JP6452644B2 - ジカウイルス検出用免疫クロマト分析装置 - Google Patents
ジカウイルス検出用免疫クロマト分析装置 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6452644B2 JP6452644B2 JP2016098845A JP2016098845A JP6452644B2 JP 6452644 B2 JP6452644 B2 JP 6452644B2 JP 2016098845 A JP2016098845 A JP 2016098845A JP 2016098845 A JP2016098845 A JP 2016098845A JP 6452644 B2 JP6452644 B2 JP 6452644B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- zika virus
- sample
- amino acid
- labeling substance
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000907316 Zika virus Species 0.000 title claims description 118
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims description 61
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 84
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 72
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 claims description 36
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 29
- 239000012501 chromatography medium Substances 0.000 claims description 28
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 19
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 16
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 13
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 13
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 8
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 claims description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 83
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 67
- 101710128560 Initiator protein NS1 Proteins 0.000 description 61
- 101710144127 Non-structural protein 1 Proteins 0.000 description 61
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 27
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 20
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 19
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 17
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 15
- 208000001455 Zika Virus Infection Diseases 0.000 description 14
- 208000035332 Zika virus disease Diseases 0.000 description 13
- 208000020329 Zika virus infectious disease Diseases 0.000 description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 description 13
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 11
- 101500010375 Zika virus Non-structural protein 1 Proteins 0.000 description 11
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 11
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 10
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 9
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 9
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 9
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 9
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 8
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 8
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 8
- 241000725619 Dengue virus Species 0.000 description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 7
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 6
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 6
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 5
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 4
