JP6172865B2 - 併用療法によるプロカスパーゼ3活性化 - Google Patents

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Description

関連出願
本願は、2012年3月6日出願の米国特許仮出願第61/607098号に基づいて35U.S.C.§119(e)による優先権を主張するものである。この仮出願は、参照により本明細書に組み入れられる。
発明の背景
アポトーシス、すなわちプログラム細胞死は、すべての多細胞生物の発生及びホメオスタシスにおいて中心的役割を果たしている。癌の一般的な特徴は、天然のアポトーシスシグナルに対する耐性である。癌のタイプに応じて、この耐性は、通常、アポトーシスカスケードにおける主要タンパク質の上方若しくは下方制御によるか、又はこれらのタンパク質をコードする遺伝子の変異による。そのような変化は、ミトコンドリア及びカスパーゼ−9を介する内因性アポトーシス経路と、細胞死受容体及びカスパーゼ−8の作用を伴う外因性アポトーシス経路と、の両方で生じる。例えば、p53、Bim、Bax、Apaf−1、FLIP及びその他多くのタンパク質の適正レベルの変化が癌において観察されている。この変化は、不完全なアポトーシスカスケード、すなわち、上流のアポトーシス促進シグナルが十分に伝達されず、実行型カスパーゼであるカスパーゼ−3及びカスパーゼ−7が活性化されないカスケードをもたらす可能性がある。
ほとんどのアポトーシス経路が最終的にプロカスパーゼ−3の活性化を伴うので、上流の遺伝子異常は事実上アポトーシス回路における「遮断」であり、その結果、そのような細胞は異常に増殖する。癌におけるアポトーシスの中心的役割を考慮して、アポトーシスカスケードにおける特異的タンパク質を標的とする治療薬を開発する試みが行われてきた。例えば、カスケードメンバー(例えば、p53及びBclファミリーのタンパク質)に対する又はアポトーシス阻害タンパク質(IAP)ファミリーのタンパク質に対するペプチド分子又は小分子の結合剤は、Apaf−1のオリゴマー化を促進する化合物と同様のアポトーシス促進活性を有する。しかし、そのような化合物はアポトーシスカスケード上の早期(又は中位から高位)のポジションを標的とするので、それらのメンバーの下流のタンパク質に影響する変異のある癌は、それらの化合物のあり得る有益な効果に対して依然として耐性を有し得る。
アポトーシスカスケードの遠位の下流にあるアポトーシス促進タンパク質を直接活性化する小分子を同定することは治療上有益である。このアプローチはカスケード中の比較的低ポジションに関わり、それにより、上流アポトーシス機構に影響する変異のある細胞であっても死滅させることが可能となる。さらに、そのような治療戦略は、そのアポトーシス促進タンパク質が癌細胞において上方制御されるか又は高いレベルで存在する場合に成功の可能性がより高くなる。したがって、アポトーシスの下流エフェクタータンパク質であるプロカスパーゼ−3を標的とする小分子の同定は現在の癌治療を著しく促進することになる。
プロカスパーゼ−3がカスパーゼ−3に変換又は活性化されると、活性「実行型」カスパーゼ形態が生成され、これが続いて多数のタンパク質基質の加水分解を触媒する。活性カスパーゼ−3はヘテロダイマーのホモダイマーであり、プロカスパーゼ−3のタンパク質分解によって産生される。インビボにおいて、このタンパク質分解性活性化は、通常、カスパーゼ−8又はカスパーゼ−9の作用を介して生じる。酵素前駆体(プロ酵素)が時期尚早に活性化されないように、プロカスパーゼ−3は、タンパク質分解のETD部位(アミノ酸配列:ile−glu−thr−asp)へのアクセスを阻止する12アミノ酸の「セーフティキャッチ」を有する。このセーフティキャッチは、プロカスパーゼ−3がカスパーゼ−9による自己触媒的活性化及びタンパク質分解に抵抗することを可能にする。変異原性試験では、連続する3個のアスパラギン酸残基がセーフティキャッチの重要成分であるように思われることが示されている。セーフティキャッチの部位はpHに感受性があるため、(アポトーシス中に生じる)細胞の酸性化の際に、セーフティキャッチはタンパク質分解の部位へのアクセスを可能とし、活性カスパーゼ−3は、カスパーゼ−9の作用によって又は自己活性化機構を介して産生されることができると考えられる。
特定の癌では、プロカスパーゼ−3のレベルは正常組織に比べて上昇する。20名の結腸癌患者から得た一次単離物の研究では、平均して、プロカスパーゼ−3が、隣接した非癌性組織と比較してそのような単離物において6倍上方制御されたことが示されている。また、プロカスパーゼ−3は、特定の神経芽腫、リンパ腫及び肝癌において上方制御される。さらに、米国国立癌研究所(NCI)Developmental Therapeutics Programによる癌スクリーニングで使用されている60細胞株パネルにおけるプロカスパーゼ−3レベルの系統的評価が行われ、特定の肺癌、黒色腫、腎癌及び乳癌が非常に高レベルのプロカスパーゼ−3発現を示すことが明らかとなった。
アポトーシス達成における活性カスパーゼ−3の役割、特定の癌細胞型におけるプロカスパーゼ−3の比較的高いレベル、及びその自己活性化の興味深いセーフティキャッチ媒介性抑制によって、プロカスパーゼ−3を直接修飾する小分子は癌標的治療での大きな適用可能性を有する。
併用療法は癌患者の処置の標準となっている。併用療法の混合薬レジメンの目的は、化学療法薬間の相乗又は相加効果を実現し、それにより処置時間の短縮、毒性の低減、及び患者の生存の増加を促進することである。単一の生化学経路に作用する薬物は、「合成致死性」の遺伝子の組み合わせを模倣し得ることから、相乗又は増強作用に関する特に有力な候補である。例えば、DNA損傷修復を促進する酵素であるポリ(ADPリボース)ポリメラーゼ−1(PARP−1)の阻害剤は、細胞培養、動物モデル及びヒト治験において証明されているようにDNA損傷剤と共に強力な相乗作用を示す。しかし、依然として、多くの形態の癌を処置するためのより有効な治療法が必要とされており、抗癌薬の新たな相乗的な組み合わせがこの探求に有用であろう。したがって、癌細胞の死滅には有効であるが、正常な宿主組織を該薬物の好ましくない毒性から保護する、新規の細胞毒性薬を同定する必要性がある。
概要
本発明は、概して、化合物、組成物、及び治療的処置の方法を提供する。種々の実施形態において、本発明は、種々の癌性疾患及び癌細胞型、例えば、乳癌、リンパ腫、副腎癌、腎癌、黒色腫、白血病、神経芽腫、肺癌、脳癌、及び当技術分野で公知の他の癌に適用可能である。本明細書では、特に、細胞死を誘発することができる小分子を含む組成物及び方法が開示される。一部の実施形態において、組成物及び方法は、プログラム細胞死経路のメンバー(例えばプロカスパーゼ−3)と直接的又は間接的に相互作用し得る化合物を含む。特定の実施形態において、組成物及び方法は、プログラム細胞死経路のメンバー(例えばプロカスパーゼ−3)と直接的又は間接的に相互作用する他の化合物と比較して低減された神経毒性を有する。
併用抗癌療法は、異なる生化学経路を標的とする薬物、又は同一経路での異なる標的を攻撃し、「合成致死性」の遺伝子の組み合わせを模倣する薬物から構成され得る。プロカスパーゼ−3活性化薬PAC−1及び第2の活性薬物の組み合わせは大きな相乗作用を示し、しばしば相加効果をはるかに上回る程度に癌細胞のアポトーシス死を誘導する。PAC−1及び第2の活性薬物の組み合わせは、化合物単独では効果が僅かであるか効果がない腫瘍モデルの腫瘍量を効果的に低減させるために使用できる。本明細書に記載のデータは、癌の処置におけるPAC−1/第2の薬物の組み合わせの有効性を示しており、より広く見れば、その組み合わせが相乗的であり得、また、顕著に増強された治療上の利益をもたらし得ることを示している。
すなわち、本発明は、
(a)化合物PAC−1:

と、
(b)第2の活性薬物と、
(c)薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤又は担体と、
を含む組成物を提供する。第2の活性薬物は、例えば、エトポシド、ボルテゾミブ、スタウロスポリン、ドキソルビシン、タモキシフェン、シスプラチン、カルボプラチン、パクリタキセル、又は他の化学療法薬若しくは本明細書に記載の活性薬物であり得る。担体は水を含み得、活性薬物を有利に送達するための任意選択の成分、例えば、緩衝液、糖、可溶化剤(例えばシクロデキストリン)又はそれらの種々の組み合わせをさらに含み得る。一実施形態において、シクロデキストリンは2−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンである。
PAC−1の濃度は、約0.2μM〜約5mM、又は約2μM〜約50μM、通常、約2.5μM、約5μM、約7.5μM、約10μM、約12.5μM、約15μM、約20μM、約25μM、約30μM、約40μM、若しくは約50μM、又は前述のいずれかの値の間の範囲であり得る。第2の活性薬物の濃度は、約1nM〜約1mM、又は約25nM〜約1mM、通常、約1nM、約2nM、約3nM、約5nM、約10nM、約25nM、約50nM、約100nM、約250nM、約500nM、約750nM、約900nM、約1μΜ、約2.5μΜ、約5μΜ、約7.5μΜ、約10μΜ、約12.5μΜ、約15μΜ、約20μΜ、約25μΜ、約30μΜ、約40μΜ、約50μΜ、約75μΜ、約100μΜ、約125μΜ、約150μΜ、約200μΜ、約250μΜ、約300μΜ、約500μΜ、約750μΜ、若しくは約1mM、又は前述のいずれかの値の間の範囲であり得る。
一実施形態において、第2の活性薬物はエトポシドであり得、エトポシドの濃度は約0.2μM〜約50μMであり得る。
他の実施形態において、第2の活性薬物はボルテゾミブであり得、ボルテゾミブの濃度は約50nM〜約20μMであり得る。
他の実施形態において、第2の活性薬物はスタウロスポリンであり得、スタウロスポリンの濃度は約25nM〜約200nMであり得る。
他の実施形態において、第2の活性薬物はドキソルビシンであり得、ドキソルビシンの濃度は約50nM〜約5μMであり得る。
他の実施形態において、第2の活性薬物はタモキシフェンであり得、タモキシフェンの濃度は約5μM〜約50μMであり得る。
他の実施形態において、第2の活性薬物はシスプラチンであり得、シスプラチンの濃度は約5μM〜約150μMであり得る。
他の実施形態において、第2の活性薬物はカルボプラチンであり得、カルボプラチンの濃度は約5μM〜約150μMであり得る。
他の実施形態において、第2の活性薬物はパクリタキセルであり得、パクリタキセルの濃度は約0.5nM〜約15nMであり得る。
また、本発明は、癌細胞の成長又は増殖を抑制する方法であって、癌細胞を本明細書に記載の組成物の有効量と接触させ、それにより癌細胞の成長又は増殖を抑制するステップを含む方法を提供する。一部の実施形態において、癌細胞は、リンパ腫細胞、骨肉腫細胞、乳癌細胞又は卵巣癌細胞であり得る。他の実施形態において、癌細胞は、本明細書において後述される他の細胞型である。
また、本発明は、癌細胞におけるアポトーシスを誘導する方法であって、癌細胞を、有効量の化合物PAC−1:

