JP6660301B2

JP6660301B2 - 新規化合物、その製造方法、及びその用途

Info

Publication number: JP6660301B2
Application number: JP2016552140A
Authority: JP
Inventors: 和田　俊一; 俊一和田; 雅之五十嵐; 由美子久保田; 竜一澤; 俊一大庭; 和樹波多野; まや梅北; 千草林
Original assignee: Microbial Chemistry Research Foundation
Current assignee: Microbial Chemistry Research Foundation
Priority date: 2014-09-30
Filing date: 2015-09-30
Publication date: 2020-03-11
Anticipated expiration: 2035-09-30
Also published as: WO2016052656A1; JPWO2016052656A1

Description

本発明は、新規化合物、前記新規化合物の製造方法、前記新規化合物を含有する化合物含有組成物及び甘味料、前記新規化合物及びその類縁体を含有するオートファジー誘導剤、及び前記新規化合物を含有する抗酸化剤に関する。

トレハロース（Ｔｒｅｈａｌｏｓｅ）は、多くの動植物や、微生物に見られる化合物である。前記トレハロースは、生物種によって、栄養源として、保湿剤として、或いは細胞壁成分などとして働いている。例えば、昆虫では血糖の主成分であり、キノコ類では、乾燥重量の１％〜１７％を占めていることが知られている。
前記トレハロースは、トレハレース（Ｔｒｅｈａｌａｓｅ）により分解され、グルコースとなる。なお、哺乳類自身は、前記トレハロースを持たないものの、前記トレハレースは持っている。
現在、前記トレハロースは、多くの食品に添加されているほか、化粧品、臓器移植時の保護液などにも利用されている。

また、前記トレハロースは、マウスアルツハイマー病モデルやマウス筋萎縮性側索硬化症モデルを用いた実験において、オートファジーの誘導活性を有することが報告されている（例えば、非特許文献１〜２参照）。
しかしながら、前記報告で投与されているトレハロースの量は大量であり、肥満や糖尿病につながることが懸念されるという問題がある。

したがって、より優れたオートファジーの誘導活性を有する化合物の速やかな開発が強く望まれているのが現状である。

また、甘味料や抗酸化剤として用いることができる新規化合物の開発も強く望まれている。

ＳｃｈａｅｆｆｅｒＶ，ＬａｖｅｎｉｒＩ，ＯｚｃｅｌｉｋＳ，ＴｏｌｎａｙＭ，ＷｉｎｋｌｅｒＤＴ，ＧｏｅｄｅｒｔＭ、Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｏｆａｕｔｏｐｈａｇｙｒｅｄｕｃｅｓｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｉｎａｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌｏｆｈｕｍａｎｔａｕｏｐａｔｈｙ、Ｂｒａｉｎ、１３５（Ｐｔ７）、２１６９−７７（２０１２Ｊｕｌ．）ＣａｓｔｉｌｌｏＫ，ＮａｓｓｉｆＭ，ＶａｌｅｎｚｕｅｌａＶ，ＲｏｊａｓＦ，ＭａｔｕｓＳ，ＭｅｒｃａｄｏＧ，ＣｏｕｒｔＦＡ，ｖａｎＺｕｎｄｅｒｔＢ，ＨｅｔｚＣ、Ｔｒｅｈａｌｏｓｅｄｅｌａｙｓｔｈｅｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃｌａｔｅｒａｌｓｃｌｅｒｏｓｉｓｂｙｅｎｈａｎｃｉｎｇａｕｔｏｐｈａｇｙｉｎｍｏｔｏｎｅｕｒｏｎｓ、Ａｕｔｏｐｈａｇｙ、９（９）、１３０８−２０（２０１３Ｓｅｐ．）

本発明は、上記従来技術に鑑みて行われたものであり、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、優れたオートファジー誘導活性を有し、安全性にも優れるオートファジー誘導剤、前記オートファジー誘導剤、甘味料、及び抗酸化剤の少なくともいずれかとして利用可能な新規化合物、前記新規化合物の製造方法、並びに前記新規化合物を利用した、化合物含有組成物、甘味料、及び抗酸化剤を提供することを目的とする。

前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞下記構造式（Ａ）で表される化合物（以下、「レンツトレハロースＡ」と称することがある）、下記構造式（Ｂ）で表される化合物（以下、「レンツトレハロースＢ」と称することがある）、及び下記構造式（Ｃ）で表される化合物（以下、「レンツトレハロースＣ」と称することがある）の少なくともいずれかを含むことを特徴とするオートファジー誘導剤である。
＜２＞下記構造式（Ｂ）で表されることを特徴とする化合物である。
＜３＞下記構造式（Ｃ）で表されることを特徴とする化合物である。
＜４＞下記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び下記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかの製造方法であって、
レンツィア（Ｌｅｎｔｚｅａ）属に属し、下記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び下記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを生産する能力を有する微生物を培養する培養工程と、
前記培養工程で得られた培養物から下記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び下記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを採取する採取工程とを含むことを特徴とする化合物の製造方法である。
＜５＞下記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び下記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを含むことを特徴とする化合物含有組成物である。
＜６＞下記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び下記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを含むことを特徴とする甘味料である。
＜７＞下記構造式（Ｂ）で表される化合物を含むことを特徴とする抗酸化剤である。

本発明によれば、前記目的を達成することができ、優れたオートファジー誘導活性を有し、安全性にも優れるオートファジー誘導剤、前記オートファジー誘導剤、甘味料、及び抗酸化剤の少なくともいずれかとして利用可能な新規化合物、前記新規化合物の製造方法、並びに前記新規化合物を利用した、化合物含有組成物、甘味料、及び抗酸化剤を提供することができる。

図１Ａは、前記構造式（Ａ）で表される化合物のＫＢｒ錠剤法で測定した、赤外線スペクトルのチャートである。縦軸：透過率（％）、横軸：波数（ｃｍ^−１）。図１Ｂは、前記構造式（Ａ）で表される化合物の紫外線吸収スペクトルのチャートである。縦軸：吸光度（Ａｂｓ）、横軸：波長（ｎｍ）。図１Ｃは、前記構造式（Ａ）で表される化合物の重メタノール中で２５℃にて測定した、６００ＭＨｚにおけるプロトン核磁気共鳴スペクトルのチャートである。横軸：ｐｐｍ単位。図１Ｄは、前記構造式（Ａ）で表される化合物の重メタノール中で２５℃にて測定した、１５０ＭＨｚにおける炭素１３核磁気共鳴スペクトルのチャートである。横軸：ｐｐｍ単位。図２Ａは、前記構造式（Ｂ）で表される化合物のＫＢｒ錠剤法で測定した、赤外線スペクトルのチャートである。縦軸：透過率（％）、横軸：波数（ｃｍ^−１）。図２Ｂは、前記構造式（Ｂ）で表される化合物の紫外線吸収スペクトルのチャートである。縦軸：吸光度（Ａｂｓ）、横軸：波長（ｎｍ）。図２Ｃは、前記構造式（Ｂ）で表される化合物の重メタノール中で２５℃にて測定した、６００ＭＨｚにおけるプロトン核磁気共鳴スペクトルのチャートである。横軸：ｐｐｍ単位。図２Ｄは、前記構造式（Ｂ）で表される化合物の重メタノール中で２５℃にて測定した、１５０ＭＨｚにおける炭素１３核磁気共鳴スペクトルのチャートである。横軸：ｐｐｍ単位。図３Ａは、前記構造式（Ｃ）で表される化合物のＫＢｒ錠剤法で測定した、赤外線スペクトルのチャートである。縦軸：透過率（％）、横軸：波数（ｃｍ^−１）。図３Ｂは、前記構造式（Ｃ）で表される化合物の紫外線吸収スペクトルのチャートである。縦軸：吸光度（Ａｂｓ）、横軸：波長（ｎｍ）。図３Ｃは、前記構造式（Ｃ）で表される化合物の重メタノール中で２５℃にて測定した、６００ＭＨｚにおけるプロトン核磁気共鳴スペクトルのチャートである。横軸：ｐｐｍ単位。図３Ｄは、前記構造式（Ｃ）で表される化合物の重メタノール中で２５℃にて測定した、１５０ＭＨｚにおける炭素１３核磁気共鳴スペクトルのチャートである。横軸：ｐｐｍ単位。図４Ａは、試験例１のトレハロース、レンツトレハロースＡ、レンツトレハロースＢ、及びレンツトレハロースＣの結果をまとめて示した図である。図４Ｂは、試験例１のレンツトレハロースＡの結果を示した図である。図４Ｃは、試験例１のレンツトレハロースＢの結果を示した図である。図４Ｄは、試験例１のレンツトレハロースＣの結果を示した図である。図５Ａは、試験例２−１の結果を示した図である。図５Ｂは、試験例２−２の結果を示した図である。図５Ｃは、試験例２−３の結果を示した図である。図５Ｄは、試験例２−４の結果を示した図である。図５Ｅは、試験例２−５の結果を示した図である。図５Ｆは、試験例２−６の結果を示した図である。図６Ａは、試験例３−１のヒト培養メラノーマ株Ｍｅｗｏを、トレハロース、又はレンツトレハロースＡで処理した結果を示した図である。図６Ｂは、試験例３−１のヒト培養メラノーマ株Ｍｅｗｏを、レンツトレハロースＢ、又はレンツトレハロースＣで処理した結果を示した図である。図６Ｃは、試験例３−１のヒト培養卵巣がん細胞株ＯＶＫ１８を、トレハロース、又はレンツトレハロースＡで処理した結果を示した図である。図６Ｄは、試験例３−１のヒト培養卵巣がん細胞株ＯＶＫ１８を、レンツトレハロースＢ、又はレンツトレハロースＣで処理した結果を示した図である。図６Ｅは、試験例３−２の結果を示した図である。図７Ａは、試験例４−１のトレハロースの結果を示した図である。図７Ｂは、試験例４−１のレンツトレハロースＢの結果を示した図である。図７Ｃは、試験例４−１のトロロックスの結果を示した図である。図７Ｄは、試験例４−２のレンツトレハロースＢを水に溶解させた場合の結果を示した図である。図７Ｅは、試験例４−２のレンツトレハロースＢをＨ_２Ｏ_２水に溶解させた場合の結果を示した図である。