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 241000710781 Flaviviridae Species 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 4
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 4
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 4
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 4
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 3
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 3
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000004745 nonwoven fabric Substances 0.000 description 3
- 239000000123 paper Substances 0.000 description 3
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 3
- -1 polyethylene Polymers 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 3
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 2
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N Iron oxide Chemical compound [Fe]=O UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101800000512 Non-structural protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 229910044991 metal oxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002923 metal particle Substances 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 2
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N pristane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000010079 rubber tapping Methods 0.000 description 2
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 2
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RDEIXVOBVLKYNT-VQBXQJRRSA-N (2r,3r,4r,5r)-2-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2r,3r,6s)-3-amino-6-(1-aminoethyl)oxan-2-yl]oxy-2-hydroxycyclohexyl]oxy-5-methyl-4-(methylamino)oxane-3,5-diol;(2r,3r,4r,5r)-2-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2r,3r,6s)-3-amino-6-(aminomethyl)oxan-2-yl]o Chemical compound OS(O)(=O)=O.O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H](CC[C@@H](CN)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N.O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H](CC[C@H](O2)C(C)N)N)[C@@H](N)C[C@H]1N.O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N RDEIXVOBVLKYNT-VQBXQJRRSA-N 0.000 description 1
- WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 2,6-dimethoxybenzenecarbothioamide Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(N)=S WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 241000238876 Acari Species 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 208000006820 Arthralgia Diseases 0.000 description 1
- OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 Chemical compound C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N 0.000 description 1
- 229920003043 Cellulose fiber Polymers 0.000 description 1
- 241000282994 Cervidae Species 0.000 description 1
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 206010012310 Dengue fever Diseases 0.000 description 1
- 241000710815 Dengue virus 2 Species 0.000 description 1
- 241000255925 Diptera Species 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical group C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 241000710842 Japanese encephalitis virus Species 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 1