及び有効量の第2の活性薬物と接触させるステップを含み、アポトーシスはそれにより癌細胞において誘導される、方法を提供する。一部の実施形態において、第2の活性薬物は、エトポシド、ボルテゾミブ、スタウロスポリン、ドキソルビシン、タモキシフェン、シスプラチン、カルボプラチン又はパクリタキセルである。他の実施形態において、第2の活性薬物は、本明細書において後述される活性薬物である。接触は、インビトロにおけるものであってもよいし、インビボにおけるものであってもよい。癌細胞は、PAC−1及び第2の活性薬物と同時に接触させることができる。あるいは、癌細胞を第2の活性薬物と接触させる前に癌細胞をPAC−1と接触させることができ、又は、癌細胞を第2の活性薬物と接触させた後に癌細胞をPAC−1と接触させることができる。
さらに、本発明は、処置の必要な患者における癌を処置する方法であって、治療有効量の化合物PAC−1:

及び有効量の第2の活性薬物を患者に同時又は逐次に投与するステップを含み、癌はそれにより処置される、方法を提供する。一部の実施形態において、第2の活性薬物は、エトポシド、ボルテゾミブ、スタウロスポリン、ドキソルビシン、タモキシフェン、シスプラチン、カルボプラチン又はパクリタキセルである。他の実施形態において、第2の活性薬物は、本明細書において後述される活性薬物である。化合物PAC−1及び第2の活性薬物は同時に投与することができる。あるいは、化合物PAC−1及び第2の活性薬物は逐次に投与することができる。一実施形態において、化合物PAC−1は第2の活性薬物の前に投与される。他の実施形態において、化合物PAC−1は第2の活性薬物の後に投与することができる。癌は、例えば、リンパ腫、骨肉腫、乳癌、卵巣癌、又は本明細書に記載の他の癌型であり得る。
すなわち、本発明は、薬物療法で使用するための本明細書に記載の組成物の使用を提供する。薬物療法は、癌、例えば、リンパ腫、乳癌、肺癌、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、結腸癌、及び本明細書に記載の他の癌を処置することであり得る。また、本発明は、哺乳動物の疾患(例えば、ヒトの癌)を処置するための医薬を製造するための本明細書に記載の組成物の使用を提供する。すなわち、本発明は、哺乳動物(例えばヒト)の癌の処置に有用な医薬を製造するための本明細書に記載の化合物の使用を提供する。医薬は、薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤又は担体を含み得る。
添付の図面は本明細書の一部を形成し、特定の実施形態又は本発明の種々の態様をさらに例示するために含まれる。いくつかの例では、本発明の実施形態は、本明細書中の詳細な説明と組み合わせて添付の図面を参照することによって最もよく理解され得る。本明細書中の説明及び添付の図面は、本発明のある特定の例又はある特定の態様を示したものであり得る。しかし、例又は態様の一部が本発明の他の例又は態様と組み合わせて使用され得ることは当業者には理解されよう。
本発明の実施形態は例えば下記実施形態1〜28を含む。下記実施形態1〜28におけるPAC−1の構造は前述の通りである。
実施形態1:
(a)化合物PAC−1と、
(b)エトポシド、ボルテゾミブ、スタウロスポリン、ドキソルビシン、タモキシフェン、シスプラチン、カルボプラチン又はパクリタキセルである第2の活性薬物と、
(c)薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤又は担体と、
を含む組成物。
実施形態2:
担体は水を含み、任意選択で、緩衝液、シクロデキストリン又はそれらの組み合わせをさらに含む、実施形態1に記載の組成物。
実施形態3:
シクロデキストリンは2−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンである、実施形態2に記載の組成物。
実施形態4:
PAC−1の濃度が約2μM〜約50μMである、実施形態1に記載の組成物。
実施形態5:
第2の活性薬物の濃度が約25nM〜約1mMである、実施形態1に記載の組成物。
実施形態6:
第2の活性薬物はエトポシドであり、エトポシドの濃度が約2μM〜約50μMである、実施形態1又は4に記載の組成物。
実施形態7:
第2の活性薬物はボルテゾミブであり、ボルテゾミブの濃度が約50nM〜約20μMである、実施形態1又は4に記載の組成物。
実施形態8:
第2の活性薬物はスタウロスポリンであり、スタウロスポリンの濃度が約25nM〜約200nMである、実施形態1又は4に記載の組成物。
実施形態9:
第2の活性薬物はドキソルビシンであり、ドキソルビシンの濃度が約50nM〜約5μMである、実施形態1又は4に記載の組成物。
実施形態10:
第2の活性薬物はタモキシフェンであり、タモキシフェンの濃度が約5μM〜約50μMである、実施形態1又は4に記載の組成物。
実施形態11:
第2の活性薬物はシスプラチンであり、シスプラチンの濃度が約5μM〜約150μMであり、第2の活性薬物はカルボプラチンであり、カルボプラチンの濃度が約5μM〜約150μMである、実施形態1又は4に記載の組成物。
実施形態12:
第2の活性薬物はパクリタキセルであり、パクリタキセルの濃度が約0.5nM〜約5nMである、実施形態1又は4に記載の組成物。
実施形態13:
癌細胞の成長又は増殖を抑制する方法であって、癌細胞を有効量の実施形態1に記載の組成物と接触させ、それにより癌細胞の成長又は増殖を抑制するステップを含む方法。
実施形態14:
癌細胞はリンパ腫細胞、骨肉腫細胞、乳癌細胞又は卵巣癌細胞である、実施形態13に記載の方法。
実施形態15:
癌細胞におけるアポトーシスを誘導する方法であって、
癌細胞を、有効量の化合物PAC−1及び有効量の第2の活性薬物と接触させるステップを含み、
第2の活性薬物は、エトポシド、ボルテゾミブ、スタウロスポリン、ドキソルビシン、タモキシフェン、シスプラチン、カルボプラチン又はパクリタキセルであり、
アポトーシスはそれにより癌細胞において誘導される、
方法。
実施形態16:
前記接触はインビトロでの接触である、実施形態15に記載の方法。
実施形態17:
前記接触はインビボでの接触である、実施形態15に記載の方法。
実施形態18:
癌細胞をPAC−1及び第2の活性薬物と同時に接触させる、実施形態15〜17のいずれか一項に記載の方法。
実施形態19:
癌細胞を第2の活性薬物と接触させる前に癌細胞をPAC−1と接触させる、実施形態15〜17のいずれか一項に記載の方法。
実施形態20:
癌細胞を第2の活性薬物と接触させた後に癌細胞をPAC−1と接触させる、実施形態15〜17のいずれか一項に記載の方法。
実施形態21:
処置の必要な患者における癌を処置する方法であって、
患者に、治療有効量の化合物PAC−1及び有効量の第2の活性薬物を同時又は逐次に投与するステップを含み、
第2の活性薬物は、エトポシド、ボルテゾミブ、スタウロスポリン、ドキソルビシン、タモキシフェン、シスプラチン、カルボプラチン又はパクリタキセルであり、
癌はそれにより処置される、
方法。
実施形態22:
化合物PAC−1及び第2の活性薬物は同時に投与される、実施形態21に記載の方法。
実施形態23:
化合物PAC−1及び第2の活性薬物は逐次に投与される、実施形態21に記載の方法。
実施形態24:
化合物PAC−1は第2の活性薬物の前に投与される、実施形態23に記載の方法。
実施形態25:
化合物PAC−1は第2の活性薬物の後に投与される、実施形態23に記載の方法。
実施形態26:
癌はリンパ腫、骨肉腫又は乳癌である、実施形態21〜25のいずれか一項に記載の方法。
実施形態27:
癌の処置のための医薬を調製するための、実施形態1〜10のいずれか一項に記載の組成物の使用。
実施形態28:
癌はリンパ腫、骨肉腫、乳癌又は卵巣癌である、実施形態27に記載の使用。
Figure1: 構造上多様な次の化学療法薬の化学構造:PAC−1、SPAC−1、エトポシド、ドキソルビシン、ボルテゾミブ、スタウロスポリン及びタモキシフェン。 Figure2: U−937(リンパ腫)細胞死に関する、エトポシドと組み合わせたPAC−1の効果。破線は純粋な相加効果のレベルを表わす。凡例は、次のように棒グラフの棒に対応する:左側の棒=0μMエトポシド;中央の棒=2.5μMエトポシド;右側の棒=5μMエトポシド。 Figure3: U−937(リンパ腫)細胞死に関する、ベルケイド(Velcade)(登録商標)(ボルテゾミブ)と組み合わせたPAC−1の効果。細胞死は、0μM PAC−1の下の0nMのボルテゾミブでは確認されなかった。細胞死は、ボルテゾミブにおいて6時間後に測定された。破線は純粋な相加効果の予想レベルを表わし、したがって、組み合わせは治療上適切な濃度で相乗作用を示す。 Figure4: U−937(リンパ腫)細胞死に関する、スタウロスポリンと組み合わせたPAC−1の効果。細胞死は、0〜15μM PAC−1の下の0nM ボルテゾミブではほとんど又は全く確認されなかった。細胞死は、スタウロスポリンにおいて8時間後に測定された。破線は純粋な相加効果の予想レベルを表わし、したがって、組み合わせは治療上適切な濃度で相乗作用を示す。 Figure5: PAC−1はドキソルビシンと相乗的に作用して骨肉腫143B(ヒトOS)細胞を死滅させる。凡例は棒グラフの棒に対応するものであり、ここで、最も上の凡例は一番左の棒に対応し、残りの凡例は残りの棒に対応(上〜下の凡例はそれぞれ左〜右の棒に対応)している。細胞死は、0μM PAC−1の下の0nM Doxでは確認されなかった。破線は純粋な相加効果の予想レベルを表わし、したがって、組み合わせは治療上適切な濃度で相乗作用を示す。 Figure6: PAC−1はBT20(トリプルネガティブ乳癌)細胞においてタモキシフェンを増強する。種々のPAC−1及びタモキシフェン濃度において36時間で評価した。 Figure7: PAC−1及びタモキシフェンの組み合わせは、BT20(トリプルネガティブ乳癌)細胞の死滅について相乗効果を示す。種々のPAC−1及びタモキシフェン濃度において24時間で評価した。凡例は棒グラフの棒に対応するものであり、ここで、最も上の凡例は一番左の棒に対応し、残りの凡例は残りの棒に対応(上〜下の凡例はそれぞれ左〜右の棒に対応)している。 Figure8: PAC−1及びタモキシフェンの組み合わせは、MDA MB 436(トリプルネガティブ乳癌)細胞の死滅について相乗効果を示す。種々のPAC−1及びタモキシフェン濃度において24時間で評価した。凡例は棒グラフの棒に対応するものであり、ここで、最も上の凡例は一番左の棒に対応し、残りの凡例は残りの棒に対応(上〜下の凡例はそれぞれ左〜右の棒に対応)している。 Figure9: PAC−1及びシスプラチンの組み合わせは、IGROV−1(卵巣癌)細胞の死滅について相乗効果を示す。種々のPAC−1及びシスプラチン濃度において40時間で評価した(Annexin V/PI染色)。凡例は棒グラフの棒に対応するものであり、ここで、最も上の凡例は一番左の棒(0μMのシスプラチンでは棒なし)に対応し、残りの凡例は残りの棒に対応(上〜下の凡例はそれぞれ左〜右の棒に対応)している。 Figure10: PAC−1及びパクリタキセルの組み合わせは、IGROV−1(卵巣癌)細胞の死滅について相乗効果を示す。種々のPAC−1及びパクリタキセル濃度において40時間で評価した(Annexin V/PI染色)。凡例は棒グラフの棒に対応するものであり、ここで、最も上の凡例は一番左の棒(0μMのパクリタキセルでは棒なし)に対応し、残りの凡例は残りの棒に対応(上〜下の凡例はそれぞれ左〜右の棒に対応)している。 Figure11: PAC−1はカルボプラチンと相乗的に作用して、培養下のHOS(ヒト骨肉腫)細胞の死を誘導する。細胞を8時間共処置し、栄養培地を交換し、コロニーを7日間成長させた。 Figure12: PAC−1はカルボプラチンと相乗的に作用して、培養下の143B(ヒト骨肉腫)細胞の死を誘導する。細胞を8時間共処置し、栄養培地を交換し、コロニーを7日間成長させた。