（新規化合物）
＜構造式（Ｂ）で表される化合物＞
本発明の化合物の１つである、下記構造式（Ｂ）で表される化合物は、本発明者らが分離した新規化合物である。

−構造式（Ｂ）で表される化合物の物理化学的性質−
前記構造式（Ｂ）で表される化合物の物理化学的性質としては、次の通りである。
（１）外観：白色固体
（２）分子式：Ｃ_１７Ｈ_３０Ｏ_１１
なお、通常の状態では一水和物となり、元素分析ではＣ_１７Ｈ_３０Ｏ_１１・Ｈ_２Ｏとして表される。
（３）高分解能質量分析（ＨＲＥＳＩＭＳ：正イオンモード）：
実験値ｍ／ｚ４３３．１６８３（Ｍ＋Ｎａ）^＋
計算値ｍ／ｚ４３３．１６８０（Ｍ＋Ｎａ）^＋
（４）元素分析：
実験値Ｃ４７．７％、Ｈ７．８％
計算値（Ｃ_１７Ｈ_３０Ｏ_１１・Ｈ_２Ｏ）Ｃ４７．７％、Ｈ７．５％
（５）比旋光度：［α］Ｄ^２５＝＋１７７°（ｃ１．０６，メタノール）
（６）赤外線吸収スペクトル：
赤外線吸収スペクトルは、図２Ａに示す通りである。
ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１：３４１０、２９３１、１６７４、１４４９、１３７８、１２０３、１１４６、１１０５、１０５３、９９５、８３９、８０１、６１３
（７）紫外線吸収スペクトル：
水溶液における紫外線吸収は、図２Ｂに示す通り、エンド吸収である（２００ｎｍにおけるε値は、水中で７１５５である）。
（８）プロトン核磁気共鳴スペクトル：
６００ＭＨｚにおいて重メタノール中で２５℃にて測定した結果は、図２Ｃ、及び表１に示す通りである。
（９）炭素１３核磁気共鳴スペクトル：
１５０ＭＨｚにおいて重メタノール中で２５℃にて測定した結果は、図２Ｄ、及び表１に示す通りである。
（１０）高速液体クロマトグラフィー：
ＨｙｄｒｏｓｐｈｅｒｅＣ１８ＨＳ１２Ｓ０５−２５２０ＷＴ（粒子径５μｍ、内径２０ｍｍ×長さ２５０ｍｍ、株式会社ワイエムシィ製）カラムを用い、流速１０ｍＬ／分間で、水で５分間展開した後、２５分まで直線濃度勾配的にメタノールに置換したときの保持時間は２１分〜２３分である。

＜構造式（Ｃ）で表される化合物＞
本発明の化合物の１つである、下記構造式（Ｃ）で表される化合物は、本発明者らが分離した新規化合物である。

−構造式（Ｃ）で表される化合物の物理化学的性質−
前記構造式（Ｃ）で表される化合物の物理化学的性質としては、次の通りである。
（１）外観：白色固体
（２）分子式：Ｃ_１７Ｈ_３０Ｏ_１２
なお、通常の状態では一水和物となり、元素分析ではＣ_１７Ｈ_３０Ｏ_１２・Ｈ_２Ｏとして表される。
（３）高分解能質量分析（ＨＲＥＳＩＭＳ：正イオンモード）：
実験値ｍ／ｚ４４９．１６２９（Ｍ＋Ｎａ）^＋
計算値ｍ／ｚ４４９．１６２９（Ｍ＋Ｎａ）^＋
（４）元素分析：
実験値Ｃ４５．７％、Ｈ７．３％
計算値（Ｃ_１７Ｈ_３０Ｏ_１２・Ｈ_２Ｏ）Ｃ４５．９％、Ｈ７．３％
（５）比旋光度：［α］Ｄ^２５＝＋１６０°（ｃ１．０３，メタノール）
（６）赤外線吸収スペクトル：
赤外線吸収スペクトルは、図３Ａに示す通りである。
ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１：３４２２、２９３５、１６３５、１４５７、１１９１、１１５３、１０５４、９９６、９４１、８４５、８０３、６３７
（７）紫外線吸収スペクトル：
水溶液における紫外線吸収は、図３Ｂに示す通り、エンド吸収である（２００ｎｍにおけるε値は、水中で６８である）。
（８）プロトン核磁気共鳴スペクトル：
６００ＭＨｚにおいて重メタノール中で２５℃にて測定した結果は、図３Ｃ、及び表２に示す通りである。
（９）炭素１３核磁気共鳴スペクトル：
１５０ＭＨｚにおいて重メタノール中で２５℃にて測定した結果は、図３Ｄ、及び表２に示す通りである。
（１０）高速液体クロマトグラフィー：
ＨｙｄｒｏｓｐｈｅｒｅＣ１８ＨＳ１２Ｓ０５−２５２０ＷＴ（粒子径５μｍ、内径２０ｍｍ×長さ２５０ｍｍ、株式会社ワイエムシィ製）カラムを用い、流速１０ｍＬ／分間で、水で５分間展開した後、２５分まで直線濃度勾配的にメタノールに置換したときの保持時間は１７分〜１８分である。

化合物が、前記構造式（Ｂ）で表される構造、又は前記構造式（Ｃ）で表される構造を有するか否かは、適宜選択した各種の分析方法により確認することができ、例えば、前記質量分析法、前記赤外分光法、前記紫外分光法、前記プロトン核磁気共鳴分光法、前記炭素１３核磁気共鳴分光法等の分析方法などが挙げられる。なお、前記各分析方法による測定値には、多少の誤差が生じることがあるが、当業者であれば、化合物が前記構造式（Ｂ）で表される構造、又は前記構造式（Ｃ）で表される構造を有することは容易に同定することが可能である。

前記構造式（Ｂ）で表される化合物は、通常、水和物である。
前記構造式（Ｃ）で表される化合物は、通常、水和物である。

前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物は、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを生産する微生物から得られたものであってもよいし、化学合成により得られたものであってもよいが、後述する本発明の化合物の製造方法により得られることが好ましい。

＜用途＞
前記構造式（Ｂ）で表される化合物は、後述する試験例で示されるように、優れたオートファジー誘導活性、及び優れた抗酸化活性を有し、安全性の高い化合物である。また、甘味料の成分としても用いることができる。そのため、前記構造式（Ｂ）で表される化合物は、例えば、後述する本発明の、化合物含有組成物、オートファジー誘導剤、抗酸化剤、甘味料などの有効成分として好適に利用可能である。また、前記構造式（Ｂ）で表される化合物は、オートファジー誘導活性と、抗酸化活性とを有するため、筋萎縮性側索硬化症の予防乃至治療薬の有効成分としてより期待される。

前記構造式（Ｃ）で表される化合物は、後述する試験例で示されるように、優れたオートファジー誘導活性を有し、安全性の高い化合物である。また、甘味料の成分としても用いることができる。そのため、前記構造式（Ｃ）で表される化合物は、例えば、後述する本発明の、化合物含有組成物、オートファジー誘導剤、甘味料などの有効成分として好適に利用可能である。

（化合物の製造方法）
本発明の前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかの製造方法は、培養工程と、採取工程とを少なくとも含み、必要に応じて更にその他の工程を含む。

＜培養工程＞
前記培養工程は、レンツィア（Ｌｅｎｔｚｅａ）属に属し、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを生産する能力を有する微生物を培養する工程である。

−微生物−
前記微生物としては、レンツィア（Ｌｅｎｔｚｅａ）属に属し、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを生産する能力を有する限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、本発明者らの分離したレンツィアエスピー（Ｌｅｎｔｚｅａｓｐ．）ＭＬ４５７−ｍＦ８株（ＮＩＴＥＢＰ−０１５８６）が好ましい。
また、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを生産できるその他の菌株についても、常法によって、自然界より分離することが可能である。なお、前記レンツィアエスピー（Ｌｅｎｔｚｅａｓｐ．）ＭＬ４５７−ｍＦ８株を含め、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかの生産菌を、放射線照射やその他の変異処理に供することにより、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかの生産能を高めることも可能である。更に、遺伝子工学的手法による前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかの生産も可能である。

前記微生物が前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを生産する能力を有することを分析する方法としては、例えば、該微生物の培養物、好ましくは、液体培養後の培養上清中又は固体培養後の固体培地中の成分の、オートファジー誘導活性、若しくは抗酸化活性を分析する方法、各種分析法により前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを検出する方法などが挙げられる。

−−レンツィアエスピー（Ｌｅｎｔｚｅａｓｐ．）ＭＬ４５７−ｍＦ８株−−
前記レンツィアエスピー（Ｌｅｎｔｚｅａｓｐ．）ＭＬ４５７−ｍＦ８株は、公益財団法人微生物化学研究会微生物化学研究所において、新潟県佐渡市の土壌より分離された放線菌であり、その菌学的性状は、以下の通りである。

１．形態
ＭＬ４５７−ｍＦ８株は、分枝した基生菌糸より、直状もしくは曲状の気菌糸を伸長する。成熟した胞子鎖は１０〜２０個の柱筒状の胞子を連鎖する。胞子の大きさは約０．４〜０．５×１．１〜１．５ミクロンで、胞子の表面は平滑である。