- 208000000112 Myalgia Diseases 0.000 description 1
- 101710144128 Non-structural protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101710144111 Non-structural protein 3 Proteins 0.000 description 1
- 206010029719 Nonspecific reaction Diseases 0.000 description 1
- 101710199667 Nuclear export protein Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Natural products N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000004105 Penicillin G potassium Substances 0.000 description 1
- 101710176384 Peptide 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 206010057293 West Nile viral infection Diseases 0.000 description 1
- 241000710886 West Nile virus Species 0.000 description 1
- 201000004296 Zika fever Diseases 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000002390 adhesive tape Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- IYNDLOXRXUOGIU-LQDWTQKMSA-M benzylpenicillin potassium Chemical compound [K+].N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C([O-])=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 IYNDLOXRXUOGIU-LQDWTQKMSA-M 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 238000009535 clinical urine test Methods 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 208000025729 dengue disease Diseases 0.000 description 1
- 230000030609 dephosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006209 dephosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 239000002563 ionic surfactant Substances 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 150000004706 metal oxides Chemical class 0.000 description 1
- 239000013528 metallic particle Substances 0.000 description 1
- 239000012229 microporous material Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 235000019368 penicillin G potassium Nutrition 0.000 description 1
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002635 polyurethane Polymers 0.000 description 1
- 239000004814 polyurethane Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000010340 saliva test Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011537 solubilization buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 229960002385 streptomycin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54386—Analytical elements
- G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
- G01N33/54388—Immunochromatographic test strips based on lateral flow
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
- C07K16/1081—Togaviridae, e.g. flavivirus, rubella virus, hog cholera virus
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/18—Togaviridae; Flaviviridae
- G01N2333/183—Flaviviridae, e.g. pestivirus, mucosal disease virus, bovine viral diarrhoea virus, classical swine fever virus (hog cholera virus) or border disease virus
- G01N2333/185—Flaviviruses or Group B arboviruses, e.g. yellow fever virus, japanese encephalitis, tick-borne encephalitis, dengue
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
- G01N2469/10—Detection of antigens from microorganism in sample from host
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
