JP6288649B2 - L−システイン生産能が高められた腸内細菌科に属する細菌 - Google Patents
L−システイン生産能が高められた腸内細菌科に属する細菌 Download PDFInfo
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- C12Y205/01047—Cysteine synthase (2.5.1.47)
Description
チオ硫酸結合タンパク質のC末端領域が欠失するように改変され、且つ
硫酸塩存在下におけるL-システイン生産能が高められたことを特徴とする、
腸内細菌科に属する細菌。
(a)配列番号1に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質、又は
(b)配列番号1に示されるアミノ酸配列と85%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、且つチオ硫酸結合活性を有するタンパク質。
(c)配列番号1に示されるアミノ酸配列の274〜300番目のアミノ酸からなる領域を含む領域、又は
(d)配列番号1に示されるアミノ酸配列と85%以上の同一性を有するアミノ酸配列において、配列番号1に示されるアミノ酸配列の274〜300番目のアミノ酸からなる領域を含む領域に対応する領域。
(e)配列番号3に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質、又は
(f)配列番号3に示されるアミノ酸配列と85%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、且つO-アセチルセリンスルフヒドリラーゼB活性を有するタンパク質。
本発明は、O-アセチルセリンスルフヒドリラーゼBの活性が低下するように改変された腸内細菌科に属する細菌であって、チオ硫酸結合タンパク質のC末端領域が欠失するように改変され、且つ硫酸塩存在下におけるL-システイン生産能が高められたことを特徴とする、腸内細菌科に属する細菌に関する。
(e)配列番号3に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質、又は
(f)配列番号3に示されるアミノ酸配列と85%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、且つO-アセチルセリンスルフヒドリラーゼB活性を有するタンパク質。
(f’)配列番号3に示されるアミノ酸配列に対して1若しくは複数個のアミノ酸が置換、欠失、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、且つO-アセチルセリンスルフヒドリラーゼB活性を有するタンパク質が挙げられる。
(a)配列番号1に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質、又は
(b)配列番号1に示されるアミノ酸配列と85%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、且つチオ硫酸結合活性を有するタンパク質。
(b’)配列番号1に示されるアミノ酸配列に対して1若しくは複数個のアミノ酸が置換、欠失、付加、又は挿入されたアミノ酸配列からなり、且つチオ硫酸結合化性を有するタンパク質が挙げられる。
(c)配列番号1に示されるアミノ酸配列の274〜300番目のアミノ酸からなる領域を含む領域、又は
(d)配列番号1に示されるアミノ酸配列と85%以上の同一性を有するアミノ酸配列において、配列番号1に示されるアミノ酸配列の274〜300番目のアミノ酸からなる領域を含む領域に対応する領域。
本発明は、上記本発明の細菌を培地中で培養して得られた培養物からL-システインを採取することを特徴とする、L-システインの製造方法に関する。また、本発明は、上記本発明の細菌を培地中で培養して培養液を得ること、及び得られた培養液からL-システインを採取することを含む、L-システインの製造方法にも関する。
大腸菌がL-システインを生合成する経路には、硫黄源として硫酸塩を利用する経路(硫酸経路)と、硫黄源としてチオ硫酸塩を利用する経路の(チオ硫酸経路)2つの経路が存在する(図1)。この2つの経路の選択的利用機構の一端を明らかにする目的で、チオ硫酸経路においてシステインの前駆体であるS-スルホシステインの合成に関与する酵素(O-アセチルセリンスルフヒドリラーゼB:図1)をコードする遺伝子(cysM)の欠損株の硫黄源選択性を調べた。具体的には、下記のように、cysM欠損株を、硫黄源として硫酸塩のみを含む培地、又は硫黄源として硫酸塩及びチオ硫酸塩の両方を含む培地における生育性を調べた。
硫黄源として硫酸塩とチオ硫酸塩の両方が存在していても、システイン合成には、実際にはチオ硫酸塩しか使われないことが示唆されている(参考例1)。硫酸塩及びチオ硫酸塩の両方が存在している状態でも、硫酸経路及びチオ硫酸経路の両方によるシステイン合成を起こす変異株(チオ硫酸リプレッションが起こらない変異株)を取得できれば、この変異株によって効率良くシステインを合成することができると考えられる。そこで、このような変異株の取得を試みた。具体的には、下記のように行った。
実施例1で得られたサプレッサー変異株において、cysM欠損株から変異している部分を同定するために、これらの株のゲノムを次世代シーケンサーを用いて解析した。具体的には以下のように行った。
サプレッサー変異株のシステイン生産能を調べた。具体的には下記のように行った。
Claims (6)
- O-アセチルセリンスルフヒドリラーゼBをコードする遺伝子が破壊された腸内細菌科に属する細菌であって、
チオ硫酸結合タンパク質のC末端領域が欠失するように改変され、
前記チオ硫酸結合タンパク質が下記(a)又は(b)に記載のタンパク質:
(a)配列番号1に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質、又は
(b)配列番号1に示されるアミノ酸配列と90%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、且つチオ硫酸結合活性を有するタンパク質であり、
前記C末端領域が下記(c)又は(d)に記載の領域:
(c)配列番号1に示されるアミノ酸配列の274〜300番目のアミノ酸からなる領域を含む領域、又は
(d)配列番号1に示されるアミノ酸配列と90%以上の同一性を有するアミノ酸配列において、配列番号1に示されるアミノ酸配列の274〜300番目のアミノ酸からなる領域を含む領域に対応する領域であり、
且つ
硫酸塩存在下におけるL-システイン生産能が高められたことを特徴とする、
腸内細菌科に属する細菌。 - 前記O-アセチルセリンスルフヒドリラーゼBが下記(e)又は(f)に記載のタンパク質である、請求項1に記載の細菌:
(e)配列番号3に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質、又は
(f)配列番号3に示されるアミノ酸配列と90%以上の同一性を有するアミノ酸配列からなり、且つO-アセチルセリンスルフヒドリラーゼB活性を有するタンパク質。 - 前記腸内細菌科に属する細菌がエシェリヒア属細菌である、請求項1又は2に記載の細菌。
- 請求項1〜3のいずれかに記載の細菌を培地中で培養して得られた培養物からL-システインを採取することを特徴とする、L-システインの製造方法。
- 前記培地が硫黄源として硫酸塩を含む、請求項4に記載の製造方法。
- 前記培地が硫黄源としてさらにチオ硫酸塩を含む、請求項5に記載の製造方法。
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