JP6448553B2

JP6448553B2 - 経皮投与用外用剤

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Publication number: JP6448553B2
Application number: JP2015557836A
Authority: JP
Inventors: 祥紀 ▲崎▼山; 倫明金田; ともみ滋野
Original assignee: Maruho Co Ltd
Current assignee: Maruho Co Ltd
Priority date: 2014-01-16
Filing date: 2015-01-14
Publication date: 2019-01-09
Anticipated expiration: 2035-01-14
Also published as: US10894009B2; JPWO2015108045A1; EP3095453A1; US20160374920A1; ES2944263T3; EP3095453A4; WO2015108045A1; EP3095453B1

Description

本発明は、シクロスポリンの経皮吸収性を向上したシクロスポリン外用剤に関する。

シクロスポリンは免疫抑制作用および育毛作用を有する化合物で、乾癬、アトピー性皮膚炎、円形脱毛症などの皮膚疾患に有効であることが知られているが、分子量が約１２００と大きいため、経皮吸収は困難である。また、角質層が動物に比べ分厚いヒト皮膚ではより経皮吸収が困難である。
非特許文献１には、シクロスポリンの局所送達のための複数のビヒクルが検討され、４０％エタノールが最も効率がよかったことが記載されている。
非特許文献２には、ヒマシ油に溶解した０．２％シクロスポリン溶液の経皮投与による円形脱毛症治療効果が記載されている。しかし、ヒマシ油製剤では、シクロスポリンを高濃度で溶解できず、使用感が悪く、また皮膚刺激性の課題もある。
特許文献１には、アルギニン類似一酸化窒素シンターゼ阻害剤を含む育毛料において組み合わせて使用することができる他の育毛効果を有する化合物としてシクロスポリンＡが記載されている。また、非特許文献３及び４には、シクロスポリンＡの局所適用による円形脱毛症治療効果が検討されている。

特開平７−３１６０２３号公報

International Journal of pharmaceutics 311 （2006）182-186 Ann ital dermatol clin sper 42 （1988） 377-382 Lancet 1986 ii 803-804 Transplantation Proceedings Vol XX No 3 Suppl 4 (June) 1988 p.112-113

円形脱毛症は、頭部のみならず毛髪が存在するあらゆる部位に円形から斑状の脱毛班が生じる病態を呈する。病理組織学的には毛包周囲のリンパ球浸潤を特徴とし、本疾患が自己免疫疾患であること、それも局所免疫の異常に基づいた疾患であることが知られている。このような病態・病因を踏まえてシクロスポリンＡ（ＣｙＡ）が円形脱毛症の治療に加えられてきた経緯がある（適応外）。治療では市販の経口剤または注射剤が用いられているが、ＣｙＡをはじめとするカルシニューリン阻害剤の難点は副作用である。それらの全身投与は高血圧、腎機能障害その他多岐にわたる副作用を起こすことが知られている。また、他剤との薬物相互作用を招くおそれがあり、使用が制限される場合がある。
そこで、ＣｙＡを外用化し局所治療を行うことで、この全身性の副作用を軽減し、かつ疾患部位での有効成分濃度を上昇させ、局所で有効性を示すことができると考えられる。
しかし、シクロスポリンは上記のとおり経皮吸収が困難であり、ヒト皮膚に対しても十分な経皮吸収を可能とするシクロスポリン外用剤は知られていなかった。
本発明は、シクロスポリンの経皮吸収性を向上したシクロスポリン外用剤の提供を目的とする。

本発明者らは、上記の課題を解決するため鋭意検討した結果、メチルエチルケトン等のケトン類を含有させることでシクロスポリンの経皮吸収性を向上させることができることを見出した。本発明者らは、かかる知見に基づき、さらに研究を進めて本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、以下の通りである。
［１］シクロスポリン及びケトン類を含有する外用剤。
［２］ケトン類が、メチルエチルケトン、アセトン及びメチルイソブチルケトンからなる群から選択される、上記［１］記載の外用剤。
［３］さらに、エタノールを含有する、上記［１］又は［２］に記載の外用剤。
［４］さらに、脂肪酸エステルを含有する、上記［１］〜［３］のいずれかに記載の外用剤。
［５］脂肪酸エステルが、脂肪酸モノエステル及び中鎖脂肪酸トリグリセリドからなる群から選択される、上記［４］記載の外用剤。
［６］脂肪酸エステルが、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル及びトリ（カプリル酸・カプリン酸）グリセリルからなる群から選択される、上記［４］記載の外用剤。
［７］脂肪酸エステルが、ミリスチン酸イソプロピル及びトリ（カプリル酸・カプリン酸）グリセリルである、上記［４］記載の外用剤。
［８］外用剤が液剤である、上記［１］〜［７］のいずれかに記載の外用剤。
［９］溶解剤として実質的に水を含有しない、上記［１］〜［８］のいずれかに記載の外用剤。
［１０］発毛促進剤である、上記［１］〜［９］のいずれかに記載の外用剤。

