JP6300735B2 - Glp−1プロドラッグ - Google Patents
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Description
「配列リスト」という表題の配列リストは、561バイトであり、2013年2月11日に作製され、参照により本明細書中に組み込まれている。配列リストの配列番号1は、天然ヒトGLP-1の残基8-37(GLP-1(8-37))と同一である。
Chem.1:
第1の態様において、本発明は、エステル結合を介してGLP-1ペプチドのN末端に付着しているジペプチド伸長部を含むGLP-1ペプチドプロドラッグに関する。このために、GLP-1ペプチドのN末端アミノ酸のα-アミノ基は、ヒドロキシル基によって置き換えられる。ジペプチド伸長部のN末端アミノ酸は、さらにN-アルキル化されている。
Chem.1:
# 1:GLP-1(8-37)
# 2:GLP-1(8-37)_類似体
# マトリックス:EBLOSUM62
# ギャップ_ペナルティ:10.0
# 延長_ペナルティ:0.5
# 長さ:30
# 同一性:28/30(93.3%)
# 類似性:29/30(96.7%)
# ギャップ:0/30(0.0%)
# スコア:142.0
「誘導体」という用語は、GLP-1の状況において本明細書において使用する場合、化学修飾されたGLP-1(8-37)ペプチド(配列番号1)または配列番号1の化学修飾された類似体を意味し、少なくとも1個の置換基は、ペプチドに共有結合的に付着している。置換基はまた、側鎖と称し得る。
a)第1の置換基は、GLP-1(8-37)の18位に相当する位置に付着しており、第2の置換基は、GLP-1(8-37)の31位に相当する位置に付着しており、b)第1の置換基は、GLP-1(8-37)の26位に相当する位置に付着しており、第2の置換基は、GLP-1(8-37)の37位に相当する位置に付着しており、またはc)第1の置換基は、GLP-1(8-37)の18位に相当する位置に付着しており、第2の置換基は、GLP-1(8-37)の26位に相当する位置に付着しており、第1および第2の置換基のそれぞれは、独立に、本明細書における実施形態のいずれかにおいて定義されているような置換基である。第1および第2の置換基は、好ましくは同様、実質的に同様、または同一である。
Chem.5:
本発明の化合物は、薬学的に許容される塩、アミド、またはエステルの形態であり得る。
第1の機能的態様において、GLP-1プロドラッグ化合物は、相当する親薬物の持続放出、したがって、親薬物の延長された作用の持続時間をもたらし、その結果、親薬物の改善された半減期を測定し得る。好ましくは、親薬物のPKプロファイルは、望ましいベル形の形態を有する。
第2の機能的態様によると、本発明のGLP-1プロドラッグに相当するGLP-1親薬物は生物活性があり、すなわちGLP-1活性を有する。上で説明したように、GLP-1親薬物は、本発明のGLP-1プロドラッグのインビボでの転換からもたらされることが予想される薬物である。
また、または代わりに、効力は、任意の適切な動物モデルにおいて、および臨床治験において、当技術分野において公知のようにインビボで決定し得る。糖尿病性db/dbマウスは、適切な動物モデルの一例であり、例えば、WO09/030738の実施例43において記載されているように、このようなマウスにおいてインビボで血中グルコース低下効果を決定し得る。
特定の実施形態において、効力および/または活性は、インビトロの効力、すなわち、機能的GLP-1受容体アッセイにおける性能を意味し、より特に、クローン化ヒトGLP-1受容体を発現している細胞系におけるcAMP形成を刺激する能力を意味する。
第3の機能的態様によると、本発明のGLP-1プロドラッグに相当するGLP-1親薬物は、DPP-IVによる分解に対して安定化している。
第1および第4の機能的態様によると、本発明のGLP-1プロドラッグからのGLP-1親薬物の放出は持続する。それによって、親薬物の作用の延長された持続時間が達成され、結果として、親薬物の改善された半減期を測定し得る。好ましくは、親薬物のPKプロファイルは、望ましいベル形形態を有する。持続放出または延長された作用の持続時間はまた、作用の引き延ばした持続時間、および/または遅延性効果と称してもよい。これは、インビトロ、および/またはインビボでの当技術分野において公知の任意の方法を使用して決定し得る。1つの特定の実施形態において、半減期(T1/2)は、例えば、WO2011/080103の実施例58において記載されている方法を使用して、ラットにおいてi.v.投与後にインビボで決定される。また、または代わりに、他の特定の実施形態において、遅延は、例えば、WO2011/080103の実施例54において記載された方法を使用して、ミニブタにおけるi.v.投与後のインビボでの半減期(T1/2)として決定し得る。本発明のプロドラッグはまた、これらの方法を使用して試験し得る。またさらなる特定の実施形態において、また、または代わりに、本発明のプロドラッグはまた、インビボでの延長された半減期を有する。これは、例えば、本明細書の上記で言及した任意の方法を使用して決定し得る。特定の実施形態において、比較は、相当するプロドラッグ(R1はHである)と共に行い得る。好ましい試験は、本明細書において実施例12に記載されているミニブタi.v.PK実験である。
本発明のGLP-1プロドラッグおよびGLP-1親薬物の構成物であるGLP-1ペプチド、例えば、GLP-1(8-37)(配列番号1)、およびその類似体の生成は、当技術分野で周知である。
本発明のGLP-1プロドラッグまたはGLP-1親薬物を含む医薬組成物、および薬学的に許容される添加剤は、当技術分野で公知のように調製し得る。
本発明はまたは、医薬として使用するための本発明のGLP-1プロドラッグおよび本発明のGLP-1親薬物に関する。
(i)全ての形態の糖尿病、例えば、高血糖症、2型糖尿病、耐糖能異常、1型糖尿病、インスリン非依存性糖尿病、MODY(若年者の成人発症型糖尿病)、妊娠糖尿病の予防および/または治療、ならびに/あるいはHbA1Cの低下;
(ii)糖尿病性疾患の進行(2型糖尿病の進行など)の遅延または予防、耐糖能異常(IGT)からインスリンを必要とする2型糖尿病への進行の遅延、および/またはインスリンを必要としない2型糖尿病からインスリンを必要とする2型糖尿病への進行の遅延;
(iii)β細胞機能の改善、例えば、β細胞のアポトーシスの減少、β細胞機能および/またはβ細胞塊の増加、ならびに/あるいはβ細胞に対するグルコース感受性の回復;
(iv)認知障害の予防および/または治療;
(v)例えば、食物摂取量を減少させ、体重を低下させ、食欲を抑制し、満腹を誘発し;過食障害、神経性過食症、および/または抗精神病剤もしくはステロイドの投与によって誘発される肥満症を治療または予防し;胃運動性を低下させ;かつ/あるいは胃内容物排出を遅延させることによる、摂食障害、例えば、肥満症の予防および/または治療;
(vi)糖尿病性合併症、例えば、末梢性ニューロパシーを含めたニューロパシー;ネフロパシー;あるいは網膜症の予防および/または治療;
(vii)脂質パラメーターの改善、例えば、異脂肪血症の予防および/または治療、総血清脂質の低下;HDLの低下;小さく密なLDLの低下;VLDLの低下:トリグリセリドの低下;コレステロールの低下;HDLの増加;ヒトにおけるリポタンパク質(Lp(a))の血漿レベルの低下;インビトロおよび/またはインビボでのアポリポタンパク質(apo(a))の生成の阻害;
(iix)心血管疾患、例えば、症候群X;アテローム性動脈硬化症;心筋梗塞;冠動脈心疾患;脳卒中、脳虚血;早期心臓疾患もしくは早期心血管疾患、例えば、左室肥大;冠動脈疾患;本態性高血圧症;急性高血圧性緊急症;心筋症;心臓不全;運動耐性;慢性心不全;不整脈;心律動異常;失神;アテローム性動脈硬化症;軽度の慢性心不全;狭心症;心臓バイパス再閉塞;間欠性跛行(閉塞性動脈硬化症);拡張機能障害;および/または収縮機能障害の予防および/または治療;
(ix)胃腸疾患、例えば、炎症性腸症候群;小腸症候群、もしくはクローン病;消化不良;および/または胃潰瘍の予防および/または治療;
(x)重篤疾患の予防および/または治療、例えば、危篤状態の患者、重篤疾患ポリネフロパシー(CIPNP)患者、および/または潜在的CIPNP患者の治療;重篤疾患またはCIPNPの発生の予防;患者における全身性炎症反応症候群(SIRS)の予防、治療および/または治癒;ならびに/あるいは入院の間に菌血症、敗血症、および/または敗血症性ショックを患う患者の可能性の予防または減少のため;ならびに/あるいは
(xi)多嚢胞性卵巣症候群(PCOS)の予防および/または治療。
下記は、本発明の特定の実施形態である。
1.一般式IのGLP-1化合物:
R1-(NHXaa1)-Xaa2-(OHis)-(GLP-1ペプチド)(式I)
[式中、
GLP-1ペプチドは、GLP-1(8-37)(配列番号1)、またはGLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最大で9個のアミノ酸の変化を有するその類似体であり、
R1は、低級アルキルであり、
(NHXaa1)は、アミノ酸であり、
Xaa2は、アミノ酸であり、
(OHis)は、式Chem.1
Chem.1:
またはその薬学的に許容される塩、アミド、もしくはエステル。
2.GLP-1プロドラッグである、実施形態1の化合物。
3.GLP-1エステルプロドラッグである、実施形態1および2のいずれかの化合物。
4.GLP-1デプシペプチドである、実施形態1〜3のいずれかの化合物。
5.Xaa2と(OHis)との間の結合が、エステル結合である、実施形態1〜4のいずれかの化合物。
6.(NHXaa1)とXaa2との間の結合が、アミド結合である、実施形態1〜5のいずれかの化合物。
7.(OHis)と(GLP-1ペプチド)との間の結合が、アミド結合である、実施形態1〜6のいずれかの化合物。
8.R1が、(NHXaa1)のα-アミノ基に付着している、実施形態1〜7のいずれかの化合物。
9.N-末端が、延長されたGLP-1ペプチドである、実施形態1〜8のいずれかの化合物。
10.R1が、1〜6個の炭素原子を有する、実施形態1〜9のいずれかの化合物。
11.R1が、直鎖状アルキルである、実施形態1〜10のいずれかの化合物。
12.R1が、分岐状アルキルである、実施形態1〜10のいずれかの化合物。
13.R1が、メチルである、実施形態1〜11のいずれかの化合物。
14.(NHXaa1)が、Gly、Val、またはIleである、実施形態1〜13のいずれかの化合物。
15.(NHXaa1)が、Glyである、実施形態1〜14のいずれかの化合物。
16.(NHXaa1)が、Valである、実施形態1〜14のいずれかの化合物。
17.(NHXaa1)が、Ileである、実施形態1〜14のいずれかの化合物。
18.Xaa2が、N-アルキル化されたアミノ酸を含まない、実施形態1〜17のいずれかの化合物。
19.Xaa2が、タンパク新生アミノ酸である、実施形態1〜18のいずれかの化合物。
20.Xaa2が、β-分岐状アミノ酸である、実施形態1〜19のいずれかの化合物。
21.Xaa2が、Valである、実施形態1〜20のいずれかの化合物。
22.(OHis)が、Chem.2の式、および/またはL-β-イミダゾール乳酸もしくは(2S)-2-ヒドロキシ-3-(1H-イミダゾール-4-イル)プロピオン酸の名称を有する、実施形態1〜21のいずれかの化合物。
Chem.2:
24.GLP-1ペプチドが、GLP-1(8-37)(配列番号1)である、実施形態1〜23のいずれかの化合物。
25.GLP-1ペプチドが、GLP-1(8-37)(配列番号1)の類似体である、実施形態1〜23のいずれかの化合物。
26.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最大で8個、好ましくは7個のアミノ酸の変化を有する、実施形態25の化合物。
27.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最大で6個のアミノ酸の変化を有する、実施形態25〜26のいずれかの化合物。
28.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最大で5個のアミノ酸の変化を有する、実施形態25〜27のいずれかの化合物。
29.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最大で4個のアミノ酸の変化を有する、実施形態25〜28のいずれかの化合物。
30.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最大で3個のアミノ酸の変化を有する、実施形態25〜29のいずれかの化合物。
31.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最大で2個のアミノ酸の変化を有する、実施形態25〜30のいずれかの化合物。
32.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最大で1個のアミノ酸の変化を有する、実施形態25〜31のいずれかの化合物。
33.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最小で1個のアミノ酸の変化を有する、実施形態25〜32のいずれかの化合物。
34.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最小で2個のアミノ酸の変化を有する、実施形態25〜33のいずれかの化合物。
35.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最小で3個のアミノ酸の変化を有する、実施形態25〜34のいずれかの化合物。
36.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最小で4個のアミノ酸の変化を有する、実施形態25〜35のいずれかの化合物。
37.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最小で5個のアミノ酸の変化を有する、実施形態25〜36のいずれかの化合物。
38.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最小で6個のアミノ酸の変化を有する、実施形態25〜37のいずれかの化合物。
39.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最小で7個のアミノ酸の変化を有する、実施形態25〜38のいずれかの化合物。
40.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最小で8個のアミノ酸の変化を有する、実施形態25〜39のいずれかの化合物。
41.GLP-1ペプチドが、a)式IIIのペプチドを含み;かつ/またはb)任意選択で誘導体化された式IIIのペプチド:
式III:Xaa8-Glu-Gly-Thr-Xaa12-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Xaa31-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Lys-Xaa38
であり、式中、
Xaa8は、Ala、Gly、Val、Leu、Ile、Thr、Ser、Lys、Aib、(1-アミノシクロプロピル)カルボン酸、(1-アミノシクロブチル)カルボン酸、(1-アミノシクロペンチル)カルボン酸、(1-アミノシクロヘキシル)カルボン酸、(1-アミノシクロヘプチル)カルボン酸、または(1-アミノシクロオクチル)カルボン酸であり、
Xaa12は、PheまたはLeuであり、
Xaa16は、ValまたはLeuであり、
Xaa18は、Ser、Val、Lys、またはLeuであり、
Xaa19は、TyrまたはGlnであり、
Xaa20は、LeuまたはMetであり、
Xaa22は、Gly、Glu、またはAibであり、
Xaa23は、Gln、Glu、またはArgであり、
Xaa25は、AlaまたはValであり、
Xaa26は、LysまたはArgであり、
Xaa27は、Lys、Glu、またはLeuであり、
Xaa30は、Ala、Glu、またはArgであり、
Xaa31は、Trp、Lys、またはHisであり、