２．各種培地における生育状態
色の記載について［］内に示す標準は、コンティナー・コーポレーション・オブ・アメリカのカラー・ハーモニー・マニュアル（ＣｏｎｔａｉｎｅｒＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎｏｆＡｍｅｒｉｃａのｃｏｌｏｒｈａｒｍｏｎｙｍａｎｕａｌ）を用いた。
（１）イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−培地２、３０℃培養）
うす黄［２ｇｃ，Ｂａｍｂｏｏ］の発育上に、白［Ｎｅａｒｇｒａｙｓｅｒｉｅｓ，３ｂａ，Ｐｅａｒｌ］の気菌糸を着生する。可溶性色素は認められない。
（２）オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培地３、３０℃培養）
うす黄［１ｃａ，Ｐａｌｅｙｅｌｌｏｗ］の発育上に、白［Ｔｈｅｇｒａｙｓｃａｌｅ，ａ，Ｗｈｉｔｅ］の気菌糸を着生する。可溶性色素は認められない。
（３）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−培地４、３０℃培養）
うす黄［３ｃａ，Ｓｈｅｌｌ］〜暗い黄［２ｌｅ，Ｍｕｓｔａｒｄ］の発育上に、白［Ｔｈｅｇｒａｙｓｃａｌｅ，ａ，Ｗｈｉｔｅ］の気菌糸を着生する。可溶性色素は認められない。
（４）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ−培地５、３０℃培養）
うす黄［１１／２ｅａ，ＬｔＹｅｌｌｏｗ］〜にぶ黄だいだい［３ｉｃ，ＬｔＡｍｂｅｒ］の発育上に、白［Ｎｅａｒｇｒａｙｓｅｒｉｅｓ，３ｂａ，Ｐｅａｒｌ］の気菌糸を着生する。可溶性色素は認められない。
（５）チロシン寒天培地（ＩＳＰ−培地７、３０℃培養）
うす黄茶［２ｐｅ，ＭｕｓｔａｒｄＧｏｌｄ］の発育上に、白［Ｎｅａｒｇｒａｙｓｅｒｉｅｓ，３ｃｂ，Ｓａｎｄ］の気菌糸を着生する。可溶性色素は認められない。
（６）シュークロース・硝酸塩寒天培地（３０℃培養）
うす黄［２ｃａ，ＬｔＩｖｏｒｙ］〜にぶ黄［２ｉｃ，ＨｏｎｅｙＧｏｌｄ］の発育上に、白［Ｔｈｅｇｒａｙｓｃａｌｅ，ｂ，ＯｙｓｔｅｒＷｈｉｔｅ］の気菌糸を着生する。可溶性色素は認められない。

３．生理的性質
（１）生育温度範囲
イースト・スターチ寒天培地（溶性デンプン１％、Ｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔ０．２％、ひも寒天２．６％、ｐＨ７．０）を用い、１０℃、２０℃、２７℃、３０℃、３７℃、４２℃及び５０℃の各温度で試験した結果、１０℃及び５０℃での生育は認められず、２０℃〜４２℃の範囲で生育した。生育至適温度は３０℃付近である。

４．菌体成分
細胞壁中の２，６−ジアミノピメリン酸はｍｅｓｏ−型である。

５．１６ＳｒＲＮＡ遺伝子解析
１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の部分塩基配列（１，４７４ｂｐ）を決定し、ＤＮＡデータベースに登録された公知菌株のデータと比較した。その結果、ＭＬ４５７−ｍＦ８株の塩基配列は以下に示すように、レンツィア（Ｌｅｎｔｚｅａ）属放線菌の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子と高い相同性を示した。即ち、Ｌｅｎｔｚｉａｗａｙｗａｙａｎｄｅｎｓｉｓ（９９．１％）、Ｌ．ａｌｂｉｄａ（９９．０％）、Ｌ．ｖｉｏｌａｃｅａ（９８．５％）等である。なお、括弧内は塩基配列の相同値を表記した。

以上の性状を要約すると、ＭＬ４５７−ｍＦ８株は、その形態上、分枝した基生菌糸より、直状および曲状の気菌糸を伸長する。その先端は柱筒状の胞子を連鎖する。種々の培地で、うす黄〜うすだいだいの発育上に白〜灰白の気菌糸を着生する。生育至適温度は３０℃付近である。
ＭＬ４５７−ｍＦ８株の細胞壁中の２，６−ジアミノピメリン酸はｍｅｓｏ−型である。
ＭＬ４５７−ｍＦ８株の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の部分塩基配列を解析し、公知菌株のデータと比較したところ、レンツィア属放線菌と高い相同性を示した。

以上の結果より、ＭＬ４５７−ｍＦ８株はレンツィア（Ｌｅｎｔｚｅａ）属に属するものと考えられる。そこで、ＭＬ４５７−ｍＦ８株をレンツィアエスピー（Ｌｅｎｔｚｅａｓｐ．）ＭＬ４５７−ｍＦ８とする。
なお、ＭＬ４５７−ｍＦ８株は、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに寄託申請し、２０１３年４月９日に、ＮＩＴＥＰ−０１５８６として国内受託された。その後、２０１５年８月１３日にブダペスト条約に基づく国際寄託への移管請求が受領され、受託番号ＮＩＴＥＢＰ−０１５８６として国際寄託されている。

−培養−
前記培養は、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを生産する生産菌（以下、単に「化合物生産菌」と称することがある）を栄養培地（以下、単に「培地」と称することがある）中に接種し、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかの生産に良好な温度で培養することによって行われる。

前記栄養培地としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、従来放線菌の培養に利用されている公知のものを使用することができ、液体培地であってもよく、固体（寒天）培地であってもよい。
前記栄養培地に添加する栄養源としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、市販されている大豆粉、小麦胚芽、押し麦、発芽玄米、ペプトン、綿実粕、酵母エキス、肉エキス、コーン・スティープ・リカー、硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、尿素等の窒素源；トマトペースト、グリセリン、デンプン、グルコース、ガラクトース、デキストリン、バクトソイトン等の炭水化物、脂肪等の炭素源；などが挙げられる。
更に、食塩、炭酸カルシウム等の無機塩を培地に添加して使用することもでき、その他、必要に応じて微量の金属塩を培地に添加して使用することもできる。
これらの材料は、前記化合物生産菌が利用し、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかの生産に役立つものであればよく、公知の培養材料は全て用いることができる。

前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかの生産のための前培養液としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、液体培地、平板培地、斜面培地、半斜面培地などの培地上で前記化合物生産菌を培養した生育物などを使用することができる。

前記培養の方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、振とう培養、静置培養、タンク培養などが挙げられる。
前記培養の温度としては、前記化合物生産菌の発育が実質的に阻害されずに、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを生産し得る範囲であれば、特に制限はなく、使用する生産菌に応じて適宜選択することができるが、２５℃〜３５℃が好ましい。
前記培養のｐＨとしては、前記化合物生産菌の発育が実質的に阻害されずに、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを生産し得る範囲であれば、特に制限はなく、使用する生産菌に応じて適宜選択することができる。
前記培養の期間としては、特に制限はなく、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかの蓄積に合わせて適宜選択することができる。

＜採取工程＞
前記採取工程は、前記培養工程で得られた培養物から前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを採取する工程である。
前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかは、上述した物理化学的性質を有するので、その性質に従って培養物から採取することができる。

前記培養物としては、前記培養工程で得られ、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを含むものであれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、菌体、液体培養後の培養上清、固体培養後の固体培地、及びこれらの混合物などが挙げられる。
なお、前記培養物として、前記菌体を用いる場合は、適当な有機溶媒を用いた抽出方法や、菌体破砕による溶出方法などにより、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを菌体から抽出し、これを分離及び／又は精製に供してもよい。

前記採取の方法としては、特に制限はなく、微生物の生産する代謝物を採取するのに用いられる方法を適宜選択することができる。例えば、溶媒抽出法、各種吸着剤に対する吸着親和性の差を利用する方法、クロマトグラフ法などが挙げられる。これらの方法を単独又は適宜組み合せて、場合によっては反復使用することにより、分離及び／又は精製された前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを採取することができる。

前記溶媒抽出法に用いる溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、エタノール、メタノール、アセトン、ブタノール、アセトニトリルなどが挙げられる。

前記吸着剤としては、特に制限はなく、公知の吸着剤の中から目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ポリスチレン系吸着樹脂などが挙げられる。

前記クロマトグラフ法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、薄層クロマトグラフ法、順相あるいは逆相カラムを用いた分取用高速液体クロマトグラフ（分取用ＨＰＬＣ）法などが挙げられる。
前記クロマトグラフ法に用いる担体としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、イオン交換樹脂、ゲル濾過、シリカゲル、アルミナ、活性炭などが挙げられる。
前記クロマトグラフ法に用いる担体の市販品の具体例としては、アンバーライト（登録商標）ＣＧ５０（Ｓｉｇｍａ−ＡｌｄｒｉｃｈＣｏ．ＬＬＣ）等のイオン交換樹脂；Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）ＬＨ−２０（ＧＥヘルスケア・ジャパン株式会社製）等のゲル濾過；ＨｙｄｒｏｓｐｈｅｒｅＣ１８ＨＳ１２Ｓ０５−２５２０ＷＴ（株式会社ワイエムシィ製）等のシリカゲルなどが挙げられる。

前記吸着剤や前記クロマトグラフ法における担体から前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを溶出させる方法としては、特に制限はなく、該吸着剤や該担体の種類や性質等に応じて適宜選択することができる。例えば、ポリスチレン系吸着樹脂の場合には、溶出溶媒として、含水アルコール、含水アセトン等を用いて溶出する方法などが挙げられる。

＜その他の工程＞
前記その他の工程としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。

以上のようにして前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを製造することができる。

（化合物含有組成物）
本発明の化合物含有組成物は、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを少なくとも含み、必要に応じて、更にその他の成分を含む。

前記化合物含有組成物における前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかの含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。前記化合物含有組成物は、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかそのものであってもよい。

＜その他の成分＞
前記化合物含有組成物におけるその他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、薬理学的に許容され得る担体、下記構造式（Ａ）で表される化合物などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
前記薬理学的に許容され得る担体の具体例としては、添加剤、補助剤、水などが挙げられる。

前記添加剤又は前記補助剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、殺菌剤、保存剤、粘結剤、増粘剤、固着剤、結合剤、着色剤、安定化剤、ｐＨ調整剤、緩衝剤、等張化剤、溶剤、酸化防止剤、紫外線防止剤、結晶析出防止剤、消泡剤、物性向上剤、防腐剤などが挙げられる。

前記殺菌剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化セチルピリジニウム等のカチオン性界面活性剤などが挙げられる。

前記保存剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、クレゾールなどが挙げられる。

前記粘結剤、前記増粘剤、又は前記固着剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、デンプン、デキストリン、セルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルデンプン、プルラン、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸アンモニウム、アルギン酸プロピレングリコールエステル、グアーガム、ローカストビーンガム、アラビアゴム、キサンタンガム、ゼラチン、カゼイン、ポリビニルアルコール、ポリエチレンオキサイド、ポリエチレングリコール、エチレン・プロピレンブロックポリマー、ポリアクリル酸ナトリウム、ポリビニルピロリドンなどが挙げられる。

前記結合剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドンなどが挙げられる。

前記着色剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、酸化チタン、酸化鉄などが挙げられる。

前記安定化剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、トラガント、アラビアゴム、ゼラチン、ピロ亜硫酸ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、チオグリコール酸、チオ乳酸などが挙げられる。