1.試料添加部と、標識物質保持部と、検出部を有するクロマトグラフ媒体部と、吸収部とを含む、検体中のジカウイルスを検出するための免疫クロマト分析装置であって、
前記標識物質保持部及び前記検出部が、配列番号1で示されるジカウイルスの非構造性タンパク質であるNS1を認識する抗体を含有する、免疫クロマト分析装置。
2.前記標識物質保持部及び前記検出部の少なくとも一方が、前記非構造性タンパク質であるNS1の全アミノ酸配列中に存在する配列番号2〜4で示される3つのアミノ酸配列のうち、少なくとも1つのアミノ酸配列を認識する抗体を含有する、前記1に記載の免疫クロマト分析装置。
3.前記標識物質保持部及び前記検出部が、前記非構造性タンパク質であるNS1の全アミノ酸配列中に存在する配列番号2〜4で示される3つのアミノ酸配列のうち、少なくとも1つのアミノ酸配列を認識する抗体を含有する、前記2に記載の免疫クロマト分析装置。
4.前記1〜3のいずれか1に記載の免疫クロマト分析装置と、検体を希釈して展開するための検体希釈液とを含む、免疫クロマト分析キット。
5.前記4に記載の免疫クロマト分析キットを用いて、検体中のジカウイルスを検出する免疫クロマト分析方法であって、以下の工程(1)〜(4)を含む免疫クロマト分析方法。
(1)検体希釈液により検体を希釈した検体含有液を試料として、試料添加部に添加する工程
(2)標識物質保持部に保持されているジカウイルスの非構造性タンパクであるNS1を認識する抗体により、検体中のジカウイルスを認識させる工程
(3)前記検体及び前記抗体を移動相としてクロマトグラフ媒体部に展開させる工程
(4)展開された前記移動相中のジカウイルスを、検出部に含まれるジカウイルスの非構造性タンパク質であるNS1を認識する抗体により検出する工程
本発明の免疫クロマト分析装置は、検体中のジカウイルスを検出する。本発明に用いることのできる検体は、ジカウイルスを含む可能性のあるものであれば特に制限されない。具体的には、ジカウイルス感染者の血清、血漿、全血、精液、髄液等が挙げられる。好ましくは、迅速診断の観点から、全血、血清、及び血漿である。
本発明の、ジカウイルスを検出するための免疫クロマト分析装置は、検体を含有する試料(以下、単に試料ともいう)を添加する試料添加部と、標識物質を保持する標識物質保持部と、ジカウイルスを検出する検出部を有するクロマトグラフ媒体部と、検出部を通過した液体を吸収する吸収部とを備え、標識物質保持部及び検出部が、ジカウイルスの非構造性タンパク質であるNS1を認識する抗体を含有することを特徴としている。
本発明の免疫クロマト分析装置に使用する抗体は、ジカウイルスの非構造性タンパク質であるNS1(nonstructural protein NS1,以下単にNS1ともいう)を認識する抗体である。
ジカウイルスのNS1を認識する抗体の作製方法について、以下例示的に説明をする。
次に、図面を参照しながら本発明の免疫クロマト分析装置の一実施形態について説明する。
本発明の免疫クロマト分析キットは、上記の免疫クロマト分析装置と、検体を希釈して展開するための検体希釈液とを含む。
本発明の免疫クロマト分析方法は以下の工程(1)〜(4)を含み、上記の免疫クロマト分析キットを用いて検体に含まれるジカウイルスを検出する。
(1)検体希釈液により検体を希釈した検体含有液を試料として、試料添加部に添加する工程
(2)標識物質保持部に保持されているジカウイルスの非構造性タンパクであるNS1を認識する抗体により、検体中のジカウイルスを認識させる工程
(3)前記検体及び前記抗体を移動相としてクロマトグラフ媒体部に展開させる工程
(4)展開された前記移動相中のジカウイルスを、検出部に含まれるジカウイルスの非構造性タンパク質であるNS1を認識する抗体により検出する工程
各工程について以下に説明する。
工程(1)では、第1に、検体を、測定精度を低下させることなく、免疫クロマトグラフ媒体中をスムーズに移動する程度の濃度に、検体希釈液で調整または希釈して検体含有液とするのが好ましい。検体希釈液は上述したものを使用できる。第2に、検体含有液を試料として、試料添加部(1)上に、所定量(通常、0.1ml〜2ml)滴下する。試料が試料添加部(1)に滴下されると、試料添加部(1)中で移動を開始する。
工程(2)は、工程(1)において試料添加部に添加された試料を、標識物質保持部(2)へと移動させ、標識物質保持部に保持されている、標識物質が結合したジカウイルスのNS1を認識する抗体により、検体中の被検出物質であるジカウイルスを認識させる工程である。標識物質は上述したものを使用できる。
工程(3)は、工程(2)において被検出物質であるジカウイルスが標識物質保持部において標識物質が結合したジカウイルスのNS1を認識する抗体に認識された後、検体および前記抗体を、クロマトグラフ媒体部上を移動相として通過させる工程である。
工程(4)は、クロマトグラフ媒体部上を移動相として通過した検体中のジカウイルスが、抗原・抗体の特異的結合反応により、検出部に固定されているジカウイルスのNS1を認識する抗体と、前記工程(2)において標識物質が結合したジカウイルスのNS1を認識する抗体とによってサンドイッチ状に挟まれるように特異的に反応結合して、検出部が着色する工程である。
ジカウイルスのNS1を認識する抗体を以下のように作製した。
まず、配列番号1で示されるジカウイルスのNS1のアミノ酸配列からなるペプチドを合成した。His−tag発現用ベクターであるpET302/NT−Hisを制限酵素EcoRIで切断した後、脱リン酸化処理としてアルカリフォスファターゼにより処理し、前記ペプチドと混合し、DNA Ligation Kit Ver.2(タカラバイオ)を用いてライゲーション反応をおこなった。
目的遺伝子を組み込んだ組換えNS1プラスミドを組換え蛋白発現用宿主E.coli BL(DE3)pLysS(Novagen)に導入した。導入菌をLB寒天平板培地で培養し、得られたコロニーをLB液体培地で培養した。さらに1mM IPTG(タカラバイオ)を添加して組換えNS1の発現を誘導した後、E.coliを回収した。回収した菌を可溶化バッファー[0.5%Triron X−100(sigma)、10mM Imidazole、20mM Phosphateおよび0.5M NaCl(pH7.4)(Amersham)]に再浮遊し、超音波処理により可溶化した後、組換えNS1をHis trap Kit(Amersham)を用いて精製した。この精製タンパク質をリン酸緩衝生理食塩水(以下、PBSと称する)に対して透析し、目的の組換えNS1とした。
このようにして得られたモノクローナル抗体に対して、組換えNS1を96穴プレートに固定化した直接ELISA法にて抗体をスクリーニングした。
その結果、ジカウイルスのNS1を認識する3種類の抗体が得られた。以下この3種類の抗体を、No.1〜No.3の抗体として説明する。