Xaa33は、Valであり、
Xaa34は、Glu、Asn、Gly、Gln、Arg、またはHisであり、
Xaa35は、GlyまたはAibであり、
Xaa36は、ArgまたはGlyであり、
Xaa37は、Lys、Arg、またはGlyであり、
Xaa38は、Ser、Gly、Ala、Glu、Pro、Arg、または存在しない、実施形態1〜40のいずれかの化合物。
42.GLP-1ペプチドが、1個もしくは2個のみのLysを含み、または1個もしくは2個のみのLys有する、実施形態1〜41のいずれかの化合物。
43.Xaa8が、AlaまたはAibであり、Xaa12が、Pheであり、Xaa16が、Valであり、Xaa18が、SerまたはLysであり、Xaa19が、Tyrであり、Xaa20が、Leuであり、Xaa22が、GlyまたはGluであり、Xaa23が、GlnまたはArgであり、Xaa25が、AlaまたはValであり、Xaa26が、LysまたはArgであり、Xaa27が、LysまたはGluであり、Xaa30が、Alaであり、Xaa31が、TrpまたはLysであり、Xaa33が、Valであり、Xaa34が、GlnまたはArgであり、Xaa35が、Glyであり、Xaa36が、Argであり、Xaa37が、LysまたはGlyであり、Xaa38が、存在しない、実施形態41〜42のいずれかの化合物。
44.Xaa8が、Alaである、実施形態41〜43のいずれかの化合物。
45.Xaa8が、Aibである、実施形態41〜43のいずれかの化合物。
46.Xaa12が、Pheである、実施形態41〜45のいずれかの化合物。
47.Xaa16が、Valである、実施形態41〜46のいずれかの化合物。
48.Xaa18が、Serである、実施形態41〜47のいずれかの化合物。
49.Xaa18が、Lysである、実施形態41〜47のいずれかの化合物。
50.Xaa19が、Tyrである、実施形態41〜49のいずれかの化合物。
51.Xaa20が、Leuである、実施形態41〜50のいずれかの化合物。
52.Xaa22が、Glyである、実施形態41〜51のいずれかの化合物。
53.Xaa22が、Gluである、実施形態41〜51のいずれかの化合物。
54.Xaa23が、Glnである、実施形態41〜53のいずれかの化合物。
55.Xaa23が、Argである、実施形態41〜53のいずれかの化合物。
56.Xaa25が、Alaである、実施形態41〜55のいずれかの化合物。
57.Xaa25が、Valである、実施形態41〜55のいずれかの化合物。
58.Xaa26が、Lysである、実施形態41〜57のいずれかの化合物。
59.Xaa26が、Argである、実施形態41〜57のいずれかの化合物。
60.Xaa27が、Gluである、実施形態41〜59のいずれかの化合物。
61.Xaa27が、Lysである、実施形態41〜59のいずれかの化合物。
62.Xaa30が、Alaである、実施形態41〜61のいずれかの化合物。
63.Xaa31が、Trpである、実施形態41〜62のいずれかの化合物。
64.Xaa31が、Lysである、実施形態41〜62のいずれかの化合物。
65.Xaa33が、Valである、実施形態41〜64のいずれかの化合物。
66.Xaa34が、Glnである、実施形態41〜65のいずれかの化合物。
67.Xaa34が、Argである、実施形態41〜65のいずれかの化合物。
68.Xaa35が、Glyである、実施形態41〜68のいずれかの化合物。
69.Xaa36が、Argである、実施形態41〜68のいずれかの化合物。
70.Xaa37が、Glyである、実施形態41〜69のいずれかの化合物。
71.Xaa37が、Lysである、実施形態41〜69のいずれかの化合物。
72.Xaa38が、存在しない、実施形態41〜71のいずれかの化合物。
73.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較したとき、下記:8Aib、18K、22E、23R、25V、26R、27K、31K、34Rまたは34Q、および/または37Kから選択される少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、位置の付番は、GLP-1(8-37)(配列番号1)を意味する、実施形態25〜72のいずれかの化合物。
74.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)のバリアント(18K、22E、25V、26R、31K、34R)である、実施形態25〜73のいずれかの化合物。
75.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)のバリアント(34R、37K)である、実施形態25〜73のいずれかの化合物。
76.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)のバリアント(18K、22E、34Q)である、実施形態25〜73のいずれかの化合物。
77.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)のバリアント(8Aib、22E、26R、27K、34R)である、実施形態25〜73のいずれかの化合物。
78.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)のバリアント(8Aib、23R、34R)である、実施形態25〜73のいずれかの化合物。
79.GLP-1ペプチドが、a)GLP-1(8-37)(配列番号1)、またはb)実施形態25〜77のいずれかにおいて定義したような類似体、の誘導体である実施形態1〜78のいずれかの化合物。
80.少なくとも1個の置換基が、a)またはb)において定義されているペプチドに共有結合的に付着している、実施形態79の化合物。
81.置換基が、側鎖である、実施形態79〜80のいずれかの化合物。
82.側鎖が、アルブミンと非共有結合的凝集物を形成することができる、実施形態81の化合物。
83.側鎖が、アルブミン結合部分である、実施形態81〜82のいずれかの化合物。
84.アルブミン結合部分が、延長部分および任意選択でリンカーを含む、実施形態83の化合物。
85.アルブミン結合部分、延長部分、またはリンカーが、アシル化によってペプチドのリシン残基に、好ましくはそのεアミノ基に共有結合的に付着している、実施形態83〜84のいずれかの化合物。
86.延長部分が、両方とも任意選択で置換されている、末端または遠位のフェニルまたはフェノキシ基を任意選択で有する、a)脂肪二酸、およびb)脂肪酸から選択される、実施形態84〜85のいずれかの化合物。
87.脂肪酸または脂肪二酸のカルボキシ基が、任意選択でリンカーを介して、好ましくはそのε-アミノ基においてペプチドのリシン残基にアシル化されている、実施形態86の化合物。
88.延長部分が、
Chem.3:HOOC-C6H4-O-(CH2)9-CO-*(式中、好ましくは、HOOC-基は、パラ位にある)である、実施形態85〜87のいずれかの化合物。
89.延長部分が、
Chem.7:HOOC-(CH2)16-CO-*である、実施形態85〜87のいずれかの化合物。
90.アルブミン結合部分が、延長部分に加えて、リンカーを含む、実施形態84〜89のいずれかの化合物。
91.リンカーが、延長部分とペプチドとの間にある、実施形態90の化合物。
92.リンカーが、アシル化によってペプチドのリシン残基に、好ましくはペプチド中のリシン残基のεアミノ基に共有結合的に付着している、実施形態91の化合物。
93.リンカーが、1つまたは複数のリンカー要素を含む、実施形態90〜92のいずれかの化合物。
94.第1のリンカー要素が、式Chem.4:
Chem.4:*-NH-(CH2)2-O-(CH2)2-O-CH2-CO-*によって表し得る、かつ/またはOEGと示し得る、8-アミノ-3,6-ジオキサオクタン酸のジラジカルである、実施形態93の化合物。
95.第2のリンカー要素が、Gluのジラジカル、例えば、γ-Glu、または短くgGluであり、アミノ酸であるグルタミン酸のγカルボキシ基が、別のリンカー要素への、またはリシンのε-アミノ基への接続のために使用される、実施形態93〜94のいずれかの化合物。
96.リンカーが、1つもしくは複数の第1のリンカー要素、および/または1つもしくは複数の第2のリンカー要素を含む、実施形態93〜95のいずれかの化合物。
97.リンカーが、gGlu-2xOEGである、実施形態90〜96のいずれかの化合物。
98.gGluのα-アミノ基が、延長部分のカルボキシ基とアミド結合を形成し、gGluのγカルボキシ基が、OEGのN-末端側終端とアミド結合を形成し、OEGのC末端側終端が、ペプチド中のLys残基のεアミノ基とアミド結合を形成する、実施形態97の化合物。
99.少なくとも1個の置換基が、それぞれ、GLP-1(8-37)(配列番号1)の下記の位置:18位、26位、27位、31位、および/または37位の少なくとも1つに相当する位置においてLys残基のεアミノ基に付着している、実施形態80〜98のいずれかの化合物。
100.26位または27位に付着した1個の置換基を有し、位置の付番が、GLP-1(8-37)を意味する、実施形態99の化合物。
101.26位に付着した1個の置換基を有する、実施形態99の化合物。
102.27位に付着した1個の置換基を有する、実施形態99の化合物。
103.a)18位および31位、b)26位および37位、またはc)18位および26位に付着している2個の置換基を有し、位置の付番は、GLP-1(8-37)を意味し、化合物は好ましくは、a)18位および31位のそれぞれ、b)26位および37位のそれぞれ、またはc)18位および26位のそれぞれに付着している1個の置換基を有する、実施形態99の化合物。
104.GLP-1ペプチドが、下記:
Chem.21a:
Chem.25a:
105.例えば、R1がHである相当する比較化合物と比較して、延長された半減期、好ましくは、インビトロ、またはインビボでの延長された半減期を有する、実施形態1〜104のいずれかの化合物。
106.インビトロでのプロドラッグの半減期が、
a)25mMのリン酸緩衝液(pH7.4);ならびに/または
b)200ulの200mMのリン酸緩衝液(pH7.4)および800ulの血漿の溶液
中で37℃にて測定され、
化合物の濃度が、任意の適切な方法、例えば、UPLCを使用して決定し得る、実施形態105の化合物。
107.プロドラッグの半減期が、例えば、実施例7において全体的に記載されているような、a)緩衝液法および/またはb)血漿法を使用して決定される、実施形態106の化合物。
108.比較化合物の半減期の少なくとも2倍、好ましくは少なくとも3倍、より好ましくは少なくとも4倍、さらにより好ましくは少なくとも5倍、または最も好ましくは少なくとも6倍であるプロドラッグの半減期を有する、実施形態105〜107のいずれかの化合物。
109.その構造において式IIの化合物要素:(HOHis)-(GLP-1ペプチド)(式II)を含み、式中、(HOHis)は、Chem1の(OHis)ラジカルに相当するイミダゾール-乳酸であり、結合、およびGLP-1ペプチドは、上記の実施形態1〜108のいずれかにおいて定義した通りであり、式IIの化合物要素が、GLP-1活性を有する、実施形態1〜108のいずれかの化合物。
110.(HOHis)が、式Chem.1a:
111.(HOHis)が、式Chem.2a:
112.化合物要素が、GLP-1親薬物である、実施形態109〜111のいずれかの化合物。
113.化合物要素のGLP-1活性が、ヒトGLP-1受容体を活性化する能力を意味する、実施形態109〜112のいずれかの化合物。
114.ヒトGLP-1受容体の活性化が、cAMP生成の効力としてインビトロのアッセイにおいて測定される、実施形態113の化合物。
115.化合物要素が、
a)2000pM未満、好ましくは1800pM未満、より好ましくは1600pM未満、さらにより好ましくは1400pM未満、もしくは最も好ましくは1200pM未満;
c)1000pM未満、好ましくは800pM未満、より好ましくは600pM未満、さらにより好ましくは500pM未満、もしくは最も好ましくは400pM未満;または
d)300pM未満、好ましくは250pM未満、より好ましくは200pM未満、さらにより好ましくは150pM未満、もしくは最も好ましくは100pM未満
のEC50に相当する効力を有する、実施形態109〜114のいずれかの化合物。
116.効力が、好ましくは安定的なトランスフェクトされた細胞系、例えば、BHK467-12A(tk-ts13)を使用して、かつ/またはcAMPの決定のために、例えば、内因的に形成されたcAMPと外因的に加えたビオチン標識したcAMPとの間の競合に基づいた機能的受容体アッセイを使用して、ヒトGLP-1受容体を含有する培地におけるcAMPの形成の刺激についてのEC50として決定され、このアッセイにおいて、cAMPはより好ましくは、特異的抗体を使用して捕捉され、かつ/またはさらにより好ましいアッセイが、AlphaScreen cAMPアッセイ、最も好ましくは、実施例8において記載したものである、実施形態114〜115のいずれかの化合物。
117.(式IIの化合物要素のEC50値を、式III:
(His7)-(GLP-1ペプチド)(式III)[式中、(His7)は、GLP-1(8-37)(N-末端Hisによって延長された配列番号1)の7位におけるL-Hisを意味し、結合は、アミド結合であり、GLP-1ペプチドは、化合物におけるものと同じである]の相当する比較薬物のEC50値で割った商)の逆数が、少なくとも0.1、好ましくは少なくとも0.2、より好ましくは少なくとも0.3、さらにより好ましくは少なくとも0.4、または最も好ましくは少なくとも0.5である、実施形態114〜116のいずれかの化合物。
118.化合物要素のGLP-1活性が、全細胞アッセイにおいてヒトGLP-1受容体を活性化する能力を意味する、実施形態113の化合物。
119.化合物要素が、
a)100pM未満、好ましくは50pM未満、より好ましくは40pM未満、さらにより好ましくは35pM未満、もしくは最も好ましくは30pM未満;または
c)25pM未満、好ましくは20pM未満、より好ましくは15pM未満、さらにより好ましくは10pM未満、もしくは最も好ましくは5pM未満
のEC50に相当する効力を有する、実施形態118の化合物。
120.インビトロの効力が、ヒトGLP-1受容体を発現しており、かつプロモーターにカップリングしたcAMP応答配列(CRE)についてのDNAと、ホタルルシフェラーゼ(CREルシフェラーゼ)についての遺伝子とを含有する安定的にトランスフェクトされたBHK細胞系において好ましくは行われるレポーター遺伝子アッセイにおいて、ヒトGLP-1受容体の反応を測定することによって決定される、実施形態118〜119のいずれかの化合物。
121.ヒトGLP-1受容体が活性化されるとき、これによってcAMPの生成がもたらされ、それによってルシフェラーゼタンパク質の発現がもたらされ、アッセイインキュベーションが完了するとき、ルシフェラーゼ基質(ルシフェリン)を加え、酵素によってルシフェリンはオキシルシフェリンに変換され、バイオルミネセンスを生成し、これはアッセイについての読み出し情報である、実施形態120の化合物。
122.アッセイが、実施例9において記載されているように行われる、実施形態121の化合物。
123.化合物要素のGLP-1活性が、低アルブミンの存在下でのヒトGLP-1受容体への結合の能力を意味する、実施形態109〜122のいずれかの化合物。
124.0.005%HSA(低アルブミン)の存在下での化合物要素のGLP-1受容体の結合親和性(IC50)が、
a)1000nM未満、好ましくは500nM未満、より好ましくは100nM未満、もしくは最も好ましくは50nM未満;
b)40nM未満、好ましくは30.0nM未満、またより好ましくは20.0nM未満、さらにより好ましくは10.0nM未満、もしくは最も好ましくは5.00nM未満;または
c)5.0nM未満、好ましくは4.0nM未満、またより好ましくは2.0nM未満、さらにより好ましくは1.0nM未満、もしくは最も好ましくは0.5nM未満である、実施形態123の化合物。
125.GLP-1受容体への結合親和性が、好ましくはSPA結合アッセイを使用して、より好ましくは、実施例10において記載されているようなSPA結合アッセイを使用して、受容体からの125I-GLP-1の移動によって測定される、実施形態123〜124のいずれかの化合物。