本発明の外用剤は、シクロスポリンの経皮吸収性に優れており、特にヒト皮膚に対しても十分な経皮吸収を可能とする。
本発明の外用剤によれば、シクロスポリンの経皮吸収を促進し、皮膚深部まで送達させることができるので、円形脱毛症等の脱毛症、乾癬、アトピー性皮膚炎等の治療を可能とする。
本発明の外用剤は、シクロスポリンの経口投与による高血圧、腎機能障害等の全身性の副作用を軽減し、かつ局所で有効性を示すことができる。
本発明の外用剤は、経皮吸収性に優れ、効率よく、局所に投与することができるので、シクロスポリンの発毛促進等の効果が有効に発揮され、かつ低用量化が可能である。
本発明の外用剤は、保存安定性（主薬安定性、製剤安定性）に優れ、皮膚刺激も少ない。

図１は、試験例１の結果を示す。図２は、試験例２の結果を示す。図３は、試験例３の結果を示す。図４は、試験例４の結果を示す。図５は、試験例５の結果を示す。図６は、試験例６の結果を示す。

本発明の外用剤は、薬物としてシクロスポリンを含有する。
本明細書において、シクロスポリンは、シクロスポリンＡ、シクロスポリンＢ、シクロスポリンＣ、シクロスポリンＤ、シクロスポリンＨ等を包含する概念である。本発明において、シクロスポリンとしては、シクロスポリンＡが好ましい。
本発明の外用剤における、シクロスポリンの含有率は、製剤全量に対して、通常１重量％以上、好ましくは１．２５重量％以上、さらに好ましくは２重量％以上、より好ましくは２．５重量％以上、特に好ましくは５重量％以上である。また、シクロスポリンの含有率は、製剤全量に対して、通常５０重量％以下、好ましくは３０重量％以下、さらに好ましくは１０重量％以下である。
本発明の外用剤における、シクロスポリンの含有率は、製剤全量に対して、通常１〜５０重量％、好ましくは２．５〜３０重量％、さらに好ましくは５〜３０重量％である。また、シクロスポリンの含有率は、製剤全量に対して、１．２５〜１０重量％、２〜１０重量％の態様も挙げられる。

本発明の外用剤は、ケトン類を含有する。本発明において、ケトン類としては、例えば、Ｒ（Ｒ’）Ｃ＝Ｏ（式中、Ｒ及びＲ’はそれぞれ炭素数１〜４のアルキルを示す）で表わされる化合物、具体的には、例えば、メチルエチルケトン、アセトン、メチルイソブチルケトン等が挙げられ、メチルエチルケトンが好ましい。
本発明の外用剤における、ケトン類の含有率は、製剤全量に対して、通常１〜９９重量％、好ましくは５〜９０重量％、より好ましくは１０〜５０重量％、さらに好ましくは１０〜３０重量％である。ケトン類が１重量％より少ないと、経皮吸収性低下の傾向がある。また、局所刺激性の低減の点からはケトン類は５０重量％以下が好ましい。

本発明の外用剤は、エタノールを含有することが好ましい。
本発明において、エタノールとしては無水エタノールが好ましい。無水エタノールとしては、例えば、第十六改正日本薬局方に規定される無水エタノールが挙げられる。
本発明の外用剤における、エタノールの含有率は、製剤全量に対して、通常３〜９０重量％、好ましくは５〜７０重量％、より好ましくは８〜５０重量％、さらに好ましくは１５〜４０重量％である。エタノールが３重量％より少ないと、経皮吸収性低下の傾向がある。また、局所刺激性の低減の点からはエタノールは５０重量％以下が好ましい。