製造例1で作製したジカウイルスのNS1を認識する各抗体(No.1〜No.3の抗体)が、配列番号2〜4で示される3つのアミノ酸配列のうち、少なくとも1つのアミノ酸配列を認識するか否かについて、ELISA試験を行うことで調べた。ELISA試験で使用したペプチドは、配列番号2〜4で示されるアミノ酸配列それぞれからなるペプチド3種類(下記に示すペプチド1〜3)であり、ペプチドの化学合成法の常法であるペプチド固相合成法により作製した。
ペプチド1:ENGVQLTVVV GSVKNPMWRG PQRLPVPVNE LPHGWKAWGK(配列番号2)
ペプチド2:SYFVRAAKTN NSFVVDGDTL KECPLEHRAW NSF(配列番号3)
ペプチド3:GP LSHHNTREGY RTQVKGPWHS EELEIRFEEC PGTKVYV(配列番号4)
二次抗体として、Anti Mouse IgG(H+L),Rabbit,IgG Whole,Peroxidase Cojugated(和光純薬社製、コード014−17611)1mg/mLを100μL、ウェルに加え、37℃で1.5時間インキュベートした。その後二次抗体溶液を取り除き、ウェルを300μL PBST(0.05% Tween20 in PBS)にて3回ウォッシュし、ウェルに残った液は、ペーパータオルに叩き付けて取り除いた。
ウェルに発色基質としてSure Blue Reserve TMB Microwell Peroxidase Substrate(1−Component)(KPL社製、コード53−00−01)を100μL加え、15分反応させ、2N硫酸を100μL加えて反応を停止させた後、マイクロプレートリーダー(BIORAD社製)で450nmの吸光度を測定した。ブランクと比較して反応が見られたものを+、見られなかったものを−とした。結果を表1に示す。
検体希釈液、及び、試料添加部(1)と、標識物質保持部(2)と、検出部(4)を有するクロマトグラフ媒体(3)と、吸収部(5)とを含む免疫クロマト分析装置からなる免疫クロマト分析キットを作製した。
なお、標識物質保持部が含有する抗体には、上記で作製したNo.1の抗体を使用し、検出部が含有する抗体には、上記で作製したNo.2の抗体を使用した。以下詳細に説明する。
試料添加部としてグラスファイバーからなる不織布(ミリポア社製:300mm×30mm)を用いた。
金コロイド懸濁液(田中貴金属工業社製:LC40nm)0.5mlに、リン酸緩衝液(pH7.4)で0.05mg/mlの濃度になるように希釈した上記No.1抗体を0.1ml加え、室温で10分間静置した。
次いで、1質量%の牛血清アルブミン(BSA)を含むリン酸緩衝液(pH7.4)を0.1ml加え、更に室温で10分間静置した。その後、十分撹拌した後、8000×gで15分間遠心分離を行い、上清を除去した後、1質量%のBSAを含むリン酸緩衝液(pH7.4)を0.1ml加えた。以上の手順で標識物質溶液を作製した。
上記作製した標識物質溶液300μLに、300μLの10質量%トレハロース水溶液と1.8mLの蒸留水を加えたものを12mm×300mmのグラスファイバーパッド(ミリポア社製)に均一になるように添加した後、真空乾燥機にて乾燥させ、標識物質保持部を作製した。
メンブレンとしてニトロセルロースからなるシート(ミリポア社製、商品名:HF120、300mm×25mm)を用いた。
次に、5質量%のイソプロピルアルコールを含むリン酸緩衝液(pH7.4)で1.0mg/mlの濃度になるように、上記No.2抗体を希釈した溶液150μLを、乾燥されたメンブレン上の検出部に1mmの幅でイムノクロマト用ディスペンサー「XYZ3050」(BIODOT社製)を用いて1μL/mmの量(1シートあたり25μL)でライン状に塗布した。
また、金ナノ粒子標識試薬の展開の有無や展開速度を確認するために検出部位の下流に、金ナノ粒子標識物質と広く親和性を有するヤギ由来抗血清をリン酸緩衝液(pH7.4)で希釈した液をコントロール部位(コントロールライン)に塗布した。その後、50℃で30分間乾燥させ、室温で一晩乾燥させ、クロマトグラフ媒体部および検出部を作製した。
次に、バッキングシートからなる基材に、試料添加部、標識物質保持部、検出部を有するクロマトグラフ媒体部、展開した試料や標識物質を吸収するための吸収部としてグラスファイバー製の不織布を順次貼り合わせた。そして、裁断機で幅が5mmとなるように裁断し、免疫クロマト分析装置とした。なお、標識物質保持部の試料展開方向の長さを12mmとした。
1質量%の非イオン性界面活性剤(ナカライテスク社製NP−40と日油社製ノニデットMN−811の1:1混合物)を含む50mMのHEPES緩衝液(pH7.5)を調製し、検体を希釈処理するための検体希釈液とした。
実施例1において、標識物質保持部が含有する抗体を、上記作製したNo.2の抗体とし、検出部が含有する抗体を、上記作製したNo.1の抗体とした点を除いては、実施例1と同様にして、実施例2の免疫クロマト分析キットを作製した。
実施例1において、標識物質保持部が含有する抗体を、上記作製したNo.2の抗体とした点を除いては、実施例1と同様にして、実施例3の免疫クロマト分析キットを作製した。
実施例2において、標識物質保持部が含有する抗体を、上記作製したNo.3の抗体とした点を除いては、実施例2と同様にして、実施例4の免疫クロマト分析キットを作製した。
実施例1において、標識物質保持部が含有する抗体を、上記作製したNo.3の抗体とした点を除いては、実施例1と同様にして、実施例5の免疫クロマト分析キットを作製した。
本試験では、上記作製した実施例1〜5の免疫クロマト分析キットを用い、ジカウイルスNS1組換え抗原を検体として測定を行った。検体としては、Zika Virus NS1 Recombinant Antigen(MeridianLife Science社製)を用い、濃度が5ng/mL、又は20ng/mLとなるように検体希釈液で希釈し、検体含有液を調製し、これを陽性検体試料とした。
上記調製した各検体含有液90μLを免疫クロマト分析装置の試料添加部に滴下し展開させ、15分後にテストラインを目視で確認した。テストラインの赤い線がより強く発色したものを「+++」、赤い線が強く発色したものを「++」、赤い線が発色したものを「+」、赤い線がわずかに発色したものを「±」、赤い線を目視確認できないものを「−」とした。結果を表2に示す。
また、上記陽性検体の代わりにPBS及びヒト標準血清(Access Bio社製)を用いた陰性検体試料を作製し、同様の試験を行った。結果を表2に示す。
本試験では、上記作製した実施例1〜4の免疫クロマト分析キットを用い、不活化したジカウイルスを検体として測定を行った。検体としては、Zika virus Heat inactivated virus(ZeptMetrix社製、原液濃度:TCID50=1×105.23U/mL)を用い、その濃度が原液、10倍希釈、100倍希釈、1000倍希釈となるように、検体希釈液で希釈し、検体含有液を調製した。
調製した検体含有液を試料として、試験例1と同様に測定を行った。結果を表3に示す。