126.(式IIの化合物要素のIC50値を、式III:
(His7)-(GLP-1ペプチド)(式III)[式中、(His7)は、GLP-1(7-37)(N-末端Hisによって延長された配列番号1)の7位におけるL-Hisを意味し、結合は、アミド結合であり、GLP-1ペプチドは、化合物におけるものと同じである]の相当する比較薬物のIC50値で割った商)の逆数が、少なくとも0.1、好ましくは少なくとも0.2、より好ましくは少なくとも0.3、さらにより好ましくは少なくとも0.4、または最も好ましくは少なくとも0.5である、実施形態123〜125のいずれかの化合物。
127.化合物要素が、DPP-IV分解に対して安定化している、実施形態109〜126のいずれかの化合物。
128.実施例11において全体的に記載されているような、BSAの添加を伴う、または伴わない、インビトロでのDPP-IVとのインキュベーション後に決定して、
a)少なくとも1000分、好ましくは少なくとも1500分、より好ましくは少なくとも2000分、もしくは最も好ましくは少なくとも2500分の半減期;または
b)少なくとも3000分、もしくは好ましくは少なくとも3500分の半減期
を有する、実施形態127の化合物。
129.ミニブタにおいてi.v.投与されたときに、親薬物について、例えば全体的に、図2において四角によって表される曲線として「ベル形」PKプロファイルをもたらす、実施形態1〜128のいずれかの化合物。
130.Chem.51、Chem.52、Chem.53、Chem.54、Chem.55、およびChem.56から選択される化合物、またはその薬学的に許容される塩、アミドもしくはエステル。
131.その構造が、実施例1、2、3、4、5、および6において示される構造から選択される、好ましくは実施形態80による化合物、またはその薬学的に許容される塩、アミドもしくはエステル。
132.その名称が、実施例1、2、3、4、5、および6の化合物の名称から選択される、好ましくは実施形態80および/または81のいずれかによる化合物、またはその薬学的に許容される塩、アミドもしくはエステル。
133.実施形態1〜129のいずれかにおいて定義したような化合物である、実施形態130〜132のいずれかの化合物。
134.Chem.30、Chem.31、Chem.32、Chem.33、およびChem.34から選択される化合物、またはその薬学的に許容される塩、アミドもしくはエステル。
135.その名称が、実施例1a、1b、2a、3a、および6aの化合物の名称から選択される、好ましくは実施形態134による化合物、またはその薬学的に許容される塩、アミドもしくはエステル。
136.実施形態1〜129のいずれかにおいて定義したような化合物である、実施形態134〜135のいずれかの化合物。
137.Chem.21、Chem.22、Chem.23、Chem.24、およびChem.25から選択される化合物、またはその薬学的に許容される塩、アミドもしくはエステル。
138.GLP-1親薬物である、実施形態137の化合物。
139.配列番号1の下記の類似体:(i)7HOHis、18K、22E、25V、26R、31K、34R;(ii)7HOHis、18K、22E、25V、26R、31K、34R;(iii)7HOHis、34R、37K;(iv)7HOHis、18K、22E、34Q;(v)7HOHis、8Aib、22E、26R、27K、34R;および(vi)7HOHis、8Aib、23R、34Rから選択される、ペプチド配列を含む化合物。
140.(i)〜(vi)から選択されるペプチド配列を有する、実施形態139の化合物。
141.GLP-1(8-37)配列番号1の類似体である、実施形態139〜140のいずれかの化合物。
142.GLP-1活性を有し、GLP-1活性が好ましくは、上記の実施形態109〜126のいずれかにおけるように定義される、実施形態137〜141のいずれかの化合物。
143.DPP-IVによる分解に対して安定化している、実施形態137〜142のいずれかの化合物。
144.延長された半減期を有する、実施形態137〜143のいずれかの化合物。
145.Chem.41(Boc-NMe-Ile-Val-OH)、Chem.42(Boc-NMe-Val-Val-OH)、およびChem.44(Boc-NMe-Gly-Val-OH)から選択される化合物、またはその塩、アミドもしくはエステル。
146.中間化合物である、実施形態145の化合物。
147.Boc-NMe-Ile-Val-OHが、
Chem.41:
148.Boc-NMe-Val-Val-OHが、
Chem.42:
149.Boc-NMe-Ile-Val-OHが、
Chem.41a:
150.Boc-NMe-Val-Val-OHが、
Chem.42a:
151.Boc-NMe-Gly-Val-OHが、
Chem.44:
152.Boc-NMe-Gly-Val-OHが、
Chem.44a:
153.下記から選択される化合物:
2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-5-tert-ブトキシ-4-[10-(4-tert-ブトキシカルボニルフェノキシ)デカノイルアミノ]-5-オキソ-ペンタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]-アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]酢酸;および
Chem.43:
154.上記の実施形態1〜136のいずれかにおいて定義したようなそのプロドラッグを投与することによる、一般式II:(HOHis)-(GLP-1ペプチド)の活性および安定化した親薬物GLP-1化合物、またはその薬学的に許容される塩、アミド、もしくはエステルのインビボでの放出を達成する方法。
155.プロドラッグが、インビボで転換され、長いT1/2を有する活性薬物を放出する、実施形態154の方法。
156.医薬として使用するための、実施形態1〜144のいずれかの化合物。
157.全ての形態の糖尿病および関連する疾患、例えば、摂食障害、心血管疾患、胃腸疾患、糖尿病性合併症、重篤疾患、および/もしくは多嚢胞性卵巣症候群の治療および/もしくは予防において使用するため;ならびに/または脂質パラメーターを改善するため、β-細胞機能を改善するため、ならびに/または糖尿病性疾患の進行を遅延もしくは予防するための、実施形態1〜144のいずれかの化合物。
158.薬学的活性量の実施形態1〜144のいずれかの化合物を投与することによって、全ての形態の糖尿病および関連する疾患、例えば、摂食障害、心血管疾患、胃腸疾患、糖尿病性合併症、重篤疾患、および/もしくは多嚢胞性卵巣症候群を治療もしくは予防するため;ならびに/または脂質パラメーターを改善するため、β-細胞機能を改善するため、ならびに/または糖尿病性疾患の進行を遅延もしくは予防するための方法。
下記は、本発明の特定の実施形態である。
1.一般式IのGLP-1化合物:
R1-(NHXaa1)-Xaa2-(OHis)-(GLP-1ペプチド)(式I)
[式中、
R1は、低級アルキルであり、
(NHXaa1)は、アミノ酸であり、
Xaa2は、アミノ酸であり、
(OHis)は、式Chem.1
Chem.1:
またはその薬学的に許容される塩、アミド、もしくはエステル。
2.GLP-1プロドラッグである、実施形態1の化合物。
3.GLP-1エステルプロドラッグである、実施形態1および2のいずれかの化合物。
4.GLP-1デプシペプチドである、実施形態1〜3のいずれかの化合物。
5.Xaa2と(OHis)との間の結合が、エステル結合である、実施形態1〜4のいずれかの化合物。
6.(NHXaa1)とXaa2との間の結合が、アミド結合である、実施形態1〜5のいずれかの化合物。
7.(OHis)と(GLP-1ペプチド)との間の結合が、アミド結合である、実施形態1〜6のいずれかの化合物。
8.R1が、(NHXaa1)のα-アミノ基に付着している、実施形態1〜7のいずれかの化合物。
9.N-末端が、延長されたGLP-1ペプチドである、実施形態1〜8のいずれかの化合物。
10.R1が、1〜6個の炭素原子を有する、実施形態1〜9のいずれかの化合物。
11.R1が、直鎖状アルキルである、実施形態1〜10のいずれかの化合物。
12.R1が、分岐状アルキルである、実施形態1〜10のいずれかの化合物。
13.R1が、メチルである、実施形態1〜11のいずれかの化合物。
14.(NHXaa1)が、Gly、Val、またはIleである、実施形態1〜13のいずれかの化合物。
15.(NHXaa1)が、Glyである、実施形態1〜14のいずれかの化合物。
16.(NHXaa1)が、Valである、実施形態1〜14のいずれかの化合物。
17.(NHXaa1)が、Ileである、実施形態1〜14のいずれかの化合物。
18.Xaa2が、N-アルキル化されたアミノ酸を含まない、実施形態1〜17のいずれかの化合物。
19.Xaa2が、タンパク新生アミノ酸である、実施形態1〜18のいずれかの化合物。
20.Xaa2が、β-分岐状アミノ酸である、実施形態1〜19のいずれかの化合物。
21.Xaa2が、Valである、実施形態1〜20のいずれかの化合物。
22.(OHis)が、Chem.2の式を有する、実施形態1〜21のいずれかの化合物。
Chem.2:
24.GLP-1ペプチドが、GLP-1(8-37)(配列番号1)またはその類似体である、実施形態1〜23のいずれかの化合物。
25.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最大で6個のアミノ酸の変化を有する、実施形態24の化合物。
26.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最大で5個のアミノ酸の変化を有する、実施形態24の化合物。
27.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最大で4個のアミノ酸の変化を有する、実施形態24の化合物。
28.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最大で3個のアミノ酸の変化を有する、実施形態24の化合物。
29.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最大で2個のアミノ酸の変化を有する、実施形態24の化合物。
30.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最大で1個のアミノ酸の変化を有する、実施形態24の化合物。
31.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最小で1個のアミノ酸の変化を有する、実施形態24の化合物。
32.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最小で2個のアミノ酸の変化を有する、実施形態24の化合物。
33.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最小で3個のアミノ酸の変化を有する、実施形態24の化合物。
34.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最小で4個のアミノ酸の変化を有する、実施形態24の化合物。
35.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最小で5個のアミノ酸の変化を有する、実施形態24の化合物。
36.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最小で6個のアミノ酸の変化を有する、実施形態24の化合物。
37.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)と比較したとき、下記:18K、22E、25V、26R、31K、34Rまたは34Q、および/または37Kから選択される少なくとも1つのアミノ酸置換を含み、位置の付番は、GLP-1(8-37)を意味する、実施形態24〜36のいずれかの化合物。
38.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)のバリアント(18K、22E、25V、26R、31K、34R)である、実施形態24〜37のいずれかの化合物。
39.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)のバリアント(34R、37K)である、実施形態24〜37のいずれかの化合物。
40.類似体が、GLP-1(8-37)(配列番号1)のバリアント(18K、22E、34Q)である、実施形態24〜38のいずれかの化合物。
41.GLP-1ペプチドが、a)GLP-1(8-37)(配列番号1)、またはb)実施形態24〜40のいずれかにおいて定義したような類似体、の誘導体である実施形態1〜23のいずれかの化合物。
42.少なくとも1個の置換基が、a)またはb)において定義されているペプチドに共有結合的に付着している、実施形態41の化合物。
43.置換基が、側鎖である、実施形態41〜42のいずれかの化合物。
44.側鎖が、アルブミンと非共有結合的凝集物を形成することができる、実施形態43の化合物。
45.側鎖が、アルブミン結合部分である、実施形態43〜44のいずれかの化合物。
46.アルブミン結合部分が、延長部分および任意選択でリンカーを含む、実施形態45の化合物。
47.アルブミン結合部分、延長部分、またはリンカーが、アシル化によってペプチドのリシン残基に、好ましくはそのεアミノ基に共有結合的に付着している、実施形態45〜46のいずれかの化合物。
48.延長部分が、両方とも任意選択で置換されている、末端または遠位のフェニルまたはフェノキシ基を任意選択で有する、a)脂肪二酸、およびb)脂肪酸から選択される、実施形態46〜47のいずれかの化合物。
49.脂肪酸または脂肪二酸のカルボキシ基が、任意選択でリンカーを介して、好ましくはそのε-アミノ基においてペプチドのリシン残基にアシル化されている、実施形態48の化合物。
50.延長部分が、
Chem.3:HOOC-C6H4-O-(CH2)9-CO-*(式中、好ましくは、HOOC-基は、パラ位にある)である、実施形態47〜49のいずれかの化合物。
51.アルブミン結合部分が、延長部分に加えて、リンカーを含む、実施形態46〜50のいずれかの化合物。
52.リンカーが、延長部分とペプチドとの間にある、実施形態51の化合物。
53.リンカーが、アシル化によってペプチドのリシン残基に、好ましくはペプチド中のリシン残基のεアミノ基に共有結合的に付着している、実施形態52の化合物。
54.リンカーが、1つまたは複数のリンカー要素を含む、実施形態51〜53のいずれかの化合物。
55.第1のリンカー要素が、式Chem.4:
Chem.4:*-NH-(CH2)2-O-(CH2)2-O-CH2-CO-*によって表し得る、かつ/またはOEGと示し得る、8-アミノ-3,6-ジオキサオクタン酸のジラジカルである、実施形態54の化合物。
56.第2のリンカー要素が、Gluのジラジカル、例えば、γ-Glu、または短くgGluであり、アミノ酸であるグルタミン酸のγカルボキシ基が、別のリンカー要素への、またはリシンのε-アミノ基への接続のために使用される、実施形態54〜55のいずれかの化合物。
57.リンカーが、1つもしくは複数の第1のリンカー要素、および/または1つもしくは複数の第2のリンカー要素を含む、実施形態54〜56のいずれかの化合物。
58.リンカーが、gGlu-2xOEGである、実施形態51〜57のいずれかの化合物。
59.gGluのα-アミノ基が、延長部分のカルボキシ基とアミド結合を形成し、gGluのγカルボキシ基が、OEGのN-末端側終端とアミド結合を形成し、OEGのC末端側終端が、ペプチド中のLys残基のεアミノ基とアミド結合を形成する、実施形態58の化合物。
60.少なくとも1個の置換基が、それぞれ、GLP-1(8-37)(配列番号1)の下記の位置:18位、26位、31位、および/または37位の少なくとも1つに相当する位置においてLys残基のεアミノ基に付着している、実施形態42〜59のいずれかの化合物。