本発明の外用剤は、脂肪酸エステルを含有することが好ましい。脂肪酸エステルは不揮発性基剤として用いられる。
本発明において、脂肪酸エステルとしては、アルコールと、脂肪族モノカルボン酸、脂肪族ジカルボン酸とのエステル等が挙げられる。
脂肪酸エステルとして、脂肪酸モノエステル（例えば、炭素数１〜２２（好ましくは１〜１６、より好ましくは１〜３）の１価アルコール（例えば、メチルアルコール、エチルアルコール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ラウリルアルコール、ミリスチルアルコール、パルミチルアルコール、ステアリルアルコール、イソステアリルアルコール、セトステアリルアルコール、２−ヘキサデシルアルコール、オクチルドデシルアルコール、ベヘニルアルコール）と、炭素数６〜２２（好ましくは１４〜１６）のモノカルボン酸（例えば、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、イソステアリン酸）とのエステル（例えば、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、イソステアリン酸２−ヘキサデシル））；脂肪酸ジエステル（例えば、炭素数２〜２２の２価アルコール（例えば、エチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、ヘキサンジオール、オクタンジオール、ドコサンジオール）と炭素数６〜２２の脂肪酸（例えば、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、イソステアリン酸）とのエステル、または炭素数６〜１０のジカルボン酸（例えば、アジピン酸、セバシン酸）と炭素数１〜２２（好ましくは１〜３）のアルコール（例えば、メチルアルコール、エチルアルコール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ラウリルアルコール、ミリスチルアルコール、パルミチルアルコール、ステアリルアルコール、イソステアリルアルコール、セトステアリルアルコール、２−ヘキサデシルアルコール、オクチルドデシルアルコール、ベヘニルアルコール）とのエステル（例えば、アジピン酸ジイソプロピル、セバシン酸ジエチル、セバシン酸ジイソプロピル））；グリセリン脂肪酸エステル（例えば、グリセリンと炭素数４〜２２の脂肪酸（例えば、酪酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、イソステアリン酸）とのエステル）が挙げられる。
グリセリン脂肪酸エステルとしては、好ましくは中鎖脂肪酸グリセリド、より好ましくは中鎖脂肪酸トリグリセリドであり、中鎖脂肪酸トリグリセリドとしては、炭素数４〜１８（好ましくは８〜１０）の脂肪酸（例えば、コハク酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、リノール酸）とのトリグリセリドが挙げられ、具体的にはトリ（カプリル酸・カプリン酸）グリセリルが挙げられる。中鎖脂肪酸トリグリセリドとして、ミグリオール８１０（トリ（カプリル酸・カプリン酸）グリセリル、ミツバ貿易）を好適に用いることができる。
脂肪酸エステルは、１種または２種以上を組合せて使用することができる。
本発明において、脂肪酸エステルは、脂肪酸モノエステル（特に、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル）、セバシン酸ジエチル、グリセリン脂肪酸エステル（好ましくは、中鎖脂肪酸トリグリセリド（特に、トリ（カプリル酸・カプリン酸）グリセリル））が好ましく、ミリスチン酸イソプロピル又はパルミチン酸イソプロピルがさらに好ましい。

本発明の外用剤における、脂肪酸エステルの含有率は、製剤全量に対して、通常１〜９８重量％、好ましくは３〜５０重量％、より好ましくは５〜３５重量％、さらに好ましくは５〜３０重量％である。
脂肪酸エステルが１重量％より少ないと、患部に塗布した際に、溶解剤として用いるケトン類や低級アルコール類（例えばエタノール）等の揮発により、シクロスポリンが析出する傾向がある。また、局所刺激性の低減の点からは５０重量％以下が好ましい。

本発明の外用剤において、脂肪酸モノエステル（特にミリスチン酸イソプロピル）およびグリセリン脂肪酸エステル（好ましくは、中鎖脂肪酸トリグリセリド（特に、トリ（カプリル酸・カプリン酸）グリセリル））を組合せて使用する場合、脂肪酸モノエステル（特にミリスチン酸イソプロピル）の含有率は、製剤全量に対して、通常２〜９０重量％、好ましくは３〜５０重量％、さらに好ましくは５〜３０重量％であり、グリセリン脂肪酸エステル（好ましくは、中鎖脂肪酸トリグリセリド（特に、トリ（カプリル酸・カプリン酸）グリセリル））の含有率は、製剤全量に対して、通常２〜９０重量％、好ましくは３〜５０重量％、さらに好ましくは５〜３０重量％である。