本試験では、上記作製した実施例1〜4の免疫クロマト分析キットを用い、不活化したデングウイルスを検体として測定を行った。検体としては、Dengue Virus type2 AbD(serotec社製)を用い、濃度が1×107pfu/mLとなるように検体希釈液で希釈し、検体含有液を調製した。
調製した検体含有液を試料として、試験例1と同様に測定を行った。結果を表4に示す。
2 標識物質保持部
3 クロマトグラフ媒体部
4 検出部
5 吸収部
6 バッキングシート
Claims (5)
- 試料添加部と、標識物質保持部と、検出部を有するクロマトグラフ媒体部と、吸収部とを含む、検体中のジカウイルスを検出するための免疫クロマト分析装置であって、
前記標識物質保持部及び前記検出部が、配列番号1で示されるジカウイルスの非構造性タンパク質であるNS1を認識する抗体を含有する、免疫クロマト分析装置。 - 前記標識物質保持部及び前記検出部の少なくとも一方が、前記非構造性タンパク質であるNS1の全アミノ酸配列中に存在する配列番号2〜4で示される3つのアミノ酸配列のうち、少なくとも1つのアミノ酸配列を認識する抗体を含有する、請求項1に記載の免疫クロマト分析装置。
- 前記標識物質保持部及び前記検出部が、前記非構造性タンパク質であるNS1の全アミノ酸配列中に存在する配列番号2〜4で示される3つのアミノ酸配列のうち、少なくとも1つのアミノ酸配列を認識する抗体を含有する、請求項2に記載の免疫クロマト分析装置。
- 請求項1〜3のいずれか1項に記載の免疫クロマト分析装置と、検体を希釈して展開するための検体希釈液とを含む、免疫クロマト分析キット。
- 請求項4に記載の免疫クロマト分析キットを用いて、検体中のジカウイルスを検出する免疫クロマト分析方法であって、以下の工程(1)〜(4)を含む免疫クロマト分析方法。
(1)検体希釈液により検体を希釈した検体含有液を試料として、試料添加部に添加する工程
(2)標識物質保持部に保持されているジカウイルスの非構造性タンパクであるNS1を認識する抗体により、検体中のジカウイルスを認識させる工程
(3)前記検体及び前記抗体を移動相としてクロマトグラフ媒体部に展開させる工程
(4)展開された前記移動相中のジカウイルスを、検出部に含まれるジカウイルスの非構造性タンパク質であるNS1を認識する抗体により検出する工程
Priority Applications (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2016098845A JP6452644B2 (ja) | 2016-05-17 | 2016-05-17 | ジカウイルス検出用免疫クロマト分析装置 |
SG11201810029PA SG11201810029PA (en) | 2016-05-17 | 2017-05-17 | Immunochromatography Analysis Device for Detecting Zika Virus |
KR1020187032712A KR20180128971A (ko) | 2016-05-17 | 2017-05-17 | 지카 바이러스 검출용 면역 크로마토그래피 분석 장치 |
US16/301,804 US20190162727A1 (en) | 2016-05-17 | 2017-05-17 | Immunochromatography analysis device for detecting zika virus |
PCT/JP2017/018540 WO2017200008A1 (ja) | 2016-05-17 | 2017-05-17 | ジカウイルス検出用免疫クロマト分析装置 |
EP17799432.4A EP3460475A1 (en) | 2016-05-17 | 2017-05-17 | Immunochromatographic analysis device for detecting zika virus |
PH12018502389A PH12018502389A1 (en) | 2016-05-17 | 2018-11-12 | Immunochromatography analysis device for detecting zika virus |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2016098845A JP6452644B2 (ja) | 2016-05-17 | 2016-05-17 | ジカウイルス検出用免疫クロマト分析装置 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017207335A JP2017207335A (ja) | 2017-11-24 |
JP6452644B2 true JP6452644B2 (ja) | 2019-01-16 |
Family
ID=60325903
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016098845A Active JP6452644B2 (ja) | 2016-05-17 | 2016-05-17 | ジカウイルス検出用免疫クロマト分析装置 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20190162727A1 (ja) |
EP (1) | EP3460475A1 (ja) |
JP (1) | JP6452644B2 (ja) |
KR (1) | KR20180128971A (ja) |
PH (1) | PH12018502389A1 (ja) |
SG (1) | SG11201810029PA (ja) |
WO (1) | WO2017200008A1 (ja) |
Families Citing this family (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP7157061B2 (ja) * | 2017-08-24 | 2022-10-19 | 富士レビオ株式会社 | ジカウイルスを検出する方法及びキット |
KR102015371B1 (ko) * | 2017-12-26 | 2019-08-28 | 주식회사 수젠텍 | 지카 바이러스 진단용 조성물 및 지카 바이러스 진단 방법 |
JP7359390B2 (ja) | 2018-02-09 | 2023-10-11 | 国立大学法人大阪大学 | チクングニアウイルスに対する抗体またはその抗原結合断片、およびその用途 |
JP6906207B2 (ja) * | 2018-02-09 | 2021-07-21 | 国立大学法人大阪大学 | チクングニアウイルス検出用免疫クロマト分析装置 |
JP2019152666A (ja) * | 2018-03-02 | 2019-09-12 | 富士レビオ株式会社 | ジカウイルスを検出する方法及びキット |
JP7055715B2 (ja) * | 2018-07-20 | 2022-04-18 | 富士レビオ株式会社 | ジカウイルス抗原および抗ジカウイルス抗体を検出するための方法およびキット |