61.a)18位および31位、b)26位および37位、またはc)18位および26位に付着している2個の置換基を有し、位置の付番は、GLP-1(8-37)を意味し、化合物は好ましくは、a)18位および31位のそれぞれ、b)26位および37位のそれぞれ、またはc)18位および26位のそれぞれに付着している1個の置換基を有する、実施形態60の化合物。
62.GLP-1ペプチドが、下記:
Chem.21a:
Chem.23a:
63.例えば、R1がHである相当する比較化合物と比較して、延長された半減期、好ましくは、インビトロ、またはインビボでの延長された半減期を有する、実施形態1〜50のいずれかの化合物。
64.インビトロでのプロドラッグの半減期が、
a)25mMのリン酸緩衝液(pH7.4);ならびに/または
b)200ulの200mMのリン酸緩衝液(pH7.4)および800ulの血漿の溶液
中で37℃にて測定され、
化合物の濃度が、任意の適切な方法、例えば、UPLCを使用して決定し得る、実施形態63の化合物。
65.プロドラッグの半減期が、例えば、実施例7において全体的に記載されているような、a)緩衝液法および/またはb)血漿法を使用して決定される、実施形態64の化合物。
66.比較化合物の半減期の少なくとも2倍、好ましくは少なくとも3倍、より好ましくは少なくとも4倍、さらにより好ましくは少なくとも5倍、または最も好ましくは少なくとも6倍であるプロドラッグの半減期を有する、実施形態63〜65のいずれかの化合物。
67.その構造において式IIの化合物要素:(HOHis)-(GLP-1ペプチド)(式II)を含み、式中、(HOHis)は、Chem1の(OHis)ラジカルに相当するイミダゾール-乳酸であり、結合、およびGLP-1ペプチドは、上記の実施形態1〜66のいずれかにおいて定義した通りであり、式IIの化合物要素が、GLP-1活性を有する、実施形態1〜66のいずれかの化合物。
68.(HOHis)が、式Chem.1a:
69.(HOHis)が、式Chem.2a:
70.化合物要素が、GLP-1親薬物である、実施形態67〜69のいずれかの化合物。
71.化合物要素のGLP-1活性が、ヒトGLP-1受容体を活性化する能力を意味する、実施形態67〜70のいずれかの化合物。
72.ヒトGLP-1受容体の活性化が、cAMP生成の効力としてインビトロのアッセイにおいて測定される、実施形態71の化合物。
73.化合物要素が、
a)2000pM未満、好ましくは1800pM未満、より好ましくは1600pM未満、さらにより好ましくは1400pM未満、もしくは最も好ましくは1200pM未満;
c)1000pM未満、好ましくは800pM未満、より好ましくは600pM未満、さらにより好ましくは500pM未満、もしくは最も好ましくは400pM未満;または
d)300pM未満、好ましくは250pM未満、より好ましくは200pM未満、さらにより好ましくは150pM未満、もしくは最も好ましくは100pM未満
のEC50に相当する効力を有する、実施形態67〜72のいずれかの化合物。
74.効力が、好ましくは安定的なトランスフェクトされた細胞系、例えば、BHK467-12A(tk-ts13)を使用して、かつ/またはcAMPの決定のために、例えば、内因的に形成されたcAMPと外因的に加えたビオチン標識したcAMPとの間の競合に基づいた機能的受容体アッセイを使用して、ヒトGLP-1受容体を含有する培地におけるcAMPの形成の刺激についてのEC50として決定され、このアッセイにおいて、cAMPはより好ましくは、特異的抗体を使用して捕捉され、かつ/またはさらにより好ましいアッセイが、AlphaScreen cAMPアッセイ、最も好ましくは、実施例8において記載したものである、実施形態72〜73のいずれかの化合物。
75.(式IIの化合物要素のEC50値を、式III:
(His7)-(GLP-1ペプチド)(式III)[式中、(His7)は、GLP-1(8-37)(N-末端Hisによって延長された配列番号1)の7位におけるL-Hisを意味し、結合は、アミド結合であり、GLP-1ペプチドは、化合物におけるものと同じである]の相当する比較薬物のEC50値で割った商)の逆数が、少なくとも0.1、好ましくは少なくとも0.2、より好ましくは少なくとも0.3、さらにより好ましくは少なくとも0.4、または最も好ましくは少なくとも0.5である、実施形態72〜74のいずれかの化合物。
76.化合物要素のGLP-1活性が、低アルブミンの存在下でのヒトGLP-1受容体への結合の能力を意味する、実施形態67〜76のいずれかの化合物。
77.0.005%HSA(低アルブミン)の存在下での化合物要素のGLP-1受容体の結合親和性(IC50)が、
a)1000nM未満、好ましくは500nM未満、より好ましくは100nM未満、または最も好ましくは50nM未満;
b)40nM未満、好ましくは30.0nM未満、またより好ましくは20.0nM未満、さらにより好ましくは10.0nM未満、または最も好ましくは5.00nM未満である、実施形態76の化合物。
78.GLP-1受容体への結合親和性が、好ましくはSPA結合アッセイを使用して、より好ましくは、実施例10において記載されているようなSPA結合アッセイを使用して、受容体からの125I-GLP-1の移動によって測定される、実施形態76〜77のいずれかの化合物。
79.(式IIの化合物要素のIC50値を、式III:
(His7)-(GLP-1ペプチド)(式III)[式中、(His7)は、GLP-1(7-37)(N-末端Hisによって延長された配列番号1)の7位におけるL-Hisを意味し、結合は、アミド結合であり、GLP-1ペプチドは、化合物におけるものと同じである]の相当する比較薬物のIC50値で割った商)の逆数が、少なくとも0.1、好ましくは少なくとも0.2、より好ましくは少なくとも0.3、さらにより好ましくは少なくとも0.4、または最も好ましくは少なくとも0.5である、実施形態76〜78のいずれかの化合物。
80.Chem.51、Chem.52、Chem.53、Chem.54、およびChem.55から選択される化合物、またはその薬学的に許容される塩、アミドもしくはエステル。
81.その構造が、実施例1、2、3、4、および5において示される構造から選択される、好ましくは実施形態80による化合物、またはその薬学的に許容される塩、アミドもしくはエステル。
82.その名称が、実施例1、2、3、4、および5の化合物の名称から選択される、好ましくは実施形態80および/または81のいずれかによる化合物、またはその薬学的に許容される塩、アミドもしくはエステル。
83.実施形態1〜79のいずれかにおいて定義したような化合物である、実施形態80〜82のいずれかの化合物。
84.Chem.21、Chem.22、およびChem.23から選択される化合物、またはその薬学的に許容される塩、アミドもしくはエステル。
85.GLP-1親薬物である、実施形態84の化合物。
86.GLP-1活性を有し、GLP-1活性が好ましくは、上記の実施形態67〜79のいずれかにおけるように定義される、実施形態84〜85のいずれかの化合物。
87.DPP-IVによる分解に対して安定化している、実施形態84〜86のいずれかの化合物。
88.延長された半減期を有する、実施形態84〜87のいずれかの化合物。
89.Boc-NMe-Ile-Val-OH、およびBoc-NMe-Val-Val-OHから選択される化合物、またはその塩、アミドもしくはエステル。
90.中間化合物である、実施形態89の化合物。
91.Boc-NMe-Ile-Val-OHが、
Chem.41:
92.Boc-NMe-Val-Val-OHが、
Chem.42:
93.Boc-NMe-Ile-Val-OHが、
Chem.41a:
94.Boc-NMe-Val-Val-OHが、
Chem.42a:
95.医薬として使用するための、実施形態1〜83のいずれかの化合物。
96.全ての形態の糖尿病および関連する疾患、例えば、摂食障害、心血管疾患、胃腸疾患、糖尿病性合併症、重篤疾患、および/もしくは多嚢胞性卵巣症候群の治療および/もしくは予防において使用するため;ならびに/または脂質パラメーターを改善するため、β-細胞機能を改善するため、ならびに/または糖尿病性疾患の進行を遅延もしくは予防するための、実施形態1〜83のいずれかの化合物。
97.薬学的活性量の実施形態1〜83のいずれかの化合物を投与することによって、全ての形態の糖尿病および関連する疾患、例えば、摂食障害、心血管疾患、胃腸疾患、糖尿病性合併症、重篤疾患、および/もしくは多嚢胞性卵巣症候群を治療もしくは予防するため;ならびに/または脂質パラメーターを改善するため、β-細胞機能を改善するため、ならびに/または糖尿病性疾患の進行を遅延もしくは予防するための方法。
98.医薬として使用するための、実施形態84〜88のいずれかの化合物。
99.全ての形態の糖尿病および関連する疾患、例えば、摂食障害、心血管疾患、胃腸疾患、糖尿病性合併症、重篤疾患、および/もしくは多嚢胞性卵巣症候群の治療および/もしくは予防において使用するため;ならびに/または脂質パラメーターを改善するため、β-細胞機能を改善するため、ならびに/または糖尿病性疾患の進行を遅延もしくは予防するための、実施形態84〜88のいずれかの化合物。
100.薬学的活性量の実施形態84〜88のいずれかの化合物を投与することによって、全ての形態の糖尿病および関連する疾患、例えば、摂食障害、心血管疾患、胃腸疾患、糖尿病性合併症、重篤疾患、および/もしくは多嚢胞性卵巣症候群を治療もしくは予防するためするため;ならびに/または脂質パラメーターを改善するため、β-細胞機能を改善するため、ならびに/または糖尿病性疾患の進行を遅延もしくは予防するための方法。
略語の一覧
Aib: α-アミノイソ酪酸
API: 活性医薬成分
AUC: 曲線下面積
BG: 血中グルコース
BHK ベビーハムスター腎臓
BSA: ウシ血清アルブミン
BW: 体重
Boc: t-ブチルオキシカルボニル
BSA: ウシ血清アルブミン
CAS: 化学情報検索サービス機関
CDCl3: 重水素化クロロホルム
コリジン: 2,4,6-トリメチルピリジン
DCM: ジクロロメタン
Dde: 1-(4,4-ジメチル-2,6-ジオキソシクロヘキシリデン)エチル
DesH: デス-アミノヒスチジン(イミダゾプロピオン酸、Impともまた称してよい)
DIC: ジイソプロピルカルボジイミド
DIPEA: ジイソプロピルエチルアミン
DMEM: ダルベッコ変法イーグル培地(DMEM)
DMSO: ジメチルスルホキシド
DPP-IV: ジペプチジルペプチダーゼ-4
EDAC 1-エチル-3-[3-ジメチルアミノプロピル]カルボジイミド塩酸塩
EDTA: エチレンジアミン四酢酸
EGTA: エチレングリコール四酢酸
EtOAc: 酢酸エチル
EtOH: エタノール
FCS: ウシ胎仔血清
Fmoc: 9-フルオレニルメチルオキシカルボニル
HEPES: 4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジンエタンスルホン酸
HOAt: 1-ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾール
HOBt: 1-ヒドロキシベンゾトリアゾール
HPLC: 高速液体クロマトグラフィー
HSA: ヒト血清アルブミン
IBMX: 3-イソブチル-1-メチルキサンチン
Imp: イミダゾプロピオン酸(デス-アミノヒスチジン、DesHともまた称してよい)
i.v. 静脈内
ivDde: 1-(4,4-ジメチル-2,6-ジオキソシクロヘキシリデン)-3-メチルブチル
IVGTT: 静脈内グルコース耐性試験
LCMS: 液体クロマトグラフィー質量分析
LYD: Landrace Yorkshire Duroc
MALDI-MS: MALDI-TOF MSを参照されたい
MALDI-TOF MS: マトリックス支援レーザー脱離/イオン化飛行時間型質量分析
MeOH: メタノール
MES: 2-(N-モルホリノ)エタンスルホン酸
Mmt: 4-メトキシトリチル
MSNT: 1-(メシチレン-2-スルホニル)-3-ニトロ-1,2,4-トリアゾール
Mtt: 4-メチルトリチル
NaOEt: ナトリウムエタノレート
NMP: N-メチルピロリドン
OEG: 8-アミノ-3,6-ジオキサオクタン酸
OtBu: Tert-ブチルエステル
Pbf: 2,2,4,6,7-ペンタメチルジヒドロベンゾフラン-5-スルホニル
PBS: リン酸緩衝生理食塩水
PD: 薬力学
Pen/Strep: ペニシリン/ストレプトマイシン
PK: 薬物動態学
PyBob ベンゾトリアゾール-1-イル-オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
RP: 逆相
RP-HPLC: 逆相高速液体クロマトグラフィー
RT: 室温
Rt: 保持時間
s.c.: 皮下
SD: 標準偏差
SEC-HPLC: サイズ排除高速液体クロマトグラフィー
SEM: 平均の標準誤差
SPA: シンチレーション近接アッセイ
SPPS: 固相ペプチド合成
TBDMS: Tert-ブチルジメチルシリルまたはtert-ブチルジメチルシラン
TBTU: (2-(1H-ベンゾトリアゾール-1-イル-)-1,1,3,3テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート)
tBu: Tert-ブチル
TEA: トリエチルアミン
TFA: トリフルオロ酢酸
TFE: トリフルオロエタノール
THF: テトラヒドロフラン
TIS: トリイソプロピルシラン
TLC: 薄層クロマトグラフィー
TNBS: トリニトロベンゼンスルホネート
Tol トルエン
Tris: トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンまたは2-アミノ-2-ヒドロキシメチル-プロパン-1,3-ジオール
Trt: トリフェニルメチル(トリチル)
Tween20: ポリオキシエチレン(20)モノラウリン酸ソルビタン
UPLC: 超高性能液体クロマトグラフィー
材料および方法
特に明記しない限り、全ての試薬は試薬グレードであった。
材料
L-β-イミダゾール乳酸、(2S)-2-ヒドロキシ-3-(1H-イミダゾール-4-イル)プロパン酸(CAS14403-45-3)
H-Val-OMe.HCl、L-バリンメチルエステル塩酸塩(CAS6306-52-1)
Fmoc-8-アミノ-3,6-ジオキサオクタン酸(CAS166108-71-0)
Fmoc-L-グルタミン酸1-tert-ブチルエステル(CAS84793-07-7)
10-(4-tert-ブトキシカルボニルフェノキシ)デカン酸(WO2006/082204の実施例25、ステップ2において記載しているように調製)
化学的方法
このセクションは、2つに分割される。一般法に関するセクションA(調製(A1);ならびに検出および特性決定(A2))、ならびにいくつかの特定の中間化合物(B1)、親薬物(B2)、およびプロドラッグ(B3)の調製および特性決定が記載されているセクションB。
A、一般の方法
A1、調製方法
このセクションは、固相ペプチド合成のための方法(アミノ酸の脱保護のための方法、樹脂からペプチドを切断する方法、およびその精製の方法を含めた、SPPS法)、ならびにこのように得られたペプチドを検出し特徴付けるための方法(LCMS、MALDI、およびUPLC法)に関する。ペプチドの固相合成は、場合によっては、ジペプチドアミド結合上で酸性条件下にて切断することができる基(これらに限定されないが、2-Fmoc-オキシ-4-メトキシベンジル、または2,4,6-トリメトキシベンジルなど)で保護されたジペプチドを使用することによって改善し得る。セリンまたはトレオニンがペプチド中に存在する場合、疑似プロリンジペプチドを使用し得る(例えば、Novabiochemから入手可能、W.R. Sampson(1999年)、J. Pep. Sci.、5、403をまた参照されたい)。使用されるFmoc保護されたアミノ酸誘導体は、推奨される標準であった:Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、または、Fmoc-Val-OHなど(例えば、Anaspec、Bachem、Iris Biotech、またはNovabiochemから供給)。これ以上特定されない場合、アミノ酸の天然L型を使用する。N末端アミノ酸は、αアミノ基においてBoc保護されていた(例えば、N末端においてHisを有するペプチドについて、Boc-His(Boc)-OH、またはBoc-His(Trt)-OH)。SPPSを使用するモジュールアルブミン結合部分付着の場合、下記の適切に保護された構造単位(これらに限定されないが、Fmoc-8-アミノ-3,6-ジオキサオクタン酸、Fmoc-トラネキサム酸、Fmoc-Glu-OtBu、オクタデカン二酸モノ-tert-ブチルエステル、ノナデカン二酸モノ-tert-ブチルエステル、テトラデカン二酸モノ-tert-ブチルエステル、または4-(9-カルボキシノニルオキシ)安息香酸tert-ブチルエステルなど)を使用した。下記で述べた全ての操作は、250μmolの合成スケールで行った。
方法:SPPS_A
保護されたペプチジル樹脂は、メーカーが供給するFastMoc UVプロトコルの修飾されたバージョンを使用して、Applied Biosystems433ペプチド合成機上でFmoc戦略に従って、4倍過剰なFmoc-アミノ酸で、250μmolスケールにて合成したが、ここではカップリング毎に、4当量のDIC(NMP中1M)および4当量のHOBt(NMP中1M)をアミノ酸バイアルに最初に加え、アミノ酸を10分間事前活性化し、その後、樹脂に加えた。活性化したアミノ酸を添加した後、樹脂を30分間振盪し、この後、4当量のDIPEA(NMP中2M)を加え、反応をさらに30分間続けた。Fmoc基の脱保護は、NMP中の20%ピペリジンおよびUVモニタリングおよびFmoc保護基の脱保護の2-5フィードバックループを伴うメーカーの方法により、場合によっては、二重カップリングを使用したが、これは第1のカップリングの後、樹脂から液体を排出させ、Fmoc-アミノ酸の別のバイアルを活性化させ、樹脂に加えたことを意味する。カップリング時間は、塩基の添加を伴わずに約20分であった。ペプチドC末端アミドの合成のために使用される樹脂は、Rink-アミド樹脂および事前充填Wang(例えば、低充填Fmoc-Gly-WangもしくはFmoc-Lys(Mtt)-wang)、またはカルボキシC末端を有するペプチドについてクロロトリチル樹脂であった。使用された保護されたアミノ酸誘導体は、非天然アミノ酸、例えば、Fmoc-Aib-OH(Fmoc-アミノイソ酪酸)を例外として、ABI433A合成機に適した事前秤量したカートリッジ中で供給される標準的Fmoc-アミノ酸(例えば、Anaspec、またはNovabiochemから供給)であった。N末端アミノ酸を、αアミノ基においてFmocまたはBoc保護した。配列中のリシンのεアミノ基を、アルブミン結合部分およびスペーサーの付着のための経路によって、Mtt、Mmt、Dde、ivDde、またはBocで保護した。ペプチドの合成は、場合によっては、ジペプチドアミド結合上で酸性条件下にて切断することができる基(これらに限定されないが、2-Fmoc-オキシ-4-メトキシベンジル、または2,4,6-トリメトキシベンジルなど)で保護されたジペプチドを使用することによって改善し得る。セリンまたはトレオニンがペプチド中に存在する場合、疑似プロリンジペプチドの使用を使用し得る(例えば、Novobiochem2009/2010からのカタログ、もしくはより新しいバージョン、またはW.R. Sampson(1999年)、J. Pep. Sci.、5、403を参照されたい)。
SPPS法Bは、マイクロ波をベースとするLibertyペプチド合成機(CEM Corp.、North Carolina)上のFmoc化学を使用した、保護されたペプチジル樹脂の合成を意味する。適切な樹脂は、Novabiochemから入手可能な事前充填した低充填Wang樹脂である(例えば、低充填Fmoc-Lys(Mtt)-Wang樹脂、0.35mmol/g)。Fmoc脱保護は、NMP中の5%ピペリジンによって70℃までまたは75℃までで行った。カップリング化学は、NMP中のDIC/HOAtであった。アミノ酸/HOAt溶液(3〜10倍のモル過剰でNMP中0.3M)、それに続いて同じモル当量のDIC(NMP中0.75M)を樹脂に加えた。例えば、下記の量の0.3Mのアミノ酸/HOAt溶液を、下記のスケールの反応のためのカップリング毎に使用した。スケール/ml、0.10mmol/2.5ml、0.25mmol/5ml、1mmol/15ml。カップリング時間および温度は一般に、70℃までまたは75℃までにおいて5分であった。より長いカップリング時間、例えば、10分を、より大きなスケールの反応のために使用した。ヒスチジンアミノ酸を、50℃にて二重カップリングし、または前のアミノ酸に立体障害があった場合(例えば、Aib)、四重カップリングした。アルギニンアミノ酸をRTにて25分間カップリングし、次いで、70℃または75℃に5分間加熱した。これらに限定されないがAibなどのいくつかのアミノ酸を、「二重カップリング」したが、これは最初のカップリング(例えば、75℃で5分)後、樹脂から液体を排出させ、さらなる試薬を加え(アミノ酸、HOAtおよびDIC)、混合物を再び加熱する(例えば、75℃で5分)ことを意味する。リシン側鎖の化学修飾が所望であるとき、リシンをLys(Mtt)として組み込んだ。樹脂をDCMで洗浄し、樹脂を無溶媒(無希釈)ヘキサフルオロイソプロパノールに20分間懸濁させ、それに続き、DCMおよびNMPによって洗浄することによってMtt基を除去した。リシンの化学修飾を、手作業の合成によって、または任意選択で手作業のカップリングを含めた、適切に保護された構造ブロック(一般法を参照されたい)を使用した、上記のようなLibertyペプチド合成機上での1つもしくは複数の自動化ステップによって行った。
SPPS_Pは、Protein Technologies(Tucson、AZ85714、U.S.A.)からのPrelude固相ペプチド合成機で樹脂充填に対して6倍過剰なFmoc-アミノ酸(300mMのHOAtを有するNMP中300mM)、例えば、低充填Fmoc-Gly-Wang(0.35mmol/g)を使用して、250μmolスケールにて行った。NMP中の20%ピペリジンを使用してFmoc脱保護を行った。NMP中の3:3:3:4のアミノ酸/HOAt/DIC/コリジンを使用して、カップリングを行った。脱保護およびカップリングステップの間にNMPおよびDCMのトップ洗浄(7ml、0.5分、それぞれ2×2)を行った。カップリング時間は一般に、60分であった。これらに限定されないが、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Aib-OHまたはBoc-His(Trt)-OHを含めたいくつかのアミノ酸を、「二重カップリング」した。これは、最初のカップリングの後(例えば、60分)、樹脂から液体を排出させ、さらなる試薬を加え(アミノ酸、HOAt、DIC、およびコリジン)、混合物を再び反応させる(例えば、60分)ことを意味する。
N-ε-リシンMtt保護基は、DCM中の0.5%TFAによる1回の処理、それに続く無溶媒(無希釈)ヘキサフルオロイソプロパノールまたはヘキサフルオロイソプロパノール/DCM(75:25)による室温で3回の15分間の処理、それに続く、DCMによる5回の洗浄、それに続く、NMPによる5回の洗浄によって除去した。延長部分(樹脂と比較して4モル当量)を、NMPに溶解した。活性化試薬、例えば、TBTU(樹脂に対して3.88モル当量)およびDIC(樹脂に対して4モル当量)を加え、溶液を15分間撹拌した。溶液を樹脂に加え、DIPEA(樹脂に対して4モル当量)を加えた。樹脂を室温にて2〜24時間振盪した。樹脂をNMPで2回、NMP/DCM(1:1)で2回、およびDCMで2回洗浄した。
方法:CP_M1
合成の後、樹脂をDCMで洗浄し、TFA/TIS/水(95/2.5/2.5または92.5/5/2.5)による2〜3時間の処理、それに続くジエチルエーテルによる沈殿によってペプチドを樹脂から切断した。ペプチドを適切な溶媒(例えば、30%酢酸)に溶解し、アセトニトリル/水/TFAを使用したC18、5μMカラム上の標準的RP-HPLCによって精製した。UPLC、およびLC-MS法の組合せによって画分を分析し、適当な画分をプールし、凍結乾燥した。
この方法は、次のステップ1〜5を含む。
ステップ1.Fmocの除去:
末端Glu上のFmoc保護基を、2分+18分間のNMP中の20%ピペリジンによる処理、それに続くNMPによる6回の洗浄によって除去した。
Fmoc-Ala-OH(樹脂と比較して4モル当量)を、TBTU(3.8当量)、HOBt(4当量)、およびDIPEA(4当量)によって10分間活性化し、次いで、樹脂に加え、2時間または陰性のTNBS試験までカップリングした(W.S. Hancock、J.E. Battersby、Analytical Biochemistry、1976、71(1)、260〜264頁)。樹脂を、NMPで6回およびDCMで10回洗浄した。
2つのε-Lys Mtt保護基を、DCM中の0.5%TFAによる5分間の処理、それに続く無溶媒ヘキサフルオロイソプロパノールによる15分の3回の処理によって除去した。樹脂を、DCMで6回およびNMPで6回洗浄した。TNBS試験は、陽性であった。
ビス-t-ブチル保護された側鎖(2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-5-tert-ブトキシ-4-[10-(4-tert-ブトキシカルボニルフェノキシ)デカノイルアミノ]-5-オキソ-ペンタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]酢酸)(樹脂と比較して4モル当量)をNMPに溶解し、TBTU(3.8当量)、HOBt(4当量)、およびDIPEA(4当量)で15分間事前活性化し、次いで、樹脂に加え、2.5時間またはTNBS試験が透明なビーズを示すまで反応させた。Ala8上のN-末端Fmocを、上記のように除去した。
L-β-イミダゾール乳酸(樹脂と比較して4モル当量)をNMPに溶解し、PyBOB(3.8当量)、HOBt(4当量)、およびTEA(4当量)で10分間活性化し、その後、樹脂に加え、1.5時間カップリングした。
1.LC-MS法
方法:LCMS_4
LCMS_4は、Waters Acquity UPLCシステムおよびMicromassからのLCT Premier XE質量分析計からなる設定において行った。溶離液:A:水中の0.1%ギ酸、B:アセトニトリル中の0.1%ギ酸。分析は、適当な容量の試料(好ましくは、2〜10μl)をAおよびBの勾配で溶出するカラム上に注入することによってRTにて行った。UPLC条件、検出器の設定および質量分析計の設定は、カラム:Waters Acquity UPLC BEH、C-18、1.7μm、2.1mm×50mmであった。勾配:4.0分(代わりに、8.0分)の間、0.4mL/分で直線状の5%〜95%のアセトニトリル。検出:214nm(TUV(Tunable紫外吸光検出器)からの類似体の結果)MSイオン化モード:API-ESスキャン:100〜2000原子質量単位(代わりに、500〜2000原子質量単位)、ステップ0.1原子質量単位。
方法:B2_1
RP-分析は、デュアルバンド検出器を取り付けたWaters UPLCシステムを使用して行った。214nmおよび254nmでのUV検出を、ACQUITY UPLC BEH130、C18、130Å、1.7um、2.1mm×150mmカラム、40℃を使用して集めた。UPLCシステムは、A:99.95%H2O、0.05%TFA;B:99.95%CH3CN、0.05%TFAを含有する2つの溶離液レザバーに接続した。下記の直線勾配を使用した。0.40ml/分の流速で16分に亘り95%A、5%Bから40%A、60%B。
RP-分析は、デュアルバンド検出器を取り付けたWaters UPLCシステムを使用して行った。214nmおよび254nmでのUV検出を、ACQUITY UPLC BEH130、C18、130Å、1.7μm、2.1mm×150mmカラム、40℃を使用して集めた。UPLCシステムを、A:99.95%H2O、0.05%TFA;B:99.95%CH3CN、0.05%TFAを含有する2つの溶離液レザバーに接続した。下記の直線勾配を使用した。0.40mL/分の流速で16分に亘り95%A、5%Bから95%A、5%B。
RP-分析は、デュアルバンド検出器を取り付けたWaters UPLCシステムを使用して行った。215nmおよび254nmでのUV検出を、kinetex1.7u C18、100A、2.1×150mmカラム、60℃を使用して集めた。UPLCシステムを、A:0.045Mの(NH4)2HPO4を有する90%水および10%CH3CN、pH3.6、B:20%2-プロパノール、20%水および60%CH3CNを含有する2つの溶離液レザバーに接続した。下記のステップ勾配を使用した。0.5ml/分の流速で2分に亘り35%Bおよび65%A、次いで、15分に亘り35%B、65%Aから65%B、35%A、次いで、3分に亘り65%B、35%Aから80%B、20%A。
RP-分析は、デュアルバンド検出器を取り付けたWaters UPLCシステムを使用して行った。214nmおよび254nmでのUV検出を、ACQUITY UPLC BEH130、C18、130Å、1.7um、2.1mm×150mmカラム、40℃を使用して集めた。UPLCシステムを、A:99.95%H2O、0.05%TFA;B:99.95%CH3CN、0.05%TFAを含有する2つの溶離液レザバーに接続した。下記の直線勾配を使用した。0.40ml/分の流速および37℃のオートサンプラー温度にて16分に亘り63%A、37%Bから53%A、47%B。
RP-分析は、デュアルバンド検出器を取り付けたWaters UPLCシステムを使用して行った。214nmおよび254nmでのUV検出を、ACQUITY UPLC BEH130、C18、130Å、1.7um、2.1mm×150mmカラム、40℃を使用して集めた。UPLCシステムを、A:99.95%H2O、0.05%TFA;B:99.95%CH3CN、0.05%TFAを含有する2つの溶離液レザバーに接続した。下記の直線勾配を使用した。0.40ml/分の流速および37℃のオートサンプラー温度で、16分に亘り65%A、35%Bから50%A、50%B。
陽子NMRスペクトルは、内部標準としてテトラメチルシランを伴うBrucker Avance DPX400(400MHz)を使用して記録した。化学シフト(δ)はppmで示し、分割パターンは、下記のように示す。s、一重線;d、二重線;dd、二重線の二重線;dt、三重線の二重線;t、三重線;tt、三重線の三重線;q、四重線;quint、五重線;sext、六重線;m、多重線、およびbr=広幅化。
B1.中間化合物
B1.1
(S)-2-(2-ヒドロキシ-アセチルアミノ)-3-メチル-酪酸(N-ヒドロキシアセチル-S-バリン)
L-バリン(5.86g;0.05mmol)を、無水EtOH(150mL)に懸濁させた。新たに調製したNaOEtのEtOH(0.5M、100mL、1当量)溶液を、1時間に亘りRTにて滴下で添加し、それによってバリンはそのNa塩として溶解した。溶液をさらに0.5時間撹拌し、少量の未反応バリンから濾過した。溶液を蒸発させ、バリンのナトリウム塩を白色の粉末として得た。固体を100mLの丸底フラスコに移し、ベンジルグリコレート(25g、0.15mol、3当量)を加え、混合物を85℃で一晩(15時間)撹拌した。フラスコの内容物は、黄色がかった固体として凝固した。エーテル(100mL)を加え、固体を微粉に完全に粉砕した。濾過し、エーテルで4回洗浄し、白色の固体を真空中で直ちに乾燥させた。収量10.1g(概ね100%)。
(S)-2-[2-(tert-ブチル-ジメチル-シラニルオキシ)-アセチルアミノ]-3-メチル-酪酸
実施例B1.1からのN-ヒドロキシアセチル-S-バリン(1.00g、5.74mmol)を、NMP(15mL)に溶解した。TBDMS(2.40g、15.96mmol、2.8当量)を加えた。イミダゾール(2.58g、37.9mmol、6.6当量)を、少しずつ加え、水中で冷却することによって溶液の温度が30℃超に上昇しないように制御した。透明な無色の溶液を、RTにて窒素下で一晩撹拌した。
H2N-Val-O-クロロトリチル樹脂
16gの2-クロロトリチル-樹脂(1.5mmol/g;24mmol)をDCM(150mL)中で45分間膨潤させ、DCMから液体を排出させた。DCM(150mL)中のFmoc-Val-OH(16.29g;48.0mmol)およびDIPEA(20.54mL)の混合物を樹脂に加え、混合物を50分間振盪し、その後、30mLのMeOHを加え、未反応の樹脂をクエンチした。混合物をさらに10分間撹拌し、その後、樹脂から液体を排出させ、DCM(150mL)で1回洗浄した。DCM、MeOH、およびDIPEAの混合物(80:15:5)を樹脂に加え、10分間反応させ、その後、樹脂をDCM(3×)で、それに続いてNMP(3×)で洗浄した。
(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-メチル-ブタノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸(Boc-Val-Val-OH)
実施例B1.3からのH2N-Val-O-クロロトリチル樹脂の1/3(概ね8mmol)をDCM中で膨潤させ、液体を排出させた。Boc-Val-OH(5.52g、24mmol)をNMP(50mL)に溶解し、HOAt(3.26g、24mmol)、それに続いてDIC(3.66mL、24mmol)を加えた。混合物を10分間撹拌し、その後、樹脂に加え、さらに30mLのNMPを加えた。TNBS試験が陰性となるまで、反応物を2時間半撹拌した。樹脂から液体を排出させ、NMP(4×70mL)およびDCM(10×70mL)、それに続いてエーテル(1×100mL)で洗浄した。
(2S)-2-[[(2S)-2-[tert-ブトキシカルボニル(メチル)アミノ]-3-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸(Boc-N-Me-Ile-Val-OH)
実施例B1.3からのH2N-Val-O-クロロトリチル樹脂の1/3(概ね8mmol)をDCM中で膨潤させ、液体を排出させた。Boc-N(Me)Ile-OH(5.88g、24mmol)をNMP(50mL)に溶解し、HOAt(3.26g、24mmol)、それに続いてDIC(3.66mL、24mmol)を加えた。混合物を10分間撹拌し、その後、樹脂に加え、さらに30mLのNMPを加えた。TNBS試験が陰性となるまで、反応物を2時間半撹拌した。樹脂から液体を排出させ、NMP(4×70mL)およびDCM(10×70mL)、それに続いてエーテル(1×100mL)で洗浄した。
(2S)-2-[[2-[tert-ブトキシカルボニル(メチル)アミノ]アセチル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸(Boc-N-Me-Gly-Val-OH)
実施例B1.3からのH2N-Val-O-クロロトリチル樹脂の1/3(概ね8mmol)をDCM中で膨潤させ、液体を排出させた。Boc-N(Me)Gly-OH(4.54g、24mmol)をNMP(50mL)に溶解し、HOAt(3.26g、24mmol)、それに続いてDIC(3.66mL、24mmol)を加えた。混合物を10分間撹拌し、その後、樹脂に加え、さらに30mLのNMPを加えた。TNBS試験が陰性となるまで、反応物を2時間半撹拌した。樹脂から液体を排出させ、NMP(4×70mL)およびDCM(10×70mL)、それに続いてエーテル(1×100mL)で洗浄した。
(2S)-2-[[2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)アセチル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸(Boc-Gly-Val-OH)
Boc-Gly-OH(5.80g、33.11mmol)、EDAC(6.98g、36.4mmol、1.1当量)およびH-Val-OMe.HCl(4.78g、36.4mmol、1.1当量)をTHF(50mL)に溶解し、透明な溶液が得られるまでDCMを加えた。20分の撹拌の後、DIPEA(4.89mL、28.5mmol、2.5当量)を加え、混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をEtOAc(100mL)に溶解した。有機相をKHSO4水溶液(100mL、1M)で洗浄し、水相をEtOAc(100mL)で逆抽出した。合わせた有機相を10%NaHCO3(水溶液)(1×100mL)およびブライン(1×100mL)で洗浄し、MgSO4上で乾燥させた。溶媒をロータリーエバポレーター上で除去し、Boc-Gly-Val-OMeが淡黄色の油として残った。収量:8.0g(84%)。
(2S)-2-[[(2S)-2-[tert-ブトキシカルボニル(メチル)アミノ]-3-メチル-ブタノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸(Boc-N-Me-Val-Val-OH)
実施例B1.3におけるように作製したH2N-Val-O-クロロトリチル樹脂(約5.4mmol)をDCM中で膨潤させ、液体を排出させた。Boc-N(Me)Val-OH(5.55g、24mmol)をNMP(50mL)に溶解し、HOAt(3.26g、24mmol)、それに続いてDIC(3.66mL、24mmol)を加えた。混合物を10分間撹拌し、その後、樹脂に加え、さらに30mLのNMPを加えた。TNBS試験が陰性となるまで、反応物を2時間半撹拌した。樹脂から液体を排出させ、NMP(4×70mL)およびDCM(10×70mL)、それに続いてエーテル(1×100mL)で洗浄した。
(2S)-2-[[(2S)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-3-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-メチル-ブタン酸(Boc-Ile-Val-OH)
実施例B1.3におけるように作製したH2N-Val-O-クロロトリチル樹脂(約5.4mmol)をDCM中で膨潤させ、液体を排出させた。Boc-Ile-OH(5.55g、24mmol)をNMP(50mL)に溶解し、HOAt(3.26g、24mmol)、それに続いてDIC(3.66mL、24mmol)を加えた。混合物を10分間撹拌し、その後、樹脂に加え、さらに30mLのNMPを加えた。TNBS試験が陰性となるまで、反応物を2時間半撹拌した。樹脂から液体を排出させ、NMP(4×70mL)およびDCM(10×70mL)、それに続いてエーテル(1×100mL)で洗浄した。
2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-5-tert-ブトキシ-4-[10-(4-tert-ブトキシカルボニルフェノキシ)デカノイルアミノ]-5-オキソ-ペンタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]-アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]酢酸
Chem.43:
B2.1
Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[10-(4-カルボキシフェノキシ)デカノイルアミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]、Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[10-(4-カルボキシフェノキシ)デカノイルアミノ]-ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]、Nα8-{3-[(2S)-2-ヒドロキシ-3-(1H-イミダゾール-4-イル)プロパノイル}-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Gln34]-GLP-1-(8-37)-ペプチド
Chem.21:
LCMS法:LCMS_4:Rt:3.62分;正確な質量:4914.495Da;M/5:983.74;M/4:1229.41;M/3:1639.19
UPLC法:B4_1:Rt=8.42分
UPLC法:B29_1:Rt=11.12分
Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[10-(4-カルボキシフェノキシ)デカノイルアミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]、Nε37-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[10-(4-カルボキシフェノキシ)デカノイルアミノ]-ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]、Nα8-{3-[(2S)-2-ヒドロキシ-3-(1H-イミダゾール-4-イル)プロパノイル}-[Arg34,Lys37]-GLP-1-(8-37)-ペプチド
Chem.22:
LCMS法:LCMS_4:Rt:2.27分;正確な質量:4872.416Da;M/4:1219.43;M/3:1625.52
UPLC法:B4_1:Rt=8.75分
UPLC法:B29_1:Rt=11.86分
Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[10-(4-カルボキシフェノキシ)デカノイルアミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]、Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[10-(4-カルボキシフェノキシ)デカノイルアミノ]-ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]、Nα8-{3-[(2S)-2-ヒドロキシ-3-(1H-イミダゾール-4-イル)プロパノイル}-[Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(8-37)-ペプチド
Chem.23:
LCMS法:LCMS_4:Rt:2.37分;正確な質量:4886.384Da;M/4:1222.92、M/3:1630.50
UPLC法:B4_1:Rt=8.93分
UPLC法:B29_1:Rt=12.36分
Nε27[(S)-(22,40-ジカルボキシ-10,19,24-トリオキソ-3,6,12,15-テトラオキサ-9,18,23-トリアザテトラコンタン-1-オイル)]-Nα8-{3-[(2S)-2-ヒドロキシ-3-(1H-イミダゾール-4-イル)プロパノイル}-[Aib8,Glu22,Arg26,Lys27,Arg34]-GLP-1-(8-37)-ペプチド
Chem.24:
完全に保護された[Glu22、Arg26、Lys27、Arg34]-GLP-1-(9-37)-ペプチドを、一般法SPPS_BによってFmoc-Gly Wang LL樹脂上で合成し、N末端においてFmoc保護されたGlu残基が残った。
ε-Lys Mtt保護基を、DCM中の0.5%TFAによる5分間の処理、それに続く、無溶媒ヘキサフルオロイソプロパノールによる15分の3回の処理によって除去した。樹脂を、DCMで6回およびNMPで6回洗浄した。TNBS試験は、陽性であった。
ビス-t-ブチル保護された側鎖(17-((S)-1-tert-ブトキシカルボニル-3-{2-[-2-({2-[2-(2,5-ジオキソピロリジン-1-イルオキシカルボニルメトキシ)エトキシ]エチルカルバモイル}メトキシ)エトキシ]エチルカルバモイル}プロピルカルバモイル)ヘプタデカン酸tert-ブチルエステル)(樹脂と比較して4モル当量)をNMPに溶解し、TBTU(3.8当量)、HOBt(4当量)、およびDIPEA(4当量)で15分間事前活性化し、次いで、樹脂に加え、一晩またはTNBS試験が透明なビーズを示すまで反応させた。
末端Glu上のFmoc保護基を、2分+18分間のNMP中の20%ピペリジンによる処理、それに続くNMPによる6回の洗浄によって除去した。
Fmoc-Aib-OH(樹脂と比較して4モル当量)をNMPに溶解し、Oxyma(4.0当量)、DIC(4当量)で15分間活性化し、次いで、樹脂に加え、陰性のTNBS試験まで一晩カップリングした。樹脂を、NMPで6回およびDCMで10回洗浄した。
L-β-イミダゾール乳酸(樹脂と比較して4モル当量)をNMPに溶解し、PyBOB(3.8当量)、HOBt(4当量)、およびTEA(4当量)で10分間活性化し、その後、樹脂に加え、1.5時間カップリングした。カップリングを、3回繰り返した。
LCMS法:LCMS_4:Rt:2.25分;正確な質量:4211.179Da;M/4:1053.78、M/3:1404.74
UPLC法:B4_1:Rt=8.73分
UPLC法:B29_1:Rt=14.56分
Nε26[(S)-(22,40-ジカルボキシ-10,19,24-トリオキソ-3,6,12,15-テトラオキサ-9,18,23-トリアザテトラコンタン-1-オイル)]-Nα8-{3-[(2S)-2-ヒドロキシ-3-(1H-イミダゾール-4-イル)プロパノイル}-[Aib8,Arg23,Arg34]-GLP-1-(8-37)-ペプチド
Chem.25:
完全に保護されたAib8、Arg23、Arg34]-GLP-1-(8-37)-ペプチドを、一般法SPPS_PによってFmoc-Gly Wang LL樹脂上で合成し、N末端においてFmoc保護されたAib残基が残った。
末端Glu上のFmoc保護基を、NMP中の20%ピペリジンによる2分+18分間の処理、それに続くNMPによる6回の洗浄によって除去した。
L-β-イミダゾール乳酸(樹脂と比較して4モル当量)をNMPに溶解し、PyBOB(3.8当量)、HOBt(4当量)、およびTEA(4当量)で10分間活性化し、その後、樹脂に加え、1.5時間カップリングした。カップリングを2回繰り返した。
樹脂をNMPおよびDCMで洗浄し、TFA/TIS/水(95:2.5:2.5)による2.5時間の処理、それに続くジエチルエーテルによる粗ペプチドの沈殿によってペプチドを樹脂から切断した。
粗ペプチドを水に溶解し、ペプチドの完全な溶解およびpH10.6までNaOH(1N、水溶液)を滴下で添加した。
ペプチドを、アセトニトリル/水/TFAを使用したC18、5μMカラム上の標準的RP-HPLCによって精製した。画分をUPLC、およびLC-MS法の組合せによって分析し、適当な画分をプールし、凍結乾燥した。
LCMS法:LCMS_4:Rt:2.22分;正確な質量:4140.142Da;M/4:1036.03、M/3:1381.36
UPLC法:B4_1:Rt=8.80分
UPLC法:B29_1:Rt=14.76分
(実施例1)
Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[10-(4-カルボキシフェノキシ)デカノイルアミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]、Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[10-(4-カルボキシフェノキシ)デカノイルアミノ]-ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]、Nα8-{(2S)-3-(1H-イミダゾール-4-イル)-2-[(2S)-3-メチル-2-[[2-(メチルアミノ)アセチル]アミノ]ブタノイル]オキシ-プロパノイル}-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Gln34]-GLP-1-(8-37)-ペプチド
Chem.51:
LCMS法:LCMS_4:Rt:2.05分;正確な質量:5082.585Da;M/5:1017.75;M/4:1271.98
UPLC法:B4_1:Rt=8.09分
UPLC法:B29_1:Rt=11.20分
Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[10-(4-カルボキシフェノキシ)デカノイルアミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]、Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[10-(4-カルボキシフェノキシ)デカノイルアミノ]-ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]、Nα8-{(2S)-2-[(2S)-2-[(2-アミノアセチル)アミノ]-3-メチル-ブタノイル]オキシ-3-(1H-イミダゾール-4-イル)プロパノイル}-}-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Gln34]-GLP-1-(8-37)-ペプチド。
Chem.30:
LCMS法:LCMS_4:Rt:2.36分;正確な質量:5068.5696Da;M/5:1014.97;M/4:1268.46。
UPLC法:B4_1:Rt=9.35分
UPLC法:B29_1:Rt=9.10分
Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[10-(4-カルボキシフェノキシ)デカノイルアミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]、Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[10-(4-カルボキシフェノキシ)デカノイルアミノ]-ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]、Nα8-{(2S)-2-[(2S)-2-[(2-ヒドロキシアセチル)アミノ]-3-メチル-ブタノイル]オキシ-3-(1H-イミダゾール-4-イル)プロパノイル}-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Gln34]-GLP-1-(8-37)-ペプチド。
Chem.31:
LCMS法:LCMS_4:Rt:3.67分;正確な質量:5071.569Da;M/4:1268.71;M/3:1692.23
UPLC法:B4_1:Rt=8.69分
UPLC法:B29_1:Rt=9.51分
Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[10-(4-カルボキシフェノキシ)デカノイルアミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]、Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[10-(4-カルボキシフェノキシ)デカノイルアミノ]-ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]、Nα8-{(S)-3-(1H-イミダゾール-4-イル)-2-[(S)-3-メチル-2-((S)-3-メチル-2-メチルアミノ-ブチリルアミノ)-ブチリルオキシ]-プロピオニル}-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Gln34]-GLP-1-(8-37)-ペプチド
Chem.52:
LCMS法:LCMS_4:Rt:2.12分;正確な質量:5124.632Da;M/5:1025.93;M/4:1282.15
UPLC法:B4_1:Rt=8.07分
Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[10-(4-カルボキシフェノキシ)デカノイルアミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]、Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[10-(4-カルボキシフェノキシ)デカノイルアミノ]-ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]、Nα8-{(2S)-2-[(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-メチル-ブタノイル]アミノ]-3-メチル-ブタノイル]オキシ-3-(1H-イミダゾール-4-イル)プロパノイル}-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Gln34]-GLP-1-(8-37)-ペプチド
Chem.32:
LCMS法:LCMS_4:Rt:2.05分;正確な質量:5110.617Da;M/5:1023.37;M/4:1278.99
UPLC法:B2_1:Rt=12.41分
UPLC法:B29_1:Rt=11.13分
Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[10-(4-カルボキシフェノキシ)デカノイルアミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]、Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[10-(4-カルボキシフェノキシ)デカノイルアミノ]-ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]、Nα8-{(S)-3-(1H-イミダゾール-4-イル)-2-[(S)-3-メチル-2-((S)-3-メチル-2-メチルアミノ-ペンタノイルアミノ)-ブチリルオキシ]-プロピオニル}-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Gln34]-GLP-1-(8-37)-ペプチド
Chem.53:
LCMS法:LCMS_4:Rt:2.05分;正確な質量:5140.666Da;M/5:1028.97;M/4:1286.00
UPLC法:B2_1:Rt=12.37分
UPLC法:B29_1:Rt=11.22分
Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[10-(4-カルボキシフェノキシ)デカノイルアミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]、Nε31-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[10-(4-カルボキシフェノキシ)デカノイルアミノ]-ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]、Nα8-{(S)-2-[(S)-2-((S)-2-アミノ-3-メチル-ペンタノイルアミノ)-3-メチル-ブチリルオキシ]-3-(1H-イミダゾール-4-イル)-プロピオニル}-[Lys18,Glu22,Val25,Arg26,Lys31,Gln34]-GLP-1-(8-37)-ペプチド
Chem.33:
LCMS法:LCMS_4:Rt:2.10分;正確な質量:5124.632Da;M/5:1025.93;M/4:1282.15
UPLC法:B4_1:Rt=8.07分
Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[10-(4-カルボキシフェノキシ)デカノイルアミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]、Nε37-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[10-(4-カルボキシフェノキシ)デカノイルアミノ]-ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]、Nα8-{(S)-3-(1H-イミダゾール-4-イル)-2-[(S)-3-メチル-2-((S)-3-メチル-2-メチルアミノ-ペンタノイルアミノ)-ブチリルオキシ]-プロピオニル}-[Arg34、Lys37]-GLP-1-(8-37)-ペプチド
Chem.54:
LCMS法:LCMS_4:Rt:2.23分;正確な質量:5098.584Da;M/5:1020.99;M/4:1275.98
UPLC法:B4_1:Rt=9.485分
UPLC法:B29_1:Rt=13.070分
Nε18-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[10-(4-カルボキシフェノキシ)デカノイルアミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]、Nε26-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[10-(4-カルボキシフェノキシ)デカノイルアミノ]-ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]、Nα8-{(S)-3-(1H-イミダゾール-4-イル)-2-[(S)-3-メチル-2-((S)-3-メチル-2-メチルアミノ-ペンタノイルアミノ)-ブチリルオキシ]-プロピオニル}-[Lys18,Glu22,Gln34]-GLP-1-(8-37)-ペプチド
Chem.55:
LCMS法:LCMS_4:Rt:2.30分;正確な質量:5112.552Da;M/5:1023.78;M/4:1279.71
UPLC法:B4_1:Rt=11.05分
UPLC(方法:B29_1):Rt=19.60分
Nε27-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル]、Nα8-{(S)-3-(1H-イミダゾール-4-イル)-2-[(S)-3-メチル-2-((S)-3-メチル-2-メチルアミノ-ブチリルアミノ)-ブチリルオキシ]-プロピオニル}-[Aib8,Glu22,Arg26,Lys27,Arg34]GLP-1-(8-37)-ペプチド
Chem.56:
末端Glu上のFmoc保護基を、NMP中の20%ピペリジンによる2分+18分間の処理、それに続くNMPによる6回の洗浄によって除去した。
Fmoc-Aib-OH(樹脂と比較して4モル当量)をTBTU(3.8当量)、HOBt(4当量)、およびDIPEA(4当量)で10分間活性化し、次いで、樹脂に加え、2時間または陰性のTNBS試験までカップリングさせた(W.S. Hancock、J.E. Battersby、Analytical Biochemistry、1976、71(1)、260〜264頁)。樹脂を、NMPで6回およびDCMで10回洗浄した。
ε-Lys Mtt保護基を、DCM中の0.5%TFAによる5分間の処理、それに続く無溶媒ヘキサフルオロイソプロパノールによる15分の3回の処理によって除去した。樹脂をDCMで6回およびNMPで6回洗浄した。TNBS試験は陽性であった。
ビス-t-ブチル保護された側鎖(2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-5-tert-ブトキシ-4-[(18-tert-ブトキシ-18-オキソ-オクタデカノイル)アミノ]-5-オキソ-ペンタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]酢酸)(US2010317057A1、例えば、実施例4を参照されたい)(樹脂と比較して4モル当量)をNMPに溶解し、TBTU(3.8当量)、HOBt(4当量)、およびDIPEA(4当量)で15分間事前活性化し、次いで、樹脂に加え、2.5時間またはTNBS試験が透明なビーズを示すまで反応させた。Aib8上のN-末端Fmocを、上記のように除去した。
L-β-イミダゾール乳酸(樹脂と比較して4モル当量)をNMPに溶解し、PyBOB(3.8当量)、HOBt(4当量)、およびTEA(4当量)で10分間活性化し、その後、樹脂に加え、1.5時間カップリングした。
LCMS法:LCMS_4:Rt:2.67分;正確な質量:4437.347Da;M/5:888.47;M/4:1110.33;M/3:1480.43
UPLC法:B4_1:Rt=8.55分
UPLC法:B29_1:Rt=12.51分
Nε27-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル]、Nα8-{(2S)-2-[(2S)-2-[[(2S)-2-アミノ-3-メチル-ブタノイル]アミノ]-3-メチル-ブタノイル]オキシ-3-(1H-イミダゾール-4-イル)プロパノイル}-[Aib8,Glu22,Arg26,Lys27,Arg34]-GLP-1-(8-37)-ペプチド
Chem.34:
末端Glu上のFmoc保護基を、NMP中の20%ピペリジンによる2分+18分間の処理、それに続くNMPによる6回の洗浄によって除去した。
Fmoc-Aib-OH(樹脂と比較して4モル当量)をTBTU(3.8当量)、HOBt(4当量)、およびDIPEA(4当量)で10分間活性化し、次いで、樹脂に加え、2時間または陰性のTNBS試験までカップリングさせた(W.S. Hancock、J.E. Battersby、Analytical Biochemistry、1976、71(1)、260〜264頁)。樹脂を、NMPで6回およびDCMで10回洗浄した。
ε-Lys Mtt保護基を、DCM中の0.5%TFAによる5分間の処理、それに続く無溶媒ヘキサフルオロイソプロパノールによる15分の3回の処理によって除去した。樹脂をDCMで6回およびNMPで6回洗浄した。TNBS試験は陽性であった。
ビス-t-ブチル保護された側鎖(2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-5-tert-ブトキシ-4-[(18-tert-ブトキシ-18-オキソ-オクタデカノイル)アミノ]-5-オキソ-ペンタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]酢酸)(US2010317057A1、例えば、実施例4を参照されたい)(樹脂と比較して4モル当量)をNMPに溶解し、TBTU(3.8当量)、HOBt(4当量)、およびDIPEA(4当量)で15分間事前活性化し、次いで、樹脂に加え、2.5時間またはTNBS試験が透明なビーズを示すまで反応させた。Aib8上のN-末端Fmocを、上記のように除去した。
L-β-イミダゾール乳酸(樹脂と比較して4モル当量)をNMPに溶解し、PyBOB(3.8当量)、HOBt(4当量)、およびTEA(4当量)で10分間活性化し、その後、樹脂に加え、1.5時間カップリングした。
LCMS法:LCMS_4:Rt:2.68分;正確な質量:4423.332Da;M/5:885.66;M/4:1106.82;M/3:1475.77
UPLC法:B4_1:Rt=8.55分
UPLC法:B29_1:Rt=12.52分
(実施例7)
インビトロでのプロドラッグの半減期
この実施例の目的は、概念的に異なるプロドラッグと比較した、本発明のGLP-1プロドラッグのインビトロでの半減期(T1/2)を試験することである。以下において、2つのインビトロの方法を記載する。すなわち、1つの方法は、緩衝液中で行い、1つの方法は、血漿中で行う。
緩衝液:25mMのホスフェート(イオン強度:154mM、pH7.4、37℃)
NaH2PO4・2H2O(1.95g、12.5mmol)およびNaCl(2.61g、44.7mmol)をMillipore水(概ね450mL)に溶解し、概ね20℃にて濃縮されたNaOHおよび1MのNaOHでpH=7.44に調節した。水を500.00mLまで加えた。
計算1:Y=÷αt+k
計算2:T1/2=ln(2)/α
緩衝液:200mMのホスフェート、pH7.4、37℃
NaH2PO4・2H2O(15.61g、100mmol)をmilliQ水(概ね450mL)に溶解し、濃縮したNaOH(水溶液)および1MのNaOH(水溶液)で概ね20℃にてpH=7.44に調節した。水を、500.00mLまで加えた。
新鮮な血液を、ミニブタからGreiner bio-oneからの9mLのLHリチウムヘパリンVacuetteチューブ(カタログ番号455084)中に出した。氷上で冷却した後、これを遠心分離し(10分、4℃、3000rpm/1942G)、上清を単離し、使用前に-18℃で保持した。
薬物のインビトロの効力(AlphaScreen、膜)
この実施例の目的は、例えば、本発明のプロドラッグのGLP-1親薬物のインビトロでの活性、または効力を試験することである。
ヒトGLP-1受容体を発現している安定的なトランスフェクトされた細胞系であるBHK467-12A(tk-ts13)からの精製した形質膜を、問題のGLP-1薬物で刺激し、cAMP生成の効力を、Perkin Elmer Life SciencesからのAlphaScreen(商標)cAMPアッセイキットを使用して測定した。AlphaScreenアッセイの基本的原理は、内因性cAMPと外因的に加えたビオチン-cAMPとの間の競合である。cAMPの捕捉は、アクセプタービーズにコンジュゲートした特異的抗体を使用することによって達成する。