本発明の外用剤は、シクロスポリンを溶解する溶解剤として、前記のケトン類を用いること（好ましくは、ケトン類と、エタノール及び／又は脂肪酸エステルを用いること）を特徴としている。本発明の外用剤においては、シクロスポリンが該溶解剤に良好に溶解しているので、優れた経皮吸収性を発揮することができる。
本発明の外用剤においては、本発明の効果を阻害しない限り、上記以外の溶解剤（例えば、水、ポリエチレングリコール（例えば、マクロゴール４００）、トリアセチン、オレイルアルコール、２−エチル−１，３−ヘキサンジオール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン、イソプロパノール、軽質流動パラフィン、スクワラン、ジメチルポリシロキサン、サリチル酸エチレングリコール等）を含有していてもよい。本発明の外用剤において、ケトン類、エタノール及び脂肪酸エステル以外の溶解剤の含有量は、溶解剤全体の４０重量％以下が好ましく、２０重量％以下がより好ましく、１０重量％以下がさらに好ましい。ここで、本明細書において溶解剤全体の重量には、溶解剤として作用しない成分（例えば、l-メントール等）の重量は含まない。
本発明の外用剤においては、シクロスポリンの溶解剤への溶解性や経皮吸収性が低下するため、溶解剤全体における水の含有率は、通常４０重量％以下又は３５重量％以下であり、溶解剤として実質的に水を含有しないことが更に好ましい。本明細書において「溶解剤として水を実質的に含有しない」とは、シクロスポリンを溶解する溶解剤全体における水の含有率が通常１０重量％以下、好ましくは５重量％以下、より好ましくは３重量％以下、さらに好ましくは水を含まないことを意味する。溶解剤と水が混和していなければよく、シクロスポリンを溶解したケトン類等の溶解剤を界面活性剤を用い水と乳化し、クリーム剤や乳剤性ローション剤とすることもできる。

本発明の外用剤の剤型としては、例えば、液剤、クリーム剤、ローション剤及びゲル剤が挙げられ、液剤が好ましい。

本発明の外用剤は、上記した他に、外用剤の分野で一般的に使用される添加剤、例えば、界面活性剤、増粘剤、安定化剤、防腐剤、ｐＨ調節剤、香料を含有していてもよい。
本発明の外用剤は、外用剤の製剤の分野で公知の方法で製造することができる。例えば、液剤の場合、メチルエチルケトンと任意に添加してもよい添加剤（無水エタノール、ミリスチン酸イソプロピル、中鎖脂肪酸トリグリセリド、l-メントール等）とを含む混液に、シクロスポリンを溶解して製造することができる。

本発明の外用剤として、シクロスポリン（好ましくはシクロスポリンＡ）２．５〜３０重量％、メチルエチルケトン１０〜３０重量％、エタノール（好ましくは無水エタノール）１０〜３０重量％、ミリスチン酸イソプロピル５〜３０重量％、中鎖脂肪酸トリグリセリド（好ましくはトリ（カプリル酸・カプリン酸）グリセリル）５〜３０重量％を含む液剤が好ましい。
また、シクロスポリン（好ましくはシクロスポリンＡ）２．５〜３０重量％、メチルエチルケトン１０〜３０重量％、エタノール（好ましくは無水エタノール）１０〜３０重量％、ミリスチン酸イソプロピル５〜３０重量％、中鎖脂肪酸トリグリセリド（好ましくはトリ（カプリル酸・カプリン酸）グリセリル）５〜３０重量％、香料（例えば、l-メントール）０．５〜５重量％を含む液剤が好ましい。

本発明の外用剤は、ヒト、哺乳動物（例えば、マウス、ハムスター、モルモット、ラット、ウサギ等のげっ歯類の他、イヌ、ネコ、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ブタ、サル等）に、安全に使用することができる。
本発明の外用剤は、例えば、円形脱毛症（例えば、全身性脱毛症、単発型脱毛症、多発型脱毛症）等の脱毛症、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、痒疹等の治療に有用である。本発明の外用剤は、なかでも、発毛促進剤（特に円形脱毛症に対する発毛促進剤）として有用である。
円形脱毛症は自己免疫を引き金にする。そのため、このような免疫抑制作用と育毛作用とを併せ持つシクロスポリン外用剤は円形脱毛症に有効な治療薬になると考えられる。実際に、前述の非特許文献２〜４や特許文献１では、シクロスポリン経皮投与による発毛効果が示されている。

本発明の外用剤の投与量は、対象疾患、疾患の重篤度などにより異なるが、例えば発毛促進剤として用いる場合、１日２回、１回につきシクロスポリンとして０．１μｇ／ｃｍ^２〜２００μｇ／ｃｍ^２を患部に塗布することができる。