US11738079B2 (en) | 2018-07-23 | 2023-08-29 | The University Of Adelaide | Zika virus vaccine |
WO2020061135A1 (en) | 2018-09-18 | 2020-03-26 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Methods and reagents for zika virus immunoassays |
KR20210080410A (ko) * | 2018-10-24 | 2021-06-30 | 오러슈어 테크날러지스, 인코포레이티드 | 변별적인 아이소타입 검출을 위한 측방 유동 분석 |
KR102218517B1 (ko) * | 2019-01-23 | 2021-02-19 | 충북대학교 산학협력단 | 단일클론항체 쌍을 이용한 지카 바이러스의 검출 방법 |
US20220137042A1 (en) * | 2020-11-04 | 2022-05-05 | Signature Science, Llc | Lateral Flow Assay Device And Sampling Methods |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
TWI294036B (en) * | 2005-02-24 | 2008-03-01 | Tzu Chi Buddhist General Hospital | A method for screening compounds against flaviviruses infection by using persistent virus-infected cell systems |
JP5792859B1 (ja) * | 2014-04-04 | 2015-10-14 | 田中貴金属工業株式会社 | 免疫クロマト分析方法 |
-
2016
- 2016-05-17 JP JP2016098845A patent/JP6452644B2/ja active Active
-
2017
- 2017-05-17 SG SG11201810029PA patent/SG11201810029PA/en unknown
- 2017-05-17 WO PCT/JP2017/018540 patent/WO2017200008A1/ja unknown
- 2017-05-17 KR KR1020187032712A patent/KR20180128971A/ko not_active Application Discontinuation
- 2017-05-17 EP EP17799432.4A patent/EP3460475A1/en not_active Withdrawn
- 2017-05-17 US US16/301,804 patent/US20190162727A1/en not_active Abandoned
-
2018
- 2018-11-12 PH PH12018502389A patent/PH12018502389A1/en unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3460475A1 (en) | 2019-03-27 |
WO2017200008A1 (ja) | 2017-11-23 |
KR20180128971A (ko) | 2018-12-04 |
JP2017207335A (ja) | 2017-11-24 |
PH12018502389A1 (en) | 2019-07-15 |
SG11201810029PA (en) | 2018-12-28 |
US20190162727A1 (en) | 2019-05-30 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6452644B2 (ja) | ジカウイルス検出用免疫クロマト分析装置 | |
JP5575377B2 (ja) | 抗rsウイルスモノクローナル抗体を用いたrsウイルス検出用キット及びイムノクロマトグラフィー用試験具、並びに新規な抗rsウイルスモノクローナル抗体 | |
JP6367783B2 (ja) | 水痘帯状疱疹ウイルス検出用免疫クロマト分析装置 | |
JP2017049269A (ja) | マイコプラズマ・ニューモニエ検出用免疫クロマト分析装置 | |
US20080254440A1 (en) | Anti-Sars Virus Antibody, Hybridoma Producing the Antibody and Immunoassay Reagent Using the Antibody | |
JP2024012473A (ja) | Rsウイルスを検出するための検出用試薬又はキット及びrsウイルスを検出する方法 | |
WO2019156248A1 (ja) | チクングニアウイルス検出用免疫クロマト分析装置 | |
JP7051824B2 (ja) | 非特異反応抑制剤 | |
JPWO2005007698A1 (ja) | 抗インフルエンザb型ウイルスモノクローナル抗体及び該抗体を用いる免疫測定器具 | |
JP2006067979A (ja) | インフルエンザa型ウイルスの免疫検出法 | |
JP7274904B2 (ja) | ヒトメタニューモウイルス検出用試薬 | |
WO2020158950A1 (ja) | デングウイルス検出用免疫クロマト分析装置 | |
JP2021092517A (ja) | 免疫測定方法及び免疫測定器具 | |
JP2017096985A (ja) | 水痘帯状疱疹ウイルス検出用免疫クロマト分析装置 | |
JP6462791B2 (ja) | 水痘帯状疱疹ウイルス検出用免疫クロマト分析装置 | |
WO2021095762A1 (ja) | 抗rsウイルスn蛋白質を認識する抗体、並びに該抗体を用いた免疫測定方法及び免疫測定器具 | |
JP6962834B2 (ja) | モノクローナル抗体および非特異反応抑制剤 | |
JP2017088528A (ja) | 水痘・帯状疱疹ウイルスの免疫学的検出 | |
WO2019163922A1 (ja) | モノクローナル抗体および非特異反応抑制剤 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180507 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20181113 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20181211 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6452644 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |