中間体化合物の製造
ステップ1:4−(4−アミノピリミジン−2−イル)ピラゾール−1−カルボン酸tert−ブチル(2)の製造
2−クロロ−4−アミノピリミジン(3.0g、23.2mmol)、4−(4,4,5,5−テトラメチル−1,3,2−ジオキサボロラン−2−イル)ピラゾール−1−カルボン酸tert−ブチル(8.2g、27.8mmol))、及び炭酸カリウム(9.6g、69.5mmol)をジオキサン(30mL)及び水(5mL)の混合溶媒に溶解させた。しばらくして、Pd(dppf)Cl2(1.7g、2.3mmol)を加えて、真空で排気し窒素ガスで置換した。窒素ガスの保護下で、反応液を80℃の油浴で2時間攪拌した。TLCで反応が完全に進行したことが測定された。反応液を冷却した後、珪藻土でろ過し、酢酸エチル(100mL)及びテトラヒドロフラン(100mL)でろ過ケーキを洗浄した。ろ液を無水硫酸ナトリウムで乾燥して、ろ過し減圧で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル/酢酸エチル=2/1〜1/1溶離)によって精製して、浅黄色油状の4−(4−アミノピリミジン−2−イル)ピラゾール−1−カルボン酸tert−ブチルを得た(4.50g、収率:59.49%)。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ=8.50 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.07 (d, J=5.8Hz, 1H), 6.92 (br. s., 2H), 6.30 (d, J=5.8Hz, 1H), 1.58 (s, 9H)。MS(ESI)計算値はC12H15N5O2[M+H]+262で、測定値は262であった。
ステップ2:4−(4−(3−(エトキシカルボニル)チオ尿素)ピリミジン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−カルボン酸tert−ブチル(3)の製造
4−(4−アミノピリミジン−2−イル)ピラゾール−1−カルボン酸tert−ブチル(4.0g、15.3mmol)を溶解させたテトラヒドロフラン(40mL)及びジクロロメタン(40mL)の溶液に、エトキシカルボニルイソチオシアナート(4g、30.6mmol)を加えて、反応液を70℃に加熱して16時間攪拌した。TLCで反応が完全に進行したことが示された。その後、反応液を減圧で濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=10:1〜2:1溶離)によって精製して、浅黄色油状の4−(4−(3−(エトキシカルボニル)チオ尿素)ピリミジン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−カルボン酸tert−ブチルを得た(4.00g、収率:63.25%)。1H NMR (400MHz, DMSO-d6)δ=12.49 (br. s., 1H), 12.16 (br. s., 1H), 8.78 (d, J=5.8Hz, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.22 (br. s., 1H), 4.27 (q, J=7.1Hz, 2H), 1.62 (s, 9H), 1.30 (t, J=7.2Hz, 3H)。MS(ESI)計算値はC16H20N6O4S[M+H]+393で、測定値は393であった。
ステップ3:5−(1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−2−アミン(中間体1)の製造
塩酸ヒドロキシルアミン(3.5g、50.9mmol)を溶解させたメタノール(50mL)及びエタノール(50mL)溶液にDIEA(4.0g、30.6mmol)を加えて、生成した混濁液を26℃で1時間攪拌した後、4−(4−(3−(エトキシカルボニル)チオ尿素)ピリミジン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−カルボン酸tert−ブチル(4.0g、10.2mmol)を加えて、反応液を90℃に加熱して3時間還流した。TLCで反応が完全に進行したことが示された。反応液を減圧で濃縮し水(20mL)を加えて、生成した沈殿物をろ過し収集し真空で乾燥して、白色固体の5−(1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−2−アミンを得た(1.7g、収率:82.9%)。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ=13.53 (br. s., 1H), 8.87 (br. s., 1H), 8.47 (br. s., 1H), 8.10 (d, J=6.0Hz, 1H), 7.23 (d, J=6.0Hz, 1H), 6.50 (s, 2H)。MS(ESI)計算値はC8H7N7[M+H]+202で、測定値は202であった。
ステップ4:3−[4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−5−イル)ピラゾール−1−イル]−3−(シアノメチル)アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチル(中間体2)の製造
中間体1(500mg、2.5mmol)を微溶したアセトニトリル(10mL)の懸濁液に、3−(シアノメチルアルケニル)アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチル(600mg、3.1mmol)及びDBU(756mg、4.97mmol)を加えて、反応液を26℃で16時間攪拌した。TLCで反応が完全に進行したことが示された。反応液を減圧で濃縮して、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=1:1〜1:3溶離)によって精製して、白色固体の3−[4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−5−イル)ピラゾール−1−イル]−3−(シアノメチル)アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチルを得た(800mg、収率:81.3%)。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ=9.03 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.17 (d, J=6.0Hz, 1H), 7.24 (d, J=6.0Hz, 1H), 4.83 (s, 2H), 4.57 (d, J=9.8Hz, 2H), 4.33 (d, J=9.8Hz, 2H), 3.36 (s, 2H), 1.49 (s, 9H)。MS(ESI)計算値はC18H21N9O2[M+H]+396で、測定値は396であった。
ステップ5:2−[3−[4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−5−イル)ピラゾール−1−イル]アゼチジン−3−イル]アセトニトリル(中間体3)の製造
中間体2(500mg、1.3mmol)のDCM(10mL)溶液に15℃でTFA(4mL)を加え、該温度で3時間攪拌し反応させた。反応が完成した後、反応液を減圧で濃縮して、褐色固体の2−[3−[4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−5−イル)ピラゾール−1−イル]アゼチジン−3−イル]アセトニトリルを得た(515mg、収率:99.9%、TFA塩)。MS(ESI)計算値はC13H13N9[M+H]+296で、測定値は296であった。
ステップ6:3−(シアノメチル)−3−[4−[2−(シクロプロパンカルボニルアミノ)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−5−イル]ピラゾール−1−イル]アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチル(中間体4)の製造
3−[4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−5−イル)ピラゾール−1−イル]−3−(シアノメチル)アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチル(400mg、1.0mmol)を微溶したアセトニトリル(8mL)の混濁液に、シクロプロパンカルボニルクロリド(317mg、3.0mmol)及びトリエチルアミン(307mg、3.0mmol)を加えて、反応液を26℃で16時間攪拌した。TLCで反応が完全に進行したことが示され、LC−MSで全てが二置換の産物を生成したと示された。反応液を減圧で濃縮した後、メチルアミンのエタノール溶液(27%〜32%、3mL)を加えて、26℃で0.5時間攪拌した。LC−MSで全てが一置換の目標産物を生成したと示された。反応液を減圧で濃縮して、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=1:1〜1:3溶離)によって精製して、白色固体の3−(シアノメチル)−3−[4−[2−(シクロプロパンカルボニルアミノ)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−5−イル]ピラゾール−1−イル]アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチルを得た(420mg、収率:89.7%)。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=9.31 (s, 1H), 9.11 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.28 (d, J=6.0Hz, 1H), 7.42 (d, J=6.0Hz, 1H), 4.58 (d, J=9.5Hz, 2H), 4.34 (d, J=9.5Hz, 2H), 3.37 (s, 2H), 1.50 (s, 9H), 1.31-1.22 (m, 3H), 1.03 (qd, J=3.7, 7.4Hz, 2H)。MS(ESI)計算値はC22H25N9O3[M+H]+464で、測定値は464であった。
ステップ7:N−[5−[1−[3−(シアノメチル)アゼチジン−3−イル]ピラゾール−4−イル]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−2−イル]シクロプロパンカルボキサミド(中間体5)の製造
3−(シアノメチル)−3−[4−[2−(シクロプロパンカルボニルアミノ)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−5−イル]ピラゾール−1−イル]アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチル(220mg、474.7umol)を溶解させたジクロロメタン溶液(8mL)に、トリフルオロ酢酸(2mL)を加えて、反応液を26℃で2時間攪拌した。TLCで反応が完全に進行したことが示された。反応液を減圧で濃縮して、浅黄色固体のN−[5−[1−[3−(シアノメチル)アゼチジン−3−イル]ピラゾール−4−イル]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−2−イル]シクロプロパンカルボキサミド(280mg、粗製品、そのまま次の反応に用いた)を得た。MS(ESI)計算値はC17H17N9O[M+H]+364で、測定値は364であった。
中間体6〜8の製造
ステップ1:エチル−N−[(6−ブロモ−2−ピペリジル)チオカルバモイル]カルバミン酸(2)の製造
6−ブロモピリジン−2−アミン(30g、173.4mmol)を溶解させたジクロロメタン(400mL)に、イソチオシアン酸エチル(25.0g、190.7mmol)をゆっくりと滴加した後、25℃で16時間反応させた。TLCで監視して反応が完全に進行したことが示された。反応液を減圧で蒸留して、得られた残留物を200mLの石油エーテルで30分間攪拌し洗浄して、ろ過し、ろ過ケーキを収集し干燥して、浅赤色固体のエチル−N−[(6−ブロモ−2−ピペリジル)チオカルバモイル]カルバミン酸を得た(51g、収率:96.7%)。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ=12.17 (s, 1 H), 11.66 (br. s., 1H), 8.65 (d, J=7.54Hz, 1H), 7.82 (t, J=7.92Hz, 1H), 7.49 (d, J=7.78Hz, 1H), 4.22 (q, J=7.18Hz, 2H), 1.25 (t, J=7.16Hz, 3H)。MS(ESI)計算値はC9H10BrN3O2S[M+H]+304で、測定値は304であった。
ステップ2:5−ブロモ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリジン−2−アミン(3)の製造
塩酸ヒドロキシルアミン(35.2g、503.1mmol)、ジイソプロピルエチルアミン(54.1g、419.3mmol)をエタノール(500mL)及びメタノール(500mL)の混合溶媒に溶解させ、25℃で1時間攪拌した後、エチル−N−[(6−ブロモ−2−ピペリジル)チオカルバモイル]カルバミン酸(51.0g、167.7mmol)を加えて、窒素ガスで3回置換した後、80℃に加熱して3時間反応させ冷却した。TLCで監視して反応が完全に進行したことが示された。反応液を減圧で蒸留して、得られた残留物を水(500mL)で10分間攪拌し洗浄した。ろ過し、ろ過ケーキを収集し乾燥して、白色固体の5−ブロモ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリジン−2−アミンを得た(32g、収率:85.1%)。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) 7.30-7.39 (m, 1H), 7.20 (dd, J=6.78, 1.76Hz, 1H), 6.27 (s, 2H)。MS(ESI)計算値はC6H5BrN4[M+H]+215で、測定値は215であった。
ステップ3:N−(5−ブロモ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−イル)シクロプロピルホルムアミド(4)の製造
0℃で、5−ブロモ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−アミン(15.00g、70.41mmol)及びトリエチルアミン(21.4g、211.2mmol)を溶解させたアセトニトリル(150mL)に、シクロプロパンカルボニルクロリド(8.8g、84.5mmol)をゆっくりと滴加した後、混合液を室温に昇温させ、16時間反応させた。TLCで監視して反応が完全に進行したことが示された。反応液を減圧で蒸留して、得られた残留物をメチルアミン(150mL)溶液に溶解させ、80℃に加熱して1時間反応させ、冷却した。減圧で蒸留して、再度得られた残留物を水(100mL)及び酢酸エチル(200mL)の混合液に溶解させ、層分離させて抽出した。得られた有機相を合併し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、ろ過し、ろ液を減圧で蒸留した。得られた粗製品をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル/石油エーテル=0〜70%溶離)によって精製して、浅黄色固体のN−(5−ブロモ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−イル)シクロプロピルホルムアミドを得た(7.2g、収率:56.64%)。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ=11.20 (br. s., 1H), 7.68-7.73 (m, 1H), 7.52-7.58 (m, 1H), 7.46-7.51 (m, 1H), 1.96-2.09 (m, 1H), 0.82 (d, J=6.28Hz, 4H)。MS(ESI)計算値はC10H9BrN4O[M+H]+282で、測定値は282であった。
ステップ4:N−[5−(1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−イル]シクロプロパンカルボキサミド(中間体6)の製造
窒素ガス雰囲気下において、N−(5−フルオロ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−イル)シクロプロパンカルボキサミド (3.0g、10.67mmol)、4−(4,4,5,5−テトラメチル−1,3,2−ジオキサボロラン−2−イル)−1H−ピラゾール(2.4g、12.9mmol)、及び炭酸カリウム(3.7g、26.7mmol)を溶解させたジオキサン(30mL)及び水(5mL)の混合液にPd(dppf)Cl2(260mg)を加えて、得られた混合液を110℃に加熱して3時間反応させた。室温に冷却して、TLCで監視して反応が完全に進行したと示された。反応液をろ過し、ろ液を水(150mL)で洗浄し、酢酸エチル(150mL×3)で抽出した。得られた有機相を合併し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、ろ過し、ろ液を減圧で蒸留した。得られた粗製品をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル/石油エーテル=50〜100%溶離)によって精製して、灰色固体のN−[5−(1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−イル]シクロプロパンカルボキサミドを得た(2.1g、収率:62.4%)。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ=13.37 (br. s., 1H), 11.15 (br. s., 1H), 8.96 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.57-7.72 (m, 2H), 7.51 (d, J=8.28Hz, 1H), 2.06 (br. s., 1H), 0.78-0.91 (m, 4H). MS(ESI)計算値はC13H12N6O[M+H]+269で、測定値は269であった。
ステップ5:3−(シアノメチル)−3−[4−[2−(シクロプロパンカルボニルアミノ)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジ−5−イル]ピラゾール−1−イル]アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチル(中間体7)の製造