以下に、実施例、比較例、試験例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例、比較例、試験例によって限定されるものではない。
実施例、比較例において、中鎖脂肪酸トリグリセリドとして、ミグリオール８１０（トリ（カプリル酸／カプリン酸）グリセリル、ミツバ貿易）；無水エタノールとして、日本薬局方無水エタノール（甘糟化学産業株式会社）を用いた。

［試験例１］インビトロヘアレスマウス皮膚透過性試験
メチルエチルケトンにシクロスポリンＡを溶解して得た実施例１の液剤、および表１に記載の医薬品添加物として使用実績のある溶解剤にシクロスポリンＡを溶解して得た比較例１〜１０の液剤について、フランツ垂直型拡散セル（縦型フランツセル、レセプター容量：７ｍＬ、有効拡散面積：１．７７ｃｍ^２）を用いてインビトロ皮膚透過性試験を行った。各液剤中のシクロスポリンＡ濃度は、各溶解剤に対するシクロスポリンＡの飽和濃度の１０％とした（表１）。
透過膜として、へアレスマウス皮膚（ラボスキン、Ｈｏｓ−ＨＲ１、オス、７週齢、星野試験動物飼育所）を用い、レセプター液として１％牛血清アルブミン含有ＰＢＳ（ダルベッコＰＢＳ（−）、日水製薬；牛血清アルブミン、ナカライテスク）を用いた。各液剤１０００μＬを透過膜状に塗布し、レセプター液を３２℃に保ちながら撹拌し、経時的にレセプター液５００μＬを分析試料として採取した。
レセプター液中シクロスポリンＡ濃度は、液体クロマトグラフィータンデム型質量分析装置（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）にて定量した。その結果に基づき、製剤−皮膚間の分配係数Ｋを皮膚中シクロスポリンＡ濃度の指標として算出した。分配係数Ｋの算出式は下記の通りである。結果を図１に示す（平均値、ｎ＝３）。

［試験例２］インビトロヘアレスマウス皮膚透過性試験
メチルエチルケトンと、無水エタノール、ミリスチン酸イソプロピル、中鎖脂肪酸トリグリセリドまたはセバシン酸ジエチルとのそれぞれ５０：５０（重量比）の混液にシクロスポリンＡを溶解して得た実施例２〜５の液剤について、試験例１と同様の方法で、皮膚透過性試験を行い、分配係数Ｋを算出した。液剤中のシクロスポリンＡ濃度は、いずれも６．２１６（ｗ／ｖ％）（メチルエチルケトンでのシクロスポリンＡ飽和濃度の１０％）とした（表２）。結果を図２に示す。

［試験例３］インビトロヘアレスマウス皮膚透過性試験
表３に示す成分をそれぞれ混合して得られた実施例６、７、比較例１１、１２の液剤について、各液剤の塗布量を５００μＬとした以外は試験例１と同様の方法で液剤を皮膚に塗布した。液剤塗布から２４時間後、皮膚を清拭し、ヒートセパレーション（６０℃、１分、ドライインキュベーション）により真皮を採取した。
真皮中シクロスポリンＡ濃度は、液体クロマトグラフィータンデム型質量分析装置（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）にて定量した。結果を図３に示す（平均値、ｎ＝３）。

シクロスポリンは皮膚中で効果を発揮することから、経皮吸収性の指標としては皮膚中濃度を用いた。前述の非特許文献１ではエタノール／水系が経皮吸収性に優れたとあるが、実施例６と比較例１１の結果から明らかな通り、メチルエチルケトンを用いた本発明の液剤は、該文献の溶解剤に比較して顕著に経皮吸収性が向上することが示された。また、有機溶剤−水では揮発性が高く、実際の臨床における使用では良好な経皮吸収性を示さないと考えられる。

［試験例４］インビトロヘアレスマウス皮膚透過性試験
表４に示す成分をそれぞれ混合して得られた実施例８〜１０の液剤について、各液剤の塗布量を１０μＬとした以外は試験例３と同様の方法で皮膚透過性試験を行い、真皮中シクロスポリンＡ濃度を定量した。結果を図４に示す（平均値、ｎ＝３）。
溶解剤としてメチルエチルケトン、無水エタノールおよびミリスチン酸イソプロピルを組み合わせた実施例９が特に高い皮膚中濃度を示し、特に経皮吸収性が高いことが示された。