前記ｐＨ調整剤又は前記緩衝剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウムなどが挙げられる。

前記等張化剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、塩化ナトリウム、ブドウ糖などが挙げられる。

前記化合物含有組成物における前記その他の成分の含有量としては、特に制限はなく、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかの効果を損なわない範囲内で、目的に応じて適宜選択することができる。

＜用途＞
前記化合物含有組成物は、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを含むため、優れたオートファジー誘導活性、及び優れた抗酸化活性の少なくともいずれかを有し、また、甘味も有し、更に、安全性が高く、例えば、医薬組成物、オートファジー誘導剤、抗酸化剤、食品、食品添加物などとして好適に利用可能である。

前記化合物含有組成物は、単独で使用されてもよいし、他の成分を有効成分とする医薬と併せて使用されてもよい。また、前記化合物含有組成物は、他の成分を有効成分とする医薬中に、配合された状態で使用されてもよい。

（オートファジー誘導剤）
本発明のオートファジー誘導剤は、下記構造式（Ａ）で表される化合物、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを少なくとも含み、必要に応じて更にその他の成分を含む。

＜構造式（Ａ）で表される化合物、構造式（Ｂ）で表される化合物、及び構造式（Ｃ）で表される化合物＞
−構造式（Ｂ）で表される化合物、及び構造式（Ｃ）で表される化合物−
前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物は、新規化合物であり、上記新規化合物の項目に記載した通りである。また、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物は、上記化合物の製造方法の項目に記載した方法により、好適に製造することができる。

−構造式（Ａ）で表される化合物−
前記構造式（Ａ）で表される化合物は、本発明者らが分離した化合物である。

−−構造式（Ａ）で表される化合物の物理化学的性質−−
前記構造式（Ａ）で表される化合物の物理化学的性質としては、次の通りである。
（１）外観：白色飴状
（２）分子式：Ｃ_１７Ｈ_３２Ｏ_１３
なお、通常の状態では二水和物となり、元素分析ではＣ_１７Ｈ_３２Ｏ_１３・２Ｈ_２Ｏとして表される。
（３）高分解能質量分析（ＨＲＥＳＩＭＳ：正イオンモード）：
実験値ｍ／ｚ４６７．１７３９（Ｍ＋Ｎａ）^＋
計算値ｍ／ｚ４６７．１７３５（Ｍ＋Ｎａ）^＋
（４）元素分析：
実験値Ｃ４２．５％、Ｈ７．７％、Ｎ＜０．１％
計算値（Ｃ_１７Ｈ_３２Ｏ_１３・２Ｈ_２Ｏ）Ｃ４２．５％、Ｈ７．５％
（５）比旋光度：［α］Ｄ^２２＝＋１３７°（ｃ０．９４，メタノール）
（６）赤外線吸収スペクトル：
赤外線吸収スペクトルは、図１Ａに示す通りである。
ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１：３４００、２９３５、１６５３、１３７５、１１５０、１０７９、１０４７、９９１、８０２、６１０
（７）紫外線吸収スペクトル：
水溶液における紫外線吸収は、図１Ｂに示す通り、ほとんど見られない（２００ｎｍにおけるε値は、水中で２０２であり、０．００５ＭＨＣｌ中で１９２である）。
（８）プロトン核磁気共鳴スペクトル：
６００ＭＨｚにおいて重メタノール中で２５℃にて測定した結果は、図１Ｃ、及び表３に示す通りである。
（９）炭素１３核磁気共鳴スペクトル：
１５０ＭＨｚにおいて重メタノール中で２５℃にて測定した結果は、図１Ｄ、及び表３に示す通りである。
（１０）高速液体クロマトグラフィー：
ＨｙｄｒｏｓｐｈｅｒｅＣ１８ＨＳ１２Ｓ０５−２５２０ＷＴ（粒子径５μｍ、内径２０ｍｍ×長さ２５０ｍｍ、株式会社ワイエムシィ製）カラムを用い、流速１０ｍＬ／分間で、水で５分間展開した後、２５分まで直線濃度勾配的にメタノールに置換したときの保持時間は１６分〜１７分である。

化合物が、前記構造式（Ａ）で表される構造を有するか否かは、適宜選択した各種の分析方法により確認することができ、例えば、前記質量分析法、前記赤外分光法、前記紫外分光法、前記プロトン核磁気共鳴分光法、前記炭素１３核磁気共鳴分光法等の分析方法などが挙げられる。なお、前記各分析方法による測定値には、多少の誤差が生じることがあるが、当業者であれば、化合物が前記構造式（Ａ）で表される構造を有することは容易に同定することが可能である。

前記構造式（Ａ）で表される化合物は、通常、水和物である。

前記構造式（Ａ）で表される化合物は、前記構造式（Ａ）で表される化合物を生産する微生物から得られたものであってもよいし、化学合成により得られたものであってもよい。

前記構造式（Ａ）で表される化合物は、後述する試験例で示されるように、優れたオートファジー誘導活性を有し、安全性の高い化合物である。また、甘味料の成分としても用いることもできる。

−−構造式（Ａ）で表される化合物の製造方法−−
前記構造式（Ａ）で表される化合物の製造方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかの製造方法と同様にして製造することができる。即ち、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかの製造方法における、培養工程と、採取工程と、必要に応じてその他の工程と、同様にして製造することができる。

前記構造式（Ａ）で表される化合物、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物は、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。

前記オートファジー誘導剤における構造式（Ａ）で表される化合物、構造式（Ｂ）で表される化合物、及び構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかの含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。また、前記オートファジー誘導剤は、前記構造式（Ａ）で表される化合物、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかそのものであってもよい。

＜その他の成分＞
前記オートファジー誘導剤におけるその他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、上記化合物含有組成物のその他の成分の項目に記載したものと同様のものが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。

前記オートファジー誘導剤におけるその他の成分の含有量としては、本発明の効果を損なわない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。

＜用途＞
前記オートファジー誘導剤は、前記構造式（Ａ）で表される化合物、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを含むため、優れたオートファジー誘導活性を有し、安全性が高く、オートファジーの研究用試薬や、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、プリオン病、及びハンチントン病などの神経変性疾患の予防乃至治療薬の有効成分として好適に利用可能である。
なお、これまでにオートファジー誘導活性を有する化合物として、ラパマイシンなどが知られているが、毒性が強く、安全性の面で問題がある。

前記オートファジー誘導剤は、単独で使用されてもよいし、他の成分を有効成分とする医薬と併せて使用されてもよい。また、前記オートファジー誘導剤は、他の成分を有効成分とする医薬中に、配合された状態で使用されてもよい。
前記オートファジー誘導剤は、細胞におけるオートファジーを誘導することができるので、本発明は、細胞におけるオートファジーの誘導方法にも関する。

＜剤形＞
前記オートファジー誘導剤の剤形としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、固形剤、半固形剤、液剤などが挙げられる。これらの剤形の前記オートファジー誘導剤は、常法に従い製造することができる。

−固形剤−
前記固形剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、内用剤として用いられる場合、例えば、錠剤、チュアブル錠、発泡錠、口腔内崩壊錠、トローチ剤、ドロップ剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、顆粒剤、散剤、丸剤、ドライシロップ剤、浸剤などが挙げられる。
前記固形剤が、外用剤として用いられる場合、例えば、坐剤、パップ剤、プラスター剤などが挙げられる。

−半固形剤−
前記半固形剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、内用剤として用いられる場合、例えば、舐剤、チューインガム剤、ホイップ剤、ゼリー剤などが挙げられる。
前記半固形剤が、外用剤として用いられる場合、例えば、軟膏剤、クリーム剤、ムース剤、インヘラー剤、ナザールジェル剤などが挙げられる。

−液剤−
前記液剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、内用剤として用いられる場合、例えば、シロップ剤、ドリンク剤、懸濁剤、酒精剤などが挙げられる。
前記液剤が、外用剤として用いられる場合、例えば、液剤、点眼剤、エアゾール剤、噴霧剤などが挙げられる。

＜投与＞
前記オートファジー誘導剤の投与方法、投与量、投与時期、及び投与対象としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
前記投与方法としては、例えば、局所投与法、経腸投与法などの非経口投与法や経口投与法などが挙げられる。
前記投与量としては、特に制限はなく、投与対象個体の年齢、体重、体質、症状、他の成分を有効成分とする医薬や薬剤の投与の有無など、様々な要因を考慮して適宜選択することができる。
前記投与対象となる動物種としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ヒト、サル、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、トリなどが挙げられるが、これらの中でもヒトに好適に用いることができる。

（抗酸化剤）
本発明の抗酸化剤は、前記構造式（Ｂ）で表される化合物を少なくとも含み、必要に応じて更にその他の成分を含む。

＜構造式（Ｂ）で表される化合物＞
前記構造式（Ｂ）で表される化合物は、新規化合物であり、上記新規化合物の項目に記載した通りである。また、前記構造式（Ｂ）で表される化合物は、上記化合物の製造方法の項目に記載した方法により、好適に製造することができる。

前記抗酸化剤における構造式（Ｂ）で表される化合物の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。また、前記抗酸化剤は、前記構造式（Ｂ）で表される化合物そのものであってもよい。

＜その他の成分＞
前記抗酸化剤におけるその他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、上記化合物含有組成物のその他の成分の項目に記載したものと同様のものが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。

前記抗酸化剤におけるその他の成分の含有量としては、本発明の効果を損なわない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。

＜用途＞
前記抗酸化剤は、前記構造式（Ｂ）で表される化合物を含むため、優れた抗酸化活性を有し、安全性が高く、抗酸化物質に関する研究用試薬や、筋萎縮性側索硬化症の予防乃至治療薬の有効成分として好適に利用可能である。

前記抗酸化剤は、単独で使用されてもよいし、他の成分を有効成分とする医薬と併せて使用されてもよい。また、前記抗酸化剤は、他の成分を有効成分とする医薬中に、配合された状態で使用されてもよい。
前記抗酸化剤は、酸化を抑制することができるので、本発明は、酸化の抑制方法にも関する。

＜剤形＞
前記抗酸化剤の剤形としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、上記オートファジー誘導剤の剤形の項目に記載したものと同様とすることができる。

＜投与＞
前記抗酸化剤の投与方法、投与量、投与時期、及び投与対象としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、上記オートファジー誘導剤の投与の項目に記載したものと同様とすることができる。

（甘味料）
本発明の甘味料は、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを少なくとも含み、必要に応じて、更にその他の成分を含む。