N−[5−(1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−イル]シクロプロパンカルボキサミド(200mg、745.5umol)、3−(シアノメチレン)アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチル(144.8mg、745.5umol)を溶解させたアセトニトリル溶液(5mL)にDBU(340.49mg、2.3mmol)を加えて、室温で16時間反応させた。LCMSで監視して反応が完全に進行したことが示された。その後、反応液を減圧で蒸留して、得られた残留物を水(20mL)及び酢酸エチル(20mL)の混合液に溶解させ、層分離させて抽出した。得られた有機相を合併し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、ろ過し、ろ液を減圧で蒸留した。得られた粗製品を分取TLC(純粋な酢酸エチル)によって精製して、浅黄色固体の3−(シアノメチル)−3−[4−[2−(シクロプロパンカルボニルアミノ)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−5−イル]ピラゾール−1−イル]アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチルを得た(170mg、収率:44.4%)。MS(ESI)計算値はC23H26N8O3[M+H]+463で、測定値は463であった。
ステップ6:N−[5−[1−[3−(シアノメチル)アゼチジン−3−イル]ピラゾール−4−イル]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−イル]シクロプロパンカルボキサミド(中間体8)(WX00)の製造
3−(シアノメチル)−3−[4−[2−(シクロプロパンカルボニルアミノ)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−5−イル]ピラゾール−1−イル]アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチル(150mg、324.3umol)を溶解させたジクロロメタン溶液(5mL)にトリフルオロ酢酸(1mL)を加えて、室温で2時間反応させた。LCMSで監視して反応が完全に進行したことが示された。反応液を減圧で蒸留して、黄色油状のN−[5−[1−[3−(シアノメチル)アゼチジン−3−イル]ピラゾール−4−イル]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−イル]シクロプロパンカルボキサミドの粗製品(100mg)を得て、そのまま次の反応に用いた。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ=11.16 (br. s., 1H), 9.18 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 7.75-7.63 (m, 2H), 7.61-7.50 (m, 1H), 4.00 (d, J=9.0Hz, 2H), 3.71 (d, J=9.0Hz, 2H), 3.57 (s, 2H), 2.13 (br. s., 1H), 0.95-0.81 (m, 4H).MS(ESI)計算値はC18H18N8O[M+H]+363で、測定値は363であった。
中間体9の製造
ステップ1:3−(シアノメチル)アゼチン−1−炭酸tert−ブチル(1)の製造
氷浴による冷却下で、水素化ナトリウム (1.2g、30.7mmol)のテトラヒドロフラン(50mL)溶液に、シアノメチル亜リン酸ジエチル(5.7g、32.1mmol)のテトラヒドロフラン(50mL) 溶液を滴加した後、混合物を25℃で1時間攪拌して、再度0℃に冷却した。その後、1時間かけて3−アゼチジノン−1−炭酸tert−ブチル(5.0g、29.2mmol)のテトラヒドロフラン(50mL)溶液を滴加して、混合物を25℃で16時間攪拌し反応させた。反応が完成した後、反応液を水(80mL)でクエンチングし、酢酸エチル(80mL×3)で抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、スピンドライして、黄色固体の粗製品3−(シアノメチル)アゼチン−1−炭酸tert−ブチルを得て(5.2g、収率:78.0%)、粗製品を精製せず、そのまま次の反応に用いた。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ=5.38 (t, J=2.5Hz, 1H), 4.73-4.68 (m, 2H), 4.61 (td, J=2.4, 4.3Hz, 2H), 1.45 (s, 9H)。MS(ESI)計算値はC10H14N2O2[M+H]+195で、測定値は195であった。
ステップ2:2−(アゼチジン−3−エニル)アセトニトリル(2)の製造
3−(シアノメチル)アゼチン−1−炭酸tert−ブチル(5.2g、26.8mmol)を少量の酢酸エチル(5mL)で浸透して、均一に攪拌した後、0℃で塩酸酢酸エチル(150mL)を加えて、0℃で1時間攪拌した。TLC(石油エーテル:酢酸エチル=5:1)で反応が完全に進行したことが測定された。反応によって得られた黄色の懸濁液をろ過し、固体を少量の冷たい酢酸エチル(5mL×2)で洗浄し、真空で乾燥して、白色固体の2−(アゼチジン−3−エニル)アセトニトリル(2.8g、収率:80.0%)を得た。1H NMR (400MHz, D2O) δ=5.69-5.65 (m, 1H), 4.95 (d, J=2.5Hz, 2H), 4.88 (br. s., 2H)。MS(ESI)計算値はC5H6N2[M+H]+95で、測定値は95であった。
ステップ3:2−(1−(エチルスルホニル)アゼチジン−3−エニル)アセトニトリル(中間体9)の製造
窒素ガスの保護下で、0℃で、2−(アゼチジン−3−エニル)アセトニトリル(2.8g、21.4mmol)及びDIPEA(8.3g、64.3mmol)のジクロロメタン溶液(30mL)に、エタンスルホニルクロリド(4.1g、32.1mmol)を滴加して、その時、温度を2℃以下に保持した。反応混合物を25℃で16時間攪拌し反応させた。TLC(石油エーテル:酢酸エチル=1:1)で反応が完全に進行したことが測定された。反応液を水でクエンチングし、ジクロロメタン(30mL×2)で抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(20mL×2)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、ろ過しスピンドライした。残留物をカラムクロマトグラフィー(ジクロロメタン:酢酸エチル=3/1)によって精製して、浅黄色固体の2−(1−(エチルスルホニル)アゼチジン−3−エニル)アセトニトリルを得た(1.4g、収率:33.0%)。
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ=5.50-5.41 (m, 1H), 4.79 (d, J=3.0Hz, 2H), 4.71 (d, J=2.5Hz, 2H), 3.06 (q, J=7.4Hz, 2H), 1.40 (t, J=7.4Hz, 3H)。MS(ESI)計算値はC7H10N2O2S[M+H]+187で、測定値は187であった。
ステップ3’:2−(1−シクロプロパンスルホニルアゼチジン−3−アルケニル)アセトニトリル(中間体10)の製造
中間体9の製造と同様の製造方法により、中間体10を製造した。浅黄色固体の2−(1−シクロプロパンスルホニルアゼチジン−3−アルケニル)アセトニトリル(1.5g)を得た。MS(ESI)計算値はC7H10N2O2S[M+H]+199で、測定値は199であった。
実施例1
ステップ1:2−[3−[4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−5−イル)ピラゾール−1−イル]−1−エチルスルホニルアゼチジン−3−イル]アセトニトリル(1)の製造
中間体1(150mg、745.6umol)を微溶させたアセトニトリル(4mL)及びDMF(2mL)の懸濁液に、中間体9(208mg、1.1mmol)及びDBU(227mg、1.5mmol)を加えて、反応液を26℃で16時間攪拌した。LC−MSで反応が完全に進行したことが示された。析出した固体をろ過し収集して、冷アセトニトリル(5mL)で洗浄し、減圧で乾燥して、白色固体の2−[3−[4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−5−イル)ピラゾール−1−イル]−1−エチルスルホニルアゼチジン−3−イル]アセトニトリルを得た(200mg、収率:69.2%)。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ=9.16 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.16 (d, J=6.3Hz, 1H), 7.31 (d, J=6.0Hz, 1H), 6.56 (s, 2H), 4.53 (d, J=9.0Hz, 2H), 4.28 (d, J=9.0Hz, 2H), 3.70 (s, 2H), 3.25 (q, J=7.4Hz, 2H), 1.25 (t, J=7.4Hz, 3H)。MS(ESI)計算値はC15H17N9O2S[M+H]+388で、測定値は388であった。
ステップ2:N−[5−[1−[3−(シアノメチル)−1−エチルスルホニルアゼチジン−3−イル]ピラゾール−4−イル]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−2−イル]シクロプロパンカルボキサミド(WX01)の製造
2−[3−[4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−5−イル)ピラゾール−1−イル]−1−エチルスルホニルアゼチジン−3−イル]アセトニトリル(100mg、258.1umol)を微溶させたアセトニトリル(2mL)及びテトラヒドロフラン(1mL)の懸濁液に、シクロプロパンカルボニルクロリド(80.9mg、774.4umol)及びトリエチルアミン(78mg、774.4umol)を加えて、反応液を26℃で16時間攪拌した。TLCで反応が完全に進行したことが示され、LC−MSで全てが二置換の産物を生成したことが示された。反応液を減圧で濃縮した後、メチルアミンのエタノール溶液(27%〜32%、3mL)を加えて、26℃で0.5時間攪拌し反応させた。LC−MSで全てが一置換の産物を生成したことが示された。反応液を減圧で濃縮して、分取HPLC(アルカリ性条件)によって精製して、N−[5−[1−[3−(シアノメチル)−1−エチルスルホニルアゼチジン−3−イル]ピラゾール−4−イル]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−2−イル]シクロプロパンカルボキサミドを得た(25mg、収率:21.1%)。
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ= 11.43 (br. s., 1H), 9.25 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.32 (d, J=6.0Hz, 1H), 7.60 (d, J=6.3Hz, 1H), 4.50 (d, J=9.0Hz, 2H), 4.28 (d, J=9.0Hz, 2H), 3.70 (s, 2H), 3.24 (q, J=7.3Hz, 2H), 2.18-2.02 (m, 1H), 1.23 (t, J=7.3Hz, 3H), 0.95-0.80 (m, 4H)。MS(ESI)計算値はC19H21N9O3S[M+H]+456で、測定値は456であった。
実施例2
ステップ1:N−[5−[1−[3−(シアノメチル)−1−(トリフルオロメチルスルホニル)アゼチジン−3−イル]ピラゾール−4−イル]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−2−イル]シクロプロパンカルボキサミド(WX02)の製造
中間体5(100mg、209.5umol)を微溶させたジクロロメタンの混濁液(3mL)に、トリフルオロメタンスルホニルクロリド(53mg、314.2umol)及びトリエチルアミン(106mg、1.1mmol)を加えて、反応液を26℃で16時間攪拌した。LC−MSで反応が完全に進行したことが示された。反応液を減圧で濃縮して、分取HPLC(アルカリ性条件)によって精製して、N−[5−[1−[3−(シアノメチル)−1−(トリフルオロメチルスルホニル)アゼチジン−3−イル]ピラゾール−4−イル]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−2−イル]シクロプロパンカルボキサミド(25mg、収率:24.1%)を得た。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ=11.45 (br. s., 1H), 9.27 (s, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.35 (d, J=6.0Hz, 1H), 7.63 (d, J=6.3Hz, 1H), 4.90 (d, J=9.0Hz, 2H), 4.72 (d, J=9.0Hz, 2H), 3.85 (s, 2H), 1.30-1.23 (m, 1H), 0.97-0.87 (m, 4H)。MS(ESI)計算値はC18H16F3N9O3S[M+H]+496で、測定値は496であった。
実施例3
ステップ1:2−[3−[4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−5−イル)ピラゾール−1−イル]−1−シクロプロパンスルホニル−アゼチジン−3−イル]アセトニトリル(2)の製造
中間体1(150mg、745.6umol)を溶解させたアセトニトリルの懸濁液(4mL)に、中間体10(192mg、969.2umol)及びDBU(227mg、1.5mmol)を加えて、反応液を26℃で16時間攪拌した。TLCで反応が完全に進行したことが示された。析出した固体をろ過し収集して、冷アセトニトリル(5mL)で洗浄し、減圧で乾燥して、白色固体の2−[3−[4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−5−イル)ピラゾール−1−イル]−1−シクロプロパンスルホニル−アゼチジン−3−イル]アセトニトリルを得た(200mg、収率:67.2%)。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ=9.18 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.15 (d, J=6.3Hz, 1H), 7.30 (d, J=6.0Hz, 1H), 6.56 (s, 2H), 4.59 (d, J=9.3Hz, 2H), 4.33 (d, J=9.3Hz, 2H), 3.70 (s, 2H), 2.90-2.82 (m, 1H), 1.09-1.03 (m, 2H), 1.03-0.96 (m, 2H)。MS(ESI)計算値はC16H17N9O2S[M+H]+400で、測定値は400であった。
ステップ2:N−[5−[1−[3−(シアノメチル)−1−シクロプロパンスルホニル−アゼチジン−3−イル]ピラゾール−4−イル]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−2−イル]シクロプロパンカルボキサミド(WX03)の製造
2−[3−[4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−5−イル)ピラゾール−1−イル]−1−シクロプロパンスルホニル−アゼチジン−3−イル]アセトニトリル(80mg、200.3umol)を微溶させたアセトニトリルの懸濁液(2mL)に、シクロプロパンカルボニルクロリド(63mg、600.9umol)及びトリエチルアミン(61mg、600.9umol)を加えて、反応液を26℃で16時間攪拌した後、80℃で再度3時間攪拌した。LC−MSで一置換の産物と二置換の産物との混合物を生成したことが示された。反応液を減圧で濃縮した後、メチルアミンのエタノール溶液(27%〜32%、3mL)を加えて、26℃で0.5時間攪拌した。LC−MSで全てが一置換の産物を生成したことが示された。反応液を減圧で濃縮して、分取HPLC(アルカリ性条件)によって精製して、N−[5−[1−[3−(シアノメチル)−1−シクロプロパンスルホニル−アゼチジン−3−イル]ピラゾール−4−イル]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−2−イル]シクロプロパンカルボキサミド(60mg、収率:64.1%)を得た。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ=11.43 (s, 1H), 9.27 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.32 (d, J=6.0Hz, 1H), 7.60 (d, J=6.0Hz, 1H), 4.57 (d, J=9.3Hz, 2H), 4.32 (d, J=9.3Hz, 2H), 3.70 (s, 2H), 2.92-2.79 (m, 1H), 2.07 (d, J=13.6Hz, 1H), 1.07-0.96 (m, 4H), 0.91-0.83 (m, 4H)。MS(ESI)計算値はC20H21N9O3S[M+H]+468で、測定値は468であった。
実施例4
ステップ1:2−[3−[4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−5−イル)ピラゾール−1−イル]−1−メタンスルホニル−アゼチジン−3−イル]アセトニトリル(WX04)の製造
中間体3(1.0g、2.4mmol、TFA塩)及びトリエチルアミン(617mg、6.1mmol)を溶解させたDCM溶液(50mL)に、15℃で、MsCl(307mg、2.7mmol)を滴加して、反応混合物を15℃で2時間攪拌した。反応が完了した後、反応物を濃縮し乾燥して、得られた固体を分取HPLC(アルカリ法)によって分離し精製して、2−[3−[4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−5−イル)ピラゾール−1−イル]−1−トリフルオロメタンスルホニル−アゼチジン−3−イル]アセトニトリル(800mg、収率:87.8%)を得た。
1H-NMR (400MHz, DMSO-d6) δ=9.17 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.15 (d, J=6.0Hz, 1H), 7.30 (d, J=6.0Hz, 1H), 6.56 (brs, 2H), 4.55 (d, J=9.2Hz, 2H), 4.31 (d, J=9.2Hz, 2H), 3.69 (s, 2H), 3.14 (s, 3H)。MS(ESI)計算値はC14H12F3N9O2S[M+H]+428で、測定値は428であった。
実施例5
ステップ1:2−[3−[4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−5−イル)ピラゾール−1−イル]−1−(トリフルオロメタンスルホニル)アゼチジン−3−イル]アセトニトリル(WX05)の製造
中間体3(515mg、1.7mmol)及びTEA(264mg、2.6mmol)を溶解させたDCM(10mL)溶液に、窒素ガスの保護下、15℃でトリフルオロメタンスルホニルクロリド(323mg、1.9mmol)を滴加して、反応混合物を15℃で3時間攪拌した。反応が完全に進行した後、濃縮し乾燥して、得られた固体を水(20mL)で叩解してろ過し、ろ過ケーキを乾燥して、白色固体の2−[3−[4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−5−イル)ピラゾール−1−イル]−1−(トリフルオロメタンスルホニル)アゼチジン−3−イル]アセトニトリルを得た(700mg、収率:94.1%)。1H-NMR (400MHz, DMSO-d6) δ=9.18 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.15 (d, J=6.0Hz, 1H), 7.30 (d, J=6.0Hz, 1H), 6.55 (brs, 2H), 4.91 (d, J=9.2Hz, 2H), 4.70 (d, J=9.2Hz, 2H), 3.82 (s, 2H)。MS(ESI)計算値はC14H12F3N9O2S[M+H]+428で、測定値は428であった。
ステップ2:N−[5−[1−[3−(シアノメチル)−1−(トリフルオロメタンスルホニル)アゼチジン−3−イル]ピラゾール−4−イル]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−2−イル]アゼチジン−3−ホルムアミド(WX06)の製造
N−(tert−ブチルオキシカルボニル)アゼチジン−3−カルボン酸(198mg、982.8umol)及びDMF(100uL)のDCM(10mL)溶液に、窒素ガスの保護下、0℃で塩化オキサリル(156mg、1.23mmol)のDCM(1mL)溶液を滴加した後、反応混合物を0℃で2時間攪拌した。その後、反応混合物を15℃で、減圧で濃縮して、得られた液体をDCM(2mL)に溶解させ、それを窒素ガスの保護下、0℃で、注射器で2−[3−[4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−5−イル)ピラゾール−1−イル]−1−(トリフルオロメタンスルホニル)アゼチジン−3−イル]アセトニトリル(350mg、818.9umol)のDCM(10mL)溶液に滴加した後、反応混合物を0℃で2時間攪拌した。反応液をそのまま分取薄層クロマトグラフィー(DCM/MeOH=10/1)によって精製して、Boc保護の産物(10mg)を得た。該産物をDCM(2mL)に溶解させ、15℃で、該溶液にTFA(2mL)を加えて、得られた混合物を15℃で1時間攪拌した。反応が完成した後、濃縮し乾燥して、得られた固体を分取HPLC(アルカリ法)によって分離し精製して、N−[5−[1−[3−(シアノメチル)−1−(トリフルオロメタンスルホニル)アゼチジン−3−イル]ピラゾール−4−イル]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−2−イル]アゼチジン−3−ホルムアミドを得た(2mg、収率:0.42%)。MS(ESI)計算値はC18H17F3N10O3S[M+H]+511で、測定値は511であった。
実施例6
ステップ1:3−(シアノメチル)−3−[4−[2−[(3−ヒドロキシシクロブタンホルミル)アミノ]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−5−イル]ピラゾール−1−イル]アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチル(1)の製造
中間体2(300mg、758.7umol)、3−ヒドロキシシクロブタンカルボン酸(106mg、910.4umol)及びEDCI(218mg、1.1mmol)の混合物をピリジン(10mL)に加えて、得られた混合物を窒素ガスの保護下で、16時間加熱し還流した。濃縮して乾燥した後、残った固体を分取薄層クロマトグラフィー(DCM/MeOH=10/1)によって精製して、白色固体の3−(シアノメチル)−3−[4−[2−[(3−ヒドロキシシクロブタンホルミル)アミノ]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−5−イル]ピラゾール−1−イル]アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチルを得た(36mg、収率:9.61%)。MS(ESI)計算値はC23H27N9O4[M+H]+494で、測定値は494であった。
ステップ2:N−[5−[1−[3−(シアノメチル)アゼチジン−3−イル]ピラゾール−4−イル]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−2−イル]−3−ヒドロキシ−シクロブタンホルムアミド(2)の製造
3−(シアノメチル)−3−[4−[2−[(3−ヒドロキシシクロブタンホルミル)アミノ]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−5−イル]ピラゾール−1−イル]アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチル(36mg、72.9umol)のジクロロメタン溶液(2.00mL)に、15℃で、TFA(1mL)を滴加して、得られた混合物を15℃で30分間攪拌した。LCMSで反応が完全に進行したことが示された。反応混合物を30℃で濃縮し乾燥して、黄色固体のN−[5−[1−[3−(シアノメチル)アゼチジン−3−イル]ピラゾール−4−イル]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−2−イル]−3−ヒドロキシ−シクロブタンホルムアミドを得た(37mg、収率:99.9%、TFA塩)。MS(ESI)計算値はC18H19N9O2[M+H]+394で、測定値は394であった。
ステップ3:N−[5−[1−[3−(シアノメチル)−1−(トリフルオロメタンスルホニル)アゼチジン−3−イル]ピラゾール−4−イル]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−2−イル]−3−ヒドロキシ−シクロブタンホルムアミド(WX07)の製造
N−[5−[1−[3−(シアノメチル)アゼチジン−3−イル]ピラゾール−4−イル]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−2−イル]−3−ヒドロキシ−シクロブタンホルムアミド(15mg、29.6umol)及びトリエチルアミン(9mg、88.7umol)のDCM溶液(5.00mL)に、N2保護下、20℃で、トリフルオロメタンスルホニルクロリド(7mg、44.34umol)のDCM溶液(1mL)を滴加した後、当該混合物を20℃で1時間攪拌した。反応が完成した後、反応液を濃縮して乾燥させた。得られた固体を分取HPLC(0.1%、NH4OHは添加物である)によって分離し精製して、N−[5−[1−[3−(シアノメチル)−1−(トリフルオロメタンスルホニル)アゼチジン−3−イル]ピラゾール−4−イル]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−2−イル]−3−ヒドロキシ−シクロブタンホルムアミドを得た(8mg、収率:51.50%)。1H-NMR (400MHz, MeOD-d4) δ=9.29 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.32 (d, J=6.4Hz, 1H), 7.49 (d, J=6.0Hz, 1H), 5.00 (d, J=9.6 Hz, 2H), 4.70 (d, J=9.2Hz, 2H), 4.05-4.13 (m, 1H), 3.70 (s, 2H), 2.90 (brs, 1H), 2.50-2.66 (m, 2H), 2.20-2.35 (m, 2H)。MS(ESI)計算値はC19H18F3N9O4S[M+H]+526で、測定値は526であった。
実施例7
ステップ1:N−(5−(1−(3−(シアノメチル)−1−(トリフルオロメチルスルホニル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−イル)シクロプロパンカルボキサミドの製造
0℃で、中間体8(100mg、275.9umol)及びトリエチルアミン(84mg、827.9umol)を溶解させたジクロロメタン(5mL)に、トリフルオロメチルスルホニルクロリド(56mg、331.4umol)をゆっくりと滴加した後、混合物を室温に昇温させ、16時間反応させた。LCMSで監視して反応が完全に進行したことが示された。反応液を水(20mL)で希釈し、ジクロロメタン(20mL×3)で抽出した。得られた有機相を合併し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、ろ過し、ろ液を減圧で蒸留して、得られた残留物を分取薄層クロマトグラフィー(酢酸エチル)によって精製して、白色固体のN−(5−(1−(3−(シアノメチル)−1−(トリフルオロメチルスルホニル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−イル)シクロプロパンカルボキサミド(WX09、45mg、収率:31.33%)を得た。1H NMR (400MHz, METHANOL-d4) δ=9.21 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 7.71-7.77 (m, 1H), 7.60 (dd, J=14.44, 8.16Hz, 2H), 5.00 (d, J=9.04Hz, 2H), 4.70 (d, J=9.04Hz, 2H), 3.68 (s, 2H), 1.28-1.39 (m, 1H), 1.11 (quin, J=3.84Hz, 2H), 0.97-1.04 (m, 2 H)。MS(ESI)計算値はC19H17N8O3F3S[M+H]+495で、測定値は495であった。
WX08の製造:WX09(ステップ1)と同様の製造方法により製造した。N−(5−(1−(3−(シアノメチル)−1−(シクロプロパンスルホニル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−イル)シクロプロパンカルボキサミド(WX08)を得た。1H NMR (400MHz, METHANOL-d4) δ=9.23 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 7.71-7.76 (m, 1H), 7.58-7.65 (m, 2H), 4.70 (d, J=9.28Hz, 2H), 4.39 (d, J=9.04Hz, 2H), 3.64 (s, 2H), 2.72 (dt, J=12.74, 6.31Hz, 1H), 1.78 (d, J=7.04Hz, 1H), 1.08-1.14 (m, 6H), 1.00 (dd, J=7.28, 3.26Hz, 2H)。MS(ESI)計算値はC21H22N8O3S[M+H]+467で、測定値は467であった。
実施例8
ステップ1:N−[5−[1−[3−(シアノメチル)−1−(2−メトキシアセチル)アゼチジン−3−]ピラゾール−4−]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン2−]シクロプロパンカルボキサミドの製造
2−メトキシ酢酸(11mg、128.4umol)を混合溶媒DCM/DMF(6mL、5:1)に溶解させ、順にHOBt(35mg、256.9umol)及びEDCI(49mg、256.9umol)を加えて、得られた混合物を1時間攪拌し反応させた。中間体5(70mg、192.6umol)及びDIEA(50mg、385.3umol)を加えて、15℃で12時間攪拌し反応させた。LC−MSで原料が全て消耗して目標産物が生成したことが示された。反応液を減圧で濃縮してDCM及びDMFを除去した。分取HPLC(アルカリ性)によって分離して、N−[5−[1−[3−(シアノメチル)−1−(2−メトキシアセチル)アゼチジン−3−]ピラゾール−4−]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン2−]シクロプロパンカルボキサミドを得た(30mg、収率:53.7%)。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ=9.26 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.34 (d, J=6.0Hz, 1H), 7.61 (d, J=6.3Hz, 1H), 4.81 (d, J=10.0Hz, 1H), 4.61 (d, J=10.0Hz, 1H), 4.46 (d, J=10.5Hz, 1H), 4.33 (d, J=10.3Hz, 1H), 4.01 (s, 2H), 3.72 (s, 2H), 3.32 (s, 3H), 2.12 (br. s., 1H), 0.98-0.84 (m, 4H)。MS(ESI)計算値はC20H21N9O3[M+H]+436で、測定値は436であった。
実施例9
ステップ1:N−[5−[1−[3−(シアノメチル)−1−(シクロプロピルカルボニル)アゼチジン−3−]ピラゾール−4−]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−2−]シクロプロパンカルボキサミドの製造
中間体5(79mg、216.3umol)をジクロロメタン(3mL)に溶解させ、DIEA(84mg、648.9umol)を加えた後、5分間以内に、注射器でシクロプロパンカルボニルクロリド(27mg、259.6umol)を加えて、15℃で反応液を3時間撹拌し反応させた。LC−MSで原料が全て消耗して目的産物が生成したことが示された。反応液を減圧で濃縮してDCM及びDMFを除去した。分取HPLC(アルカリ性)によって分離して、N−[5−[1−[3−(シアノメチル)−1−(シクロプロピルカルボニル)アゼチジン−3−]ピラゾール−4−]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−2−]シクロプロパンカルボキサミドを得た(50mg、53.6%)。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ=9.25 (s, 1H), 8.83-8.78 (m, 1H), 8.32 (dd, J=3.8, 6.0Hz, 1H), 7.60-7.52 (m, 1H), 4.88 (d, J=9.3Hz, 1H), 4.68 (d, J=9.5Hz, 1H), 4.44 (d, J=10.5Hz, 1H), 4.29 (d, J=10.3Hz, 1H), 3.72 (d, J=5.5Hz, 2H), 3.13 (br. s., 1H), 1.69-1.55 (m, 1H), 0.98-0.85 (m, 4H), 0.77 (br. s., 4H)。MS(ESI)計算値はC21H21N9O2[M+H]+432で、測定値は432であった。
実施例10
ステップ1: N−[5−[1−[3−(シアノメチル)−1−メタンスルホニル−アゼチジン−3−]ピラゾール−4−]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−2−]シクロプロパンカルボキサミド(WX12)の製造
中間体5(100mg、275.2umol)をジクロロメタン(8mL)に懸濁させて、順にDIEA(107mg、825.6umol)及びMsCl(140mg、1.2mmol)を加えて、反応液を15℃で2時間攪拌し反応させた。LC−MSで原料が全て消耗したことが示され、目的産物が生成したと監視された。反応液を減圧で濃縮してDCMを除去した。分取HPLC(アルカリ性)によって分離して、N−[5−[1−[3−(シアノメチル)−1−メタンスルホニル−アゼチジン−3−]ピラゾール−4−]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−2−]シクロプロパンカルボキサミドを得た(39mg、収率:31.1%)。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ=9.28 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.35 (d, J=6.3Hz, 1H), 7.63 (d, J=6.3Hz, 1H), 6.08 (br. s., 1H), 4.55 (d, J=9.5Hz, 2H), 4.33 (d, J=9.3Hz, 2H), 3.72 (s, 2H), 3.16 (s, 3H), 2.10 (d, J=14.8Hz, 1H), 1.01-0.79 (m, 4H)。MS(ESI)計算値はC18H19N9O3S[M+H]+442で、測定値は442であった。
実施例11
ステップ1:N−[5−[1−[3−(シアノメチル)−1−(ジフルオロメタンスルホニル)−アゼチジン−3−]ピラゾール−4−]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン2−]シクロプロパンカルボキアミド(WX13)の製造
中間体5(100mg、275.2umol)をジクロロメタン(8mL)に懸濁させて、順にDIEA(178mg、1.4mmol)及びジフルオロメタンスルホニルクロリド(62mg、412.8umol)を加えて、反応液を15℃で12時間攪拌し反応させた。LC−MSで原料が全て消耗したことが示された。目的物が生成したことが監視された。反応液を減圧で濃縮してDCMを除去した。残留物をDMF及びMeOH溶液(5ml)に希釈し、分取HPLC(アルカリ性)によって分離して、N−[5−[1−[3−(シアノメチル)−1−(ジフルオロメタンスルホニル)−アゼチジン−3−]ピラゾール−4−]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン2−]シクロプロパンカルボキアミドを得た(8mg、6.1%)。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ=11.46 (br. s., 1H), 9.27 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.34 (d, J=6.3Hz, 1H), 7.63 (d, J=6.0Hz, 1H), 7.42-7.06 (m, 1H), 4.79 (d, J=9.0Hz, 2H), 4.67-4.49 (m, 2H), 3.78 (s, 2H), 2.26-1.96 (m, 1H), 0.97-0.84 (m, 4H)。MS(ESI)計算値はC18H17F2N9O3S[M+H]+478で、測定値は478であった。
実施例12
ステップ1:N−[5−[1−[3−(シアノメチル)−1−(ジフルオロメタンスルホニル)アゼチジン−3−]ピラゾール−4−]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリジン2−]シクロプロパンカルボキアミド(WX14)の製造
中間体8(300mg、629.7umol、トリフルオロ酢酸塩)をDCM(4mL)に懸濁させて、順にDMAP(8mg、63umol)、DIEA(407mg、3.2mmol)及びジフルオロメタンスルホニルクロリド(142mg、944.6umol)を加えて、混合物を15℃で12時間攪拌し反応させた。LC−MSで原料が全て消耗したことが示され、目的物が生成したことが監視された。反応液を減圧で濃縮してDCMを除去した。DMF及びMeOHで溶液(5mL)に希釈し、分取HPLC(アルカリ性)によって分離して、N−[5−[1−[3−(シアノメチル)−1−(ジフルオロメタンスルホニル)アゼチジン−3−]ピラゾール−4−]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリジン2−]シクロプロパンカルボキアミドを得た(8mg、収率:2.7%)。1H NMR (400MHz, METHANOL−d4) δ=9.99 (s, 1H), 9.57-9.44 (m, 1H), 8.52-8.44 (m, 1H), 8.39 (d, J=7.3Hz, 1H), 8.33 (d, J=8.3Hz, 1H), 8.01-7.68 (m, 1H), 5.57 (d, J=8.8Hz, 2H), 5.36 (d, J=9.0Hz, 2H), 4.47 (s, 2H), 1.81-1.61 (m, 4H)。MS(ESI)計算値はC19H18F2N8O3S[M+H]+477で、測定値は477であった。