［試験例５］インビトロヒト皮膚透過性試験
比較例１３の液剤（前述の非特許文献２記載ヒマシ油溶解０．２重量％シクロスポリン溶液）、実施例９の液剤、及び表５に示す成分をそれぞれ混合して得られた実施例１１〜１４の液剤について、透過膜として、ヒト死体皮膚（白人男性、背部皮膚、エイチ・エー・ビー研究機構）を用い、各液剤の塗布量を１０μＬとした以外は試験例３と同様の方法で皮膚透過性試験を行い、真皮中シクロスポリンＡ濃度を定量した。
結果を図５に示す（平均値、ｎ＝３）。実施例の液剤では、円形脱毛症に対し効果が認められた比較例１３を上回る経皮吸収性が示された。

［試験例６］インビトロヒト皮膚透過性試験
表６に示す成分をそれぞれ混合して得られた実施例１３、１５〜１７の液剤について、試験例５と同様の方法で、皮膚透過性試験を行い、真皮中シクロスポリンＡ濃度を定量した。結果を図６に示す（平均値、ｎ＝６）。

前述の非特許文献１ではエタノール／水系が経皮吸収性に優れたとあるが、試験例３の実施例６と比較例１１の結果から明らかな通り、メチルエチルケトンを用いた本発明の液剤は、該文献の溶解剤に比較して顕著に経皮吸収性が向上することが示され、試験例５の結果から、メチルエチルケトンを用いた本発明の液剤は、前述の非特許文献２にて円形脱毛症治療効果が報告されているヒマシ油に溶解した０．２重量％シクロスポリン溶液を上回る経皮吸収性が示された。また、有機溶剤−水では揮発性が高く、実際の臨床における使用では良好な経皮吸収性を示さないと考えられる。

［試験例７］安定性試験
実施例１３の液剤について、製剤の主薬残存率（シクロスポリンＡ残存率）、性状および析出物より、製剤安定性を評価した。主薬残存率は、サンプル中の未変化体について、高速液体クロマトグラフィーにて定量した。
主薬残存率は、サンプルを４０℃または６０℃にて保管し、保管後４週、８週および１３週のサンプルを定量した。結果、主薬残存率の低下を認めなかった。また、製剤安定性については、性状は４０℃、析出物は５℃または−５℃にてサンプルを保管し、保管後３週、８週及び１３週のサンプルを、目視および顕微鏡にて確認した。結果、性状変化、析出物は認められなかった。
以上より、実施例１３の液剤の主薬安定性、製剤安定性はいずれも問題がないことが示された。

［試験例８］皮膚刺激性試験
実施例１１、１３および１４の液剤について、ウサギを用いて皮膚累積刺激性を確認した。結果、弱い刺激物に分類され、皮膚刺激性には問題なかった。また、ウサギ眼粘膜刺激性試験においても、これらの液剤は弱い刺激物に分類され、眼粘膜刺激性についても問題なかった。

本発明によれば、シクロスポリンの経皮吸収性を向上したシクロスポリン外用剤の提供が可能である。

本出願は、特願２０１４−００６１６９を基礎としており、その内容は本明細書にすべて包含されるものである。

Claims

シクロスポリン及び式：Ｒ（Ｒ’）Ｃ＝Ｏ（式中、Ｒ及びＲ’はそれぞれ炭素数１〜４のアルキルを示す）で表される化合物を含有する外用剤。
前記式で表される化合物が、メチルエチルケトン、アセトン及びメチルイソブチルケトンからなる群から選択される、請求項１記載の外用剤。
さらに、エタノールを含有する、請求項１又は２に記載の外用剤。
さらに、脂肪酸エステルを含有する、請求項１〜３のいずれかに記載の外用剤。
脂肪酸エステルが、脂肪酸モノエステル及び中鎖脂肪酸トリグリセリドからなる群から選択される、請求項４記載の外用剤。
脂肪酸エステルが、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル及びトリ（カプリル酸・カプリン酸）グリセリルからなる群から選択される、請求項４記載の外用剤。
脂肪酸エステルが、ミリスチン酸イソプロピル及びトリ（カプリル酸・カプリン酸）グリセリルである、請求項４記載の外用剤。
外用剤が液剤である、請求項１〜７のいずれかに記載の外用剤。
溶解剤として実質的に水を含有しない、請求項１〜８のいずれかに記載の外用剤。
発毛促進剤である、請求項１〜９のいずれかに記載の外用剤。