JP6516829B2

JP6516829B2 - 第ｖｉｉｉ因子製剤

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Publication number: JP6516829B2
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Authority: JP
Inventors: ウーヴェ・リービンク; フーベルト・メツナー; クリスティーナ・ボーデンベンダー
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Priority date: 2014-08-04
Filing date: 2015-07-24
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Description

第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）は血漿中に見られるタンパク質であり、これが数段階の反応中でコファクターとして作用し血液凝固をもたらす。血中での一定量のＦＶＩＩＩ活性の欠乏は、血友病Ａ、主に男性が罹患する遺伝性疾患として知られる凝固障害につながる。現在、血友病Ａは、ヒト血漿に由来するかまたは組換えＤＮＡ技術を使用して製造されるＦＶＩＩＩの治療用製剤により治療されている。このような製剤は、出血症状発現（オンデマンド療法）または頻繁に、一定間隔での制御不能な出血の予防目的（予防法）のいずれかに応じて投与される。

ＦＶＩＩＩは治療用製剤において比較的不安定であることが知られている。血漿中でＦＶＩＩＩは、別の血漿タンパク質、フォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）と通常複合体形成し、ｖＷＦはＦＶＩＩＩより多量にモル過剰のＶＷＦサブユニットで血漿中に存在し、ＦＶＩＩＩを時期尚早な分解から保護すると考えられる。別の血漿中循環タンパク質、アルブミンもｉｎｖｉｖｏでＦＶＩＩＩを安定化する役割を果たすことができる。したがって、現在市販されているＦＶＩＩＩ製剤は、製造工程中および保存中にＦＶＩＩＩを安定化するため、アルブミンおよび／またはｖＷＦの使用に依存することが多い。

現在市販されているＦＶＩＩＩ製剤中で使用されるアルブミンとｖＷＦはヒト血漿に由来するが、しかしながら、このような物質の使用には幾つか特定の欠点がある。典型的には、ＦＶＩＩＩと比較して多量にモル過剰のアルブミンを加えて、こうした製剤中のＦＶＩＩＩの安定性を増大させ、これによってこれらの製剤中のＦＶＩＩＩタンパク質自体を特徴付けることがさらに難しくなる。ＦＶＩＩＩへのヒト由来アルブミンの添加も、組換え生成ＦＶＩＩＩ製剤に関しては欠点であると考えられる。これは、このようなアルブミン添加がない状態では、組換え由来ＦＶＩＩＩ製剤においてウイルスが伝播する理論上のリスクが低減する可能性があるからである。

アルブミンもしくはｖＷＦを含まない（または比較的低レベルのこれらの賦形剤を含む）ＦＶＩＩＩを製剤化するための幾つかの試みが記載されている。例えば、特許文献１は、塩化ナトリウムおよびスクロースなどの賦形剤以外に、洗浄剤とアミノ酸、具体的にはアルギニンおよびグリシンの特定の組合せを含有するＦＶＩＩＩ製剤を記載する。

特許文献２も、アルブミンを含まず、１５〜６０ｍＭのスクロース、最大５０ｍＭのＮａＣｌ、最大５ｍＭの塩化カルシウム、６５〜４００ｍＭのグリシン、および最大５０ｍＭのヒスチジンを含む治療用ＦＶＩＩＩ製剤を記載する。

（ＰｈａｒｍａｃｉａａｎｄＵｐｊｏｈｎに譲渡された）Ｏｓｔｅｒｂｅｒｇへの特許文献３は、０．０１〜１ｍｇ／ｍｌの界面活性剤を含む製剤を開示する。

低濃度または高濃度の塩化ナトリウムを使用する他の試みも記載されている。特許文献４は、比較的低濃度の塩化ナトリウム、すなわち０．５ｍＭ〜１５ｍＭのＮａＣｌを含む製剤を開示する。

他方で、特許文献５は、比較的高濃度の塩化ナトリウムを含む製剤の使用を教示する。

さらなるＦＶＩＩＩ製剤は、特許文献６、特許文献７、特許文献８、特許文献９、特許文献１０、特許文献１１、特許文献１２、特許文献１３、特許文献１４、特許文献１５、特許文献１６、特許文献１７、特許文献１８、特許文献１９、特許文献２０、特許文献２１、特許文献２２、特許文献２３および特許文献２４中に開示される。特許文献７はヒスチジンとＣａＣｌ_２を含むＦＶＩＩＩ組成物を開示するが、特許文献７の組成物におけるヒスチジンとＣａ^２＋の組合せ濃度は、水溶液中で望ましいＦＶＩＩＩ安定性をもたらすのには低すぎる。

従来技術の他の治療用ＦＶＩＩＩ製剤は、ＦＶＩＩＩを安定化する目的でアルブミンおよび／またはｖＷＦを一般に含み、したがって本開示とは関連がない。

ＦＶＩＩＩ組成物の調製における１つの問題は、凍結乾燥およびその後の再構成後の使用に適した溶液をもたらすことである。この点における重要な尺度は、ＦＶＩＩＩ溶液が安定したＦＶＩＩＩ活性を示さなければならず、凍結乾燥前に濁りを示してはならないことである。ＦＶＩＩＩ水溶液が凍結乾燥前に濁った状態である場合、これはＦＶＩＩＩ自体を含めた溶液中の１種またはそれ以上の物質が凝集した明らかな徴候である。このことは、典型的にそれが活性低下をもたらす変性タンパク質の指標であるため非常に望ましくない。ＦＶＩＩＩ製剤に関する第二の大きな問題は、凍結乾燥後のそれらの安定性である。乏しい安定性の徴候には、凍結乾燥、保存および再構成後のＦＶＩＩＩ残存活性の低下、ならびにＦＶＩＩＩの高分子量複合体の存在がある。

したがって、如何なる濁度、または例えば凍結乾燥前の相当な活性消失のような他の関連性質障害も示さず、同時に凍結乾燥後の長期の安定性を有する、ＦＶＩＩＩを含む組成物が非常に必要とされる。組成の点で凍結乾燥前の安定溶液と安定凍結乾燥物の要件は著しく変わり得るので、このような安定状態の製剤を開発する際は、両方の状態を考慮しなければならない。

特定最小濃度でヒスチジンとカルシウムを含む本発明による組成物によって、これを行うことができることが、現在驚くべきことに発見されている。本発明者らは、詳細には、ＦＶＩＩＩの安定性に関して、ヒスチジンの低濃度は高カルシウム濃度によってバランスをとることができ、逆もまた然りであることを発見している。これは、例えば特許文献７中には開示されておらず、したがってその中に記載された組成物によって、本発明において特許請求する主題は予想されない。具体的には、特許文献７の組成物のヒスチジン濃度は本出願の請求項１によって要求される濃度より低い。本発明の組成物には、それらが重量オスモル濃度に関して生理的条件に近い点で他の利点がある。これによって、多くの従来技術の第ＶＩＩＩ因子製剤に存在する著しく高浸透圧性の組成物によって引き起こされる可能性がある、刺激または他の局所的影響が回避される。

米国特許第５，５６５，４２７号（ＥＰ５０８１９４）米国特許第５，７６３，４０１号（ＥＰ８１８２０４）米国特許第５，７３３，８７３号（ＥＰ６２７９２４）米国特許第４，８７７，６０８号（ＥＰ３１５９６８）米国特許第５，６０５，８８４号（ＥＰ０３１４０９５）ＷＯ２０１０／０５４２３８ＥＰ１７１２２２３（Ａ１）ＷＯ２０００／４８６３５ＷＯ９６／３００４１ＷＯ９６／２２１０７ＷＯ２０１１／０２７１５２ＥＰ２３６１６１３ＥＰ０４１０２０７ＥＰ０５１１２３４米国特許第５，５６５，４２７号ＥＰ０６３８０９１ＥＰ０８７１４７６ＥＰ０８１９０１０米国特許第５，８７４，４０８号ＵＳ２００５／０２５６０３８ＵＳ２００８／００６４８５６ＷＯ２００５／０５８２８３ＷＯ２０１２／０３７５３０ＷＯ２０１４／０２６９５４

本発明は、ＦＶＩＩＩの水性組成物であって、血友病Ａを有する対象の治療に使用できる、組成物に関する。

以下の項目（１）〜（９３）は、本発明の様々な態様および実施形態を記載する：

（１）凝固第ＶＩＩＩ因子の水性組成物であって、
ａ．ＦＶＩＩＩ分子、
ｂ．４０〜１９５ｍＭのナトリウム塩、
ｃ．ヒスチジン、
ｄ．少なくとも１ｍＭのカルシウム塩、および
ｅ．界面活性剤
を含み、［Ｈｉｓ］≧１８０ｍＭ−２０＊［Ｃａ^２＋］（式中、［Ｃａ^２＋］は該水性組成物中の１リットルあたりのミリモルでのカルシウムイオンの濃度であり、［Ｈｉｓ］は該水性組成物中の１リットルあたりのミリモルでのヒスチジンの濃度である）であり、該組成物のモル浸透圧濃度は６００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ以下である前記水性組成物。

（２）凝固第ＶＩＩＩ因子の水性組成物であって、
ａ．ＦＶＩＩＩ分子、
ｂ．４０〜９５ｍＭのナトリウム塩、
ｃ．ヒスチジン、
ｄ．少なくとも１ｍＭのカルシウム塩、および
ｅ．界面活性剤
を含み、［Ｈｉｓ］≧１８０ｍＭ−２０＊［Ｃａ^２＋］（式中、［Ｃａ^２＋］は該水性組成物中の１リットルあたりのミリモルでのカルシウムイオンの濃度であり、［Ｈｉｓ］は該水性組成物中の１リットルあたりのミリモルでのヒスチジンの濃度である）であり、該組成物のモル浸透圧濃度は好ましくは６００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ以下である前記水性組成物。

（３）凝固第ＶＩＩＩ因子の水性組成物であって、
ａ．ＦＶＩＩＩ分子、
ｂ．少なくとも４０ｍＭのナトリウム塩、
ｃ．ヒスチジン、
ｄ．スクロース
ｅ．少なくとも１ｍＭのカルシウム塩、および
ｆ．界面活性剤
を含み、［Ｈｉｓ］≧１８０ｍＭ−２０＊［Ｃａ^２＋］（式中、［Ｃａ^２＋］は該水性組成物中の１リットルあたりのミリモルでのカルシウムイオンの濃度であり、［Ｈｉｓ］は該水性組成物中の１リットルあたりのミリモルでのヒスチジンの濃度である）であり、該組成物のモル浸透圧濃度は好ましくは６００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ以下である前記水性組成物。

（４）［Ｈｉｓ］＞０という条件によって公式が決まる、前述の項目（１）〜（３）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（５）ナトリウム塩の濃度が５０〜１５０ｍＭである、項目（１）または（３）に記載の水性組成物。