実施例13
ステップ1:N−[5−[1−[3−(シアノメチル)−1−メタンスルホニル−アゼチジン−3−]ピラゾール−4−]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリミジン−2−]シクロプロパンカルボキアミドの製造
中間体8(150mg、314.9umol、トリフルオロ酢酸塩)をジクロロメタン(2mL)に懸濁させて、順にDIEA(203mg、1.6mmol)、DMAP(11mg、94.5umol)及びMsCl(180mg、1.6mmol)を加えて、反応液を15℃で12時間攪拌し反応させた。LC−MSで原料が全て消耗したことが示され、目的物が生成したと監視された。反応液を減圧で濃縮してDCMを除去した。MeOHで溶液(5mL)に希釈し、分取HPLC(アルカリ性)によって分離して、N−[5−[1−[3−(シアノメチル)−1−メタンスルホニル−アゼチジン−3−]ピラゾール−4−]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリミジン−2−]シクロプロパンカルボキアミドを得た(10mg、7.15%)。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ=11.17 (br. s., 1H), 9.27 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 7.83-7.68 (m, 1H), 7.62 (dd, J=7.8, 17.6Hz, 2H), 4.51 (d, J=9.0Hz, 2H), 4.34 (d, J=9.0Hz, 2H), 3.69 (s, 2H), 3.16 (s, 3H), 2.25-2.00 (m, 1H), 0.95-0.80 (m, 4H)。MS(ESI)計算値はC19H20N8O3S[M+H]+441で、測定値は441であった。
実施例14
ステップ1:N−(5−(1−(3−(シアノメチル)−1−(エチルスルホニル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−イル)シクロプロパンカルボキアミド(WX16)の製造
窒素ガスの保護下で、中間体6(1.5g、5.6mmol)及び中間体9(1.5g、7.8mmol)のアセトニトリル(15mL)溶液にDBU(1.7g、11.2mmol)を滴加して、反応混合物を25℃で16時間攪拌し反応させた。TLC(石油エーテル:酢酸エチル=0:1)で反応が完全に進行したことが示された。0℃で反応液をメタノール(200mL)に注いでから、固体を多量に析出して、10分間攪拌した後にろ過した。得られた固体を少量のメタノー(5mL)で洗浄した後、真空で乾燥して、産物であるN−(5−(1−(3−(シアノメチル)−1−(エチルスルホニル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−イル)シクロプロピルホルムアミドを得た(1.60g、収率:60%)。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ=9.25 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 7.76-7.70 (m, 1H), 7.64 (d, J=7.0Hz, 1H), 7.60 (d, J=8.5Hz, 1H), 4.49 (d, J=9.0Hz, 2H), 4.32 (d, J=9.0Hz, 2H), 3.68 (s, 2H), 1.26 (t, J=7.3Hz, 3H), 0.91-0.85 (m, 4H)。MS(ESI)計算値はC20H22N8O3S[M+H]+455で、測定値は455であった。
実施例15
ステップ1:3−[4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−1−)−3−(シアノエチル)アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチルの製造
5−(1H−ピラゾール−4−)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−アミド(700mg、3.5mmol)及び3−(シアノメチル)アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチル(747mg、3.9mmol)をアセトニトリル(20.00mL)に溶解させ、DBU(1.6g、10.5mmol)を加えて、混合物を40℃で3時間反応させた。LC−MSで反応が完全に進行したことが示され、目標産物が生成したことが測定された。混合物を水(30mL)に注ぎ、30分間攪拌し、水相を酢酸エチル(20mL×3)で抽出した。得られた有機層を合併し、飽和塩水(20mL×2)で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥して、ろ過し減圧で濃縮して、褐色固体の3−[4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−1−)−3−(シアノエチル)アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチル(1.33g、粗製品)を得た。MS(ESI)計算値はC19H22N8O2[M+H]+395で、測定値は395であった。
ステップ2:3−(シアノメチル−3−[4−([1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−5−)ピラゾール−1−]アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチルの製造
3−[4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−1−)−3−(シアノエチル)アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチル(150mg、380.3umol)をテトラヒドロフラン(2mL)に溶解させ、t−BuONO(59mg、570.5umol)を加えて、15℃で3時間攪拌し反応させた。LC−MSで反応が完全に進行したことが示され、目標産物が生成したことが測定された。反応液を減圧で濃縮して、DCM(4mL)で希釈し、分取TLC(DCM:MeOH=10:1)によって分離して、3−(シアノメチル−3−[4−([1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−5−)ピラゾール−1−]アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチル(80mg、収率:55.4%)を得た。MS(ESI)計算値はC19H21N7O2[M+H]+380で、測定値は380であった。
ステップ3:2−[3−[4−([1,2,41]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−5−)ピラゾール−1−]アゼチジン−3−]アセトニトリルの製造
3−(シアノメチル−3−[4−([1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−5−)ピラゾール−1−]アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチル(80mg、210.9umol)をDCM(1.5mL)に懸濁させて、トリフルオロ酢酸(857mg、7.5mmol)を加えて、15℃で3時間攪拌し反応させた。LC−MSで反応が完全に進行したことが示され、目標産物MSが生成したことが測定された。反応液を減圧で濃縮して、溶媒及び残ったトリフルオロ酢酸を除去して、褐色かゆ状の2−[3−[4−([1,2,41]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−5−)ピラゾール−1−]アゼチジン−3−]アセトニトリル(129mg、粗製品)を得た。MS(ESI)計算値はC14H13N7[M+H]+280で、測定値は280であった。
ステップ4:2−[3−[4−([1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−5−)ピラゾール−1−]−1−(トリフルオロメタンスルホニル)アゼチジン−3−]アセトニトリルの製造
2−[3−[4−([1,2,41]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−5−)ピラゾール−1−]アゼチジン−3−]アセトニトリル(60mg、214.8umol)をDCM(2mL)に溶解させ、DMAP(13mg、107.4umol)及びEt3N(109mg、1.1mmol)を加えて、その後、15℃でトリフルオロメタンスルホニルクロリド(47mg、279.3umol)を滴加して、反応物を攪拌し反応させ、15℃で4時間反応させた。LC−MSで反応が完全に進行したことが示され、目標産物MSが生成したことが測定された。反応液を減圧で濃縮して溶媒を除去した。分取HPLC(アルカリ性)によって分離して、2−[3−[4−([1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−5−)ピラゾール−1−]−1−(トリフルオロメタンスルホニル)アゼチジン−3−]アセトニトリル(25mg、収率:28.3%)を得た。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ=9.28 (br. s., 1H), 8.73 (d, J=17.8Hz, 2H), 7.82 (br. s., 3H), 5.22-4.50 (m, 4H), 3.86 (br. s., 2H)。MS(ESI)計算値はC15H12F3N7O2S[M+H]+412で、測定値は412であった。
実施例16
ステップ1:2−(3−(4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン)−1H−ピラゾール)−1−(トリフルオロメタンスルホニル)シクロブタン)アセトニトリル(WX18)の製造
2−(3−(4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン)−1H−ピラゾール)シクロブタン−3)アセトニトリル(200mg、489.8umol)をDCM(10mL)に溶解させ、TEA(198mg、2mmol)を加えた。得られた混合物を0℃に冷却して、トリフルオロメタンスルホニルクロリド(107mg、636umol)をゆっくりと滴加した後、該反応液を室温に戻して、室温で12時間反応させた。LC−MSで反応が完全に進行したことが示された。減圧で溶媒をスピンドライして、残留物をDMFで溶解させ、更に分取HPLC(HCl)によって精製し冷凍乾燥して、2−(3−(4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン)−1H−ピラゾール)−1−(トリフルオロメタンスルホニル)シクロブタン)アセトニトリルを得た。1H-NMR (400MHz, MeOD-d4) δ=9.14 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 7.58 (t, J =7.8, 1H), 7.41 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.30 (d, J=8.8 Hz, 1H), 4.98 (d, J=9.3 Hz, 2H), 4.68 (d, J=9.0Hz, 2H), 3.67 (s, 2H)。MS(ESI)計算値はC15H13F3N8O2S[M+H]+427で、測定値は427であった。
WX19の製造:WX18 (ステップ1)と同様の製造方法により、WX19を製造した。分取HPLC(HCl)によって精製し冷凍乾燥して、2−(3−(4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン)−1H−ピラゾール)−1−(メタンスルホニル)シクロブタン)アセトニトリルを得た。1H-NMR (400MHz, MeOD-d4) δ=9.13 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.57 (m, 1H), 7.41 (d, J=6.8 Hz, 1H), 7.30 (d, J=8.5 Hz, 1H), 4.64 (d, J=9.3 Hz, 2H), 4.35 (d, J=9.3 Hz, 2H), 3.62 (s, 2H), 3.08 (s, 3H)。MS(ESI)計算値はC15H16N8O2S[M+H]+373で、測定値は373であった。
実施例17
ステップ1:N−(8−ブロモ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−イル)シクロプロパンカルボキサミドの製造
8−ブロモ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−アミン(1.0g、4.7mmol)、トリエチルアミン(1.4g、14.1mmol)を溶解させたアセトニトリル(15.0mL)に、シクロプロパンカルボニルクロリド(1.5g、14.1mmol) を滴加した後、該混合物を26℃で12時間攪拌し反応させた。LC−MSで反応が完全に進行したことが示された。減圧で蒸留してアセトニトリルを除去した。残留物にH2O(5mL)を加えて、水層をDCM(15mL×3)で2回抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(15mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、ろ過し、ろ液を減圧で蒸留して除去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(DCM/MeOH=20/1)によって精製して、黄色固体(700mg、収率:47.8%)を得た。MS(ESI)計算値はC10H9N4OBr[M+H]+282で、測定値は282であった。
ステップ2:N−[8−(1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−イル]シクロプロパンカルボキサミドの製造
N−(8−ブロモ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−イル)シクロプロパンカルボキサミド(700mg、2.5mmol)、4−(4,4,5,5−テトラメチル−1,3,2−ジオキサボロラン−2−イル)−1H−ピラゾール(579mg、3.0mmol)を溶解させたジオキサン(25mL)及び水(6mL) の混合溶媒に、炭酸カリウム(1.0g、7.5mmol)及びPd(dppf)Cl2(182mg、249umol)をそれぞれ加えた。体系を真空で排気し窒素ガスを充填して保護した。その後、該混合物を1時間加熱還流した。LC−MSで反応が完全に進行したことが示された後、減圧で蒸留して溶媒を除去した。残留物をDCM(50mL)及び水(10mL)に溶解させ、有機層を分けて、水層をDCM(2×50mL)で2回抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(10mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、ろ過し、ろ液を減圧で蒸留して除去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(EA/PE=3/1至1/1)によって精製して、黄色固体を得た(300mg、収率:40.4%)。MS(ESI)計算値はC13H12N6O[M+H]+269で、測定値は269であった。
ステップ3:化合物N−(8−(1−(3−(シアノメチル)−1−(エチルスルホニル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−イル)シクロプロパンカルボキサミド(WX20)の製造
N−[8−(1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−イル]シクロプロパンカルボキサミド(100mg、372.8umol)、2−(1−エチルスルホニルアゼチジン−3−イル)アセトニトリル(83mg、447.3umol)を溶解させたアセトニトリル(15mL)に、DBU(68mg、447.3umol)を滴加して、形成した混合物を26℃で12時間攪拌し反応させた。TLCで反応が完全に進行したことが示された後、減圧で蒸留して溶媒を除去した。残留物をDCM(15mL)及び水(10mL)に溶解させ、有機層を分けて、水層をDCM(15mL×2)で2回抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(10mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、ろ過し、ろ液を減圧で蒸留して除去した。残留物を分取HPLC(アルカリ法)によって精製して、(WX20)を得た(65mg、収率:37.98%)。1H NMR (400MHz, METHANOL-d4) δ=8.72 (s, 1H), 8.37 (d, J=6.8Hz, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.71 (d, J=7.3Hz, 1H), 6.98 (t, J=7.0Hz, 1H), 4.63 (d, J=9.0Hz, 2H), 4.28 (d, J=9.0Hz, 2H), 3.58 (s, 2H), 3.20 (q, J=7.3Hz, 2H), 1.44-1.31 (m, 3H), 1.07 (quin, J=3.8Hz, 2H), 0.96 (qd, J=3.7, 7.3 Hz, 2H)。MS(ESI)計算値はC20H22N8O3S[M+H]+455で、測定値は455であった。
WX21の製造:WX21(ステップ3)と同様の製造方法により、WX21を製造した。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ=8.93-8.82 (m, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.42 (d, J=6.3Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.63 (d, J=7.3Hz, 1H), 6.96 (t, J=7.2Hz, 1H), 4.62 (d, J=9.3Hz, 2H), 4.25 (d, J=9.3Hz, 2H), 3.42 (s, 2H), 2.54-2.42 (m, 1H), 1.87 (br. s., 1H), 1.25-1.17 (m, 4H), 1.13-1.06 (m, 2H), 0.94 (dd, J=3.0, 7.5Hz, 2H)。MS(ESI)計算値はC21H22N8O3S[M+H]+467で、測定値は467であった。
実施例18
ステップ1:N−(8−ブロモ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−イル)−2,2,2−トリフルオロ−アセトアミドの製造
8−ブロモ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−アミン(1.0g、4.7mmol)、トリエチルアミン(1.4g、14.1mmol)を溶解させたジクロロメタン溶液(25.00mL)に、トリフルオロ酢酸(3.0g、14.1mmol)を滴加して、形成した反応液を26℃で12時間攪拌し反応させた。LC−MSで反応が完全に進行したことが示された後、減圧で蒸留して溶媒を除去した。残留物をDCM(50mL)及び飽和塩水(10mL)に溶解させ、有機層を分けて、水層をDCM(50mL×2)で2回抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(10mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、ろ過し、ろ液を減圧で蒸留して除去して、白色粗製品のN−(8−ブロモ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−イル)−2,2,2−トリフルオロ−アセトアミドを得て(1.1g)、精製せず、そのまま次の反応に用いた。MS(ESI)計算値はC8H4N4OBrF3[M+H]+310で、測定値は310であった。
ステップ2:8−(1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−アミンの製造
N−(8−ブロモ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−イル)−2,2,2−トリフルオロ−アセトアミド(1.1g、3.6mmol、4−(4,4,5,5−テトラメチル−1,3,2−ジオキサボロラン−2−イル)−1H−ピラゾール(1.0g、5.3mmol)を溶解させたジオキサン(25mL)及び水(6mL)に、炭酸カリウム(492mg、3.6mmol)及びPd(dppf)Cl2(260mg、356umol)をそれぞれ加えて、反応系を真空で排気し窒素ガスを充填して保護した。その後、該混合物を1時間加熱還流した。LC−MSで反応が完全に進行したことが示された後、ろ過し、ろ液を水(10mL)で洗浄し、EA(30mL×3)で抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(10mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、ろ過し、ろ液を減圧で蒸留して除去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(DCM/MeOH=DCM〜20/1)によって精製して、黄色固体の8−(1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−アミン(430mg、収率:57.3%)を得た。MS(ESI)計算値はC9H8N6[M+H]+201で、測定値は201であった。
ステップ3:2−[3−[4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−8−イル)ピラゾール−1−イル]−1−エチルスルホニル−アゼチジン−3−イル]アセトニトリルの製造
8−(1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−アミン(50mg、249.7umol)、2−(1−エチルスルホニルアゼチジン−3−イリデン)アセトニトリル(56mg、299.7umol) を溶解させたアセトニトリル(8mL)に、DBU(46mg、299.7umol)を滴加して、該反応液を26℃で12時間攪拌し反応させた。LC−MSで反応が完全に進行したことが示された後、減圧で蒸留してアセトニトリルを除去した。残留物に水(10mL)を加えて、EA(10mL×3)で抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(10mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、ろ過し、ろ液を減圧で蒸留して除去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(DCM/MeOH=20/1)によって精製して、白色固体の2−[3−[4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−8−イル)ピラゾール−1−イル]−1−エチルスルホニル−アゼチジン−3−イル]アセトニトリルを得た(50mg、収率:49.22%)。MS(ESI)計算値はC16H18N8SO2[M+H]+387で、測定値は387であった。
ステップ4:N−(8−(1−(3−(シアノメチル)−1−(エチルスルホニル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−イル)−2,2,2−トリフルオロアセトアミド(WX22)の製造
2−[3−[4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−8−イル)ピラゾール−1−イル]−1−エチルスルホニル−アゼチジン−3−イル]アセトニトリル(50mg、129.4umol)、トリエチルアミン(39.28mg、388.2umol)を溶解させたジクロロメタン(5mL)溶液に、無水トリフルオロ酢酸(81.5mg、388.2umol)を滴加して、該反応液を26℃で12時間攪拌し反応させた。TLCで反応が完全に進行したことが示された後、H2O(5mL)を加えて、有機層を分けて、水層をDCM(15mL×3)で2回抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(10mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、ろ過し、ろ液を減圧で蒸留して除去した。残留物を分取薄層クロマトグラフィー(DCM:MeOH=20:1)によって精製して、(WX22)を得た(29mg、46.5%)。
1H NMR (400MHz, METHANOL-d4) δ=8.93-8.89 (m, 1H), 8.63-8.59 (m, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.02 (dd, J=1.0, 7.3Hz, 1H), 7.28-7.21 (m, 1H), 4.68-4.58 (m, 4H), 4.32 (s, 2H), 3.60 (s, 2H), 3.19 (q, J=7.4Hz, 2H), 1.38 (t, J=7.3 Hz, 3H)。MS(ESI)計算値はC18H17N8SO3F3[M+H]+483で、測定値は483であった。
実施例19
ステップ1:2−[3−[4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−8−イル)ピラゾール−1−イル]−1−シクロプロパンスルホニル−アゼチジン−3−イル]アセトニトリルの製造
8−(1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−アミン(250mg、1.3mmol)、2−(1−シクロプロパンスルホニルアゼチジン−3−イルデン)アセトニトリル(297mg、1.5mmol)を溶解させたアセトニトリル(25.00mL)に、DBU(228mg、1.5mmol)を滴加して、該反応液を26℃で12時間攪拌し反応させた。LC−MSで反応が完全に進行したと示された後、H2O(5mL)を加えて、有機層を分けて、水層をDCM(2×15mL)で2回抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(15mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、ろ過し、ろ液を減圧で蒸留して除去した。残留物ををシリカゲルカラムクロマトグラフィー(DCM/MeOH=20/1)によって精製して、黄色固体の2−[3−[4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−8−イル)ピラゾール−1−イル]−1−シクロプロパンスルホニル−アゼチジン−3−イル]アセトニトリル(250mg、収率:45.2%)を得た。MS(ESI)計算値はC17H18N8SO2[M+H]+399で、測定値は399であった。
ステップ2:化合物WX23の製造
2−[3−[4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−8−イル)ピラゾール−1−イル]−1−シクロプロパンスルホニル−アゼチジン−3−イル]アセトニトリル(50mg、125.5umol)、トリエチルアミン(38mg、376.5umol)を溶解させたDCM(5mL)溶液に、無水トリフルオロ酢酸(79mg、376.5umol)を滴加して、該反応液を26℃で12時間攪拌し反応させた。LC−MSで反応が完全に進行したことが示された後、H2O(5mL)を加えて、有機層を分けて、水層をDCM(2×15mL)で2回抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(15mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、ろ過し、ろ液を減圧で蒸留して除去した。残留物を分取HPLC(アルカリ性、0−60)によって精製して、(WX23)を得た(17mg、収率:27.4%)。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ=9.09-9.04 (m, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.55-8.52 (m, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.79-7.74 (m, 1H), 7.12 (t, J=7.0Hz, 1H), 4.64 (d, J=9.3Hz, 2H), 4.27 (d, J=9.3Hz, 2H), 3.44 (s, 2H), 2.50-2.43 (m, 1H), 1.25-1.21 (m, 2H), 1.15-1.08 (m, 2H)。MS(ESI)計算値はC19H17N8SO3[M+H]+495で、測定値は495であった。
実施例20
ステップ1:3−(シアノメチル)−3−(4−(2−(2−メトキシアセトアミド)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリジン−5−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチル(1)の製造
中間体2(0.1g、0.25mmol)及びトリエチルアミン(0.15mL、1.2mmol)を溶解させたDMF(10.00mL)に、2−メトキシアセチルクロリド(65mg、0.5mmol)を加えて、得られた混合物を60℃で16時間攪拌し反応させた。LC−MSで反応が完全に進行したことが示された。混合物を10mLの水に注ぎ、酢酸エチル(10mL×3)で抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(20mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して濃縮した後、粗製品(120mg)を得て、そのまま次の反応に用いた。MS(ESI)計算値はC21H25N9O4[M+H]+468で、測定値は468であった。
ステップ2:N−(5−(1−(3−(シアノメチル) アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリジン−2−イル)−2−メトキシアセトアミド(2)の製造
3−(シアノメチル)−3−(4−(2−(2−メトキシアセトアミド)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリジン−5−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチル(100mg、0.2mmol)をジクロロメタン(5mL)に溶解させて、TFA(5mL)を加えた。得られた混合物を10℃で1時間攪拌し反応させた後、LC−MSで反応が完全に進行したことが示された。溶媒を濃縮した後、100mgの粗製品を得て、そのまま次の反応に用いた。MS(ESI)計算値はC16H17N9O2[M+H]+482で、測定値は482であった。
ステップ3:N−(5−(1−(3−(シアノメチル)−1−((トリフルオロメチル)スルホニル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリジン−2−イル)−2−メトキシアセトアミド(WX24)の製造
N−(5−(1−(3−(シアノメチル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリジン−2−イル)−2−メトキシアセトアミド(50mg、0.14mmol)をジクロロメタン(5mL)に溶解させ、順にトリエチルアミン(42mg、0.4mmol)及びトリフルオロメタンスルホニルクロリド(47mg、0.28mmol)を加えて、得られた混合物を10℃で1時間攪拌し反応させた。LC−MSで反応が完全に進行したことが示された。溶媒を濃縮した後、粗製品(50mg)を得た。粗製品を分取HPLC(アルカリ性)によって分離して、白色固体のN−(5−(1−(3−(シアノメチル)−1−((トリフルオロメチル)スルホニル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリジン−2−イル)−2−メトキシアセトアミド(WX24,10mg)を得た。1H NMR (400MHz, DMSO-d6)9.30 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.36 (d, J=6.27Hz, 1H), 7.66 (d, J=6.02Hz, 1H), 4.74 (s, 2H), 3.86 (s, 2H), 3.40 (s, 4H)。MS(ESI)計算値はC17H16F3N9O4S[M+H]+495で、測定値は495であった。
WX25の製造:WX24(ステップ3)と同様の製造方法により、N−(5−(1−(3−(シアノメチル)−1−((メチルスルホニル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリジン−2−イル)−2−メトキシアセトアミド(WX25)を製造した。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=9.29-9.32 (m, 1H), 8.67-8.71 (m, 1H), 8.28-8.33 (m, 1H), 7.44-7.48 (m, 1H), 4.60-4.68 (m, 1H), 4.30-4.36 (m, 2H), 4.13-4.19 (m, 1H), 3.58 (s, 2H), 3.41-3.48 (m, 1H), 3.04 (s, 3H), 1.45 (s, 3H)。MS(ESI)計算値はC17H19N9O4S[M+H]+446で、測定値は446であった。
実施例21
ステップ1:3−(4−(2−(2−シアノアセトアミド)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリジン−5−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−3−(シアノメチル)アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチル(1)の製造
中間体2(0.1g、0.3mmol)及びトリエチルアミン(0.17mL、1.3mmol)を溶解させたDMF(10mL)に、2−シアノアセチルクロリド(131mg、1.3mmol)を加えて、得られた混合物を60℃で2時間攪拌し反応させた。LC−MSで反応が完全に進行したことが示された。混合物を水(10mL)に注ぎ、酢酸エチル(10mL×3)で抽出した。得られた有機相を合併し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して濃縮した後、3−(4−(2−(2−シアノアセトアミド)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリジン−5−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−3−(シアノメチル)アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチル(100mg、粗製品)を得て、そのまま次の反応に用いた。MS(ESI)計算値はC21H22N10O3[M+H]+463で、測定値は463であった。
ステップ2:2−シアノ−N−(5−(1−(3−(シアノメチル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリジン−2−イル)アセトアミド(2)の製造
3−(4−(2−(2−シアノアセトアミド)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリジン−5−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−3−(シアノメチル)アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチル(1)(100mg、0.2mmol)をジクロロメタン (5mL)に溶解させ、TFA(5mL)を加えた。得られた混合物を10℃で1時間攪拌し反応させた後、LC−MSで反応が完全に進行したと示された。溶媒を濃縮した後、2−シアノ−N−(5−(1−(3−(シアノメチル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリジン−2−イル)アセトアミド(2)(100mg、粗製品)を得て、そのまま次の反応に用いた。MS(ESI)計算値はC16H14N10O[M+H]+463で、測定値は463であった。
ステップ3:2−シアノ−N−(5−(1−(3−(シアノメチル)−1−(メタンスルホン酸アミド)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリジン−2−イル)アセトアミド(WX26)の製造
2−シアノ−N−(5−(1−(3−(シアノメチル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリジン−2−イル)アセトアミド(50mg、0.14mmol)をジクロロメタン(5mL)に溶解させ、順にトリエチルアミン(42mg、0.4mmol)、メタンスルホニルクロリド(47mg、0.28mmol)を加えた。得られた混合物を10℃で1時間攪拌し反応させた後、LC−MSで反応が完全に進行したことが示された。溶媒を濃縮した後、50mgの粗製品を得て、粗製品を分取HPLC(アルカリ性)によって分離して、2−シアノ−N−(5−(1−(3−(シアノメチル)−1−(メタンスルホン酸アミド)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリジン−2−イル)アセトアミド(WX26、10mg)を得た。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) 9.27 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.25-8.52 (m, 1H), 7.67 (d, J=6.27Hz, 1H), 4.56 (d, J=9.29Hz, 4H), 4.34 (d, J=9.29Hz, 4H), 3.73 (s, 3H)。MS(ESI)計算値はC17H16N10O3S[M+H]+441で、測定値は441であった。
実施例22
ステップ1:1−(3−ブロモフェニル)チオ尿素(2)の製造
室温で、3−ブロモアニリン(30.0g、174mmol)の希塩酸溶液(1M、50mL)にチオシアン酸カリウム(20.0g、205.8mmol)を加えて、混合物を100℃で12時間攪拌し反応させた。TLC(PE:EA=1:1)で3−ブロモアニリンの一部(約20%)が残っていることが測定された。反応液を0℃に冷却した後、アンモニア水でpH=10にアルカリ化して、得られた紫色の乳状液を続いて半時間攪拌した。その後、酢酸エチル(200mL×4)で抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(30mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、ろ過しスピンドライして、濃い紫色の懸濁液を得た。しばらく冷却してジクロロメタン(50mL)を加えて、氷浴で0℃に冷却した。溶解しない薄紫の固体を吸引濾過した後、少量のジクロロメタン(10mL×2)で洗浄し、真空で乾燥して、産物である1−(3−ブロモフェニル)チオ尿素を得た(25g2、収率:55.8%)。1H NMR (400MHz, CDCl3) 7.46 (s, 1H), 7.39-7.44 (m, 1H), 7.28-7.32 (m, 1H), 7.25 (s, 1H)。MS(ESI)計算値はC7H7BrN2S[M+H]+230で、測定値は230であった。
ステップ2:7−ブロモベンゼン[d]チアゾリル−2−アミン(3)の製造
0℃で、(3−ブロモフェニル)チオ尿素(5.0g、21.6mmol)の酢酸溶液(50mL)に臭素(4.7g、29.2mmol)のクロロホルム溶液(5mL)を滴加して、混合物を85℃で3時間攪拌し反応させた。TLC(PE:EA=1:1)で測定して原料が全て消耗し、二つの新点が生成したことが示された。反応液を熱いうちにろ過し、溶解しない固体を少量のジクロロメタン(10mL×2)で洗浄し乾燥して、黄色固体の産物(4.2g、収率:50%)を得た。ろ液をスピンドライして黄色の懸濁液を得て、残留物をジクロロメタン(20mL)で叩解し、不溶物を吸引濾過し、少量のDCM(5mL×2)で洗浄した後、真空で乾燥して、黄色固体の産物(1.2g、収率:13%)を得た。一定分量の産物(P1及びP2)をそれぞれ取って水(1mL)に溶解させ、アンモニア水でpH=10にアルカリ化して、酢酸エチル(0.2mL)で抽出した。二つの抽出液を窒素ガスで乾燥した後、そのままNMR測定に用いた。核磁気共鳴(NMR)でP1において主に5−臭素化異性体副産物が、P2において主に所望の7−臭素化産物があることが示された。得られた粗製品を精製せず、そのまま次の反応に用いた。
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) 7.13-7.16 (m, 1H), 7.16-7.22 (m, 2H), 7.32 (dd, J=7.28, 1.51Hz, 1H), 7.48 (d, J=1.76Hz, 1H), 7.62 (d, J=8.53Hz, 1H), 7.71 (br. s., 1H), 7.73 (s, 2H)。MS(ESI)計算値はC7H5BrN2S[M+H]+228で、測定値は228であった。
ステップ3:N−(7−ブロモベンゼン[d]チアゾリル−2−イル)シクロプロピルホルムアミド(4)の製造
窒素ガスの保護下、0℃で、7−ブロモベンゼン[d]チアゾリル−2−アミン(1.2g、3.9mmol、HBr塩)及びトリエチルアミン(1.6g、15.5mmol)のアセトニトリル溶液(50mL)に、シクロプロパンカルボニルクロリド(1.2g、11.6mmol)を滴加して、混合物を30℃で12時間攪拌し反応させた。TLC(PE:EA=1:1)で測定して、主な点が単置換の所望の産物であることが示された。反応液を水(60mL)でクエンチングし、酢酸エチル(30mL×3)で抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(5mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、吸引濾過しスピンドライした。残留物をカラムクロマトグラフィー(PE:EA=5:1)によって精製して、黄色固体のN−(7−ブロモベンゼン[d]チアゾリル−2−イル)シクロプロピルホルムアミドを得た(580mg、収率:40%)。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ=12.85 (s, 1H), 7.75 (d, J=8.03Hz, 1H), 7.52 (d, J=7.78Hz, 1H), 7.38-7.43 (m, 1H), 1.98-2.05 (m, 1H), 0.95-1.02 (m, 4H)。MS(ESI)計算値はC11H9BrN2OS[M+H]+296で、測定値は296であった。
ステップ4:N−(7−(1H−ピラゾール−4−イル)ベンズ[d]チアゾリル−2−イル)シクロプロピルホルムアミド(5)の製造
窒素ガスの保護下で、N−(7−ブロモベンゼン[d]チアゾリル−2−イル)シクロプロピルホルムアミド(480mg、1.6mmol)及び1H−ピラゾール−4−ボロン酸ピナコール(317mg、1.6mmol)のジオキサン(15mL)溶液に、Pd(dppf)Cl2(119mg、162umol)、K2CO3(672mg、4.9mmol)及びH2O(2.5mL)を加えて、混合物を90℃で12時間攪拌し反応させた。TLC(PE:EA=1:1)で測定して新点があると示され、LC−MSで目標産物が生成したことが測定された。反応液を水(100mL)で希釈して、酢酸エチル(30mL×3)で抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(5mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、吸引濾過しスピンドライした。残留物をカラムクロマトグラフィー(PE:EA=1:1)によって精製して、黄色固体の産物であるN−(7−(1H−ピラゾール−4−イル)ベンズ[d]チアゾリル−2−イル)シクロプロピルホルムアミド(80mg、収率:15.63%)を得た。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ=13.22 (br. s., 1H), 12.70 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.64 (d, J=8.03Hz, 1H), 7.52-7.55 (m, 1H), 7.45-7.50 (m, 1 H), 2.03 (t, J=4.52Hz, 1H), 0.95-1.00 (m, 4H)。MS(ESI)計算値はC14H12N4OS[M+H]+285で、測定値は285であった。
ステップ5:7−(1H−ピラゾール−4−イル)ベンズ[d]チアゾリル−2−アミン(6)の製造
N−(7−(1H−ピラゾール−4−イル)ベンズ[d]チアゾリル−2−イル)シクロプロピルホルムアミド(120mg、422.1umol)のメタノール(3mL)溶液に、NaOH(240mg、6mmol)の水溶液(1mL)を1滴ずつ滴加して、混合物を80℃で12時間攪拌し反応させた。LCMSで測定して反応が完全に進行したことが示された。反応液を水(50mL)で希釈し、1M HClでpH=7に中和し、酢酸エチル(15mL×4)で抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(5mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、吸引濾過しスピンドライした。残留物を7−(1H−ピラゾール−4−イル)ベンズ[d]チアゾリル−2−アミン(100mg、収率:87.7%)の粗製品として、精製せず、そのまま次の反応に用いた。MS(ESI)計算値はC10H8N4S[M+H]+216で、測定値は216.8であった。
ステップ6:3−(4−(2−アミノベンズ[d]チアゾリル−7−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−3−(シアノメチル)アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチル(7)の製造
窒素ガスの保護下で、7−(1H−ピラゾール−4−イル)ベンズ[d]チアゾリル−2−アミン(100mg、462.4umol)及び3−(シアノメチレン)アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチル(90mg、463.4umol)のアセトニトリル溶液(3mL)に、DBU(140.8mg、924.8umol)を滴加して、混合物を30℃で12時間攪拌し反応させた。 LC−MSで測定して反応が完全に進行したことが示された。 反応液を水(50mL)で希釈し、酢酸エチル(20mL×3)で抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(30mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、吸引濾過しスピンドライした。残留物を産物である3−(4−(2−アミノベンズ[d]チアゾリル−7−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−3−(シアノメチル)アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチル(190mg、収率:80%)の粗製品として、精製せず、そのまま次の反応に用いた。MS(ESI)計算値はC20H22N6O2S[M+H]+410で、測定値は411であった。
ステップ7:2−(3−(4−(2−アミノベンズ[d]チアゾリル−7−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)アゼチジン−3−イル)アセトニトリル(8)の製造
3−(4−(2−アミノベンズ[d]チアゾリル−7−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−3−(シアノメチル)アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチル(180mg、438.5umol)及び塩酸酢酸エチル溶液(30mL)の混合物を、25℃で1時間攪拌し反応させた。LCMSで反応が完全に進行したことが示された。反応液をそのままスピンドライして、得られた黄色固体を産物である2−(3−(4−(2−アミノベンズ[d]チアゾリル−7−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)アゼチジン−3−イル)アセトニトリル(150mg、収率:78.9%、HCl塩)の粗製品として、精製せず、そのまま次の反応に用いた。MS(ESI)計算値はC15H14N6S[M+H]+310で、測定値は310であった。
ステップ8:2−(3−(4−(2−アミノベンズ[d]チアゾリル−7−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−1−(メタンスルホニル)アゼチジン−3−イル)アセトニトリル(WX27)の製造
窒素ガスの保護下で、0℃で、2−(3−(4−(2−アミノベンズ[d]チアゾリル−7−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)アゼチジン−3−イル)アセトニトリル(150mg、345.9umol、HCl塩)及びEt3N(140mg、1.4mmol)のジクロロメタン溶液(3mL)に、MsCl(80mg、698.9umol)を1滴ずつ滴加して、混合物を0℃で1時間攪拌し反応させた。LC−MSで測定して反応が完全に進行したことが示された。反応液を水(50mL)でクエンチングし、ジクロロメタン(15mL×3)で抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(5mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、吸引濾過しスピンドライした。残留物を分取薄層クロマトグラフィー(DCM:MeOH=10:1)によって精製して、黄色固体の産物である2−(3−(4−(2−アミノベンズ[d]チアゾリル−7−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−1−(メタンスルホニル)アゼチジン−3−イル)アセトニトリル(30mg、収率:20.1%)を得た。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ=8.55 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.56 (s, 2H), 7.28-7.31 (m, 2H), 7.25-7.28 (m, 1H), 4.54 (d, J=9.29Hz, 2H), 4.27 (d, J=9.29Hz, 2H), 3.66 (s, 2H), 3.14 (s, 3H)。MS(ESI)計算値はC16H16N6O2S2[M+H]+389で、測定値は389であった。
実施例23
ステップ1:3−(シアノメチル)−3−(4−(2−(シクロプロピルホルムアミド)ベンズ[d]チアゾリル−7−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチルの製造
窒素ガスの保護下で、 N−[7−(1H−ピラゾール−4−イル)−1,3−ベンズチアゾリル−2−イル]シクロプロピルホルムアミド(100mg、351.7umol)及び3−(シアノメチレン)アゼチジン−1−炭酸−tert−ブチル(100mg、513.5umol)のアセトニトリル溶液(3mL)に、DBU(107mg、703.4umol)を滴加して、混合物を25℃で12時間攪拌し反応させた。TLC(PE:EA=1:1)で測定して反応が完全に進行したことが示された。反応液を水(50mL)で希釈し、酢酸エチル(20mL×3)で抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(5mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、吸引濾過した後、スピンドライした。残留物を分取TLC(PE:EA=1:1)によって分離し精製して、黄色固体の産物である3−(シアノメチル)−3−(4−(2−(シクロプロピルホルムアミド)ベンズ[d]チアゾリル−7−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチル(80mg、収率:47.5%)を得た。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ=11.30 (br. s., 1H), 8.05 (d, J=12.05Hz, 2H), 7.75 (d, J=7.78Hz, 1H), 7.48-7.53 (m, 1H), 7.43-7.47 (m, 1H), 4.58 (d, J=9.79Hz, 2H), 4.32 (d, J=9.54Hz, 2H), 3.31 (s, 2H), 1.74 (dq, J=7.97, 3.95Hz, 1H), 1.51 (s, 9H), 1.27-1.31 (m, 2H), 1.01-1.09 (m, 2H)。MS(ESI)計算値はC24H26N6O3S[M+H]+479で、測定値は479であった。
ステップ2:N−(7−(1−(3−(シアノメチル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−4−イル)ベンズ[d]チアゾリル−2−イル)シクロプロピルホルムアミドの製造
3−(シアノメチル)−3−(4−(2−(シクロプロピルホルムアミド)ベンズ[d]チアゾリル−7−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチル(80mg、167.2umol)及び塩酸酢酸エチル(30mL)の混合物を、25℃で1時間攪拌し反応させた。LCMSで反応が完全に進行したことが示された。反応液をそのままスピンドライして、残留物を水(50mL)に溶解させ、飽和NaHCO3水溶液で弱アルカリ性(pH>7) に調整した後、酢酸エチル(15mL×3)で抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(5mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、吸引濾過した後、スピンドライした。得られた黄色固体を産物であるN−(7−(1−(3−(シアノメチル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−4−イル)ベンズ[d]チアゾリル−2−イル)シクロプロピルホルムアミド(60mg、収率:85.4%、純度90%)の粗製品として、精製せず、そのまま次の反応に用いた。MS(ESI)計算値はC19H18N6OS[M+H]+378で、測定値は378であった。
ステップ3:N−(7−(1−(3−(シアノメチル)−1−(メタンスルホニル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−4−イル)ベンズ[d]チアゾリル−2−イル)シクロプロピルホルムアミドの製造
窒素ガスの保護下で、N−(7−(1−(3−(シアノメチル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−4−イル)ベンズ[d]チアゾリル−2−イル)シクロプロピルホルムアミド(60mg、158.54umol)、及びトリエチルアミン(50mg、494.6umol)のジクロロメタン溶液(5mL)に、メタンスルホニルクロリド(50mg、436.5umol)を滴加して、混合物を0℃で0.5時間攪拌し、25℃で続いて1時間攪拌した。LC−MS及びTLCで測定して反応が完全に進行したことが示された。反応液を水(50mL)でクエンチングし、酢酸エチル(15mL×3)で抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(5mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、吸引濾過した後、スピンドライした。残留物を分取TLC(PE:EA=1:1)によって分離し精製して、白色固体の産物であるN−(7−(1−(3−(シアノメチル)−1−(メタンスルホニル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−4−イル)ベンズ[d]チアゾリル−2−イル)シクロプロピルホルムアミド(45mg、収率:62%)を得た。1H NMR (400MHz, CDCl3)δ=12.26 (br. s., 1H), 8.07 (s, 2H), 7.74 (d, J=7.78Hz, 1H), 7.46-7.52 (m, 1H), 7.39-7.45 (m, 1H), 4.63 (d, J=9.03Hz, 2H), 4.30 (d, J=9.03Hz, 2H), 3.41 (s, 2H), 3.04 (s, 3H), 1.72-1.80 (m, 1H), 1.26 (d, J=3.26Hz, 2H), 1.01 (dd, J=7.40, 2.89Hz, 2H)。MS(ESI)計算値はC20H20N6O3S2[M+H]+457で、測定値は457であった。
実施例24
ステップ1:2−(ベンジルオキシ)−1−フルオロ−3−ニトロベンゼンの製造