＜構造式（Ｂ）で表される化合物、及び構造式（Ｃ）で表される化合物＞
前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物は、新規化合物であり、上記新規化合物の項目に記載した通りである。また、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物は、上記化合物の製造方法の項目に記載した方法により、好適に製造することができる。

前記甘味料における前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかの含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。前記甘味料は、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかそのものであってもよい。

＜その他の成分＞
前記甘味料におけるその他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、上記化合物含有組成物のその他の成分の項目に記載したものと同様のものが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。

前記甘味料におけるその他の成分の含有量としては、本発明の効果を損なわない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。

＜用途＞
前記甘味料は、前記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び前記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを含むため、優れた甘味を有し、安全性が高く、例えば、ダイエット用の食品の添加物として好適に利用可能である。

前記甘味料は、単独で使用されてもよいし、他の成分を有効成分とする甘味料と併せて使用されてもよい。また、前記甘味料は、他の成分を有効成分とする甘味料中に、配合された状態で使用されてもよい。

前記甘味料の態様としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、粉末状、液状などが挙げられる。
前記甘味料の使用量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。

以下に本発明の製造例、及び試験例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの製造例、及び試験例に何ら限定されるものではない。

（製造例１：化合物の製造）
構造式（Ａ）で表される化合物、構造式（Ｂ）で表される化合物、及び構造式（Ｃ）で表される化合物を以下のようにして製造した。

−前培養液の調製−
ロータリーフラスコに、Ｓ培地（２質量％ガラクトース、２質量％デキストリン、１質量％ソイペプトン、０．５質量％コーン・スティープ・リカー、０．２質量％（ＮＨ_４）_２ＳＯ_４、０．２質量％ＣａＣＯ_３、シリコン消泡剤少量、ｐＨ７．４）を１００ｍＬ入れ、レンツィアエスピー（Ｌｅｎｔｚｅａｓｐ．）ＭＬ４５７−ｍＦ８株（受託番号ＮＩＴＥＢＰ−０１５８６）を植菌し、３０℃、２２０ｒｐｍで３日間培養し、前培養液を得た。

−培養工程−
発芽玄米１２０ｇに水を２００ｍＬ加えて、１２１℃で２０分間オートクレーブした培地に、５６ｍＬの前記前培養液を加え、３０℃で４週間、静置培養した。

−採取工程−
前記培養物に３２０ｍＬのメタノールを加え、よく混ぜた後、ペーパーフィルターにより濾過し、液体分を回収した。残渣にメタノールを３２０ｍＬ加え、同様にして液体分を回収し、初めの液体分と混ぜて、エバポレーターにより乾固した。

前記乾固したサンプルを１Ｌの水に溶解させ、そこに１Ｌの酢酸エチルを加え、よく混ぜた後、二層分配を行い、水層を回収し、エバポレーターにより乾固した。

前記水層乾固物を少量の水に溶かし、ダイヤイオンＨＰ２０樹脂（三菱化学株式会社製）により、水、２０体積％メタノール、５０体積％メタノール、及び１００体積％メタノールを段階的な溶媒として用い、レンツトレハロースＡ、レンツトレハロースＢ、及びレンツトレハロースＣを含む画分を分離した。

前記レンツトレハロースＡ、レンツトレハロースＢ、及びレンツトレハロースＣを含む画分を、ＨｙｄｒｏｓｐｈｅｒｅＣ１８カラムＨＳ１２Ｓ０５−２５２０ＷＴ（株式会社ワイエムシィ製）を用いて、水からメタノールへの勾配溶媒系を用いたＨＰＬＣにより分離し、レンツトレハロースＡを含む画分、レンツトレハロースＢを含む画分、及びレンツトレハロースＣを含む画分を得た。

前記レンツトレハロースＡを含む画分、レンツトレハロースＢを含む画分、及びレンツトレハロースＣを含む画分を、それぞれ５０ｍＬ程度のＫｉｅｓｅｌｇｅｌ６０（ＭｅｒｃｋＫＧａＡ）に吸着させ、乾燥させた。これを、クロロホルムで平衡化した１００ｍＬのＷａｋｏｇｅｌＣ−３００（和光純薬工業株式会社製）に上乗せした後、クロロホルム：メタノール＝４：６（体積比）の溶液１００ｍＬ、クロロホルム：メタノール：水＝４：６：１（体積比）の溶液６００ｍＬで順次溶出し、分離し、レンツトレハロースＡを含む画分、レンツトレハロースＢを含む画分、及びレンツトレハロースＣを含む画分を得た。

前記レンツトレハロースＡを含む画分、レンツトレハロースＢを含む画分、及びレンツトレハロースＣを含む画分を、それぞれを乾固した後、少量の水に溶かし、９倍量のアセトニトリルを加えて乳状液とし、ＰｏｌｙａｍｉｎｅＩＩカラムＰＢ１２Ｓ０５−２５１０ＷＴ（株式会社ワイエムシィ製）を用いて、９０体積％アセトニトリルから５０体積％アセトニトリルへの勾配溶媒系を用いたＨＰＬＣにより分離し、レンツトレハロースＡを含む画分、レンツトレハロースＢを含む画分、及びレンツトレハロースＣを含む画分を得た。

前記レンツトレハロースＡを含む画分、レンツトレハロースＢを含む画分、及びレンツトレハロースＣを含む画分を、それぞれメタノールを溶媒としたＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ−２０（ＧＥヘルスケア・ジャパン株式会社製）カラムにかけ夾雑物を取り除き、エバポレーターにより乾固した。

前記乾固したレンツトレハロースＡを含む画分、レンツトレハロースＢを含む画分、及びレンツトレハロースＣを含む画分を、それぞれ水を溶媒とした活性炭素（和光純薬工業株式会社製）カラムに通し、通過分と、水による洗浄画分とを回収し、凍結乾燥し、精製されたレンツトレハロースＡ、レンツトレハロースＢ、及びレンツトレハロースＣを得た。

＜レンツトレハロースＡの物理化学的性質＞
得られたレンツトレハロースＡの物理化学的性質は、以下の通りであり、これらのことから、前記レンツトレハロースＡが、下記構造式（Ａ）で表される構造を有する化合物であることが確認された。
（１）外観：白色飴状
（２）分子式：Ｃ_１７Ｈ_３２Ｏ_１３
なお、通常の状態では二水和物となり、元素分析ではＣ_１７Ｈ_３２Ｏ_１３・２Ｈ_２Ｏとして表される。
（３）高分解能質量分析（ＨＲＥＳＩＭＳ：正イオンモード）：
実験値ｍ／ｚ４６７．１７３９（Ｍ＋Ｎａ）^＋
計算値ｍ／ｚ４６７．１７３５（Ｍ＋Ｎａ）^＋
（４）元素分析：
実験値Ｃ４２．５％、Ｈ７．７％、Ｎ＜０．１％
計算値（Ｃ_１７Ｈ_３２Ｏ_１３・２Ｈ_２Ｏ）Ｃ４２．５％、Ｈ７．５％
（５）比旋光度：［α］Ｄ^２２＝＋１３７°（ｃ０．９４，メタノール）
（６）赤外線吸収スペクトル：
赤外線吸収スペクトルは、図１Ａに示す通りであった。
ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１：３４００、２９３５、１６５３、１３７５、１１５０、１０７９、１０４７、９９１、８０２、６１０
（７）紫外線吸収スペクトル：
水溶液における紫外線吸収は、図１Ｂに示す通り、ほとんど見られなかった（２００ｎｍにおけるε値は、水中で２０２であり、０．００５ＭＨＣｌ中で１９２であった）。
（８）プロトン核磁気共鳴スペクトル：
６００ＭＨｚにおいて重メタノール中で２５℃にて測定した結果は、図１Ｃ、及び表４に示す通りであった。
（９）炭素１３核磁気共鳴スペクトル：
１５０ＭＨｚにおいて重メタノール中で２５℃にて測定した結果は、図１Ｄ、及び表４に示す通りであった。
（１０）高速液体クロマトグラフィー：
ＨｙｄｒｏｓｐｈｅｒｅＣ１８ＨＳ１２Ｓ０５−２５２０ＷＴ（粒子径５μｍ、内径２０ｍｍ×長さ２５０ｍｍ、株式会社ワイエムシィ製）カラムを用い、流速１０ｍＬ／分間で、水で５分間展開した後、２５分まで直線濃度勾配的にメタノールに置換したときの保持時間は１６分〜１７分であった。

＜レンツトレハロースＢの物理化学的性質＞
得られたレンツトレハロースＢの物理化学的性質は、以下の通りであり、これらのことから、前記レンツトレハロースＢが、下記構造式（Ｂ）で表される構造を有する化合物であることが確認された。
（１）外観：白色固体
（２）分子式：Ｃ_１７Ｈ_３０Ｏ_１１
なお、通常の状態では一水和物となり、元素分析ではＣ_１７Ｈ_３０Ｏ_１１・Ｈ_２Ｏとして表される。
（３）高分解能質量分析（ＨＲＥＳＩＭＳ：正イオンモード）：
実験値ｍ／ｚ４３３．１６８３（Ｍ＋Ｎａ）^＋
計算値ｍ／ｚ４３３．１６８０（Ｍ＋Ｎａ）^＋
（４）元素分析：
実験値Ｃ４７．７％、Ｈ７．８％
計算値（Ｃ_１７Ｈ_３０Ｏ_１１・Ｈ_２Ｏ）Ｃ４７．７％、Ｈ７．５％
（５）比旋光度：［α］Ｄ^２５＝＋１７７°（ｃ１．０６，メタノール）
（６）赤外線吸収スペクトル：
赤外線吸収スペクトルは、図２Ａに示す通りであった。
ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１：３４１０、２９３１、１６７４、１４４９、１３７８、１２０３、１１４６、１１０５、１０５３、９９５、８３９、８０１、６１３
（７）紫外線吸収スペクトル：
水溶液における紫外線吸収は、図２Ｂに示す通り、エンド吸収であった（２００ｎｍにおけるε値は、水中で７１５５であった）。
（８）プロトン核磁気共鳴スペクトル：
６００ＭＨｚにおいて重メタノール中で２５℃にて測定した結果は、図２Ｃ、及び表５に示す通りであった。
（９）炭素１３核磁気共鳴スペクトル：
１５０ＭＨｚにおいて重メタノール中で２５℃にて測定した結果は、図２Ｄ、及び表５に示す通りであった。
（１０）高速液体クロマトグラフィー：
ＨｙｄｒｏｓｐｈｅｒｅＣ１８ＨＳ１２Ｓ０５−２５２０ＷＴ（粒子径５μｍ、内径２０ｍｍ×長さ２５０ｍｍ、株式会社ワイエムシィ製）カラムを用い、流速１０ｍＬ／分間で、水で５分間展開した後、２５分まで直線濃度勾配的にメタノールに置換したときの保持時間は２１分〜２３分であった。