安定的なトランスフェクトされた細胞系および高発現クローンを、スクリーニングのために選択した。細胞を、5%CO2でDMEM、10%FCS、1%Pen/Strep(ペニシリン/ストレプトマイシン)および好ましくは0.5mg/ml(代わりに、1.0mg/ml)の選択マーカーG418中で増殖させた。
Perkin Elmer Life SciencesからのAlphaScreen cAMPアッセイキット(カタログ番号:6760625M);抗-cAMPアクセプタービーズ(10U/μl)、ストレプトアビジンドナービーズ(10U/μl)およびビオチン化-cAMP(133U/μl)を含有。
膜は、好ましくは、0.6mg/mlに相当する6μg/ウェル(代わりに、3μg/ウェル)の濃度でhGLP-1/BHK467-12A細胞から調製した(ウェル毎に使用する膜の量は変化し得る)。
1.AlphaScreen緩衝液を作製する。
2.GLP-1薬物/cAMP標準をAlphaScreen緩衝液に溶解および希釈する。
3.ドナービーズ溶液を、ストレプトアビジンドナービーズ(2単位/ウェル)およびビオチン化cAMP(1.2単位/ウェル)を混合することによって作製し、暗中室温で20〜30分インキュベートする。
4.cAMP/GLP-1薬物をプレートに加える。ウェル毎に10μl。
5.膜/アクセプタービーズ溶液を調製し、これをプレートに加える。ウェル毎に10μl。
6.ドナービーズを加える。ウェル毎に30μl。
7.プレートをアルミホイルで包み振盪機上で室温にて3時間(非常にゆっくりと)インキュベートする。
8.AlphaScreen上で計数する。各プレートをAlphaScreenにおいて計数の前に3分間プレインキュベートする。
EC50[nM]値は、Graph-Pad Prismソフトウェア(バージョン5)を使用して計算したが、下記のTable 2(表2)において示す。
薬物のインビトロの効力(CREルシフェラーゼ;全細胞)
この実施例の目的は、例えば、本発明のプロドラッグのGLP-1親薬物の活性、または効力を試験することである。インビトロの効力は、全細胞アッセイにおけるヒトGLP-1受容体活性化の尺度である。この方法は、実施例8の方法への代替である。
インビトロの効力は、レポーター遺伝子アッセイにおいてヒトGLP-1受容体の反応を測定することによって決定した。アッセイは、ヒトGLP-1受容体を発現しており、かつプロモーターにカップリングしたcAMP応答配列(CRE)についてのDNAと、ホタルルシフェラーゼ(CREルシフェラーゼ)についての遺伝子とを含有する安定的にトランスフェクトされたBHK細胞系において行った。ヒトGLP-1受容体が活性化されるとき、これによってcAMPの生成がもたらされ、それによってルシフェラーゼタンパク質の発現がもたらされる。アッセイインキュベーションが完了するとき、ルシフェラーゼ基質(ルシフェリン)を加え、酵素によってルシフェリンはオキシルシフェリンに変換され、バイオルミネセンスを生成する。アッセイについての読み出し情報として、発光を測定する。
このアッセイにおいて使用する細胞(クローンFCW467-12A/KZ10-1)は、親細胞系としてBHKTS13を有するBHK細胞であった。細胞はヒトGLP-1受容体を発現しているクローン(FCW467-12A)に由来し、CREルシフェラーゼによるさらなるトランスフェクションによって確立し、現在のクローンを得た。
下記の化学物質を、アッセイにおいて使用した。Pluronic F-68(10%)(Gibco2404)、ヒト血清アルブミン(HSA)(Sigma A9511)、オボアルブミン(Sigma A5503)、DMEM w/oフェノールレッド(Gibco11880-028)、1MのHepes(Gibco15630)、Glutamax100x(Gibco35050)およびsteadylite plus(PerkinElmer6016757)。
1)細胞ストックは、37℃の水浴中で解凍した。
2)細胞は、PBS中で3回洗浄した。
3)アッセイ培地中で細胞を計数し、5×103個の細胞/50μl(1×105個の細胞/ml)に調節した。50μlの一定分量の細胞を、アッセイプレート中の各ウェルに移した。
4)試験化合物および参照化合物のストックを、0%HSA CREルシフェラーゼアッセイのために0%アッセイ緩衝液、および1%HSA CREルシフェラーゼアッセイのために1%アッセイ緩衝液において0.2μMの濃度に希釈した。化合物を10倍に希釈し、下記の濃度を得た。2×10-7M、2×10-8M;2×10-9M、2×10-10M、2×10-11M、2×10-12M、2×10-13M、および2×10-14M。
5)50μlの一定分量の化合物またはブランクを、希釈プレートからアッセイプレートに移した。化合物を、下記の最終濃度で試験した。1×10-7M、1×10-8M;1×10-9M、1×10-10M、1×10-11M、1×10-12M、1×10-13M、および1×10-14M。
6)アッセイプレートを、5%CO2インキュベーターにおいて37℃にて3時間インキュベートした。
7)アッセイプレートをインキュベーターから取り出し、室温で15分間静置した。
8)100μlの一定分量のsteadylite plus試薬を、アッセイプレートの各ウェルに加えた(試薬は光に敏感であった)。
9)各アッセイプレートをアルミ箔で覆い、光から保護し、室温にて30分間振盪した。
10)各アッセイプレートを、Packard TopCount NXT機器において読み取った。
TopCount機器からのデータを、GraphPad Prismソフトウェアに移した。ソフトウェアによって、非線形回帰を行う(反応に対するlog(アゴニスト))。ソフトウェアによって計算し、pMで報告するEC50値を、下記のTable 3(表3)において示す。
GLP-1受容体結合
この実験の目的は、本発明のプロドラッグのGLP-1親薬物の受容体結合活性を試験することである。受容体結合は、ヒトGLP-1受容体についての親薬物の親和性の尺度である。実施例B2.1、B2.2、B2.3、B2.4、およびB2.5の親GLP-1薬物は、下記のように試験した。
競合的結合アッセイにおいて、ヒトGLP-1受容体へのGLP-1薬物の受容体結合を測定した。このタイプのアッセイにおいて、標識したリガンド(この場合は、125I-GLP-1)は、受容体に結合する。各薬物を、ヒトGLP-1受容体を含有する単離した膜に一連の濃度で加え、標識したリガンドの移動をモニターする。受容体結合は、標識したリガンドの半分が受容体から移動する濃度、IC50値として報告する。
下記の化学物質を、アッセイにおいて使用した。ヒト血清アルブミン(HSA)(Sigma A1653)、DMEM w/oフェノールレッド(Gibco11880-028)、Pen/Strep(Invitrogen15140-122)、G418(Invitrogen10131-027)、1MのHepes(Gibco15630)、EDTA(Invitrogen15575-038)、PBS(Invitrogen14190-094)、ウシ胎仔血清(Invitrogen16140-071)、EGTA、MgCl2(Merck1.05832.1000)、Tween20(Amresco0850C335)、SPA粒子(コムギ胚芽アグルチニン(WGA)SPAビーズ、Perkin Elmer RPNQ0001)、[125I]-GLP-1]-(7-36)NH2(施設内で生成)、OptiPlate(商標)-96(Packard6005290)。
種(インビトロ):ハムスター
生物学的エンドポイント:受容体結合
アッセイ法:SPA
受容体:GLP-1受容体
細胞系:BHK tk-ts13
このアッセイにおいて使用した細胞(クローンFCW467-12A)は、親細胞系としてBHKTS13を有するBHK細胞であった。細胞は、ヒトGLP-1受容体を発現している。
SPA結合アッセイのために、試験化合物、膜、SPA-粒子および[125I]-GLP-1(7-36)NH2を、アッセイ緩衝液に希釈した。25ul(マイクロリットル)の試験化合物を、Optiplateに加える。緩衝液(0.005%HSAを含有する「低アルブミン」実験)を加えた(50ul)。0.1〜0.2mgのタンパク質/mlに相当する5〜10ugのタンパク質/試料を加えた(50ul)(好ましくは、各膜調製のために最適化される)。SPA-粒子(コムギ胚芽アグルチニンSPAビーズ、Perkin Elmer、#RPNQ0001)を、0.5mg/ウェル(50ul)の量で加えた。[125I]-GLP-1(7-36)NH2(49.880DPMに相当する最終濃度0.06nM、25ul)と共にインキュベーションを開始した。プレートをPlateSealerで密封し、撹拌しながら30℃にて120分間インキュベートした。プレートを遠心分離し(1500rpm、10分)、Topcounterにおいて計数した。下記の手順に好ましくは従う。
1.低HSA(0.005%)の存在下での受容体結合アッセイのために、50μlのアッセイ緩衝液を、アッセイプレートの各ウェルに加えた。アッセイをステップ3において続けた。
2.高HSA(2%)の存在下での受容体結合アッセイのために、50μlの8%アルブミンストックを、アッセイプレートの各ウェルに加えた。アッセイをステップ3において続けた。
3.試験化合物を段階希釈し、下記の濃度を得た。8×10-7M、8×10-8M、8×10-9M、8×10-10M、8×10-11M、8×10-12Mおよび8×10-13M。25μlを、アッセイプレート中の適当なウェルに加えた。
4.細胞膜の一定分量を解凍し、これらの処理用濃度に希釈した。50μlを、アッセイプレート中の各ウェルに加えた。
5.WGA SPAビーズを、20mg/mlでアッセイ緩衝液に懸濁した。懸濁液を、アッセイプレートへの添加の直前にアッセイ緩衝液中に10mg/mlへと希釈した。50μlを、アッセイプレートの各ウェルに加えた。
6.アッセイプレートの各ウェルに25μlの[125I]-GLP-1]-(7-36)NH2の480pM溶液を加えることによって、インキュベーションを開始した。25μlの一定分量を、総カウント/ウェルを測定するために準備した。
7.アッセイプレートを、30℃にて2時間インキュベートした。
8.アッセイプレートを、10分間遠心分離した。
9.アッセイプレートを、Packard TopCount NXT機器において読み取った。
TopCount機器からのデータを、GraphPad Prismソフトウェアに移した。ソフトウェアは反復試験についての値を平均し、非線形回帰を行った。IC50値をソフトウェアによって計算し、nMで報告した。
結果を、下記のTable 4(表4)において示す。
DPP-IVによる分解への耐性
この実験の目的は、ジペプチジルペプチダーゼ-4(DPP-IV)による本発明のプロドラッグの親薬物の分解を決定することである。
HEPES緩衝液(0.005%Tween20を有する50mMのHEPES緩衝液、pH7.4)
10mlのHEPES(1M)+100μlの10%Tween20、pH7.4に調節し、MilliQ水を200mL加えて希釈。
ストック溶液
BSAを有する親GLP-1薬物のストック溶液
HEPES緩衝液中1.0mM、0.1%BSA(Sigmaカタログ番号A9418)
BSAを有さない親GLP-1薬物のストック溶液
HEPES緩衝液中1.0mM、pH7.4
DPP-IVのストック溶液
DPP-IVは、組換えジペプチジルペプチダーゼ、R&D Systems、カタログ番号1180-SEであった。
50μlのDPP-IV(0.2mg/mL)、25mMのMES、0.7MのNaCl、pH5.0
DPP-IVの処理用溶液
200μlのTRIS(25mM)pH8.0を、ストックバイアルに加える(DPP-IV濃度40μg/mL)。使用の直前に、210μl(40μg/ml)を、210μlの50mMのHEPESに加える(DPP-IV濃度20μg/mL)。
インキュベーション
プレートのプレインキュベーション
600μlの0.1%オボアルブミンと共に最低30分、37℃。次いで、4℃で一晩静置し、50mMのHEPESで回洗浄する。
実験前
HEPES緩衝液と共に37℃にて最低150分。
ディッシュ
Costar96-セミディープウェル(cci-3957)
総インキュベーション容量
300μL
全てをインキュベーション
267μLの50HEPES緩衝液、T÷150分
3μLの化合物(1.0mM)±BSA、T÷150分
30μLの処理用酵素溶液、T÷0分
インキュベーション時間
1-30-60-120-180分および1440分(37℃)
インキュベーションの停止
25μlの試料をEtOH中の150μlの冷却した1%TFA中に移すことによって反応を終了させた。試料を、v型96ウェルプレート(ポリプロピレン、Costar3957)(カタログ番号cci-3957)中に集めた。試料を密封し、分析するまで氷上に保持した。
分析
コーティングされていない96ウェルプレート(ポリプロピレン、WATERS186002643番)における上清中のLC-MS分析
試料を50%アセトニトリル(1%ギ酸)に5倍に希釈し(20μL+80μL)、UPLC-MSで分析した。
結果
BSAを伴わない結果を、下記のTable 5(表5)において示し、BSAを伴う結果を、Table 6(表6)において示す。
計算3:Y(t)=÷αt+k
計算4:T1/2=ln2/α
T1/2(÷BSA):3466分
T1/2(+0.001%BSA):2311分
ミニブタにおける薬物動態研究
本明細書における実施例7は、本発明者らがインビトロで、プロドラッグから薬物への変換についての変換定数、k(図1を比較)を制御し、これを長くすることができるという証拠を提供する。
半減期結果を、下記のTable 7(表7)において示す。
Claims (11)
- 一般式IのGLP-1化合物:
R1-(NHXaa1)-Xaa2-(OHis)-(GLP-1ペプチド)(式I)
[式中、
GLP-1ペプチドは、GLP-1(8-37)(配列番号1)、またはGLP-1(8-37)(配列番号1)と比較して最大で9個のアミノ酸の置換、付加、および/または欠失を有するその類似体であり、
R1は、低級アルキルであり、
(NHXaa1)は、アミノ酸であり、
Xaa2は、アミノ酸であり、
(OHis)は、式Chem.1
Chem.1:
またはその薬学的に許容される塩、アミド、もしくはエステルであって、(OHis)中の左側の*-OがXaa2アミノ酸のC末端のCOOHとエステルを形成し、(OHis)中の右側のO-*がGLP-1ペプチドのNH2末端とアミド結合を形成している、化合物。 - (NHXaa1)とXaa2との間の結合が、アミド結合であり、R1が、(NHXaa1)のα-アミノ基に付着している、請求項1に記載の化合物。
- R1が、メチルである、請求項1に記載の化合物。
- (NHXaa1)が、Gly、Val、またはIleである、請求項1に記載の化合物。
- Xaa2が、Valである、請求項1に記載の化合物。
- GLP-1ペプチドが、少なくとも1つのアルブミン結合側鎖を含む誘導体である、請求項5に記載の化合物。
- GLP-1ペプチドが、
i)26位もしくは27位に付着した1つのアルブミン結合側鎖;または
ii)a)18位および31位のそれぞれ、b)26位および37位のそれぞれ、もしくはc)18位および26位のそれぞれに付着した1つのアルブミン結合側鎖
を有する誘導体であり、位置の付番は、GLP-1(8-37)(配列番号1)を意味する、請求項6に記載の化合物。 - 医薬として使用するための、請求項1から8のいずれか一項に記載の化合物。
- 摂食障害、心血管疾患、胃腸疾患、糖尿病性合併症、重篤疾患、および/もしくは多嚢胞性卵巣症候群から成る群から選択される全ての形態の糖尿病および関連する疾患の治療および/もしくは予防において使用するため;ならびに/または脂質パラメーターを改善するため、β-細胞機能を改善するため、ならびに/または糖尿病性疾患の進行を遅延もしくは予防するための、請求項1から8のいずれか一項に記載の化合物。
- 一般式II:(HOHis)-(GLP-1ペプチド)の活性であり安定化した親薬物GLP-1化合物、またはその薬学的に許容される塩、アミド、もしくはエステルのインビボでの放出を達成するための、請求項1から8のいずれか一項に記載の化合物を含む医薬組成物。
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