（６）ナトリウム塩の濃度が５０〜９５ｍＭである、前述の項目（１）〜（５）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（７）ナトリウム塩の濃度は５０〜７５ｍＭである、前述の項目（１）〜（６）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（８）ナトリウム塩の濃度は６０〜７０ｍＭである、前述の項目（１）〜（７）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（９）ナトリウム塩の濃度は約６５ｍＭである、前述の項目（１）〜（８）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（１０）ヒスチジンの濃度は少なくとも５ｍＭである、前述の項目（１）〜（９）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（１１）ヒスチジンの濃度は少なくとも１０ｍＭである、前述の項目（１）〜（１０）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（１２）ヒスチジンの濃度は少なくとも２０ｍＭである、前述の項目（１）〜（１１）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（１３）ヒスチジンの濃度は少なくとも３０ｍＭである、前述の項目（１）〜（１２）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（１４）ヒスチジンの濃度は少なくとも４０ｍＭである、前述の項目（１）〜（１３）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（１５）ヒスチジンの濃度は少なくとも５０ｍＭである、前述の項目（１）〜（１４）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（１６）ヒスチジンの濃度は５０〜１５０ｍＭである、前述の項目（１）〜（１５）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（１７）ヒスチジンの濃度は約１００ｍＭである、前述の項目（１）〜（１６）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（１８）５〜９のｐＨを有する、前述の項目（１）〜（１７）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（１９）６〜８のｐＨを有する、前述の項目（１）〜（１８）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（２０）６．５〜７．５のｐＨを有する、前述の項目（１）〜（１９）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（２１）６．８〜７．２のｐＨを有する、前述の項目（１）〜（２０）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（２２）組成物が約７のｐＨを有する、前述の項目（１）〜（２１）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（２３）（ｉ）凍結乾燥、（ｉｉ）６ヶ月の間＋２５℃の温度と４０％の相対湿度での凍結乾燥組成物の保存、および（ｉｉｉ）蒸留水中での該凍結乾燥組成物のその後の再構成時に、（ｉ）凍結乾燥および、該凍結乾燥組成物の保存なし、（ｉｉ）蒸留水中でのその後の即時再構成時の同一組成物と比較して少なくとも８０％のＦＶＩＩＩ：Ｃ活性の回復率を示す、前述の項目（１）〜（２２）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（２４）（ｉ）凍結乾燥、（ｉｉ）１２ヶ月の間＋２５℃の温度と４０％の相対湿度での凍結乾燥組成物の保存、および（ｉｉｉ）蒸留水中での該凍結乾燥組成物のその後の再構成時に、（ｉ）凍結乾燥および、該凍結乾燥組成物の保存なし、（ｉｉ）蒸留水中でのその後の即時再構成時の同一組成物と比較して少なくとも８０％のＦＶＩＩＩ：Ｃ活性の回復率を示す、前述の項目（１）〜（２３）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（２５）（ｉ）凍結乾燥、（ｉｉ）１８ヶ月の間＋２５℃の温度と４０％の相対湿度での凍結乾燥組成物の保存、および（ｉｉｉ）蒸留水中での該凍結乾燥組成物のその後の再構成時に、（ｉ）凍結乾燥および、該凍結乾燥組成物の保存なし、（ｉｉ）蒸留水中でのその後の即時再構成時の同一組成物と比較して少なくとも８０％のＦＶＩＩＩ：Ｃ活性の回復率を示す、前述の項目（１）〜（２４）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（２６）（ｉ）凍結乾燥、（ｉｉ）２４ヶ月の間＋２５℃の温度と４０％の相対湿度での凍結乾燥組成物の保存、および（ｉｉｉ）蒸留水中での該凍結乾燥組成物のその後の再構成時に、（ｉ）凍結乾燥および、該凍結乾燥組成物の保存なし、（ｉｉ）蒸留水中でのその後の即時再構成時の同一組成物と比較して少なくとも８０％のＦＶＩＩＩ：Ｃ活性の回復率を示す、前述の項目（１）〜（２５）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（２７）（ｉ）凍結乾燥、（ｉｉ）３６ヶ月の間＋２５℃の温度と４０％の相対湿度での凍結乾燥組成物の保存、および（ｉｉｉ）蒸留水中での該凍結乾燥組成物のその後の再構成時に、（ｉ）凍結乾燥および、該凍結乾燥組成物の保存なし、（ｉｉ）蒸留水中でのその後の即時再構成時の同一組成物と比較して少なくとも８０％のＦＶＩＩＩ：Ｃ活性の回復率を示す、前述の項目（１）〜（２６）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（２８）（ｉ）凍結乾燥、（ｉｉ）６ヶ月の間＋４０℃の温度と６０％の相対湿度での凍結乾燥組成物の保存、および（ｉｉｉ）蒸留水中での該凍結乾燥組成物のその後の再構成時に、（ｉ）凍結乾燥および、該凍結乾燥組成物の保存なし、（ｉｉ）蒸留水中でのその後の即時再構成時の同一組成物と比較して少なくとも８０％のＦＶＩＩＩ：Ｃ活性の回復率を示す、前述の項目（１）〜（２７）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（２９）（ｉ）凍結乾燥、（ｉｉ）１２ヶ月の間＋４０℃の温度と６０％の相対湿度での凍結乾燥組成物の保存、および（ｉｉｉ）蒸留水中での該凍結乾燥組成物のその後の再構成時に、（ｉ）凍結乾燥および、該凍結乾燥組成物の保存なし、（ｉｉ）蒸留水中でのその後の即時再構成時の同一組成物と比較して少なくとも８０％のＦＶＩＩＩ：Ｃ活性の回復率を示す、前述の項目（１）〜（２８）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（３０）（ｉ）凍結乾燥、（ｉｉ）１８ヶ月の間＋４０℃の温度と６０％の相対湿度での凍結乾燥組成物の保存、および（ｉｉｉ）蒸留水中での該凍結乾燥組成物のその後の再構成時に、（ｉ）凍結乾燥および、該凍結乾燥組成物の保存なし、（ｉｉ）蒸留水中でのその後の即時再構成時の同一組成物と比較して少なくとも８０％のＦＶＩＩＩ：Ｃ活性の回復率を示す、前述の項目（１）〜（２９）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（３１）（ｉ）凍結乾燥、（ｉｉ）２４ヶ月の間＋４０℃の温度と６０％の相対湿度での凍結乾燥組成物の保存、および（ｉｉｉ）蒸留水中での該凍結乾燥組成物のその後の再構成時に、（ｉ）凍結乾燥および、該凍結乾燥組成物の保存なし、（ｉｉ）蒸留水中でのその後の即時再構成時の同一組成物と比較して少なくとも８０％のＦＶＩＩＩ：Ｃ活性の回復率を示す、前述の項目（１）〜（３０）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（３２）（ｉ）凍結乾燥、（ｉｉ）１２ヶ月の間＋２５℃の温度と４０％の相対湿度での凍結乾燥組成物の保存、および（ｉｉｉ）蒸留水中での凍結乾燥組成物のその後の再構成時に、１８ＮＴＵ以下の濁度を有する、前述の項目（１）〜（３１）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（３３）カルシウム塩は塩化カルシウムである、前述の項目（１）〜（３２）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（３４）ナトリウム塩は塩化ナトリウムである、前述の項目（１）〜（３３）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（３５）炭水化物をさらに含む、前述の項目（１）〜（３４）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（３６）炭水化物がスクロース、トレハロースおよびラフィノースからなる群から選択される、前述の（３５）に記載の水性組成物。

（３７）炭水化物はスクロースである、前述の（３５）または（３６）に記載の水性組成物。

（３８）炭水化物の濃度は１〜２０％ｗ／ｗである、前述の（３５）〜（３７）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（３９）炭水化物の濃度は２〜１０％ｗ／ｗである、前述の（３５）〜（３７）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（４０）炭水化物の濃度は３〜８％ｗ／ｗである、前述の（３５）〜（３７）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（４１）炭水化物の濃度は４〜６％ｗ／ｗである、前述の（３５）〜（３７）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（４２）炭水化物の濃度は約５％ｗ／ｗである、前述の（３５）〜（３７）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（４３）界面活性剤の濃度は少なくとも０．００１％ｖ／ｖである、前述の項目（１）〜（４２）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（４４）界面活性剤の濃度は０．００１〜０．１％ｖ／ｖである、前述の項目（１）〜（４３）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（４５）界面活性剤の濃度は０．００２〜０．２％ｖ／ｖである、前述の項目（１）〜（４４）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（４６）界面活性剤の濃度は０．００５％ｖ／ｖである、前述の項目（１）〜（４５）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（４７）界面活性剤は非天然界面活性剤である、前述の項目（１）〜（４６）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（４８）界面活性剤がポリソルベート８０である、前述の項目（１）〜（４７）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（４９）界面活性剤はポリソルベート２０である、前述の項目（１）〜（４８）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（５０）ヒスチジン以外の少なくとも１種のアミノ酸をさらに含む、前述の項目（１）〜（４９）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（５１）ヒスチジン以外の少なくとも１種のアミノ酸はアルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、ロイシン、イソロイシンおよびこれらの組合せからなる群から選択される、前述の（５０）に記載の水性組成物。

（５２）ヒスチジン以外の少なくとも１種のアミノ酸がアルギニンである、前述の（５０）に記載の水性組成物。

（５３）ヒスチジン以外の少なくとも１種のアミノ酸はアスパラギンである、前述の（５０）に記載の水性組成物。

（５４）ヒスチジン以外の少なくとも１種のアミノ酸はアスパラギン酸である、前述の（５０）に記載の水性組成物。

（５５）ヒスチジン以外の少なくとも１種のアミノ酸はグルタミン酸である、前述の（５０）に記載の水性組成物。

（５６）ヒスチジン以外の少なくとも１種のアミノ酸はグルタミンである、前述の（５０）に記載の水性組成物。

（５７）ヒスチジン以外の少なくとも１種のアミノ酸はリシンである、前述の（５０）に記載の水性組成物。

（５８）ヒスチジン以外の少なくとも１種のアミノ酸はメチオニンである、前述の（５０）に記載の水性組成物。

（５９）ヒスチジン以外の少なくとも１種のアミノ酸はフェニルアラニンである、前述の（５０）に記載の水性組成物。

（６０）ヒスチジン以外の少なくとも１種のアミノ酸はイソロイシンである、前述の（５０）に記載の水性組成物。

（６１）ヒスチジン以外の少なくとも１種のアミノ酸の濃度が少なくとも０．１ｍＭである、前述の（５０）〜（６０）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（６２）ヒスチジン以外の少なくとも１種のアミノ酸の濃度は少なくとも１ｍＭである、前述の（５０）〜（６０）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（６３）ヒスチジン以外の少なくとも１種のアミノ酸の濃度は５〜３００ｍＭである、前述の（５０）〜（６０）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（６４）ヒスチジン以外の少なくとも１種のアミノ酸の濃度は１０〜２００ｍＭである、前述の（５０）〜（６０）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（６５）少なくとも１種の抗酸化物質をさらに含む、前述の項目（１）〜（６４）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（６６）少なくとも１種の抗酸化物質は還元型グルタチオン、メチオニン、システイン、亜硫酸ナトリウム、ビタミンＡ、ビタミンＥ、アスコルビン酸、アスコルビン酸ナトリウムおよびこれらの組合せからなる群から選択される、前述の（６５）に記載の水性組成物。

（６７）少なくとも１種の抗酸化物質が還元型グルタチオンである、前述の（６５）に記載の水性組成物。

（６８）少なくとも１種の抗酸化物質はメチオニンである、前述の（６５）に記載の水性組成物。

（６９）少なくとも１種の抗酸化物質はシステインである、前述の（６５）に記載の水性組成物。

（７０）少なくとも１種の抗酸化物質は亜硫酸ナトリウムである、前述の（６５）に記載の水性組成物。

（７１）少なくとも１種の抗酸化物質はビタミンＡである、前述の（６５）に記載の水性組成物。

（７２）少なくとも１種の抗酸化物質はビタミンＥである、前述の（６５）に記載の水性組成物。

（７３）少なくとも１種の抗酸化物質はアスコルビン酸である、前述の（６５）に記載の水性組成物。

（７４）少なくとも１種の抗酸化物質はアスコルビン酸ナトリウムである、前述の（６５）に記載の水性組成物。

（７５）少なくとも１種の抗酸化物質の濃度は少なくとも０．０５ｍＭである、前述の（６５）〜（７４）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（７６）少なくとも１種の抗酸化物質の濃度は０．０５〜１００ｍＭである、前述の（６５）〜（７４）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（７７）少なくとも１種の抗酸化物質の濃度は０．１〜２０ｍＭである、前述の（６５）〜（７４）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（７８）少なくとも１種の抗酸化物質の濃度が０．２５〜５ｍＭである、前述の（６５）〜（７４）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（７９）第ＦＶＩＩＩ因子分子が非天然ＦＶＩＩＩ分子である、前述の項目（１）〜（７８）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（８０）第ＦＶＩＩＩ因子分子が組換えによって生成されたものである、（７９）に記載の水性組成物。

（８１）第ＦＶＩＩＩ因子分子がヒト血漿由来ＦＶＩＩＩのそれとは異なるグリコシル化パターンを有する、（７９）または（８０）に記載の水性組成物。

（８２）ＦＶＩＩＩ分子が配列番号１とは異なるアミノ酸配列を有する、前述の（７９）〜（８１）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（８３）ＦＶＩＩＩ分子が（ｉ）Ｂドメイン欠失型または切断型ＦＶＩＩＩ分子、（ｉｉ）一本鎖ＦＶＩＩＩ分子、（ｉｉｉ）保護基または半減期延長部分を有するＦＶＩＩＩ分子、（ｉｖ）異種アミノ酸配列と融合したＦＶＩＩＩアミノ酸配列を含む融合タンパク質、および（ｖ）これらの組合せからなる群から選択される、前述の（７９）〜（８２）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（８４）第ＦＶＩＩＩ因子分子が配列番号２として示すアミノ酸配列を有する、前述の項目（１）〜（８３）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（８５）組成物が１８ＮＴＵ以下、好ましくは６ＮＴＵ以下、より好ましくは３ＮＴＵ以下の濁度を有する、前述の項目（１）〜（８４）のいずれか一項目に記載の水性組成物。

（８６）凍結乾燥前の組成物が１８ＮＴＵ以下、好ましくは６ＮＴＵ以下、より好ましくは３ＮＴＵ以下の濁度を有する、前述の（８５）に記載の水性組成物。

（８７）凍結乾燥および蒸留水中での再構成時に、１８ＮＴＵ以下、好ましくは６ＮＴＵ以下、より好ましくは３ＮＴＵ以下の濁度を有する、前述の（８５）に記載の水性組成物。

（８８）前述の項目（１）〜（８７）のいずれか一項目に記載の水性組成物を凍結乾燥する工程によって得られる組成物。

（８９）前述の（８８）に記載の凍結乾燥水性組成物を水溶液で再構成する工程によって得られる水性組成物。

（９０）水溶液が蒸留水、塩溶液およびヒスチジン含有溶液から選択される、（８９）の水性組成物。

（９１）前述の（１）〜（３）のいずれか一項目で定義した成分を混合して水性組成物を得る工程、および水性組成物を凍結乾燥する工程を含む、ＦＶＩＩＩ分子を安定化する方法。

（９２）得られる水性組成物が前述の（１）〜（８７）のいずれか一項目に記載の組成物である（９１）の方法。

（９３）薬学的に有効な量の前述の（８９）または（９０）の組成物を対象に投与する工程を含む、血液凝固障害を治療する方法。

本発明の組成物におけるヒスチジン濃度とカルシウムイオン濃度の間の関係を示すグラフである。この図は、様々なヒスチジンおよび塩化カルシウム濃度で一方他の賦形剤は一定に保った（６５ｍｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウム、５％スクロース、０．００５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０）、液体製剤試験（実施例７）の結果を要約する。ドットは１８ＮＴＵの閾値レベルを超える濁度を表し、菱形は透明溶液を表す（濁度１８ＮＴＵ以下）。このグラフは、特定濃度のヒスチジンとカルシウムイオンを施用した場合、透明溶液が生成することを示す。透明溶液に関する要件は後に与える式によって表す。

第ＦＶＩＩＩ因子分子
本明細書で使用する用語「第ＦＶＩＩＩ因子」または「ＦＶＩＩＩ」は、ヒト原型第ＦＶＩＩＩ因子の凝固活性の少なくとも一部分を有する分子を指す。ヒトＦＶＩＩＩは、（シグナルペプチドを含む）２３５１のアミノ酸と（シグナルペプチドを含まない）２３３２のアミノ酸からなる。「ヒト原型ＦＶＩＩＩ」は、配列番号１（アミノ酸１〜２３３２）として示される完全長配列を有するヒト血漿由来ＦＶＩＩＩ分子である。詳細なドメイン構造、Ａ１−ａ１−Ａ２−ａ２−Ｂ−ａ３−Ａ３−Ｃ１−Ｃ２は対応するアミノ酸残基を有する（配列番号１を指す）：Ａ１（１〜３３６）、ａ１（３３７〜３７２）、Ａ２（３７３〜７１０）、ａ２（７１１〜７４０）、Ｂ（７４１〜１６４８）、ａ３（１６４９〜１６８９）、Ａ３（１６９０〜２０２０）、Ｃ１（２０２１〜２１７３）およびＣ２（２１７４〜２３３２）。

ＦＶＩＩＩ分子の凝固活性は、（例えばＬｅｅら、ＴｈｒｏｍｂｏｓｉｓＲｅｓｅａｒｃｈ３０、５１１５１９（１９８３年）中に記載されたような）一段階凝固アッセイまたは発色基質アッセイ（例えば、Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｘ−ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｙＳｐＡＶ．ｌｅＭｏｎｚａ３３８−２０１２８、ミラノ、イタリアからのコアマティック（coamatic）ＦＶＩＩＩ試験キット）を使用して決定することができる。これらの活性アッセイのさらなる詳細は以下に記載する。

本発明に従い使用するＦＶＩＩＩ分子は、ヒト原型ＦＶＩＩＩの少なくとも１０％のモル比活性を有することが好ましい。用語「モル比活性」は１モルのＦＶＩＩＩあたりの凝固活性を指し、ＩＵ／ｍｏｌｅＦＶＩＩＩで示される。

好ましい実施形態では、ＦＶＩＩＩ分子は非天然ＦＶＩＩＩ分子である。非天然ＦＶＩＩＩ分子は組換えによって生成されたものであることが好ましい。別の実施形態では、ＦＶＩＩＩ分子は細胞培養中に生成される。別の好ましい実施形態では、非天然ＦＶＩＩＩ分子は血漿由来ＦＶＩＩＩのそれとは異なるグリコシル化パターンを有する。さらに別の実施形態では、ＦＶＩＩＩ分子は（ｉ）Ｂドメイン欠失型または切断型ＦＶＩＩＩ分子、（ｉｉ）一本鎖ＦＶＩＩＩ分子、（ｉｉｉ）組換え生成型二本鎖ＦＶＩＩＩ分子、（ｉｖ）保護基または半減期延長部分を有するＦＶＩＩＩ分子、（ｖ）異種アミノ酸配列と融合したＦＶＩＩＩアミノ酸配列を含む融合タンパク質、および（ｖｉ）これらの組合せからなる群から選択される。

用語「第ＦＶＩＩＩ因子」と「ＦＶＩＩＩ」は本明細書では同義で使用する。本発明の意味における「第ＦＶＩＩＩ因子組成物」にはＦＶＩＩＩとＦＶＩＩＩａを含む組成物がある。典型的にＦＶＩＩＩａは少量、例えば約１〜２％のＦＶＩＩＩａで存在する可能性があり、これは組成物中のＦＶＩＩＩタンパク質の全量を指す。「ＦＶＩＩＩ」は、一個人毎に存在および出現し得るＦＶＩＩＩの天然対立遺伝子変異体を含む。ＦＶＩＩＩは血漿由来であってよく、またはよく知られている生成法および精製法を使用して組換えによって生成することができる。グリコシル化、チロシン硫酸化および他の翻訳後修飾の程度と場所は、選択宿主細胞およびその増殖条件に応じて変わり得る。

用語ＦＶＩＩＩはＦＶＩＩＩアナログを含む。本明細書で使用する用語「ＦＶＩＩＩアナログ」は、配列番号１と比較して１種またはそれ以上のアミノ酸が置換または欠失された（完全長またはＢドメイン切断型／欠失型）ＦＶＩＩＩ分子、またはＢドメイン切断型／欠失型ＦＶＩＩＩ分子、配列番号１の対応する部分を指す。ＦＶＩＩＩアナログは天然には存在しないが人為的操作によって得られる。

本発明の組成物中に含まれる第ＦＶＩＩＩ因子分子は、残りのドメインが配列番号１のアミノ酸番号１〜７４０および１６４９〜２３３２として述べる配列に相当する、Ｂドメイン切断型／欠失型ＦＶＩＩＩ分子であってもよい。他の型のＢドメイン欠失型ＦＶＩＩＩ分子はそれらのａ３ドメイン中に部分的欠失を追加的に有し、これが一本鎖ＦＶＩＩＩ分子をもたらす。

これらのＦＶＩＩＩ分子は、好ましくは哺乳動物起源の形質転換宿主細胞において生成される組換え分子であることになる。しかしながら、Ｂドメイン欠失型ＦＶＩＩＩ中の残りのドメイン（すなわち、３つのＡドメイン、２つのＣドメインならびにａ１、ａ２およびａ３領域）は、配列番号１として述べるそれぞれのアミノ酸配列（アミノ酸１〜７４０および１６４９〜２３３２）と、若干、例えば約１％、２％、３％、４％または５％異なる可能性がある。

本発明の組成物中に含まれるＦＶＩＩＩ分子は、二本鎖ＦＶＩＩＩ分子または一本鎖ＦＶＩＩＩ分子であってよい。本発明の組成物中に含まれるＦＶＩＩＩ分子は、ＦＶＩＩＩの生物活性断片、すなわちＢドメイン以外のドメイン（複数可）が欠失または切断状態であるが、欠失／切断型のＦＶＩＩＩ分子が血塊の形成をサポートするその能力を保持するＦＶＩＩＩであってもよい。当技術分野でよく知られる技法を使用して、ＦＶＩＩＩ活性をｉｎｖｉｔｒｏで評価することができる。本発明に従いＦＶＩＩＩ活性を測定するのに好ましい試験は、発色基質アッセイまたは一段階アッセイである（以下参照）。アミノ酸修飾（置換、欠失など）を残りのドメイン中に導入して、例えば、フォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）、低密度リポタンパク質受容体−関連タンパク質（ＬＰＲ）、様々な受容体、他の凝固因子などの様々な他の成分、細胞表面などと第ＶＩＩＩ因子の結合能力を改変することができ、またはグリコシル化部位などを導入するおよび／または無効にすることができる。ＦＶＩＩＩ活性を無効にしない他の突然変異を、本発明の組成物中で使用するためのＦＶＩＩＩ分子／アナログ内に収容することもできる。

ＦＶＩＩＩアナログはＦＶＩＩＩ分子も含み、その中では親ポリペプチドの１種またはそれ以上のアミノ酸残基が欠失状態または他のアミノ酸残基と置換されており、および／または別のアミノ酸残基が親ＦＶＩＩＩポリペプチドに付加している。

さらに、第ＶＩＩＩ因子分子／アナログは、例えば切断型Ｂドメイン中、および／または１つまたはそれ以上の分子の他のドメイン中に他の修飾を含むことができる（「ＦＶＩＩＩ誘導体」）。これらの他の修飾は、第ＶＩＩＩ因子分子と結合した様々な分子、例えばポリマー化合物、ペプチド化合物、脂肪酸誘導化合物などの型であってよい。

用語ＦＶＩＩＩは糖ペグ化ＦＶＩＩＩを含む。本発明の文脈では、用語「糖ペグ化ＦＶＩＩＩ」は、１つまたはそれ以上のＰＥＧ基（複数可）がポリペプチドの多糖側鎖（複数可）（グリカン（複数可））を介してＦＶＩＩＩポリペプチドに結合している、（完全長ＦＶＩＩＩおよびＢドメイン切断型／欠失型ＦＶＩＩＩを含めた）第ＶＩＩＩ因子分子を表すものとする。

用語ＦＶＩＩＩは、保護基または半減期延長部分を有するＦＶＩＩＩ分子を含む。用語「保護基／半減期延長部分」は、本明細書では、タンパク質／ペプチドと結合したときこれらの幾つかの治療用タンパク質／ペプチドのｉｎｖｉｖｏ循環半減期を延長することができる、−ＳＨ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＨ２などの１つまたはそれ以上のアミノ酸側鎖官能基と結合した１つまたはそれ以上の化学基、または１つまたはそれ以上のＮ−および／またはＯ−グリカン構造を指すものと理解される。保護基／半減期延長部分の例には、生体適合性脂肪酸およびその誘導体、ヒドロキシアルキルデンプン（ＨＡＳ）、例えばヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、ポリ（Ｇｌｙ_ｘ−Ｓｅｒ_ｙ）_ｎ（ホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ））、ヒアルロン酸（ＨＡ）、ヘパロサンポリマー（ＨＥＰ）、ホスホリルコリン系ポリマー（ＰＣポリマー）、Ｆｌｅｘｉｍｅｒ（登録商標）ポリマー（ＭｅｒｓａｎａＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、ＭＡ、ＵＳＡ）、デキストラン、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、Ｆｃドメイン、トランスフェリン、アルブミン、エラスチン様ペプチド、ＸＴＥＮ（登録商標）ポリマー（Ａｍｕｎｉｘ、ＣＡ、ＵＳＡ）、アルブミン結合ペプチド、フォンウィルブランド因子断片（ｖＷＦ断片）、カルボキシル末端ペプチド（ＣＴＰペプチド、ＰｒｏｌｏｒＢｉｏｔｅｃｈ、ＩＬ）、およびこれらの任意の組合せ（例えば、ＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａｏｆＰｏｌｙｍｅｒＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．２００２、ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ、Ｉｎｃ．中のＭｃＣｏｒｍｉｃｋ、Ｃ．Ｌ．、Ａ．Ｂ．Ｌｏｗｅ、およびＮ．Ａｙｒｅｓ、Ｗａｔｅｒ−ＳｏｌｕｂｌｅＰｏｌｙｍｅｒｓ参照）がある。誘導体化の形式は重要ではなく前述の事項から解明することができる。

本発明に従い使用することができるＦＶＩＩＩ分子は、異種アミノ酸配列、好ましくは半減期延長アミノ酸配列と融合したＦＶＩＩＩアミノ酸配列を含む融合タンパク質を含む。好ましい融合タンパク質は、Ｆｃ融合タンパク質およびアルブミン融合タンパク質である。用語「Ｆｃ融合タンパク質」は、本明細書では、任意の抗体アイソタイプから誘導することができるＦｃドメインと融合したＦＶＩＩＩを包含することを意味する。ＩｇＧ抗体の比較的長い循環半減期のため、ＩｇＧＦｃドメインが好ましいことが多い。Ｆｃドメインをさらに修飾して、例えば補体結合および／または特定Ｆｃ受容体との結合などの特定エフェクター機能を調節することができる。ＦｃＲｎ受容体と結合する能力があるＦｃドメインとＦＶＩＩＩの融合は、野生型ＦＶＩＩＩの半減期と比較して、融合タンパク質の長期の循環半減期を一般にもたらす。本発明において使用するためのＦＶＩＩＩ分子は、例えばＦＶＩＩＩアナログの融合タンパク質、ペグ化もしくは糖ペグ化ＦＶＩＩＩアナログ、またはヘパロサンポリマーと結合したＦＶＩＩＩアナログなどの、ＦＶＩＩＩアナログの誘導体であってもよいということになる。用語「アルブミン融合タンパク質」は、本明細書では、アルブミンアミノ酸配列またはその断片もしくは誘導体と融合したＦＶＩＩＩを包含することを意味する。異種アミノ酸配列はＦＶＩＩＩのＮ末端またはＣ末端と融合することができ、またはそれをＦＶＩＩＩアミノ酸配列の内部に挿入することができる。異種アミノ酸配列は、その開示を参照によって本明細書に組み入れるＷＯ２００８／０７７６１６Ａ１中に記載された、任意の「半減期延長ポリペプチド」であってよい。

本発明の組成物において使用するためのＦＶＩＩＩ分子の例は、例えばＷＯ２０１０／０４５５６８、ＷＯ２００９／０６２１００、ＷＯ２０１０／０１４７０８、ＷＯ２００８／０８２６６９、ＷＯ２００７／１２６８０８、ＵＳ２０１０／０１７３８３１、ＵＳ２０１０／０１７３８３０、ＵＳ２０１０／０１６８３９１、ＵＳ２０１０／０１１３３６５、ＵＳ２０１０／０１１３３６４、ＷＯ２００３／０３１４６４、ＷＯ２００９／１０８８０６、ＷＯ２０１０／１０２８８６、ＷＯ２０１０／１１５８６６、ＷＯ２０１１／１０１２４２、ＷＯ２０１１／１０１２８４、ＷＯ２０１１／１０１２７７、ＷＯ２０１１／１３１５１０、ＷＯ２０１２／００７３２４、ＷＯ２０１１／１０１２６７、ＷＯ２０１３／０８３８５８、およびＷＯ２００４／０６７５６６中に記載されたＦＶＩＩＩ分子を含む。

本発明の組成物において使用することができるＦＶＩＩＩ分子の例には、Ａｄｖａｔｅ（登録商標）、Ｈｅｌｉｘａｔｅ（登録商標）、Ｋｏｇｅｎａｔｅ（登録商標）、Ｘｙｎｔｈａ（登録商標）の活性成分、およびＷＯ２００８／１３５５０１、ＷＯ２００９／００７４５１中に記載されたＦＶＩＩＩ分子、およびＷＯ２００４／０６７５６６の「ｄＢＮ（６４−５３）」で指定される構築物がある。この構築物は配列番号２で示されるアミノ酸配列を有する。