＜レンツトレハロースＣの物理化学的性質＞
得られたレンツトレハロースＣの物理化学的性質は、以下の通りであり、これらのことから、前記レンツトレハロースＣが、下記構造式（Ｃ）で表される構造を有する化合物であることが確認された。
（１）外観：白色固体
（２）分子式：Ｃ_１７Ｈ_３０Ｏ_１２
なお、通常の状態では一水和物となり、元素分析ではＣ_１７Ｈ_３０Ｏ_１２・Ｈ_２Ｏとして表される。
（３）高分解能質量分析（ＨＲＥＳＩＭＳ：正イオンモード）：
実験値ｍ／ｚ４４９．１６２９（Ｍ＋Ｎａ）^＋
計算値ｍ／ｚ４４９．１６２９（Ｍ＋Ｎａ）^＋
（４）元素分析：
実験値Ｃ４５．７％、Ｈ７．３％
計算値（Ｃ_１７Ｈ_３０Ｏ_１２・Ｈ_２Ｏ）Ｃ４５．９％、Ｈ７．３％
（５）比旋光度：［α］Ｄ^２５＝＋１６０°（ｃ１．０３，メタノール）
（６）赤外線吸収スペクトル：
赤外線吸収スペクトルは、図３Ａに示す通りであった。
ν_ｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１：３４２２、２９３５、１６３５、１４５７、１１９１、１１５３、１０５４、９９６、９４１、８４５、８０３、６３７
（７）紫外線吸収スペクトル：
水溶液における紫外線吸収は、図３Ｂに示す通り、エンド吸収であった（２００ｎｍにおけるε値は、水中で６８であった）。
（８）プロトン核磁気共鳴スペクトル：
６００ＭＨｚにおいて重メタノール中で２５℃にて測定した結果は、図３Ｃ、及び表６に示す通りであった。
（９）炭素１３核磁気共鳴スペクトル：
１５０ＭＨｚにおいて重メタノール中で２５℃にて測定した結果は、図３Ｄ、及び表６に示す通りであった。
（１０）高速液体クロマトグラフィー：
ＨｙｄｒｏｓｐｈｅｒｅＣ１８ＨＳ１２Ｓ０５−２５２０ＷＴ（粒子径５μｍ、内径２０ｍｍ×長さ２５０ｍｍ、株式会社ワイエムシィ製）カラムを用い、流速１０ｍＬ／分間で、水で５分間展開した後、２５分まで直線濃度勾配的にメタノールに置換したときの保持時間は１７分〜１８分であった。

（試験例１：トレハレース反応試験）
トレハロース（以下、「ＴＲＨ」と称することがある）、レンツトレハロースＡ（以下、「ＬＴＡ」と称することがある）、レンツトレハロースＢ（以下、「ＬＴＢ」と称することがある）、又はレンツトレハロースＣ（以下、「ＬＴＣ」と称することがある）を１３５ｍＭクエン酸バッファー（ｐＨ５．７）で、各濃度に調製した。

前記各濃度に調製した液に、０．２４ｕｎｉｔ／ｍＬで１３５ｍＭクエン酸バッファー（ｐＨ５．７）に溶かしたブタ腎臓トレハレース（Ｓｉｇｍａ−ＡｌｄｒｉｃｈＣｏ．ＬＬＣ、Ｔ８７７８）を４倍量加え、３７℃で２０分間反応させた。

次いで、同量の５００ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）を加え反応を停止した。

その後、３倍量のグルコースアッセイ試薬（Ｓｉｇｍａ−ＡｌｄｒｉｃｈＣｏ．ＬＬＣ、Ｇ３２９３）を添加し、室温で１５分間反応させた。

その後、３４０ｎｍの吸光度を測定し、グルコースをスタンダードとした検量線より、反応により放出されたグルコースの量を算出した。結果を図４Ａ〜図４Ｄに示した。

図４Ａは、トレハロース、レンツトレハロースＡ、レンツトレハロースＢ、及びレンツトレハロースＣの結果をまとめて示した図であり、図４Ｂ〜図４Ｄは、それぞれ、レンツトレハロースＡ、レンツトレハロースＢ、レンツトレハロースＣの結果を示した図である。
図４Ａ〜図４Ｄ中、「○」はトレハロースの結果を示し、「●」はレンツトレハロースＡの結果を示し、「△」はレンツトレハロースＢの結果を示し、「▲」はレンツトレハロースＣの結果を示す。

図４Ａ〜図４Ｄに示されるように、トレハロースは、トレハレースによって分解され、基質の量に応じて分解産物のグルコースを放出した。一方、レンツトレハロースＡ、レンツトレハロースＢ、及びレンツトレハロースＣは、いずれもトレハレースによってほとんど分解されなかった。
そのため、レンツトレハロースＡ、レンツトレハロースＢ、及びレンツトレハロースＣは、哺乳類（例えば、ヒト）の体内で、トレハロースよりも低濃度で、トレハロースと同様の生物活性を示す可能性があることが示唆された。

（試験例２：急性毒性試験）
＜試験例２−１：レンツトレハロースＡの静脈注射＞
４週齢の雌ＩＣＲマウスに、生理食塩水で溶解させた各濃度のレンツトレハロースＡを静脈注射し、その後、２週間の体重変化を観察した。結果を図５Ａに示した。

図５Ａ中、「○及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＡを投与しなかった場合（Ｎｏｒｍａｌ）の結果であり、「●及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＡを５００ｍｇ／ｋｇ／０．４ｍＬで投与した場合の結果であり、「■及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＡを２５０ｍｇ／ｋｇ／０．２ｍＬで投与した場合の結果であり、「▲及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＡを１２５ｍｇ／ｋｇ／０．２ｍＬで投与した場合の結果であり、「×及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＡを６２．５ｍｇ／ｋｇ／０．２ｍＬで投与した場合の結果であり、「●及び破線」で示したものは、レンツトレハロースＡを３１．２５ｍｇ／ｋｇ／０．２ｍＬで投与した場合の結果であり、「■及び破線」で示したものは、レンツトレハロースＡを１５．６ｍｇ／ｋｇ／０．２ｍＬで投与した場合の結果であり、「▲及び破線」で示したものは、レンツトレハロースＡを７．８ｍｇ／ｋｇ／０．２ｍＬで投与した場合の結果である。

また、各濃度のレンツトレハロースＡを静脈注射し、２週間後に解剖を行い、各臓器の重量を測定した。結果を表７に示した。

前記試験例２−１の経過観察の結果、全ての投与群において、特に異常は見られなかった。図５Ａの結果から、レンツトレハロースＡによる毒性を示すような濃度依存的な体重の減少は、見られなかった。表７の結果から、解剖後の臓器重量についても、特にレンツトレハロースＡの濃度依存性は見られなかった。
以上の結果から、５００ｍｇ／ｋｇまでの投与量では、レンツトレハロースＡの静脈注射による毒性は無いといえる。

＜試験例２−２：レンツトレハロースＡの経口投与＞
４週齢の雌ＩＣＲマウスに生理食塩水で溶解した各濃度のレンツトレハロースＡを経口投与し、その後、２週間の体重変化を観察した。結果を図５Ｂに示した。

図５Ｂ中、「○及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＡを投与しなかった場合（Ｎｏｒｍａｌ）の結果であり、「●及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＡを５００ｍｇ／ｋｇ／０．４ｍＬで投与した場合の結果であり、「■及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＡを２５０ｍｇ／ｋｇ／０．２ｍＬで投与した場合の結果であり、「▲及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＡを１２５ｍｇ／ｋｇ／０．２ｍＬで投与した場合の結果であり、「×及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＡを６２．５ｍｇ／ｋｇ／０．２ｍＬで投与した場合の結果であり、「●及び破線」で示したものは、レンツトレハロースＡを３１．２５ｍｇ／ｋｇ／０．２ｍＬで投与した場合の結果であり、「■及び破線」で示したものは、レンツトレハロースＡを１５．６ｍｇ／ｋｇ／０．２ｍＬで投与した場合の結果であり、「▲及び破線」で示したものは、レンツトレハロースＡを７．８ｍｇ／ｋｇ／０．２ｍＬで投与した場合の結果である。

また、各濃度のレンツトレハロースＡを経口投与し、２週間後に解剖を行い、各臓器の重量を測定した。結果を表８に示した。

前記試験例２−２の経過観察の結果、全ての投与群において、特に異常は見られなかった。図５Ｂの結果から、レンツトレハロースＡによる毒性を示すような濃度依存的な体重の減少は、見られなかった。表８の結果から、解剖後の臓器重量についても、特にレンツトレハロースＡの濃度依存性は見られなかった。
以上の結果から、５００ｍｇ／ｋｇまでの投与量では、レンツトレハロースＡの経口投与による毒性は無いといえる。

＜試験例２−３：レンツトレハロースＢの静脈注射＞
４週齢の雌ＩＣＲマウスに、生理食塩水で溶解させた各濃度のレンツトレハロースＢを静脈注射し、その後、２週間の体重変化を観察した。結果を図５Ｃに示した。

図５Ｃ中、「○及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＢを投与しなかった場合（Ｎｏｒｍａｌ）の結果であり、「●及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＢを５００ｍｇ／ｋｇ／０．４ｍＬで投与した場合の結果であり、「▲及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＢを２５０ｍｇ／ｋｇ／０．２ｍＬで投与した場合の結果であり、「■及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＢを１２５ｍｇ／ｋｇ／０．２ｍＬで投与した場合の結果であり、「◆及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＢを６２．５ｍｇ／ｋｇ／０．２ｍＬで投与した場合の結果であり、「▼及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＢを３１．２５ｍｇ／ｋｇ／０．２ｍＬで投与した場合の結果である。