2−フルオロ−6−ニトロフェノール(5.2g、23.9mmol)及びK2CO3(3.6g、26.3mmol)のアセトニトリル溶液(100mL)に、臭化ベンジル(4.3g、25.3mmol)を加えて、混合物を100℃で3時間攪拌し反応させた。TLC(PE:EA=10:1)で測定して反応が完全に進行したことが示された。反応液を吸引濾過して、固体を酢酸エチル(10mL×3)で洗浄した。ろ液をスピンドライした後、残留物を酢酸エチル(100mL)に溶解させ、水(20mL)及び飽和塩水(20mL)で洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥して、吸引濾過した後、スピンドライした。得られた黄色固体を産物である2−(ベンジルオキシ)−1−フルオロ−3−ニトロベンゼン(7.50g、収率:91.51%)の粗製品として、精製せず、そのまま次の反応に用いた。1H NMR (400MHz, CDCl3)δ=7.84 (d, J=8.03Hz, 1H), 7.79 (d, J=8.03Hz, 1H), 7.56 (d, J=6.53Hz, 2H), 7.37-7.45 (m, 3H), 7.16 (t, J=8.28Hz, 1H), 5.21 (s, 2H)。MS(ESI)計算値はC13H10BrNO3[M+H]+308で、測定値は308であった。
ステップ2:4−(2−(ベンジルオキシ)−3−ニトロベンゼン)−1H−ピラゾールの製造
窒素ガスの保護下で、2−(ベンジルオキシ)−1−ブロモ−3−ニトロベンゼン(1.0g、3.3mmol)及び4−ピナコールボロン酸ピラゾール−1−カルバン酸tert−ブチル(1.0g、3.4mmol)のジオキサン(30mL)溶液に、Pd(dppf)Cl2(250mg、341.7umol)、炭酸カリウム(1.4g、9.8mmol)及び水(5mL)を加えて、混合物を100℃で12時間攪拌し反応させた。TLC(PE:EA=1:1)及びLC−MSで測定して反応が完全に進行したことが示された。反応液を水(20mL)で希釈し、酢酸エチル(20mL×3)で抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(5mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、吸引濾過した後、スピンドライした。残留物をカラムクロマトグラフィー(PE:EA=1:1)によって分離し精製して、黄色油状の産物である4−(2−(ベンジルオキシ)−3−ニトロベンゼン)−1H−ピラゾール(900mg、収率:89.1%)を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=8.03 (s, 2H), 7.70-7.78 (m, 2H), 7.33-7.39 (m, 5H), 7.28-7.32 (m, 1H), 4.87 (s, 2H)。MS(ESI)計算値はC16H13N3O3[M+H]+296で、測定値は296であった。
ステップ3:3−(4−(2−(ベンジルオキシ)−3−ニトロベンゼン)−1H−ピラゾール−1−イル)−3−(シアノメチル)アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチルの製造
窒素ガスの保護下で、0℃で、4−(2−(ベンジルオキシ)−3−ニトロベンゼン)−1H−ピラゾール(900mg、3.1mmol)及び3−(シアノメチレン)アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチル(900mg、4.6mmol)のアセトニトリル溶液(20mL)に、DBU(928mg、6.1mmol)を滴加して、混合物を25℃で3時間攪拌し反応させた。TLC(PE:EA=1:1)で測定して反応が完全に進行したことが示された。 反応液を水(60mL)でクエンチングし、酢酸エチル(20mL×3)で抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(5mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、吸引濾過した後、スピンドライした。残留物をカラムクロマトグラフィー(PE:EA=1:1)によって 分離し精製して、黄色油状の産物である3−(4−(2−(ベンジルオキシ)−3−ニトロベンゼン)−1H−ピラゾール−1−イル)−3−(シアノメチル)アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチルを得た(1.00g、収率:60.3%)。 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ=7.96 (d, J=9.03Hz, 2H), 7.71-7.76 (m, 2H), 7.32-7.40 (m, 5H), 7.27-7.31 (m, 1H), 4.90 (s, 2H), 4.24 (d, J=9.54Hz, 2H), 4.12 (d, J=9.03Hz, 2H), 3.16 (s, 2H), 1.48 (s, 9H)。MS(ESI)計算値はC26H27N5O5[M+H]+490で、測定値は490であった。
ステップ4:2−(3−(4−(2−(ベンジルオキシ)−3−ニトロベンゼン)−1H−ピラゾール−1−イル)アゼチジン−3−イル)アセトニトリルの製造
3−(4−(2−(ベンジルオキシ)−3−ニトロベンゼン)−1H−ピラゾール−1−イル)−3−(シアノメチル)アゼチジン−1−カルボン酸tert−ブチル(1.0g、2.04mmol)及び塩酸酢酸エチル(50mL)の混合物を、25℃で1時間攪拌し反応させた。LC−MSで測定して反応が完全に進行したことが示された。反応液をそのままスピンドライした後、残留物を水(50mL)に溶解させて、飽和NaHCO3溶液で中性pH=7に調整した後、酢酸エチルで抽出した(15mL×3)。得られた有機相を合併し、飽和塩水(2mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、吸引濾過した後、スピンドライした。得られたオレンジ色の油状物を産物である2−(3−(4−(2−(ベンジルオキシ)−3−ニトロベンゼン)−1H−ピラゾール−1−イル)アゼチジン−3−イル)アセトニトリル(900mg、収率:90.6%)の粗製品として、精製せず、そのまま次の反応に用いた。MS(ESI)計算値はC21H19N5O3[M+H]+390で、測定値は390であった。
ステップ5:2−(3−(4−(2−(ベンジルオキシ)−3−ニトロベンゼン)−1H−ピラゾール−1−イル)−1−(メタンスルホニル)アゼチジン−3−イル)アセトニトリルの製造
窒素ガスの保護下で、0℃で、2−(3−(4−(2−(ベンジルオキシ)−3−ニトロベンゼン)−1H−ピラゾール−1−イル)アゼチジン−3−イル)アセトニトリル(900mg、2.3mmol)及びトリエチルアミン(730mg、7.2mmol)のジクロロメタン溶液(10mL)に、メタンスルホニルクロリド(529mg、4.6mmol)を滴加して、混合物を0℃で1時間攪拌し反応させた。LC−MSで測定して反応が完全に進行したことが示された。反応液を水(50mL)でクエンチングし、酢酸エチル(20mL×3)で抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(5mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、吸引濾過した後、スピンドライした。残留物をカラムクロマトグラフィー(PE:EA=1:1(0.5% Et3N))によって分離し精製して、黄色油状の産物である2−(3−(4−(2−(ベンジルオキシ)−3−ニトロベンゼン)−1H−ピラゾール−1−イル)−1−(メタンスルホニル)アゼチジン−3−イル)アセトニトリル(450mg、収率:37.50%)を得た。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ=7.98 (d, J=12.55Hz, 2H), 7.71-7.78 (m, 2 H), 7.34-7.41 (m, 5H), 7.30 (t, J=8.03Hz, 1H), 4.88-4.93 (m, 2H), 4.33 (d, J=9.03Hz, 2H), 4.09 (d, J=9.54Hz, 2H), 3.21 (s, 2H), 2.95 (s, 3H)。MS(ESI)計算値はC22H21N5O5S[M+H]+468で、測定値は468であった。
ステップ6:2−(3−(4−(3−アミノ−2−ヒドロキシフェニル)−1H−ピラゾール−1−イル)−1−(メタンスルホニル)アゼチジン−3−イル)アセトニトリルの製造
水素ガスの雰囲気下において、2−(3−(4−(2−(ベンジルオキシ)−3−ニトロベンゼン)−1H−ピラゾール−1−イル)−1−(メタンスルホニル)アゼチジン−3−イル)アセトニトリル(400mg、855.6umol)の酢酸エチル溶液(10mL)に、Pd/C(200mg、1.9mmol)を加えて、混合物を25℃で1.5時間攪拌し反応させた。 LC−MSで測定して反応が完全に進行したことが示された。反応液を吸引濾過してPd/Cを除去した後、低温でロータリーエバポレーターにより少し濃縮した。得られた浅黄色の産物である2−(3−(4−(3−アミノ−2−ヒドロキシフェニル)−1H−ピラゾール−1−イル)−1−(メタンスルホニル)アゼチジン−3−イル)アセトニトリル(300mg、収率:80.75%)を精製せず、そのまま次の反応に用いた。MS(ESI)計算値はC15H17N5O3S[M+H]+348で、測定値は348であった。
ステップ7:2−(3−(4−(2−アミノベンズ[d]オキサゾール−7−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−1−(メタンスルホニル)アゼチジン−3−イル)アセトニトリル(WX29)の製造
窒素ガスの保護下で、2−(3−(4−(3−アミノ−2−ヒドロキシフェニル)−1H−ピラゾール−1−イル)−1−(メタンスルホニル)アゼチジン−3−イル)アセトニトリル(300mg、863.58umol)の酢酸エチル溶液(5mL)に、臭化シアン(100mg、944.1umol)を加えて、混合物を50℃で12時間攪拌し反応させた。LC−MS及びTLC(DCM:MeOH=10:1)で測定して反応が完全に進行したことが示された。反応液をそのままスピンドライした後、DCM:MeOH=10:1(3mL)に溶解させ、分取TLC(DCM:MeOH=10:1)によって分離し精製して、黄色固体の産物である2−(3−(4−(2−アミノベンズ[d]オキサゾール−7−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−1−(メタンスルホニル)アゼチジン−3−イル)アセトニトリル(200mg、収率:56.0%)を得た。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ=8.26 (br. s., 1H), 8.10 (s, 1H), 7.26-7.28 (m, 2H), 7.24 (d, J=7.28Hz, 1H), 4.65 (d, J=9.03Hz, 2H), 4.28 (d, J=9.29Hz, 2H), 3.45 (s, 2H), 3.04 (s, 3H)。MS(ESI)計算値はC16H16N6O3S[M+H]+373で、測定値は373であった。
ステップ8:N−(7−(1−(3−(シアノメチル)−1−(メタンスルホニル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−4−イル)ベンズ[d]オキサゾール−2−イル)シクロプロピルホルムアミド(WX30)の製造
窒素ガスの保護下で、2−(3−(4−(2−アミノベンズ[d]オキサゾール−7−イル)−1H−ピラゾール−1−イル)−1−(メタンスルホニル)アゼチジン−3−イル)アセトニトリル(100mg、268.5umol)及びトリエチルアミン(54mg、537.1umol)のアセトニトリル溶液(3mL)に、シクロプロパンカルボニルクロリド(30mg、287.3umol)を滴加して、混合物を30℃で12時間攪拌し反応させた。LCMSで測定して反応の収率が比較的に低いことが示された。反応液をそのままスピンドライして、残留物を分取TLC(DCM:MeOH=10:1)によって分離し精製して、黄色固体の産物であるN−(7−(1−(3−(シアノメチル)−1−(メタンスルホニル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−4−イル)ベンズ[d]オキサゾール−2−イル)シクロプロピルホルムアミドを得た(10mg、収率:8.45%)。1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ=12.05 (br. s., 1H), 8.77 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.60 (d, J=7.53Hz, 1H), 7.44 (d, J=7.53Hz, 1H), 7.31-7.38 (m, 1H), 4.52 (d, J=9.29Hz, 2H), 4.30 (d, J=9.03Hz, 2H), 3.66 (s, 2H), 3.15 (s, 3H), 2.14 (br. s., 1H), 0.96 (d, J=5.52Hz, 4H)。MS(ESI)計算値はC20H20N6O4S[M+H]+441で、測定値は441であった。
実施例25
ステップ1:N−[(3−クロロピラジン−2−イル)チオカルバモイル]カルボン酸エチルの製造
3−クロロピラジン−2−アミン(8.7g、67.2mmol)を溶解させたTHF(100mL)にイソチオシアン酸エチル(9.7g、73.9mmol)を加えて、得られた混合物を27℃で48時間攪拌し反応させた。LC−MSで反応が完全に進行したことが示された。混合物を溶媒THFで減圧でスピンドライして、粗製品のN−[(3−クロロピラジン−2−イル)チオカルバモイル]カルボン酸エチルを得て、メチルtert−ブチルエーテルで洗浄し乾燥して、精製せず(純度が十分である)、そのまま次の反応に用いた。MS(ESI)計算値はC8H9ClN4O2S[M+H]+261で、測定値は261であった。
ステップ2:8−クロロ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピラジニル−2−アミンの製造
塩酸ヒドロキシルアミン(20.0g、287.7mmol)を100mLのエタノール及びメタノール(1:1)の混合物に懸濁させて、DIEA(22.3g、172.6mmol)を加えて、得られた混合物を27℃で1時間攪拌し反応させた後、N−[(3−クロロピラジン−2−イル)チオカルバモイル]カルバミン酸エチル(15.0g、57.54mmol)を該反応体系に加えて、ゆっくりと3時間還流した(70℃)。LC−MSで反応が完全に進行したことが示された。反応物を室温に冷却して、ろ過し、水及びMTBEで洗浄し、その後、真空で乾燥して(60℃)、黄色固体の8−クロロ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピラジニル−2−アミン(6.50g、収率:64.62%)を得た。MS(ESI)計算値はC5H4ClN5[M+H]+170で、測定値は170であった。
ステップ3:N−(8−クロロ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピラジニル−2−イル)シクロプロパンカルボキサミドの製造
5℃で、8−クロロ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピラジニル−2−アミン(2.0g、11.8mmol)を溶解させた無水CH3CN(30mL)に、Et3N(3g、29.5mmol)を加えて、続いてシクロプロパンカルボニルクロリド(3.1g、29.5mmol)を加えた。その後、反応混合物を28℃に昇温させて攪拌した。LC−MSで原料が全て消耗したことが示された。反応が完全に進行したことを保証するために、必要に応じて、更にEt3N(7.1mmol)及びシクロプロパンカルボニルクロリド(7.1mmol)を加えた。溶媒を減圧でスピンドライして残留物を得た。残留物をEt2O(50mL)で叩解して、固体をろ過し収集した。H2O(2×50mL)、アセトン(50mL)、及びEt2O(50mL)で洗浄し、真空で乾燥して、所望の黄色固体のN−(8−クロロ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピラジニル−2−イル)シクロプロパンカルボキサミドを得た(1.2g)。MS(ESI)計算値はC9H8ClN5O[M+H]+237で、測定値は237であった。
ステップ4:N−[8−(1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピラジニル−2−イル]シクロプロパンカルボキサミドの製造
N−(8−クロロ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピラジニル−2−イル)シクロプロパンカルボキサミド(100mg、420.8umol)、4−(4,4,5,5−テトラメチル−1,3,2−ジオキサホスホラン−2−イル)−1H−ピラゾール(122.5mg、631.2umol)、及びK2CO3(175mg、1.3mmol)を溶解させた混合溶媒H2O(1mL)/ジオキサン(4mL)に、Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2(34mg、42.08umol)を加えた。真空で排気し窒素ガスを充填した後、混合物を100℃で3時間攪拌し反応させた。LC−MSで反応が完全に進行したことが示された。室温に冷却して、混合物を珪藻土でろ過し、珪藻土をDCM(30mL)で洗浄した。有機層を分離して、水層をDCM(3×50mL)で抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水で洗浄し、無水Na2SO4で乾燥して、溶媒を減圧でスピンドライした。粗製品を分取薄層クロマトグラフィー(DCM/MeOH=10:1)によって精製して、浅黄色固体のN−[8−(1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピラジニル−2−イル]シクロプロパンカルボキサミド(70mg、収率:8.1%)を得た。MS(ESI)計算値はC12H11N7O[M+H]+270で、測定値は270であった。
ステップ5:N−[8−[1−[3−(シアノメチル)−1−エチルスルホニルアゼチジン−3−イル]ピラゾール−4−イル]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピラジニル−2−イル]シクロプロパンカルボキサミド(WX31)の製造