本発明の組成物中の第ＶＩＩＩ因子の濃度は、典型的には１０〜１０，０００ＩＵ／ｍＬの範囲内である。異なる実施形態では、本発明の組成物中のＶＩＩＩ分子の濃度は、１０〜８，０００ＩＵ／ｍＬ、または１０〜５，０００ＩＵ／ｍＬ、または２０〜３，０００ＩＵ／ｍＬ、または５０〜１，５００ＩＵ／ｍＬ、または３，０００ＩＵ／ｍＬ、または２，５００ＩＵ／ｍＬ、または２，０００ＩＵ／ｍＬ、または１，５００ＩＵ／ｍＬ、または１，２００ＩＵ／ｍＬ、１，０００ＩＵ／ｍＬ、または８００ＩＵ／ｍＬ、または６００ＩＵ／ｍＬ、または５００ＩＵ／ｍＬ、または４００ＩＵ／ｍＬ、または３００ＩＵ／ｍＬ、または２５０ＩＵ／ｍＬ、または２００ＩＵ／ｍＬ、または１５０ＩＵ／ｍＬ、または１００ＩＵ／ｍＬの範囲内である。

「国際単位」または「ＩＵ」は、「ＩＵ」で検量した国際標準製剤に対して検量した標準を使用する一段階凝固アッセイまたは発色基質ＦＶＩＩＩ活性アッセイなどの、ＦＶＩＩＩ活性アッセイによって測定したＦＶＩＩＩの血液凝固活性（効力）の測定単位である。ＮＬｅｅ、ＭａｒｔｉｎＬら、ＡｎＥｆｆｅｃｔｏｆＰｒｅｄｉｌｕｔｉｏｎｏｎＰｏｔｅｎｃｙＡｓｓａｙｓｏｆＦＶＩＩＩＣｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ、ＴｈｒｏｍｂｏｓｉｓＲｅｓｅａｒｃｈ（ＰｅｒｇａｍｏｎＰｒｅｓｓＬｔｄ．）３０、５１１５１９（１９８３年）中に記載されたアッセイなどの一段階凝固アッセイが当技術分野で知られている。一段階アッセイの原理：この試験は、活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）−アッセイの改変バージョンとして実行する：血漿とリン脂質および表面アクチベーターのインキュベーションは、固有凝固系の因子の活性化をもたらす。カルシウムイオンの添加が凝固反応を誘発する。測定可能なフィブリン血栓の形成時間を決定する。このアッセイは第ＶＩＩＩ因子欠乏血漿の存在下で実行する。欠乏血漿の凝固能力は、試験対象サンプル中に含まれる凝固第ＶＩＩＩ因子によって回復される。凝固時間の短縮はサンプル中に存在する第ＶＩＩＩ因子の量に比例する。凝固第ＶＩＩＩ因子の活性は、国際単位で既知の第ＶＩＩＩ因子活性を有する標準製剤との直接比較によって定量化する。

別の標準アッセイは発色基質アッセイである。コアマティックＦＶＩＩＩ試験キット（Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｘ−ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｙＳｐＡＶ．ｌｅＭｏｎｚａ３３８−２０１２８、ミラノ、イタリア）などの発色基質アッセイを商品購入することができる。発色基質アッセイの原理：カルシウムとリン脂質の存在下において、第Ｘ因子は第ＩＸａ因子により第Ｘａ因子に活性化される。この反応はコファクターとしての第ＶＩＩＩａ因子によって刺激される。ＦＶＩＩＩａは、測定対象サンプル中のＦＶＩＩＩ由来の反応混合物において少量のトロンビンによって形成される。最適濃度のＣａ^２＋、リン脂質および第ＩＸａ因子および過剰量の第Ｘ因子を使用すると、第Ｘ因子の活性化は第ＶＩＩＩ因子の効力に比例する。活性化第Ｘ因子は発色基質Ｓ−２７６５から発色団ｐＮＡを切り離す。したがって４０５ｎｍで測定したｐＮＡの放出は形成されるＦＸａの量、したがってサンプルの第ＶＩＩＩ因子活性にも比例する。

フリーズドライまたは凍結乾燥は、それが出現する文脈によって他に示されない限り、物質（すなわち、活性医薬成分および様々な製剤添加物または「賦形剤」）の溶液が固体に転換される乾燥工程を示すために使用するものとする。典型的なフリーズドライ工程は３段階、「凍結」、「一次乾燥」および「二次乾燥」からなる。凍結段階では、含有されるほぼ全ての水が氷に、溶質は固体に転換される（結晶または非結晶）。一次乾燥段階では、氷は直接昇華によって産物から除去され、これは水分子（氷）と周辺大気の間の好ましい圧力勾配の維持によって達成される。二次乾燥段階では、脱離によって産物から残留水分が除去される。

フリーズドライ組成物に関して濃度（ｗ／ｖ）を与える場合、それらはフリーズドライ直前の体積を指す。

他に示さない限り、パーセンテージの用語は重量／重量パーセンテージを表し、温度は摂氏単位である。

モル浸透圧濃度
本発明の第ＶＩＩＩ因子組成物は、０．６Ｏｓｍ／Ｌ未満のモル浸透圧濃度を典型的に有する。高濃度の塩化ナトリウムを含有する多くの従来技術の製剤におけるモル浸透圧濃度より、これは生理的条件に近い。本発明の異なる実施形態では、製剤は０．５５Ｏｓｍ／Ｌ未満、０．５Ｏｓｍ／Ｌ未満、０．４５Ｏｓｍ／Ｌ未満、または０．４Ｏｓｍ／Ｌ未満のモル浸透圧濃度を有する。用語「モル浸透圧濃度」と「浸透濃度」は本明細書では交互に使用する。

モル浸透圧濃度、または浸透濃度は、溶液１リットル（Ｌ）あたりの溶質のオスモル数（Ｏｓｍ）として定義される溶質濃度の測定値である（ｏｓｍｏｌ／ＬまたはＯｓｍ／Ｌ）。重量モル濃度が単位体積溶液あたりの溶質のモル数を測定する一方で、モル浸透圧濃度は単位体積溶液あたりの溶質粒子のオスモル数を測定する。

モル浸透圧濃度の理論上の計算は当業者にはよく知られている。簡単に言うと、溶液の各成分に関して、浸透係数ｆの積、水中に解離する分子の粒子数ｎ、およびモル濃度を計算し、全成分の結果を合計する。溶液のモル浸透圧濃度は以下の式：Ｏｓｍ／Ｌ＝Σ_ｉｆ_ｉｎ_ｉＣ_ｉから計算することができ、前式で指標ｉは個々の成分のアイデンティティーを表し、ｆは個々の成分に関する浸透係数であり、ｎは水中に解離する分子の粒子数であり、Ｃは成分のモル濃度である。モル濃度にはある程度の温度依存性があり、本発明の目的では、それは２５℃での濃度を指す。

注入後に溶液が影響を及ぼし得る浸透圧を評価するための別の方法は重量オスモル濃度を評価することであり、その中では成分の中身を溶媒質量に対して評価する。溶液の密度および溶存成分の乾燥質量が分かっている場合、重量オスモル濃度とモル浸透圧濃度は容易に相互転換することができる。重量オスモル濃度は幾つかの方法、最も一般的には凝固点降下法によって測定することができる。

例えば水に関しては、１Ｏｓｍｏｌの溶質を１ｋｇの水に加えると１．８６℃凝固点が低下する。凝固点降下法により溶液の重量オスモル濃度を測定するための方法は、例えばＥｕｒｏｐｅａｎＰｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ２．２．３５およびＵ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｃｈａｐｔｅｒ７８５中に記載されている。

以下の表に、幾つかの重要な賦形剤に関する浸透係数と粒子数ｎを列挙する。他の成分に関しては、ｆ＝１の値は実用目的で充分優れた近似値を示し、ｎの値は非経口用途の医薬製剤に関連するほぼ全ての化合物に関してよく知られている。

塩
本発明による組成物はナトリウム塩を含む。

一実施形態では、本発明の組成物は少なくとも４０ｍＭのナトリウム塩（例えばＮａＣｌ）を含有する。一連の実施形態では、組成物は４０ｍＭ〜１９５ｍＭ、または４５ｍＭ〜１８０ｍＭ、または４５ｍＭ〜１５０ｍＭ、または５０ｍＭ〜１２５ｍＭ、または５０ｍＭ〜１００ｍＭ、または６０ｍＭ〜９５ｍＭ、または６０ｍＭ〜７５ｍＭ、例えば約６５ｍＭのナトリウム塩（例えばＮａＣｌ）を含む。さらに別の実施形態では、ナトリウム塩（例えばＮａＣｌ）の濃度は４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４または９５ｍＭである。

ナトリウム塩は塩化ナトリウムであることが好ましい。別の実施形態では、塩は酢酸ナトリウムである。第三の実施形態では、本発明の組成物は塩化ナトリウムと酢酸ナトリウムの混合物を含有する。

本発明による組成物はカルシウム塩をさらに含む。本発明に従い使用するカルシウム塩は典型的には水に溶け、したがってそれは、水溶液中での溶解時に１つまたはそれ以上のカルシウムイオンと対アニオンに解離する。用語「Ｃａ^２＋」は用語「カルシウムイオン」と同義である。

一実施形態では、カルシウム濃度は以下の式によって定義され、式中［Ｃａ^２＋］は１リットルあたりのミリモルでのカルシウムイオンの濃度であり、かつ［Ｈｉｓ］は１リットルあたりのミリモルでのヒスチジンの濃度である：
［Ｃａ^２＋］≧９ｍＭ−０．０５^＊［Ｈｉｓ］

別の実施形態では、カルシウム濃度は以下の式によって定義され、式中［Ｃａ^２＋］は１リットルあたりのミリモルでのカルシウムイオンの濃度であり、かつ［Ｈｉｓ］は１リットルあたりのミリモルでのヒスチジンの濃度である：
［Ｃａ^２＋］≧９．５ｍＭ−０．０５^＊［Ｈｉｓ］

別の実施形態では、カルシウム濃度は以下の式によって定義され、式中［Ｃａ^２＋］は１リットルあたりのミリモルでのカルシウムイオンの濃度であり、かつ［Ｈｉｓ］は１リットルあたりのミリモルでのヒスチジンの濃度である：
［Ｃａ^２＋］≧１０ｍＭ−０．０５^＊［Ｈｉｓ］

別の実施形態では、カルシウム濃度は以下の式によって定義され、式中［Ｃａ^２＋］は１リットルあたりのミリモルでのカルシウムイオンの濃度であり、かつ［Ｈｉｓ］は１リットルあたりのミリモルでのヒスチジンの濃度である：
［Ｃａ^２＋］≧１０．５ｍＭ−０．０５^＊［Ｈｉｓ］

前述の式は［Ｃａ^２＋］＞０という条件によって決まる。典型的には、組成物は少なくとも１ｍＭ、好ましくは少なくとも２ｍＭ、より好ましくは少なくとも４ｍＭ、最も好ましくは少なくとも５ｍＭのカルシウム塩を含有する。別の実施形態では、組成物は最大１００ｍＭのカルシウム塩を含有する。別の実施形態では、組成物は１〜５０ｍＭ、または２〜４０ｍＭ、または３〜３０ｍＭ、または４〜２０ｍＭのカルシウム塩を含む。特定の一実施形態では、組成物は約１０ｍＭのカルシウム塩を含有する。

カルシウム塩は、例えば塩化カルシウム、酢酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、乳酸カルシウム、安息香酸カルシウムおよびこれらの混合物、および当業者によってよく知られている他の可溶性カルシウム塩の群から選択することができる。好ましい実施形態では、カルシウム塩は塩化カルシウムである。

ヒスチジン
本発明による組成物はヒスチジン、好ましくはＬ−ヒスチジンを含む。

一実施形態では、ヒスチジン濃度は以下の式によって定義され、式中［Ｃａ^２＋］は１リットルあたりのミリモルでのカルシウムイオンの濃度であり、かつ［Ｈｉｓ］は１リットルあたりのミリモルでのヒスチジンの濃度である：
［Ｈｉｓ］≧１８０ｍＭ−２０^＊［Ｃａ^２＋］

別の実施形態では、ヒスチジン濃度は以下の式によって定義され、式中［Ｃａ^２＋］は１リットルあたりのミリモルでのカルシウムイオンの濃度であり、かつ［Ｈｉｓ］は１リットルあたりのミリモルでのヒスチジンの濃度である：
［Ｈｉｓ］≧１９０ｍＭ−２０^＊［Ｃａ^２＋］

別の実施形態では、ヒスチジン濃度は以下の式によって定義され、式中［Ｃａ^２＋］は１リットルあたりのミリモルでのカルシウムイオンの濃度であり、かつ［Ｈｉｓ］は１リットルあたりのミリモルでのヒスチジンの濃度である：
［Ｈｉｓ］≧２００ｍＭ−２０^＊［Ｃａ^２＋］

別の実施形態では、ヒスチジン濃度は以下の式によって定義され、式中［Ｃａ^２＋］は１リットルあたりのミリモルでのカルシウムイオンの濃度であり、かつ［Ｈｉｓ］は１リットルあたりのミリモルでのヒスチジンの濃度である：
［Ｈｉｓ］≧２１０ｍＭ−２０^＊［Ｃａ^２＋］

前述の式は［Ｈｉｓ］＞０という条件によって決まる。典型的には、ヒスチジンの濃度は少なくとも５ｍＭ、好ましくは少なくとも１０ｍＭ、好ましくは少なくとも２０ｍＭ、好ましくは２０〜４００ｍＭ、好ましくは少なくとも２５ｍＭ、好ましくは２５〜２００ｍＭ、好ましくは少なくとも５０ｍＭ、好ましくは５０〜３００ｍＭ、好ましくは５５〜１７０ｍＭ、好ましくは６０〜１５０ｍＭ、好ましくは６５〜１２０ｍＭ、より好ましくは５０〜１００ｍＭ、例えば約１００ｍＭである。さらに別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は１０、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、３００または４００ｍＭである。

