛋白交叉反应抗原的表位结合，包括或组成为氨基酸序列SVLDEFYWLDKKDPYSL(SEQ ID No.2)、PDFKAVRFTRRNQYESMI(SEQ ID No.3)或QATSIKILRDGKEEEIKL(SEQ ID No.4)。
本发明还涉及用于制备根据本发明的抗体的方法，包括：
a)用暂定种丝状段细菌的抗原的免疫原性肽免疫鸡；和
b)回收和提纯在鸡体内或由所述鸡下的蛋中形成的抗体。
本发明的中和抗体是通过从功能决定的和对分段丝状细菌(SFB)具有特异性的蛋白质中选择合适的蛋白质来产生的，所述合适的蛋白质的特征在于它是细菌壁蛋白，并且在黏附肠上皮和/或暂定种丝状段细菌或分段丝状细菌(SFB)例如肌球蛋白交叉反应抗原(MCRA)蛋白的生存方面发挥非多余的作用。然后，例如通过表位预测程序和/或借助数据库，在所选靶抗原的蛋白质序列内确定合适的表位。然后选择在数学上具有最佳抗原性/免疫原性的靶序列以用于抗体制备。利用该氨基酸序列，在下一步中合成足够量的相应肽。为了能够作为抗原，低分子量分子例如肽必须与载体蛋白(载体)偶联。除了卵清蛋白(鸡卵清蛋白)和牛或人血清白蛋白外，蜗牛蛋白KLH是一种广泛存在于动物免疫生物技术中的载体蛋白。因此，例如，肽于是可以偶联到蛋白质钥孔戚血蓝蛋白(KLH)上。鸡在60天内用肽-KLH复合物免疫4次，在第一次免疫期间，动物接受两倍的量。在这一免疫阶段之后，一只鸡每月将产生多达3克的IgY。然后从蛋黄中分离抗体，并测试抗体的中和效果，即抗体是否能够抑制暂定种丝状段细菌与肠上皮细胞的黏附或结合，是否能够抑制所述细菌的增殖和/或消耗或杀伤细菌。
优选地，通过上述方法生产根据本发明的抗体的是肌球蛋白交叉反应抗原，作为暂定种丝状段细菌的抗原。特别优先考虑来自具有氨基酸序列SEQ ID No.1的肌球蛋白交叉反应抗原的表位序列，即具有氨基酸序列SVLDEFYWLDKKDPYSL(SEQ ID No.2)、PDFKAVRFTRRNQYESMI(SEQ ID No.3)或QATSIKILRDGKEEEIKL(SEQ ID No.4)的肽。
以上给出的术语的定义和解释在必要时适用于下面描述的实施方案。
本发明还涉及包含本发明的抗体或抗原结合片段或由根据本发明的方法制备的抗体的药物。优选地，本发明的抗体或抗原结合片段悬浮于药学上可接受的载体中。优选地，接受治疗的患者是人类。
本发明的另一主题是一种药物，其包含本发明的抗体或抗原结合片段或由根据本发明的方法制备的抗体，并且优选还包括合适的添加剂和/或赋形剂。合适的添加剂和/或赋形剂例如是生理盐水溶液、合适的稳定剂、蛋白酶抑制剂等。合适的稳定剂是例如吐温80(0.02％)、糖溶液，例如蔗糖溶液(20％至30％或氨基酸溶液，例如甘氨酸或半胱氨酸溶液。根据本发明的药物通常通过将本发明的抗体或抗原结合片段与适当的添加剂和/或赋形剂混合而制备。
本发明的治疗剂可根据需要作为预防剂或以其他方式施用。治疗剂量和持续时间与本发明的分子在人体循环中的相对持续时间有关，并且可以由本领域技术人员根据治疗情况和患者的一般健康状况进行调整。
本发明的治疗药剂的施用模式可以是将药剂输送到宿主的任何合适途径。本发明的抗体和药物组合物/药物特别适用于口服施用。
在优选的实施方案中，根据本发明的药物用于预防或治疗肿瘤学疾病、过敏性疾病或免疫性疾病，优选为自身免疫性疾病，所述疾病由Th17细胞的活性介导。