詳細な説明
癌細胞において多くの場合不活性型で過剰発現されるか又は高いレベルで存在する酵素を活性化することができる化合物が見出されている。この化合物は、癌細胞(例えば、プロカスパーゼ−3が上方制御された細胞又はプロカスパーゼ−3のレベルが上昇する細胞)におけるプログラム細胞死(アポトーシス)を誘導することができる。多くの癌は標準的化学療法に耐性がある。本明細書に記載の併用療法は、第2の活性薬物の化学療法的特性と相乗的に作用するPAC−1によるプロカスパーゼ−1活性化を利用するものであり、それにより、活性薬物のいずれか単独ではそれほど又は全く有効でない可能性のある条件下においても有効性を示す。また、これらの化合物は癌標的療法において有効であり、ここでは、プロカスパーゼ−3のレベルが低い非癌性細胞に対する副作用が比較的低減されていて、癌細胞の死滅における選択性という利点がある。これらの副作用には、毒性、特に神経毒性が含まれ得る。
本明細書に記載の化合物の組み合わせ、組成物及び方法は、アポトーシス若しくはプログラム細胞死の調節及び他の化学療法的機序を介して作用して、癌細胞の処置に有効性を示す。一実施形態において、アポトーシスの調節はアポトーシスの誘導又は活性化によるものである。種々の実施形態において、化合物の投与は同時であっても逐次であってもよい。
すなわち、本発明は、例えばリンパ腫、骨肉腫又は乳癌を処置するための、PAC−1による活性薬物の増強のための方法を提供する。アポトーシス中、酵素前駆体プロカスパーゼ−3がタンパク質分解によりカスパーゼ−3に活性化され、次いで、この活性カスパーゼ−3が多数の細胞基質を切断してアポトーシスプログラムを実行する。プロカスパーゼ−3タンパク質レベルは種々の腫瘍組織学的検査で上昇するので、プロカスパーゼ−3の薬物媒介性直接活性化は選択的抗癌戦略として非常に有効となり得る。
特定の化合物は、プロカスパーゼ−3の活性及び自己成熟(automaturation)を促進し、癌細胞におけるアポトーシスを誘導することができる。プロカスパーゼ活性化化合物−1(PAC−1,Figure1)は、抑制性亜鉛イオンのキレート化によってプロカスパーゼ−3の活性を促進し、培養下の癌細胞におけるアポトーシスを誘導し、複数のマウス腫瘍モデルで有効性を示す。PAC−1及びいくつかの治療薬の新規の組み合わせは、本明細書に記載のように、癌細胞、特にリンパ腫、骨肉腫及び乳癌細胞の処置において相乗的に有効性を示すことが見出されている。PAC−1はアポトーシスカスケードの後期に作用するので、後述のように、PAC−1は広範な化学療法薬と特有の相乗作用をもたらすことができる。
定義:
本明細書において、記載された用語は以下の意味を有する。本明細書で使用されている他のすべての用語及びフレーズは、当業者が理解し得るそれらの通常の意味を有する。そのような通常の意味は、専門用語辞典(例えば、Hawley’s Condensed Chemical Dictionary 14th Edition, by R.J.Lewis, John Wiley & Sons,New York,N.Y.,2001)を参照することによって得ることができる。
明細書中で「一実施形態」、「実施形態」などに言及される場合、記載されている実施形態は特定の態様、特徴、構造、成分又は特性を含み得るが、すべての実施形態が必ずしもその態様、特徴、構造、成分又は特性を含むわけではないことを示す。また、そのようなフレーズは、明細書の他の部分で言及されている同じ実施形態を意味し得るが、必ずしもそれを意味するわけではない。さらに、特定の態様、特徴、構造、成分又は特性がある実施形態に関連して記載されている場合、そのような態様、特徴、構造、成分又は特性を他の実施形態に影響させ、関連付けることは、明示的に記載されているかどうかに関わらず当業者の知識の範囲内である。
文脈上明らかに他の意味に解すべき場合でない限り、単数形(“a”、“an”及び“the”)には複数の意味が含まれる。したがって、例えば、「化合物」(“a compound”)と言う場合、複数のそのような化合物が含まれ、化合物Xには複数の化合物Xが含まれる。また、請求項は任意選択の要素を除外するように記載され得ることに留意されたい。この説明は、請求項の要素の記載又は「否定的」限定の使用に関連して、排他的な用語(例えば、「単独で」(“solely”)、「のみ」(“only”))の使用の前提となることを意図したものである。
用語「及び/又は」は、該用語が関連している項目のいずれか1つ、項目の任意の組み合わせ、又は項目のすべてを意味する。「1つ又は複数の」というフレーズは、特にそれが使用される文脈で解釈する場合、当業者によって容易に理解される。例えば、フェニル環の1個又は複数の置換基とは、1〜5個、あるいは例えばフェニル環が二置換の場合は1〜4個を意味する。
用語「約」は、指定された値の±5%、±10%、±20%、又は±25%の変動を意味し得る。例えば、「約50」パーセントは、一部の実施形態では、45〜55パーセントの変動を生じ得る。整数の範囲に関して、「約」という用語は、記載された範囲の両端の整数よりも1つ若しくは2つ大きい整数及び/又は1つ若しくは2つ小さい整数を含み得る。特に断らない限り、本明細書において、用語「約」は、個々の成分、組成物又は実施形態の機能の点で同等である、記載された範囲に近い値(例えば重量パーセント)を含むものとする。
当業者によって理解されるように、成分の量、特性(例えば分子量)、反応条件などを表現するものを含むすべての数値は近似値であり、すべての場合に任意選択で用語「約」により修飾されるものとする。これらの値は、本明細書の教示を利用する当業者が得ようとする所望の特性に応じて変わり得る。また、そのような値は、それぞれの試験測定において見られる標準偏差から必然的に生じる変動を内在的に含むことも理解される。
(特に書面による説明を提供するという観点から)当業者によって理解されるように、本明細書に記載されているすべての範囲は、任意の及びすべての可能性のある部分範囲及びその部分範囲の組み合わせ、並びに範囲を構成する個別の値、特に整数値を包含する。記載されている範囲(例えば、重量パーセンテージ又は炭素基)には、該範囲内の各々の特定の値、整数、小数、又はアイデンティティが含まれる。記載されているいかなる範囲も、少なくとも該範囲が2分の1、3分の1、4分の1、5分の1、又は10分の1まで分割されることが十分に記載されており、それが可能であることは容易に認識され得る。非限定的な例として、本明細書に記載の各範囲は、下位3分の1、中位3分の1、上位3分の1などに容易に分けることができる。また、当業者により理解されるように、「多くても」、「少なくとも」、「より大きい」、「以下」、「以上」などの表現はすべて、記載された数値を含み、そのような用語は、上述の部分範囲まで分割できる範囲を指す。同様に、本明細書に記載されているすべての比率は、当該より広い比率の範囲内にあるすべての部分比率を含む。したがって、ラジカル及び置換基に関する特定の値及び範囲は説明目的でのみ記載されており、それらは、ラジカル及び置換基に関して規定される他の値又は規定される範囲内の他の値を除外するものではない。
メンバーが一般的な方法で(例えばマーカッシュグループとして)一緒にグループ化されている場合、本発明は、記載されているグループの全体だけでなく、グループの各メンバーを個別に包含し、また、メイングループ中のすべての可能なサブグループも包含することは当業者であれば容易に理解するであろう。また、本発明は、メイングループを包含するだけでなく、メイングループにおいて1つ又は複数のグループメンバーが存在しない場合も包含する。すなわち、本発明は、記載されたグループのメンバーのうちのいずれか1つ又は複数の明確な除外も想定している。したがって、但し書きは、開示されたすべてのカテゴリー又は実施形態に適用することができ、それにより、(例えば、明示的な否定的限定で使用される場合のように、)記載された要素、種又は実施形態のいずれか1つ又は複数をそのようなカテゴリー及び実施形態から除外することができる。
用語「接触」は、例えば、溶液中、反応混合物中、インビトロ又はインビボで、例えば、生理的反応、化学的反応又は物理的変化をもたらすために、触れさせる、接触させる、又は極めて近接した位置に置くことを指す。
「同時に」とは、(1)時間的に同時に、あるいは(2)同一の処置スケジュール中の異なる時に、ということを意味する。
「逐次に」とは、引き続き他の活性薬物の投与が行われる方法で使用されるある活性薬物の投与を意味する。ある活性薬物の投与後、次の活性薬物は実質的に第1の薬物の直後に投与することができ、また、次の活性薬物は第1の活性薬物の薬効時間後に投与することができる。薬効時間は、第1の活性薬物の投与からの最大の利益を実現するために与えられた時間の量である。
「有効量」とは、疾患、障害及び/又は状態を処置するために有効な量、あるいは、記載された効果(例えば、活性化又は抑制)などをもたらすための有効な量を意味する。例えば、有効量とは、処置されている状態又は症状の進行又は重症度を低減するのに有効な量であり得る。治療有効量の決定は当業者の能力の範囲内にある。用語「有効量」は、例えば、宿主における疾患又は障害の処置又は防止に、あるいは疾患又は障害の症状の処置に有効である、本明細書に記載の化合物の量又は本明細書に記載の化合物の組み合わせの量を含むものとする。したがって、「有効量」とは、概して、所望の効果が得られる量を意味する。一実施形態において、有効量とは、細胞又は対象(例えば患者)に単回投与又は複数回投与を行う際、成長若しくは増殖の抑制、死滅の誘導、又は過剰増殖性細胞の成長の阻害において、単独で又は医薬担体との組み合わせで有効である、本明細書に記載の活性薬物の量を意味する。そのような成長抑制又は死滅は、そのような処置がない場合に予想される程度を超える対象(例えば患者)の生存の延長として、あるいはそのような処置がない場合と比較した対象の予後の改善として反映され得る。
用語「処置すること」(“treating”)、「処置する」(“treat”)及び「処置」(“treatment”)には、(i)疾患、病態若しくは医学的状態の発症を防止すること(例えば予防(prophylaxis));(ii)疾患、病態若しくは医学的状態を抑制すること又はその進行を抑止すること;(iii)疾患、病態若しくは医学的状態を軽減すること;及び/又は(iv)疾患、病態若しくは医学的状態に随伴する症状を減弱させることが含まれる。したがって、用語「処置する」(“treat”)、「処置」(“treatment”)及び「処置すること」(“treating”)は予防まで及び得るものであり、処置している状態又は症状の進行又は重症度を防止する、低下させる、中止させる又は逆転させることを含み得る。したがって、用語「処置」(“treatment”)は医学的、治療的及び/又は予防的投与を適宜含み得る。一部の実施形態において、用語「処置」(“treatment”)、「処置する」(“treat”)又は「処置された」(“treated”)とは、(i)腫瘍の成長若しくは再成長の防止(予防(prophylaxis))、(ii)目的の症状若しくは疾患の低減若しくは除去(治療(therapy))、又は(iii)腫瘍の除去若しくは破壊(治癒(cure))を意味し得る。
用語「抑制する」(“inhibit”)、「抑制すること」(“inhibiting”)及び「抑制(“inhibition”)とは、疾患、感染、症状又は細胞群の成長又は進行を、遅延、停止又は逆転させることを意味する。抑制は、例えば、処置又は接触がない場合の成長又は進行と比較して、約20%以上、40%以上、60%以上、80%以上、90%以上、95%以上、又は99%以上であり得る。さらに、用語「誘導する」(“induce”)、「抑制する」(“inhibit”)、「増強する」(“potentiate”)、「上昇させる」(“elevate”)、「増加する」(“increase”)、「減少する」(“decrease”)などは、2つの状態間の定量的差異を示し、しかも、2つの状態間の少なくとも統計学的に有意な差を意味し得る。例えば、「過剰増殖性細胞の成長を抑制するのに有効な量」とは、細胞の成長率が、一部の実施形態において、無処置細胞と少なくとも統計学的に有意に異なり得ることを意味する。本明細書において、そのような用語は例えば増殖率に適用することができる。
過剰増殖性細胞(例えば腫瘍細胞)の「成長又は増殖を抑制する」というフレーズは、その成長及び転移を遅延、中断、抑止又は中止することを意味するが、必ずしも新生物の成長の完全な除去を示すものではない。
用語「癌」(“cancer”)とは、概して、異常細胞の制御されない成長によって発症する100種以上の疾患の群のいずれかを意味する。癌は、固形腫瘍及びリンパ腫、並びに非固形癌(例えば白血病)の形態をとり得る。正常細胞(これは、成熟まで複製し、その後、必要な場合にのみ、損傷した細胞を交換する。)とは異なり、癌細胞は際限なく成長・分裂して近傍の細胞を押し出し、最終的に身体の他の部分にまで広がる。
本発明は、癌及び癌性状態を処置するための方法を提供する。用語「癌性状態」(“cancerous condition”)とは、速い増殖又は新生物形成を特徴とする異常な状態に細胞がある任意の状態に関する。癌性状態は悪性又は非悪性(例えば前癌状態)であり得る。「癌性状態」をさらに説明するために、「過剰増殖性」(“hyperproliferative”)、「過形成性」(“hyperplastic”)、「過形成」(“hyperplasia”)、「悪性」(“malignant”)、「腫瘍性」(“neoplastic”)及び「新生物形成」(“neoplasia”)という用語を使用することができる。これらの用語は互換的に使用することができ、病理組織学上のタイプ、浸潤性の段階、又は癌の決定(例えば、悪性及び非悪性)に関わらず、すべてのタイプの過剰増殖性成長、過形成性成長、癌性成長若しくは発癌プロセス、転移組織、又は悪性に形質転換した細胞、組織若しくは器官を含むものとする。
用語「新生物形成」は、正常な増殖制御に対する応答性の損失を生じる新たな細胞成長(例えば腫瘍性細胞成長)を意味する。「過形成」は、細胞が異常に高い速度で成長していることを意味する。しかし、これらの用語は、文脈上明らかなように、互換的に使用可能であり、概して、細胞が異常な細胞成長速度を示していることを指す。「新生物形成」及び「過形成」は腫瘍(これは、良性、前悪性、上皮内癌、悪性、固形、又は非固形であり得る。)を含む。本発明の範囲内にある癌性状態としては、例えば、肛門癌、移行細胞膀胱癌、骨癌、乳癌、子宮頸癌、大腸癌、胃癌、頭頸部癌、カポジ肉腫、白血病、肺癌(例えば、気管支肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌)、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、悪性リンパ腫、神経芽細胞腫、骨原性癌(例えば骨の癌)、眼癌(例えば、網膜芽細胞腫及び他の眼部の癌)、卵巣癌、前立腺癌、腎癌、皮膚癌(例えば黒色腫)、軟部肉腫、甲状腺癌、及びウィルムス腫瘍が挙げられる(それらに限定されない)。本発明の範囲内にある非悪性の過剰増殖性状態(例えば前癌状態)の他の例としては、腺腫、軟骨腫、内軟骨腫、線維腫、筋腫、粘液腫、神経鞘腫、骨芽細胞腫、骨軟骨腫、骨腫、乳頭状腫瘍などが挙げられる(それらに限定されない)。
用語「白血病」又は「白血病性癌」は、造血系及び免疫系(血液系及びリンパ系)のすべての癌又は新生物形成を意味する。これらの用語は、血液及び骨髄における白血球及びその前駆体の乱れた増殖及び発生を特徴とする、造血器官の進行性の悪性疾患を意味する。骨髄腫は、血液及び骨髄細胞の他のタイプの腫瘍を指す。リンパ腫はリンパ組織の腫瘍を指す。白血病の例には、急性骨髄性白血病(AML)、急性リンパ芽球性白血病(ALL)、及び慢性骨髄性白血病(CML)が含まれる。
本明細書に記載のように、本発明の組成物及び方法は、例えば次のような状態を含む種々の新生物形成障害の処置又は防止のために使用することができる:末端性黒子性黒色腫、光線性角化症、腺癌、腺様嚢胞癌、腺腫、腺肉腫、腺扁平上皮癌、星細胞腫、バルトリン腺癌、基底細胞癌、気管支腺癌、毛細管、カルチノイド、癌腫、癌肉腫、海綿状血管腫、胆管癌、軟骨肉腫、脈絡叢乳頭腫/脈絡叢癌、明細胞癌、嚢胞腺腫、内胚葉洞腫瘍、子宮内膜増殖症、子宮内膜間質肉腫、類内膜腺癌、上衣癌、類上皮癌、ユーイング肉腫、線維層状癌、限局性結節性過形成、ガストリノーマ、胚細胞腫瘍、神経膠芽腫、グルカゴノーマ、血管芽腫、血管内皮腫、血管腫、肝腺腫、肝腺腫症、肝細胞癌、インスリノーマ、上皮内腫瘍、上皮内扁平上皮腫瘍、浸潤性扁平上皮癌、大細胞癌、平滑筋肉腫、悪性黒子黒色腫、悪性黒色腫、悪性中皮腫瘍、髄芽腫、髄様上皮腫、黒色腫、髄膜癌、中皮癌、転移性癌、粘表皮癌、神経芽細胞腫、神経上皮腺癌結節性黒色腫、燕麦細胞癌、オリゴデンドログリア、骨肉腫、膵臓ポリペプチド、乳頭状漿液性腺腫、松果体細胞、下垂体腫瘍、形質細胞腫、偽肉腫、肺芽細胞腫、腎細胞癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、肉腫、漿液性癌、小細胞癌、軟組織癌、ソマトスタチン分泌腫瘍、扁平上皮癌、中皮下癌、表在拡大型黒色腫、未分化癌、ブドウ膜黒色腫、疣状癌、ビポーマ、高分化癌、及びウィルムス腫瘍。したがって、本明細書に記載の組成物及び方法は、膀胱癌、脳腫瘍(神経膠腫、髄膜腫、神経鞘腫、腺腫などの頭蓋内新生物を含む)、乳癌、結腸癌、肺癌(SCLC又はNSCLC)、卵巣癌、膵臓癌、及び前立腺癌の処置に使用することができる。
一部の実施形態において、PAC−1及び第2の活性薬物(例えば、本明細書に記載の化学療法薬)の組み合わせは脳の癌の処置に特に有効であり得る。脳の癌としては、乏突起神経膠腫及び膠芽腫(多形性膠芽腫(GBM)を含む。)が挙げられる(それらに限定されない)。癌性細胞に冒された組織は、脳それ自体(例えば、頭蓋又は脊柱管中心部)に、リンパ組織に、血管に、脳神経に、又は脳膜(髄膜)、頭蓋骨、下垂体若しくは松果体に存在し得る。処置可能な脳癌の具体的な形態としては、例えば、星細胞腫、軟骨腫、軟骨肉腫、脊索腫、CNS(中枢神経系)リンパ腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、神経節膠腫、神経節腫(神経節細胞腫ともいう)、神経膠腫(例えば、星細胞腫、乏突起神経膠腫、上衣腫)、血管芽腫(血管腫瘍ともいう)、原始神経外胚葉性腫瘍(PNET)(例えば髄芽腫)、髄膜腫、及び前庭神経鞘腫(以前は聴神経腫瘍/神経鞘腫として知られていた。)が挙げられる。
また、上記組み合わせは、身体の他の器官に由来する癌から頭蓋内に浸潤する転移性腫瘍の処置に使用することもできる。これらの状態は一般に二次脳腫瘍と呼ばれている。PAC−1及び第2の活性薬物の組み合わせで処置することができる二次脳腫瘍には、肺癌、乳癌、悪性黒色腫、腎癌、結腸癌、及び他の癌腫に由来する脳の転移性腫瘍が含まれる。
本発明の範囲内にある癌性状態の他の例としては、神経芽細胞腫及び骨原性癌(例えば、骨の癌、骨の組織の腫瘍性成長)が挙げられる(それらに限定されない)。PAC−1及び第2の活性薬物の組み合わせで処置することができる悪性原発性骨腫瘍の例には、骨肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、線維肉腫などが含まれ、また、二次骨腫瘍(例えば、他の器官(例えば、乳、肺、前立腺)の癌から広がった転移性病変)が含まれる。
治療薬及び活性:
プロカスパーゼ活性化化合物−1(PAC−1)(2−(4−ベンジルピペラジン−1−イル)−N−[(2−ヒドロキシ−3−プロパ−2−エニル−フェニル)メチリデンアミノ]アセトアミド)は、癌細胞におけるアポトーシスを選択的に誘導する。PAC−1の構造はFigure1に示され、PAC−1の調製方法は、米国特許出願公開第2012/0040995号(Hergenrother et al.)に開示されている。
PAC−1は、抑制性亜鉛イオンのキレート化によってプロカスパーゼ−3の活性を促進し、癌細胞におけるアポトーシスを誘導する。PAC−1は、プロカスパーゼ−3の活性及び自己成熟を促進し、癌細胞におけるアポトーシスを誘導することができる。また、PAC−1は他のいくつかの薬物の化学療法的活性を増強したが、多くの場合、PAC−1又は第2の活性薬物のいずれか単独ではさほど有効ではないか又は完全に不活性である。したがって、驚くべきことに、PAC−1は、多くのクラスの化学療法薬の活性と相乗的に作用することが見出された。PAC−1と相乗的に作用し得る化合物のクラスの例には下記のものが含まれる。
(a)bcl−2ファミリー阻害剤/修飾剤(例えば、bax及びbcl−xl阻害剤)
(b)BIRモチーフ含有タンパク質の修飾剤(例えば、スルビビン、SMAC模倣体)
(c)微小管又は細胞骨格要素の修飾剤/安定剤又は阻害剤(例えば、パクリタキセル及びドセタキセルなどのタキサン)
(d)アルキル化剤(例えば、シクロホスファミド、DTIC)又は細胞障害性抗生物質(例えばドキソルビシン)
(e)DNA挿入剤(例えば、シスプラチン、カルボプラチン又はオキサリプラチンなどのプラチン)
(f)オートファジー調節剤(例えばテモゾロミド)
(g)腫瘍細胞シグナル伝達阻害剤(例えば、野性型又は変異型EGFRs、braf、Ras、AKT、cMET、mTOR、PI3K、BTK、JAK/STATファミリーメンバー、MEKの阻害剤)