界面活性剤
本発明による組成物は界面活性剤を含む。本明細書で使用する「界面活性剤」は、空気−溶液界面または溶液−表面界面誘導ストレスまたはダメージから活性物質を保護する作用物質を指す。界面活性剤は、非天然界面活性剤であることが好ましい。

典型的な非天然界面活性剤（および括弧［］内に与える数例の商品名）は、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート［Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０］、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート［Ｔｗｅｅｎ（登録商標）４０］またはポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート［Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０］など、ポロキサマー、ポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレンブロックコポリマー［Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８／ポロキサマー１８８］、ポリエチレングリコールオクチルフェニルエーテル［Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００］またはポリオキシエチレングリコールドデシルエーテル［Ｂｒｉｊ（登録商標）３５］などである。水性組成物における界面活性剤の使用は当業者にはよく知られている。便宜上、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ、第１９版、１９９５年を参照として載せる。本発明の一実施形態では、組成物はソルビタンモノオレエート［Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０］を含む。特定の実施形態では、本発明の組成物は、酸化の影響を受けない界面活性剤、例えばアルキルサッカリドを含む。別の実施形態では、界面活性剤は植物由来界面活性剤であり、および／またはそれは石油化学製品を含まず、および／またはそれは石油化学製品を使用せずに生成される。

一実施形態では、界面活性剤の濃度は少なくとも０．００１％ｖ／ｖ、好ましくは０．００１〜０．１％ｖ／ｖ、好ましくは０．００２〜０．３％ｖ／ｖ、より好ましくは０．００３〜０．１％ｖ／ｖ、および最も好ましくは約０．００５％ｖ／ｖである。さらに別の実施形態では、界面活性剤の濃度は０．００１、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．５、０．７、０．８、０．９または１．０％ｖ／ｖである。一実施形態では、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート［Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０］の濃度は少なくとも０．００１％ｖ／ｖ、好ましくは０．００１〜０．１％ｖ／ｖ、好ましくは０．００２〜０．３％ｖ／ｖ、より好ましくは０．００３〜０．１％ｖ／ｖ、および最も好ましくは約０．００５％ｖ／ｖである。

バッファー
本発明による組成物は緩衝剤を含むことができる。本明細書で使用する「緩衝剤」または「バッファー」は、製剤の（例えば、静脈内または皮下）投与が通常充分許容される場合一定範囲で製剤のｐＨを維持し（例えば、ｐＨ５〜９）、さらにｐＨ変動を回避し、凍結乾燥中のｐＨ誘導ストレスまたはダメージから活性物質を保護する作用物質を指す。バッファー物質として使用される物質の典型例は、例えばカルボネート、ホスフェート、シトレート、ボレート、２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，−３−プロパンジオール［＝ＴＲＩＳ］、ヒスチジン、グリシンである。

バッファー（または緩衝剤）は、アセテート、ベンゾエート、カルボネート、シトレート、グリシルグリシン、Ｈｅｐｅｓ、ヒスチジン、グリシン、およびＴＲＩＳ、バイシン、トリシン、スクシネート、アスパラギン酸、グルタミン酸またはこれらの混合物からなる群から選択することができる。本発明の一実施形態では、緩衝物質の濃度は１〜２００ｍＭ、例えば１〜１５０ｍＭ、または１〜５０ｍＭ、または１〜２５ｍＭ、または５〜２０ｍＭ、または５〜１５ｍＭなどである。

本発明の組成物は４〜１０のｐＨを典型的に有する。別の実施形態では、組成物は５．０〜９．０または６．０〜８．０または６．５〜７．５または６．８〜７．２または約７のｐＨを有する。他の実施形態では、組成物のｐＨは５．５±０．２、５．６±０．２、５．７±０．２、５．８±０．２、５．９±０．２、６．０±０．２、６．１±０．２、６．２±０．２、６．３±０．２、６．４±０．２、６．５±０．２、６．６±０．２、６．７±０．２、６．８±０．２、６．９±０．２、７．０±０．２、７．１±０．２、７．２±０．２、７．３±０．２、７．４±０．２、または７．５±０．２である。他の実施形態では、組成物のｐＨは５．５±０．１、５．６±０．１、５．７±０．１、５．８±０．１、５．９±０．１、６．０±０．１、６．１±０．１、６．２±０．１、６．３±０．１、６．４±０．１、６．５±０．１、６．６±０．１、６．７±０．１、６．８±０．１、６．９±０．１、７．０±０．１、７．１±０．１、７．２±０．１、７．３±０．１、７．４±０．１、または７．５±０．１である。さらに他の実施形態では、製剤を安定化するｐＨは５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、０６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、または８．０である。

炭水化物
本発明の組成物は炭水化物をさらに含むことができる。本明細書で使用する「炭水化物」は、単糖、二糖、もしくは多糖などの糖類を指し、または例えばフルクトース、グルコース、マンノース、マンニトール、ソルボース、ソルビット、キシロース、マルトース、ラクトース、スクロース、ガラクトース、デキストラン、トレハロース、プルラン、デキストリン、シクロデキストリン、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプンおよびカルボキシメチルセルロースを含めた水溶性グルカンを使用することができる。

炭水化物は、例えば（単糖フルクトース、グルコース、マンノース、ガラクトース、二糖ラクトース、スクロース、トレハロース、マルトース、および多糖デキストラン、ラフィノース、スタキオースを例えば含む）単糖、二糖、または多糖からなる群から選択することができる。

本発明の一実施形態では、ＦＶＩＩＩ組成物は、スクロース、ラフィノース、トレハロース、またはこれらの混合物の群からの１種またはそれ以上の炭水化物を含む。一実施形態では、ＦＶＩＩＩ組成物は、２〜１０％ｗ／ｗ、好ましくは３〜８％ｗ／ｗ、好ましくは４〜６％ｗ／ｗ、および最も好ましくは５％ｗ／ｗの濃度で炭水化物を含む。さらに別の実施形態では、炭水化物の濃度は２、３、４、５、６、７、８、９または１０％ｗ／ｗである。

具体的実施形態では、炭水化物はスクロースである。一実施形態では、ＦＶＩＩＩ組成物は、２〜１０％ｗ／ｗ、好ましくは３〜８％ｗ／ｗ、好ましくは４〜６％ｗ／ｗ、および最も好ましくは５％ｗ／ｗの濃度でスクロースを含む。さらに別の実施形態では、スクロースの濃度は２、３、４、５、６、７、８、９または１０％ｗ／ｗである。

具体的実施形態では、炭水化物はトレハロースである。一実施形態では、ＦＶＩＩＩ組成物は、２〜１０％ｗ／ｗ、好ましくは３〜８％ｗ／ｗ、好ましくは４〜６％ｗ／ｗ、および最も好ましくは５％ｗ／ｗの濃度でトレハロースを含む。さらに別の実施形態では、トレハロースの濃度は２、３、４、５、６、７、８、９または１０％ｗ／ｗである。

具体的実施形態では、炭水化物はラフィノースである。一実施形態では、ＦＶＩＩＩ組成物は、２〜１０％ｗ／ｗ、好ましくは３〜８％ｗ／ｗ、好ましくは４〜６％ｗ／ｗ、および最も好ましくは５％ｗ／ｗの濃度でラフィノースを含む。さらに別の実施形態では、ラフィノースの濃度は２、３、４、５、６、７、８、９または１０％ｗ／ｗである。

アミノ酸
一実施形態では、本発明の組成物は、ヒスチジン以外の１種またはそれ以上のアミノ酸をさらに含む。本明細書で使用する「アミノ酸」は、薬学的に許容される任意の天然または非天然アミノ酸を指す。アミノ酸の非制限的な例には、イソロイシン、アラニン、ロイシン、アスパラギン、リシン、アスパラギン酸、メチオニン、システイン、フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニン、グルタミン、トリプトファン、グリシン、バリン、プロリン、セレノシステイン、セリン、チロシン、アルギニン、ヒスチジン、オルニチン、タウリンなどがある。ヒスチジン以外のアミノ酸は、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、イソロイシン、ロイシンおよびこれらの組合せからなる群から選択されることが好ましい。

一実施形態では、水性組成物はアルギニンとイソロイシンを含む。

一実施形態では、水性組成物はアルギニン、グルタミン酸およびフェニルアラニンを含む。

一実施形態では、水性組成物はアルギニン、グルタミン酸、フェニルアラニンおよびメチオニンを含む。

一実施形態では、水性組成物はアルギニン、イソロイシンおよびメチオニンを含む。

一実施形態では、水性組成物はグルタミン、グルタミン酸、イソロイシンおよびメチオニンを含む。

一実施形態では、ヒスチジン以外のアミノ酸の濃度は少なくとも０．２ｍＭ、好ましくは１〜３００ｍＭ、好ましくは５〜３００ｍＭ、好ましくは１０〜２００ｍＭ、好ましくは５５〜１５０ｍＭ、好ましくは２５〜１００ｍＭ、好ましくは４０〜１８０ｍＭ、好ましくは５０〜９０ｍＭである。さらに別の実施形態では、ヒスチジン以外のアミノ酸の濃度は０．２、０．５、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５または２００ｍＭである。

一実施形態では、アルギニンの濃度は少なくとも１ｍＭ、好ましくは５〜３００ｍＭ、好ましくは１０〜２００ｍＭ、好ましくは５５〜１５０ｍＭ、好ましくは２５〜１００ｍＭ、好ましくは４０〜１８０ｍＭ、好ましくは５０〜９０ｍＭである。さらに別の実施形態では、アルギニンの濃度は１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５または２００ｍＭである。

一実施形態では、イソロイシンの濃度は少なくとも１ｍＭ、好ましくは５〜３００ｍＭ、好ましくは１０〜２００ｍＭ、好ましくは５５〜１５０ｍＭ、好ましくは２５〜１００ｍＭ、好ましくは４０〜１８０ｍＭ、好ましくは５０〜９０ｍＭである。さらに別の実施形態では、イソロイシンの濃度は１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５または２００ｍＭである。

一実施形態では、グルタミン酸の濃度は少なくとも１ｍＭ、好ましくは５〜３００ｍＭ、好ましくは１０〜２００ｍＭ、好ましくは５５〜１５０ｍＭ、好ましくは２５〜１００ｍＭ、好ましくは４０〜１８０ｍＭ、好ましくは５０〜９０ｍＭである。さらに別の実施形態では、グルタミン酸の濃度は１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５または２００ｍＭである。

一実施形態では、フェニルアラニンの濃度は少なくとも１ｍＭ、好ましくは５〜２００ｍＭ、好ましくは１０〜１６０ｍＭ、好ましくは５５〜１５０ｍＭ、好ましくは２５〜１００ｍＭ、好ましくは４０〜１８０ｍＭ、好ましくは５０〜９０ｍＭである。さらに別の実施形態では、フェニルアラニンの濃度は１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５または２００ｍＭである。

抗酸化物質
本発明の組成物は１種またはそれ以上の抗酸化物質（複数可）をさらに含有することができる。本発明の意義内での「抗酸化物質」は、酸化工程を減速、阻害、遮断および／または停止する、薬学的適合性がある化合物または組成物である。抗酸化物質は、特に以下の物質、トコフェロールおよびそのエステル、還元型グルタチオン、メチオニン、モノチオグリセロール、システイン、ホモシステイン、シスタチオニン、ビタミンＡ、ごま油のセサモール、ベンゾイン樹脂の安息香酸コニフェリル、ノルジヒドログアヤレ樹脂およびノルジヒドログアヤレチン酸（ＮＤＧＡ）、ガレート（特に没食子酸メチル、没食子酸エチル、没食子酸プロピル、没食子酸アミル、没食子酸ブチル、没食子酸ラウリル）、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡＩＢＨＴ、さらにブチル−ｐ−クレゾール）、アスコルビン酸およびその塩およびエステル（例えばパルミチン酸アスコルビル）、エリソルビン酸（イソアスコルビン酸）およびその塩およびエステル、モノチオグリセロール、ナトリウムホルムアルデヒドスルホキシレート、メタ重亜硫酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸カリウム、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、プロピオン酸を含む。典型的な抗酸化物質は、例えばａ−トコフェロールなどのトコフェロール、およびそのエステル、ブチルヒドロキシトルエンおよびブチルヒドロキシアニソールである。用語「トコフェロール」はトコフェロールのエステルも含む。知られているトコフェロールはａ−トコフェロールである。用語「ａ−トコフェロール」はａ−トコフェロールのエステル（例えばａ−トコフェロール酢酸）を含む。本発明の一実施形態では、抗酸化物質はメチオニン、例えばＬ−メチオニンである。

一実施形態では、抗酸化物質の濃度は、少なくとも０．０５ｍＭ、好ましくは０．０５〜１００ｍＭ、好ましくは０．１〜８０ｍＭ、好ましくは０．２〜５０ｍＭ、好ましくは０．５〜７０ｍＭ、好ましくは１〜２５ｍＭ、好ましくは０．１〜２０ｍＭ、好ましくは０．２５〜１ｍＭである。さらに別の実施形態では、抗酸化物質の濃度は、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、６．０、７．０、８．０、９．０、１０．０、１１．０、１２．０、１３．０、１４．０、１５．０、１６．０、１７．０、１８．０、１９．０、２０．０、２５．０、３０．０、３５．０、４０．０、４５．０、５０．０、５５．０、６０．０、６５．０、７０．０、７５．０、８０．０、８５．０、９０．０、９５．０または１００．０ｍＭである。

一実施形態では、メチオニンの濃度は、少なくとも０．０５ｍＭ、好ましくは０．０５〜１００ｍＭ、好ましくは０．１〜８０ｍＭ、好ましくは０．２〜５０ｍＭ、好ましくは０．５〜７０ｍＭ、好ましくは１〜２５ｍＭ、好ましくは０．１〜２０ｍＭ、好ましくは０．２５〜５ｍＭである。さらに別の実施形態では、メチオニンの濃度は、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、６．０、７．０、８．０、９．０、１０．０、１１．０、１２．０、１３．０、１４．０、１５．０、１６．０、１７．０、１８．０、１９．０、２０．０、２５．０、３０．０、３５．０、４０．０、４５．０、５０．０、５５．０、６０．０、６５．０、７０．０、７５．０、８０．０、８５．０、９０．０、９５．０または１００．０ｍＭである。

一実施形態では、グルタチオンの濃度は、少なくとも０．０５ｍＭ、好ましくは０．０５〜１００ｍＭ、好ましくは０．１〜８０ｍＭ、好ましくは０．２〜５０ｍＭ、好ましくは０．５〜７０ｍＭ、好ましくは１〜２５ｍＭ、好ましくは０．１〜２０ｍＭ、好ましくは０．２５〜１ｍＭである。さらに別の実施形態では、グルタチオンの濃度は、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、６．０、７．０、８．０、９．０、１０．０、１１．０、１２．０、１３．０、１４．０、１５．０、１６．０、１７．０、１８．０、１９．０、２０．０、２５．０、３０．０、３５．０、４０．０、４５．０、５０．０、５５．０、６０．０、６５．０、７０．０、７５．０、８０．０、８５．０、９０．０、９５．０または１００．０ｍＭである。

安定剤
本発明の組成物は安定剤を含むことができる。本明細書で使用する「安定剤」は、溶液状態または凍結−解凍中のいずれか、ならびにフリーズドライおよび脱水凍結乾燥物のその後の保存中、水性製剤中の不安定な治療剤の安定化を手助けする化学物質を指す（他の同義語は例えば「共溶媒」、「共溶質」、「化学添加剤」、「賦形剤」である）。本明細書で提供する製剤および方法に適した安定剤の例には、非制限的に、緩衝剤（例えば、ＴＲＩＳ、ＨＥＰＥＳ、アミノ酸など）、浸透物質（例えば糖、糖アルコールなど）、クリオプロテクタント／リオプロテクタント（例えば、グリセロール、メタノール、イソプロパノールなどのアルコール、スクロース、キシリトール、デキストロース、トレハロースなどの糖、カルボン酸およびカルボキシレート、乳酸およびラクテート、リンゴ酸およびマレエートなど、エチレングリコール、ＰＥＧ２００、ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ２００００などのＰＥＧ、ポリビニルピロリドン、ＰＶＰ１２、ＰＶＰ１７、ＰＶＰ３０などのポリマー、バルキング解消剤（例えばアミノ酸、マンニトールなどのポリオールなど）、塩、ポリマー、界面活性剤、抗酸化物質などがある。

安定剤の濃度は作用物質の化学的性質に依存し、本明細書の前述の開示に従い選択することができる。

安定性
前に提供した組成物の具体的実施形態では、組成物は安定状態である。本明細書で使用する用語「安定状態」は、一定時間の保存後ＦＶＩＩＩ活性アッセイにより測定した組成物の効力が、保存前の効力の少なくとも８０％であることを意味する。本明細書で他に示さない限り、２００３年８月の「ＮＯＴＥＦＯＲＧＵＩＤＡＮＣＥＯＮＳＴＡＢＩＬＩＴＹＴＥＳＴＩＮＧ：ＳＴＡＢＩＬＩＴＹＴＥＳＴＩＮＧＯＦＮＥＷＤＲＵＧＳＵＢＳＴＡＮＣＥＳＡＮＤＰＲＯＤＵＣＴＳ」という表題の、欧州医薬品庁からの文書ＣＰＭＰ／ＩＣＨ／２７３６／９９中に記載されたように安定性試験を実施する。

一連の実施形態では、凍結乾燥により本明細書で提供する組成物は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８ヶ月またはそれより長い月数安定状態である（２５℃；４０％の相対湿度［ＲＨ］）。好ましい実施形態では、凍結乾燥組成物は少なくとも６ヶ月間安定状態である（２５℃；４０％ＲＨ）。より好ましい実施形態では、凍結乾燥組成物は少なくとも１２ヶ月間安定状態である（２５℃；４０％ＲＨ）。別の好ましい実施形態では、凍結乾燥組成物は少なくとも１８ヶ月間安定状態である（２５℃；４０％ＲＨ）。別の好ましい実施形態では、凍結乾燥組成物は少なくとも２４ヶ月間安定状態である（２５℃；４０％ＲＨ）。別の好ましい実施形態では、凍結乾燥組成物は少なくとも３６ヶ月間安定状態である（２５℃；４０％ＲＨ）。

前に提供した組成物の具体的実施形態では、２５℃／４０％ＲＨで保存すると、凍結乾燥組成物は少なくとも６ヶ月間、好ましくは少なくとも１２ヶ月間、より好ましくは少なくとも２４ヶ月間、さらにより好ましくは少なくとも３６ヶ月間安定状態である。

前に提供した組成物の別の実施形態では、３０℃／４０％ＲＨで保存すると、凍結乾燥組成物は少なくとも６ヶ月間、好ましくは少なくとも１２ヶ月間、より好ましくは少なくとも２４ヶ月間、さらにより好ましくは少なくとも３６ヶ月間安定状態である。

前に提供した組成物の別の実施形態では、４０℃／４０％ＲＨで保存すると、凍結乾燥組成物は少なくとも６ヶ月間、好ましくは少なくとも１２ヶ月間、より好ましくは少なくとも２４ヶ月間安定状態である。

前に提供した組成物の別の実施形態では、２５℃／６０％ＲＨで保存すると、凍結乾燥組成物は少なくとも６ヶ月間、好ましくは少なくとも１２ヶ月間、より好ましくは少なくとも２４ヶ月間、さらにより好ましくは少なくとも３６ヶ月間安定状態である。

前に提供した組成物の別の実施形態では、３０℃／６０％ＲＨで保存すると、凍結乾燥組成物は少なくとも６ヶ月間、好ましくは少なくとも１２ヶ月間、より好ましくは少なくとも２４ヶ月間、さらにより好ましくは少なくとも３６ヶ月間安定状態である。

前に提供した組成物の別の実施形態では、４０℃／６０％ＲＨで保存すると、凍結乾燥組成物は少なくとも６ヶ月間、好ましくは少なくとも１２ヶ月間、より好ましくは少なくとも２４ヶ月間安定状態である。

前に提供した組成物の別の実施形態では、２５℃／６５％ＲＨで保存すると、凍結乾燥組成物は少なくとも６ヶ月間、好ましくは少なくとも１２ヶ月間、より好ましくは少なくとも２４ヶ月間、さらにより好ましくは少なくとも３６ヶ月間安定状態である。

前に提供した組成物の別の実施形態では、３０℃／６５％ＲＨで保存すると、凍結乾燥組成物は少なくとも６ヶ月間、好ましくは少なくとも１２ヶ月間、より好ましくは少なくとも２４ヶ月間、さらにより好ましくは少なくとも３６ヶ月間安定状態である。

前に提供した組成物の別の実施形態では、４０℃／６５％ＲＨで保存すると、凍結乾燥組成物は少なくとも６ヶ月間、好ましくは少なくとも１２ヶ月間、より好ましくは少なくとも２４ヶ月間安定状態である。

前に提供した組成物の別の実施形態では、２５℃／７５％ＲＨで保存すると、凍結乾燥組成物は少なくとも６ヶ月間、好ましくは少なくとも１２ヶ月間、より好ましくは少なくとも２４ヶ月間、さらにより好ましくは少なくとも３６ヶ月間安定状態である。

前に提供した組成物の別の実施形態では、３０℃／７５％ＲＨで保存すると、凍結乾燥組成物は少なくとも６ヶ月間、好ましくは少なくとも１２ヶ月間、より好ましくは少なくとも２４ヶ月間、さらにより好ましくは少なくとも３６ヶ月間安定状態である。

前に提供した組成物の別の実施形態では、４０℃／７５％ＲＨで保存すると、凍結乾燥組成物は少なくとも６ヶ月間、好ましくは少なくとも１２ヶ月間、より好ましくは少なくとも２４ヶ月間安定状態である。

前に提供した組成物の別の実施形態では、２５℃／２５％ＲＨで保存すると、凍結乾燥組成物は少なくとも６ヶ月間、好ましくは少なくとも１２ヶ月間、より好ましくは少なくとも２４ヶ月間、さらにより好ましくは少なくとも３６ヶ月間安定状態である。

前に提供した組成物の別の実施形態では、３０℃／２５％ＲＨで保存すると、凍結乾燥組成物は少なくとも６ヶ月間、好ましくは少なくとも１２ヶ月間、より好ましくは少なくとも２４ヶ月間、さらにより好ましくは少なくとも３６ヶ月間安定状態である。

前に提供した組成物の別の実施形態では、４０℃／２５％ＲＨで保存すると、凍結乾燥組成物は少なくとも６ヶ月間、好ましくは少なくとも１２ヶ月間、より好ましくは少なくとも２４ヶ月間安定状態である。

前に定義した条件の１つの下での凍結乾燥組成物の保存後、ＳＥ−ＨＰＬＣにより測定した高分子量成分の量は、３％以下であることが好ましい。ＳＥ−ＨＰＬＣにより測定した高分子量成分の量は、本出願の実施例中に記載する。

一実施形態では、４℃で液体状態で保存すると、組成物は少なくとも４８時間、好ましくは少なくとも７２時間、より好ましくは少なくとも９６時間、最も好ましくは少なくとも１週間安定状態である。典型的には水性組成物は、２〜８℃で液体状態で保存すると、少なくとも４８時間、好ましくは少なくとも７２時間、より好ましくは少なくとも９６時間、最も好ましくは少なくとも１週間にわたって、その第ＶＩＩＩ因子活性の少なくとも８０％を保持する。これは、凍結乾燥前の水性組成物、および／または凍結乾燥および水溶液中、例えば蒸留水中での再構成後の水性組成物に当てはまる。

前に提供した組成物の具体的実施形態では、４℃で液体状態で保存すると、組成物は少なくとも４８時間、好ましくは少なくとも７２時間、より好ましくは少なくとも９６時間、最も好ましくは少なくとも１週間にわたって、その第ＶＩＩＩ因子活性の少なくとも８５％を保持する。これは、凍結乾燥前の水性組成物、および／または凍結乾燥および水溶液中、例えば蒸留水中での再構成後の水性組成物に当てはまる。

前に提供した組成物の具体的実施形態では、４℃で液体状態で保存すると、組成物は少なくとも４８時間、好ましくは少なくとも７２時間、より好ましくは少なくとも９６時間、最も好ましくは少なくとも１週間にわたって、その第ＶＩＩＩ因子活性の少なくとも９０％を保持する。これは、凍結乾燥前の水性組成物、および／または凍結乾燥および水溶液中、例えば蒸留水中での再構成後の水性組成物に当てはまる。

本発明の具体的実施形態では、例えば凍結乾燥前、または凍結乾燥および水中での再構成時に、組成物はほとんどまたは全く濁度を示さない。本明細書で使用する用語「濁度」は溶液の乳光を指す。Ｐｈａｒｍ．Ｅｕｒ．８．０、ｓｅｃｔｉｏｎ２．２．１「Ｃｌａｒｉｔｙａｎｄｄｅｇｒｅｅｏｆｏｐａｌｅｓｃｅｎｃｅｏｆｌｉｑｕｉｄｓ」中に記載されたように、濁度を視覚的または機械的に決定することができる。本出願中の濁度に関する任意の参照は、Ｐｈａｒｍ．Ｅｕｒ．８．０、ｓｅｃｔｉｏｎ２．２．１「Ｃｌａｒｉｔｙａｎｄｄｅｇｒｅｅｏｆｏｐａｌｅｓｃｅｎｃｅｏｆｌｉｑｕｉｄｓ」中に記載された方法を指す。

一実施形態では、本発明の組成物は１８ＮＴＵ以下の濁度を有する。別の実施形態では、本発明の組成物は６ＮＴＵ以下の濁度を有する。さらに別の実施形態では、本発明の組成物は３ＮＴＵ以下の濁度を有する。これらの濁度値は、凍結乾燥前、および凍結乾燥および蒸留水中での再構成後に実現する。

さらに別の実施形態では、本発明の組成物は透明である。本出願において、その乳光がＰｈａｒｍ．Ｅｕｒ．８．０、ｓｅｃｔｉｏｎ２．２．１「Ｃｌａｒｉｔｙａｎｄｄｅｇｒｅｅｏｆｏｐａｌｅｓｃｅｎｃｅｏｆｌｉｑｕｉｄｓ」中に記載された「参照懸濁液ＩＩＩ」のそれほど顕著でないとき、組成物または溶液は「透明」であると考えられる。本明細書で「濁度なし」または「濁りを含まない」組成物を指すとき、組成物がこの定義に従い「透明」であることが理解される。

好ましいのは下記を含む以下の組成物である（表１）：

さらに好ましいのは下記を含む以下の組成物である（表２）：

さらに好ましいのは下記を含む以下の組成物である（表３）：

さらに好ましいのは下記を含む以下の組成物である（表４）：

さらに好ましいのは下記を含む以下の組成物である（表５）：

好ましいのは下記を含む以下の組成物である（表６）：

好ましいのは下記を含む以下の組成物である（表７）：

好ましいのは下記を含む以下の組成物である（表８）：

好ましいのは下記を含む以下の組成物である（表９）：

好ましいのは下記を含む以下の組成物である（表１０）：

好ましいのは下記を含む以下の組成物である（表１１）：

好ましいのは下記を含む以下の組成物である（表１２）：

好ましいのは下記を含む以下の組成物である（表１３）：

好ましいのは下記を含む以下の組成物である（表１４）：

好ましいのは下記を含む以下の組成物である（表１５）：

別の実施形態では、組成物１７０〜２３３は、好ましくは少なくとも０．００１％ｗ／ｗの濃度で、界面活性剤、例えばポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート［例えばＴｗｅｅｎ（登録商標）８０］をさらに含む。

別の実施形態では、組成物１７０〜２３３は、ヒスチジン以外の１種またはそれ以上のアミノ酸をさらに含む。他のアミノ酸は、好ましくは少なくとも１ｍＭの濃度で、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、イソロイシンまたはこれらの混合物からなるリストから選択される。

別の実施形態では、組成物１７０〜２３３は、好ましくは少なくとも０．０５ｍＭの濃度で抗酸化物質をさらに含む。抗酸化物質の例には、還元型グルタチオン、メチオニン、システイン、亜硫酸ナトリウム、ビタミンＡ、ビタミンＥ、アスコルビン酸、アスコルビン酸ナトリウムおよびこれらの混合物があるが、これらだけには限られない。本発明の一実施形態では、抗酸化物質はメチオニン、例えばＬ−メチオニンである。

別の実施形態では、組成物１７０〜２３３は６．０〜８．０または６．５〜７．５または６．８〜７．２または７のｐＨを有する。

別の実施形態では、組成物１７０〜２３３は
ａ．好ましくは少なくとも０．００１％ｗ／ｗの濃度で、界面活性剤としてポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート［例えばＴｗｅｅｎ（登録商標）８０］、
ｂ．好ましくは少なくとも１ｍＭの濃度で、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、イソロイシンまたはこれらの混合物からなるリストから選択されるヒスチジン以外の１種またはそれ以上のアミノ酸、
ｃ．好ましくは少なくとも０．０５ｍＭの濃度で、還元型グルタチオン、メチオニン、システイン、亜硫酸ナトリウム、ビタミンＡ、ビタミンＥ、アスコルビン酸、アスコルビン酸ナトリウムおよびこれらの混合物からなるリストから選択される抗酸化物質をさらに含み、かつ
ｄ．これらの組成物は、６．０〜８．０または６．５〜７．５または６．８〜７．２または７のｐＨを有する。

好ましいのは下記を含む以下の組成物である（表１６）：

別の実施形態では、組成物２３４〜２９７は、好ましくは少なくとも０．００１％ｗ／ｗの濃度で、界面活性剤、例えばポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート［例えばＴｗｅｅｎ（登録商標）８０］をさらに含む。

別の実施形態では、組成物２３４〜２９７は、ヒスチジン以外の１種またはそれ以上のアミノ酸をさらに含む。他のアミノ酸は、好ましくは少なくとも１ｍＭの濃度で、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、イソロイシンまたはこれらの混合物からなるリストから選択される。

別の実施形態では、組成物２３４〜２９７は、好ましくは少なくとも０．０５ｍＭの濃度で抗酸化物質をさらに含む。抗酸化物質の例には、還元型グルタチオン、メチオニン、システイン、亜硫酸ナトリウム、ビタミンＡ、ビタミンＥ、アスコルビン酸、アスコルビン酸ナトリウムおよびこれらの混合物があるが、これらだけには限られない。本発明の一実施形態では、抗酸化物質はメチオニン、例えばＬ−メチオニンである。

別の実施形態では、組成物２３４〜２９７は６．０〜８．０または６．５〜７．５または６．８〜７．２または７のｐＨを有する。

別の実施形態では、組成物２３４〜２９７は
ｅ．好ましくは少なくとも０．００１％ｗ／ｗの濃度で、界面活性剤としてポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート［例えばＴｗｅｅｎ（登録商標）８０］、
ｆ．好ましくは少なくとも１ｍＭの濃度で、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、イソロイシンまたはこれらの混合物からなるリストから選択されるヒスチジン以外の１種またはそれ以上のアミノ酸、
ｇ．好ましくは少なくとも０．０５ｍＭの濃度で、還元型グルタチオン、メチオニン、システイン、亜硫酸ナトリウム、ビタミンＡ、ビタミンＥ、アスコルビン酸、アスコルビン酸ナトリウムおよびこれらの混合物からなるリストから選択される抗酸化物質をさらに含み、かつ
ｈ．これらの組成物は、６．０〜８．０または６．５〜７．５または６．８〜７．２または７のｐＨを有する。

好ましいのは下記を含む以下の組成物である（表１７）：

別の実施形態では、組成物２９８〜３６１は、好ましくは少なくとも０．００１％ｗ／ｗの濃度で、界面活性剤、例えばポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート［例えばＴｗｅｅｎ（登録商標）８０］をさらに含む。

別の実施形態では、組成物２９８〜３６１は、ヒスチジン以外の１種またはそれ以上のアミノ酸をさらに含む。他のアミノ酸は、好ましくは少なくとも１ｍＭの濃度で、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、イソロイシンまたはこれらの混合物からなるリストから選択される。

別の実施形態では、組成物２９８〜３６１は、好ましくは少なくとも０．０５ｍＭの濃度で抗酸化物質をさらに含む。抗酸化物質の例には、還元型グルタチオン、メチオニン、システイン、亜硫酸ナトリウム、ビタミンＡ、ビタミンＥ、アスコルビン酸、アスコルビン酸ナトリウムおよびこれらの混合物があるが、これらだけには限られない。本発明の一実施形態では、抗酸化物質はメチオニン、例えばＬ−メチオニンである。

別の実施形態では、組成物２９８〜３６１は６．０〜８．０または６．５〜７．５または６．８〜７．２または７のｐＨを有する。

別の実施形態では、組成物２９８〜３６１は
ｉ．好ましくは少なくとも０．００１％ｗ／ｗの濃度で、界面活性剤としてポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート［例えばＴｗｅｅｎ（登録商標）８０］、
ｊ．好ましくは少なくとも１ｍＭの濃度で、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、イソロイシンまたはこれらの混合物からなるリストから選択されるヒスチジン以外の１種またはそれ以上のアミノ酸、
ｋ．好ましくは少なくとも０．０５ｍＭの濃度で、還元型グルタチオン、メチオニン、システイン、亜硫酸ナトリウム、ビタミンＡ、ビタミンＥ、アスコルビン酸、アスコルビン酸ナトリウムおよびこれらの混合物からなるリストから選択される抗酸化物質をさらに含み、かつ
ｌ．これらの組成物は、６．０〜８．０または６．５〜７．５または６．８〜７．２または７のｐＨを有する。

具体的実施形態では、本発明は、前に記載した水性組成物を凍結乾燥する工程によって得られる組成物に関する。別の実施形態では、本発明は、前に記載した水性組成物を凍結乾燥する工程によって得られる組成物に関する。

具体的実施形態では、本発明は、前に記載した凍結乾燥水性組成物を適切な溶媒で再構成する工程によって得られる組成物に関する。

具体的実施形態では、前に記載した凍結乾燥水性組成物を適切な溶媒で再構成する工程によって組成物を得られ、この場合適切な溶媒は水溶液である。

具体的実施形態では、前に記載した凍結乾燥水性組成物を水溶液で再構成する工程によって組成物を得られ、この場合水溶液はリンガー液、乳酸加リンガー液、および非経口投与に適した任意の他の溶液を含む群から選択される。

具体的実施形態では、前に記載した凍結乾燥水性組成物を水溶液で再構成する工程によって組成物を得られ、この場合水溶液は水、好ましくは「注射用水」である。

具体的実施形態では、前に記載した凍結乾燥水性組成物を水溶液で再構成する工程によって組成物を得られ、この場合水溶液は塩化ナトリウム溶液である。

具体的実施形態では、前に記載した凍結乾燥水性組成物を水溶液で再構成する工程によって組成物を得られ、この場合水溶液はヒスチジン溶液である。

本発明の別の態様は、血液凝固障害、例えば血友病Ａの治療における、本明細書中に記載の組成物の使用である。

前に提供した組成物の具体的実施形態では、皮下および／または筋肉内投与用に組成物を製剤化する。

組成物は経口、局所、経皮、非経口、吸入器噴霧により、膣内、直腸または頭蓋内注射により投与され、非経口投与が好ましい。本明細書で使用する用語、非経口は、皮下注射、静脈内、筋肉内、槽内注射、または注入技法を含む。特定部位への、静脈内、真皮内、筋肉内、乳房内、腹腔内、鞘内、後眼球、肺内注射および／または手術移植による投与も企図される。一般に組成物は、レシピエントに有害であり得る発熱物質（例えば、Ｐｈ．Ｅｕｒ．７．０／２．０６．０８．００参照）、および他の不純物をほとんど含まない。

以下の実施例は、ＦＶＩＩＩ分子（配列番号２、ＷＯ２００４／０６７５６６中に記載された構築物ｄＢＮ（６４−５３））を使用して実行した。このＦＶＩＩＩ分子は以後「ＣＳＬ６２７」と呼ぶ。

発色ＦＶＩＩＩ：Ｃアッセイ
コアマティックＦＶＩＩＩ試験キット（Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｘ−ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｙＳｐＡＶ．ｌｅＭｏｎｚａ３３８−２０１２８、ミラノ、イタリア）を使用して発色ＦＶＩＩＩ：Ｃアッセイを実行した。

アッセイの原理：カルシウムとリン脂質の存在下において、第Ｘ因子は第ＩＸａ因子により第Ｘａ因子に活性化される。この反応はコファクターとしての第ＶＩＩＩａ因子によって刺激される。ＦＶＩＩＩａは、測定対象サンプル中のＦＶＩＩＩ由来の反応混合物において少量のトロンビンによって形成される。最適濃度のＣａ^２＋、リン脂質および第ＩＸａ因子および過剰量の第Ｘ因子を使用すると、第Ｘ因子の活性化は第ＶＩＩＩ因子の効力に比例する。活性化第Ｘ因子は発色基質Ｓ−２７６５から発色団ｐＮＡを切り離す。したがって４０５ｎｍで測定したｐＮＡの放出は形成されるＦＸａの量、したがってサンプルの第ＶＩＩＩ因子活性にも比例する。このアッセイは、全自動血液凝固分析装置、いずれもＳｉｅｍｅｎｓＨｅａｌｔｈｃａｒｅＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓＧｍｂＨ、Ｌｕｄｗｉｇ−Ｅｒｈａｒｄ−Ｓｔｒａｓｓｅ１２、６５７６０Ｅｓｃｈｂｏｒｎ、ドイツからの、ＢｅｈｒｉｎｇＣｏａｇｕｌａｔｉｏｎＴｉｍｅｒ（ＢＣＴ）またはＢｅｈｒｉｎｇＣｏａｇｕｌａｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍ（ＢＣＳ）のいずれかで実行するよう適合させた。

一段階凝固アッセイ
ＦＶＩＩＩ：Ｃ一段階凝固アッセイを、いずれもＳｉｅｍｅｎｓＨｅａｌｔｈｃａｒｅＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓｐｒｏｄｕｃｔｓＧｍｂＨ、Ｅｍｉｌ−ｖｏｎ−Ｂｅｈｒｉｎｇ−Ｓｔｒ．７６、３５０４１、Ｍａｒｂｕｒｇ、ドイツからの、ＰａｔｈｒｏｍｔｉｎＳＬ試薬とＶＩＩＩ欠乏血漿を使用して実行した。

アッセイの原理：この試験は、活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）−アッセイの改変バージョンとして実行する：血漿とリン脂質および表面アクチベーターのインキュベーションは、固有凝固系の因子の活性化をもたらす。カルシウムイオンの添加が凝固反応を誘発する。測定可能なフィブリン血栓の形成時間を決定する。このアッセイは第ＶＩＩＩ因子欠乏血漿の存在下で実行する。欠乏血漿の凝固能力は、試験対象サンプル中に含まれる凝固第ＶＩＩＩ因子によって回復される。凝固時間の短縮はサンプル中に存在する第ＶＩＩＩ因子の量に比例する。凝固第ＶＩＩＩ因子の活性は、国際単位で既知の第ＶＩＩＩ因子活性を有する標準製剤との直接比較によって定量化する。

このアッセイは、全自動血液凝固分析装置、いずれもＳｉｅｍｅｎｓＨｅａｌｔｈｃａｒｅＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓＧｍｂＨ、Ｌｕｄｗｉｇ−Ｅｒｈａｒｄ−Ｓｔｒａｓｓｅ１２、６５７６０Ｅｓｃｈｂｏｒｎ、ドイツからの、ＢｅｈｒｉｎｇＣｏａｇｕｌａｔｉｏｎＴｉｍｅｒ（ＢＣＴ）またはＢｅｈｒｉｎｇＣｏａｇｕｌａｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍ（ＢＣＳ）のいずれかで実行するよう適合させた。

サイズ排除ＨＰＬＣによる高分子量成分（ＨＭＷＣ）
サイズ排除ＨＰＬＣを、ＣＯＳＭＯＳＩＬＤｉｏｌ−３００−ＩＩ７．５×６００ｍｍカラム（ＮａｃａｌａｉＴｅｓｑｕｅ、京都、日本）を使用して実行し、励起波長２８０ｎｍおよび蛍光波長３４０ｎｍで蛍光検出した。移動相の組成は３００ｍＭのＮａＣｌ、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１０ｍＭのＣａＣｌ_２ ^＊２Ｈ_２Ｏ、０．００５％のＴｗｅｅｎ（登録商標）８０、１０％のイソプロパノール、ｐＨ７．０であった。７５分間にわたり周囲室温において０．５ｍＬ／分の流速で溶出は等しかった。

脱塩カラムを介したバッファー交換後のＦＶＩＩＩ製剤の調製および溶液の性質の評価
ＦＶＩＩＩ：Ｃ活性（発色基質法）で９５００ＩＵ／ｍｌの精製ＣＳＬ６２７を、供給者の説明書に従い、ＮＡＰ−２５脱塩カラム（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＳｅｐｈａｄｅｘ（商標）Ｇ２５；カタログ番号１７−０８５２−０１）を介したバッファー交換により所望の組成物に製剤化した。このバッファー交換によって１．４の希釈倍率をもたらした。

次いで異なる組成物を、それらの様相（濁度）およびＦＶＩＩＩ：Ｃ活性収率に関して調べた。

ＦＶＩＩＩ：Ｃの収率は、バッファー交換による希釈に適した調節をしたバッファー交換前の溶液中のＦＶＩＩＩ：Ｃ量で割った、バッファー交換後に得た組成物中のＦＶＩＩＩ：Ｃ量の割合として計算した（希釈倍率１．４）。

脱塩カラムを介したバッファー交換後のＦＶＩＩＩ製剤の調製および溶液の性質の評価
実施例１中に記載したバッファー交換によって異なる組成物を得た（出発物質におけるＦＶＩＩＩ：Ｃ活性は９７３３ＩＵ／ｍＬであった）。バッファー交換後に、組成物をそれらの様相に関して評価した。さらに、組成物を次いで滅菌濾過し（０．２２μｍ）、濾過時（時間０）に直接、ならびに１、２、３、１５、３０、および６０日間＋２〜＋８℃での保存後、および１、２および３日間＋２５℃と＋４０℃での保存後に、それらのＦＶＩＩＩ：Ｃ活性をアッセイした。

回復率（安定性）を、時間０でのＦＶＩＩＩ：Ｃ活性で割った保存後のＦＶＩＩＩ：Ｃの割合として計算した（発色基質ＦＶＩＩＩ活性アッセイ）。（０．２２μｍ濾過後の）時間０でのＦＶＩＩＩ：Ｃ活性を１００％として定義した。

脱塩カラムを介したバッファー交換後の溶液の様相
実施例１中に記載したバッファー交換によって異なる組成物を得た（出発物質におけるＦＶＩＩＩ：Ｃ活性は発色基質ＦＶＩＩＩ活性アッセイにより８３１７ＩＵ／ｍＬであった）。バッファー交換後に、組成物をそれらの様相に関して評価した。

脱塩カラムを介したバッファー交換後のＦＶＩＩＩ：Ｃ活性収率と溶液の様相、および保存によるＦＶＩＩＩ：Ｃ活性の回復率。
実施例１中に記載したバッファー交換によって異なる組成物を得た（出発物質におけるＦＶＩＩＩ：Ｃ活性は４７８０ＩＵ／ｍＬであった）。

バッファー交換後に、組成物をそれらの様相に関して評価した。さらに、組成物を次いで滅菌濾過し（０．２２μｍ）、濾過時（時間０）に直接、ならびに１、２および３日間２〜８℃での保存後、および３日間２５℃と４０℃での保存後に、それらのＦＶＩＩＩ：Ｃ活性（発色基質アッセイ）をアッセイした。

製剤化工程のＦＶＩＩＩ：Ｃ活性の収率は、希釈に適した調節をしたバッファー交換前の溶液中のＦＶＩＩＩ：Ｃで割った、バッファー交換後に得た組成物中のＦＶＩＩＩ：Ｃの割合として計算した。保存による回復率（安定性）を、時間０でのＦＶＩＩＩ：Ｃ活性で割った保存後のＦＶＩＩＩ：Ｃの割合として計算した。（０．２２μｍ濾過後の）時間０でのＦＶＩＩＩ：Ｃ活性を１００％として定義した。

高温での保存時のフリーズドライ製剤におけるＨＭＷＣ形成（ＳＥ−ＨＰＬＣ）。
この実施例の製剤のＦＶＩＩＩ：Ｃ活性および賦形剤の濃度は、適切なバッファー溶液でＦＶＩＩＩ濃縮物を希釈することにより調節した。得られた製剤は４３０〜４８０ＩＵ／ｍＬのＦＶＩＩＩ：Ｃ濃度を示した。次いで溶液を分配し（２．５ｍＬ）フリーズドライした。得られた凍結乾燥物は＋４０℃で保存し１、３、６および１２ヶ月後にサンプルを採取した。凍結乾燥物の保存前と保存後に還元溶液からサンプルを採取し−７０℃で凍結させた。水浴中（＋３７℃）での解凍後にＳＥ−ＨＰＬＣによりサンプル中のＨＭＷＣを測定した。

高温での保存時のフリーズドライ製剤におけるＦＶＩＩＩ：Ｃ発色基質活性アッセイおよびＨＭＷＣ形成（ＳＥ−ＨＰＬＣ）
ＦＶＩＩＩ：Ｃ活性および賦形剤の濃度は、適切なバッファー溶液でＦＶＩＩＩ濃縮物を希釈することにより調節した。次いで溶液を分配し（２．５ｍＬ）フリーズドライした。得られた凍結乾燥物は＋４０℃で保存し１、３、６、１２、１８および２４ヶ月後にサンプルを採取した。凍結乾燥物の保存前と保存後に還元溶液からサンプルを採取し−７０℃で凍結させた。水浴中（＋３７℃）での解凍後に凍結保存サンプル中のＨＭＷＣを測定した。

（発色基質ＦＶＩＩＩ活性アッセイで）ＦＶＩＩＩ：Ｃ活性を、フリーズドライ前に新たな溶液において、およびフリーズドライ直後または保存後に新たな還元凍結乾燥物において測定した。回復率（安定性）を、時間０でのＦＶＩＩＩ：Ｃ活性で割った保存後のＦＶＩＩＩ：Ｃの割合として計算した。（フリーズドライ後の）時間０でのＦＶＩＩＩ：Ｃ活性を１００％として定義した。

脱塩カラムを介したバッファー交換後のＦＶＩＩＩ製剤の調製および溶液の性質の評価。
精製ＣＳＬ６２７を、供給者の説明書に従い実施例１中に記載したように、ＮＡＰ−２５脱塩カラム（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＳｅｐｈａｄｅｘ（商標）Ｇ２５；カタログ番号１７−０８５２−０１）を介したバッファー交換により所望の組成物に製剤化した。その後、異なる組成物を発色活性アッセイに基づき希釈し、発色基質ＦＶＩＩＩ活性アッセイを使用して約７０００ＩＵ／ｍｌのＦＶＩＩＩ：Ｃ活性（効力）を得た。次いで異なる組成物をそれらの様相（濁度）に関して調べた。

結果は図１中にグラフで示す。ドットは１８ＮＴＵの閾値レベルを超える濁度を表し、菱形は透明溶液（１８ＮＴＵ以下の濁度）を表す。

高温での保存時のフリーズドライ製剤におけるＨＭＷＣ形成（ＳＥ−ＨＰＬＣ）
この実施例の製剤のＦＶＩＩＩ：Ｃ活性および賦形剤の濃度は、適切なバッファー溶液でＦＶＩＩＩ濃縮物（ＣＳＬ６２７）を希釈することにより調節した。得られた製剤は約３９０〜４３５ＩＵ／ｍＬのＦＶＩＩＩ：Ｃ濃度を示した。次いで溶液を分配し（２．５ｍＬ）フリーズドライした。得られた凍結乾燥物は＋４０℃で保存し１、３、６、９および１２ヶ月後にサンプルを採取した。凍結乾燥物の保存前と保存後に還元溶液からサンプルを採取し−７０℃で凍結させた。水浴中（＋３７℃）での解凍後に、ＳＥ−ＨＰＬＣによりサンプル中のＨＭＷＣを測定した。

高温での保存時のフリーズドライ製剤におけるＦＶＩＩＩ：Ｃ発色基質活性アッセイおよびＨＭＷＣ形成（ＳＥ−ＨＰＬＣ）
ＦＶＩＩＩ：Ｃ活性および賦形剤の濃度は、適切なバッファー溶液でＦＶＩＩＩ濃縮物（ＣＳＬ６２７）を希釈することにより調節した。次いで溶液を分配し（２．５ｍＬ）フリーズドライした。得られた凍結乾燥物は＋４０℃で保存し１、３、６、９および１２ヶ月後にサンプルを採取した。凍結乾燥物の保存前と保存後に還元溶液からサンプルを採取し−７０℃で凍結させた。水浴中（＋３７℃）での解凍後に凍結保存サンプル中のＨＭＷＣを測定した。

高温での保存時のフリーズドライ製剤におけるＦＶＩＩＩ：Ｃ発色基質活性アッセイおよびＨＭＷＣ形成（ＳＥ−ＨＰＬＣ）
ＦＶＩＩＩ：Ｃ活性および賦形剤の濃度は、適切なバッファー溶液でＦＶＩＩＩ濃縮物（ＣＳＬ６２７）を希釈することにより調節した。次いで溶液を分配し（２．５ｍＬ）フリーズドライした。得られた凍結乾燥物は＋４０℃で保存し３、６および９ヶ月後にサンプルを採取した。凍結乾燥物の保存前と保存後に還元溶液からサンプルを採取し−７０℃で凍結させた。水浴中（＋３７℃）での解凍後に凍結保存サンプル中のＨＭＷＣを測定した。

Claims

凝固第ＶＩＩＩ因子の水性組成物であって、
ａ．ＦＶＩＩＩ分子、
ｂ．４０〜１９５ｍＭのナトリウム塩、
ｃ．ヒスチジン、
ｄ．少なくとも１ｍＭのカルシウム塩、および
ｅ．界面活性剤
を含み、［Ｈｉｓ］≧１８０ｍＭ−２０^＊［Ｃａ^２＋］（式中、［Ｃａ^２＋］は該水性組成物中の１リットルあたりのミリモルでのカルシウムイオンの濃度であり、［Ｈｉｓ］は該水性組成物中の１リットルあたりのミリモルでのヒスチジンの濃度であり、ただし、［Ｈｉｓ］＞０である）であり、該組成物のモル浸透圧濃度は６００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ以下である前記水性組成物。
水性組成物中のナトリウム塩の濃度は４５〜９５ｍＭである、請求項１に記載の水性組成物。
［Ｈｉｓ］は５〜２００ｍＭである、請求項１または２に記載の水性組成物。
［Ｃａ^２＋］は５〜１００ｍＭである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の水性組成物。
ｐＨは５〜９である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の水性組成物。
（ｉ）凍結乾燥、（ｉｉ）１２ヶ月の間＋２５℃の温度と４０％の相対湿度での凍結乾燥組成物の保存、および（ｉｉｉ）蒸留水中での該凍結乾燥組成物のその後の再構成時に、（ｉ）凍結乾燥および、該凍結乾燥組成物の保存なし、（ｉｉ）蒸留水中でのその後の即時再構成時の同一組成物と比較して少なくとも８０％のＦＶＩＩＩ：Ｃ活性の回復率を示す、請求項１〜５のいずれか１項に記載の水性組成物。
４℃で液体状態で保存すると、少なくとも４８時間にわたってその第ＶＩＩＩ因子活性の少なくとも８０％を保持する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の水性組成物。
カルシウム塩は塩化カルシウムである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の水性組成物。
ナトリウム塩は塩化ナトリウムである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の水性組成物。
炭水化物をさらに含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の水性組成物。
炭水化物はスクロースである、請求項１０に記載の水性組成物。
炭水化物の濃度は１〜２０％（ｗ／ｗ）である、請求項１０または１１に記載の水性組成物。
界面活性剤の濃度は０．００１〜０．２％（ｖ／ｖ）である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の水性組成物。
界面活性剤は非天然界面活性剤である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の水性組成物。
ヒスチジン以外の少なくとも１種のアミノ酸をさらに含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の水性組成物。
前記ヒスチジン以外の少なくとも１種のアミノ酸はアルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、ロイシン、イソロイシンおよびこれらの組合せからなる群から選択される、請求項１５に記載の水性組成物。
少なくとも１種の抗酸化物質をさらに含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の水性組成物。
前記少なくとも１種の抗酸化物質は、還元型グルタチオン、メチオニン、システイン、亜硫酸ナトリウム、ビタミンＡ、ビタミンＥ、アスコルビン酸、アスコルビン酸ナトリウムおよびこれらの組合せからなる群から選択される、請求項１７に記載の水性組成物。
前記少なくとも１種の抗酸化物質の濃度は０．０５〜１００ｍＭである、請求項１７または１８に記載の水性組成物。
ＦＶＩＩＩ分子は非天然ＦＶＩＩＩ分子、好ましくは組換え生成型ＦＶＩＩＩ分子、例えば（ｉ）Ｂドメイン欠失型または切断型ＦＶＩＩＩ分子、（ｉｉ）組換え生成型二本鎖ＦＶＩＩＩ分子、または（ｉｉｉ）一本鎖ＦＶＩＩＩ分子である、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の水性組成物。
請求項１〜２０のいずれか１項に記載の水性組成物を凍結乾燥する工程によって得られる組成物。
請求項２１に記載の凍結乾燥組成物を水溶液で再構成する工程によって得られる凝固第ＶＩＩＩ因子の水性組成物。
ＦＶＩＩＩ分子を安定化する方法であって、請求項１で定義した成分を混合して水性組成物を得る工程、および該水性組成物を凍結乾燥する工程を含む前記方法。