N−[8−(1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピラジニル−2−イル]シクロプロパンカルボキサミド(120mg、445.7umol)、2−(1−エチルスルホニルアゼチジン−3−イリデン)アセトニトリル(125mg、668.5umol)を溶解させたDMF(10mL)溶液に、DBU(136mg、891umol)を加えて、得られた混合物を40℃で16時間攪拌し反応させた。LC−MSで反応が完全に進行したことが示された。溶媒を減圧でスピンドライして、残留物をEtOAc(50mL)に溶解させた。該溶液を順に1N HCl(10mL)及び塩水(20mL)で洗浄し、有機相を無水Na2SO4で乾燥して、溶媒を減圧でスピンドライした。残留物を分取薄層クロマトグラフィー(PE/EA=1:4)によって精製して、粗化合物を得て、それをさらに分取HPLC(HCl)によって精製し冷凍乾燥して、白色固体のN−[8−[1−[3−(シアノメチル)−1−エチルスルホニルアゼチジン−3−イル]ピラゾール−4−イル]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピラジニル−2−イル]シクロプロパンカルボキサミドを得た(40mg)。1H-NMR (400MHz, MeOD-d4) δ=8.07 (d, J=8Hz, 2H), 7.86 (dd, J=7.2, 13.2Hz, 2H), 7.67 (d, J=8.4Hz, 2H), 7.44-7.42 (m, 1H), 4.19 (s, 2H), 3.44 (d, J=4.8Hz, 4H), 3.26 (d, J=4.8Hz, 4H), 2.95 (m, 1H), 0.87 (m, 2H), 0.74 (m, 2H)。MS(ESI)計算値はC19H21N9O3S[M+H]+456で、測定値は456であった。
実施例26
ステップ1:3−オキソシクロブタンカルボン酸ベンジルの製造
3−オキソシクロブタンカルボン酸 (3.0g、26.3mmol)、臭化ベンジル (6.7g、39.4mmol)、及び炭酸カリウム(7.3g、52.6mmol)を溶解させたアセトン溶液(30mL)を10時間加熱還流した。TLCで反応が完全に進行したことが示された後、反応液を減圧で濃縮して溶媒を除去し、水(20mL)を加えて、酢酸エチル(150mL×2)で抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(50mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、ろ過し真空で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=10:1)によって精製して、無色液体の3−オキソシクロブタンカルボン酸ベンジルを得た(2.5g、収率:41.9%)。MS(ESI)計算値はC12H12O3[M+H]+205で、測定値は205であった。
ステップ2:3,3−ジフルオロシクロブタンカルボン酸ベンジルの製造
−60℃で、3−オキソシクロブタンカルボン酸ベンジル(1.0g、4.9mmol)を溶解させたジクロロメタン溶液(35mL)に、DAST(1.6g、9.8mmol)を1滴ずつ滴加した後、反応液をゆっくりと15℃に昇温させ10時間攪拌した。TLCで反応が完全に進行したと示された。反応液を0℃に冷却して、飽和炭酸水素ナトリウム溶液(10mL)を加えてクエンチングし、水相をジクロロメタン(30mL×2)で抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(10mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、ろ過し真空で濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(石油エーテル:酢酸エチル=20:1〜10:1)によって精製して、無色油状の3,3−ジフルオロシクロブタンカルボン酸ベンジルを得た(450mg、収率:36.54%)。MS(ESI)計算値はC12H12F2O2[M+H]+227で、測定値は227であった。
ステップ3:3,3−ジフルオロシクロブタンカルボン酸の製造
3,3−ジフルオロシクロブタンカルボン酸ベンジル(450mg、2.0mmol)を溶解させたエタノール(10mL)溶液に、Pd/C(10%、40mg)を加えて、反応液を水素ガス(15Psi)の雰囲気において、常温で10時間攪拌し反応させた。TLCで反応が完全に進行したことが示された。固体をろ過し、ろ液を真空で濃縮して、白色固体の3,3−ジフルオロシクロブタンカルボン酸(250mg、収率:83.1%)を得た。MS(ESI)計算値はC5H6F2O2[M+H]+137で、測定値は137であった。
ステップ4:3,3−ジフルオロシクロブタンカルボニルクロリドの製造
0℃で、3,3−ジフルオロシクロブタンカルボン酸(230mg、1.69mmol)及びDMF(13mg、169.0umol)を溶解させたジクロロメタン(5mL)溶液に、塩化オキサリル(322mg、2.5mmol)を1滴ずつ滴加した後、反応液を常温で3時間攪拌した。TLCで反応が完全に進行したことが示された。反応液を真空で濃縮して、黄色固体の3,3−ジフルオロシクロブタンカルボニルクロリド(300mg、粗製品)を得て、精製せず、そのまま次の反応に用いた。MS(ESI)計算値はC5H5ClF2O[M+H]+155で、測定値は155であった。
ステップ5:tert−ブチル 3−(シアノメチル)−3−[4−[2−[(3,3−ジフルオロシクロブタンカルボン酸)アミノ]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−5−イルピラゾール−1−イル]アゼチジン−1−カルボン酸の製造
0℃で、tert−ブチル 3−[4−(2−アミノ−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−5−イル)ピラゾール−1−イル]−3−(シアノメチル)アゼチジン−1−カルボン酸(395mg、1.0mmol)、DMAP(13mg、110umol)及びピリジン(396mg、5mmol)を溶解させたジクロロメタン(8mL)溶液に、3,3−ジフルオロシクロブタンカルボニルクロリド(294mg、1.9mmol)を加えて、混合物を40℃に加熱して10時間攪拌した。LCMSで反応が完成したことが示された。反応液を水(5mL)に注ぎ、水相をジクロロメタン(15mL×2)で抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(10mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、ろ過し真空で濃縮した。残留物を分取TLC(酢酸エチル:石油エーテル=1:0)によって精製して、白色固体のtert−ブチル 3−(シアノメチル)−3−[4−[2−[(3,3−ジフルオロシクロブタンカルボン酸)アミノ]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−5−イルピラゾール−1−イル]アゼチジン−1−カルボン酸を得た(80mg、収率:12.00%)。MS(ESI)計算値はC23H25F2N9O3[M+H]+514で、測定値は514であった。
ステップ6:N−[5−[1−[3−(シアノメチル)アゼチジン−3−イル]ピラゾール−4−イル]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−2−イル]−3,3−ジフルオロ−シクロブタンホルムアミドの製造
tert−ブチル 3−(シアノメチル)−3−[4−[2−[(3,3−ジフルオロシクロブタンカルボン酸)アミノ]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−5−イルピラゾール−1−イル]アゼチジン−1−カルボン酸(80mg、155.8umol)を溶解させたジクロロメタン(5mL)溶液に、トリフルオロ酢酸(765mg、6.7mmol)を滴加して、反応液を常温で2時間攪拌した。LCMSで反応が完成したことが示された。反応液を真空で濃縮して、褐色固体のN−[5−[1−[3−(シアノメチル)アゼチジン−3−イル]ピラゾール−4−イル]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−2−イル]−3,3−ジフルオロ−シクロブタンホルムアミド(100mg、粗製品、TFA塩)を得て、精製せず、そのまま次の反応に用いた。MS(ESI)計算値はC18H17F2N9O[M+H]+414で、測定値は414であった。
ステップ7:N−[5−[1−[3−(シアノメチル)−1−(トリフルオロメタンスルホニル)アゼチジン−3−イル]ピラゾール−4−イル]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−2−イル]−3,3−ジフルオロシクロブタンホルムアミド(WX32)の製造
N−[5−[1−[3−(シアノメチル)アゼチジン−3−イル]ピラゾール−4−イル]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−2−イル]−3,3−ジフルオロ−シクロブタンホルムアミド(100mg、189.61umol、TFA塩)を溶解させたジクロロメタン溶液(8mL)に、トリフルオロメチルスルホニルクロリド(38mg、227.5mmol)を加えた後、更にトリエチルアミン(96mg、948.1umol)を加えて、反応液を常温で10時間攪拌した。LCMSで反応が完成したことが示された。反応液を真空で濃縮して、残留物を分取HPLCによって精製して、白色固体のN−[5−[1−[3−(シアノメチル)−1−(トリフルオロメタンスルホニル)アゼチジン−3−イル]ピラゾール−4−イル]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−c]ピリミジン−2−イル]−3,3−ジフルオロ−シクロブタンホルムアミド(WX32)(3mg、収率:2.9%)を得た。MS(ESI)計算値はC19H16F5N9O3S[M+H]+546で、測定値は546であった。
実施例27
ステップ1:tert−ブチル4−[3−(シアノメチル)−3−[4−[2−(シクロプロパンカルボニルアミノ)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン5−イル]ピラゾール−1−イル]アゼチジン−1−イル]ピペリジン−1−カルボン酸tert−ブチル(1)の製造
中間体8(250mg、689.9umol) 、4−オキソピペリジンカルボン酸tert−ブチル(137mg、689.9umol) 及びNaBH(OAc)3(292mg、1.4mmol)を溶解させたTHF(3mL)に、DIEA(446mg、3.5mmol)を加えて、反応系を真空で排気し窒素ガスを充填して保護した。その後、該混合物を26℃で12時間攪拌し反応させた。LC−MSで反応が完全に進行したことが示された後、ろ過して、ろ液を水(3mL)で洗浄し、EA(5ml×3)で抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(3mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、ろ過し、ろ液を減圧で蒸留して溶媒を除去した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(DCM/MeOH=20/1)によって精製して、黄色固体(143.00mg、収率:37.99%)を得た。MS ESI計算値はC28H35N9O3[M+H]+546で、測定値は546であった。
ステップ2:N−[5−[1−[3−(シアノメチル)−1−(4−ピペリジル)アゼチジン−3−イル]ピラゾール−4−イル]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−]ピリジン−2−イル]シクロプロパンカルボキサミド(2)の製造
tert−ブチル4−[3−(シアノメチル)−3−[4−[2−(シクロプロパンカルボニルアミノ)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−5−イル]ピラゾール−1−イル]アゼチジン−1−イル]ピペリジン−1−カルボン酸tert−ブチル(143mg、262.1umol)を溶解させたジクロロメタン(5mL)に、トリフルオロ酢酸(2mL)を滴加した後、該反応液を26℃で3時間攪拌し反応させた。LC−MSで反応が完全に進行したことが示された後、減圧で蒸留して溶媒を除去して、黄色固体(56mg、粗製品)を得て、精製せず、そのまま次の反応に用いた。MS ESI計算値はC23H27N9O[M+H]+446で、測定値は446であった。
ステップ3:エチル6−(ブロモメチル)−2−(トリフルオロメチル)ピリミジン−4−カルボン酸エチルエステル(3)の製造
6−メチル−2−(トリフルオロメチル)ピリミジン−4−カルボン酸エチルエステル(2.0g、8.5mmol)を溶解させた酢酸(12mL)に、Br2(1.4g、8.5mmol)を滴加して、該反応液を80℃で30分間攪拌し反応させた。LC−MSで反応が完全に進行したことが示された後、減圧で蒸留して溶媒を除去して、残留物を分取HPLC(PE/EA=3/1)によって分離して、黄色油状の液体を得た(610mg、収率:12.3%)。MS ESI計算値はC9H8BrF3N2O2[M+H]+313で、測定値は313であった。
ステップ4:エチル6−[(ジメチルアミノ)メチル]−2−(トリフルオロメチル)ピリミジン−4−カルボン酸エチルエステル(4)の製造
エチル6−(ブロモメチル)−2−(トリフルオロメチル)ピリミジン−4−カルボン酸エチルエステル(610mg、2.0mmol) 及びN−ジメチルアミン(318mg、3.9mmol)を溶解させたジクロロメタン(20mL)に、トリエチルアミン(592mg、5.9mmol)を滴加して、該反応液を26℃で0.5時間攪拌した。LC−MSで反応が完全に進行したことが示された。ろ液を水(20mL)で洗浄し、EA(20mL×3)で抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(20mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、ろ過し、ろ液を減圧で蒸留して溶媒を除去した。残留物を分取HPLC(PE/EA=3/1)によって分離し精製して、黄色液体(310mg、収率:51.6%)を得た。MS ESI計算値はC11H14F3N3O2[M+H]+278で、測定値は278であった。
ステップ5:6−[(ジメチルアミノ)メチル]−2−(トリフルオロメチル)ピリミジン−4−カルボン酸(5)の製造
エチル6−[(ジメチルアミノ)メチル]−2−(トリフルオロメチル)ピリミジン−4−カルボン酸エチルエステル(310mg、1.1mmol)を溶解させたテトラヒドロフラン(8mL)及び水(2mL)に、水酸化リチウム(54mg、2.3mmol)を加えて、該反応液を26℃で0.5時間攪拌し反応させた。LC−MSで反応が完全に進行したことが示された後、減圧で蒸留して溶媒を除去して、黄色油状の液体(314mg)を得て、精製せず、そのまま次の反応に用いた。MS ESI計算値はC9H10F3N3O2[M+H]+250で、測定値は250であった。
ステップ6:N−(5−(1−(3−(シアノメチル)−1−(1−(6−((ジメチルアミノ)メチル)−2−(トリフルオロメチル)ピリミジン−4−カルボニル)ピペリジン−4−イル)アゼチジン−3−イル)−1H−ピラゾール−4−イル)−[1,2,4]トリアゾール[1,5−a]ピリジン−2−イル)シクロプロパンカルボキサミド(WX33)の製造
N−[5−[1−[3−(シアノメチル)−1−(4−ピペリジン)アゼチジン−3−イル]ピラゾール−4−イル]−[1,2,4]トリアゾール[1,5−]ピリジン−2−イル]シクロプロパンカルボキサミド(480mg、107.7umol)、化合物2(27mg、107.7umol)、EDCI(52mg、269.4umol)、及び HOBt(36mg、269.4umol)を溶解させたDMF溶液(3mL)に、TEA(55mg、538.7umol)を加えて、該反応液を26℃で12時間攪拌し反応させた。LC−MSで反応が完全に進行したことが示された。反応液をEA(10mL)及び水(10mL)に溶解させ、有機層を分けて、水層をEA(2×15mL)で2回抽出した。得られた有機相を合併し、飽和塩水(5mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、ろ過し、ろ液を減圧で蒸留して溶媒を除去した。分取HPLCによって分離して白色固体(WX33)を得た(5mg、収率:6.9%)。1H NMR (400MHz, METHANOL-d4) δ=9.18 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.75-7.69 (m, 1H), 7.57 (ddd, J=1.1, 8.1, 18.9Hz, 2H), 3.87-3.73 (m, 6H), 3.53 (s, 2H), 3.43-3.35 (m, 1H), 3.30-3.21 (m, 1H), 2.74-2.66 (m, 1H), 2.37 (s, 6H), 2.06-1.93 (m, 2H), 1.50 (d, J=10.3Hz, 1H), 1.38-1.28 (m, 4H), 1.11-1.05 (m, 2H), 1.01-0.95 (m, 2H)。MS ESI計算値はC33H35F3N12O2[M+H]+677で、測定値は677であった。
Jak1、2、Jak3キナーゼのインビトロ活性試験
試験材料
組換え体タンパク質JAK1、JAK2、JAK3プロテアーゼは、いずれもLifetechnologyから購入し、LANCE Ultra ULight(商標)−JAK−1(Tyr1023)ペプチド及びLANCE Eu−W1024 Anti−Phosphotyrosine(PT66)は、いずれもPerkinElmerから購入した。読み取りは、マイクロプレートリーダーEnvision(PerkinElmer)で実施した。
試験方法:
被験化合物を濃度勾配で3倍希釈して、最終濃度は10uM〜0.17nMにおける11個の濃度であり、各濃度で2個のウェルを設けた。測定反応におけるDMSOの含有量は1%である。
JAK1酵素反応:
2nM JAK1プロテインキナーゼ、50nM LANCE Ultra ULight(商標)−JAK−1(Tyr1023)ペプチド、38uM ATP、50mM HEPES(pH7.5)、10mM MgCl2、1mM EGTA、2mM DTT、0.01% BRIJ−35。ウェルプレートはWhite Proxiplate 384−Plus plate(PerkinElmer)で、室温で90分間反応させ、反応体系は10ulである。
JAK2酵素反応:
0.02nM JAK2プロテインキナーゼ、50nM LANCE Ultra ULight(商標)−JAK−1(Tyr1023)ペプチド、12uM ATP、50mM HEPES(pH7.5)、10mM MgCl2、1mM EGTA、2mM DTT、0.01% BRIJ−35。ウェルプレートはWhite Proxiplate 384−Plus plate(PerkinElmer)で、室温で60分間反応させ、反応体系は10ulである。
JAK3酵素反応:
0.05nM JAK2プロテインキナーゼ、50nM LANCE Ultra ULight(商標)−JAK−1(Tyr1023)ペプチド、4uM ATP、50mM HEPES(pH7.5)、10mM MgCl2、1mM EGTA、2mM DTT、0.01% BRIJ−35。ウェルプレートはWhite Proxiplate 384−Plus plate(PerkinElmer)で、室温で90分間反応させ、反応体系は10ulである。
反応測定:
10ulの測定試薬をウェルプレートに添加して、ここで、LANCE Eu−W1024 Anti−Phosphotyrosine(PT66)の最終濃度は2nMで、EDTAの最終濃度は10mMで、室温で60分間インキュベートした。読み取りは、Envisonで実施した。
データ分析
阻害率(%)=(Min−Ratio)/(Max−Min)×100%の式でリード数を阻害率(%)に変換した。4パラメートの曲線あてはめ(Model 205 in XLFIT5、iDBS)で、IC50を測定し、詳細を表1に示す。
結論:本発明に係る化合物は、トファシチニブよりもJAK2に対する選択性が良い。