JP6385299B2 - 液体クロマトグラフ用遠紫外吸光度検出装置 - Google Patents
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Description
一例として、第二の光検出器で検出される光の波長幅を4nm以上50nm以下とすることができる。
本実施例では、参照光を測定する光検出器を回折格子の−1次光側に固定配置し、吸光度を測定する例を説明する。
測定開始前に、測定波長及び測定時間を設定する。測定途中で波長を変更する場合には、変更する時刻と変更後の波長を予め設定しておく(S11)。測定波長を変更する時刻は、試料が溶出しておらず、溶離液のみが溶出している時刻とする。次に、吸光度測定を開始し、試料が注入された時刻を0秒とし、測定開始時(0秒)に吸光度が0となるようにオフセットを設定する(S12)。一定時間が経過し、S11で設定した波長変更時刻となったら、波長変更に同期してベースラインを補正し、吸光度が0となるようにオフセットを再度設定する(S13)。複数回波長を変更する時にはS13を繰り返す。設定した測定時間が経過したら測定を終了する(S14)。
実施例に示した液体クロマトグラフ用遠紫外吸光度検出装置を用いて糖分析した例を示す。この測定では、参照光用光検出器を、−1次光側のローランド円上から5mm外側に離れた位置に固定配置した。検出光の波長が185nmのとき、参照光は波長帯170〜200nmの光が参照光用光検出器に入射される位置とした。使用した分析条件を以下に示す。
注入量;6μL
分析カラム;SHODEX製カラム(Asahipak NH2P-50 4E、4.6mm×250mm)
移動相;水25%、アセトニトリル75%の混合溶液
流速;1.0mL/min
検出波長;185nm
次に、実施例に示した液体クロマトグラフ用遠紫外吸光度検出装置を用いてペプチドを分析した例を示す。使用した分析条件を以下に示す。
注入量;10μL
分析カラム;Vydac製カラム(218TP54、4.6mm×250mm)
移動相;水90%、アセトニトリル10%の混合溶液から水60%、アセトニトリル40%の混合溶液へ30分かけて線形に組成を変化させたグラジエント分析。5mMの過塩素酸ナトリウム塩を添加。
流速;1.0mL/min
104 凹面回折格子
106 フローセル
107 検出光用光検出器
108 参照光用光検出器
110 溶離液
111 ポンプ
112 分離カラム
113 廃液容器
114 オートサンプラ
115 密閉容器
120 演算部
121 制御部
910 駆動装置
1030 ビームスプリッタ
Claims (7)
- 遠紫外光を含む光を発する光源、前記光源から発せられた光を分光する回折格子、液体が通過するフローセル、前記回折格子で回折された+1次光の所定の波長を選択して前記フローセルに入射するスリット、前記フローセルを透過した光を検出する第一の光検出器、及び前記回折格子で回折された+1次光以外の光を検出する第二の光検出器を備える光学系と、
前記光学系を真空排気あるいは窒素ガスで置換する機構と、
前記第一の光検出器の出力信号と前記第二の光検出器の出力信号から吸光度を算出する演算部とを有し、
前記第二の光検出器は固定配置されており、
前記演算部は、測定時の波長変更と同期してベースライン補正を行う、液体クロマトグラフ用遠紫外吸光度検出装置。 - 前記回折格子からの光はスリットやビームスプリッタを通過することなく直接前記第二の光検出器に入射する、請求項1記載の液体クロマトグラフ用遠紫外吸光度検出装置。
- 前記第二の光検出器は前記回折格子の−1次光側に固定配置され、前記第二の光検出器で検出される光の波長幅が前記第一の光検出器で検出される光の波長幅より大きい、請求項1に記載の液体クロマトグラフ用遠紫外吸光度検出装置。
- 前記第二の光検出器で検出される光の波長幅が4nm以上50nm以下である、請求項1に記載の液体クロマトグラフ用遠紫外吸光度検出装置。
- 前記光源は前記光学系が窒素ガスで置換された後に点灯される、請求項1に記載の液体クロマトグラフ用遠紫外吸光度検出装置。
- 前記フローセルを通過する液体が水又はアセトニトリル、あるいはその混合物である、請求項1に記載の液体クロマトグラフ用遠紫外吸光度検出装置。
- 前記液体に含まれる塩が過塩素酸ナトリウム又はフッ化ナトリウムである、請求項6に記載の液体クロマトグラフ用遠紫外吸光度検出装置。
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