(h)シグナル伝達受容体の阻害剤/修飾剤(例えば、タモキシフェン、EGFR、CD20、CD19に対する抗体、及び腫瘍細胞で過剰発現されるか、慣例的に発現される他のもの)
(i)血管新生の阻害剤/調節剤(例えば、VEGF、VEGFR、アンジオジェニン、アンジオスタチン、TIEタンパク質、エンドスタチン)
(j)免疫媒介性機序の調節剤(例えば、ワクチン、細胞治療、チェックポイント阻害剤、炎症誘発性サイトカイン/抗体、アジュバント)
(k)プロテアソーム阻害剤(例えばボルテゾミブ)
PAC−1と有利に組み合わされ得る特定の化学療法薬(活性薬物、すなわち「第2の活性薬物」)の例には、シスプラチン、エトポシド、イリノテカン、カンプトサール、トポテカン、パクリタキセル、ドセタキセル、エポチロン、タキソテール、タモキシフェン、5−フルオロウラシル、メトトレキサート、テモゾロミド、シクロホスファミド、SCH66336、R115777、L778、123、BMS214662、ゲフィチニブ、エルロチニブ塩酸塩、EGFRに対する抗体、イマチニブ、イントロン、ara−C、シトキサン、ゲムシタビン、ウラシルマスタード、クロルメチン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレンメラミン、トリエチレンチオホスホルアミン、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジン、フロクスウリジン、シタラビン、6−メルカプトプリン、6−チオグアニン、リン酸フルダラビン、ペントスタチン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトラマイシン、デオキシコホルマイシン、L−アスパラギナーゼ、テニポシド、エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、テストステロン、プレドニゾン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、テストラクトン、酢酸メゲストロール、メチルプレドニゾロン、メチルテストステロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、酢酸メドロキシプロゲステロン、ロイプロリド、フルタミド、トレミフェン、ゴセレリン、ヒドロキシ尿素、アムサクリン、プロカルバジン、ミトタン、ミトキサントロン、レバミゾール、ナベルビン、アナストラゾール、レトロゾール、カペシタビン、ラロキシフェン、ドロロキサフィン、ヘキサメチルメラミン、ベバシズマブ、ハーセプチン、ベキサール、ゼヴァリン、トリセノックス、ゼローダ、ビノレルビン、ポルフィマー、セツキシマブ、チオテパ、アルトレタミン、メルファラン、トラスツズマブ、レトロゾール、フルベストラント、エキセメスタン、フルベストラント、イホスファミド、リツキシマブ、C225、キャンパス、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトテシン、ブスルファン、ニトロソ尿素、ピリカマイシン、マイトマイシン、ラロキシフェン、エストロゲン受容体結合剤、ナベルビン、ファルネシル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、トランス白金、メトトレキサートなどの活性薬物、又はそれらの任意の類似体若しくは誘導変異体が含まれる。
PAC−1又はPAC−1誘導体と組み合わせた場合に顕著な活性を示す化学療法的活性薬物の例には、エトポシド、ボルテゾミブ、スタウロスポリン、ドキソルビシン、タモキシフェン、シスプラチン、カルボプラチン、パクリタキセル、及びSMAC模倣体が含まれる。
エトポシドとの組み合わせ:
エトポシドはトポイソメラーゼII阻害剤である。エトポシドは、DNA及びトポイソメラーゼII酵素と三元複合体を形成し、DNA鎖の再連結を阻害し、それによって、DNA合成におけるエラーをもたらし、癌細胞のアポトーシスを促進する。PAC−1及びエトポシドによるU−937細胞の併用処置は、低マイクロモル濃度であっても有意なインビトロ活性を示した(Figure2)。
ボルテゾミブとの組み合わせ:
ベルケイド(登録商標)(ボルテゾミブ)は、高い親和性及び特異性で26Sプロテアソームの触媒部位に結合する。正常細胞において、プロテアソームは、ユビキチン化タンパク質の分解によってタンパク質の発現及び機能を制御し、また、異常タンパク質又はミスフォールドタンパク質の細胞を除去する。複数の機序が関与しているようであるが、プロテアソーム阻害はアポトーシス促進因子の分解を阻害することができ、アポトーシス促進経路の抑制に依存する腫瘍細胞でのプログラム細胞死を活性化させることができる。相乗的な活性は、PAC−1及びボルテゾミブによるU−937リンパ腫細胞の組み合わせ処置に関して確認された(Figure3)。
スタウロスポリンとの組み合わせ:
スタウロスポリンの主な生物学的活性は、キナーゼへのATP結合阻止によるプロテインキナーゼの阻害であり、これは、キナーゼのATP結合部位に対するスタウロスポリンの強力な親和性によって達成される。スタウロスポリンは、選択性は低いが、多くのキナーゼに高親和性で結合するという点で、典型的なATP競合キナーゼ阻害剤である。特異性の欠如によりその臨床使用が妨げられてきたが、スタウロスポリンを使用してアポトーシスを誘導する貴重な研究ツールとなっている。スタウロスポリンがアポトーシスを誘導する1つの経路はカスパーゼ−3の活性化によるものである。PAC−1及びスタウロスポリンによるU−937リンパ腫細胞の併用処置は、低PAC−1濃度(例えば、7.5μMと15μMのPAC−1)で相乗効果を示した(Figure4)。
ドキソルビシンとの組み合わせ:
ドキソルビシンは、DNA挿入によってその細胞毒性活性を作動させるアントラサイクリン系抗生物質である。ドキソルビシンは、血液悪性腫瘍、多くのタイプの癌腫、並びに軟部肉腫及び骨肉腫を含む、広範囲の癌の治療に使用されている。相乗的な活性は、PAC−1及びドキソルビシンによる143B(ヒトOS)骨肉腫細胞の組み合わせ処置に関して確認された(Figure5)。
タモキシフェンとの組み合わせ:
タモキシフェンは、エストロゲン受容体の競合的作動薬であって、男性乳癌の最も一般的な治療法であり、初期ER+乳癌及び進行性ER+乳癌の両方で使用されている。タモキシフェンは、高リスクの患者の乳癌予防について承認されている。タモキシフェン及びPAC−1の組み合わせは相乗的であり、タモキシフェン陰性若しくはタモキシフェン耐性乳癌及びトリプルネガティブ乳癌を含む乳癌において細胞致死効率を高める(Figure6〜8)。
シスプラチンとの組み合わせ:
シスプラチンは、癌化学療法で使用されているいくつかの白金配位錯体の1種である。白金化合物の細胞毒性は癌細胞のDNA合成の阻害に起因し得る。シスプラチンは、肉腫、癌腫(肺小細胞癌及び卵巣癌を含む)、リンパ腫、胚細胞腫瘍及び精巣癌を含む種々のタイプの癌の処置で使用されている。シスプラチン及びPAC−1の組み合わせは相乗的であり、卵巣癌の場合と同様にこれらの処置における細胞致死効率を高め得る(Figure9)。
パクリタキセルとの組み合わせ:
パクリタキセルは有糸分裂阻害剤(微小管安定剤)であって、肺癌、卵巣癌、乳癌及び頭頸部癌の処置で使用されている。パクリタキセルは、アントラサイクリン系が奏功しなかった後の進行性乳癌の処置に推奨されており、早期リンパ節陽性乳癌での使用が推奨されている。パクリタキセル及びPAC−1の組み合わせは相乗的な活性をもたらし、卵巣癌の場合と同様にこれらの処置における細胞致死効率を高める(Figure10)。
カルボプラチンとの組み合わせ:
カルボプラチンは、癌化学療法で使用されているいくつかの白金配位錯体のうちの他の1種である。カルボプラチンは、種々のタイプの癌、主として卵巣癌、肺癌、頭頸部癌の処置で使用されている。カルボプラチン及びPAC−1の組み合わせは相乗的であり、骨肉腫の場合と同様にこれらの処置における細胞致死効率を高め得る(Figure11及び12)。
さらなる併用試験:
近年定義された17種の乳癌亜型のうちの12種を示す細胞株(表1)を利用して、標準治療薬のPAC−1感作/相乗作用についての非致死量の試験が進められている。
種々の異なる標準治療薬と組み合わせたPAC−1は、組み合わせていなければ得られない可能性がある相加的又は相乗的活性を提供することもできる。組み合わせ効果について調査されているそのような標準治療薬の例には次のものが含まれる。
ラパチニブ: HER2陽性癌の治療及びトリプルポジティブ乳癌の最先端治療で使用されているデュアルチロシンキナーゼ阻害剤(EGFR及びHER2)である。ラパチニブ及びPAC−1の組み合わせによって、これらの処置における細胞致死効率を高め得る。
フルオロウラシル(5−FU): 種々の癌の処置で使用されているピリミジン類似薬である。フルオロウラシルは自殺型阻害剤であり、チミジル酸合成酵素の不可逆的阻害によって作動する。5−FU及びPAC−1の組み合わせによって、5−FUにより処置可能な癌における細胞致死効率を高め得る。
種々の実施形態において、PAC−1は、同様の増強された活性又は相加的若しくは相乗的活性により類似体SPAC−1に置き換えることができる。結腸癌、肺癌及び肝癌の細胞株に対する一般的な腫瘍療法とのSPAC−1の組み合わせ効果が調査されている。組み合わせ薬物、細胞株、及び取得可能なデータ出力の例が表2及び表3にまとめられているが、ここで、例えば、PAC−1又はSPAC−1は標準薬剤1〜4のいずれかと組み合わせ可能である。
癌細胞成長を抑制するか又は特定のタイプの癌を処置するための増強された活性又は相乗的活性を提供するためにPAC−1又はその誘導体と組み合わせ可能な活性薬物には次のものがさらに含まれる。
SN−38: イリノテカン(カンプトテシンの類似体、トポイソメラーゼI阻害剤)の活性代謝物である。SN−38は、イリノテカンそれ自体よりも200倍の活性がある。イリノテカンの主な用途は結腸癌であり、特に他の化学療法薬との組み合わせでの使用である。SN−38及びPAC−1の組み合わせによって、これらの処置における細胞致死効率を高め得る。
オキサリプラチン: 癌化学療法で使用されるいくつかの白金配位錯体の1種である。白金化合物の細胞毒性は癌細胞のDNA合成の阻害に起因するものと考えられる。インビボ試験では、オキサリプラチンがその(非標的化)細胞毒性作用を介して結腸癌に対する抗腫瘍活性を示すことが明らかとなった。オキサリプラチン及びPAC−1の組み合わせによって、これらの処置における細胞致死効率を高め得る。
ソラフェニブ: いくつかのチロシンプロテインキナーゼ(VEGFR及びPDGFR)及びRafの小分子阻害剤である。ソラフェニブはMAPキナーゼ経路(Raf/Mek/Erk経路)(MAPキナーゼ経路)を標的とし、原発性腎癌(進行性腎細胞癌)及び進行型の原発性肝癌(肝細胞癌)の処置について承認されている。ソラフェニブ及びPAC−1の組み合わせによって、これらの処置における細胞致死効率を高め得る。
スニチニブ: 腎細胞癌(RCC)及びイマチニブ耐性胃腸間質性腫瘍(GIST)の処置についてFDAにより承認された、経口用の小分子多重標的化受容体チロシンキナーゼ(RTK)阻害剤である。スニチニブ及びPAC−1の組み合わせによって、これらの処置における細胞致死効率を高め得る。