例如，过敏症患者或患有自身免疫性疾病的患者在规定的治疗方案中，在规定的时间段内口服本发明的特定SFB抗体。然后，例如通过点刺试验来确定过敏反应的减少程度。例如，特定的SFB抗体对患有自身免疫性疾病的患者的影响可以通过减少自身抗体的形成来检测。参考值对应于在没有SFB抗体治疗的情况下反应的强度。
优选地，过敏性疾病、免疫性疾病或自身免疫性疾病选自：多发性硬化症、1型糖尿病、类风湿性关节炎、过敏性呼吸道疾病和过敏性哮喘。
在另一个优选的实施方案中，口服施用抗体或其抗原结合片段。鸡抗体(IgY)特别耐酸，因此特别适合患者口服。然而，所有以前用于免疫球蛋白转移的途径也包括在内，例如肌肉注射、静脉注射、腹腔注射或鞘内注射。
在另一个优选实施方案中，抗体或其抗原结合片段与抗生素，优选β-内酰胺和/或糖肽抗生素结合使用。
本发明还涉及一种用于生产根据本发明的药物的方法，包括：
a)生产根据本发明的抗体或其抗原结合片段；和
b)将所述抗体或其抗原结合片段制成药物。
本发明最后涉及包含根据本发明的抗体或其抗原结合片段的试剂盒，其用于减少Th17细胞增殖、减少Th17细胞分化或降低Th17细胞活性和/或抑制B细胞形成的针对内源性抗原的抗体。
除了根据本发明的抗体或其抗原结合片段之外，试剂盒还可以包括抗生素，例如β-内酰胺和/或糖肽抗生素，还可以包括使用试剂盒组件的说明书。
这里使用的术语“约”指的是本说明书中涉及的特定值，包括在其+/-20％、+/-10％、+/-5％、+/-4％、+/-3％、+/-2％或+/-1％范围内的变体。
这里使用的术语“测定”、“确定”或“检测”包括定性、半定量和/或定量测定，例如定量测定为治疗目的而施用本发明抗体的患者的血清或血浆中的所述抗体。
在此引用的所有参考文献的内容通过引用相应的具体公开内容并整体结合于此。
此外，本发明的特别优选实施方案在以下实施例中示出。
附图：
图1：形成本发明基础的概念的图形概要：特定的暂定种丝状段细菌(分段丝状细菌，SFB)定植于肠壁，通过树突状细胞(DC)激活Th17细胞，从而促进自身免疫和特应性。首先，鉴定所述细菌的合适的菌壁蛋白(1)，合成并注射到鸡中(2)。这些鸡形成高度特异的抗SFB抗体，可以从鸡蛋中分离出来(3)，并可用于人类的口服抗体治疗(4)。肠道中SFB微生物数量的减少会导致Th17效应细胞活性的降低，从而导致免疫耐受。
实施例：
以下实施例用于说明本发明。关于所保护的范围，不能用限制性的方式来解释。
实施例1：抗肌球蛋白交叉反应抗原(MCRA)蛋白中和抗体的制备和回收
从功能决定和分段丝状细菌(SFB)特异性蛋白中筛选出肌球蛋白交叉反应抗原(MCRA)蛋白，由于MCRA蛋白的菌壁位置和与人肠上皮黏附的非多余作用，以及暂定种丝状段细菌或SFB分段丝状细菌(SFB)的存活，使之成为中和抗体的合适靶点。然后在MCRA蛋白(SEQ ID No.1)的已知蛋白序列内确定合适的表位。选择具有计算上最好抗原性的靶序列用于抗体生产。在下一步中，利用已知的氨基酸序列，足量合成具有SEQ ID No.2、SEQ IDNo.3和SEQ ID No.4的相应肽，然后将其偶联到蛋白质钥孔戚血蓝蛋白(KLH)上。鸡在60天内用肽-KLH复合物免疫四次，在第一次免疫期间，动物接受两倍的量。在这一免疫阶段之后，一只鸡每月产生多达3克的IgY。然后从蛋黄中分离抗体(Hassl等人，1987 http：//www.unet.univie.ac.at/～a7505973/texte/JiM1.pdf).