また、各濃度のレンツトレハロースＢを静脈注射し、２週間後に解剖を行い、各臓器の重量を測定した。結果を表９に示した。

前記試験例２−３の経過観察の結果、全ての投与群において、特に異常は見られなかった。図５Ｃの結果から、レンツトレハロースＢによる毒性を示すような濃度依存的な体重の減少は、見られなかった。表９の結果から、解剖後の臓器重量についても、特にレンツトレハロースＢの濃度依存性は見られなかった。
以上の結果から、５００ｍｇ／ｋｇまでの投与量では、レンツトレハロースＢの静脈注射による毒性は無いといえる。

＜試験例２−４：レンツトレハロースＢの経口投与＞
４週齢の雌ＩＣＲマウスに生理食塩水で溶解した各濃度のレンツトレハロースＢを経口投与し、その後、２週間の体重変化を観察した。結果を図５Ｄに示した。

図５Ｄ中、「○及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＢを投与しなかった場合（Ｎｏｒｍａｌ）の結果であり、「●及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＢを５００ｍｇ／ｋｇ／０．４ｍＬで投与した場合の結果であり、「▲及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＢを２５０ｍｇ／ｋｇ／０．２ｍＬで投与した場合の結果であり、「■及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＢを１２５ｍｇ／ｋｇ／０．２ｍＬで投与した場合の結果であり、「◆及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＢを６２．５ｍｇ／ｋｇ／０．２ｍＬで投与した場合の結果であり、「▼及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＢを３１．２５ｍｇ／ｋｇ／０．２ｍＬで投与した場合の結果である。

また、各濃度のレンツトレハロースＢを経口投与し、２週間後に解剖を行い、各臓器の重量を測定した。結果を表１０に示した。

前記試験例２−４の経過観察の結果、全ての投与群において、特に異常は見られなかった。図５Ｄの結果から、レンツトレハロースＢによる毒性を示すような濃度依存的な体重の減少は、見られなかった。表１０の結果から、解剖後の臓器重量についても、特にレンツトレハロースＢの濃度依存性は見られなかった。
以上の結果から、５００ｍｇ／ｋｇまでの投与量では、レンツトレハロースＢの経口投与による毒性は無いといえる。

＜試験例２−５：レンツトレハロースＣの静脈注射＞
４週齢の雌ＩＣＲマウスに、生理食塩水で溶解させた各濃度のレンツトレハロースＣを静脈注射し、その後、２週間の体重変化を観察した。結果を図５Ｅに示した。

図５Ｅ中、「○及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＣを投与しなかった場合（Ｎｏｒｍａｌ）の結果であり、「●及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＣを５００ｍｇ／ｋｇ／０．４ｍＬで投与した場合の結果であり、「▲及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＣを２５０ｍｇ／ｋｇ／０．２ｍＬで投与した場合の結果であり、「■及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＣを１２５ｍｇ／ｋｇ／０．２ｍＬで投与した場合の結果であり、「◆及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＣを６２．５ｍｇ／ｋｇ／０．２ｍＬで投与した場合の結果であり、「▼及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＣを３１．２５ｍｇ／ｋｇ／０．２ｍＬで投与した場合の結果である。

また、各濃度のレンツトレハロースＣを静脈投与し、２週間後に解剖を行い、各臓器の重量を測定した。結果を表１１に示した。

前記試験例２−５の経過観察の結果、全ての投与群において、特に異常は見られなかった。図５Ｅの結果から、レンツトレハロースＣによる毒性を示すような濃度依存的な体重の減少は、見られなかった。表１１の結果から、解剖後の臓器重量についても、特にレンツトレハロースＣの濃度依存性は見られなかった。
以上の結果から、５００ｍｇ／ｋｇまでの投与量では、レンツトレハロースＣの静脈注射による毒性は無いといえる。

＜試験例２−６：レンツトレハロースＣの経口投与＞
４週齢の雌ＩＣＲマウスに生理食塩水で溶解した各濃度のレンツトレハロースＣを経口投与し、その後、２週間の体重変化を観察した。結果を図５Ｆに示した。

図５Ｆ中、「○及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＣを投与しなかった場合（Ｎｏｒｍａｌ）の結果であり、「●及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＣを５００ｍｇ／ｋｇ／０．４ｍＬで投与した場合の結果であり、「▲及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＣを２５０ｍｇ／ｋｇ／０．２ｍＬで投与した場合の結果であり、「■及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＣを１２５ｍｇ／ｋｇ／０．２ｍＬで投与した場合の結果であり、「◆及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＣを６２．５ｍｇ／ｋｇ／０．２ｍＬで投与した場合の結果であり、「▼及び実線」で示したものは、レンツトレハロースＣを３１．２５ｍｇ／ｋｇ／０．２ｍＬで投与した場合の結果である。

また、各濃度のレンツトレハロースＣを経口投与し、２週間後に解剖を行い、各臓器の重量を測定した。結果を表１２に示した。

前記試験例２−６の経過観察の結果、全ての投与群において、特に異常は見られなかった。図５Ｆの結果から、レンツトレハロースＣによる毒性を示すような濃度依存的な体重の減少は、見られなかった。表１２の結果から、解剖後の臓器重量についても、特にレンツトレハロースＣの濃度依存性は見られなかった。
以上の結果から、５００ｍｇ／ｋｇまでの投与量では、レンツトレハロースＣの経口投与による毒性は無いといえる。

（試験例３：オートファジー誘導活性試験）
＜試験例３−１＞
トレハロース、レンツトレハロースＡ、レンツトレハロースＢ、及びレンツトレハロースＣのオートファジー誘導活性を以下のようにして試験した。
ヒト培養メラノーマ株Ｍｅｗｏ（独立行政法人医薬基盤研究所ＪＣＲＢ生物資源バンクより入手）、又はヒト培養卵巣がん細胞株ＯＶＫ１８（理化学研究所バイオリソースセンターより入手）を１０体積％ＦＢＳ入りＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓＭｏｄｉｆｉｅｄＥａｇｌｅＭｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ、日水製薬株式会社製）に懸濁し、１ウェルあたり１．６×１０^４ｃｅｌｌｓ／２００μＬで９６ウェルプレートに播いた。
３７℃で３日間培養後、各ウェルより１００μＬの培地を取り出し、それぞれの処理濃度分のトレハロース、レンツトレハロースＡ、レンツトレハロースＢ、又はレンツトレハロースＣを溶解させた後、元のウェルに戻した。
３７℃で２４時間培養後、培地を除去し、リン酸緩衝生理食塩水（ＤＳファーマバイオメディカル株式会社製）で１回洗浄後、２×ＳＤＳ−ＰＡＧＥサンプルバッファー（１２５ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ６．８）、４％ＳＤＳ、１０％シュークロース）５０μＬで細胞を溶解した。

前記細胞を溶解させた細胞溶解液のタンパク質量をＢＣＡ法により測定し、５μｇ分をＳＤＳ−ＰＡＧＥ（１２．５％プレキャストゲル、株式会社アプロサイエンス製）にかけた。
泳動物をブロッター（株式会社バイオクラフト製）により、１２Ｖで４０分間、ＰＶＤＦ膜（ＭｅｒｃｋＫＧａＡ）に転写した。
前記ＰＶＤＦ膜を、３％スキムミルク（雪印メグミルク株式会社製）、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０入りＴｒｉｓ緩衝液（０．０５％Ｔｗｅｅｎ−ＴＢＳ、タカラバイオ株式会社製）で１時間ブロッキング処理した。
０．０５％Ｔｗｅｅｎ−ＴＢＳで５分間、３回洗浄した後、０．３％スキムミルク入り０．０５％Ｔｗｅｅｎ−ＴＢＳで１／２，０００に希釈した抗ＬＣ３抗体（株式会社医学生物学研究所製）を２時間反応させた。
０．０５％Ｔｗｅｅｎ−ＴＢＳで５分間、３回洗浄した後、０．３％スキムミルク入り０．０５％Ｔｗｅｅｎ−ＴＢＳで１／２，０００に希釈したＨＲＰ標識抗ウサギＩｇＧ抗体（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．）を１時間反応させた。
０．０５％Ｔｗｅｅｎ−ＴＢＳで５分間、３回洗浄した後、ＥＣＬプライム（ＧＥヘルスケア・ジャパン株式会社製）で処理を行い、発光をＬＡＳ−３０００（ＧＥヘルスケア・ジャパン株式会社製）で検出した。結果を図６Ａ〜図６Ｄに示した。

図６Ａは、ヒト培養メラノーマ株Ｍｅｗｏを、トレハロース（ＴＲＨ）、又はレンツトレハロースＡ（ＬＴＡ）で処理した結果を示し、図６Ｂは、ヒト培養メラノーマ株Ｍｅｗｏを、レンツトレハロースＢ（ＬＴＢ）、又はレンツトレハロースＣ（ＬＴＣ）で処理した結果を示し、図６Ｃは、ヒト培養卵巣がん細胞株ＯＶＫ１８を、トレハロース（ＴＲＨ）、又はレンツトレハロースＡ（ＬＴＡ）で処理した結果を示し、図６Ｄは、ヒト培養卵巣がん細胞株ＯＶＫ１８を、レンツトレハロースＢ（ＬＴＢ）、又はレンツトレハロースＣ（ＬＴＣ）で処理した結果を示す。なお、図６Ａ〜図６Ｄ中、左端の０は、トレハロース、レンツトレハロースＡ、レンツトレハロースＢ、又はレンツトレハロースＣで処理しなかった（コントロール）場合の結果を示す。
図６Ａ〜図６Ｄの結果から、レンツトレハロースＡ、レンツトレハロースＢ、及びレンツトレハロースＣは、いずれもトレハロースと同様に、１００ｍＭ程度で各がん細胞株にオートファジーを誘導し、オートファジーのマーカーであるＬＣ３の発現量を上昇させた。