ゲムシタビン: 化学療法で使用されているヌクレオシド類似体である。フルオロウラシル及びピリミジンの他の類似体と同様に、ゲムシタビン三リン酸塩類似体は、DNA複製の際に核酸の構成成分の1つ(ここではシチジン)を置き換える。このプロセスは腫瘍成長を抑止する。ここでは、ただ1つの追加ヌクレオシドが「不完全」ヌクレオシドに結合し、その結果、アポトーシスが生じ得る。ゲムシタビンの他の標的は酵素リボヌクレオチドレダクターゼ(RNR)である。二リン酸塩類似体はRNR活性部位に結合し、酵素を不可逆的に不活性化する。RNRが阻害されると、細胞はDNAの複製及び修復に必要なデオキシリボヌクレオチドを産生することができず、細胞のアポトーシスが誘導される。ゲムシタビン及びPAC−1の組み合わせによって、これらの処置における細胞致死効率を高め得る。
エルロチニブ: 非小細胞肺癌、膵癌及び他の複数のタイプの癌の処置に使用されている薬物である。エルロチニブはチロシンキナーゼ阻害剤であり、上皮増殖因子受容体(EGFR)に作用する。エルロチニブ及びPAC−1の組み合わせによって、これらの処置における細胞致死効率を高め得る。
ペメトレキセド: 非小細胞肺癌と同様に胸膜中皮腫の処置に使用されている化学療法薬である。ペメトレキセドは、葉酸代謝拮抗剤と呼ばれる化学療法薬のクラスのものである。ペメトレキセドは、プリン及びピリミジン合成で使用される3種類の酵素:チミジル酸シンターゼ(TS)、ジヒドロ葉酸レダクターゼ(DHFR)、及びグリシンアミドリボヌクレオチドホルミルトランスフェラーゼ(GARFT)を阻害することによって作動する。前駆体プリン及びピリミジンヌクレオチドの形成を阻害することによって、ペメトレキセドは、正常細胞及び癌細胞の両方の増殖及び生存に要求される、DNA及びRNAの形成を阻止する。ペメトレキセド及びPAC−1の組み合わせによって、これらの処置における細胞致死効率を高め得る。
異なる標的に作用する薬物の組み合わせを利用する抗癌戦略には明らかな利益があるが、本明細書に記載の試験は、異なる機序を介して作用する化合物で劇的な相乗効果が認められることを実証している。酵素の活性化を求める場合、この多重標的化戦略は特別な利点を有し得る。
PAC−1は哺乳動物において安全であり、PAC−1誘導体はリンパ腫のペット用イヌの第I相臨床試験において有効であった(Peterson et al., Cancer Res 70, 7232−7241(2010))。したがって、観察された活性薬物(例えば、エトポシド、ボルテゾミブ、スタウロスポリン、ドキソルビシン、タモキシフェン)との相乗作用は重要な臨床的影響を有するはずである。小分子による酵素の活性化に対する関心が急速に高まってきている。本明細書に記載のデータは、PAC−1及びそのような相補的な活性薬物を用いる標的化戦略が目的の生物学的効果を劇的に促進する一般的なアプローチであり、その効果により重要な臨床的影響を及ぼすはずであることを示している。
本発明の方法:
本発明は、癌細胞におけるアポトーシスを選択的に誘導する方法であって、癌細胞のプロカスパーゼ−3分子を修飾可能な化合物の組み合わせを癌細胞に投与するステップを含み、化合物の組み合わせはPAC−1及び第2の活性薬物である、方法を提供する。また、癌細胞におけるアポトーシスを選択的に誘導する方法であって、癌細胞のプロカスパーゼ−3分子を修飾可能な化合物の組み合わせを癌細胞に投与するステップを含み、化合物の組み合わせはPAC−1及び第2の活性薬物であり、例えば、癌細胞は処置の必要な患者体内にある、方法を提供する。
本発明は、上記化合物の組み合わせがPAC−1及び第2の活性薬物であるさらなる方法を提供する。例えば、癌細胞を処置する方法であって、(a)プロカスパーゼ活性化化合物による癌細胞の処置に対する潜在的な感受性を同定するステップと、(b)プロカスパーゼ活性化化合物及び第2の活性薬物の組み合わせの有効量に癌細胞を暴露するステップと、を含む方法を提供する。また、癌細胞を処置する方法であって、(a)プロカスパーゼ活性化化合物による癌細胞の処置に対する潜在的な感受性を同定するステップと、(b)有効量のPAC−1及び第2の活性薬物に癌細胞を暴露するステップと、を含み、PAC−1はプロカスパーゼ−3及びプロカスパーゼ−7の少なくとも1つを活性化することができる、方法を提供する。さらに、癌細胞における死を誘導する(例えば、癌細胞を死滅させる)方法であって、活性薬物と、癌細胞のプロカスパーゼ−3分子を活性化することができる化合物(例えばPAC−1)と、を癌細胞に投与するステップを含む方法を提供する。
さらに、本発明は、PAC−1及び第2の活性薬物の組み合わせの有効量を含む医薬を提供する。そのような医薬は、細胞のアポトーシスを誘導する方法において使用することができる。一部の実施形態において、化合物の組み合わせは、感知可能な神経毒性作用を患者にもたらす程度に血液脳関門を通過するものではない。本発明の方法は、1種又は複数の細胞を、インビボ又はインビトロで本明細書に記載の化合物の組み合わせの有効量と接触させるステップを含む。また、本発明は、細胞を処置する方法であって、細胞を本明細書に記載の化合物の組み合わせの有効量と接触させるステップを含む方法を提供する。
本明細書に記載のように、本発明は、プロカスパーゼ−3レベルが高い腫瘍細胞を有する患者を処置する方法を提供する。本発明の方法は、PAC−1及び本明細書に記載の第2の活性薬物の組み合わせ又はその組成物の治療有効量を、プロカスパーゼ−3レベルが高い腫瘍細胞を有する患者に投与するステップを含み得る。また、本発明は、プロカスパーゼ−3レベルが高い腫瘍細胞を処置する方法であって、PAC−1及び本明細書に記載の第2の活性薬物の組み合わせの治療有効量を腫瘍細胞に暴露させるステップを含み、腫瘍細胞は処置、殺傷又は成長抑制される、方法を提供する。腫瘍又は腫瘍細胞は悪性腫瘍細胞であり得る。一部の実施形態において、腫瘍細胞はリンパ腫、骨肉腫又は乳癌細胞である。
PAC−1は、患者に投与するための単位剤形で第2の活性薬物と組み合わせることができる。併用療法は同時又は逐次レジメンとして投与され得る。逐次投与の場合、組み合わせは2回以上に分けて投与され得る。
併用療法は、「相乗効果」、すなわち、一緒に使用される活性成分が、個別に化合物を使用することから得られる効果の総和よりも大きい場合に達成される効果を提供し得る。PAC−1及び第2の活性薬物が次の場合に相乗効果は達成され得る。(1)共製剤化され、複合製剤で同時に投与又は送達される;(2)個別の製剤として、交互に又は並行して送達される;あるいは(3)他のレジメンによる。交互療法で送達される場合、相乗効果は、例えば、個別の錠剤、丸剤若しくはカプセル剤中で、又は個別の注射器中の異なる注射剤により、化合物が逐次に投与又は送達される場合に達成され得る。概して、交互療法中、各活性成分の有効量は、逐次にすなわち連続的に投与することができるが、併用療法では、2種以上の活性成分の有効量は一緒に投与される。相乗的な抗癌作用は、組み合わせの個別の化合物の予測される純粋な相加効果よりも大きな抗癌作用を示す。併用療法は、米国特許第6833373号(McKearn et al.)によりさらに開示されており、これには、PAC−1と組み合わせ可能な追加の活性薬物、及びPAC−1により処置可能なさらなるタイプの癌及び他の状態が含まれている。
したがって、PAC−1は、癌処置のための他の活性薬物(「第2の活性薬物」)と組み合わせて使用することができる。PAC−1は、数分から数週間の間隔で、第2の活性薬物の投与に先行させても後続させてもよい。第2の活性薬物及びPAC−1が細胞に個別に適用される実施形態では、薬物及びPAC−1が細胞に対して有利な組み合わせ効果を依然として発揮できるように、概して、各送達の間で長い時間が経過しないようにする。例えば、そのような例では、細胞、組織又は生物を2種の手段と実質的に同時(すなわちほぼ数分以内)に接触させることができるものとする。他の態様において、組み合わせの第2の活性薬物は、PAC−1の投与前及び/又は投与後の約1分、約5分、約10分、約20分、約30分、約45分、約60分、約2時間、約3時間、約4時間、約6時間、約8時間、約9時間、約12時間、約15時間、約18時間、約21時間、約24時間、約28時間、約31時間、約35時間、約38時間、約42時間若しくは約45時間以内に、又は約48時間以降に投与することができる。他の実施形態において、第2の活性薬物は、PAC−1の投与前及び/又は投与後の約1日、約2日、約3日、約4日、約5日、約6日、約8日、約9日、約12日、約15日、約16日、約18日、約20日又は約21日以内に投与することができる。一部の場合において、治療期間を大幅に延長することが望ましい場合もあるが、その場合、それぞれの投与の間隔は数週間(例えば、約1、約2、約3、約4、約6若しくは約8週間又はそれ以上)あけるようにする。
本発明の化学療法組成物の患者への投与は、通常、化学療法の投与に関する一般的なプロトコールに従い、毒性も考慮する。治療サイクルは必要に応じて繰り返されることが期待される。また、種々の標準的治療法若しくは癌補助療法及び外科的介入も、本明細書に記載の併用療法と組み合わせて適用することができるものとする。これらの治療法としては、化学療法、免疫療法、遺伝子治療、及び手術が挙げられる(それらに限定されない)。
医薬製剤:
本明細書に記載の化合物を使用して、例えば、該化合物を薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤又は担体と組み合わせることによって、治療用医薬組成物を製造することができる。化合物は、塩又は溶媒和物の形態で担体に添加することができる。例えば、化合物が安定な非毒性の酸又は塩基の塩を形成するのに十分に塩基性又は酸性である場合、塩としての化合物の投与は適切であり得る。薬学的に許容可能な塩の例は、生理学的に許容可能な陰イオンを形成する酸と共に形成される有機酸付加塩であり、例えば、トシル酸塩、メタンスルホン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、マロン酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、安息香酸塩、アスコルビン酸塩、α−ケトグルタル酸塩、及びβ−グリセロリン酸塩である。さらに、適切な無機塩、例えば、塩酸塩、ハロゲン化物、硫酸塩、硝酸塩、重炭酸塩、及び炭酸塩の塩も形成され得る。
薬学的に許容可能な塩は、当技術分野で周知の標準的な手順を使用して、例えば、十分に塩基性の化合物(例えばアミン)を適切な酸と反応させて生理学的に許容可能なイオン化合物を提供することによって得ることができる。カルボン酸のアルカリ金属(例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム)塩又はアルカリ土類金属(例えばカルシウム)塩も類似の方法により調製することができる。
本明細書に記載の化合物は、医薬組成物として製剤化し、種々の形態で哺乳動物宿主、例えばヒト患者に投与することができる。形態は、選択した投与経路、例えば、静脈内、筋肉内、局所又は皮下経路による経口又は非経口投与に特に適合させることができる。