实施例2：抗肌球蛋白交叉反应抗原(MCRA)蛋白中和抗体在治疗中的应用
根据发明人的基本工作假设，SFB在患者肠道中的定植密度降低会导致TH17反应降低。这通常对TH17介导的炎症性疾病具有巨大的治疗意义。
发明人认为，SFB也存在于人类患者的肠道中，口服中和抗体可能适用于治疗各种过敏性疾病、免疫性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤性疾病。
选择的治疗方法特别有吸引力，因为几乎没有预期的任何副作用——与大多数已有的治疗方法形成对比，例如治疗过敏性呼吸道疾病的地塞米松——而且有可能大大简化授权程序，例如作为新的食品。
在这一点上，使用鸡抗体(IgY)是本发明的基本概念。鸡抗体(IgY)的使用相比于常规方法有许多优点：例如，IgY不与人体补体系统反应，具有特别高的酸稳定性，这使得它们对于口服治疗的开发很有吸引力。
在这种情况下，口服施用可以如下所示：
过敏症患者在规定的治疗方案中，在规定的时间内口服特定的SFB抗体。然后，例如通过点刺试验来确定过敏反应的减少程度。参考值对应于在没有SFB抗体治疗的情况下反应的强度。
综上所述，本项目筛选、合成了合适的SFB菌壁蛋白，并将其注射到鸡体内。这些鸡产生了从鸡蛋中分离出来的高度特异的中和抗SFB抗体。这种从鸡蛋中分离出来的具有药物潜力的产品可以用于患者的口服抗体治疗，以治疗各种过敏性疾病、免疫性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤性疾病。
引用文献
[1]Cerf-Bensussan N，Gaboriau-Routhiau V：The immune system and the gutmicrobiota：friends or foes？Nat Rev lmmunol 2010；10：735-744.
[2]Lee YK，Menezes JS，Umesaki Y，Mazmanian SK：Proinflammatory T-cellresponses to gut microbiota promote experimental autoimmuneencephalomyelitis.Proc.Natl Acad Sci-U-S-A 15-3-2011；108 Suppl 1：4615-4622.
[3]Wu HJ，lvanov II，Darce J，Hattori K，Shima T，Umesaki Y，Littman DR，Benoist C，Mathis D：Gut-residing segmented filamentous bacteria driveautoimmune arthritis via T helper 17 cells.lmmunity 25-6-2010；32：815-827.
[4]http：//www.atsjournals.org/doi/abs/10.1164/ajrccm-conference.2012.185.1_MeetingAbstracts.A 1444
[5]Spillner E，Braren 1，Greunke K，Seismann H，Blank S，du PD：Avian lgYantibodies and their recombinant equivalents in research，diagnostics andtherapy.Biologicals 2012；40：313-322.
[6]Wills-Karp M，Santeliz J，Karp CL：The germless theory of allergicdisease：revisiting the hygiene hypothesis.Nat Rev lmmunol 2001；1：69-75.
[7]Bach JF：The effect of infections on susceptibility to autoimmuneand allergic diseases.N Engl J Med 19-9-2002；347：911-920.
[8]Atarashi K，Tanoue T，Oshima K，Suda W，Nagano Y，Nishikawa H，Fukuda S，Saito T，Narushima S，Hase K，Kirn S，Fritz JV，Wilmes P，Ueha S，Matsushima K，OhnoH，Olle B，Sakaguchi S，Taniguchi T，Morita H，Hattori M，Honda K：Treg induction bya rationally selected mixture of Clostridia strains from the humanmicrobiota.Nature 8-8-2013；500：232-236.
[9]Wang H，Geier MS，Howarth GS：Prebiotics：a potential treatmentstrategy for the chemotherapy-damaged gut？Crit Rev Food Sei Nutr 27-8-2014.
[10]Zeissig S，Blumberg RS：Life at the beginning：perturbation of themicrobiota by antibiotics in early life and its role in health anddisease.Nat lmmunol 2014；15：307-310.