＜試験例３−２＞
トレハロース、レンツトレハロースＡ、レンツトレハロースＢ、及びレンツトレハロースＣのオートファジー誘導活性を以下のようにして試験した。
ヒト培養メラノーマ株Ｍｅｗｏ（独立行政法人医薬基盤研究所ＪＣＲＢ生物資源バンクより入手）、又はヒト培養卵巣がん細胞株ＯＶＫ１８（理化学研究所バイオリソースセンターより入手）を１０体積％ＦＢＳ入りＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓＭｏｄｉｆｉｅｄＥａｇｌｅＭｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ、日水製薬株式会社製）に懸濁し、１ウェルあたり８．０×１０^３ｃｅｌｌｓ／２００μＬで９６ウェルプレートに播いた。
３７℃で４日間培養後、各ウェルより１００μＬの培地を取り出し、処理濃度が１００ｍＭとなるように、トレハロース、レンツトレハロースＡ、レンツトレハロースＢ、又はレンツトレハロースＣを溶解させた後、元のウェルに戻した。
３７℃で２４時間培養後、ＤＭＥＭで１／１０に希釈したＣｙｔｏ−ＩＤ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ検出試薬（ＥｎｚｏＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）を４μＬ／ウェルで培地に加え、細胞を処理した。
前記処理の３０分間後、培地をリン酸緩衝生理食塩水と交換し、蛍光顕微鏡（ＮｉｋｏｎＥＣＬＩＰＳＥＴＥ２０００−ＵＢｆｉｌｔｅｒ（Ｅｘ．４２０−４９０、Ｅｍ．５２０）で蛍光観察した。
なお、トレハロース、レンツトレハロースＡ、レンツトレハロースＢ、又はレンツトレハロースＣで処理しなかった（コントロール）場合も同様にして試験した。
結果を図６Ｅに示した。

図６Ｅ中、「Ｍｅｗｏ」はヒト培養メラノーマ株Ｍｅｗｏを表し、「ＯＶＫ１８」はヒト培養卵巣がん細胞株ＯＶＫ１８を表し、「ＰＣ」は位相差像を表し、「Ｃｙｔｏ−ＩＤ」はＣｙｔｏ−ＩＤ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ検出試薬を検出した像を表す。また、「ＴＲＨ」はトレハロース、「ＬＴＡ」はレンツトレハロースＡ、「ＬＴＢ」はレンツトレハロースＢ、「ＬＴＣ」はレンツトレハロースＣを表す。
オートファジーのマーカー色素であるＣｙｔｏ−ＩＤ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ検出試薬による細胞染色の結果、図６Ｅに示すように、コントロールの細胞に比べ、トレハロース、レンツトレハロースＡ、レンツトレハロースＢ、又はレンツトレハロースＣで処理した細胞では、色素の局在が核以外の細胞全体に広がり、オートファジーの活性化が確認された。

前記試験例１の結果をふまえると、トレハロースは、動物体内で速やかに分解されてグルコースとなるため、すぐに効果がなくなると考えられる。
一方、レンツトレハロースＡ、レンツトレハロースＢ、及びレンツトレハロースＣは、オートファジーの誘導活性自体はトレハロースと同程度であるものの、トレハレースにより分解されないことから、体内でより安定であると考えられ、トレハロースよりも低い濃度での効果が期待できる。また、レンツトレハロースＡ、レンツトレハロースＢ、及びレンツトレハロースＣは、血糖値を上げず、還元性の無い状態のまま循環するため、肥満や血管障害の原因となりにくいと考えられる。

（試験例４：抗酸化活性試験）
＜試験例４−１＞
トレハロース、及びレンツトレハロースＢの抗酸化作用を、ＯｘｉＳｅｌｅｃｔ^ＴＭＯｘｙｇｅｎＲａｄｉｃａｌＡｎｔｉｏｘｉｄａｎｔＣａｐａｃｉｔｙ（ＯＲＡＣ）ＡｃｔｉｖｉｔｙＡｓｓａｙ（ＣｅｌｌＢｉｏｌａｂｓ，Ｉｎｃ．）を用い、前記製品の説明書に記載の方法に従って調べた。なお、ポジティブコントロールとして、水溶性ビタミンＥ類縁体であるトロロックス（Ｔｒｏｌｏｘ）を用いた。
前記ＯｘｉＳｅｌｅｃｔ^ＴＭＯｘｙｇｅｎＲａｄｉｃａｌＡｎｔｉｏｘｉｄａｎｔＣａｐａｃｉｔｙ（ＯＲＡＣ）ＡｃｔｉｖｉｔｙＡｓｓａｙは、対象物質存在下において、活性酸素による蛍光物質の分解を継時的に観測し、その物質の抗酸化作用を調べる系である。

トレハロースの結果を図７Ａ、レンツトレハロースＢの結果を図７Ｂ、トロロックスの結果を図７Ｃに示す。
図７Ａ〜図７Ｃ中、「○」は水のみの場合の結果を示し、「●」はトレハロース、レンツトレハロースＢ、又はトロロックスの濃度が１００μＭの場合の結果を示し、「■」はトレハロース、レンツトレハロースＢ、又はトロロックスの濃度が５０μＭの場合の結果を示し、「▲」はトレハロース、レンツトレハロースＢ、又はトロロックスの濃度が２５μＭの場合の結果を示す。
図７Ａ〜図７Ｃの結果から、トロロックスと比べると弱いものの、レンツトレハロースＢは、抗酸化作用が見られた（ＯＲＡＣ値２０７．３（μｍｏｌｅＴＥ／ｇ））。一方、トレハロースは、抗酸化作用が見られず、むしろ活性酸素による蛍光物質の分解が促進されていた。

＜試験例４−２＞
レンツトレハロースＢを、水又は１５％Ｈ_２Ｏ_２水で１ｍＭとなるように溶解し、常温で６日間静置した後、質量分析装置として、ＴｈｅＡｃｃｕＴＯＦＪＭＳ−Ｔ１００ＬＣ（ＪＥＯＬ）を用い、溶解物の分子量を測定した。

レンツトレハロースＢを水に溶解させた場合の結果を図７Ｄ、レンツトレハロースＢをＨ_２Ｏ_２水に溶解させた場合の結果を図７Ｅに示す。
図７Ｄの結果から、レンツトレハロースＢは、水中では、常温で６日間後も安定であり、［Ｍ＋Ｎａ］（４３３．１８）と、そのＮａ塩のピーク（４５５．１７）とが検出された。一方、１５％Ｈ_２Ｏ_２水中では、Ｏが１つ結合したもの（４４９．１８）、Ｈ_２Ｏ_２が結合したもの（４６７．１９）、及び更にもう１つＯが結合したもの（４８３．２０）が検出された。
レンツトレハロースＢは活性酸素をトラップしやすいものと思われ、それが抗酸化作用の主因であると考えられる。

（試験例５：甘味試験）
レンツトレハロースＡ、レンツトレハロースＢ、及びレンツトレハロースＣの甘味について、以下のようにして試験した。
評価者は、Ａ〜Ｊの１０人（男性５人、女性５人）とした。
試料として、レンツトレハロースＡ、レンツトレハロースＢ、レンツトレハロースＣ、トレハロース、及びシュークロースのそれぞれについて、５００ｍｇ／ｍＬの水溶液を作製した。
評価者に、水と、試料名を伏せて前記試料とを、２０μＬずつ渡した。
前記試料のうち１０μＬを舐め、残りの１０μＬは、必要に応じて再確認に用いた。
評価者は、水を最初に舐め、その後、前記試料を順に舐めた。なお、前記試料の順番は、評価者ごとに違う順番となるように調整した。
水を０ポイント、最も甘かった試料を１０ポイントとし、それ以外の試料について相対的な点数を付けるか、又は、水を０ポイント、最初の試料を１０ポイントとし、それ以外の試料について相対的な点数を付けた。
各評価者の評価について、シュークロースが１０ポイントとなるように換算した。前記換算したポイントの平均値を算出し、任意甘味度とした。結果を表１３に示す。

表１３の結果から、レンツトレハロースＡ、レンツトレハロースＢ、及びレンツトレハロースＣは、トレハロースと同程度の甘味を有しており、甘味料としても用いることができることがわかった。

本発明の態様としては、例えば、以下のものなどが挙げられる。
＜１＞下記構造式（Ａ）で表される化合物、下記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び下記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを含むことを特徴とするオートファジー誘導剤である。
＜２＞下記構造式（Ｂ）で表されることを特徴とする化合物である。
＜３＞下記構造式（Ｃ）で表されることを特徴とする化合物である。
＜４＞下記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び下記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかの製造方法であって、
レンツィア（Ｌｅｎｔｚｅａ）属に属し、下記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び下記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを生産する能力を有する微生物を培養する培養工程と、
前記培養工程で得られた培養物から下記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び下記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを採取する採取工程とを含むことを特徴とする化合物の製造方法である。
＜５＞レンツィア（Ｌｅｎｔｚｅａ）属に属し、構造式（Ｂ）で表される化合物、及び構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを生産する能力を有する微生物が、受託番号ＮＩＴＥＢＰ−０１５８６のレンツィアエスピー（Ｌｅｎｔｚｅａｓｐ．）ＭＬ４５７−ｍＦ８株である前記＜４＞に記載の化合物の製造方法である。
＜６＞下記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び下記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを含むことを特徴とする化合物含有組成物である。
＜７＞下記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び下記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを含むことを特徴とする甘味料である。
＜８＞下記構造式（Ｂ）で表される化合物を含むことを特徴とする抗酸化剤である。

ＮＩＴＥＢＰ−０１５８６

Claims

下記構造式（Ａ）で表される化合物、下記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び下記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを含むことを特徴とするオートファジー誘導剤。
下記構造式（Ｂ）で表されることを特徴とする化合物。
下記構造式（Ｃ）で表されることを特徴とする化合物。
下記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び下記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかの製造方法であって、
レンツィア（Ｌｅｎｔｚｅａ）属に属し、下記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び下記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを生産する能力を有する微生物を培養する培養工程と、
前記培養工程で得られた培養物から下記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び下記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを採取する採取工程とを含むことを特徴とする化合物の製造方法。
レンツィア（Ｌｅｎｔｚｅａ）属に属し、構造式（Ｂ）で表される化合物、及び構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを生産する能力を有する微生物が、受託番号ＮＩＴＥＢＰ−０１５８６のレンツィアエスピー（Ｌｅｎｔｚｅａｓｐ．）ＭＬ４５７−ｍＦ８株である請求項４に記載の化合物の製造方法。
下記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び下記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを含むことを特徴とする化合物含有組成物。
下記構造式（Ｂ）で表される化合物、及び下記構造式（Ｃ）で表される化合物の少なくともいずれかを含むことを特徴とする甘味料。
下記構造式（Ｂ）で表される化合物を含むことを特徴とする抗酸化剤。