本明細書に記載の化合物は、薬学的に許容可能なビヒクル(例えば、不活性希釈剤又は同化可能な食用担体)と組み合わせて全身投与され得る。活性薬物の溶解性は、シクロデキストリン、例えば2−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンを使用することによって増大させることができる。経口投与の場合、化合物は、ハード又はソフトシェルゼラチンカプセルに封入するか、又は錠剤に圧縮するか、又は患者の食餌に直接組み入れることができる。また、化合物は、1つ又は複数の賦形剤と組み合わせることが可能であり、摂取可能な錠剤、バッカル錠、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁液剤、シロップ、ウエハースなどの形態で使用することができる。このような組成物及び調製物は、通常、少なくとも0.1%の活性化合物を含有する。組成物及び調製物の割合は変動し得、好都合なことに所定の単位剤形の重量の約1%〜約60%、又は約2%〜約25%であり得る。そのような治療上有用な組成物中の活性化合物の量は、有効用量レベルが得られるような量である。
錠剤、トローチ剤、丸剤、カプセル剤などは次の1つ又は複数を含み得る:結合剤、例えば、トラガカントゴム、アラビアゴム、トウモロコシデンプン又はゼラチン;賦形剤、例えばリン酸二カルシウム;崩壊剤、例えば、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルギン酸;及び潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム。甘味料(例えば、スクロース、フルクトース、ラクトース、アスパルテーム)又は着香料(例えば、ペパーミント、ウインターグリーン油、チェリーフレーバー)を添加してもよい。単位剤形がカプセルである場合、上記のような材料の他に、液体担体(例えば、植物油、ポリエチレングリコール)を含有し得る。コーティング剤として、あるいは固体単位剤形の物理的形態を変えるように、他の種々の材料が存在していてもよい。例えば、錠剤、丸剤又はカプセル剤はゼラチン、ワックス、セラック又は糖でコーティングすることができる。シロップ剤又はエリキシル剤は、活性化合物、甘味料としてのスクロース又はフルクトース、保存剤としてのメチル及びプロピルパラベン、色素、並びに香料(例えば、チェリー又はオレンジフレーバー)を含有し得る。任意の単位剤形の調製に使用されるすべての材料は、使用量において、薬学的に許容可能で実質的に非毒性であるものとする。さらに、活性化合物は徐放性製剤及びデバイスに組み入れることができる。
活性化合物は、点滴又は注射によって静脈内又は腹腔内に投与することができる。活性化合物又はその塩の溶液は、必要に応じて非毒性界面活性剤と混合して、水中で調製することができる。分散液は、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、トリアセチン、又はその混合物中で、あるいは薬学的に許容可能な油中で調製することができる。通常の保存及び使用の条件下で、製剤は、微生物の成長を防止するための防腐剤を含有し得る。
注射又は点滴に適した医薬剤形は、滅菌水溶液、分散液、又は注射若しくは点滴用滅菌溶液若しくは分散液の即時調製に適合していて、任意選択でリポソームに封入された活性成分を含む滅菌粉末を含み得る。最終的な剤形は、滅菌済み、液体で、製造及び保存の条件下で安定しているものとすべきである。液体担体又はビヒクルは、例えば、水、エタノール、ポリオール(例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール)、植物油、非毒性グリセリルエステル、又はそれらの適切な混合物を含む溶媒又は液体分散媒体であり得る。適切な流動度は、例えば、リポソームの形成によって、又は(分散液の場合には)必要とされる粒子サイズの維持によって、又は界面活性剤の使用によって維持され得る。微生物作用の防止は、種々の抗菌剤及び抗真菌剤(例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チオメルサール)によって実現することができる。多くの場合、等張剤(例えば、糖、緩衝液、塩化ナトリウム)を含めるのが好ましい。注射用組成物の持続的吸収は、吸収を遅延させる物質、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及び/又はゼラチンによって実現することができる。
注射用滅菌溶液は、必要に応じて上記の種々の他の成分と共に適切な溶媒に必要量の活性化合物を添加する(そして、任意選択で引き続き濾過滅菌を行う)ことによって調製することができる。注射用滅菌溶液を調製するための滅菌粉末の場合、調製方法は真空乾燥及び凍結乾燥(これによって、活性成分及び予め滅菌濾過した溶液に存在する所望のさらなる成分の粉末が得られる。)を含み得る。
本明細書に記載の化合物の有用な用量は、それらのインビトロ活性及び動物モデルにおけるインビボ活性を比較することによって決定することができる。マウス及び他の動物における有効用量からヒトの有効用量を推定する方法は当技術分野で公知である。例えば、米国特許第4938949号(Borch et al.)を参照されたい。処置における使用のために必要とされる化合物又はその活性塩若しくは誘導体の量は、選択される特定の化合物又はその塩だけでなく、投与経路、処置されている状態の性質、並びに患者の年齢及び症状によっても変動し、最終的には担当の医師又は臨床医の判断で決定される。
化合物の組み合わせは、好都合なことに単位剤形で投与することができ、例えば、単位剤形当たり100〜5000mg/m、300〜4000mg/m、370〜3700mg/m、50〜750mg/m、又は750〜4000mg/mの活性成分を含有する。また、各化合物は、個別に又は組み合わせで、約1mg/kg〜約250mg/kg、約10mg/kg〜約100mg/kg、約10mg/kg〜約50mg/kg、約50mg/kg〜約100mg/kg、約10mg/kg〜約50mg/kg、又は約10mg/kg、約25mg/kg、約50mg/kg、約75mg/kg、約100mg/kg、若しくは約150mg/kg、あるいは上記の値のいずれか1つから上記の値の他のいずれか1つまでの範囲で投与することができる。また、化合物は、単独で又は組み合わせで、約1μmol/L〜約25μmol/L、又は約10μmol/L、又は約15μmol/Lの定常状態血漿薬物濃度をもたらすように対象に投与することもできる。
一部の実施形態において、本発明は、約10nM〜約100μMの有効濃度での化合物を提供する。他の実施形態において、有効濃度は、約200nM〜約50μM、約500nM〜約40μM、約750nM〜約25μM、約1μM〜約20μM、又は約1μM〜約10μMである。他の実施形態において、有効濃度は、例えば、直接プロカスパーゼ活性化アッセイ、細胞アポトーシス誘導アッセイ又は動物臨床治療評価における50%活性濃度のような値とみなされる。一実施形態において、そのような値は約200μM以下である。他の実施形態において、そのような値は約10nM以上かつ約10μM以下である。好都合なことに、所望の用量は、単回用量又は適切な間隔で投与される分割用量(例えば、1日当たり2回、3回、4回又はそれ以上の部分用量)の形をとり得る。部分用量自体も、例えば不連続な緩く間隔をあけた複数の投与回数にさらに分割され得る。
本明細書に記載の化合物は有効な抗腫瘍剤であり得、単一薬物の投与と比較して高い効力及び/又は低減された毒性を有し得る。本発明は、哺乳動物の癌を処置する治療的方法であって、癌に罹患した哺乳動物に有効量の本明細書に記載の化合物又は組成物を投与するステップを含む方法を提供する。哺乳動物としては、霊長類、ヒト、げっ歯類、イヌ、ネコ、ウシ、ヒツジ、ウマ、ブタ、ヤギなどが挙げられる。癌は、任意の種々のタイプの悪性新生物、とりわけ、例えば、結腸癌、乳癌、黒色腫及び白血病を意味し、概して、望ましくない細胞増殖、例えば、制御されない増殖、分化の欠如、局所組織浸潤、及び転移を特徴とする。
癌を処置する本発明の化合物の能力は、当技術分野で公知のアッセイを用いて判定することができる。例えば、処置プロトコールの設計、毒性評価、データ解析、腫瘍細胞死滅の定量化、及び移植腫瘍スクリーンの使用の生物学的意義が知られている。さらに、癌を処置する化合物の能力は、上記アッセイ並びに本明細書で引用された引用文献及び特許文献に記載のアッセイを用いて判定することができる。
また、本発明は化合物のプロドラッグ形態を提供する。インビボで変換されてPAC−1又は本明細書に記載の他の活性薬物が得られるすべての化合物がプロドラッグである。プロドラッグを形成する多く方法が当技術分野で周知である。プロドラッグ及びそれを調製する方法の例は、とりわけ、Design of Prodrugs, edited by H.Bundgaard (Elsevier, 1985); Methods in Enzymology, Vol.42, at pp.309−396, edited by K.Widder,et.al (Academic Press, 1985); A Textbook of Drug Design and Development, edited by Krosgaard−Larsen and H.Bundgaard, Chapter 5, “Design and Application of Prodrugs”, by H.Bundgaard, at pp.113−191, 1991; H.Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews, Vol.8, p.1−38 (1992); H.Bundgaard,et al., Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol.77, p.285 (1988);及び Nogrady(1985) Medicinal Chemistry A Biochemical Approach, Oxford University Press, New York, pages 388−392)に見出される。
さらに、一部の実施形態において、PAC−1は、PAC−1誘導体又は他の阻害剤、例えば、米国特許第7632972号(Hergenrother et al.)、米国特許出願公開第2012/0040995号(Hergenrother et al.)及び同2007/0049602号(Hergenrother et al.)、及び米国特許出願第12/597287号(Hergenrother et al.)に記載の化合物に交換可能である。本明細書の開示と組み合わせて使用可能である、癌治療に有用な化合物、方法及び技術は、前述の文献、並びに米国特許第6303329号(Heinrikson et al.)、同第6403765号(Alnemri)、同第6878743号(Choong et al.)及び同第7041784号(Wang et al.)、及び米国特許出願公開第2004/0180828号(Shi)に記載されている。