[11]Lecuyer E，Rakotobe S，Lengline-Garnier H，Lebreton C，Picard M，JusteC，Fritzen R，Eberl G，McCoy KD，Macpherson AJ，Reynaud CA，Cerf-Bensussan N，Gaboriau-Routhiau V：Segmented filamentous bacterium uses secondary andtertiary lymphoid tissues to induce gut lgA and specific T helper 17cellresponses.lmmunity 17-4-2014；40：608-620.
[12]Goto Y，Panea C，Nakato G，Cebula A，Lee C，Diez MG，Laufer TM，lgnatowicz L，lvanov II：Segmented filamentous bacteria antigens presented byintestinal dendritic cells drive mucosal Th17 cell differentiation.lmmunity17-4-2014；40：594-607.
[13]lvanov II，Atarashi K，Manel N，Brodie EL，Shima T，Karaoz U，Wei D，Goldfarb KC，Santee CA，Lynch SV，Tanoue T，lmaoka A，ltoh K，Takeda K，Umesaki Y，Honda K，Littman DR：lnduction of intestinal Th17 cells by segmentedfilamentous bacteria.Cell 30-10-2009；139：485-498.
[14]Davidson GP，Whyte PB，Daniels E，Franklin K，Nunan H，McCloud PI，Moore AG，Moore DJ：Passive immunisation of children with bovine colostrumcontaining antibodies to human rotavirus.Lancet 23-9-1989；2：709-712.
[15]Tollemar J，Gross N，Dolgiras N，Jarstrand C，Ringden 0，HammarstromL：Fungal prophylaxis by reduction of fungal colonization by oraladministration of bovine anti-Candida antibodies in bone marrow transplantrecipients.Bone Marrow Transplant 1999；23：283-290.
[16]Shimamoto C，Tokioka S，Hirata 1，Tani H，Ohishi H，Katsu K：Inhibitionof Helicobacter pylori infection by orally administered yolk-derived anti-Helicobacter pylori antibody.Hepatogastroenterology 2002；49：709-714.
[17]Torres 0，Cruz JR：Protection against Campylobacter diarrhea：roleof milk lgA antibodies against bacterial surface antigens.Acta Paediatr 1993；82：835-838.
[18]Ochi H，Abraham M，lshikawa H，Frenkel D，Yang K，Basso AS，Wu H，ChenML，Gandhi R，Miller A，Maron R，Weiner HL：Oral CD3-specific antibody suppressesautoimmune encephalomyelitis by inducing CD4+.Nat Med 2006；12：627-635.
Figure IPA0000302753000000011
Figure IPA0000302753000000021
Figure IPA0000302753000000031

Claims (15)

1.一种抗体或其抗原结合片段，其中抗体或抗原结合片段与暂定种丝状段细菌的抗原结合，并且(i)抑制细菌与肠上皮细胞，优选人肠上皮细胞的黏附，和/或(ii)消耗细菌。
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中抗体或抗原结合片段选自：免疫球蛋白分子、多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、CDR嫁接产生的抗体、人源化抗体、Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv、二硫键连接的Fv、ScFv、单结构域抗体、双抗体、多特异性抗体、双特异性抗体和双特异抗体。
3.根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其中抗体是鸡免疫球蛋白分子或抗体。
4.根据权利要求3所述的抗体或其抗原结合片段，其中鸡免疫球蛋白分子为IgY。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中抗体或抗原结合片段导致Th17细胞增殖减少、Th17细胞分化减少或Th17细胞活性降低和/或抑制B细胞形成的针对内源性抗原的抗体。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中暂定种丝状段细菌的抗原是细菌壁蛋白，优选包含SEQ ID No.1所示的氨基酸序列的肌球蛋白交叉反应抗原。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中抗体或抗原结合片段与肌球蛋白交叉反应抗原的表位结合，所述表位组成为或包含氨基酸序列SVLDEFYWLDKKDPYSL(SEQ ID No.2)、PDFKAVRFTRRNQYESMI(SEQ ID No.3)或QATSIKILRDGKEEEIKL(SEQ ID No.4)。
8.一种用于生产根据权利要求1至7中任一项所述的抗体的方法，其包括：
a)用暂定种丝状段细菌的抗原的免疫原性肽，优选细菌壁蛋白的免疫原性肽免疫鸡；和
b)回收和纯化在鸡体内或由所述鸡下的蛋中形成的抗体。
9.一种药物，其包含根据权利要求1至7中的任一项所述的抗体或其抗原结合片段，或由根据权利要求8所述的方法生产的抗体。
10.根据权利要求9所述的药物，其用于预防或治疗肿瘤性疾病、过敏性疾病、免疫性疾病或自身免疫性疾病，所述疾病由Th17细胞的活性介导。
11.根据权利要求10所述的药物，其中过敏性疾病、免疫性疾病或自身免疫性疾病选自：多发性硬化症、1型糖尿病、类风湿性关节炎和过敏性哮喘。
12.根据权利要求9至11中任一项所述的药物，其中抗体或其抗原结合片段是口服施用的。
13.根据权利要求9至12中任一项所述的药物，其中抗体或其抗原结合片段与抗生素，优选β-内酰胺和/或糖肽抗生素结合使用。
14.一种用于生产根据权利要求9至13中任一项所述的药物的方法，其包括：
a)生产根据权利要求1至7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段；和
b)将所述抗体或其抗原结合片段制成药物。
15.一种试剂盒，其包含根据权利要求1至7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段和任选的抗生素，所述的抗体或其抗原结合片段用于减少Th17细胞增殖、减少Th17细胞分化或降低Th17细胞活性和/或抑制B细胞形成的针对内源性抗原的抗体。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104160014A (zh) * 2011-12-01 2014-11-19 国立大学法人东京大学 诱导调节性t细胞的增殖或积累的人源细菌
CN106011281A (zh) * 2016-07-19 2016-10-12 浙江大学 肠道分节丝状菌鞭毛蛋白的检测方法
CN107429222A (zh) * 2014-12-23 2017-12-01 巴斯德研究所 在体外培养分节丝状菌的方法

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
JPH08214900A (ja) * 1995-02-17 1996-08-27 Yakult Honsha Co Ltd Ｒｎａ配列、新規セグメント細菌、検出方法、およびその用途
JPH08214873A (ja) * 1995-02-17 1996-08-27 Yakult Honsha Co Ltd 新規セグメント細菌の培養方法、継代方法
ES2393674T3 (es) 2003-11-14 2012-12-27 Brigham And Women's Hospital, Inc. Métodos para modular la inmunidad
WO2011047153A1 (en) 2009-10-15 2011-04-21 President And Fellows Of Harvard College Methods for modulating autoimmunity
WO2011046616A2 (en) 2009-10-15 2011-04-21 New York University Methods for modulating bacterial infection

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104160014A (zh) * 2011-12-01 2014-11-19 国立大学法人东京大学 诱导调节性t细胞的增殖或积累的人源细菌
CN107429222A (zh) * 2014-12-23 2017-12-01 巴斯德研究所 在体外培养分节丝状菌的方法
CN106011281A (zh) * 2016-07-19 2016-10-12 浙江大学 肠道分节丝状菌鞭毛蛋白的检测方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
G L TALHAM等: "Segmented filamentous bacteria are potent stimuli of a physiologically normal state of the murine gut mucosal immune system", 《INFECT IMMUN》, vol. 67, no. 4, pages 1992 - 2000, XP055624661, DOI: 10.1128/IAI.67.4.1992-2000.1999 *
SÜNJE J PAMP等: "Single-cell sequencing provides clues about the host interactions of segmented filamentous bacteria (SFB)", GENOME RES, vol. 22, no. 6, pages 1107 - 1119, XP055198149, DOI: 10.1101/gr.131482.111 *
王宇;尹业师;王欣;: "肠道分节丝状菌(SFB)与宿主间相互作用关系研究进展", 微生物学免疫学进展, no. 03, pages 78 - 81 *
袁建云;周燕红;: "肠道菌群调控肠黏膜免疫及抗感染功能的研究进展", 世界华人消化杂志, no. 30, pages 4852 - 4858 *

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