試験を行い、癌細胞株を評価する方法は、Putt et al., Nature Chemical Biology 2006, 2(10), 543−550;Peterson et al., J.Mol.Biol. 2009, 388, 144〜158;及び Peterson et al., Cancer Res. 2010, 70(18), 7232−7241に記載のようにして実施することができる。
以下の実施例は、本発明の説明を意図したものであり、その範囲を限定するように解釈されるべきではない。当業者は、本発明を実施することができる他の多くの方法を実施例が示唆していることを容易に理解するであろう。本発明の範囲内で多くの変更及び修正がなされ得ることは理解されるべきである。
実施例1(医薬剤形):
以下の製剤は、本明細書に記載の組み合わせ化合物(例えば、PAC−1及び第2の活性薬物)又はその薬学的に許容可能な塩若しくは溶媒和物(以下「化合物X」という。)を治療的又は予防的に投与するために使用され得る代表的な医薬剤形を示す。
(i)錠剤1 mg/錠剤
化合物X 200.0
ラクトース 77.5
ポビドン 15.0
クロスカルメロースナトリウム 12.0
微結晶性セルロース 92.5
ステアリン酸マグネシウム 3.0
400.0
(ii)錠剤2 mg/錠剤
化合物X 120.0
微結晶性セルロース 410.0
デンプン 50.0
デンプングリコール酸ナトリウム 15.0
ステアリン酸マグネシウム 5.0
600.0
(iii)カプセル剤 mg/カプセル剤
化合物X 110.0
コロイド状二酸化ケイ素 1.5
ラクトース 465.5
α化デンプン 120.0
ステアリン酸マグネシウム 3.0
700.0
(iv)注射剤1(1mg/mL) mg/mL
化合物X 1.0
二塩基性リン酸水素ナトリウム 12.0
一塩基性リン酸ナトリウム 0.7
塩化ナトリウム 4.5
1.0N水酸化ナトリウム溶液 q.s.(7.0〜7.5にpH調整)
注射用蒸留水 q.s.ad 1mL
(v)注射剤2(10mg/mL) mg/mL
化合物X 10.0
一塩基性リン酸ナトリウム 0.3
二塩基性リン酸ナトリウム 1.1
ポリエチレングリコール400 200.0
0.1N水酸化ナトリウム溶液 q.s.(7.0〜7.5にpH調整)
注射用蒸留水 q.s.ad 1mL
(vi)エアロゾル剤 mg/缶
化合物X 20
オレイン酸 10
トリクロロモノフルオロメタン 5000
ジクロロジフルオロメタン 10000
ジクロロテトラフルオロエタン 5000
これらの製剤は、薬学分野で周知の従来の手順によって調製することができる。異なる量及びタイプの活性成分(「化合物X」)に適合するように周知の製薬技術に従って上記医薬組成物が変更可能であることは理解されよう。エアロゾル製剤(vi)は、標準的な定量エアゾールディスペンサーと組み合わせて使用され得る。また、特定の成分及び割合は説明目的で示されているものである。成分は適切な同等物に変更され得、割合は、当該剤形の所望の特性に応じて変更され得る。
特定の実施形態について上記の実施形態及び実施例を参照して説明したが、そのような実施形態は例示的なものにすぎず、本発明の範囲を限定するものではない。変更及び修正は、添付の特許請求の範囲で規定されているより広範な態様の発明から逸脱することなく、当技術分野における通常の技術に従って行うことができる。
すべての刊行物、特許、及び特許文献は、参照により個別に組み入れられるように、参照により本明細書に組み入れられる。本開示と整合しない限定はそれらから理解されるべきではない。本発明は、種々の具体的な好ましい実施形態及び技術に関連して記載されている。しかし、本発明の精神及び範囲内で多くの変更及び修正がなされ得ることは理解されるべきである。

Claims (20)

  1. 癌細胞の成長又は増殖を抑制するための組成物であって、
    (a)化合物PAC−1:

    と、
    (b)ボルテゾミブ、スタウロスポリン、ドキソルビシン、タモキシフェン、シスプラチン、カルボプラチン又はパクリタキセルである第2の活性薬物と、
    (c)薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤又は担体と、
    を含み、
    第2の活性薬物はボルテゾミブであり、癌細胞はリンパ腫細胞である、又は
    第2の活性薬物はスタウロスポリンであり、癌細胞はリンパ腫細胞である、又は
    第2の活性薬物はドキソルビシンであり、癌細胞は骨肉腫細胞である、又は
    第2の活性薬物はタモキシフェンであり、癌細胞は乳癌細胞である、又は
    第2の活性薬物はシスプラチンであり、癌細胞は卵巣癌細胞である、又は
    第2の活性薬物はカルボプラチンであり、癌細胞は骨肉腫細胞である、又は
    第2の活性薬物はパクリタキセルであり、癌細胞は卵巣癌細胞である、
    組成物。
  2. 癌の処置のための組成物であって、
    (a)化合物PAC−1:

    と、
    (b)ボルテゾミブ、スタウロスポリン、ドキソルビシン、タモキシフェン、シスプラチン、カルボプラチン又はパクリタキセルである第2の活性薬物と、
    (c)薬学的に許容可能な希釈剤、賦形剤又は担体と、
    を含み、
    第2の活性薬物はボルテゾミブであり、癌はリンパ腫である、又は
    第2の活性薬物はスタウロスポリンであり、癌はリンパ腫である、又は
    第2の活性薬物はドキソルビシンであり、癌は骨肉腫である、又は
    第2の活性薬物はタモキシフェンであり、癌は乳癌である、又は
    第2の活性薬物はシスプラチンであり、癌は卵巣癌である、又は
    第2の活性薬物はカルボプラチンであり、癌は骨肉腫である、又は
    第2の活性薬物はパクリタキセルであり、癌は卵巣癌である、
    組成物。
  3. 担体は水を含み、任意選択で、緩衝液、シクロデキストリン又はそれらの組み合わせをさらに含む、請求項1又は2に記載の組成物。
  4. シクロデキストリンは2−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンである、請求項に記載の組成物。
  5. PAC−1の濃度が約2μM〜約50μMである、請求項1〜4のいずれか一項に記載の組成物。
  6. PAC−1の濃度が約7.5μM〜約30μMである、請求項1〜5のいずれか一項に記載の組成物。
  7. 第2の活性薬物の濃度が約25nM〜約1mMである、請求項1〜6のいずれか一項に記載の組成物。
  8. 第2の活性薬物はボルテゾミブであり、ボルテゾミブの濃度が約50nM〜約20μMである、又は
    第2の活性薬物はスタウロスポリンであり、スタウロスポリンの濃度が約25nM〜約200nMである、又は
    第2の活性薬物はドキソルビシンであり、ドキソルビシンの濃度が約50nM〜約5μMである、又は
    第2の活性薬物はタモキシフェンであり、タモキシフェンの濃度が約5μM〜約50μMである、又は
    第2の活性薬物はシスプラチンであり、シスプラチンの濃度が約5μM〜約150μMである、又は
    第2の活性薬物はカルボプラチンであり、カルボプラチンの濃度が約5μM〜約150μMである、又は
    第2の活性薬物はパクリタキセルであり、パクリタキセルの濃度が約0.5nM〜約5nMである、
    請求項1〜6のいずれか一項に記載の組成物。
  9. 第2の活性薬物はボルテゾミブであり、ボルテゾミブの濃度が約100nM〜約5μMである、又は
    第2の活性薬物はスタウロスポリンであり、スタウロスポリンの濃度が約50nM〜約100nMである、又は
    第2の活性薬物はドキソルビシンであり、ドキソルビシンの濃度が約100nM〜約1000nMである、又は
    第2の活性薬物はタモキシフェンであり、タモキシフェンの濃度が約3μM〜約15μMである、又は
    第2の活性薬物はシスプラチンであり、シスプラチンの濃度が約100μMである、又は
    第2の活性薬物はカルボプラチンであり、カルボプラチンの濃度が約25μM〜約100μMである、又は
    第2の活性薬物はパクリタキセルであり、パクリタキセルの濃度が約1nM〜約3nMである、
    請求項1〜6のいずれか一項に記載の組成物。
  10. 癌細胞におけるアポトーシスを誘導するための剤であって、
    化合物PAC−1:

    を含み、
    癌細胞有効量の化合物PAC−1及び有効量の第2の活性薬物と接触するように用いられ、
    第2の活性薬物はボルテゾミブであり、癌細胞はリンパ腫細胞である、又は
    第2の活性薬物はスタウロスポリンであり、癌細胞はリンパ腫細胞である、又は
    第2の活性薬物はドキソルビシンであり、癌細胞は骨肉腫細胞である、又は
    第2の活性薬物はタモキシフェンであり、癌細胞は乳癌細胞である、又は
    第2の活性薬物はシスプラチンであり、癌細胞は卵巣癌細胞である、又は
    第2の活性薬物はカルボプラチンであり、癌細胞は骨肉腫細胞である、又は
    第2の活性薬物はパクリタキセルであり、癌細胞は卵巣癌細胞である、
  11. 前記接触はインビトロでの接触である、請求項10に記載の
  12. 前記接触はインビボでの接触である、請求項10に記載の
  13. 癌細胞PAC−1及び第2の活性薬物と同時に接触するように用いられる、請求項1012のいずれか一項に記載の
  14. 癌細胞第2の活性薬物と接触する前に癌細胞PAC−1と接触するように用いられる、請求項1012のいずれか一項に記載の
  15. 癌細胞第2の活性薬物と接触した後に癌細胞PAC−1と接触するように用いられる、請求項1012のいずれか一項に記載の
  16. 処置の必要な患者における癌を処置するための剤であって、
    化合物PAC−1:

    を含み、
    患者に、治療有効量の化合物PAC−1及び有効量の第2の活性薬物同時又は逐次に投与されるように用いられ、
    第2の活性薬物はボルテゾミブであり、癌はリンパ腫である、又は
    第2の活性薬物はスタウロスポリンであり、癌はリンパ腫である、又は
    第2の活性薬物はドキソルビシンであり、癌は骨肉腫である、又は
    第2の活性薬物はタモキシフェンであり、癌は乳癌である、又は
    第2の活性薬物はシスプラチンであり、癌は卵巣癌である、又は
    第2の活性薬物はカルボプラチンであり、癌は骨肉腫である、又は
    第2の活性薬物はパクリタキセルであり、癌は卵巣癌である、
  17. 化合物PAC−1及び第2の活性薬物同時に投与されるように用いられる、請求項16に記載の
  18. 化合物PAC−1及び第2の活性薬物逐次に投与されるように用いられる、請求項16に記載の
  19. 化合物PAC−1第2の活性薬物の前に投与されるように用いられる、請求項18に記載の
  20. 化合物PAC−1第2の活性薬物の後に投与されるように用いられる、請求項18に記載の
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